atelier de formation de deux jours à l'utilisation des produits pour ...

ATELIER DE FORMATION DE DEUX JOURSÀ L’UTILISATION DES PRODUITS POURLUTTER CONTRE LA GRIPPE AVIAIREÉQUIPEMENT DE PROTECTION INDIVIDUELLE (EPI)DÉCONTAMINATIONPRÉLÈVEMENT D’ÉCHANTILLONS, LEUR EMBALLAGE ET EXPÉDITIONVERSION PRÉLIMINAIRE DU 13 DÉCEMBRE 2006

PRÉFACECet atelier de formation ensanté et sécurité de deuxjours présente les thèmessuivants: L’utilisation de l’équipementde protection individuelle (EPI) lorsquevous travaillez dans des endroits oùvous pourriez entrer en contact avecdes oiseaux ou des volailles que l’onsoupçonne d’être infectés par la grippeaviaire; l’utilisation correcte et sûre destrousses de décontamination pourdétruire le virus dans des localitésoù l’on a signalé une flambée de lamaladie; et des méthodes correctes etsûres pour effectuer le prélèvementd’échantillons, et aussi pour lesemballer avant de les expédier auxlaboratoires.Chaque thème est compris dans unModule d’apprentissage contenant desNotes pour le Formateur ainsique des Fiches Mémo Pour lesParticipants. Cette approche assurela formation future de formateurs,même si une séance de formationpour formateurs ‘formelle’ n’a pas eulieu. En fait, n’importe quel individu,pourvu qu’il veuille l’essayer et aiele temps de faire des préparations àl’avance, peut diriger une séance deformation. Les Fiches Mémo pourles Participants ont été élaborées demanière à faciliter que les participantsdans l’atelier puissent emporter chezeux un ensemble des matériaux soitpour le partager ou pour l’examinerencore une fois plus tard.Ce Guide de Formation fait quelquessuppositions, parmi lesquelles sontincluses les suivantes:• Que la formation sera interactive etque l’on encouragera l’interactionparmi les participants• Que les participants aurontaccès aux produits pour ladécontamination; le prélèvementd’échantillons, leur emballage etexpédition; ainsi que l’équipementde protection individuelle fournispar l’USAID• Que l’EPI est aisément disponible etqu’il n’est pas difficile d’obtenir.• Que l’on effectuera un testd’ajustement des APR N-95• Qu’il ne sera pas difficile d’obtenir del’eauQuoique les modules d’apprentissagecomprennent quelques activités dontl’objectif est de donner l’opportunitéaux participants de se lever de leurssièges et marcher un peu, chaqueformateur (ou le personnel conduisantl’atelier de formation) devra exercerson jugement pour déterminer lafréquence avec laquelle les participantsauront besoin d’utiliser les toilettes,manger des repas, et ainsi de suite.Ordre du jour (modèle)Atelier de formation de deuxjours à l’utilisation des produitspour lutter contre la grippeaviaireVersion préliminaire, p. i

Version préliminaire, p. ii1er jour—Bienvenue et présentationsBut de la formation pendant ces deuxjours et ses objectifsActivité d’animation: Faites-vous uneimage de votre journéeModule d’apprentissage 1: Utilisation del’équipement de protection individuellefourni par l’USAIDActivité 1: Se familiariser avec leséléments contenus dans latrousse d’EPIActivité 2: Bien comprendre le but dechaque élémentActivité 3: Jeu: Apparier les énoncés-- Que sais-je à proposde l’appareil de protectionrespiratoire (APR) N-95?Activité 4: Test d’ajustement pour l’APRN-95Activité 5: Démonstration: Procédure àsuivre point par point pourmettre votre EPIActivité 6: Procédure à suivre pointpar point pour ôter et jetervotre EPIActivité 7: Études de cas:#1 Pourquoi faut-il jetertous ces trucs en bon état?Peut être que j’en auraibesoin un autre jour!#2 Je ne veux pas fairepeur aux gens ou causerde la panique quand ils meverront tout couvert dansmon équipement EPI.#3 Faut-il vraiment que jemette tout ça? Mais vousplaisantez!Clôture 1er jour2ème jour—Module d’apprentissage 2: Utilisationcorrecte et sûre des trousses dedécontaminationActivité 1: Qu’est-ce que ladécontamination?Activité 2: Trois raisons pourdécontaminer pendant uneflambée de la grippe aviaireActivité 3: Comment le virus peutsurvivreActivité 4: Se familiariser avec lesproduits chimiques quidésinfectentActivité 5: Les contenus de la troussede décontaminationActivité 6: Des concepts dont il faut serappeler lorsque l’on planifieune décontaminationActivité 7: Pre-activités, 1ère et 2èmephase de la décontaminationActivité 8: L’utilisation du désinfectantVirkon®Module d’apprentissage 3:Méthode propre pour effectuer leprélèvement des échantillons et pourles expédierActivité 1: Pourquoi est-il important deprélever et de soumettredes échantillons à des finsd’analyseActivité 2: Introduction au contenu dela trousse de laboratoireActivité 3: Comment prélever deséchantillons et effectuer destests de diagnostic rapidesur les oiseaux

