MILIEU DE BORELLI - Simoco Diagnostics

MILIEU DE BORELLI
MILIEU POUR LA SUBCULTURE ET L'IDENTIFICATION DES
DERMATOPHYTES
BUT DU TEST
Le milieu de BORELLI est recommandé pour la culture des dermatophytes à partir d’isolats obtenus sur
des milieux d’isolement tels que le milieu de Sabouraud, en vue de leur identification car il favorise la
sporulation et la pigmentation de ces champignons.
PRINCIPE
Les mycoses cutanées sont dues à des levures ou à des champignons filamenteux (dermatophytes)
ayant une affinité pour la kératine localisée au niveau de la couche cornée. Les lésions sont situées au
niveau de la peau et des phanères (ongles, cheveux, poils).
Le diagnostic biologique de ces mycoses comprend un examen direct et la mise en culture sur milieu de
Sabouraud des prélèvements qui sont constitués de squames, de cheveux, de poils ou d’ongles.
L'identification des dermatophytes est basée sur les caractères macroscopiques et microscopiques des
colonies. Certains caractères propres à un dermatophyte donné ne sont pas toujours retrouvés après
culture sur le milieu de Sabouraud. L'identification nécessite alors une subculture sur d'autres milieux tels
que le milieu de BORELLI.
Le milieu de BORELLI contient les éléments nécessaires au développement des dermatophytes et à
l’apparition des structures indispensables à leur identification.
COMPOSITION DU COFFRET
Le milieu de BORELLI est un milieu gélosé, conditionné en flacons ou en tubes, destiné après
régénération et distribution éventuelle dans des boites de Petri, à l’identification des dermatophytes.
- Milieu prêt à l’emploi 4 flacons de 50 mL (pour environ 20 tests) / flacons à répartir en boîtes de Petri
après régénération : référence borelfl20.
- Milieu prêt à l’emploi 18 tubes de 10 mL (pour environ 18 tests) / tubes à incliner ou à transvaser en
boîtes de Petri après régénération : référence borelt18.
MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI
- Boites de Petri de 5 cm de diamètre
- Bain-marie
- Cellophane adhésive transparente (Scotch ® )
- Microscope
- Lames porte-objets 76x26 mm
- Lamelles
- Colorant au bleu lactique
- Conteneur pour déchets contaminés
- En cas de versement accidentel de milieu, nettoyer le plan de travail à l’aide de papier absorbant et
rincer avec de l’eau. En cas de contamination de l'environnement par les échantillons de cultures,
nettoyer à l’aide d’eau de Javel et de papier absorbant.
- Les échantillons ainsi que le matériel et les produits contaminés doivent être éliminés dans un
conteneur pour déchets contaminés, selon les recommandations et la réglementation en vigueur.
- Ne pas utiliser les flacons ou les tubes dont le milieu présente une contamination par des
microorganismes.
PREPARATION DU MILIEU
- Dévisser légèrement le bouchon du flacon ou du tube et le placer dans un bain-marie et chauffer
jusqu'à dissolution complète de la gélose. La persistance en suspension de certains éléments du milieu
est normale.
- Enlever le flacon ou le tube du bain-marie, viser le bouchon
- Essuyer et agiter par retournement le flacon ou le tube pour bien homogénéiser le contenu.
- Répartir le contenu du flacon dans des boîtes de Petri. Exemple 10 mL pour une boîte de Petri de 5 cm
de diamètre. Après refroidissement et solidification de la gélose, les boîtes de Petri peuvent être
utilisées ou conservées entre +2°C et +8°C (sachet hermétique -.Parafilm®) pendant 2 semaines.
- Pour le milieu conditionné en tubes, après régénération incliner le tube (angle environ 20 degrés)
jusqu’à solidification de la gélose ou transvaser le contenu d’un tube dans une boîte de Petri de 5 cm
de diamètre.
UTILISATION
Pour la subculture enfoncer légèrement le prélèvement obtenu à partir d'une colonie dans la gélose de
BORELLI. La température et la durée d’incubation varient en fonction de l’espèce de dermatophytes à
identifier. En règle générale la boite de Petri est placée entre +20°C et +25°C pendant 1 à 4 semaines.
Lorsque la taille des colonies est jugée satisfaisante un examen microscopique d'un prélèvement
effectué sur une colonie sera réalisé pour l'identification de l'espèce. La technique dite du drapeau
réalisée avec un morceau de cellophane adhésive transparente est recommandée pour prélever le
dermatophyte qui sera coloré avec le bleu lactique.
L’identification du dermatophyte est basée sur l’aspect macroscopique des colonies (duveteuse,
poudreuse..), leur coloration (blanche, chamois…), leur pigmentation éventuelle (rouge, violet, jaune…)
et sur les caractères microscopiques (présence, aspect, forme, taille des microconidies et macroconidies
/ présence d’ornementations telles que les vrilles).
Pour l’identification des espèces, il est recommandé de se référer aux critères décrits dans les livres ou
les revues spécialisées.
