REF 73 112 - Biologiemarine

REF 73 112 06125 K - fr - 2006/12
SLIDEX ® Staph-Kit
SLIDEX ® Staph-Kit est un test rapide d'agglutination de particules de latex et d'hématies pour l'identification des souches
de Staphylococcus aureus à partir des milieux d'isolement.
IVD
INTRODUCTION ET OBJET DU TEST
Les staphylocoques font partie des bactéries les plus
fréquemment rencontrées en pathologie humaine. Les
infections les plus communes provoquées par
Staphylococcus aureus sont cutanées, mais des atteintes
sévères (septicémies, endocardites, méningites,
pneumonies, ostéomyélites) peuvent être observées en
milieu hospitalier (1).
La méthode la plus répandue pour l'identification de
Staphylococcus aureus a longtemps été la recherche de
la coagulase. Ce test est basé sur la capacité des
souches de Staphylococcus aureus à produire cette
enzyme extra-cellulaire qui coagule le plasma de lapin.
Ce test permet ainsi de différencier Staphylococcus
aureus des autres espèces de staphylocoques,
majoritairement coagulase négative. Cependant, cette
méthode nécessite 4 à 24 heures d'incubation.
D'autres méthodes, basées sur l'agglutination d'hématies
ou de particules de latex, sont actuellement reconnues
pour l'identification de Staphylococcus aureus (1, 2).
En effet, Staphylococcus aureus possède un récepteur
protéique pour un fragment du fibrinogène. Ce récepteur
est présent sur 96 % des souches d'origine humaine (3)
et sur la plupart des autres biotypes. Certaines souches
résistantes aux Pénicillines M ne présentent pas ce
facteur d'affinité pour le fibrinogène (4).
A la surface de Staphylococcus aureus une protéine, la
protéine A, réagit électivement avec le fragment Fc de la
plupart des immunoglobulines d'isotype G (IgG). Cette
protéine est produite sur tous les milieux mais faiblement
sur gélose au sang. Elle est présente sur environ 90 %
des souches (5). Enfin, des protéines ou glycoprotéines et
des acides téichoïques dont les spécificités antigéniques
sont extrêmement variables (1) existent à la surface de
Staphylococcus aureus.
SLIDEX Staph-Kit permet l’identification des souches de
Staphylococcus aureus à partir de milieux d’isolement.
PRINCIPE
SLIDEX Staph-Kit est un réactif constitué d’un mélange :
- d’hématies de mouton stabilisées, sensibilisées par du
fibrinogène et agglutinées lorsqu'elles sont mises en
présence d'une souche de Staphylococcus aureus
portant le récepteur d’affinité pour le fibrinogène,
- de particules de latex sensibilisées par un anticorps
monoclonal (IgG) et agglutinées lorsqu'elles sont
mises en présence d'une souche de Staphylococcus
aureus portant la protéine A et/ou des antigènes
protéiques de surface.
COMPOSITION DU COFFRET POUR 50 TESTS
R1
S. aureus (H / L)
1 x 1,7 ml
Flacon comptegouttes**
à
bouchon rouge
R2
S. aureus (H / LC)
1 x 1,7 ml
Flacon comptegouttes**
à
bouchon blanc
1 notice
Réactif anti-Staphylococcus aureus
(prêt à l’emploi, stocker en position verticale)
Hématies de mouton sensibilisées par du
fibrinogène humain* et latex sensibilisé par un
anticorps monoclonal souris anti-
Staphylococcus aureus (souris)
(merthiolate de sodium 0,13 g/l + azoture de
sodium 1 g/l)
Réactif contrôle négatif
(prêt à l’emploi, stocker en position verticale)
Hématies de mouton et latex non sensibilisé
(merthiolate de sodium 0,13 g/l + azoture de
sodium 1 g/l)
* L'absence d'antigène HBs, d'anticorps anti-VIH1, anti-
VIH2 et d'anticorps anti-VHC a été vérifiée. Cependant,
aucun test ne pouvant apporter une garantie absolue, ce
produit doit être manipulé avec les précautions d'usage
relatives aux produits potentiellement infectieux.
** 1 goutte = 0,03 ml
Bien homogénéiser les réactifs avant utilisation.
MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI
Cartes jetables ou,
Lames de verre porte-objets parfaitement propres
Oeses plastiques ou bâtonnets jetables
Minuteur
PRECAUTIONS D’UTILISATION
Pour diagnostic in vitro uniquement.
Pour usage professionnel uniquement.
Ce coffret contient des composants d'origine
humaine. Aucune des méthodes d'analyse
actuellement connues ne peut garantir de façon
absolue que ces produits ne contiennent aucun
agent pathogène transmissible. Il est recommandé
de les manipuler avec les précautions d'usage
relatives aux produits potentiellement infectieux
(se reporter au Manuel de Sécurité Biologique en
Laboratoire - OMS - Genève - dernière édition).
Ce coffret contient des composants d'origine animale.
La maîtrise de l'origine et/ou de l'état sanitaire des
animaux ne pouvant garantir de façon absolue que ces
produits ne contiennent aucun agent pathogène
transmissible, il est recommandé de les manipuler avec
les précautions d'usage relatives aux produits
potentiellement infectieux (ne pas ingérer ; ne pas
inhaler).
Les prélèvements, cultures bactériennes et produits
ensemencés doivent être considérés comme
potentiellement infectieux et doivent être manipulés de
façon appropriée. Les techniques aseptiques et les
précautions usuelles de manipulation pour le groupe
bactérien étudié doivent être respectées tout au long de
la manipulation ; se référer à "CLSI/NCCLS M29A,
Protection of Laboratory Workers from Occupationally
Acquired Infections, Approved Guideline – révision en
vigueur". Pour informations complémentaires sur les
bioMérieux SA Français - 1

SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - fr - 2006/12
précautions de manipulation, se référer à "Biosafety in
Microbiological and Biomedical Laboratories, CDC/NIH
dernière édition," ou à la réglementation en vigueur
dans le pays d'utilisation.
Ne pas utiliser les réactifs après la date de péremption
indiquée sur l’étiquette coffret.
Eviter le contact avec les yeux, la peau ou les
vêtements.
Ne pas intervertir ou mélanger les réactifs de lots
différents.
Ne pas pipeter à la bouche les réactifs.
Ne pas utiliser d'oese métallique pour réaliser le test
d'agglutination au latex.
Ne pas réutiliser les cartes jetables.
Les réactifs du coffret contiennent un conservateur
(azoture de sodium), susceptible de réagir avec les
tuyauteries en plomb ou en cuivre et de former des
azotures métalliques explosifs. Il est recommandé de
rincer à l'eau tout rejet.
L'interprétation des résultats du test doit être faite en
tenant compte du contexte clinique, de l'origine du
prélèvement, des aspects macro et microscopiques de
la souche et éventuellement des résultats d'autres tests.
CONDITIONS DE STOCKAGE
Conserver les réactifs à 2-8°C.
Ne pas congeler les réactifs.
Si les réactifs ont été congelés accidentellement, ils ne
doivent pas être utilisés.
Tous les composants sont stables jusqu'à la date de
péremption indiquée sur l'étiquette coffret, s'ils sont
conservés dans les conditions préconisées.
ECHANTILLONS (prélèvements et préparation)
Ensemencer le prélèvement sur un milieu d'isolement
sélectif (gélose Chapman, gélose Baird Parker, gélose
tellurite glycine) ou non sélectif [(gélose Columbia au
sang de mouton (5 %), gélose Trypcase soja avec ou
sans sang de mouton (5 %), gélose Mueller Hinton avec
ou sans sang de mouton, gélose CLED, gélose BCP,
gélose CPS ID] : les performances peuvent varier en
fonction du type de milieu utilisé.
Une étude interne réalisée sur 191 souches de S. aureus
(MRSA et MSSA) et 89 souches de S. non aureus montre
une sensibilité identique en fonction du milieu utilisé.
L’étude montre également que les résultats de spécificité
ne sont pas statistiquement différents en fonction du
milieu utilisé (voir tableau ci-dessous). Cependant, il est
recommandé d’utiliser les milieux suivants : Gélose
Columbia au sang, Columbia ANC + sang, TSA, TSA +
sang, CPS et Baird Parker.
Gélose Columbia au sang
Columbia ANC + sang
TSA
TSA + sang
CPS
Baird Parker
Mueller Hinton
Mueller Hinton + sang
Tellurite Glycine Agar
BCP
CLED
Milieu Sensibilité Spécificité
94,2 % 89,5 %
94,2 % 88,4 %
Chapman 94,2 % 87,2 %
MODE OPERATOIRE
1. Laisser les réactifs à température ambiante (18-25°C)
avant utilisation.
2. Bien remettre en suspension les réactifs. Chasser les
bulles retenues dans les compte-gouttes.
3. Sur une carte jetable ou lame de verre porte-objet
parfaitement propre, dans 2 cercles, déposer :
- 1 goutte de R1 (réactif anti-Staphylococcus aureus) ;
- 1 goutte de R2 (réactif contrôle négatif).
Veiller à tenir les flacons compte-gouttes verticalement
lors de la distribution des gouttes.
4. Dans chacune des gouttes, disperser très
soigneusement et complètement pendant 10 secondes,
1 à 2 colonies suspectes de taille moyenne issues
d’une gélose non sélective ou 3 à 6 colonies très
petites issues d’une gélose sélective (ex. : gélose
Chapman) à l'aide d'une oese ou d’un bâtonnet
jetable.
5. Donner à la lame un léger mouvement de rotation
pendant 20 secondes et lire la réaction sous éclairage
normal sans utiliser de loupe.
LECTURE ET INTERPRETATION DES RESULTATS
Un résultat positif est indiqué par l'apparition dans le
réactif R1 d'une agglutination dans les 30 secondes
(temps du mélange + temps de rotation de la lame) soit
des hématies sensibilisées (coloration rouge), soit des
particules de latex (coloration blanche), ou des deux
simultanément (coloration rouge orangé).
Un résultat négatif est indiqué par l'absence
d'agglutination avec les réactifs R1 et R2.
La réaction est ininterprétable si le réactif R2
présente une agglutination.
L'agglutination des hématies sensibilisées indique la
présence de facteur d'affinité pour le fibrinogène.
L'agglutination du latex indique que la souche possède
la protéine A ou l'antigène contre lequel est dirigé
l'anticorps monoclonal.
Si l'agglutination est très faible avec le réactif anti-
Staphylococcus aureus, si le réactif contrôle est
agglutiné ou si des grumeaux sont obtenus, l'identification
de la souche doit alors être effectuée par la
recherche de la coagulase ou par l'étude des caractères
biochimiques.
CONTROLE DE QUALITE
Un contrôle de qualité des réactifs doit être effectué à
l'ouverture d'un nouveau coffret avec les souches cidessous
:
Souches contrôle Hématies Latex
recommandées R1 R2 R1 R2
S. aureus ATCC ® 25923 + - - -
S. epidermidis ATCC ® 14990 - - - -
S. aureus ATCC ® 51153 - - + -
Suivre les étapes de la méthodologie et de la lecture à
partir des colonies correspondant aux souches ci-dessus.
Les souches servant au contrôle de qualité doivent être
cultivées sur les milieux habituellement utilisés au
laboratoire.
Après incubation 18-24 heures à 33-37°C, repérer les
colonies suspectes. S'assurer dans un premier temps
qu'il s'agit bien d'un staphylocoque par les réactions
classiques (morphologie, Gram, catalase).
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Une détérioration des réactifs doit être suspectée si :
- le réactif R1 n'agglutine pas une souche de
Staphylococcus aureus connue et servant de
référence positive ;
- le réactif R1 agglutine une souche de Staphylococcus
epidermidis connue et servant de référence négative ;
- les réactifs sont autoagglutinés dans les flacons ;
- les réactifs sont contaminés, évaporés ou hémolysés.
Remarque :
Il est de la responsabilité de l'utilisateur de s'assurer que
le contrôle de qualité est mis en œuvre conformément à la
législation locale en vigueur.
LIMITES DU TEST
Certaines souches peuvent être difficiles à émulsionner
et donner des grumeaux ou des filaments dans le
réactif. Ces images ne doivent pas être confondues
avec une agglutination. Néanmoins, une agglutination
peut être visible entre les grumeaux.
Les réactions peuvent être faussement négatives si :
- un nombre insuffisant de colonies est utilisé pour le
test (dans ce cas, il faut effectuer une subculture pour
avoir une croissance suffisante) ;
- la souche ne produit pas le facteur d'affinité pour le
fibrinogène, la protéine A (gélose sang) ;
- l'antigène contre lequel est dirigé l'anticorps
monoclonal est absent.
D'autres tests doivent alors être mis en oeuvre (6).
Des réactions positives peuvent être obtenues avec les
autres espèces de Staphylococcus qui possèdent
habituellement un facteur d'affinité pour le fibrinogène
et/ou une coagulase : S. schleiferi, S. lugdunensis,
S. intermedius, S. delphini, S. hyicus (1, 7).
Des réactions faussement positives sont possibles avec
certaines souches de streptocoques (A, C et G)
possédant des sites récepteurs pour les immunoglobulines
(8) et pour le fibrinogène (9).
Des réactions ininterprétables peuvent être observées
avec certaines souches d'entérocoques et de microcoques.
SLIDEX ® Staph-Kit ne peut pas être utilisé directement
sur hémoculture en raison des interférences possibles
avec le fibrinogène et/ou les immunoglobulines
apportées par le sang.
PERFORMANCES
L'évaluation des réactifs a été menée à partir de souches
fraîchement isolées (centres hospitaliers) et à partir de
souches congelées dans plusieurs centres hospitaliers et
les résultats de l'étude multicentrique ont été publiés (10).
Toutes les souches de Staphylococcus ont été confirmées
par la coloration de Gram, le test de catalase, la
coagulase libre (tube) et éventuellement par identification
biochimique.
Toutes les souches ont été testées pour leur sensibilité à
la méticilline.
Dans cette étude, 940 souches de S. aureus et
441 souches de S. non aureus ont été testées. SLIDEX
Staph-Kit a été également comparé à deux autres réactifs
du commerce. SLIDEX Staph-Kit a présenté la meilleure
sensibilité pour les souches de S. aureus résistant à la
méticilline (en excluant les résultats ininterprétables).
La sensibilité est de 95,4 % pour les souches MRSA et de
100 % pour les souches MSSA :
S. aureus seul
+ – Intervalle de confiance à
95%
MRSA 523 25 93,2% - 97,0%
MSSA 392 0 99,0% – 100%
Total S. aureus + S. non aureus
SLIDEX Staph-
Kit
Identification S. aureus confirmée
+ –
+ 913 5
– 25 424
Ininterprétables 2 12
- SENSIBILITE : 97,3 % (913/938) avec un intervalle de confiance à
95 % : 96,0 % - 98,3 %
- SPECIFICITE : 98,8 % (424/429) avec un intervalle de confiance à
95 % : 97,3% - 99,4 %
ELIMINATION DES DECHETS
Les réactifs du coffret contiennent un dérivé mercuriel.
Il incombe à chaque laboratoire de gérer les déchets et
les effluents qu'il produit selon leur nature et leur
dangerosité, et d'en assurer (ou faire assurer) le
traitement et l'élimination selon les réglementations
applicables.
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
1. FLEURETTE J. - Staphylocoques et microcoques in L. LE
MINOR,
M. VERON, Bactériologie médicale, 2ème édition, 1990,
Flammarion.
2. FLANDROIS J.P., CARRET G. - Study of the staphylococcal
affinity to fibrinogen by passive hemagglutination : a tool for
the Staphylococcus aureus identification. Zbl. Bakt. Hyg.
Orig., 1981, A251, 171-176.
3. HAJEK V., MARSALEK E. - Evaluation of classificatory
criteria for staphylococci. Zbl. Bakt. Hyg. I. Abt. Orig., 1976,
Suppt 5, 11-21.
4. LALLY R., WOOLFREY B. - Clumping factor defective
methicillin resistant Staphylococcus aureus. Eur. J. Clin.
Microbiol., 1984, n° 2, 151-152.
5. FLANDROIS J.P., FLEURETTE J., EYRAUD F. - Détection
de la protéine A de Staphylococcus aureus par
hémagglutination conditionnée. Ann. Biol. Clin., 1975, 33,
365-368.
6. VANDENESCH et al. - The Lancet, 1993, 342, 995-996.
7. FRENEY J., BRUN Y., BES M., MEUGNIER H., GRIMONT
F., GRIMONT P.A.D., NERVI C., FLEURETTE J. -
Staphylococcus lugdunensis sp nov and Staphylococcus
schleiferi sp nov, two species from human clinical specimens.
International Journal of Systematic Bacteriology, 1988, 38,
168-172.
8. MYHRE E.B., KRONVALL G. - Binding of murine myeloma
proteins of different Ig classes and subclasses for Fr reactive
surface structures in Gram positive cocci. Scand. J. Immunol.
1980, 11, 37-46.
9. KRONVALL G., SCHONVECK C., MYHRE E. - Fibrinogen
binding structures in -hemolytic streptococci group A, C and
G. Acta. Path. Microbiol. Scand. Sect. B, 1979, 87, 303-310.
10. CROIZE J., GIALANELLA P., MONNET D., OKADA J., ORSI
A., VOSS A. and MERLIN S. - "Improved identification of
Staphylococcus aureus using a new agglutination test :
Results of an international study". APMIS, 1993, 100, 487-
491.
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TABLE DES SYMBOLES
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Dispositif médical de diagnostic in vitro
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Limites de température
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Contenu suffisant pour "n" tests
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Fax 33 (0)4 78 87 20 90
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appartenant à bioMérieux SA ou à l’une de ses filiales.

