Enzymes de restriction - Promega

Décembre 2011
Faites 45% d’économies dans la
quantification de vos ADNdb
avec une nouvelle alternative
au PicoGreen®
Clonage PCR
Astuces techniques
Des solutions intégrées
automatisées pour réussir
vos analyses
Gagnez du temps
Enzymes de restriction
1

2
Sommaire
APPLICATION & ASTUCE TECHNIQUE
▶ Gagnez du temps dans vos
digestions
QUANTIFIER VOS ADNdb
▶ Une alternative à PicoGreen®
Faites 45% d’économies
ACTUALITÉS SCIENTIFIQUES
▶ Actualisez vos connaissances
Articles techniques, vidéos et
bien plus encore
FOCUS TECHNIQUE
▶ Clonage PCR : astuces
techniques
Améliorez l'efficacité de vos
clonages !
SOLUTIONS INTÉGRÉES
▶ Des solutions clées
L’analyse cellulaire com
l’ingénierie de détectio
JEU CONCOURS MENSUE
▶ Gagnez un Ipod shuffl
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▶ Produits phares 201
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2011.
3

4
Réduire
la durée
du clonage
Enzymes de restriction
Promega est historiquement connu et reconnu
comme producteur d’enzymes depuis plus de
30 ans. Promega continue à innover dans ce
domaine et à identifier des propriétés enzyma-
tiques permettant de réduire le temps passé à
faire du clonage. Utilisez notre guide «Enzymes
de restriction» pour sélectionner rapidement la
ou les meilleures enzymes de restriction pour
vos travaux et vos applications. Voici quelques
unes des caractéristiques que nous avons
testées pour vous aider à gagner du temps.
*Isopropyl-β-d-thiogalactopyranoside (IPTG) est un inducteur du promoteur lac, et le 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-d-galactosid
Flexi, GoTaq et HaloTag sont des marques déposées et Helix est une marque de Promega Corporation.

Qualifié pour le clonage bleu/blanc
Pour aller au-delà de la pureté et de
l'activité spécifique, nous avons testé
nos enzymes de restriction dans des réactions
de sous-clonage afin de nous assurer
qu'il n'y avait aucune interférence. Le test
de clonage bleu/blanc réduit au minimum
l'incidence des faux positifs dans les expériences
de clonage. Ce test mime une expérience
de clonage et permet de détecter la
perte d'un seul nucléotide à l'extrémité d'un
plasmide linéarisé. Des bactéries transformées
avec succès donneront des colonies
blanches sur des plaques indicatrices
X-Gal + IPTG, alors que les bactéries
transformées avec un plasmide
recircularisé, dépourvue d’inserts,
donneront des colonies
bleues.
Conçues pour une
digestion rapide
Les réactions de
digestion par
des enzymes
Enzyme de
restriction
de restriction à haute efficacité nécessitent
typiquement 1 µl d'enzyme pour digérer 1
µg d'ADN en 1-3 heures. Avec des enzymes
de restriction, cette durée d'incubation peut
être réduite à 5-15 minutes, permettant le
criblage rapide de clones ou l'obtention
rapide de produits de digestion d'ADN pour
des applications ultérieures. Il existe 27
enzymes de restriction populaires assurant
une digestion rapide qui vous permettront
de réduire vos durées de clonage.
Compatible avec le tampon GoTaq®
Passez directement d'une réaction d'amplification
GoTaq® à la digestion par des
enzymes de restriction qui ont une activité
efficace dans les tampons GoTaq® Green et
PCR Master Mix. Préparez des fragments
de PCR qui sont prêts à être insérés dans
les vecteurs Flexi®, les vecteurs HaloTag®
Flexi ou dans tout autre vecteur non-T.
Augmentez encore la polyvalence de votre
clonage en choisissant la ou les enzymes de
restriction qui correspondent à vos besoins
en matière de vecteur.
Aptitude à
la digestion
rapide
Compatible
avec le tampon
GoTaq®
Recevez le
Guide complet
e (X-Gal) est un agent qui produit une coloration bleue lorsqu'il est hydrolysé par la β-galactosidase.
Qualifié pour le
clonage bleu/
blanc
AATII + +
ACC65I +
Exemple tiré du guide des enzymes de restriction, caractéristiques
visibles au premier coup d'oeil
5

