Patrón - PIEL-L Latinoamericana
Patrón - PIEL-L Latinoamericana
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INMUNOFLUORESCENCIA<br />
Importancia como<br />
herramienta diagnóstica en<br />
Dermatología<br />
Expositor: Gabriel Fernando Matamoros B.<br />
Tutoras:<br />
Dra. Nieves González<br />
Dra. Marian Ulrich
Inmunofluorescencia<br />
OBJETIVOS<br />
Conocer los principios y la técnica t<br />
en los cuales<br />
se basa esta prueba diagnóstica.<br />
Reconocer la importancia de la<br />
inmunofluorescencia como herramienta<br />
diagnóstica en patologías as dermatológicas.<br />
Interpretar de manera adecuada los<br />
resultados de esta prueba.
CONCEPTO<br />
Técnica diagnóstica basada en la<br />
detección y localización de complejos<br />
antígeno-anticuerpo depositados en tejido,<br />
mediante el uso de un segundo anticuerpo<br />
(anti-inmunoglobulina humana) conjugado<br />
con fluorescencia.<br />
Immunofluorescence in dermatology<br />
Diya F. Mutasim, MD, and Brian B. Adams, MD Cincinnati, Ohio<br />
(J Am Acad Dermatol 2001;45:803-22.)
REVISANDO LA HISTORIA<br />
Stokes denominó a lo<br />
observado:“fluorescencia<br />
fluorescencia”<br />
En la mitad del siglo XIX,<br />
Stokes observó que el<br />
mineral Fluospar,<br />
fluoresceía a cuando la luz<br />
ultravioleta incidia<br />
directamente sobre él.<br />
Stanley JR. Pemphigus and pemphigoid as paradigms of<br />
organ-specific, autoantibody-mediated diseases. J Clin Invest<br />
1989;83:1443-8.
REVISANDO LA HISTORIA<br />
En 1930 Haitinger desarrolló la<br />
técnica de fluorescencia secundaria<br />
empleando un fluorocromo.<br />
En 1950 Coons y Kaplan utilizaron<br />
los anticuerpos marcados con<br />
fluoresceína para localizar<br />
antígenos en los tejidos<br />
(inmunofluorescencia)<br />
Stanley JR. Pemphigus and pemphigoid as paradigms of<br />
organ-specific, autoantibody-mediated diseases. J Clin Invest<br />
1989;83:1443-8.
EN LA ACTUALIDAD<br />
La inmunofluorescencia es usada para:<br />
Serotipificación n e identificación n de virus.<br />
Detección n de auto-anticuerpos y otros<br />
componentes patológicos<br />
in situ.<br />
Identificación n de agentes infecciosos.<br />
Cuantificación n de niveles de anticuerpos<br />
Serologic Testing in Connective Tissue Diseases<br />
Dana E. Habash-Bseiso, MD; Steven H. Yale, MD; Ingrid Glurich, PhD; and Jerry W. Goldberg,<br />
MD.2004<br />
Raza K, Breese M, Nightingale P, Kumar K, Potter T,<br />
Carruthers DM, Situnayake D, Gordon C, Buckley CD,<br />
Salmon M, Kitas GD. Predictive value of antibodies to<br />
cyclic citrullinated peptide in patients with very early<br />
inflammatory arthritis. J Rheumatol 2005;32:231-238.
CLASIFICACIÓN<br />
Inmunofluorescencia Directa:<br />
Aplicada fundamentalmente a la detección n de<br />
inmunoglobulinas y factores del complemento<br />
presentes en una muestra clínica.<br />
Inmunofluorescencia Indirecta:<br />
Aplicada a la detección n de anticuerpos específicos<br />
en el suero del paciente frente a un determinado<br />
antígeno mediante el uso de un segundo anticuerpo,<br />
o a la detección n de un antígeno en una muestra<br />
clínica.<br />
Immunofluorescence in dermatology<br />
Diya F. Mutasim, MD, and Brian B. Adams, MD Cincinnati, Ohio<br />
(J Am Acad Dermatol 2001;45:803-22.)