Activité 4: Comment prélever deséchantillons et effectuer destests de diagnostic rapidesur les humainsActivité 5: Comment emballer etpréparer des échantillons envue du transport vers unlaboratoire du paysActivité 6: Techniques de mise auxrebutsÀ L’USAGE EXCLUSIFDU PERSONNEL DELABORATOIREModule d’apprentissage 4: Emballageet expédition d’échantillonsaux Laboratoires de RéférenceInternationaux suivant les directives del’AITAActivité 1: Le programme de formationAITA ou SAF-T-PACActivité 2: Préparation des étiquettesd’expédition et de ladocumentation pertinenteActivité 3: Des conseils pour sepréparer à passer l’examenpour obtenir le certificatd’expédition de l’AITAVersion préliminaire, p. 1

MODULE D’APPRENTISSAGE 1UTILISATION DES TROUSSES D’ÉQUIPEMENTDE PROTECTION INDIVIDUELLE (EPI)FOURNIES PAR L’USAIDNOTES POUR LE FORMATEURLe formateur prend laparole:Je voudrais vous souhaiter la bienvenueà notre atelier de formation, dont ladurée est de deux jours. Nous sommesravis que vous ayez pris ce temps endehors de vos bureaux pour apprendrel’utilisation correcte de l’équipement quivous aidera à mieux faire votre travail etvous maintiendra sûrs si l’on soupçonnequ’il y a une flambée de grippe aviaire.Si vous êtes ici, c’est parce que vousêtes considérés des chefs dans vosmétiers, alors, nous comptons sur vouspour apprendre toutes ces procéduressuffisamment bien pour être capablesde les relayer à autres collègues aveclesquels vous travaillerez dans le futur. Jevous remercie d’être venus!Vers la fin de cet atelier, nous vousdonnerons des copies des Modules deFormation que j’utiliserai aujourd’huiet demain. Vous pouvez emporterces matériaux avec vous quand vousretournerez à vos bureaux et les utiliserpour former autres collègues qui peuventse trouver dans situations où le virus dela grippe aviaire pourrait être présent.Commençons, donc, avec lesprésentations. Peut être chacun d’entrevous peut nous dire son nom, celui devotre organisation, et nous indiquerbrièvement, soit le rapport entre vosactivités et la grippe aviaire, ou bienpourquoi vous vous êtes décidé àparticiper à cette séance de formation.Note au formateur:Accordez assez de temps pour quetous les participants se présentent.Le formateur prend laparole:Comme vous voyez ici, j’ai affiché le butet les objectifs de notre atelier pour cesdeux jours au chevalet à feuilles mobiles(tableau noir). Repassons-les ensemble.Remarque au formateur:Affichez l’information ci-dessousau chevalet à feuilles mobiles ouau tableau noir, et lisez chacun desobjectifs à haute voix. Répondez àquestions posées par les participants(s’il y en a).ObjectifsQuand vous aurez achevé ces deuxjours de formation vous serez capablede:Vous servir de l’équipement deprotection individuelle• Définir qu’est-ce que l’équipementde protection individuelle (EPI) etson rapport à votre métier et à lagrippe aviaireVersion préliminaire, p. 2

