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Brigitte CIAPA ; brigitte.ciapa@u-psud.fr Philippe Huitorel, Rémi Dumolard, Lucie Torsca, Ankush Vaid et Brigitte CIAPA CNRS Université Orsay La voie ERK joue un rôle dans la régulation d'une variété de processus tels que la prolifération, la différentiation, le développement, la survie, et l'apoptose. De même que chez la souris, le xénope, ou l’étoile de mer, l’ovocyte maturé non fécondé d’oursin contient une activité ERK élevée qui dépend de celle de Mos, protéine à turnover rapide. Nous avons étudié le rôle de ERK dans les mécanismes d’apoptose chez l’œuf d’oursin non fécondé. L’inactivation dans ces œufs de la voie MEK/ERK avec des inhibiteurs de MEK (UO126 par exemple) génère l'entrée en phase M, des oscillations de MPF corrélées à des pics calciques, sorte d'oscillateur cellulaire qui conduit à la mort cellulaire en l'absence de cytokinèse. Le traitement d’œufs non fécondés avec différents inhibiteurs de synthèse protéique (émétine, anisomycine) provoque également l’inactivation de ERK, l’apparition de déformations cellulaires, et d’un certain nombre de pics calciques mais sans induire d’entrée en mitose. La mort cellulaire survient au bout de 6 heures environ. L’injection de tampon EGTA inhibe à la fois les variations de Cai ainsi que la mort cellulaire. La caspase-3 est activée dans les œufs traités avec U0126 ou avec émétine. En revanche, une chute du potentiel mitochondrial intervient après traitement avec U0126 mais pas après traitement avec de l’émétine. En conclusion, plusieurs voies de mort cellulaire peuvent être utilisées par l'œuf d'oursin non fécondé, dépendant ou non des mitochondries, à caractère plutôt apoptotique ou plutôt autophagique, mais qui semblent dépendre du calcium. L'inhibition de la synthèse protéique enclencherait une voie ressemblant à la "voie de stess du RE", l'inhibition seule de la voie MEK/ERK conduisant les œufs vers un phénomène de "catastrophe mitotique" faisant suite à des mitoses anormales et une absence de cytokinèse. 15h15-15h40 Malonyl-CoA and starvation response in Drosophila oenocytes 15h40-16h05 Laura NAPAL ; napal@cgm.cnrs-gif.fr Laura Napal, Thomas Rubin, Kashif Zahoor, Jacques Montagne CGM CNRS, FRE3144 Cellular growth requires large amounts of fatty acids (FA) as stores, membrane compounds and signalling molecules. We are using Drosophila to investigate the function of 3 enzymes involved in FA metabolism: the anabolic Acetyl-CoA Carboxilase (ACC) and Fatty Acid Synthase (FAS), as well as the catabolic Carnitine Palmitoyl Transferase-1 (CPT1). Synthesis of long chain FA takes place within the cytosol: ACC catalyses the carboxylation of acetyl-CoA into malonyl-CoA, which is used by FAS to produce palmitic acid. Malonyl-CoA is also interact with CPT1 to inhibit FA transfer into the mitochondria for oxidation. We observed that ACC and FAS are required for lipid accumulation and that mutation of CPT1 strongly improves fasting resistance. Strikingly, ACC mutation provokes embryonic lethality, whereas some FAS mutants survive through larval stage, suggesting that malonyl-CoA is much more than only a precursor of FA synthesis. Tissue-restricted disruption revealed that lack of ACC in the hepatocyte-like-cells oenocytes, induces a phenotype identical to that of genetic ablation of oenocytes. We further observed that lack of ACC in the oenocytes induces capture of lipid droplets mediated by LpR2, a Drosophila LDL receptor homologue. Since this process is also induced by starvation, we propose that the level malonyl-coA is critical in inducing a starvation response. Role of JAK-STAT signaling in Hid-mediated induction of apoptosis in the Drosophila ovarian polar c Anne-Marie PRET ; pret@cgm.cnrs-gif.fr Anne-Marie Pret, François Agnès, Asma Khammari, Antoine Borensztejn, Guillaume Rodriguez, Elisabeth Boissonneau, Pierre Gandille Centre de Génétique Moléculaire (CNRS à Gif sur Yvette) Université Pierre et Marie Curie (Paris 6) Université Paris-Sud 11 Although much has been learned in recent years about the apoptotic machinery, the mechanisms underlying physiological life and death choices remain less clearly understood likely due to the existence of, as yet unidentified, regulatory factors. We are studying apoptosis in the polar cell lineage of Drosophila ovaries, which allows selection of exactly 2 cells at each follicle extremity from among approximately 6 precursors. Polar cells are of somatic origin and they participate to the formation of the micropyle, the sperm entry into the oocyte. We have characterized the specific elements of the apoptotic machinery involved in reduction of polar cell number in order to identify potential regulatory points. We demonstrate that, among the RHG family pro-apoptotic regulators, polar cell apoptosis requires the function specifically of Hid, and among the seven Drosophila Association de Biologie Cellulaire du Grand campus http://biocell.cnrs-gif.fr 12