TÉCNICA DE IFD<br />
Inmunofluorescencia<br />
directa
TÉCNICA DE IFI<br />
Inmunofluorescencia<br />
Indirecta (IFI)
INMUNOFLUORESCENCIA<br />
INDIRECTA<br />
+ anti-IgG humana<br />
(de conejo por<br />
ejm.) conjugado<br />
con fluoresceína<br />
Suero del paciente (IgG)<br />
Antígeno tisular
INMUNOFLUORESCENCIA<br />
INDIRECTA<br />
Microscopio<br />
de luz UV
INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA<br />
EN ENFERMEDADES CUTÁNEAS
TÉCNICA PARA BIOPSIA DE <strong>PIEL</strong> EN AMPOLLAS<br />
(INCLUIR <strong>PIEL</strong> PERILESIONAL)
ALGORITMO<br />
Localización de la IF. (epitelio, membrana basal, vascular)<br />
Inmunoreactante Dominante (IgA, IgG, IgM, C3, fibrinógeno)<br />
Patrón n (Granular, lineal contínuo, nuo, intercelular)<br />
(J Am Acad Dermatol 2001;45:803-22.)<br />
Immunofluorescence in dermatology<br />
Diya F. Mutasim, MD, and Brian B. Adams, MD Cincinnati, Ohio
PATRONES DE<br />
INMUNOFLUORESCENCIA<br />
EN <strong>PIEL</strong>
epidermis<br />
Estrato córneo<br />
Estrato granuloso<br />
Estrato espinoso<br />
Capa basal<br />
Epidermis<br />
PATRÓN DE DEPÓSITO<br />
PATRÓN LINEAL, MEMBRANA BASAL<br />
INTERCELULAR<br />
PATRÓN GRANULAR, PAPILA DÉRMICA<br />
Unión dermoepidérmica
epidermis<br />
Patrón de IF alrededor de las<br />
paredes de los vasos<br />
Conducto sudoríparo<br />
Dermis<br />
Vaso sanguíneo<br />
Glándula sudorípara<br />
Tejido adiposo<br />
Hipodermis
DESMOSOMA
UNIÓN N DERMOEPIDÉRMICA<br />
RMICA
PATRONES<br />
Depósitos en el espacio intercelular.<br />
Depósitos de la membrana basal y paredes de<br />
los vasos.<br />
Depósitos en la papila dérmica. d<br />
Depósitos en el EIC y MB.<br />
Depósitos unión n dermoepidérmica rmica (granular,<br />
lineal).<br />
Perivascular.<br />
Immunofluorescence in dermatology<br />
Diya F. Mutasim, MD, and Brian B. Adams, MD Cincinnati, Ohio<br />
J Am Acad Dermatol 2001;45:803-22.)
SPLIT SKIN- SEPARACIÓN N EN LA UNIÓN<br />
DERMO-EPIDÉRMICA RMICA CON SOLUCIÓN N SALINA.<br />
Epidermis<br />
Dermis<br />
EBA
INMUNOFLUORESCENCIA EN<br />
ENFERMEDADES AMPOLLARES
INMUNOFLUORESCENCIA EN ENFERMEDADES<br />
AMPOLLARES<br />
Clasificación:<br />
Enfermedades ampollares autoinmunes<br />
Ampollas intraepidérmicas<br />
Pénfigo<br />
Ampollas subepidérmicas<br />
Penfigoide ampolloso<br />
Penfigoide cicatricial<br />
Dermatosis IgA lineal<br />
Penfigoide gestacional<br />
Epidermolisis ampollosa<br />
Erupción ampollosa asociada al lupus<br />
Dermatitis herpetiforme (no autoinmune)<br />
1.-Bolognia, J; Jorizzo J. Dermatología España 2004. 2.-Zeina, B. Pemphigus vulgaris. eMedicine. April 2003. 3.-Schwartz, R. Pemphigus<br />
foliaceus. eMedicine. Feb 2005. 4.-Chan, L. Pemphigus IgA. eMedicine. Feb 2005. 6.-Scott, D. Pemphigus drug-induced. eMedicine .march 2005
PÉNFIGO VULGAR<br />
Ampolla fláccida<br />
IFD:IgG y C3 intraepidermico<br />
IFI:IgG antidesmosomas<br />
Patron:¨panal de abejas¨<br />
Ag:Desmogleina 3<br />
HP: acantolísis suprabasal<br />
IFD: 100%<br />
IFI: 75%
PÉNFIGO FOLIÁCEO<br />
Ampolla fláccida,erosiones y<br />
costras<br />
IFD:IgG y C3 intraepidérmico<br />
IFI:IgG antidesmosomas<br />
Patrón:¨panal de abejas¨<br />
Ag: Desmogleina 1<br />
Acantolisis subcórnea<br />
IFD: 100%<br />
IFI: 75%
PÉNFIGO ERITEMATOSO (SENEAR-USHER)<br />
.<br />
Semejante al Pénfigo foliáceo.<br />
Localizado en áreas seborréicas.<br />
ANA positivo y Depósito IgG en ZMB.<br />
Fotosensibilidad.