• Lister ou donner 3 raisons pourl’utilisation de l’EPI• Identifier les éléments clé de votretrousse d’EPI fourni par l’USAID• Démontrer correctement l’ordredans lequel il faut mettre chaqueélément de l’EPI• Démontrer correctement l’ordredans lequel il faut ôter et jeterchaque élément de votre EPI.Mettre en pratique les méthodespropres pour effectuer unedécontamination• Définir correctement qu’est-ce quela décontamination• Lister ou donner 3 raisons pourlesquelles il est important d’effectuerune décontamination pendant uneflambée de la grippe aviaire• Nommer ou indiquer deux situationsoù le virus peut survivre• Identifier les éléments contenusdans la trousse de décontaminationfournie par l’USAID• Décrire au moins deux conceptsgénéraux dont on doit serappeler lorsque l’on planifie unedécontaminationEmployer les techniquescorrectes pour effectuer leprélèvement d’échantillons etleur analyse pour détecter lagrippe aviaire chez les animauxet les humains• Bien comprendre pourquoi il estimportant de prélever et expédierdes échantillons pour les analyser• Lister tous les éléments compris dansla trousse de laboratoire• Réaliser correctement une analysediagnostique rapide pour détecter lagrippe aviaire chez les oiseaux• Réaliser correctement une analysediagnostique rapide pour détecter lagrippe aviaire chez les humains• Bien comprendre comment emballeret préparer les échantillons pour lesexpédier à un laboratoire dans lepays mêmePour ceux qui forment partiedu personnel d’un laboratoire,bien connaître la marche àsuivre pour réaliser l’emballageet l’expédition des échantillonsaux laboratoires de référenceinternationaux• Prendre part au programme deformation de l’AITA ou SAF-T-PAC• Bien comprendre la démarchenécessaire pour préparercorrectement les étiquettesd’expédition et la documentationcorrespondante• Passer l’examen pour obtenir lecertificat d’expédition de l’AITARemarque au formateur:En toute probabilité il vous faudraexpliquer que seulement ceux quiforment partie du personnel d’unlaboratoire sont censées obtenir lacertification pour réaliser l’emballageet l’expédition des échantillonsaux laboratoires internationaux, lethème dont on parlera au dernierVersion préliminaire, p. 3

(quatrième) Module d’apprentissagede cet atelier de formation. Tous lesautres participants n’auront besoin quede comprendre la manière correctede prélever, analyser et préparerles échantillons pour les envoyer àdes laboratoires dans le pays même(Module d’apprentissage 3).Le formateur prend laparole:Comme vous voyez, nous avonsbeaucoup à accomplir lors de cesdeux jours, mais espérons que l’onpourra vous relayer cette informationd’une façon intéressante et que vousachèverez cet atelier ayant bien compriscomment utiliser tout cet équipement.Nous espérons aussi que vous serezcapable de diffuser ce que vous avezappris auprès de ceux qui travaillerontavec vous dans le futur lors de possiblesflambées de grippe aviaire. Vous pourrezemporter chez vous tous les FichesMémo pour le Participant, donc vousaurez des matériaux que vous pourrezcontinuer à repasser, et que vous pourrezpartager avec vos collègues et autrespersonnes travaillant avec vous lors depossibles flambées de grippe aviaire.Donc, ne vous faites pas souci, vousn’êtes pas censé mémoriser toute cetteinformation immédiatement!Activité d’animation: Faites-vous uneimage de voter journéeAlors, commençons! Lorsque l’oncommence la formation il est importantd’être capable d’imaginer ou penser auxsituations dans lesquelles nous pourrionsnous trouver après avoir achevé cetatelier. Alors, utilisons la description cidessouspour nous engager à penser ausujet de notre travail.Est-ce qu’il y a un volontaire pour la lireà haute voix?Remarque au formateur:Choisissez un volontaire. Le volontairelit à haute voix:Vous faites partie d’une équipe qui aété chargée de contrôler et surveillerune opération d’abattage chez uneferme dans une arrière-cour avecenviron 200 poulets. Depuis quelquesjours, certains de ces poulets ont eudes difficultés pour respirer et quelquessont morts. La grippe aviaire a étéconfirmée dans une ferme voisinedans la même localité. Cette ferme estdans une aire rurale, aux routes nonpavées, et les poulets flânent librement.Vous avez cinq travailleurs qui doiventêtre instruits pour réaliser l’abattage.En plus, le fermier qui s’occupe despoulets manifeste des symptômes quiressemblent aux signes cliniques dela grippe aviaire chez les humains. Lesmembres de sa famille sont là aussi, etils sont tous inquiétés.Le formateur prend laparole:Je vous remercie d’avoir lu ça. Continuezà penser à ce scénario pendantces deux jours lorsque l’on examinel’équipement de protection individuelle,et les procédures de décontamination,prélèvement d’échantillons et leurexpédition. Celle-ci est une des situationsdans lesquelles vous pourriez vous trouverVersion préliminaire, p. 4

