Notice Réalisation d'une PCR - Sordalab

Attention : vérifier que le volume final est de 80µl après ajout. Il est possible que de l’eau se
soit évaporée dans le transport sans modifier la quantité de matériel dans l’échantillon. Si le
volume contenu dans le tube est inférieur à 80µl, compléter à nouveau avec de l’eau stérile
pour ajuster ce volume.
- Homogénéiser en tapotant le tube après l’avoir refermé.
- Centrifuger rapidement les tubes afin de faire retomber tout le liquide dans le fond du tube.
Si vous ne possédez pas de centrifugeuse, secouer d’un seul mouvement sec, de haut en bas,
les tubes un à un.
5) Préparation des réactifs de PCR contenus dans le sachet AE :
Le mélange de tous les réactifs en vu de la réaction de PCR est à effectuer au moment du TP.
Seules les dilutions de chacun des réactifs peuvent être préparées à l’avance.
ATTENTION : les tubes d’amorces de PCR et d’ADN de phage lambda des sachets AD et AE n’ont
pas les mêmes concentrations, il faut donc prendre soin de les utiliser pour leurs usages
respectifs afin d’obtenir des résultats dans le cas du dépôt sur gel et de la réaction de PCR.
- Préparer les réactifs de PCR en diluant avec de l’eau stérile selon le tableau suivant :
Volume initial Volume d’eau à Volume final
ajouter
100 µl 100 µl 200 µl
Tampon de réaction
100 µl 100 µl 200 µl
MgCl2
10 µl 40 µl 50 µl
Amorces de PCR
25 µl 225 µl 250 µl
Desoxyribonucléotides
10 µl NE PAS DILUER 10µl
Taq polymérase
10 µl 30 µl 40 µl
ADN génomique de
phage lambda
Attention : vérifier que le volume final est exact après ajout. Il est possible que de l’eau se
soit évaporée dans le transport sans modifier la quantité de matériel dans l’échantillon. Si le
volume contenu dans le tube est inférieur au volume attendu, compléter à nouveau avec de
l’eau stérile pour ajuster ce volume.
- Homogénéiser en tapotant le tube après l’avoir refermé.
- Centrifuger rapidement les tubes afin de faire retomber tout le liquide dans le fond du tube.
Si vous ne possédez pas de centrifugeuse, secouer d’un seul mouvement sec, de haut en bas,
les tubes un à un.
Kit Principe de la PCR Page 6 sur 11
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