caspases, that of the initiator caspase, Dronc, and its adaptor Dark/Apaf-1, and the effector caspase, Drice. We have shown that in polar cells destined to die, in contrast to mature polar cell pairs, hid transcription is specifically activated and the anti-apoptotic protein Diap1 is downregulated, thereby identifying potential regulatory points. Importantly, Upd, a ligand of the JAK-STAT signaling pathway, is specifically secreted by polar cells, and this source of ligand is necessary for both induction of polar cell apoptosis and transcriptional activation of hid. We are presently investigating the spatial requirements (autocrine or paracrine), as well as potential targets (direct or indirect), for JAK-STAT signaling in polar cell apoptosis. In parallel, we are carrying out an RNAi-based screen to identify novel genes involved in regulation of polar cell number in Drosophila ovaries. 16h05-16h30 Pause-café et Posters 16h30- 1 Assemblé général de l’association Biologie Cellulaire Conclusion Affiches - Posters Microscopie corrélative chez la plante: apport de la congélation sous haute pression et des sondes bifonctionnelles Nicolas BAROIS ; nicolas.barois@isv.cnrs-gif.fr Nicolas Barois et Béatrice Satiat-Jeunemaitre. Laboratoire Dynamique de la Compartimentation Cellulaire Institut des Sciences du Végétal (CNRS UPR 2355/IFR 87 La Plante et son Environnement) Bâtiment 23/24 Avenue de la Terrasse F-91198 GIF-SUR- YVETTE Cedex La microscopie corrélative combine plusieurs techniques de microscopie ayant différentes résolutions pour observer une même structure ou un même marquage dans une même cellule, dans une même population de cellules ou un même tissu. Nous développons des techniques de microscopie corrélative sur coupes ultrafines de spécimens inclus dans des résines acryliques utilisant la microscopie photonique à épifluorescence pour localiser une protéine dans une population cellulaire ou un tissu chez la plante puis la microscopie électronique à transmission pour relier ce marquage à l'ultrastructure cellulaire. La préparation du spécimen par congélation sous haute pression est comparée à celle par fixation chimique. Nous utilisons des sondes bi-fonctionnelles à la fois fluorescentes et denses aux électrons telles que les quantums dots ou les nanoparticules d'or fluorescentes suivi d'un accroissement de taille par déposition d'argent. Les apports mais aussi les contraintes et compromis amenés par l'utilisation de la congélation sous haute pression, de résines acryliques et des sondes bi-fonctionnelles seront discutés. 2 Signalisation calcique et invasion des cellules épithéliales par Shigella BingKai LIU ; bingkai.liu@u-psud.fr BingKai Liu1,2, Jie Zhang1,2, Fabienne Pierre1,2, Laurent Combettes1, Guy Tran Van Nhieu,2 1Inserm-Paris XI university, UMR-S 757, Orsay, France. 2Inserm-Collège de France, U971, Paris, France. Shigella flexneri, une bactérie entéropathogène responsable de maladies diarrhéiques, est l'agent causal de la dysenterie bacillaire chez l'homme. Cette bactérie est capable d'induire son internalisation par des cellules épithéliales en réorganisant localement le cytosquelette d'actine. L'internalisation de la bactérie implique la sécrétion par celle-ci des protéines IpaB et IpaC qui, via un appareil de sécrétion de type 3 (T3SS), s'associent et s'insèrent dans la membrane plasmique de la cellule hôte pour former un "translocateur". Ce translocateur initie les remaniements du cytosquelette nécessaires à l'internalisation de la bactérie et permet l'injection d'effecteurs bactériens qui vont moduler ces réponses initiales à l'intérieur des cellules hôtes. Les remaniements initiaux sont liés au domaine carboxy-terminal d'IpaC et à l'activation des kinases de famille de Src (Mounier et al., 2009), mais la cascade précise des événements de signalisation menant à la polymérisation d'actine n'est pas connue. Au cours de l'invasion de la cellule hôte par shigella, nous avons observé des oscillations de la concentration intracellulaire globale de Ca2+. Bien que ces augmentations de Ca2+ soient dépendantes du T3SS, elles ne semblent pas nécessaires à l'invasion bactérienne (Tran Van Nhieu et al., 2003). Nous avons confirmé ces résultats en observant que l'addition de thapsgargin, inhibiteur des SERCA, combinée à l'absence de Ca2+ externe, prévient les augmentations de Ca2+ global induites par des agonistes dépendant du Ca2+ et celles observées en présence de shigella mais n'empêche pas l'invasion par la bactérie. Cependant, nous avons observé une redistribution du récepteur de l'inositol 1,4,5triphosphate (InsP3R) durant ce processus. De plus, la surexpression de l'InsP3-5-phosphatase ou l'utilisation de siRNA contre les InsP3Rs qui inhibent les augmentations d'InsP3, inhibent également la réorganisation du cytosquelette d'actine induite par l'entrée de la bactérie. Enfin, des résultats préliminaires utilisant un dispositif de vidéo-microscopie rapide (1 image/30ms), montrent des augmentations localisées de Ca2+ au niveau des foyers d'entrée de Shigella. L'ensemble de ces résultats suggère que ce sont des augmentations locales et non globales de Ca2+ qui sont impliquées dans la réorganisation du cytosquelette d'actine durant l'invasion bactérienne. Mots-clefs : Interactions cellulaires, signalisation Association de Biologie Cellulaire du Grand campus http://biocell.cnrs-gif.fr 13
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