s’il y avait une flambée de grippe aviairedans votre aire.Alors, continuons. Vous pouvez voirdans vos ordres du jour que ce matinnous allons commencer par examinerl’équipement de protection individuelle,ou «EPI», comme on l’appelle souvent.Donc, commençons avec l’Activité 1:Révision des contenus de la troussed’EPI.L’USAID vous a fourni des trousses EPIque vous utiliseriez lorsque vous travaillezavec des poulets –vifs, malades oumorts – ou avec des humains que l’onsoupçonne d’être infectés par la grippeaviaire. Ouvrons, donc, nos trousses.Remarque au formateur:Accordez assez de temps pour que lesparticipants ouvrent leurs trousses (engénéral il s’agit d’un sac en plastique) eten sortent tous les éléments.Le formateur prend laparole:Ok! Voyons ce qu’il y avait là dedans. Quipeut mentionner un élément contenudans la trousse?Remarque au formateur:Faites une liste au chevalet de feuillesmobiles ou au tableau noir de ce quementionnent les participants. Écoutezet puis écrivez leurs réponses. Veuillezvous assurer que vous listez tousles éléments qui apparaissent sur laliste dans Fiche Mémo pour leParticipant n o 8 – Les contenusde la trousse d’EPI.Vous allez utiliser la Fiche d’informationpour le Formateur dans les pagessuivantes pour vous assurer quevous discutez toute la informationpertinente à l’égard de l’ordre danslequel on doit mettre l’EPI, et puisl’ordre dans lequel on doit l’ôter etle jeter. Tout ceci est compris dansl’Activité 2: Bien comprendre lebut de chaque élément de l’EPI.Pour faciliter la compréhension desparticipants concernant la manièrecorrecte de mettre et d’ôter l’EPI, vouspourriez trouver un volontaire (oupeut être recruté quelqu’un qui est entrain de vous aider à la gestion de laséance) pour qu’il soit un «modèle»et fasse une démonstration de lafaçon correcte de mettre chacun deséléments pendant que vous décrivezleur utilisation. Ceci aide aux gens àsaisir la marche à suivre en la voyant aumême temps qu’ils en entendent parler.Fiche d’information pour leformateur: Les contenus de latrousse d’EPILe formateur prend laparole:En regardant notre liste au chevaletde feuilles mobiles on peut voir que latrousse contient beaucoup d’éléments.Il est important de nous souvenir quel’utilisation de tout l’équipement fourniconstitue pour vous la protection la pluseffective contre la grippe aviaire. L’activitésuivante revoit le but de chaque élémentdans la trousse.Version préliminaire, p. 5