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SLIDEX ® Staph-Kit
SLIDEX ® Staph-Kit is a rapid latex and red blood cell agglutination test for the identification of Staphylococcus aureus
strains from culture media.
IVD
SUMMARY AND EXPLANATION
Staphylococci represent one of the bacterial species most
frequently encountered in human infections. Skin
infections caused by Staphylococcus aureus are the most
common human staphylococcal infections, but severe
forms (septicemia, endocarditis, meningitis, pneumonia,
osteomyelitis) may be observed in the hospital
environment (1).
For a long time, the coagulase test has been the most
widely accepted method for identifying Staphylococcus
aureus. It is based on the ability of Staphylococcus aureus
strains to produce the extracellular enzyme coagulase
which initiates the clotting of rabbit plasma. This test
enables the differentiation of Staphylococcus aureus from
other species of staphylococci which are mainly
coagulase negative. However, this method requires an
incubation period of 4-24 hours.
Other agglutination methods using red blood cells or latex
particles have also become generally recognized for the
identification of Staphylococcus aureus (1, 2).
Strains of Staphylococcus aureus possess a protein
receptor capable of combining with fibrinogen. This
receptor is found in 96% of strains of human origin (3) and
in most other biotypes. Certain methicillin-resistant strains
do not produce clumping factor (4).
Protein A is present on the surface of most
Staphylococcus aureus strains. It has an affinity for the Fc
fragment of most isotype G immunoglobulins (IgG).
Protein A is produced on all media, but in lesser quantities
on blood agar plates. It is present in approximately 90% of
strains (5). Various proteins or glycoproteins and teichoic
acids are present on the surface of Staphylococcus
aureus. Their antigenic specificities are extremely variable
(1).
The SLIDEX Staph-Kit enables the identification of
Staphylococcus aureus strains from culture media.
PRINCIPLE
The SLIDEX Staph-Kit reagent is composed of:
- stabilized red blood cells (sheep), sensitized with
fibrinogen, and which will agglutinate if the
Staphylococcus aureus strain produces clumping
factor.
- latex particles, sensitized with monoclonal IgG
antibodies, and which will agglutinate if protein A
and/or antigenic proteins are present on the surface of
the Staphylococcus aureus strain.
CONTENT OF THE KIT (50 TESTS)
R1
S. aureus (H / L)
1 x 1.7 ml
Dropper bottle**
with red cap
R2
S. aureus (H / LC)
1 x 1.7 ml
Dropper bottle**
with white cap
1 package insert
Anti-Staphylococcus aureus reagent
(ready-to-use, store in an upright position)
Red blood cells (sheep) sensitized with
human fibrinogen* and latex particles
sensitized with a monoclonal anti-
Staphylococcus aureus antibody (mouse)
(0.13 g/l sodium merthiolate + 1 g/l sodium
azide)
Negative control reagent
(ready-to-use, store in an upright position)
Non-sensitized red blood cells (sheep) and
latex particles
(0.13 g/l sodium merthiolate + 1 g/l sodium
azide)
* This product has been tested and shown to be negative
for HBs antigen, antibodies to HIV1, HIV2 and HCV.
However, since no existing test method can totally
guarantee their absence, this product must be treated as
potentially infectious. Therefore, usual safety procedures
should be observed when handling.
** 1 drop = 0.03 ml
Shake reagents well before use.
MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDED
Disposable cards or
Clean laboratory glass slides
Disposable plastic loops or stirring sticks
Timer
WARNINGS AND PRECAUTIONS
For in vitro diagnostic use only.
For professional use only.
This kit contains products of human origin. No
known analysis method can totally guarantee the
absence of transmissible pathogenic agents. It is
therefore recommended that these products be
treated as potentially infectious and handled
observing the usual safety precautions (see
Laboratory biosafety manual - WHO - Geneva - latest
edition).
This kit contains products of animal origin. Certified
knowledge of the origin and/or sanitary state of the
animals does not totally guarantee the absence of
transmissible pathogenic agents. It is therefore
recommended that these products be treated as
potentially infectious, and handled observing the usual
safety precautions (do not ingest or inhale).
All specimens, microbial cultures and inoculated
products should be considered infectious and
handled appropriately. Aseptic technique and usual
precautions for handling the bacterial group studied
should be observed throughout this procedure.
Refer to "CLSI/NCCLS M29-A, Protection of
Laboratory Workers from Occupationally Acquired
Infections, Approved Guideline – Current Revision".
For additional information on handling precautions,
refer to "Biosafety in Microbiological and Biomedical
Laboratories – CDC/NIH – Latest edition", or the
current regulations in the country of use.
bioMérieux SA English - 1

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Do not use reagents past the expiration date
indicated on the label.
Avoid contact with eyes, skin or clothes.
Do not interchange or mix reagents from different lots.
Do not pipette reagents by mouth.
Do not use a metallic loop to perform the latex
agglutination test.
Do not reuse disposable cards.
The reagents contain a preservative (sodium azide).
Sodium azide may react with lead and copper plumbing
to form highly explosive metal salts. To dispose of
reagents properly, flush with large volumes of water to
prevent azide build-up.
Interpretation of test results should be made taking into
consideration the patient's history, the source of the
specimen, colonial and microscopic morphology and, if
necessary, the results of any other tests performed.
STORAGE CONDITIONS
Store all reagents at 2-8°C.
Do not freeze the reagents.
The reagents should not be used if they have been
accidentally frozen.
If stored according to the recommended conditions, all
components are stable until the expiration date indicated
on the box label.
SPECIMEN (collection and preparation)
Culture specimens on a selective (Mannitol Salt agar,
Baird Parker agar, Tellurite glycine agar) or non selective
isolation medium [(Columbia sheep blood agar (5%),
Trypcase (trypticase) soy agar with or without sheep
blood (5%), Mueller Hinton agar with or without sheep
blood, CLED agar, BCP agar, CPS ID agar]. Performance
may vary depending on the type of medium used.
An internal study carried out on 191 S. aureus strains
(MRSA and MSSA) and 89 non-aureus staphylococcal
strains shows the same sensitivity regardless of the
medium used (see table below). The study also shows
that the specificity results are not statistically different
from one medium to another (see following table).
However, it is recommended to use the following media:
Columbia Blood Agar, Columbia CNA + blood, TSA, TSA
+ blood, CPS and Baird Parker.
Columbia blood agar
Columbia CNA + blood
TSA
TSA + blood
CPS
Baird Parker
Mueller Hinton
Mueller Hinton + blood
Tellurite Glycine Agar
BCP
CLED
Medium Sensitivity Specificity
94.2% 89.5%
94.2% 88.4%
Mannitol Salt agar 94.2 % 87.2 %
After 18-24 hours of incubation at 33-37°C, suspect
colonies should be tested with the classical methods
of Gram stain, morphology and the catalase test, to
confirm that they may be staphylococci.
INSTRUCTIONS FOR USE
1. Allow reagents to come to room temperature
(18-25°C) before use.
2. Re-suspend the reagents by mixing. Expel any
remaining reagent in the dropper into bottle and mix
again.
3. To a disposable card or a thoroughly cleaned glass
slide, add the following :
- 1 drop of R1 (anti-Staphylococcus aureus reagent);
- 1 drop of R2 (negative control reagent).
Hold the bottles in a vertical position when
dispensing the reagents.
4. To each drop, carefully add 1-2 suspect colonies of
medium size from a non selective agar or 3-6 very
small colonies from a selective agar (e.g. Mannitol Salt
agar). Mix well with a bacteriological loop or a Pasteur
pipette for 10 seconds.
5. Gently rock the slide for 20 seconds and read the
reaction under normal lighting conditions without using
a magnifying glass.
READING AND INTERPRETATION
A positive result is indicated by the development of an
agglutination pattern in the R1 reagent within 30
seconds (time taken to mix the colonies and reagent,
then rotate the slide) of the sensitized red blood cells
(red coloration), of the latex particles (white coloration),
or of both simultaneously (red orange coloration).
A negative result is indicated by the absence of
agglutination with reagents R1 and R2.
The test is uninterpretable if the control reagent (R2)
shows agglutination.
Agglutination of the sensitized red blood cells indicates
the presence of clumping factor.
Agglutination of the latex particles indicates the
presence of protein A or the specific antigen against
which the monoclonal antibody is directed.
In the case of very weak agglutination with the anti-
Staphylococcus aureus reagent, if the control reagent is
agglutinated or if lumping occurs, further identification of
the strain must be performed with the tube coagulase
test or a biochemical range of tests.
QUALITY CONTROL
Quality control of the reagents must be performed each
time a new kit is opened, using the following strains:
Recommended Red blood cells Latex
Control strains R1 R2 R1 R2
S. aureus ATCC ® 25923 + - - -
S. epidermidis ATCC ® 14990 - - - -
S. aureus ATCC ® 51153 - - + -
Follow the steps listed under “Instructions for Use” and
“Reading and Interpretation” using colonies from the
strains listed above. The quality control strains should be
grown on the usual media used in the laboratory.
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SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - en - 2006/12
Deterioration of the reagents should be suspected if:
- reagent R1 does not agglutinate a known
Staphylococcus aureus strain which is used as a
positive reference;
- reagent R1 agglutinates a known Staphylococcus
epidermidis strain which is used as a negative
reference;
- the reagents have autoagglutinated in the bottles;
- the reagents are contaminated or hemolyzed, or have
evaporated.
Note:
It is the responsibility of the user to perform Quality
Control, taking into consideration any applicable local
regulations.
LIMITATIONS OF THE METHOD
Certain strains may be difficult to emulsify and may
show stringiness or lumps in the reagent. This should
not be confused with true agglutination. Nevertheless,
true agglutination may be visible between the lumps.
False negative reactions will occur if:
- an insufficient number of colonies is used for the test.
In this case, the isolate should be subcultured and
tested when there is sufficient growth;
- the strain does not produce clumping factor or protein
A (blood agar);
- the specific antigen against which the monoclonal
antibody is directed is not produced.
Other tests should be used (6).
Positive reactions may be found with other species of
Staphylococcus which possess clumping factor and/or
coagulase:
S. schleiferi, S. lugdunensis, S. intermedius, S. delphini,
S. hyicus (1, 7).
False positive reactions may be found with certain
strains of streptococci (A, C and G) which possess
receptor sites for immunoglobulins (8) and for fibrinogen
(9).
Uninterpretable reactions may be observed with some
strains of enterococci and micrococci.
The SLIDEX ® Staph-Kit should not be used directly with
blood culture broth. False reactions may take place due
to interference from fibrinogen and IgG present in the
blood.
PERFORMANCE
The evaluation of the reagents was performed with fresh
hospital isolates and strains frozen in several hospitals.
The results of the multicenter study have been published
(10).
All the Staphylococcus strains were confirmed by Gram
stain, catalase test, tube coagulase and discrepancies
resolved by biochemical procedures.
All the strains were tested for their sensitivity to methicillin.
In this study, 940 S. aureus strains and 441 non-aureus
strains were tested. The SLIDEX Staph-Kit was also
compared with two other commercially available reagents.
The SLIDEX Staph-Kit proved to be more sensitive for
methicillin-resistant strains (uninterpretable results were
not taken into account).
Sensitivity was shown to be 95.4% for MRSA strains and
100% for MSSA strains:
S. aureus only
+ – 95%
Confidence interval
MRSA 523 25 93.2% - 97.0%
MSSA 392 0 99.0% - 100%
Total S. aureus + non S. aureus
SLIDEX Staph-
Kit
Confirmed identification of
S. aureus
+ –
+ 913 5
– 25 424
Uninterpretable 2 12
- SENSITIVITY: 97.3 % (913/938)
with a 95% confidence interval: 96.0% - 98.3%
- SPECIFICITY: 98.8 % (424/429)
with a 95% confidence interval: 97.3% - 99.4%
WASTE DISPOSAL
The kit reagents contain a mercury derivative.
It is the responsibility of each laboratory to handle waste
and effluents produced according to their nature and
degree of hazardousness and to treat and dispose of
them (or have them treated and disposed of) in
accordance with any applicable regulations.
LITERATURE REFERENCES
1. FLEURETTE J. - Staphylocoques et microcoques in L. LE
MINOR,
M. VERON, Bactériologie médicale, 2ème édition, 1990,
Flammarion.
2. FLANDROIS J.P., CARRET G. - Study of the staphylococcal
affinity to fibrinogen by passive hemagglutination : a tool for
the Staphylococcus aureus identification. Zbl. Bakt. Hyg.
Orig., 1981, A251, 171-176.
3. HAJEK V., MARSALEK E. - Evaluation of classificatory
criteria for staphylococci. Zbl. Bakt. Hyg. I. Abt. Orig., 1976,
Suppt 5, 11-21.
4. LALLY R., WOOLFREY B. - Clumping factor defective
methicillin resistant Staphylococcus aureus. Eur. J. Clin.
Microbiol., 1984, n° 2, 151-152.
5. FLANDROIS J.P., FLEURETTE J., EYRAUD F. - Détection
de la protéine A de Staphylococcus aureus par
hémagglutination conditionnée. Ann. Biol. Clin., 1975, 33,
365-368.
6. VANDENESCH et al. - The Lancet, 1993, 342, 995-996.
7. FRENEY J., BRUN Y., BES M., MEUGNIER H., GRIMONT
F., GRIMONT P.A.D., NERVI C., FLEURETTE J. -
Staphylococcus lugdunensis sp nov and Staphylococcus
schleiferi sp nov, two species from human clinical specimens.
International Journal of Systematic Bacteriology, 1988, 38,
168-172.
8. MYHRE E.B., KRONVALL G. - Binding of murine myeloma
proteins of different Ig classes and subclasses for Fr reactive
surface structures in Gram positive cocci. Scand. J. Immunol.
1980, 11, 37-46.
9. KRONVALL G., SCHONVECK C., MYHRE E. - Fibrinogen
binding structures in -hemolytic streptococci group A, C and
G. Acta. Path. Microbiol. Scand. Sect. B, 1979, 87, 303-310.
10. CROIZE J., GIALANELLA P., MONNET D., OKADA J., ORSI
A., VOSS A. and MERLIN S. - "Improved identification of
Staphylococcus aureus using a new agglutination test :
Results of an international study". APMIS, 1993, 100, 487-
491.
bioMérieux SA English - 3

SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - en - 2006/12
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REF 73 112 06125 K - de - 2006/12
SLIDEX ® Staph-Kit
SLIDEX ® Staph-Kit ist ein Agglutinationstest mit Erythrozyten und Latexpartikeln zur schnellen Identifizierung von
Staphylococcus aureus von festen Kulturmedien.
IVD
EINFÜHRUNG UND TESTERKLÄRUNG
Staphylokokken gehören zu den am häufigsten isolierten
Bakterien in der Humanmedizin. Zu den häufigsten
Krankheitsbildern von Staphylococcus aureus Infektionen
gehören Hauterkrankungen, im Hospitalbereich kann es
aber auch zu schweren Manifestationen wie Septikämie,
Endokarditis, Meningitis, Pneumonie und Osteomyelitis
kommen (1).
Die Röhrchenkoagulase war lange Zeit der am häufigsten
durchgeführte Test zur Identifizierung von Staphylococcus
aureus. Er beruht auf dem Nachweis des extrazellulären
Enzyms Koagulase von Staphylococcus aureus
Stämmen, welches Kaninchenplasma koaguliert.
Staphylococcus aureus kann auf diese Weise auch von
den anderen, hauptsächlich Koagulase-negativen
Staphylokokken unterschieden werden. Dieses Verfahren
erfordert jedoch eine 4 bis 24-stündige Inkubationszeit.
Andere Methoden, die auf der Agglutination von
Erythrozyten oder Latexpartikel basieren, sind derzeit zur
Identifizierung von Staphylococcus aureus anerkannt
(1, 2).
Staphylococcus aureus besitzt einen Proteinrezeptor für
ein Fibrinogenfragment. Dieser Rezeptor ist bei 96% der
Stämme humanen Ursprungs (3) und den meisten
anderen Biotypen vorhanden. Einige Methicillinresistenten
Stämme besitzen keine Fibrinogenaffinität (4).
Auf der Zelloberfläche von Staphylococcus aureus
befindet sich Protein A mit einer Affinität für das Fc-
Fragment der meisten Immunglobuline der Klasse G
(IgG). Dieses Protein wird auf allen Medien gebildet, auf
Blutagar jedoch in geringerer Menge. Protein A ist bei ca.
90 % der Stämme vorhanden (5). Auf der Zelloberfläche
von Staphylococcus aureus befinden sich Proteine oder
Glykoproteine und Teichonsäuren mit extrem variabler
Antigenspezifität (1).
SLIDEX Staph-Kit ermöglicht die Identifizierung von
Staphylococcus aureus von festen Kulturmedien.
PRINZIP
SLIDEX Staph-Kit enthält:
- stabilisierte Schaferythrozyten, die mit Fibrinogen
sensibilisiert sind und in Anwesenheit eines
Staphylococcus aureus Stammes mit Clumpingfaktor
agglutinieren.
- Latexpartikel, die mit einem monoklonalen Antikörper
(IgG) sensibilisiert sind und in Gegenwart eines
Staphylococcus aureus Stammes, der Protein A
und/oder Oberflächenproteine und -antigen besitzt,
agglutinieren.
PACKUNGSINHALT FÜR 50 TESTS
R1
S. aureus (H / L)
1 x 1,7 ml
Tropffläschchen**
mit roter
Verschlusskappe
R2
S. aureus (H / LC)
1 x 1,7 ml
Tropffläschchen**
mit weißer
Verschlusskappe
1 Arbeitsanleitung
anti-Staphylococcus aureus Reagenz
(gebrauchsfertig, in aufrechter Position lagern)
mit Humanfibrinogen* sensibilisierte Schaferythrozyten
und mit einem monoklonalen
anti-Staphylococcus aureus Maus-Antikörper
sensibilisierte Latexpartikel (Natriummerthiolat
0,13 g/l + Natriumazid 1 g/l)
Negativkontrolle
(gebrauchsfertig, in aufrechter Position lagern)
Schaferythrozyten und nicht sensibilisierte
Latexpartikel (Natriummerthiolat 0,13 g/l +
Natriumazid 1 g/l)
* Die Abwesenheit von HBs-Antigen, HIV-1, HIV-2 und HCV-
Antikörpern wurde überprüft. Da keine Testmethode die
Abwesenheit dieser Agenzien völlig gewährleisten kann,
muss dieses Produkt als potenziell infektiös betrachtet
und unter Beachtung entsprechender Vorsichtsmaßnahmen
sachgemäß behandelt werden.
** 1 Tropfen = 0,03 ml
Die Reagenzien vor Gebrauch gut homogenisieren.
ZUSÄTZLICH ERFORDERLICHE MATERIALIEN
Einwegkarten oder saubere Glasobjektträger
Kunststoffösen oder Einwegrührspatel
Stoppuhr
VORSICHTSMASSNAHMEN
Nur für die in vitro Diagnostik.
Nur für die Verwendung durch Fachkundige bestimmt.
Dieser Kit enthält Bestandteile humanen Ursprungs.
Bislang gibt es kein bekanntes Verfahren mit dem
völlig gewährleistet werden kann, dass diese
Produkte keine übertragbaren pathogenen Agenzien
enthalten. Es ist empfehlenswert, sie als potenziell
infektiös zu betrachten und unter Beachtung
entsprechender Vorsichtsmaßnahmen sachgemäß
zu behandeln; (siehe Laboratory biosafety manual -
WHO - Geneva - neueste Ausgabe).
Dieser Kit enthält Bestandteile tierischen Ursprungs. Da
durch die Kontrolle der Herkunft und/oder des
Gesundheitszustandes der Tiere nicht völlig gewährleistet
werden kann, dass diese Produkte keine
übertragbaren pathogenen Agenzien enthalten, ist es
empfehlenswert, diese als potenziell infektiös zu
betrachten und unter Beachtung entsprechender
Vorsichtsmaßnahmen zu behandeln (nicht einnehmen,
nicht einatmen).
Die Proben, Mikroorganismen und beimpften Produkte
müssen als potenziell infektiös betrachtet und unter
Beachtung geeigneter Vorsichtsmaßnahmen sachgemäß
behandelt werden. Während der gesamten
Testdurchführung müssen aseptische Arbeitsbedingungen
und entsprechende Vorsichtsmaßnahmen für
die zu untersuchende Keimgruppe eingehalten werden,
siehe „CLSI/NCCLS M29-A, Protection of Laboratory
Workers from Occupationally Acquired Infections,
Approved Guideline – aktuelle Revision“. Weitere
diesbezügliche Informationen finden Sie in „Biosafety in
bioMérieux SA Deutsch - 1

SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - de - 2006/12
Microbiological and Biomedical Laboratories, CDC/NIH
– Letzte Ausgabe" oder in den jeweils gültigen
Richtlinien.
Die Reagenzien nach Ablauf des auf der Verpackung
angegebenen Verfallsdatums nicht mehr verwenden.
Vermeiden Sie einen Kontakt der Reagenzien mit den
Augen, der Haut oder der Kleidung.
Reagenzien aus unterschiedlichen Chargen nicht
mischen oder austauschen.
Die Reagenzien nicht mit dem Mund pipettieren.
Verwenden Sie für den Latex-Agglutinationstest keine
Metallösen.
Gebrauchte Einwegkarten nicht wiederverwenden.
Die Reagenzien des Kits enthalten ein Konservierungsmittel
(Natriumazid), das mit Blei- oder Kupferrohren zu
explosiven Metallaziden reagieren kann. Beim Ableiten
in die Kanalisation sollten die Reagenzien immer mit
reichlich Wasser verdünnt werden.
Bei der Interpretation der Ergebnisse müssen der
klinische Hintergrund, die Probenherkunft, Kolonie- und
mikroskopische Morphologie des Stammes sowie
gegebenenfalls die Ergebnisse anderer Tests
berücksichtigt werden.
LAGERUNGSBEDINGUNGEN
Die Reagenzien bei 2-8°C lagern.
Die Reagenzien nicht einfrieren.
Versehentlich tiefgefrorene Reagenzien dürfen nicht
mehr verwendet werden.
Unter den vorgeschriebenen Lagerungsbedingungen
sind alle Kitbestandteile bis zu dem auf der Verpackung
angegebenen Verfallsdatum haltbar.
PROBEN (Gewinnung und Vorbereitung)
Inkubieren Sie die Probe auf einen Selektivmedium
(Chapman-, Baird Parker-, Tellurit-Glycin-Agar) oder
einem nicht selektiven Medium [(Columbia-Agar mit
Schafblut (5 %), Trypcase Soja Agar mit oder ohne
Schafblut (5 %), Mueller Hinton Agar mit oder ohne
Schafblut, CLED Agar, BCP Agar, CPS ID Agar]: Die
Leistungsdaten können je nach Medium variieren.
In einer internen Studie, die mit 191 S. aureus (MRSA und
MSSA) und 89 non-aureus Stämmen durchgeführt wurde,
wurden unabhängig von den verwendeten Medien
dieselbe Sensitivität errreicht. Die Studie zeigt darüber
hinaus für die verschiedenen Medien keine statistische
Abweichung in der Spezifität. Es ist dennoch
empfehlenswert, folgende Medien zu verwenden:
Columbia Blutagar, Columbia CNA-Agar + Blutzusatz,
TSA, TSA + Blut, CPS und Baird Parker.
Columbia Agar mit Blut
Columbia CNA + Blut
TSA
TSA + Blut
CPS
Baird Parker
Mueller Hinton
Mueller Hinton + Blut
Tellurit Glycin Agar
BCP
CLED
Medium Sensitivität Spezifität
94,2 % 89,5 %
94,2 % 88,4 %
Chapman 94,2 % 87,2 %
Nach 18-24 Stunden Inkubation bei 33-37°C werden die
verdächtigen Kolonien mit klassischen Methoden wie
Morphologie, Gramfärbung, Katalase-Test überprüft,
um den Verdacht auf Staphylokokken zu erhärten.
TESTDURCHFÜHRUNG
1. Die Reagenzien vor Gebrauch auf Raumtemperatur
(18-25°C) bringen.
2. Die Latex-Reagenzien gut aufschütteln. In der Tropfpipette
befindliche Tropfen gut mit dem Fläschcheninhalt
mischen.
3. Geben Sie auf zwei Felder einer Einwegkarte oder
eines sauberen Glasobjektträgers:
- 1 Tropfen R1 (anti-Staphylococcus aureus Reagenz)
- 1 Tropfen R2 (Negativkontrolle).
Halten Sie die Tropffläschchen beim Auftragen der
Reagenzien senkrecht.
4. Geben Sie in jeden Tropfen mit einer Kunststoff-Öse
oder einem Einweg-Rührspatel 1 bis 2 verdächtige,
mittelgroße Kolonien von einem nicht selektiven
Nähragar oder 3 bis 6 sehr kleine Kolonien eines
Selektivagars (z.B. Chapman-Medium). Verreiben Sie
die Kolonien für 10 sec sehr sorgfältig und vollständig
in dem Tropfen.
5. Den Objektträger etwa 20 sec leicht rotierend
bewegen und die Reaktion bei normalen Lichtverhältnissen
ohne Lupe ablesen.
ABLESUNG UND INTERPRETATION
Ein positives Ergebnis liegt vor, wenn in R1 innerhalb
von 30 Sekunden (Dauer des Mischens + Rotation des
Objektträgers) eine Agglutination der sensibilisierten
Erythrozyten (rote Färbung), der Latexpartikel (weiße
Färbung) oder beider Reagenzien (rot/orange Färbung)
sichtbar wird.
Ein negatives Ergebnis wird durch eine fehlende
Agglutination in R1 und R2 angezeigt.
Die Reaktion ist nicht interpretierbar, wenn das
Reagenz R2 agglutiniert.
Eine Agglutination der sensibilisierten Erythrozyten zeigt
die Anwesenheit von Clumpingfaktor an.
Eine Agglutination der Latexpartikel weist auf das
Vorhandensein von Protein A oder spezifischen
Oberflächenantigenen, gegen die der monoklonale
Antikörper auf den Latexpartikeln gerichtet ist, hin.
Bei sehr schwacher Agglutination mit dem anti-
Staphylococcus aureus Reagenz, wenn das
Kontrollreagenz agglutiniert oder bei Klumpenbildung
sollte die Identifizierung des Stammes mit der
Röhrchenkoagulase oder mit biochemischen Methoden
erfolgen.
QUALITÄTSKONTROLLE
Für jede neu angebrochene Packung sollte mit folgenden
Kontrollstämmen eine Qualitätskontrolle der Reagenzien
durchgeführt werden:
empfohlene Kontrollstämme Erythrozyten Latex
R1 R2 R1 R2
S. aureus ATCC ® 25923 + - - -
S. epidermidis ATCC ® 14990 - - - -
S. aureus ATCC ® 51153 - - + -
Gehen Sie gemäß den in den Abschnitten Testdurchführung
und Ablesung angegebenen Arbeitsschritten vor
und verwenden Sie Kolonien der oben angegebenen
Stämme. Die Kontrollstämme sollten auf den
laborüblichen Nährmedien angezüchtet werden.
bioMérieux SA Deutsch - 2

SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - de - 2006/12
Anzeichen für einen Verfall der Reagenzien sind:
- fehlende Agglutination von R1 mit bekannt positiven
Staphylococcus aureus Referenzstämmen.
- Agglutination von R1 mit bekannt negativen
Staphylococcus epidermidis Referenzstämmen.
- Autoagglutination der Reagenzien in der Flasche.
- Sichtbare Kontamination, Hämolyse oder Verdunstungseffekt.
Anmerkung:
Es liegt in der Verantwortung des Anwenders, die
Qualitätskontrolle in Übereinstimmung mit den jeweils
gültigen Vorschriften durchzuführen.
LIMITIERUNGEN
Einige Stämme sind schwierig zu homogenisieren und
können im Reagenz zu Klumpen- oder Filamentbildung
führen. Dies darf nicht mit einer Agglutination
verwechselt werden. Zwischen den Klümpchen kann
jedoch eine Agglutinationsreaktion sichtbar sein.
Falsch negative Reaktionen können auftreten:
- wenn zu wenig Keimmaterial vorhanden ist (in diesem
Fall muss der Stamm subkultiviert werden, um
genügend Wachstum zu erhalten);
- wenn der Stamm keinen Clumpingfaktor oder kein
Protein A (Blutagar) enthält;
- wenn der Stamm keine Antigene bildet, die von dem
verwendeten monoklonalen Antikörper erkannt
werden.
In diesen Fällen müssen andere Tests durchgeführt
werden (6).
Positive Reaktionen können bei folgenden
Staphylococcus Spezies auftreten, die normalerweise
Clumpingfaktor und/oder Koagulase-positiv sind:
S. schleiferi, S. lugdunensis, S. intermedius , S. delphini,
S. hyicus (1, 7).
Falsch positive Reaktionen werden bei einigen
Streptokokken Stämmen (A, C und G) beschrieben, die
Rezeptoren für Immunglobuline (8) und für Fibrinogen
(9) besitzen.
Nicht interpretierbare Reaktionen können bei einigen
Enterokokken und Mikrokokken Stämmen beobachtet
werden.
SLIDEX ® Staph-Kit kann nicht direkt mit Proben aus
Blutkulturmedien getestet werden (mögliche
Störeinflüsse durch das im Blut vorhandene Fibrinogen
und/oder Immunglobuline).
PERFORMANCE
Die Evaluierung der Reagenzien wurde mit frischen
Isolaten (Krankenhäuser) und Stämmen aus
Stammsammlungen mehrerer Krankenhäuser
durchgeführt. Die Ergebnisse einer Multicenter-Studie
wurden veröffentlicht (10).
Alle Staphylococcus Stämme wurden durch Gramfärbung,
Katalase, freie Koagulase (Röhrchen) und gegebenenfalls
biochemische Identifizierung bestätigt.
Alle Stämme wurden auf Methicillin-Resistenz überprüft.
In dieser Studie wurden 940 Staphylococcus aureus und
441 S. non aureus Stämme getestet. Der SLIDEX Staph-
Kit wurde außerdem mit 2 anderen kommerziellen Tests
verglichen. Der SLIDEX Staph-Kit zeigte eine bessere
Sensitivität für die Methicillin-resistenten S. aureus
Stämme (nicht interpretierbare Ergebnisse wurden nicht
berücksichtigt).
Die Sensitivität beträgt 95,4% für die MRSA (Methicillinresistente
Staphylococcus aureus Stämme) und 100% für
die MSSA (Methicillin-empfindliche Stämme).
Nur S. aureus
+ – 95% Vertrauensbereich
MRSA 523 25 93.2% - 97.0%
MSSA 392 0 99.0% - 100%
S. aureus + S. non aureus gesamt
SLIDEX Staph-
Kit
S. aureus-Identifizierung bestätigt
+ –
+ 913 5
– 25 424
nicht
interpretierbar
2 12
- SENSITIVITÄT: 97,3 % (913/938) bei einem 95%igen
Vertrauensbereich 96,0% - 98.3%
- SPEZIFITÄT: 98,8 % (424/429) bei einem 95%igen
Vertrauensbereich: 97.3% - 99,4%
BESEITIGUNG DER ABFÄLLE
Die Reagenzien enthalten ein Quecksilberderivat.
Es liegt in der Verantwortung jedes Labors, die
entstandenen Fest- und Flüssigabfälle gemäß der
jeweiligen Risikogruppe zu behandeln und deren
Entsorgung in Übereinstimmung mit den gültigen
gesetzlichen Bestimmungen sicherzustellen.
LITERATUR
1. FLEURETTE J. - Staphylocoques et microcoques in L. LE
MINOR,
M. VERON, Bactériologie médicale, 2ème édition, 1990,
Flammarion.
2. FLANDROIS J.P., CARRET G. - Study of the staphylococcal
affinity to fibrinogen by passive hemagglutination : a tool for
the Staphylococcus aureus identification. Zbl. Bakt. Hyg.
Orig., 1981, A251, 171-176.
3. HAJEK V., MARSALEK E. - Evaluation of classificatory
criteria for staphylococci. Zbl. Bakt. Hyg. I. Abt. Orig., 1976,
Suppt 5, 11-21.
4. LALLY R., WOOLFREY B. - Clumping factor defective
methicillin resistant Staphylococcus aureus. Eur. J. Clin.
Microbiol., 1984, n° 2, 151-152.
5. FLANDROIS J.P., FLEURETTE J., EYRAUD F. - Détection
de la protéine A de Staphylococcus aureus par
hémagglutination conditionnée. Ann. Biol. Clin., 1975, 33,
365-368.
6. VANDENESCH et al. - The Lancet, 1993, 342, 995-996.
7. FRENEY J., BRUN Y., BES M., MEUGNIER H., GRIMONT
F., GRIMONT P.A.D., NERVI C., FLEURETTE J. -
Staphylococcus lugdunensis sp nov and Staphylococcus
schleiferi sp nov, two species from human clinical specimens.
International Journal of Systematic Bacteriology, 1988, 38,
168-172.
8. MYHRE E.B., KRONVALL G. - Binding of murine myeloma
proteins of different Ig classes and subclasses for Fr reactive
surface structures in Gram positive cocci. Scand. J. Immunol.
1980, 11, 37-46.
9. KRONVALL G., SCHONVECK C., MYHRE E. - Fibrinogen
binding structures in -hemolytic streptococci group A, C and
G. Acta. Path. Microbiol. Scand. Sect. B, 1979, 87, 303-310.
10. CROIZE J., GIALANELLA P., MONNET D., OKADA J., ORSI
A., VOSS A. and MERLIN S. - "Improved identification of
Staphylococcus aureus using a new agglutination test :
Results of an international study". APMIS, 1993, 100, 487-
491.
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SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - de - 2006/12
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REF 73 112 06125 K - es - 2006/12
SLIDEX ® Staph-Kit
SLIDEX ® Staph-Kit es una prueba rápida de aglutinación de partículas de látex y hematíes para la identificación de
cepas de Staphylococcus aureus a partir de los medios de aislamiento.
IVD
INTRODUCCION Y OBJETIVO DE LA PRUEBA
Los estafilococos forman parte del grupo de bacterias
más frecuentemente encontradas en patología
humana. Las infecciones más comunes originadas por
Staphylococcus aureus son cutáneas, pero también
pueden observarse en el medio hospitalario afecciones
más severas (septicemias, endocarditis, meningitis,
pneumonías, osteomielitis) (1).
Durante mucho tiempo el método más utilizado para la
identificación de Staphylococcus aureus fue la prueba
de la coagulasa. Esta prueba está basada en la
capacidad de las cepas de Staphylococcus aureus de
producir esta enzima extra-celular que coagula el
plasma de conejo. Esta determinación permite por
tanto, diferenciar Staphylococcus aureus del resto de
las especies de estafilococos, mayoritariamente
coagulasa negativo. Sin embargo, este método
necesita de 4 a 24 horas de incubación.
Actualmente son reconocidos otros métodos, basados
en la aglutinación de hematíes o partículas de látex,
para la identificación de Staphylococcus aureus (1, 2).
Las cepas de Staphylococcus aureus poseen un
receptor proteico para un fragmento del fibrinógeno.
Este receptor está presente en el 96 % de las cepas de
origen humano (3) y en la mayoría del resto de los
biotipos. Algunas cepas meticilin-resistentes no
presentan este factor de afinidad para el fibrinógeno
(4).
En la superficie del Staphylococcus aureus una
proteína, la proteína A, reacciona selectivamente con el
fragmento Fc de la mayoría de las inmunoglogulinas de
isotipo G (IgG). Esta proteína se produce en todos los
medios pero se produce en menor cantidad en los
medios con sangre. Está presente en
aproximadamente en el 90 % de las cepas (5). Además
existen en la superficie de Staphylococcus aureus,
proteínas o glicoproteínas y ácidos teicoicos cuya
especificidad antigénica son extremadamente variables
(1).
SLIDEX Staph-Kit permite la identificación de las cepas
de Staphylococcus aureus a partir de los medios de
aislamiento.
PRINCIPIO
SLIDEX Staph-Kit es un reactivo constituido por una
mezcla de :
- Hematíes de cordero estabilizados, sensibilizados
con fibrinógeno que aglutinan cuando se ponen en
presencia de una cepa de Staphylococcus aureus
que posea el receptor de afinidad por el fibrinógeno,
- Partículas de látex sensibilizadas con un anticuerpo
monoclonal (IgG) que aglutinan cuando se ponen
en presencia de una cepa de Staphylococcus
aureus que tenga la proteína A y/o los antígenos
proteicos de superficie.
COMPOSICION DEL EQUIPO PARA 50 PRUEBAS
R1
S. aureus (H / L)
1 x 1,7 ml
Frasco
cuentagotas** con
tapón rojo
R2
S. aureus (H / LC)
1 x 1,7 ml
Frasco
cuentagotas** con
tapón blanco
1 ficha técnica
Reactivo anti-Staphylococcus aureus
(listo al empleo, conservar en posición
vertical)
Hematíes de cordero sensibilizados con
fibrinógeno humano * y látex sensibilizado con
anticuerpo monoclonal de ratón anti-
Staphylococcus aureus (ratón)
(mertiolato sódico 0,13 g/l + azida sódica
1 g/l)
Reactivo control negativo
(listo al empleo, conservar en posición
vertical)
Hematíes de cordero y látex no sensibilizados
(mertiolato sódico 0,13 g/l + azida sódica
1 g/l)
* Se ha verficado la ausencia de antígeno HBs, de
anticuerpos anti-VIH1, anti-VIH2 y de anticuerpos anti-
VHC. Sin embargo, ninguna prueba puede aportar una
garantía absoluta, este producto debe manipularse con
las precauciones de uso relacionadas con los
productos potencialmente infecciosos.
** 1 gota = 0,03 ml
Homogeneizar correctamente los reactivos antes de su
utilización.
MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO
Tarjetas desechable o.
Portas de cristal perfectamente limpios
Asas de plástico o bastoncillos desechables
Cronómetro
PRECAUCIONES DE UTILIZACION
Para diagnóstico in vitro únicamente.
Para uso profesional exclusivamente.
Este equipo contiene componentes de origen
humano. Ningún método de análisis actualmente
conocido puede garantizar de forma absoluta que
estos productos no contienen ningún agente
patógeno transmisible. Se recomienda
manipularlos con las precauciones de uso
relacionadas con los productos potencialmente
infecciosos (consultar Laboratory biosafety
manual - OMS - Ginebra – última edición).
Este equipo contiene componentes de origen animal.
El certificado del origen y/o del estado sanitario de los
animales no pueden aportar la garantía absoluta que
estos productos no contienen ningún agente
patógeno transmisible, se recomienda manipularlos
con las precauciones de uso relacionadas con los
productos potencialmente infecciosos (no ingerir, no
inhalar).
Todas las muestras, cultivos microbianos y productos
inoculados deben considerarse como potencialmente
infecciosos y se manipularán de un modo apropiado.
Durante la manipulación, se respetarán las técnicas
asépticas y las precauciones usuales de
manipulación para el grupo bacteriano estudiado;
consultar: "CLSI/NCCLS M29-A, Protection of
bioMérieux SA Español - 1