PÉNFIGO PARANEOPLÁSICO<br />
Existen Ac contra gran<br />
cantidad de Ags:<br />
Dg1,Dg3,Dc1,Dc2,230kD,D<br />
P,PP.<br />
Los Acs en el PPN<br />
reaccionan contra distintos<br />
tejidos: 25% falsos<br />
negativos.<br />
Sensibilidad: 75%.<br />
Especificidad: 83%.<br />
IFI<br />
PPN<br />
PV<br />
ESÓFAGO DE<br />
MONO<br />
positivo<br />
positivo<br />
VEJIGA DE<br />
RATA<br />
positivo<br />
negativo
PÉNFIGO PARANEOPLÁSICO<br />
IFD: en panal de abejas mas lineal en ZMB<br />
IFI: panal de abejas mas lineal en ZMB<br />
IFD IgG<br />
IFD C3
PENFIGOIDE AMPOLLAR<br />
BP230 (BPAg1), BP180 (BPAg2, colágeno tipo XVII<br />
Ampolla tensa<br />
HP ampolla subepidérmica<br />
IFD: IgG y C3 en ZMB(90%)<br />
IFI: IgG antihemidesmosomas(70%)<br />
Patrón: Lineal
PENFIGOIDE CICATRICIAL<br />
—BP180, BP230, laminina 5, colágeno tipo VII<br />
IFD:IgG o C3 en ZMB<br />
IFI:Ac circulantes bajos<br />
Patrón:Lineal<br />
Erosiones, ampollas, cicatrización<br />
residual en mucosas
EPIDERMOLISIS AMPOLLAR ADQUIRIDA<br />
Colágeno tipo VII<br />
Ampollas tensas,erosiones,cicatrices<br />
Y quistes de millium<br />
IFD: IgG en<br />
BMZ<br />
IFI: IgG CVII<br />
Patrón lineal<br />
Técnica Split: tinción de la base de<br />
la ampolla
DERMATOSIS CON IGA LINEAL<br />
Proteínas 97kDa, 120 kDa<br />
IF, banda lineal en la UDE con anti-IgA,<br />
Típica imagen en rosetas<br />
IFD IgA BMZ<br />
IFI pos o Neg<br />
Patrón lineal
DERMATITIS HERPETIFORME<br />
Gliadina (gluten) y otros antígenos<br />
Vesicoampollas agrupadas en<br />
ramillate<br />
IFD: IgA granular papila<br />
IFI:negativa
INMUNOFLUORESCENCIA EN<br />
ENFERMEDADES DEL TEJIDO<br />
CONECTIVO
INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA PARA<br />
DETECTAR ANTICUERPOS ANTINUCLEARES (AAN)<br />
1. Tejido normal (cortes o impresiones): hígado de ratón,<br />
bazo, etc.<br />
2. Suero del paciente<br />
3. Anticuerpo contra inmunoglobulinas humanas IgA, IgM,<br />
IgG, C3, C4, conjugado con fluoresceína.
PATRONES PRINCIPALES, AAN<br />
1. LES activo: periférico, fuerte<br />
LES en remisión: homogéneo, moderado a fuerte<br />
2. LECC, LECSA: homogéneo, negativo a moderado<br />
1. Esclerodermia, ESP, CREST: moteado, negativo a fuerte<br />
4. EMTC, AR: homogéneo, negativo a moderado
PATRONES DE ANA<br />
homogéneo<br />
periférico<br />
moteado<br />
nucleolar<br />
centrómero
ANTI DNA<br />
Crithidiae Luciliae. Kinetoplasto rico en DNA.<br />
LES: valor diagnóstico-actividad enfermedad
LUPUS ERITEMATOSO SISTÉMICO<br />
IFD positiva en ZMB(granular,lineal)<br />
Piel lesionada 90% Piel sana fotoexpuesta 80%<br />
Piel sana no fotoexpuesta 50%<br />
Anti DNA 50-70% positivo(renal)<br />
AntiSm 15 25% positivo (renal y SNC)
LECC<br />
IFD: banda granular en la ZMB (banda lúpica)<br />
Piel lesionada : positiva 90%<br />
piel sana : Negativa
LUPUS ERITEMATOSO CUTÁNEO SUBAGUDO<br />
IFD en ZMB(granular,lineal)<br />
Piel lesionada 50%<br />
Piel sana 30%<br />
Anti Ro 70%<br />
Anti LA 30%
LUPUS ERITEMATOSO<br />
IFD C3 lineal BMZ<br />
IFD C3 granular BMZ<br />
IFD IgG BMZ
DERMATOMIOSITIS<br />
Serología:<br />
Anti Jo-1: 25%<br />
Anti Mi: 8%
ESCLERODERMIA<br />
Serología:<br />
Anti SCL 70 15%<br />
Anti centromero 40%<br />
HP: Engrosamiento del colágeno
ENFERMEDAD MIXTA DEL<br />
TEJIDO CONECTIVO<br />
Serología:<br />
Anti RNP positivo 100%<br />
IFD IgG dentro del núcleo del<br />
queratinocito
Inmunofluorescencia<br />
VASCULITIS<br />
IFI: neutrófilos fijados en alcohol que al microscopio<br />