Examinons encore une fois chaqueélément dans la liste au chevalet, enutilisant l’ordre que l’on doit suivre pourle mettre, puis pour l’ôter et, finalement,lorsque l’on se débarrasse de chaqueélément. Pour réaliser cette activité, vousallez vous servir des Fiches Mémopour le Participant n o 1 et n o 2.Avant de mettre votre EPI, il estimportant de désigner un endroit propreoù l’on puisse mettre l’équipement, depréférence à l’écart de tout ce qui peutêtre contaminé avec la grippe aviaire oud’autres virus. Essayez aussi de vous laverles mains avec du savon et de l’eau –s’ilssont disponibles – avant de commencer.Une autre chose dont il faut se souveniravant de mettre votre EPI, ce que vousdevriez ôter votre montre ainsi que tousvos autres bijoux et les placer dansvos poches ou dans un autre endroitsûr. Les montres sont souvent difficilesà désinfecter (et elles peuvent retenirdes particules virales). Les bijoux lissescomme les alliances sont plus faciles àdésinfecter et l’on n’a pas besoin de lesenlever.Souvenez-vous aussi que si vous alleztravailler dans une aire très chaude, ilvaudrait mieux enlever ces vêtementsdont vous n’avez pas besoin, commeça vous ne deviendrez surchauffé ettrop inconfortable lorsque vous portezl’équipement.Maintenant je voudrais inviter unvolontaire pour qu’il vienne auprès de moiet modèle les éléments de l’EPI pendantque j’explique comment les mettre defaçon sûre et correcte.Remarque au formateur:Obtenez un volontaire (soit à l’avanceou le jour même). Pendant quevous procédez à discuter la liste deséléments dans la trousse d’EPI, tenezd’abord chaque élément dans vosmains lorsque vous expliquez commentl’utiliser, et encouragez aux participantsà tenir et examiner chaque élémentlorsque vous en parlez. Ensuite, tendezleau volontaire pour qu’il le mette.Vous devriez assister au volontairepour vous assurer qu’il met tous leséléments correctement. Vous devriezaussi corriger les erreurs commissespar le volontaire (s’il y en a).Le formateur prend laparole:D’accord. On commence toujours avecla combinaison. La combinaisonest incluse dans votre trousse pourprotéger votre peau et/ou vos vêtementscontre l’infection ou la contaminationprovenant des matériaux ambiants quiont été en contact avec des crottes despoulets, de la poussière résultant descrottes des poulets, des fluides animauxcomme le sang, la salive, et le mucus.La combinaison réduit la probabilité depropager le virus de la grippe aviaire auxautres fermes ou bien de personne àpersonne à travers leurs vêtements.La combinaison a une fermeture éclairplacée à l’avant. Elle est fabriquée àpartir d’un matériel synthétique que l’onappelle Tyvek. Ce matériel résiste auxfluides, donc même si votre combinaisondevient souillée ou mouillé, elle continueraà vous protéger.Version préliminaire, p. 6

Votre combinaison aura des «pieds»(couvre-chaussures intégrées), donc vousdevrez l’enfiler en mettant d’abord lespieds. Vous devriez garder vos chaussureset vos vêtements sous la combinaison.• La combinaison sera le PREMIERélément que vous allez mettre.Les couvre-chaussures extérieuresdoivent être mises par dessus les«pieds» de votre combinaison. Ellesvous donneront une autre couche deprotection pour protéger vos chaussurescontre la contamination. La grippeaviaire est facilement propagée pardes chaussures contaminées, alors il estimportant de mettre autant de couchesde protection que possible entre le sol etvos pieds.• Vos couvre-chaussures extérieuresseront le DEUXIÈME élément quevous allez mettre.Les APR (appareils de protectionrespiratoire) vous empêchent d’inhalerle virus infectieux de la grippe aviaireà travers votre nez et vos poumons.Souvent on appelle les APR «masques»,mais sachez que ce qui est dans votretrousse n’est pas un masque. Nousallons parler beaucoup plus à propos desAPR aujourd’hui et demain.• L’APR sera le TROISIÈME élément quevous allez mettre.Naturellement, les lunettes deprotection, protègent vos yeux deséclaboussures et des liquides. Les lunettesfournies dans la trousse d’EPI sontréglables et devraient être ajustées pourqu’elles serrent bien le visage autour devous yeux. Les lunettes personnelles nesont pas un substitut des lunettes deprotection. Si vous portez des lunettespersonnelles, les lunettes de protectionpeuvent être mises par dessus voslunettes.• Les lunettes de protection seront leQUATRIÈME élément que vous allezmettre, après avoir mis votre APR.Une fois que votre APR et vos lunettessont en place, vous allez couvrir votre têteavec la cagoule de votre combinaison.Des tabliers sont fournis pour que vousles mettiez par dessus la combinaison.Vous les trouverez à l’intérieur d’un petitpaquet que vous allez ouvrir. Mettez letablier par dessus votre tête et nouez-lepar derrière.• Le tablier sera le CINQUIÈME élémentque vous allez mettre.Les gants, naturellement, protègent lesmains. Généralement ils sont fabriquésà partir de matériaux tels que le nitrile,le vinyle ou le latex. Votre troussecontient des gants non stériles en nitrile.Remarquez qu’il y a deux paires de gantsdans votre trousse. La paire blanche outransparente devra être mise d’abord, etl’autre paire (généralement d’une couleurdifférente) par dessus la première. Sipossible, tirez les bords de vos gants surles manchettes de votre combinaison.• Les deux paires de gants seront leSIXIÈME et SEPTIÈME élément quevous allez mettre.Est-ce qu’il y a des questions à proposdes éléments ou l’ordre de l’EPI avant decontinuer?Version préliminaire, p. 7