SLIDEX ® Staph-Kit 06125 K - es - 2006/12
Laboratory Workers from Occupationally Acquired
Infections, Approved Guideline – Revisión en vigor".
Para obtener informaciones complementarias sobre
las precauciones de manipulación, consultar:
"Biosafety in Microbiological and Biomedical
Laboratories – CDC/NIH – Última edición", o la
reglamentación en vigor en el país de utilización.
No utilizar los reactivos después de la fecha de
caducidad indicada en la etiqueta del envase.
Evitar el contacto con los ojos, la piel o la ropa.
No intercambiar o mezclar los reactivos de lotes
diferentes.
No pipetear con la boca los reactivos.
No utilizar un asa metálica para realizar la prueba de
aglutinación con látex.
No reutilizar las tarjetas desechables.
Los reactivos del equipo contienen un conservante
(azida sódica), susceptible de reaccionar con las
tuberías de plomo o cobre formando azidas metálicas
explosivas. Se recomienda enjuagar abundantemente
con agua cualquier residuo.
La interpretación de los resultados debe hacerse
teniendo en cuentra la historia clínica, el origen de la
muestra, los aspectos macro y microscópicos de la
cepa y eventualmente los resultados de otras
pruebas.
CONDICIONES DE CONSERVACION
Conservar los reactivos a 2-8°C.
No congelar los reactivos.
Si los reactivos se han congelado de forma
accidental, no deben utilizarse.
Todos los componentes son estables hasta la fecha
de caducidad indicada en la etiqueta del envase, si se
conservan en las condiciones recomendadas.
MUESTRAS (recogida de muestra y preparación)
Inocular la muestra en un medio de aislamiento
selectivo (medio Chapman, medio Baird Parker, agar
telurito glicina) o no selectivo [(agar Columbia con
sangre de cordero (5 %), agar Trypcase soja con o sin
sangre de cordero (5 %), medio Mueller Hinton con o
sin sangre de cordero, medio CLED, agar BCP, agar
CPS ID] : las prestaciones técnicas pueden variar en
función del tipo de medio utilizado.
Un estudio interno realizado con 191 cepas de S.
aureus (MRSA y MSSA) y 89 cepas de S. no aureus
muestra una sensibilidad idéntica independientemente
del medio utilizado. El estudio demuestra igualmente
que los resultados de especificidad no son
estadísticamente diferentes en función del medio
utilizado (ver la siguiente tabla). Sin embargo, se
recomienda utilizar los siguientes medios: Medio
Columbia con sangre, Columbia ANC + sangre, TSA,
TSA + sangre, CPS y Baird Parker.
Medio Sensibilidad Especificidad
Medio Columbia con sangre
Columbia ANC + sangre
TSA
TSA + sangre
CPS
Baird Parker
Mueller Hinton
Mueller Hinton + sangre
Agar Telurito Glicina
BCP
CLED
94,2 % 89,5 %
94,2 % 88,4 %
Chapman 94,2 % 87,2 %
Después de incubar de 18-24 horas a 33-37°C, las
colonias sospechosas deben ser estudiadas con los
métodos clásicos de tinción de Gram, morfología y
la catalasa, para confirmar que se trata de un
estafilococo.
INSTRUCCIONES DE USO
1. Dejar que los reactivos alcancen la temperatura
ambiente (18-25°C) antes de utilizarlos.
2. Poner correctamente en suspensión los reactivos.
Eliminar las burbujas retenidas en el cuentagotas.
3. En una tarjeta desechable o porta de cristal
perfectamente limpio, depositar en 2 círculos
diferentes:
- 1 gota de R1 (reactivo anti-Staphylococcus
aureus) ;
- 1 gota de R2 (reactivo control negativo).
Mantener la posición vertical de los frascos
cuentagotas durante la distribución de las
gotas.
4. En cada una de las gotas, añadir cuidadosamente
1-2 colonias sospechosas de tamaño medio
aisladas a partir de un medio no selectivo o de 3-6
colonias de tamaño muy pequeño aisladas a partir
de un medio selectivo (ej. Medio Chapman).
Mezclar bien con un asa o con un bastoncillo
desechable.
5. Dar al porta un ligero movimiento de rotación
durante 20 segundos y leer la reacción con luz
normal sin utilizar lupa.
LECTURA E INTERPRETACION DE LOS
RESULTADOS
Un resultado positivo viene indicado por la aparición
en el reactivo R1 de una aglutinación en 30 segundos
(tiempo de realizar la mezcla + tiempo de rotación del
porta) bien en los hematíes sensibilizados (color rojo),
o bien en las partículas de látex (color blanco), o en
ambos simultáneamente (color rojo anaranjado).
Un resultado negativo viene indicado por la
ausencia de aglutinación con los reactivos R1 y R2.
La reacción es ininterpretable si el reactivo R2
presenta una aglutinación.
La aglutinación de los hematíes sensibilizados indica
la presencia del factor de afinidad por el fibrinógeno.
La aglutinación del látex indica que la cepa posee la
proteína A o el antígeno contra el cual está dirigido el
anticuerpo monoclonal.
Si la aglutinación es muy débil con el reactivo anti-
Staphylococcus aureus, si el reactivo control está
aglutinado o si se obtienen grumos, la identificación
de la cepa debe efecturarse por la detección de la
coagulasa o por el estudio de las características
bioquímicas.
bioMérieux SA Español - 2

SLIDEX ® Staph-Kit 06125 K - es - 2006/12
CONTROL DE CALIDAD
Cada vez que se abra un nuevo equipo debe
efectuarse un control de calidad de los reactivos con
las siguientes cepas:
Cepas control Hematíes Látex
recomendadas R1 R2 R1 R2
S. aureus ATCC ® 25923 + - - -
S. epidermidis ATCC ® 14990 - - - -
S. aureus ATCC ® 51153 - - + -
Realizar las etapas de metodología y de lectura a partir
de las colonias correspondientes a las cepas citadas
anteriormente. Las cepas que sirven de control de
calidad deben cultivarse en los medios habitualmente
utilizados en el laboratorio.
Se debe sospechar un deterioro de los reactivos si :
- el reactivo R1 no aglutina una cepa de
Staphylococcus aureus conocida y usada como
referencia positiva ;
- el reactivo R1 aglutina una cepa de Staphylococcus
epidermidis conocida y usada como referencia
negativa;
- los reactivos están autoaglutinados en los frascos;
- los reactivos están contaminados, evaporados o
hemolizados.
Advertencia :
Es responsabilidad del usuario garantizar que el control
de calidad se realiza conforme con la normativa local
en vigor.
LIMITES DE LA PRUEBA
Algunas cepas pueden ser difíciles de emulsionar y
formar grumos o filamentos con el reactivo. Estas
imágenes no deben confundirse con una aglutinación.
Sin embargo, puede ser visible una aglutinación entre
los grumos.
Las reacciones pueden dar un resultado falso
negativo si :
- si se utiliza un número insuficiente de colonias para
realizar la prueba (en este caso, debe efectuarse un
subcultivo para obtener un crecimiento suficiente) ;
- la cepa no produce el factor de afinidad para el
fibrinógeno, la proteína A (medio con sangre) ;
- el antígeno contra el cual va dirigido el anticuerpo
monoclonal se encuentra ausente.
Deberían realizarse otras pruebas (6).
Pueden obtenerse reacciones positivas con otras
especies de Staphylococcus que poseen
habitualmente un factor de afinidad por el fibrinógeno
y/o una coagulasa: S. schleiferi, S. lugdunensis,
S. intermedius, S. delphini, S. hyicus (1, 7).
Es posible obtener reacciones falsas positivas con
algunas cepas de estreptococos (A, C y G) que
poseen sitios receptores para las inmunoglogulinas
(8) y para el fibrinógeno (9).
Pueden observarse reacciones no interpretables con
algunas cepas de enterococos y micrococos.
SLIDEX ® Staph-Kit no puede utilizarse con
hemocultivos debido a las posibles interferencias con
el fibrinógeno y/o las inmunoglobulinas incluidas en la
sangre.
PRESTACIONES TECNICAS
La evaluación de los reactivos se ha realizado a partir
de cepas recién aisladas (centros hospitalarios) y a
partir de cepas congeladas en varios centros
hospitalarios y los resultados obtenidos en el estudio
multicéntrico han sido publicados (10).
Todas las cepas de Staphylococcus han sido
confirmadas mediante la tinción de Gram, la prueba de
la catalasa, la coagulasa libre (en tubo) y
eventualmente por identificación bioquímica.
En todas las cepas se estudió su sensibilidad frente a
la meticilina.
En este estudio, se analizaron 940 cepas de S. aureus
y 441 cepas de S. no aureus. SLIDEX Staph-Kit fue
también comparado con otros dos reactivos
comercializados. SLIDEX Staph-Kit presentó la mejor
sensibilidad para las cepas de S. aureus resistente a la
meticilina (excluyendo los resultados no interpretables).
La sensibilidad es del 95,4 % para las cepas MRSA y
del 100 % para las cepas MSSA :
S. aureus únicamente
+ – Intervalo de confianza del 95%
MRSA 523 25 93,2% - 97,0%
MSSA 392 0 99,0% – 100%
Total S. aureus + S. no aureus
SLIDEX
Staph-Kit
Identificación confirmada de S.
aureus
+ –
+ 913 5
– 25 424
No interpretable 2 12
- SENSIBILIDAD: 97,3 % (913/938) con un intervalo de
confianza del 95 % : 96,0 % - 98,3 %
- ESPECIFICIDAD : 98,8 % (424/429) con un intervalo de
confianza del 95 % : 97,3% - 99,4 %
ELIMINACION DE RESIDUOS
Los reactivos del equipo contienen un derivado de
mercurio.
Es responsabilidad de cada laboratorio gestionar los
residuos y los efluentes que producen según su
naturaleza y su peligrosidad, y garantizar (o hacer
garantizar) el tratamiento y la eliminación según la
normativa aplicable.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. FLEURETTE J. - Staphylocoques et microcoques in L. LE
MINOR,
M. VERON, Bactériologie médicale, 2ème édition, 1990,
Flammarion.
2. FLANDROIS J.P., CARRET G. - Study of the
staphylococcal affinity to fibrinogen by passive
hemagglutination : a tool for the Staphylococcus aureus
identification. Zbl. Bakt. Hyg. Orig., 1981, A251, 171-176.
3. HAJEK V., MARSALEK E. - Evaluation of classificatory
criteria for staphylococci. Zbl. Bakt. Hyg. I. Abt. Orig.,
1976, Suppt 5, 11-21.
4. LALLY R., WOOLFREY B. - Clumping factor defective
methicillin resistant Staphylococcus aureus. Eur. J. Clin.
Microbiol., 1984, n° 2, 151-152.
5. FLANDROIS J.P., FLEURETTE J., EYRAUD F. -
Détection de la protéine A de Staphylococcus aureus par
hémagglutination conditionnée. Ann. Biol. Clin., 1975, 33,
365-368.
6. VANDENESCH et al. - The Lancet, 1993, 342, 995-996.
bioMérieux SA Español - 3

SLIDEX ® Staph-Kit 06125 K - es - 2006/12
7. FRENEY J., BRUN Y., BES M., MEUGNIER H., GRIMONT
F., GRIMONT P.A.D., NERVI C., FLEURETTE J. -
Staphylococcus lugdunensis sp nov and Staphylococcus
schleiferi sp nov, two species from human clinical specimens.
International Journal of Systematic Bacteriology, 1988, 38,
168-172.
8. MYHRE E.B., KRONVALL G. - Binding of murine myeloma
proteins of different Ig classes and subclasses for Fr reactive
surface structures in Gram positive cocci. Scand. J. Immunol.
1980, 11, 37-46.
9. KRONVALL G., SCHONVECK C., MYHRE E. - Fibrinogen
binding structures in -hemolytic streptococci group A, C and
G. Acta. Path. Microbiol. Scand. Sect. B, 1979, 87, 303-310.
10. CROIZE J., GIALANELLA P., MONNET D., OKADA J., ORSI
A., VOSS A. and MERLIN S. - "Improved identification of
Staphylococcus aureus using a new agglutination test :
Results of an international study". APMIS, 1993, 100, 487-
491.
TABLA DE SIMBOLOS
Símbolo
Significado
Número de referencia
Producto sanitario para diagnóstico in vitro
Fabricante
Límite de temperatura
Fecha de caducidad
Número de lote
Consultar las instrucciones de utilización
Contenido suficiente para ensayos
ATCC es una marca utilizada, depositada y/o registrada perteneciente a American Type Culture Collection.
bioMérieux ® SA
au capital de 12 029 370 €
673 620 399 RCS LYON
69280 Marcy-l'Etoile / France
Tél. 33 (0)4 78 87 20 00
Fax 33 (0)4 78 87 20 90
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Impreso en Francia
bioMérieux, el logo azul y SLIDEX son marcas utilizadas, depositadas y/o registradas pertenecientes
a bioMérieux SA o a cada una de sus filiales.

