MICROBIOLOGIA DE BARTONELLA BACILLIFORMIS

MICROBIOLOGIA DE
Bartonella bacilliformis
Rina Meza
Instituto de Investigación de Enfermedades
Tropicales de la Marina de los Estados Unidos
Lima, Peru
Marzo 21, 2005

CLASIFICACION TAXONOMICA
• Phylum BXII. Proteobacteria
• Clase I: Alphaproteobacteria
• Orden VI: Rhizobiales
• Familia II: Bartonellaceae
• Genero: Bartonella.
Fuente: Garrity, G.; Winters, M.; Searles, D. “Taxonomic Outline of the Procaryotic Genera.”
Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology, Second Edition. Realease 1.0, April 2001

BARTONELLA
• Microorganismos pequeños, Gram negativos,
aerobicos, de dificil desarrollo en cultivos.
• Se encuentran en diferentes animales pero
aparentemente no desarrollan enfermedad
• Algunas especies son capaces de infectar los
eritrocitos y otros simplemente se adhieren a las
celulas del hospedero
• Murray, et al., Medical Microbiology 3 rd Ed. Table 35-3

ESPECIES QUE PUEDEN
INFECTAR ERITROCITOS
ORGANISMO
ENFERMEDAD
B. quintana
Fiebre de las Trincheras
B. henselae
B. bacilliformis
Enfermedad del arañazo del Gato
Fiebre de la Oroya, Bartonellosis,
Enfermedad de Carrion
B. elizabethae
Endocarditis
Fuente: Murray, et al., Medical Microbiology 3rd Ed. Table 35-3

MICROFOTOGRAFIA DE INVASION POR
BARTONELLA BACILLIFORMES
Fuente: LEE ANN BENSON, SIDDHARTHA KAR, GERALD McLAUGHLIN AND GARRET M. IHLER
Vol. 54, No. 2 INFECTION AND IMMUNITY, Nov. 1986, p. 347-353, American Society for Microbiology

Verruga Peruana
BARTONELLOSIS
• Es una enfermedad infecciosa que presenta tres
fases clínicas causada por Bartonella bacilliformis
– Fase Aguda o Hemática
– Fase Intercalar
– Fase Eruptiva o Verrucosa
• Reservorio: El unico demostrado es el human.
• Vector: Se incrimina algunas especies del género
Lutzomyia como el transmisor causante de la
enfermedad en humanos.

ESQUEMA SOBRE LA PATOGENIA DE
LA BARTONELLOSIS
Fuente: Javier Arias-Stella “Bartonellosis. De Endemia Regional a Infeccion emergente mundial” Acta Medica Peruana Vol. XVII No. 1
Julio-Setiembre de 1999

MICROBIOLOGIA
Bartonella bacilliformis
• Es una bacteria pequeña: 0.25 a 0.5µm
por 1 a 3 µm
• Localización: intracelular
• Pleomórfico: bacilo, cocobacilo, cocoide
y formas L
• Gram negativo
• Posee multiples flagelos unipolares
(flagelina 42kDa)
• Coloración: Giemsa o Romanowsky

MICROBIOLOGIA
Bartonella bacilliformis
• Crecen en medios especiales muy
enriquecidos, algunos contienen por ejemplo:
agar semisólido, hemoglobina de conejo o
carnero, infusión de papa
• Temperatura: entre 25-28°C,
• Tiempo de desarrollo: entre 6 a 60 días
• No hemoliza los hematíes
• No utiliza los carbohidratos,
• Se ha determinado 24 antígenos de
B. bacilliformis por immunoprecipitación y
western blot, solo seis detectan anticuerpos
específicos.

MICROBIOLOGIA
Bartonella bacilliformis
• Es sensible a los antibióticos
• Es sensible a los anticuerpos antibartonella
• Serología: Aglutinación, fijación de
complemento, ELISA…
• Cultivo del verrucoma

OBTENCION, TRANSPORTE Y CULTIVO DE LA MUESTRA
Tomar 6 ml de sangre
Codificar
Colocar la
muestra en
tubos con o sin
anticoagulante
Frotis y Gota gruesa
Tarjeta con
filtro
Codificados
Cclocar de 2 a 3 gotas de sangre dentro del
area circular. Dejar secar
Colocar 3 ml en cada tubo
Mamtener en refrigeracion
Cerrar la tarjeta y colocar dentro de la
bolsa de trasporte junto con el
desecante. Mantener a temperatura
ambiente.
Medio de Cultivo F1
modificado NMRCD
Colocar 1 ml de
sangre. Incubar
28ºC.

FROTIS – GOTA GRUESA
Codificar las laminas.
Colocar una gota de sangre
en el extremo de una lamina
limpia y desengrasada
45º
Con otra lamina (bordes lisos) hacer un
ángulo aproximado de 45º sobre la gota de
sangre de manera que se extienda a lo
ancho del borde de la lamina
Inmediatamente hacer un extendido
de la muestra a lo largo de la lamina
Dejar secar . Fijar con metanol el
extendido
NOTA.- se sugiere que la lamina se
sostenga tal como se observa en el
grafico

POLIMORFISMO
Bartonella bacilliformis
Morfología Cocoide
Morfología Coco bacilar
Morfologia bacilar

CULTIVO
• MEDIO F1 MODIFICADO – NMRCD
– Medio Solido: Sangre de carnero 10%
– Medio Liquido: RPMI y Suero bovino
Controlar de 24 a 48 horas a 28 ºC.
Mantener en refrigeración hasta su uso
• SIEMBRA:
– Inocular 1 ml de sangre
– Homogenizar en vaiven
– Incubar a 28°C
– Controlar desde 1 – 60 días para ver la presencia del
desarrollo de Bartonella

CULTIVO
B. bacilliformis
•Las colonias se
presentan muy
finas y pequeñas
como gotas de
rocio. Luego
hacer la
coloracion Gram
y la confirmación
por PCR

REACCION EN CADENA DE LA
POLIMERASA (PCR)
– Extracción del ADN: Metodo quimico (FTA)
– Amplificación: Usando iniciadores con
dirección 16S rRNA
– Detección: Usando Gel Agarosa
– Producto: 379 pb

PCR
ELECTROFORESIS
PCR DE CEPA
PCR DE SANGRE

Bartonella bacilliformis
CASOS POSITIVOS DE BROTES
2000 AL 2004
CIUDAD
FROTIS
CULTIVO
PCR
Piura - Huancabamba
n=104
14/83
2/39
10/88
Cajamarca - Chota
n=60
30/57
1/48
8/60
Ancash - Caraz
n=76
N/A
22/76
57/76
Cusco
n=32
N/A
3/32
3/32

PCR vs FROTIS
PCR
TOTAL
F N P
R N 91 3 94
O 73.39 23.08 68.61
T P 33 10 43
I 26.61 76.96 31.39
S TOTAL 124 13 137
100.00 100.00 100
Sensibilidad=76.9% (95% IC: 46.2, 95.0)
Especificidad 73.4% (95% IC: 64.7, 80.9)
VPP = 23.3%
VPN = 96.8%

CONCLUSIONES Y
RECOMENDACIONES
• El Frotis se debe considerar como prueba tamiz
• El PCR es una prueba de alto valor diagnóstico
• El personal que va a realizar al prueba del frotis
debe ser validado
• Realizar la toma y transporte de muestra en
condiciones óptimas para obtener resultados
reales.
• Se recomienda realizar el secuenciamiento de las
cepas nativas

GRACIAS
PREGUNTAS