PERFORMANCES
Une étude réalisée avec 43 isolats de dermatophytes a montré que le milieu de BORELLI permettait la
croissance de tous les isolats et l’apparition de caractères macroscopiques et microscopiques permettant
l'identification d'espèce pour 40 des 43 isolats, soit 93%.
STOCKAGE DES MILIEUX
Les milieux doivent être stockés entre + 12°C et +37°C jusqu'à la date de péremption indiquée sur le
coffret.
Ne pas congeler, ni laisser le milieu à une température supérieure à 37°C. Conserver à l'obscurité.
PRECAUTIONS D'UTILISATION
- Pour usage in vitro.
- Pour usage professionnel uniquement.
- Ne pas utiliser de milieu provenant de lots différents.
- Respecter les instructions de la notice d'utilisation.
Fabriqué et Distribué par / Manufactured and distributed by :
SR²B - 2, rue de la Bourse - 75002 PARIS / France
Nom. : 01Borel – AF2009/02

BORELLI MEDIUM
Tubed and bottled medium for subculture and identification of dermatophytes
INTENDED USE
BORELLI medium is a convenient method for identification of dermatophytes previously cultured on
media such as Sabouraud. Observation of sporulation and pigmentation during culture from isolated fungi
placed on BORELLI Medium allows identification of species.
PRINCIPLE
Cutaneous mycoses are caused by yeasts or filamentous fungi which have an affinity for keratin. Lesions
are confined to the superficial layer of the epidermis, hair, and nails.
Biological diagnosis of mycoses is based on direct examination and sample culture of skin, hair, nails on
Sabouraud medium.
The identification of dermatophytes is based on macroscopic and microscopic characteristics of colonies.
However, dermatophytes cultured on Sabouraud medium do not always show all the characteristics that
allow species identification. A secondary subculture on a medium such as BORELLI is required in these
cases
BORELLI medium contains all the elements necessary for the growth of dermatophytes and for the
development of those features that allow species identification.
KIT CONTENT
BORELLI medium is an agar medium packaged in tubes or bottles. After reconstitution the medium can
be poured onto Petri dishes. Reconstituted medium is suitable for identification of dermatophyte species.
- Prepared bottled medium, 4 bottles of 50 mL (about 20 tests). Reference borelfl20.
Prepared tubed medium, 18 tubes of 10 mL (about 18 tests). Reference borelt18.
MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDED
- 50 mm Petri dishes
- Water bath
- Scotch ®
- Microscope
- Microscope slides (76x26 mm)
- Coverslip
- Lactophenol Cotton blue
- Container for contaminated waste
STORAGE CONDITIONS
Stored at + 12°C to +37°C, medium is stable until the expiry date indicated on the box
Do not freeze. Keep the medium below +37°C. Do not keep in intense light.
WARNINGS AND PRECAUTIONS
- For in vitro diagnostic use.
- Only for professional use.
- Do not interchange medium from different kit lots.
- Follow the instructions for use.
- In case of accidental spill of reagent, clean the surface with absorbent paper, bleach and rinse with
water. In case of environmental contamination with culture samples clean with bleach and absorbent
paper.
- The samples, reagents as well as the contaminated materials and products must be disposed of in a
container for contaminated waste, according to the prevailing recommendations and regulations.
- Do not use tubed or bottled medium if they show evidence of microbial contamination.
MEDIUM PREPARATION
- Partially unscrew cap on tube or bottle and put it in a water bath. Media should be heated in the water
bath to ensure complete dissolution. Persistence of medium components in suspension is normal.
- Remove tube or bottle from the water bath, screw cap on tube or bottle.
- Dry tube or bottle and thoroughly homogenise the content of tube or bottle by reversal.
- Dispense bottled BORELLI medium into Petri dishes. Volume should be about 10 mL in a 50 mm dish.
Allow the medium to solidify before use. Prepared dishes, sealed in small plastic bags or wrapped with
transparent cellophane adhesive (eg Parafilm®) can be stored at +2°C to +8°C for up to 2 weeks.
- Tubed BORELLI medium reconstituted may be placed in an inclined (20°) position or dispensed to 50
mm Petri dishes. Allow to solidify before use.
TEST PROCEDURE
For the subculture push the sample obtained from a colony into BORELLI agar. Temperature and
incubation period vary from species to species.
It is advisable to incubate the cultures at +20°C to +25°C for 1 to 4 weeks. Microscopic examination of
sample for identification of species is performed when the size of colony is satisfactory.
The cellotape (Scotch® tape) flag and the lactophenol Cotton blue mount may be used for microscopic
observation of the colony morphology.
The identification of dermatophyte is based on macroscopic aspects of colonies (downy, powdery...),
colonies colour (white, fawn…), colonies pigmentation (red, wine-red, yellow-brown …) and on
microscopic characteristics (aspect, shape, morphology of the microconidia and/or macroconidia,
appendages such as spiral hyphae…).
Standards characteristics specified in literature must be used to identify species of dermatophytes.
PERFORMANCES
A study of 43 dermatophytes isolates has shown that BORELLI medium allows growth of all isolates.
Species identification of dermatophytes has been done on the basis of macroscopic and microscopic
characteristics. Identification of dermatophytes species was obtained for 40 dermatophytes isolates i.e.
93%.
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