REF 73 112 06125 K - it - 2006/12
SLIDEX ® Staph-Kit
SLIDEX ® Staph-Kit è un test rapido di agglutinazione di particelle di lattice e di emazie per l'identificazione dei ceppi di
Staphylococcus aureus partendo dai terreni di isolamento.
IVD
INTRODUZIONE E OBIETTIVO DEL TEST
Gli stafilococchi fanno parte dei batteri riscontrati più
frequentemente nelle patologie umane. Le infezioni più
comuni provocate dallo Staphylococcus aureus sono a
livello cutaneo, ma in ambito ospedaliero possono essere
osservate patologie di notevole gravità (setticemie,
endocarditi, meningiti, polmoniti, osteomieliti) (1).
Il metodo più diffuso per l'identificazione dello
Staphylococcus aureus è stato per molto tempo la ricerca
della coagulasi. Questo test si basa sulla capacità dei
ceppi di Staphylococcus aureus di produrre questo
enzima extra-cellulare che coagula il plasma di coniglio.
Questo test permette dunque di differenziare lo
Staphylococcus aureus dalle altre specie di stafilococchi,
che sono principalmente coagulasi negativi. Tuttavia
questo metodo necessita dalle 4 alle 24 ore
d'incubazione.
Attualmente per la ricerca dello Staphylococcus aureus
vengono utilizzate anche altre tecniche, basate
sull’agglutinazione di emazie o di particelle di lattice (1, 2).
In effetti, lo Staphylococcus aureus possiede un recettore
proteico per un frammento del fibrinogeno. Questo
recettore è presente sul 96 % dei ceppi di origine umana
(3) e sulla maggior parte degli altri biotipi. Alcuni ceppi
resistenti alle Penicilline M non presentano questo fattore
di affinità per il fibrinogeno (4).
Sulla superficie dello Staphylococcus aureus una
proteina, la proteina A, reagisce elettivamente con il
frammento Fc della maggior parte delle immunoglobuline
dell'isotipo G (IgG). Questa proteina viene prodotta su tutti
i terreni, ma debolmente su agar al sangue ed è presente
nel 90 % dei ceppi (5). Infine, sulla superficie dello
Staphylococcus aureus sono presenti proteine,
glicoproteine e acidi teicoici le cui specifiche antigeniche
sono estremamente variabili(1)
SLIDEX Staph-Kit permette l’identificazione dei ceppi di
Staphylococcus aureus a partire da terreni di isolamento.
PRINCIPIO
SLIDEX Staph-Kit è un reattivo costituito da una miscela :
- di emazie di montone stabilizzate, sensibilizzate con
fibrinogeno, che agglutinano in presenza di un ceppo
di Staphylococcus aureus portatore del recettore di
affinità per il fibrinogeno,
- di particelle di lattice, sensibilizzate con un anticorpo
monoclonale (IgG), che agglutinano in presenza di un
ceppo di Staphylococcus aureus portatore della
proteina A e/o degli antigeni proteici di superficie.
COMPOSIZIONE DELLA CONFEZIONE DA 50 TEST
R1
S. aureus (H / L)
1 x 1,7 ml
Flacone contagocce**
con tappo
rosso
R2
S. aureus (H / LC)
1 x 1,7 ml
Flacone contagocce**
con tappo
bianco
1 scheda tecnica
Reattivo anti-Staphylococcus aureus
(pronto per l’uso, conservare in posizione
verticale)
Emazie di montone sensibilizzate con
fibrinogeno umano* e lattice sensibilizzato con
anticorpi monoclinali di topo anti-
Staphylococcus aureus (topo)
(mertiolato di sodio 0,13 g/l + sodio azide 1 g/l)
Reattivo di controllo negativo
(pronto per l’uso, conservare in posizione
verticale)
Emazie di montone e lattice non sensibilizzato
(mertiolato di sodio 0,13 g/l + sodio azide 1 g/l)
* E' stata verificata l'assenza di antigene HBs, di anticorpi
anti-HIV1, anti-HIV2 e di anticorpi anti-HCV. Tuttavia,
poiché nessun test può darne garanzia assoluta, questo
prodotto deve essere manipolato con le precauzioni d'uso
relative ai prodotti potenzialmente infettivi.
** 1 goccia = 0,03 ml
Omogenizzare bene i reattivi prima dell’uso.
MATERIALE NECESSARIO MA NON FORNITO
Cartoncini monouso o,
Vetrini porta-oggetto perfettamente puliti
Anse di plastica o bastoncini monouso
Contaminuti
AVVERTENZE E PRECAUZIONI
Unicamente per diagnostica in vitro.
Esclusivamente per uso professionale.
Questa confezione contiene componenti di origine
umana. Poiché nessuno dei metodi di analisi
attualmente conosciuti può garantire in maniera
assoluta che questi prodotti non contengano
nessun agente patogeno trasmissibile, si
raccomanda di manipolarli con le precauzioni d'uso
riservate ai prodotti potenzialmente infettivi.
(consultare Laboratory biosafety manual - WHO –
Geneva - ultima edizione).
Questa confezione contiene dei componenti di origine
animale. Poiché i controlli sull’origine e/o sullo stato
sanitario degli animali non possono garantire in maniera
assoluta che questi prodotti non contengano nessun
agente patogeno trasmissibile, si raccomanda di
manipolarli con le precauzioni d’uso relative ai prodotti
potenzialmente infettivi (non ingerire, non inalare).
I prelievi, le colture batteriche ed i prodotti seminati
devono essere considerati come potenzialmente infettivi
e devono essere manipolati in maniera appropriata. Le
tecniche di asepsi e le precauzioni d’uso per il gruppo
batterico studiato devono essere rispettate durante tutta
la manipolazione; fare riferimento a "CLSI/NCCLS M29-
A, Protection of Laboratory Workers from Occupationally
Acquired Infections, Approved Guideline - Revisione in
vigore". Per ulteriori informazioni sulle precauzioni di
manipolazione, consultare "Biosafety in Microbiological
and Biomedical Laboratories – CDC/NIH – Ultima
bioMérieux SA Italiano - 1

SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - it - 2006/12
edizione", oppure fare riferimento alla normativa vigente
nel Paese.
Non utilizzare i reattivi dopo la data di scadenza indicata
sull’etichetta della confezione.
Evitare il contatto con gli occhi, la pelle o gli indumenti.
Non invertire o mescolare reattivi di lotti differenti.
Non pipettare i reattivi con la bocca.
Non utilizzare anse metalliche per eseguire il test di
agglutinazione al lattice.
Non riutilizzare i cartoncini monouso.
I reattivi della confezione contengono un conservante
(sodio azide), suscettibile di reagire con le tubature in
piombo o in rame formando azidi metalliche esplosive.
Per prevenirne la formazione, si consiglia di sciacquare
con acqua dopo ogni rigetto.
L'interpretazione dei risultati del test deve essere fatta
tenendo conto del contesto clinico, dell’origine del
prelievo, degli aspetti macro e microscopici ed,
eventualmente, dei risultati di altri test.
CONDIZIONI DI CONSERVAZIONE
Conservare i reattivi a 2-8°C.
Non congelare i reattivi.
Non utilizzare i reattivi che siano stati accidentalmente
congelati.
Tutti i componenti, se correttamente conservati alle
condizioni prescritte, sono stabili fino alla data di
scadenza indicata sull'etichetta della confezione.
CAMPIONI (prelievo e preparazione)
Seminare il prelievo su un terreno di isolamento selettivo
(agar Chapman, agar Baird Parker, agar tellurito glicina) o
non selettivo [agar Columbia al sangue di montone (5 %),
agar Tripticasi soia con o senza sangue di montone (5 %),
agar Mueller Hinton con o senza sangue di montone, agar
CLED, agar BCP, agar CPS ID] : le performance possono
variare in funzione del tipo di terreno utilizzato.
Uno studio interno realizzato su 191 ceppi di S. aureus
(MRSA e MSSA) e su 89 ceppi di S. non aureus mostra
una sensibilità identica indipendentemente dal terreno
utilizzato. Lo studio mostra inoltre che i risultati della
specificità non sono statisticamente differenti se vengono
utilizzati terreni di coltura differenti (vedere la tabella sotto
riportata). Tuttavia si raccomanda di utilizzare i seguenti
terreni : Agar Columbia al sangue, Columbia CNA +
sangue, TSA, TSA + sangue, CPS e Baird Parker.
Terreno Sensibilità Specificità
Agar Columbia al sangue
Columbia CNA + sangue
TSA
TSA + sangue
CPS
Baird Parker
Mueller Hinton
Mueller Hinton + sangue
Agar Tellurito Glicina
BCP
CLED
94,2 % 89,5 %
94,2 % 88,4 %
Chapman 94,2 % 87,2 %
Dopo 18-24 ore di incubazione a 33-37°C, prelevare le
colonie sospette. Assicurarsi che si tratti realmente di
uno stafilococco avvalendosi delle tecniche classiche
(morfologia, Gram, catalasi).
PROCEDIMENTO
1. Lasciare i reattivi a temperatura ambiente (18-25°C)
prima dell’uso.
2. Omogeneizzare accuratamente i reattivi al lattice.
Eliminare le bolle contenute nel conta-gocce.
3. Deporre in 2 campi di reazione di un cartoncino
monouso o di un vetrino porta-oggetto perfettamente
pulito :
- 1 goccia di R1 (reattivo anti-Staphylococcus aureus);
- 1 goccia di R2 (reattivo di controllo negativo).
Tenere i flaconi conta-gocce verticalmente durante
la distribuzione delle gocce.
4. Emulsionare accuratamente e completamente per 10
secondi In ciascuna goccia 1-2 colonie sospette di
media grandezza da un terreno nutritivo o 3-6 colonie
molto piccole da un terreno selettivo (per es.: agar
Chapman) con un’ansa o un bastoncino monouso.
5. Imprimere al cartoncino un leggero movimento
rotatorio per 20 secondi e leggere sotto una luce
normale senza utilizzare lampade.
LETTURA E INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
Un risultato positivo è indicato dalla comparsa nel
reattivo R1 di una agglutinazione entro 30 secondi
(tempo del mescolamento + tempo di rotazione del
vetrino) delle emazie sensibilizzate (colorazione rossa),
delle particelle di lattice (colorazione bianca), o di
entrambi simultaneamente (colorazione rosso arancio).
Un risultato negativo è indicato dall’assenza di
agglutinazione con i reattivi R1 ed R2.
Reazione è ininterpretabile se il reattivo R2 presenta
un’agglutinazione.
L'agglutinazione delle emazie sensibilizzate indica la
presenza del fattore di affinità per il fibrinogeno.
L'agglutinazione del lattice indica che il ceppo possiede
la proteina A o l'antigene contro cui è diretto l'anticorpo
monoclonale.
In caso di agglutinazione estremamente debole con il
reattivo anti-Staphylococcus aureus, di agglutinazione
del reattivo di controllo o di formazione di grumi,
l’identificazione del ceppo deve essere effettuata
mediante la ricerca della coagulasi o con lo studio delle
caratteristiche biochimiche.
CONTROLLO DI QUALITÀ
Un controllo di qualità dei reattivi deve essere effettuato
all’apertura di una nuova confezione con i ceppi seguenti:
Ceppi di controllo Emazie Lattice
raccomandati R1 R2 R1 R2
S. aureus ATCC ® 25923 + - - -
S. epidermidis ATCC ® 14990 - - - -
S. aureus ATCC ® 51153 - - + -
Seguire le tappe del procedimento e della lettura
utilizzando le colonie corrispondenti ai ceppi sopra
indicati. I ceppi che servono al controllo di qualità devono
essere coltivati sui terreni abitualmente utilizzati dal
laboratorio.
bioMérieux SA Italiano - 2

SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - it - 2006/12
E’ possibile che i reattivi siano deteriorati se :
- il reattivo R1 non agglutina più un ceppo di
Staphylococcus aureus conosciuto ed utilizzato come
riferimento positivo ;
- il reattivo R1 agglutina un ceppo de Staphylococcus
epidermidis conosciuto ed utilizzato come riferimento
négativo ;
- i reattivi si sono autoagglutinati nei flaconi ;
- i reattivi sono contaminati, evaporati o emolizzati.
Nota :
E’ responsabilità dell'utilizzatore assicurare che il controllo
di qualità corrisponda a quanto previsto dalla legislazione
locale vigente.
LIMITI DEL METODO
Alcuni ceppi possono essere difficili da emulsionare e
dare grumi o filamenti nel reattivo. Queste condizioni
non devono essere confuse con un’agglutinazione.
Tuttavia, un’agglutinazione può essere visibile tra i
grumi.
Le reazioni possono risultare falsamente negative se:
- viene utilizzato un numero insufficiente di colonie (in
questo caso, occorre eseguire una subcoltura per
ottenere una crescita sufficiente) ;
- il ceppo non produce il fattore di affinità per il
fibrinogeno e la proteine A (agar al sangue) ;
- l'antigene contro cui è diretto l'anticorpo monoclonale
è assente.
Nei suddetti casi occorre eseguire altri test (6).
Reazioni positive possono essere ottenute con altre
specie di Staphylococcus che possiedono abitualmente
un fattore d'affinità per il fibrinogeno e/o una coagulasi:
S. schleiferi, S. lugdunensis, S. intermedius, S. delphini,
S. hyicus (1, 7).
Reazioni falsamente positive sono possibili con alcuni
ceppi di streptococchi (A, C e G) che possiedono siti
recettori per le immunoglobuline (8) e per il fibrinogeno
(9).
Reazioni non interpretabili possono essere osservate
con alcuni ceppi di enterococchi e di micrococchi.
SLIDEX ® Staph-Kit non può essere utilizzato
direttamente sulle emocolture a causa delle possibili
interferenze con il fibrinogeno e/o le immunoglobuline
presenti nel sangue.
PERFORMANCE
La performance dei reattivi è stata valutata su ceppi isolati
di fresco (centri ospedalieri) e da ceppi congelati di più
centri ospedalieri; i risultati dello studio multicentrico sono
stati pubblicati (10).
Tutti i ceppi di Staphylococcus sono stati confermati con
la colorazione di Gram, con il test della catalasi, con la
coagulasi libera (in provetta) ed, eventualmente, con
l’identificazione biochimica.
Tutti i ceppi sono stati saggiati per la sensibilità alla
meticillina.
In questo studio sono stati esaminati 940 ceppi di S.
aureus e 441 ceppi di S. non aureus. SLIDEX Staph-Kit è
stato inoltre comparato a due altri reattivi del commercio.
SLIDEX Staph-Kit ha presentto la migliore sensibilità con i
ceppi di S. aureus resistenti alla meticillina (escludendo i
risultati non interpretabili).
La sensibilità è del 95,4 % per i ceppi MRSA e del 100 %
per i ceppi MSSA :
Solo S. aureus
+ – Intervallo di confidenza al 95%
MRSA 523 25 93,2% - 97,0%
MSSA 392 0 99,0% – 100%
Totale S. aureus + S. non aureus
SLIDEX Staph-
Kit
Identificazioni confermate
di S. aureus
+ –
+ 913 5
– 25 424
Non
interpretabili
2 12
- SENSIBILITA’ : 97,3 % (913/938) con un intervallo di confidenza
al 95 % : 96,0 % - 98,3 %
- SPECIFICITA’ : 98,8 % (424/429) con un intervallo di confidenza
al 95 % : 97,3% - 99,4 %
SMALTIMENTO DEI RIFIUTI
I reattivi della confezione contengono un derivato
mercuriale.
E’ responsabilità di ogni laboratorio gestire i rifiuti e gli
effluenti prodotti a seconda della loro natura e della loro
pericolosità ed assicurarne (o farne assicurare) il
trattamento e lo smaltimento conformemente alla
legislazione vigente.
RIFERIMENTI BIBLIOGRAFICI
1. FLEURETTE J. - Staphylocoques et microcoques in L. LE
MINOR,
M. VERON, Bactériologie médicale, 2ème édition, 1990,
Flammarion.
2. FLANDROIS J.P., CARRET G. - Study of the staphylococcal
affinity to fibrinogen by passive hemagglutination : a tool for
the Staphylococcus aureus identification. Zbl. Bakt. Hyg.
Orig., 1981, A251, 171-176.
3. HAJEK V., MARSALEK E. - Evaluation of classificatory
criteria for staphylococci. Zbl. Bakt. Hyg. I. Abt. Orig., 1976,
Suppt 5, 11-21.
4. LALLY R., WOOLFREY B. - Clumping factor defective
methicillin resistant Staphylococcus aureus. Eur. J. Clin.
Microbiol., 1984, n° 2, 151-152.
5. FLANDROIS J.P., FLEURETTE J., EYRAUD F. - Détection
de la protéine A de Staphylococcus aureus par
hémagglutination conditionnée. Ann. Biol. Clin., 1975, 33,
365-368.
6. VANDENESCH et al. - The Lancet, 1993, 342, 995-996.
7. FRENEY J., BRUN Y., BES M., MEUGNIER H., GRIMONT
F., GRIMONT P.A.D., NERVI C., FLEURETTE J. -
Staphylococcus lugdunensis sp nov and Staphylococcus
schleiferi sp nov, two species from human clinical specimens.
International Journal of Systematic Bacteriology, 1988, 38,
168-172.
8. MYHRE E.B., KRONVALL G. - Binding of murine myeloma
proteins of different Ig classes and subclasses for Fr reactive
surface structures in Gram positive cocci. Scand. J. Immunol.
1980, 11, 37-46.
9. KRONVALL G., SCHONVECK C., MYHRE E. - Fibrinogen
binding structures in -hemolytic streptococci group A, C and
G. Acta. Path. Microbiol. Scand. Sect. B, 1979, 87, 303-310.
10. CROIZE J., GIALANELLA P., MONNET D., OKADA J., ORSI
A., VOSS A. and MERLIN S. - "Improved identification of
Staphylococcus aureus using a new agglutination test :
Results of an international study". APMIS, 1993, 100, 487-
491.
bioMérieux SA Italiano - 3

SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - it - 2006/12
TABELLA DEI SIMBOLI
Simbolo
Significato
Numero di catalogo
Dispositivo medico-diagnostico in vitro
Fabbricante
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Utilizzare entro
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Contenuto sufficiente per "n" saggi
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673 620 399 RCS LYON
69280 Marcy-l'Etoile / France
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REF 73 112 06125 K - pt - 2006/12
SLIDEX ® Staph-Kit
SLIDEX ® Staph-Kit é um teste rápido de aglutinação de partículas de látex e de hemácias para a identificação de
estirpes/cepas de Staphylococcus aureus a partir de meios de isolamento.
IVD
INTRODUÇÃO E OBJECTIVO DO TESTE
Os estafilococos fazem parte das bactérias que se
encontram com mais frequência em patologia humana.
As infecções mais comuns provocadas por
Staphylococcus aureus são cutâneas, mas podem
também observar-se infecções severas (septicémias,
endocardites, meningites, pneumonias, osteomielites) em
meio hospitalar (1).
O método que foi durante mais tempo escolhido para a
identificação de Staphylococcus aureus foi a pesquisa da
coagulase. Este teste baseia-se na capacidade das
estirpes/cepas de Staphylococcus aureus produzirem
esta enzima extra-ceclular que coagula o plasma de
coelho. Este teste permite assim diferenciar
Staphylococcus aureus das outras espécies de
estafilococos, maioritariamente, coagulase negativa. No
entanto, este método necessita de 4 a 24 horas de
incubação.
Outros métodos, baseados na aglutinação de hemácias
ou de partículas de látex, são actualmente reconhecidos
para a identificação de Staphylococcus aureus (1, 2).
Com efeito, Staphylococcus aureus possui um receptor
proteico para um fragmento do fibrinogénio. Este receptor
apresenta-se em 96% das estirpes/cepas de origem
humana (3) e, na maioria dos outros biotipos. Algumas
estirpes/cepas resistentes às Penicilinas M não
apresentam este factor de afinidade para o fibrinogénio
(4).
Uma proteína de superfície do Staphylococcus aureus, a
proteína A, reage electivamente com o fragmento Fc da
maioria das imunoglobulinas de isotipo G (IgG). Esta
proteína é produzida em todos os meios, mas
diminutamente na gelose de sangue. Está presente em
cerca de 90% das estirpes/cepas (5). Enfim, as proteínas
ou glicoproteínas e os ácidos teicóicos cujas
especificidades antigénicas são extremamente variáveis
(1) existem na superfície de Staphylococcus aureus.
O SLIDEX Staph-Kit permite a identificação das
estirpes/cepas de Staphylococcus aureus a partir de
meios de isolamento.
PRINCÍPIO
SLIDEX Staph-Kit é um reagente constituído por uma
mistura:
- Hemácias de carneiro estabilizadas, sensibilizadas
por fibrinogénio e aglutinadas quando colocadas na
presença de uma estirpe/cepa de Staphylococcus
aureus que contém o receptor de afinidade para o
fibrinogénio,
- Partículas de látex sensibilizadas por um anticorpo
monoclonal (IgG) e aglutinadas quando colocadas na
presença de uma estirpe/cepa de Staphylococcus
aureus que contém a proteína A e/ou antigénios
proteicos de superfície.
COMPOSIÇÃO DA EMBALAGEM PARA 50 TESTES
R1
S. aureus (H / L)
1 x 1,7 ml
Frasco com contagotas**
de tampa
vermelha
R2
S. aureus (H / LC)
1 x 1,7 ml
Frasco com contagotas**
de tampa
branca
Reagente anti-Staphylococcus aureus
(pronto a usar, armazenar em posição
vertical)
Hemácias de carneiro sensibilizadas por
fibrinogénio humano* e látex sensibilizado por
anticorpo monoclonal de rato anti-
Staphylococcus aureus (rato)
(mertiolato de sódio 0,13 g/l + azida sódica 1
g/l)
Reagente de controlo negativo
(pronto a usar, armazenar em posição
vertical)
Hemácias de carneiro e látex não
sensibilizado
(mertiolato de sódio 0,13 g/l + azida sódica 1
g/l)
1 folheto informativo
* Foi verificada a ausência de antigénio HBs, anticorpos
anti-VIH1, anti-VIH2 e de anticorpos anti-VHC. No entanto,
não podendo nenhum teste dar uma garantia absoluta,
deve este produto ser manipulado com as precauções de
utilização relativas aos produtos potencialmente
infecciosos.
** 1 gota = 0,03 ml
Homogeneizar correctamente os reagentes antes de os
utilizar.
MATERIAL NECESSARIO MAS NÃO FORNECIDO
Cartas descartáveis ou,
Lâminas de vidro bem limpas
Ansas de plástico ou bastonetes descartáveis
Cronómetro
PRECAUÇÕES DE UTILIZAÇÃO
Somente para uso em diagnóstico in vitro
Unicamente para uso profissional
Este dispositivo contém componentes de origem
humana. Nenhum dos métodos de análise
actualmente conhecidos pode garantir de maneira
absoluta que estes produtos não contenham
nenhum agente patogénico transmissível. É
recomendado manipulá-los com as precauções de
utilização relativas aos produtos potencialmente
infecciosos ; (consultar o manual : Laboratory
biosafety manual - WHO - Geneva - última edição).
Este dispositivo contém componentes de origem animal.
O controlo da origem e/ou do estado sanitário dos
animais não pode garantir de maneira absoluta que
estes produtos não contenham nenhum agente
patogénico transmissível, é recomendado manipulá-los
com as precauções de utilização relativas aos produtos
potencialmente infecciosos (não ingerir; não inalar).
As amostras, culturas bacterianas e produtos semeados
devem ser considerados potencialmente infecciosos e
manipulados de maneira apropriada. As técnicas
assépticas e as precauções habituais de manipulação
para o grupo bacteriano estudado devem ser
respeitadas durante toda a manipulação; consultar o
"CLSI/NCCLS M29-A, Protection of Laboratory Workers
from Occupationally Acquired Infections, Approved
Guideline – Revisão em vigor". Para informações
complementares sobre as precauções de manipulação,
consultar o "Biosafety in Microbiological and Biomedical
bioMérieux SA Português - 1

SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - pt - 2006/12
Laboratories – CDC/NIH – Última edição", ou a
regulamentação em vigor no país de utilização.
Não utilizar os reagentes após a data de validade
indicada na etiqueta da embalagem.
Evitar o contacto com os olhos, a pele e a roupa.
Não trocar ou misturar reagentes provenientes de
números de lotes diferentes.
Não pipetar com a boca os reagentes.
Não utilizar ansa metálica para efectuar o teste de
aglutinação em látex.
Não voltar a usar cartas descartáveis.
Os reagentes da embalagem contêm um conservante
(azida sódica) susceptível de reagir com as
canalizações de chumbo ou de cobre e formar azidas
metálicas explosivas. É recomendado passar por água
qualquer produto de rejeição.
A interpretação dos resultados do teste deve ser
efectuada tendo em conta o contexto clínico, a origem
da amostra, os aspectos macro e microscópicos, e
eventualmente, os resultados de outros testes.
CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO
Conservar os reagentes a 2° - 8° C.
Não congelar os reagentes.
Se os reagentes tiverem sido congelados
acidentalmente, não devem ser utilizados.
Todos os componentes permanecem estáveis até à
data de validade indicada na etiqueta da embalagem,
se forem conservados nas condições exigidas.
AMOSTRAS (colheitas/coletas e preparação)
Semear a colheita/coleta num meio de isolamento
selectivo (gelose Chapman, gelose Baird Parker, gelose
telurito glicina) ou não selectivo [(gelose Columbia com
sangue de carneiro (5 %), gelose Tripcase soja com ou
sem sangue de carneiro (5 %), gelose Mueller Hinton com
ou sem sangue de carneiro, gelose CLED, gelose BCP,
gelose CPS ID] : o comportamento funcional pode variar
em função do tipo de meio utilizado.
Um estudo interno efectuado com 191 estirpes/cepas de
S. aureus (MRSA e MSSA) e 89 estirpes/cepas de S. não
aureus demonstra uma sensibilidade identica em função
do meio utilizado. O estudo demonstra também que os
resultados de especificidade não são estatisticamente
diferentes em função do meio utilizado (consultar o
quadro abaixo). No entanto, é recomendado utilizar os
seguintes meios: Gelose Columbia com sangue,
Columbia ANC + sangue, TSA, TSA + sangue, CPS e
Baird Parker.
Meio Sensibilidade Especificidade
Gelose Columbia com sangue
Columbia ANC + sangue
TSA
TSA + sangue
CPS
Baird Parker
Mueller Hinton
Mueller Hinton + sangue
Gelose Telurito Glicina
BCP
CLED
94,2 % 89,5 %
94,2 % 88,4 %
Chapman 94,2 % 87,2 %
Após incubação durante 18-24 horas a 33-37°C, verificar
as colónias suspeitas. Assegurar-se primeiro que se
trata de um estafilococo pelas reacções clássicas
(morfologia, Gram, catalase).
PROCEDIMENTO
1. Deixar os reagentes à temperatura ambiente (18-
25°C) antes de utilização.
2. Efectuar correctamente a suspensão dos reagentes.
Eliminar as bolhas de ar retidas no conta-gotas.
3. Numa carta descartável ou lâmina de vidro limpa,
colocar nos 2 círculos:
- 1 gota de R1 (reagente anti-Staphylococcus aureus);
- 1 gota de R2 (reagente de controlo negativo).
Ter o cuidado de segurar os frascos com contagotas
verticalmente quando dispensar as gotas.
4. Com uma ansa ou um bastonete descartável,
homogeneizar cuidaosa e completamente durante 10
segundos, 1 a 2 colónias suspeitas de tamanho médio
provenientes de uma gelose não selectiva ou 3 a 6
colónias muito pequenas provenientes de uma gelose
selectiva (ex.: gelose Chapman).
5. Girar a lâmina com um ligeiro movimento rotativo
durante 20 segundos e ler a reacção sob luz normal
sem utilizar lupa.
LEITURA E INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
Um resultado positivo é indicado pelo aparecimento
no reagente R1 de uma aglutinação em 30 segundos
(tempo da mistura + tempo de rotação da lâmina),
através das hemácias sensibilizadas (coloração
vermelha) ou através das partículas de látex (coloração
branca), ou pelas duas em simultâneo (coloração
vermelha alaranjada).
Um resultado negativo é indicado pela ausência de
aglutinação com os reagentes R1 e R2.
A reacção é ininterpretável se o reagente R2
apresentar uma aglutinação.
A aglutinação das hemácias sensibilizadas indica a
presença do factor de afinidade para o fibrinogénio.
A aglutinação do látex indica que a estirpe/cepa indica
que a estirpe/cepa possui proteína A ou antigénio
contra o qual está dirigido o anticorpo monoclonal.
Se a aglutinação for muito fraca com o reagente anti-
Staphylococcus aureus, se o reagente de controlo for
aglutinado ou se obtiver grumos, a identificação da
estirpe/cepa deve ser efectuada pela pesquisa da
coagulase ou pelo estudo dos caracteres bioquímicos.
CONTROLO DE QUALIDADE
Deve ser efectuado um controlo de qualidade dos
reagentes em cada abertura de uma nova embalagem
com as estirpes/cepas abaixo indicadas :
Estirpes/cepas de controlo Hemácias Látex
recomendadas R1 R2 R1 R2
S. aureus ATCC ® 25923 + - - -
S. epidermidis ATCC ® 14990 - - - -
S. aureus ATCC ® 51153 - - + -
Seguir as etapas da metodologia e da leitura a partir de
colónias que correspondem às estirpes/cepas acima
indicadas. As estirpes/cepas que servem de controlo de
qualidade devem ser cultivadas nos meios habitualmente
utilizados no laboratório.
bioMérieux SA Português - 2

SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - pt - 2006/12
Deve ser suspeita a deterioração dos reagentes se:
- O reagente R1 não aglutinar uma estirpe/cepa de
Staphylococcus aureus conhecida e que sirva de
referência positiva;
- O reagente R1 aglutinar uma estirpe/cepa de
Staphylococcus epidermidis conhecida e que sirva de
referência negativa;
- Os reagentes estiverem auto-aglutinados nos frascos;
- Os reagentes estiverem contaminados, evaporados
ou hemolisados.
Nota:
É da responsabilidade do utilizador assegurar que o
controlo de qualidade é efectuado em conformidade com
a legislação local em vigor.
LIMITES DO TESTE
Algumas estirpes/cepas podem ser difíceis de
emulsionar e dar grumos ou filamentos no reagente.
Estas imagens não devem ser confundidas com uma
aglutinação. No entanto, uma aglutinação pode ser
visível entre os grumos.
As reacções podem ser falsamente negativas se:
- For utilizado um número insuficiente de colónias para
o teste (neste caso, é necessário efectuar uma
subcultura para obter um crescimento suficiente);
- A estirpe/cepa não produz o factor de afinidade para o
fibrinogénio, a proteína A (gelose de sangue) ;
O antigénio contra o qual é dirigido o anticorpo
monoclonal está ausente.
Devem então ser efectuados outros testes (6).
Podem ser obtidas reacções positivas com outras
espécies de Staphylococcus que possuem
habitualmente um factor de afinidade para o fibrinogénio
e/ou uma coagulase: S. schleiferi, S. lugdunensis,
S. intermedius, S. delphini, S. hyicus (1, 7).
São possíveis algumas reacções falsamente positivas
com algumas estirpes/cepas de estreptococos (A, C e
G) que possuem locais receptores para as
imunoglobulinas (8) e para o fibrinogénio (9).
Podem ser observadas reacções ininterpretáveis com
algumas estirpes/cepas de enterococos e de
micrococos.
O SLIDEX ® Staph-Kit não pode ser utilizado
directamente em hemocultura devido a possíveis
interferências com o fibrinogénio e/ou as
imunoglobulinas fornecidas pelo sangue.
COMPORTAMENTO FUNCIONAL
A avaliação dos reagentes foi efectuada com
estirpes/cepas recentemente isoladas (centros
hospitalares) e com estirpes/cepas congeladas em vários
centros hospitalares e os resultados do estudo
multicêntrico foram publicados (10).
Todas as estirpes/cepas de Staphylococcus foram
confirmadas por coloração de Gram, teste de catalase,
coagulase livre (tubo) e, eventualmente, por identificação
bioquímica.
Todas as estirpes/cepas foram testadas para a sua
sensibilidade à meticilina.
Neste estudo, 940 estirpes/cepas de S. aureus e
441 estirpes/cepas de S. não aureus foram testadas. O
SLIDEX Staph-Kit foi também comparado com outros dois
reagentes comercializados. O SLIDEX Staph-Kit
apresentou a melhor sensibilidade para as estirpes/cepas
de S. aureus resistentes à meticilina (excluindo os
resultados ininterpretáveis).
A sensibilidade é de 95,4% para as estirpes/cepas MRSA
e de 100 % para as estirpes/cepas MSSA :
S. aureus apenas
+ – Intervalo de confiança de
95%
MRSA 523 25 93,2% - 97,0%
MSSA 392 0 99,0% – 100%
Total S. aureus + S. não aureus
SLIDEX Staph-
Kit
Identificação S. aureus
confirmada
+ –
+ 913 5
– 25 424
Ininterpretável 2 12
- SENSIBILIDADE : 97,3 % (913/938) com um intervalo de confiança
de 95 % : 96,0 % - 98,3 %
- ESPECIFICIDADE : 98,8 % (424/429) com um intervalo de confiança
de 95 % : 97,3% - 99,4 %
ELIMINAÇÃO DE RESÍDUOS
Os reagentes da embalagem contêm um derivado de
mercúrio.
É da responsabilidade de cada laboratório gerir os
resíduos e os efluentes que este produz consoante a sua
natureza e o seu perigo, e assegurar (ou fazer assegurar)
o tratamento e a eliminação em conformidade com as
regulamentações aplicáveis.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. FLEURETTE J. - Staphylocoques et microcoques in L. LE
MINOR,
M. VERON, Bactériologie médicale, 2ème édition, 1990,
Flammarion.
2. FLANDROIS J.P., CARRET G. - Study of the staphylococcal
affinity to fibrinogen by passive hemagglutination : a tool for
the Staphylococcus aureus identification. Zbl. Bakt. Hyg.
Orig., 1981, A251, 171-176.
3. HAJEK V., MARSALEK E. - Evaluation of classificatory
criteria for staphylococci. Zbl. Bakt. Hyg. I. Abt. Orig., 1976,
Suppt 5, 11-21.
4. LALLY R., WOOLFREY B. - Clumping factor defective
methicillin resistant Staphylococcus aureus. Eur. J. Clin.
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5. FLANDROIS J.P., FLEURETTE J., EYRAUD F. - Détection
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hémagglutination conditionnée. Ann. Biol. Clin., 1975, 33,
365-368.
6. VANDENESCH et al. - The Lancet, 1993, 342, 995-996.
7. FRENEY J., BRUN Y., BES M., MEUGNIER H., GRIMONT
F., GRIMONT P.A.D., NERVI C., FLEURETTE J. -
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schleiferi sp nov, two species from human clinical specimens.
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168-172.
8. MYHRE E.B., KRONVALL G. - Binding of murine myeloma
proteins of different Ig classes and subclasses for Fr reactive
surface structures in Gram positive cocci. Scand. J. Immunol.
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9. KRONVALL G., SCHONVECK C., MYHRE E. - Fibrinogen
binding structures in -hemolytic streptococci group A, C and
G. Acta. Path. Microbiol. Scand. Sect. B, 1979, 87, 303-310.
10. CROIZE J., GIALANELLA P., MONNET D., OKADA J., ORSI
A., VOSS A. and MERLIN S. - "Improved identification of
Staphylococcus aureus using a new agglutination test :
Results of an international study". APMIS, 1993, 100, 487-
491.
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Atendimento ao Consumidor Tel.: 0800-264848
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REF 73 112 06125 K - sv - 2006/12
SLIDEX ® Staph-Kit
SLIDEX ® Staph Kit är ett snabbt latex- och erytrocytagglutinationstest för identifiering av Staphylococcus aureusstammar
som isolerats från odlingsmedia.
IVD
SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING
Stafylokocker är en av de bakteriearter som oftast
påträffas vid humaninfektioner. De vanligaste
humaninfektionerna som orsakas av Staphylococcus
aureus är hudinfektioner, men allvarliga former (septikemi,
endokardit, meningit, pneumoni, osteomyelit) kan iakttas i
sjukhusmiljö (1).
Koagulastest har länge varit den mest accepterade
metoden för att identifiera Staphylococcus aureus. Det
bygger på Staphylococcus aureus-stammarnas förmåga
att producera det extracellulära enzymet koagulas, som
initierar koagulationen av kaninplasma. Detta test
möjliggör differentiering av Staphylococcus aureusstammar
från andra arter av stafylokocker, vilka
huvudsakligen är koagulasnegativa. Denna metod kräver
emellertid en inkubationsperiod på 4-24 timmar.
Andra agglutinationsmetoder som använder sig av röda
blodkroppar eller latexpartiklar har också blivit allmänt
erkända för identifieringen av Staphylococcus aureus
(1, 2).
Staphylococcus aureus-stammar har en proteinreceptor
som kan binda till fibrinogen. Denna receptor finns i 96%
av stammarna av humant ursprung (3) och de flesta andra
biotyper. Vissa meticillinresistenta stammar producerar
inte ”clumping factor” (4).
Protein A finns på ytan av de flesta Staphylococcus
aureus-stammar. Det har affinitet för Fc-fragmentet i de
flesta isotyp-G-immunoglobuliner (IgG). Protein A
produceras på alla medier, men i mindre mängd på
blodagarplattor. Proteinet finns i ungefär 90% av
stammarna (5). Olika proteiner eller glykoproteiner och
teichonsyror finns på ytan av Staphylococcus aureus.
Deras antigena specificitet varierar kraftigt (1).
SLIDEX Staph-Kitet möjliggör identifiering av
Staphylococcus aureus-stammar från odlingsmedia.
METOD
SLIDEX Staph-Kit-reagenset består av:
- stabiliserade erytrocyter (får), sensibiliserade med
fibrinogen, som agglutinerar om Staphylococcus
aureus-stammen bildar ”clumping factor”.
- latexpartiklar, sensibiliserade med monoklonala IgGantikroppar,
som agglutinerar om protein A och/eller
antigena proteiner finns på ytan av Staphylococcus
aureus- stammen.
KITETS INNEHÅLL (50 TESTER):
R1
S. aureus (H / L)
1 x 1,7 ml
Droppflaska**
med rött lock
R2
S. aureus (H / LC)
1 x 1,7 ml
Droppflaska**
med vitt lock
1 bipacksedel
Anti-Staphylococcus aureus-reagens
(färdig att använda, förvara upprätt)
Erytrocyter (får) sensibiliserade med humant
fibrinogen* och latexpartiklar sensibiliserade
med monoklonala anti-Staphylococcus aureus
antikroppar (mus)
(0,13 g/l natriummerthiolat + 1 g/l natriumazid)
Negativt kontrollreagens
(färdig att använda, förvara upprätt)
Icke-sensibiliserade erytrocyter (får) och
latexpartiklar
(0,13 g/l natriummerthiolat + 1 g/l natriumazid)
* Denna produkt har testats och visat sig vara negativ för
HBs-antigen, och antikroppar mot HIV1, HIV2 samt HCV.
Denna produkt måste ändå behandlas som potentiellt
infektiös eftersom ingen känd testmetod kan garantera
total frånvaro av dessa smittämnen. Därför bör sedvanliga
säkerhetsåtgärder iakttas vid användning.
** 1 droppe = 0,03 ml
Skaka väl före användning.
NÖDVÄNDIG MATERIAL (SOM INTE MEDFÖLJER)
Engångskartor eller
Rena objektglas
Engångsöglor av plast eller omrörningsstavar
Timer
FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER
Endast för in vitro-diagnostik.
Endast för professionell användning.
Detta kit innehåller produkter av humant ursprung.
Ingen känd analys kan garantera total frånvaro av
överförbara patogena agens. Det rekommenderas
därför att dessa produkter behandlas som
potentiellt infektiösa och att de handhas med
sedvanliga försiktighetsåtgärder (se Laboratory
biosafety manual - WHO - Geneva - senaste
upplagan).
Detta kit innehåller produkter av animaliskt ursprung.
Certifierade data angående ursprunget och/eller
hälsotillståndet hos djuren garanterar inte total frånvaro
av överförbara patogena agens. Det rekommenderas
därför att dessa produkter behandlas som potentiellt
infektiösa och handhas med sedvanliga
försiktighetsåtgärder (får inte förtäras eller inandas).
Alla prover, odlingar av mikroorganismer och
inokulerade produkter skall anses infektiösa och
behandlas på ett lämpligt sätt. Sterilteknik och
sedvanliga försiktighetsåtgärder för att handha den
speciella gruppen av bakterier skall iakttas under hela
proceduren. Se "CLSI/NCCLS M29-A, Protection of
Laboratory Workers from Occupationally Acquired
Infections, Approved Guideline – Aktuell revidering".
För ytterligare information angående försiktighetsåtgärder
vid hantering, se “Biosafety in Microbiological
and Biomedical Laboratories – CDC/NIH – Senaste
upplagan", eller de f.n. gällande reglerna i det aktuella
landet.
bioMérieux SA Svenska - 1

SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - sv - 2006/12
Använd inga reagenser efter sista förbrukningsdatum
som anges på förpackningsetiketten .
Undvik kontakt med ögon, hud eller klädesplagg.
Blanda inte reagenser från olika batcher.
Munpipettera inte reagenserna.
Använd inte metallögla för att utföra latexagglutinationstestet.
Återanvänd inte engångskartorna.
Reagenserna innehåller ett konserveringsmedel
(natriumazid). Natriumazid kan reagera med bly- och
kopparrörsystem och bilda mycket explosiva
metallsalter. För att göra sig av med natriumaziden
spolas med stora volymer vatten för att förhindra
ackumulering i avloppsrören.
Tolkningen av testresultaten skall göras med hänsyn till
patientens anamnes, provkällan, kolonimorfologi och
mikroskopisk morfologi och, om nödvändigt, resultat av
andra utförda tester.
FÖRVARING
Förvara alla reagenser vid 2-8°C.
Frys inte reagenserna.
Reagenserna bör inte användas om de har blivit
oavsiktligt nedfrysta.
Vid förvaring enligt rekommendationerna, är alla
komponenter stabila till det utgångsdatum som anges
på etiketten.
PROVER (insamling och beredning)
Odla prover på ett selektivt (Chapman agar, Baird Parker
agar, Tellurite glycinagar) eller icke-selektivt
isoleringsmedium [(Columbia fårblodsagar (5%), Trypcase
Soy agar med eller utan fårblod (5%), Mueller Hinton agar
med eller utan fårblod, CLED-agar, BCP-agar, CPS IDagar)].
Prestanda kan variera beroende på typen av
medium som används.
En intern studie som utfördes med 191 S. aureusstammar
(MRSA och MSSA) och 89 icke-aureus-stammar
visade samma känslighet oavsett vilket medium som
användes (se tabellen nedan). Studien visade också att
resultaten för specificiteten inte statistiskt skiljer sig för
olika medier (se tabellen nedan). Det rekommenderas
emellertid att använda följande medier: Columbia
blodagar, Columbia CNA + blod, TSA, TSA + blod, CPS
och Baird Parker.
Medium Känslighet Specificitet
Columbia blodagar
Columbia CNA + blod
TSA
TSA + blod
CPS
Baird Parker
94,2% 89,5%
Mueller Hinton
Mueller Hinton + blod
Tellurite Glycin agar
BCP
CLED
94,2% 88,4%
Mannitolsalt agar 94,2% 87,2%
BRUKSANVISNING
1. Låt reagenserna anta rumstemperatur (18-25°C) före
användning.
2. Återupplös reagenserna genom blandning. Avlägsna
de kvarvarande bubblorna i droppflaskans pipett.
3. Tillsätt följande till en engångskarta eller ett noggrant
rengjort objektglas:
- 1 droppe R1 (anti-Staphylococcus aureus-reagens),
- 1 droppe R2 (negativt kontrollreagens).
Håll flaskorna vertikalt när reagenserna
dispenseras.
4. För varje droppe, tillsätt försiktigt 1-2 misstänkta
kolonier av mellanstorlek från en icke-selektiv agar
eller 3-6 mycket små kolonier från en selektiv agar
(t.ex. Mannitolsalt agar). Blanda väl med en
bakteriologisk ögla eller en pasteurpipett i 10
sekunder.
5. Rotera objektglaset försiktigt i 20 sekunder och avläs
reaktionerna under normala ljusförhållanden och utan
hjälp av förstoringsglas.
AVLÄSNING OCH TOLKNING
Ett positivt resultat påvisas av att ett
agglutinationsmönster bildas i R1-reagenset inom 30
sekunder (tid för att blanda kolonier och reagenser,
sedan rotering av objektglasen) av de sensibiliserade
erytrocyterna (röd färgning), av latexpartiklarna (vit
färgning), eller av båda samtidigt (rödorange färgning).
Ett negativt resultat påvisas av frånvaron av
agglutination med reagensen R1 och R2.
Testet är icke tolkningsbart om kontrollreagenset (R2)
visar agglutination.
Agglutination av de sensibiliserade erytrocyterna påvisar
förekomsten av ”clumping factor”.
Agglutination av latexpartiklarna påvisar förekomsten av
protein A eller det specifika antigen som den
monoklonala antikroppen är riktad mot.
I fall med mycket svag agglutination med anti-
Staphylococcus aureus-reagenset, om kontrollreagenset
agglutineras eller om klumpbildning inträffar, måste
vidare identifiering av stammen utföras med
rörkoagulastestet eller olika biokemiska tester.
KVALITETSKONTROLL
Kvalitetskontroll av reagenserna måste utföras med
följande stammar varje gång ett nytt kit tas i bruk:
Rekommenderade Erytrocyter Latex
Kontrollstammar R1 R2 R1 R2
S. aureus ATCC ® 25923 + - - -
S. epidermidis ATCC ® 14990 - - - -
S. aureus ATCC ® 51153 - - + -
Följ stegen som beskrivs i avsnitten “Bruksanvisning” och
“Avläsning och tolkning” med stammar från kolonierna
angivna ovan. Kvalitetskontrollstammarna bör växa på det
medium som normalt sett används i laboratoriet.
Efter 18-24 timmars inkubation vid 33-37°C ska
misstänkta kolonier testas med hjälp av klassiska
metoder som Gramfärgning, morfologi och
katalastest för att säkerställa att de är stafylokocker.
bioMérieux SA Svenska - 2

SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - sv - 2006/12
Försämring av reagenserna ska misstänkas om:
- R1-reagenset inte agglutinerar en känd
Staphylococcus aureus-stam, vilken används som
positiv referens,
- R1-reagenset agglutinerar en känd Staphylococcus
epidermidis-stam, vilken används som negativ
referens,
- reagenserna har autoagglutinerat i flaskorna,
- reagenserna är förorenade eller hemolyserade, eller
har avdustat.
Obs:
Det är användarens ansvar att utföra kvalitetskontroll i
enlighet med lokalt tillämpliga bestämmelser.
METODENS BEGRÄNSNINGAR
Vissa stammar kan vara svåra att suspendera och kan
ge stråkighet eller klumpar i reagenset. Detta bör inte
uppfattas som äkta agglutination. Äkta agglutination kan
däremot vara synlig mellan klumparna.
Falskt negativa reaktioner kan inträffa om:
- ett otillräckligt antal kolonier används för testet. I detta
fall ska isolatet subodlas och testas när tillväxten är
tillräcklig.
- stammen bildar inte ”clumping factor” eller protein A
(blodagar),
- det specifika antigen som den monoklonala
antikroppen är riktad mot bildas inte.
Andra tester bör användas (6).
Positiva reaktioner kan inträffa med stammar av andra
arter av Staphylococcus, vilka har ”clumping factor”
och/eller koagulas:
S. schleiferi, S. lugdunensis, S. intermedius, S. delphini,
S. hyicus (1, 7).
Falskt positiva reaktioner kan inträffa med vissa
streptokockstammar (A, C och G) som har receptorer för
immunoglobuliner (8) och fibrinogen (9).
Icke tolkningsbara reaktioner kan inträffa med vissa
stammar av enterokocker och mikrokocker.
SLIDEX ® Staph-Kit bör inte användas direkt med
blododlingsbuljong. Falska reaktioner kan inträffa på
grund av interferens med fibrinogen och IgG som finns i
blodet.
PRESTANDA
Utvärderingen av reagenserna utfördes med färskt isolat
från sjukhus och nedfrysta stammar från flera sjukhus.
Resultaten av multicenterstudien har publicerats (10).
Alla Staphylococcus-stammar konfirmerades med
Gramfärgning, katalastest, rörkoagulas och avvikelser
klargjordes med biokemiska procedurer.
Alla stammarnas känslighet för meticillin testades.
I denna studie testades 940 S. aureus-stammar och 441
icke-aureus-stammar. SLIDEX Staph-Kit jämfördes också
med två andra kommersiellt tillgängliga reagenser.
SLIDEX Staph-Kit visade sig vara mer känsligt för
meticillinresistenta stammar (icke-tolkningsbara resultat
ignorerades).
Känsligheten visade sig vara 95,4% för MRSA-stammar
och 100% för MSSA-stammar.
Endast S. aureus
+ – 95%
konfidensintervall
MRSA 523 25 93,2% - 97,0%
MSSA 392 0 99,0% - 100%
Total S. aureus + icke-S. aureus
SLIDEX Staph-
Kit
Konfirmerad identifiering av
S. aureus
+ –
+ 913 5
– 25 424
Icketolkningsbart
2 12
- KÄNSLIGHET: 97,3 % (913/938)
95% konfidensintervall: (96,0% - 98,3%)
- SPECIFICITET: 98,8 % (424/429)
95% konfidensintervall: (97,3% - 99,4%)
AVFALLSHANTERING
Kitet innehåller ett kvicksilverderivat.
Det är varje laboratoriums ansvar att handha avfalls- och
avloppsprodukter enligt typ och farlighetsgrad och
behandla och avlägsna dem (eller få dem behandlade och
avlägsnade) i enlighet med alla tillämpliga föreskrifter.
REFERENSLITTERATUR
1. FLEURETTE J. - Staphylocoques et microcoques in
L. LE MINOR, M. VERON, Bactériologie Médicale,
2ème édition, 1990, Flammarion.
2. FLANDROIS J.P., CARRET G. - Study of the staphylococcal
affinity to fibrinogen by passive hemagglutination : a tool for
the Staphylococcus aureus identification. Zbl. Bakt. Hyg.
Orig., 1981, A251, 171-176.
3. HAJEK V., MARSALEK E. - Evaluation of classificatory
criteria for staphylococci. Zbl. Bakt. Hyg. I. Abt. Orig., 1976,
Suppt 5, 11-21.
4. LALLY R., WOOLFREY B. - Clumping factor defective
methicillin resistant Staphylococcus aureus. Eur. J. Clin.
Microbiol., 1984, n° 2, 151-152.
5. FLANDROIS J.P., FLEURETTE J., EYRAUD F. - Détection
de la protéine A de Staphylococcus aureus par
hémagglutination conditionnée. Ann. Biol. Clin., 1975, 33,
365-368.
6. VANDENESCH et al. The Lancet, 1993, 342, 995-996
7. FRENEY J., BRUN Y., BES M., MEUGNIER H., GRIMONT
F., GRIMONT P.A.D., NERVI C., FLEURETTE J. -
Staphylococcus lugdunensis sp nov and Staphylococcus
schleiferi sp nov, two species from human clinical specimens.
International Journal of Systematic Bacteriology, 1988, 38,
168-172.
8. MYHRE E.B., DRONVALL G. - Binding of murine myeloma
proteins of different Ig classes and subclasses for Fr reactive
surface structures in Gram positive cocci. Scand. J. Immunol.
1980, 11, 37-46.
9. KRONVAL G., SCHONVECK C., MYHRE E. - Fibrinogen
binding structures in -hemolytic streptococci group A, C and
G. Acta. Path. Microbiol. Scand. Sect. B, 1979, 87, 303-310.
10. CROIZE J., GIALANELLA P., MONNET D., OKADA J., ORSI
A., VOSS A. and MERLIN S. - "Improved identification of
Staphylococcus aureus using a new agglutination test :
Results of an international study". APMIS, 1993, 100, 487-
491.
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SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - sv - 2006/12
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ATCC är ett använt, patentsökt och/eller registrerat varumärke som tillhör American Type Culture Collection.
bioMérieux ® SA
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Fax 33 (0)4 78 87 20 90
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tillhör och används av bioMérieux sa eller något av dess dotterbolag. .

