Estudio preliminar de las propiedades anti-inflamatoria-analgsica y ...

Estudio preliminar de las propiedades anti-inflamatoriaanalgésicay antioxidante de dos plantas marinasLlanio Villate, Mirtha a , Riguera, R. b , Fernández, M.D. a , Arteaga, F. a , Cao, R. c ,Sánchez, L. c , Martínez, J. aa Dpto. de Bioactivos y Productos Naturales. Instituto de Oceanología. Ciudad deLa Habana. Cuba. mllanio@hotmail.com y CEBIMAR@infomed.sld.cub Dpto. de Química Orgánica. Universidad de Santiago de Compostela. EspañacLaboratorio de Química Bioinorgánica. Facultad de Química. Universidad de LaHabana. Ciudad de La Habana. CubaRESUMENEn la actualidad existe una tendencia en el mundo por descubrir nuevos fármacosque puedan dar respuesta a diferentes enfermedades, muchas de ellas aún sinsolución y otras de difícil tratamiento. En las últimas dos décadas diversos gruposde científicos se han concentrado en la obtención de compuestos naturalesmarinos, ya que los mismos representan una fuente de nuevas estructurasquímicas. La farmacología marina ha dirigido su atención hacia algunas áreas dedesarrollo farmacéutico con énfasis en el cáncer y enfermedades inflamatorias.En este trabajo realizamos el estudio preliminar de dos plantas marinas presentesen la plataforma cubana, Syringodium filiforme (Sf) y Thalassia testudinum (Tt) conel objetivo de detectar en las mismas propiedades antiinflamatorias, analgésicas yantioxidantes. Para ello se utilizaron métodos químicos así como técnicasfarmacológicas entre ellas modelos de inflamación, analgésicos y un ensayo paradetectar antioxidantes.El extracto obtenido de Sf inhibió el edema de la pata de la rata inducido porcarragenina y las contorsiones inducidas por ácido acético en ratón y mostróactividad superóxido dismutasa, por lo que se fraccionó por métodoscromatográficos evaluándose las dos fracciones resultantes, obteniéndose en unade ellas resultados estadísticamente significativos en el modelo de analgesia.Por otra parte el extracto de Tt inhibió significativamente el edema de la patainducido por carragenina en rata y las contorsiones inducidas por ácido acético enratón, mostrando también actividad superóxido dismutasa.Los resultados obtenidos sugieren que ambas plantas presentan propiedadesantiinflamatorias, analgésicas y antioxidantes, por lo que deben continuarse losprocesos de aislamiento y purificación de sus principios activos, a los que se lerealizarán los estudios de sus mecanismos de acción.PC: Farmacología marina, Syringodium filiforme (Sf), Thalassia testudinum (Tt)

INTRODUCCIÓNEn los últimos 20 años, los científicos se han concentrado en la obtención decompuestos naturales marinos, ya que los mismos representan una fuente denuevas estructuras químicas (Payá et al., 1993) y de sustancias farmacológicascon actividad antiinflamatoria que permitirán profundizar en el conocimiento delproceso inflamatorio y en novedosos mecanismos de acción de agentesterapéuticos (Jacobs et al., 1993).En este trabajo realizamos el estudio preliminar de dos plantas marinas presentesen la plataforma cubana, Syringodium filiforme (Sf) y Thalassia testudinum (Tt) conel objetivo de detectar en las mismas propiedades antiinflamatorias, analgésicas yantioxidantes.MATERIALES Y METODOSPreparación y análisis químico de los extractos y fraccionesLas especies fueron colectadas en una zona de la costa norte de Ciudad de LaHabana. Una vez separado el material extraño se secaron en estufa a temperaturaentre 45-50 o C se trituraron y se maceraron con etanol al 90% por espacio de 2-3días. El extracto hidroalcohólico se filtró, y el filtrado se concentró a presiónreducida y se liofilizó. El residuo insoluble se descartó.Los extractos así preparados fueron evaluados en modelos de inflamación,analgesia y antioxidante.Una cantidad del extracto hidroalcohólico de Sf se fraccionó por partición con lossiguientes solventes: cloroformo, acetato de etilo y butanol. El residuo acuoso sefraccionó en una columna de XAD-7 obteniéndose las fracciones Sf1 y Sf2 quefueron analizadas por Cromatografía de Capa Fina, espectroscopia UV-vis, yRMN.Edema de la pata por carrageninaSe utilizó la técnica de Winter y cols. (1962). Los extractos, la indometacina (dosisde 25 y 50 mg/Kg), o solución salina (control negativo) se inyectaronintraperitonealmente (i.p.). A los 30 min se inyectó por vía subplantar λ carragenina(300 µg/pata) (Neves et al., 1993). Las mediciones se realizaron en unpletismómetro al inicio y a las 4h.Edema de la oreja por aceite de crotoSe utilizó la técnica de Tubaro y cols. (1986). Los extractos se inyectaron i.p. endosis de 25 mg/Kg, las fracciones y la indometacina y los controles negativos

