notice levure ade2 - sordalab

LEVURE SACCHAROMYCES CEREVISAE ADE2-
Réf :
℡ : 0033 (0)169922672
: 0033 (0)169922674
: www.sordalab.com
@ : sordalab@wanadoo.fr
A RECEPTION :
Boîte contenant des colonies rouges de la souche de levure Saccharomyces
cerevisae Ade2- à conserver à + 4°C couvercle vers le bas
1) Repiquage éventuel :
UTILISATION :
Sous 10-15 jours : Utiliser les colonies telles quelles (leur pigment rouge n’a
pas encore été dégradé)
Au-delà de 10 jours après réception : en conditions stériles, repiquer 5 jours
avant le TP plusieurs boîtes (on n’est jamais à l’abri d’un contaminant) pour
que le pigment rouge des colonies ainsi obtenues ne soit pas dégradé. Dans le
cas où des colonies blanches de plus grosse taille sont apparues, ne les utilisez
pas pour le repiquage.
2) Conditions nécessaires au rougissement des levures :
- La température idéale de culture de cette souche est de 28-30°C, si la
température n’est pas suffisamment élevée, les colonies resteront blanches mais
il ne faut pas dépasser 37°C.
- Le temps nécessaire au rougissement est de 4-5 jours, les colonies au départ
ne sont pas pigmentées, elles rougissent seulement en fin de croissance.
- Le rougissement est un phénomène aérobiose, il ne faut pas parafilmer les
boîtes en culture.
- Il est impératif de respecter les concentrations cellulaires indiquées dans
notre protocole lors de la préparation des suspensions de levures. Si il y a trop
de colonies sur la boîte, elles ne rougiront pas.
Levure Saccharomyces cerevisae Ade2- 1

3) Préparation de la suspension :
Le jour du Tp : la suspension de levures doit être préparée, en conditions
stériles, juste avant le TP de manière à ce que les cellules n’éclatent pas à cause
d’un séjour prolongé dans un milieu dont l’osmolarité n’est pas suffisante
(l’eau).
INFORMATIONS SUR LA SOUCHE ADE2- :
Cette mutation porte sur un gène (ade2) qui code pour une enzyme qui
intervient dans la chaîne de biosynthèse de l’adénine de la levure
Saccharomyces cerevisae. Les levures portant cette mutation sont incapables de
synthétiser elles-mêmes de l’adénine : elles ne peuvent pousser que sur un
milieu supplémenté en adénine.
Cette mutation possède un intérêt pédagogique : elle peut être « visualisée »
facilement car les colonies de levures mutées pour Ade2 présentent un
phénotype rouge et de petite taille dû sur milieu supplémenté en adénine.
Dans le cas où la supplémentation en adénine ne couvre pas tous les
besoins des levures, ces dernières vont vouloir « faire tourner » le cycle de
biosynthèse de l’adénine. Pour les levures Ade2-, il va y avoir accumulation
d’un intermédiaire (l’Amino Imidazole Ribotide) du cycle car l’enzyme
normalement codée par gène Ade2 est absente et la transformation de l’AIR
n’est alors pas possible. Dans ce cas là, en aérobie, le composé accumulé va
être oxydé en un pigment et va alors donner une coloration rouge aux colonies
de levures. De plus, comme ce pigment est toxique, les levures ne pousseront
pas aussi bien qu’en son absence : les colonies seront plus petites que celles
obtenues avec d’autres levures.
Attention, les mutations peuvent se produire naturellement car la pression de
sélection est importante. Par exemple, les levures Ade2- peuvent spontanément
muter du point de vue de la chaîne respiratoire de manière à ne plus oxyder le
composé de la chaîne de biosynthèse de l’adénine, l’AIR. Si ce composé n’est
plus oxydé, il n’y a pas d’action toxique ni de coloration et les colonies ainsi
obtenues sont blanches et plus grosses.
Le phénotype blanc n’est pas suffisant pour prouver une mutation. En effet, au
bout d’un certain temps de conservation à 4°C de colonies de levures sur boîte,
il est normal que le phénotype rouge disparaisse car le pigment se dégrade.
Levure Saccharomyces cerevisae Ade2- 2

Dans le cas où la quantité d’adénine est totalement suffisante pour la
croissance des levures, les colonies de Saccharomyces cerevisae n’ont pas la
nécessité de faire tourner le cycle de biosynthèse de l’adénine. Ces levures
pourront alors pousser sur milieu riche en adénine et les colonies ainsi formées
lors de l’étalement sur boîte de pétri seront de taille normale et de couleur
blanche.
Dans le cas d’un étalement sur un milieu non supplémenté en adénine, les
levures Ade2- ne pourront pas pousser.
L’exposition aux UV c peut entraîner une mutation pouvant rétablir le
phénotype classique : colonie de taille normale et blanche. Les mutations
possibles pouvant aboutir à ce phénotype sont de plusieurs types sur milieu
supplémenté en Adénine :
mutation de la chaîne respiratoire (voir le second paragraphe des
informations sur la souche)
soit
mutation de la chaîne de biosynthèse de l’adénine (donnant des
révertants)
soit
mutation rétablissant le gène ade2 et ainsi la fonctionnalité de l’enzyme
(donnant des révertants vrais). Ces levures poussent sur milieu pauvre.
Levure Saccharomyces cerevisae Ade2- 3