producen dos patrones de tinción: ANCA citoplasmático<br />
(cANCA) y ANCA perinuclear (pANCA).<br />
ANCA positivo: útil en Dx inicial vasculitis, limitada ,<br />
siempre muy influenciada por el cuadro clínico del<br />
paciente.<br />
Avances en el diagnostico de las vasculitis sistémicas.<br />
Rev. méd. Chile v.127 n.10 Oct. 1999<br />
Vasculitis leucocitoclastica<br />
IFD C3 vasos
PÚRPURA DE HENOCH-SCHÖNLEIN<br />
NLEIN<br />
IF- IgA en los vasos de la dermis
LIQUEN PLANO<br />
Abundantes cuerpos citoides (Civatte) fluorescentes en la<br />
zona de la membrana basal, frecuentemente en racimos.<br />
IFD IgM dentro del cuerpo citoide en<br />
dermis papilar<br />
Immunofluorescence in dermatology<br />
Diya F. Mutasim, MD, and Brian B. Adams, MD Cincinnati, Ohio<br />
J Am Acad Dermatol 2001;45:803-22.)
APLICACIONES DE LAS<br />
TÉCNICAS DE IF EN LA<br />
ACTUALIDAD
Inmunofluorescencia<br />
LA IFD ES DE VALOR EN ALOPECIA<br />
CICATRICIAL, ESPECIALMENTE EN PACIENTES<br />
CON LUPUS ERITEMATOSO.<br />
Value of direct immunofluorescence for differential diagnosis of cicatricial alopecia.<br />
Dermatology. 2005;211(2):98-102.<br />
Los hallazgos de IF en el granuloma facial han sido rara vez descriptos.<br />
Los reportes muestran depositos granulares de IgA, IgG, IgM y C3 en<br />
ZMB, pared de vasos sanguineos y tejido conectivo, IgG en ZMB e IgG en<br />
vasos sanguineos.<br />
Immunofluorescence findings in granuloma faciale: report of two<br />
cases.<br />
J Cutan Pathol. 2003 May;30(5):314-7.
HIBRIDACIÓN IN SITU CON<br />
FLUORESCEÍNA (FISH)<br />
FISH (hibridación fluorescente in situ) utiliza<br />
moléculas fluorescentes para localizar genes<br />
o<br />
fragmentos de DNA.<br />
Técnica especialmente útil para mapear genes<br />
o localizar anormalidades cromosómicas.
FISH – APLICACIÓN EN<br />
DERMATOLOGÍA<br />
Control de los márgenes de resección de neoplasias:<br />
valorando el número de copias de ciertos cromosomas<br />
en células epiteliales descamadas mediante cepillado,<br />
pueden detectarse células tumorales en márgenes<br />
aparentemente libres de tumor en el carcinoma<br />
epidermoide de cavidad oral.<br />
Detección de la presencia de trisomía 7 en algunos<br />
estudios de queratoacantomas, alteración también<br />
descrita en el carcinoma epidermoide de piel.<br />
Detección de inserción cromosómica de genomas<br />
virales, especialmente HPV.<br />
Diagnóstico molecular del virus del papiloma humano por hibridación in situ por fluorescencia (FISH).<br />
Dra Perez Robalino y col., - Instituto del Cancer – Ecuador.<br />
Junio 5, del 2006
Inmunofluorescencia<br />
Bx cervical, FISH negativo para<br />
HPV 16-18<br />
Bx cervical, FISH positiva para HPV<br />
16-18<br />
Diagnóstico molecular del virus del papiloma humano por hibridación in situ por fluorescencia (FISH).<br />
Dra Perez Robalino y col., - Instituto del Cancer – Ecuador.<br />
Junio 5, del 2006
CONCLUSIONES<br />
Las técnicas de inmunofluorescencia, a pesar del gran<br />
avance que han experimentado en los últimos años,<br />
adolecen de problemas de variabilidad, sensibilidad y/o<br />
especificidad, en mayor o menor grado, dependiendo del<br />
anticuerpo utilizado, de las características de los tejidos,<br />
del procedimiento y de la pericia del personal encargado<br />
de realizarlas.<br />
La interpretación de los resultados de la IF debe ser<br />
siempre correlacionada con la clínica, la histopatología y<br />
otros hallazgos de laboratorio para la confirmación<br />
diagnostica en cada paciente en particular.