REF 73 112 06125 K - pl - 2006/12
SLIDEX ® Staph-Kit
SLIDEX ® taph-Kit jest szybkim testem aglutynacyjnym zawierajcym lateks i krwinki czerwone, umoliwiajcym
identyfikacj szczepów Staphylococcus aureus izolowanych z podó hodowlanych.
IVD
WPROWADZENIE
Gronkowce nale do jednych z najczciej spotykanych
w infekcjach czowieka gatunków bakteryjnych. Zakaenia
najbardziej powszechne, wywoywane przez
Staphylococcus aureus dotycz skóry, ale w rodowisku
szpitalnym mona obserwowa cikie schorzenia
(posocznica, zapalenie wsierdzia, opon mózgowordzeniowych,
puc, koci) (1).
Przez dugi okres czasu, najbardziej rozpowszechnion
metod identyfikacji Staphylococcus aureus by test na
wytwarzanie koagulazy. Jest on oparty na zdolnoci
szczepów Staphylococcus aureus do wytwarzania
zewntrzkomórkowego enzymu koagulazy, która inicjuje
wytwarzanie skrzepu w osoczu króliczym. Test ten
pozwala na odrónienie Staphylococcus aureus od innych
gatunków gronkowców, które s na ogó koagulazoujemne.
Metoda ta wymaga jednak 4-24 godzin inkubacji.
Inne techniki aglutynacyjne wykorzystujce krwinki
czerwone lub czsteczki lateksu s powszechnie
uznawanymi metodami identyfikacji Staphylococcus
aureus (1, 2).
Szczepy Staphylococcus aureus posiadaj biakowy
receptor zdolny do wizania z fibrynogenem. Receptor ten
wykrywa si u 96% szczepów pochodzcych od ludzi (3)
i w wikszoci innych biotypów. Niektóre szczepy
meticylino-oporne nie wytwarzaj clumping factor (4).
Biako A wystpuje na powierzchni wikszoci szczepów
Staphylococcus aureus. Wykazuje ono powinowactwo do
fragmentu Fc wikszoci izotypów immunoglobulin
klasy G (IgG). Biako A jest wytwarzane na wszystkich
podoach, ale w mniejszej iloci na pytkach z agarem
krwawym. Wystpuje ono u okoo 90% szczepów (5). Na
powierzchni Staphylococcus aureus obecne s róne
biaka lub glikoproteiny i kwas tejchojowy. Ich
specyficzno antygenowa bardzo si róni (1).
Test SLIDEX Staph-Kit suy do identyfikacji szczepów
Staphylococcus aureus po wyhodowaniu na podoach.
ZASADA DZIAANIA
Odczynnik SLIDEX Staph-Kit zawiera:
- stabilizowane krwinki czerwone (owcze), uczulone
fibrynogenem, które aglutynuj, jeli szczep
Staphylococcus aureus wytwarza clumping factor.
- czsteczki lateksu, uczulone przeciwciaami
monoklonalnymi IgG, które aglutynuj, jeli na
powierzchni szczepu Staphylococcus aureus
wystpuje biako A i/lub biaka antygenowe.
ZAWARTO ZESTAWU (50 OZNACZE)
R1
S. aureus (H / L)
1 x 1.7 ml
Butelka z
kroplomierzem **
z czerwon
zakrtk
R2
S. aureus (H / LC)
1 x 1.7 ml
Butelka z
kroplomierzem **
z bia zakrtk
1 instrukcja
Odczynnik do wykrywania
Staphylococcus aureus
(gotowy do uycia, przechowywa w pozycji
pionowej)
Krwinki czerwone (owcze) uczulone ludzkim
fibrynogenem* i czsteczki lateksu uczulone
przeciwciaami monoklonalnymi anty-
Staphylococcus aureus (mysie)
(0.13 g/l mertiolat sodu + 1 g/l azydek sodu)
Kontrola ujemna
(gotowy do uycia, przechowywa w pozycji
pionowej)
Nieuczulone krwinki czerwone (owcze)
i czasteczki lateksu
(0.13 g/l mertiolat sodu + 1 g/l azydek sodu)
* Produkt ten badano z wynikiem negatywnym
w kierunku antygenu HBs, przeciwcia anty HIV1,
HIV2 i HCV. Jednake adna istniejca metoda nie
moe cakowicie zagwarantowa ich nieobecnoci,
dlatego naley go traktowa jako potencjalnie
zakany. Z tego powodu, podczas pracy powinno
si stosowa zwyke procedury bezpieczestwa.
** 1 kropla = 0.03 ml
Przed uyciem dokadnie wymiesza.
WYPOSAENIE WYMAGANE NIE NALECE DO
ZESTAWU
Jednorazowe karty lub czyste szkieka podstawowe
Plastikowe ezy lub paeczki do mieszania
Stoper
RODKI OSTRONOCI
Wycznie do diagnostyki in vitro.
Do wykorzystania wycznie przez profesjonalistów.
Produkty zawieraj materiay pochodzenia
ludzkiego. adna znana metoda badawcza nie
gwarantuje cakowicie nieobecnoci czynników
patogennych. Dlatego produkty te naley traktowa
jako potencjalnie zakane i obchodzi si z nimi
stosujc rodki bezpieczestwa; ( patrz “Laboratory
biosafety manual” – WHO – Geneva – ostatnie
wydanie ).
Produkt zawiera materiay pochodzenia zwierzcego.
wiadectwo pochodzenia i/lub stanu sanitarnego
zwierzt nie gwarantuje w peni nieobecnoci czynników
chorobotwórczych. Dlatego naley obchodzi si z nim
zgodnie z zasadami postpowania z materiaem
potencjalnie zakanym (nie spoywa i nie wdycha).
Wszystkie próbki, podoa mikrobiologiczne i hodowle
powinny by traktowane odpowiednio. Naley stosowa
techniki aseptyczne i zwyke procedury obowizujce
przy pracy ze szczepami bakteryjnymi. Stosownie do
"CLSI/NCCLS M29-A, Protection of Laboratory Workers
from Occupationally Acquired Infections, Approved
Guideline – Current Revision". Dodatkowe rodki
ostronoci zawarte w "Biosafety in Microbiological and
Biomedical Laboratories - CDC/NIH – Ostatnie wydanie"
bioMérieux SA Polski - 1

SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - pl - 2006/12
lub regulowane przepisami waciwymi dla
poszczególnych pastw.
Nie uywa odczynników z przekroczon dat wanoci
podan na opakowaniu.
Nie dopuszcza do kontaktu odczynników ze skór,
oczami lub ubraniem.
Nie zamienia i nie miesza odczynników z rónych
serii.
Nie pipetowa odczynników ustami.
Nie uywa metalowych ez do wykonania testu
aglutynacji lateksowej.
Nie uywa powtórnie jednorazowych kart.
Odczynniki zawieraj konserwant (azydek sodu).
Azydek sodu moe reagowa z oowiem i miedzi
wytwarzajc silnie wybuchowe sole metali. Aby
waciwie usun odczynniki, naley spuka je du
iloci wody, w celu zapobieenia gromadzeniu si
azydku.
W interpretacji wyników testu naley wzi pod uwag
histori choroby pacjenta, miejsce pobrania materiau,
makro- i mikroskopow morfologi oraz jeli bdzie
konieczne, wyniki innych przeprowadzonych testów.
PRZECHOWYWANIE
Wszystkie odczynniki przechowywa w 2-8°C.
Nie zamraa odczynników.
Jeli przypadkowo odczynniki ulegn zamroeniu, nie
naley ich dalej uywa.
Odczynniki przechowywane zgodnie z zaleceniami s
stabilne do koca daty wanoci podanej na etykiecie
opakowania.
MATERIA DO BADA (pobieranie i opracowanie)
Materia badany mona hodowa na podoach
wybiórczych (agar Chapmana, Baird-Parkera, agar
z telurynem i glicyn) lub niewybiórczych [(agar Columbia
z krwi barani (5%), agar tryptozowo-sojowy z lub bez
krwi baraniej (5%), agar Mueller-Hintona z lub bez krwi
baraniej, agar CLED, agar BCP, agar CPS ID]. Róna
moe by ocena testu w zalenoci od rodzaju uytego
podoa.
Przeprowadzona wewntrzna ocena na 191 szczepach
S. aureus (MRSA i MSSA) oraz 89 szczepach innych ni
S.aureus wykazaa tak sam czuo niezalenie od
podoa (patrz tabela poniej). Badania specyficznoci nie
wykazay równie znamiennych statystycznie rónic
zalenych od uytego podoa (patrz tabela
poniej).Jednake zaleca si uywanie nastpujcych
podó: agar Columbia z krwi, Columbia CNA + krew,
TSA, TSA + krew, CPS i Baird Parker.
Agar krwawy Columbia
Columbia CNA + krew
TSA
TSA + krew
CPS
Baird-Parker
Podoe Czuo Specyficzno
Mueller-Hinton
Mueller-Hinton + krew
Agar z telurynem i glicyn
BCP
CLED
94.2% 89.5%
94.2% 88.4%
Agar Chapmana 94.2 % 87.2 %
Po 18-24 godzinach inkubacji w 33-37°C, podejrzane
kolonie podda ocenie metodami klasycznymi
(barwienie metod Grama, morfologia i test na
katalaz), aby potwierdzi ich przynaleno do
gronkowców.
SPOSÓB WYKONANIA
1. Przed uyciem doprowadzi odczynniki do
temperatury pokojowej (18-25°C).
2. Wymiesza dokadnie odczynniki. Usun pcherzyki
z kroplomierza.
3. Na jednorazow kart lub czyste szkieko
podstawowe, nanie:
-1 kropl R1 (odczynnik do wykrywania
Staphylococcus aureus);
-1 kropl R2 (ujemna kontrola).
Nakrapiajc odczynnik trzyma butelk w pozycji
pionowej.
4. Do kadej kropli doda ostronie 1-2 podejrzanych
kolonii o redniej wielkoci z agaru niewybiórczego lub
3-6 bardzo maych kolonii z podoa wybiórczego (np.
agar Champana). Miesza dokadnie ez
bakteriologiczn lub pipet pasteurowask przez
10 sekund.
5. Przez 20 sekund delikatnie obraca kart i odczyta
reakcj w normalnym wietle, bez uywania szka
powikszajcego.
ODCZYT I INTERPRETACJA
Wynik dodatni to aglutynacja z odczynnikiem R1 po 30
sekundach (czas przeznaczony na wymieszanie kolonii
i odczynnika oraz obracania kart) uczulonych krwinek
czerwonych (kolor czerwony), czsteczek lateksu (kolor
biay), lub obu jednoczenie (kolor czerwonopomaraczowy).
Wynik ujemny to brak aglutynacji z odczynnikami R1
i R2.
Test nie do zinterpretowania jeli wystpi aglutynacja
z odczynnikiem kontrolnym (R2).
Aglutynacja uczulonych krwinek czerwonych wskazuje
na obecno clumping factor.
Aglutynacja uczulonych czsteczek lateksu wskazuje na
obecno biaka A lub specyficznych antygenów,
przeciwko którym s skierowane przeciwciaa
monoklonalne.
W przypadku bardzo sabej aglutynacji z odczynnikiem
do wykrywania Staphylococcus aureus, lub jeli
zachodzi aglutynacja z odczynnikiem kontrolnym, lub
powstan grudki, dalsz identyfikacj szczepu naley
przeprowadzi testem na koagulaz probówkow lub
testami biochemicznymi.
KONTROLA JAKOCI
Zawsze przy otwieraniu nowego zestawu, naley
przeprowadza kontrol jakoci, uywajc nastpujcych
szczepów:
Zalecane
Krwinki
czerwone
Lateks
szczepy wzorcowe R1 R2 R1 R2
S. aureus ATCC ® 25923 + - - -
S. epidermidis ATCC ® 14990 - - - -
S. aureus ATCC ® 51153 - - + -
Postpowa zgodnie z paragrafami „Sposób wykonania”
i „Odczyt i interpretacja” uywajc kolonii szczepów
wymienionych powyej. Szczepy wzorcowe naley
hodowa na podoach rutynowo stosowanych
w laboratorium.
bioMérieux SA Polski - 2

SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - pl - 2006/12
Mona spodziewa si, e odczynnik utraci aktywno
jeli:
- nie wystpuje aglutynacja odczynnika R1 ze znanym
szczepem Staphylococcus aureus, który uywa si
za wzorcowy dla wyniku dodatniego;
- wystpuje aglutynacja odczynnika R1 ze znanym
szczepem Staphylococcus epidermidis, który uywa
si za wzorcowy dla wyniku ujemnego;
- wystpuje autoaglutynacja odczynników w butelce;
- odczynniki s zanieczyszczone, shemolizowane, lub
wyschnite.
Uwaga:
Obowizkiem uytkownika jest prowadzenie kontroli
jakoci zgodnie z lokalnymi przepisami.
OGRANICZENIA TESTU
Niektóre szczepy s trudne do zawieszenia i mog
wykazywa z odczynnikiem obecno wókienek lub
grudek. Nie powinno si myli tego z prawdziw
aglutynacj. Pomimo wszystko, prawdziwa aglutynacja
moe by widoczna pomidzy grudkami.
Wyniki faszywie ujemne mog si zdarzy, jeli:
- do testu uyje si niewystarczajcej liczby kolonii.
W tym przypadku naley namnoy izolat
i przeprowadzi test jeszcze raz z odpowiednim
inokulum;
- szczep nie wytwarza clumping factor, biaka A (agar
krwawy);
- szczep nie wytwarza specyficznych antygenów,
przeciwko którym s skierowane przeciwciaa
monoklonalne.
W takiej sytuacji, naley wykona inne testy (6).
Moliwe jest zaobserwowanie pozytywnych reakcji ze
szczepami innych gatunków Staphylococcus, które
posiadaj clumping factor i/lub koagulaz:
S. schleiferi, S. lugdunensis, S. intermedius, S. delphini,
S. hyicus (1, 7).
Faszywie pozytywne reakcje mog zaj z niektórymi
szczepami paciorkowców (szczególnie grup A, C i G),
które posiadaj receptory dla immunoglobulin (8)
i fibrynogenu (9).
Reakcje nie do zinterpretowania s obserwowane
z niektórymi szczepami enterokoków i mikrokoków.
Nie powinno si uywa SLIDEX ® Staph-Kit
bezporednio do bada hodowli krwi. Mona otrzyma
faszywe wyniki spowodowane oddziaywaniem
fibrynogenu i/lub IgG obecnych we krwi.
OCENA TESTU
Ocen odczynników przeprowadzono przy uyciu
wieych izolatów szpitalnych i szczepów zamroonych
w kilku szpitalach. Wyniki bada wieloorodkowych
zostay opublikowane (10).
Identyfikacj wszystkich szczepów Staphylococcus
potwierdzono barwieniem metod Grama, testem na
katalaz, testem probówkowym na koagulaz,
a wtpliwoci potwierdzono metodami biochemicznymi.
Zbadano wraliwo wszystkich szczepów na meticylin.
Dokonujc oceny przebadano 940 szczepy S. aureus
i 441 innych gronkowców. Wyniki otrzymane w tecie
SLIDEX Staph-Kit porównano równie z otrzymanymi przy
uyciu dwóch innych odczynników dostpnych w handlu.
SLIDEX Staph-Kit wykazywa wysz czuo dla
szczepów meticylino-opornych (wyniki nie do
zinterpretowania nie byy brane pod uwag).
Czuo wynosia 95.4% dla szczepów MRSA i 100% dla
szczepów MSSA:
Tylko S. aureus
+ – 95%
Przedzia ufnoci
MRSA 523 25 93.2% - 97.0%
MSSA 392 0 99.0% - 100%
Ogóem S. aureus + i szczepy inne ni S. aureus
SLIDEX Staph-
Kit
Potwierdzona identyfikacja
S. aureus
+ –
+ 913 5
– 25 424
Nie do
zinterpretowania
2 12
- CZUO: 97.3 % (913/938)
z 95% w przedziale ufnoci: 96.0% - 98.3%
- SPECYFICZNO: 98.8 % (424/429)
z 95% w przedziale ufnoci: 97.3% - 99.4%
POSTPOWANIE ZE ZUYTYMI TESTAMI
Odczynniki w zestawie zawieraj pochodne rtci.
Obowizkiem kadego laboratorium jest pozbywanie si
zuytych testów i wytworzonych cieków w zalenoci od
ich typu i stopnia zabezpieczenia laboratorium oraz
dezynfekowanie ich i usuwanie (zlecenie dezynfekcji
i usuwania) zgodnie z zatwierdzonymi procedurami.
PIMIENNICTWO
1. FLEURETTE J. - Staphylocoques et microcoques in L. LE
MINOR,
M. VERON, Bactériologie médicale, 2ème édition, 1990,
Flammarion.
2. FLANDROIS J.P., CARRET G. - Study of the staphylococcal
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491.
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SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - pl - 2006/12
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