ecibieron solución salina.A los 30 min se les administró tópicamente aceite decroto (40 µg/oreja).Contorsiones por ácido acéticoSe utilizó la técnica de Collier y cols. (1968). Se inyectaron i.p. los extractos endosis de 10, 25 y 50 mg/Kg; las fracciones y la indometacina en dosis de 10 y 25mg/Kg , o solución salina (control negativo). A los 30 min se inyectó (i.p.) ácidoacético al 0,8 %. Los ratones se observaron durante 20 min registrándose elnúmero de contorsiones del cuerpo y los estiramientos de las extremidades.Actividad superóxido dismutasa (SOD)La actividad SOD se determinó por el método de Mc. Cord y Fridovich (1969). Apartir de los extractos liofilizados fue preparada una solución patrón de 2mg/ml enmezcla reaccionante. Posteriormente fueron realizadas diluciones en base alpatrón para evaluar diferentes concentraciones.Las reacciones fueron monitoreadas espectrofotométricamente a una longitud deonda de 560 nm durante 10 min. Los % de inhibición se calcularon por la relaciónde las pendientes con respecto al control.EstadísticaTodos los análisis se realizaron por los métodos no paramétricos Kruskall-Wallis yMann Whitney. Los resultados se expresan en % de inhibición con respecto alcontrol negativo.RESULTADOSAnálisis por Cromatografía de Capa FinaAl revelar con yodo, para Sf1 se observó una sola mancha y para Sf2componentes de fluorescencia parda y contaminación con Sf1.Análisis de la posible naturaleza química de las fraccionesEl espectro de absorción de Sf1 no mostró máximos en el rango de 200-800 nm.Sf2 no se analizó.Al analizar los espectros RMN-13C y RMN-1H de Sf1 se sugiere que la estructuradel compuesto es de agrupamiento olefínico y que contiene 3 grupos carbonílicosy también grupos alifáticos.Edema de la pata por carragenina

En la fig. 1 se observa que el extracto Tt inhibió significativamente el edema de lapata inducido por carragenina en las dos dosis ensayadas, mientras que el de Sf,al igual que la indometacina, sólo lo hizo en la dosis de 25 mg/Kg. En estos doscasos, en la dosis de 50 mg/Kg, la inhibición observada fue de 21%, lo quepudiera deberse a efectos tóxicos.Edema de la oreja por aceite de crotoNinguno de los extractos, ni las fracciones de Sf inhibieron significativamente eledema de la oreja en las dosis ensayadas.Contorsiones por ácido acéticoEl extracto Tt y la indometacina inhiben de forma significativa las contorsionesinducidas por ácido acético en todas las dosis ensayadas, mientras que el de Sfsólo lo hace en las dosis de 25 y 50 mg/Kg (fig. 2).La fracción Sf1 presenta diferencia significativa con el control negativo en la dosisde 25 mg/Kg y la Sf2 en ambas dosis (fig. 3)Actividad superóxido dismutasaLa fig. 4 muestra la relación dosis-respuesta del extracto Tt con una CI 50 de 0.29mg/mL, y en la fig. 5 se observa este efecto para Sf con una CI 50 de 1.71 mg/mLAunque no se representó gráficamente también se obtuvo el valor de CI 50 de laenzima SOD correspondiente a 0.95 x 10 -9 M.Las CI 50 determinadas para los extractos reflejan que el de Tt tiene una actividadantioxidante superior al de Sf.COMENTARIO GENERALEl extracto Tt presenta efectos antiinflamatorio, analgésico y antioxidantesuperiores a los del extracto Sf, con resultados comparables en algunas dosis a laindometacina, lo que sugiere que su acción pudiera estar relacionada con lainhibición de la producción de prostaglandinas u otros compuestos de la víaciclooxigenasa o la COX-2 directamente, por lo que estamos trabajando en elproceso de purificación y caracterización estructural del mismo.Las fracciones obtenidas de Sf muestran resultados analgésicos, que, en el casode Sf2 se manifiestan en las dos dosis ensayadas. Las mismas deberán serevaluadas en los modelos de edema de la pata y SOD. De acuerdo a losresultados que se obtengan y teniendo en cuenta que esta fracción presentacontaminación con Sf1 se determinará si debemos continuar su purificación para

poder determinar la naturaleza química del o los compuestos responsables de laactividad.100****80% de inhibición604020TtSfIndometacina025 50dosis (mg/Kg)Fig. 1 Efecto de los extractos en el modelo de edema de la pata inducido porcarragenina (* p

10080****% de inhibición6040*Sf1Sf2Indometacina20010 25dosis (mg/Kg)Fig. 3 Efecto de las fracciones en el modelo de contorsiones inducidas por ácidoacético (* p

Fig. 4 Relación dosis-respuesta correspondiente al extracto Tt. (CI 50 =0,29mg/mL).