6
QUANTIFIER VOS ADNdb
Economisez 45%
avec une nouvelle alternative au Pi
Le nouveau système QuantiFluor pour ADN double brin offre à
votre labo une sensibilité équivalente au PicoGreen® avec en prime
de grosses économies sur la quantification de l'ADNdb :
Economique : 45% d’économie par rapport à PicoGreen®.
Sensible : Même sensibilité que PicoGreen® ; sensibilité accrue
sur l'absorbance (par ex., méthode NanoDrop®).
Polyvalent : S'utilise sur n'importe quel instrument à microplaques
ou à tubes séparés.
Fluorescence (UFR)
200,000
180,000
160,000
140,000
120,000
100,000
80,000
60,000
40,000
20,000
0
0
31,937
Colorant QuantiFluor dsDNA
Colorant PicoGreen ®
34,488
159,771
130,949
200 400 600 800 1,000 1,200
Concentration d'ADN Lambda (ng/ml)
Comparaison des méthodes colorimétriques de quantification de
l'ADNdb
Les deux colorants pour ADNdb ont des gammes dynamiques comparables
et saturent vers 1000 ng/ml dans le volume de 200 μl, au format 96 puits.
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8
Actualités
scientifiques
NOUVEAU PROTOCOLE EN VIDÉO
Aperçu des kits simplyRNA pour l'instrument Maxwell® 16

ARTICLES TECHNIQUES DU PUBHUB
PubHub
PubHub
Bioluminescent assays for detection of lysine
deacetylase activities
Comparison of luciferases as ATP sensors in the
presence of inhibitors: CellTiter-Glo® Assay shows
less compound interference than the PerkinElmer
ATPlite 1Step assay
PROFILS ADN
Forensic DNA profiles crossing borders in Europe
(implementation of the Treaty of Prüm)
BLOG PROMEGA
Screening for drug-drug interactions with PXR and
CYP3A4 activation
Sequencing the black death is a window to the past
ATPlite est une marque de PerkinElmer, Inc. CellTiter-Glo et Maxwell sont des marques déposées de Promega Corporation.
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jeu
concours
Gagnez un
Ipod Schuffle !
Pour participer, répondez aux questions ci-dessous. Vous trouverez les
réponses en parcourant ce numéro.
1. Avant Promega, quelle était la société qui
commercialisait le Fugene®?
2. Quel luminomètre (la marque) a été sélectionné
comme étant «le plus vieux luminomètre
d’Europe»?
Conditions
Soumettez
vos réponses

Avez-vous le plus vieux
Luminométre d’Europe?
Promega vous remercie pour votre participation.
UN gagnant a été sélectionné grâce à son
luminomètre : LKB Wallac datant de 1975 !
Vous pouvez à tout moment consulter le panel
des plus vieux luminomètres d›Europe qui ont
été proposés :
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FOCUS TECHNIQUE
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Améliorez le rendement de vos clonages
Astuces pour le clonage PCR
Les systèmes de vecteur pGEM®-T et pGEM®-T Easy autorisent le
clonage direct des produits de PCR dans des vecteurs linéaires, munis
d’extrémités cohésives de thymidine (T) en 3', correspondant aux
résidus adénine (A) en 5' de l'amplicon. Rien n'est plus simple que
d'identifier les recombinants : il suffit de reprendre les colonies
blanches parmi les colonies bleues de la plaque de référence. Améliorez
votre taux de succès avec ces quelques astuces utiles.
pGEM et GoTaq sont des marques déposées de Promega Corporation.

• Evitez d'introduire des nucléases qui sont
susceptibles de dégrader les bouts collants
T de votre vecteur. Utilisez de l'eau
stérile, dépourvue de nucléases, dans
vos réactions de ligation.
• Utilisez une ADN polymérase qui ne soit
pas de haute fidélité uniquement durant
la PCR afin de garantir la présence d'une
extrémité cohésive A sur votre fragment
de PCR.
• Si vous utilisez une ADN polymérase de
haute fidélité, ajoutez une extrémité
cohésive. Purifiez le fragment de PCR et
préparez une réaction d’adénylation (voir
"Clonage des produits de PCR ou A tailing
à bouts francs" dans le manuel technique
des vecteurs pGEM®-T).
• Optimisez le rapport insert/vecteur. La
ligature de l'insert d'ADN témoin peut
s'effectuer avec un rapport 1/1, alors
qu'un autre insert peut s’insérer plus
efficacement avec un rapport 3/1.
• Utilisez des cellules dont le rendement
de transformation est d'au moins 1 ×
10 8 cfu/μg d'ADN afin d'obtenir un
nombre suffisant de colonies, car la ligation
de fragments dont les extrémités
cohésives ne comprennent qu'une seule
base peut s'avérer inefficace.
• Eviter d'exposer les produits de PCR à un
rayonnement UV de courte longueur
d'onde, lequel génère des dimères de
pyrimidines. Placez une plaque en verre
entre le gel et la source d'UV. Idéalement,
le produit de PCR sera observé sous une
lumière UV de grande longueur d'onde.
• Purifiez le fragment de PCR sur gel
de façon à minimiser les inserts
concurrents et éliminer les inhibiteurs
éventuels de la réaction de ligation.
• Evitez les températures élevées (>28°C)
durant la ligation, et laissez la réaction
se dérouler pendant la nuit de manière
à améliorer le rendement de la transformation.
Pour plus d’aide, consultez le guide
de résolution des problèmes techniques
pGEM-T et pGEM-T easy.
Regardez la vidéo
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TECHNIQUES DE DÉTECTION
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