Remarque au formateur:Vérifiez s’il y a des questions etdonnez les réponses appropriées, puiscontinuez.Le formateur prend laparole:Nous allons prendre le temps pourpratiquer comment on doit mettre, ôteret jeter tout l’EPI. Mais maintenant,repassons les points pour ôterl’équipement.Avant de commencer la procédure pourôter votre EPI, vous devez trouver unendroit qui ne soit pas contaminé avecdu sang, de la poussière, des excrémentsou d’autres déchets. Ça pourrait être lemême endroit ou vous avez mis votreEPI.Dès que vous ayez trouvé un endroitpropre et sûr, vous pouvez commencerà vous débarrasser de votre EPI. Vouspouvez le faire en même temps que moien utilisant votre Fiche Mémo pourle Participant n o 2, où l’on décritla marche à suivre pour ôter et vousdébarrasser de votre EPI.Peut être vous vous souvenez que il ya quelques minutes, pendant que nousexaminions les contenus de la troussed’EPI, on a remarqué qu’elle contenaitaussi une lingette germicide et un sacdéchets rouge. Vous allez utiliser tous lesdeux lorsque vous vous débarrassez devotre EPI. Voyons quel est leur but.La lingette germicide vient à l’intérieurd’un sachet que vous allez ouvrir. D’abord,vous allez utiliser la lingette pour essuyervos gants extérieurs et puis pour essuyervos couvre-chaussures extérieurespour les désinfecter et pour réduire laprobabilité d’entrer en contact avec levirus pendant que vous ôtez votre EPI.Puisque tout l’EPI est jetable et ne doitpas être réutilisé, tous ces élémentsdoivent être mis dans votre sac déchetsinfectieux rouge dès que vous les ôtez.Souvenez vous que la lingette germicidene doit jamais être utilisé auprès desyeux.Voici l’ordre dans lequel on doit ôter etjeter l’équipement dans le sac déchetsinfectieux rouge:1 Après avoir essuyé les gants et lescouvre-chaussures extérieurs, jetez lalingette dans le sac déchets rouge.2 Ensuite, ôtez et jetez votre tablier...3 Puis, ôtez et jetez vos couvrechaussuresextérieures...4 Après, ôtez et jetez vos gantsextérieurs...5 Ensuite ouvrez la fermeture éclair devotre combinaison, roulez-la à l’enversjusqu’à vos pieds et sortez d’elle. Puis,jetez la combinaison dans le sacdéchets rouge...6 Puis, ôtez vos lunettes de protection enles tirant au dessus de votre tête. Vousdevez les tenir par la bande serre-tête.Jetez-les dans le sac déchets rouge...7 Ensuite, ôtez votre APR. Étirez l’attachesupérieure et puis l’attache inférieureau dessus de votre tête. Placez-le APRdans le sac déchets infectieux rouge...Version préliminaire, p. 8

8 Pour en finir, ôtez la seconde paire degants. Commencez avec une main etroulez le gant à l’envers, commençantau poignet vers les pointes de vosdoigts. Faites une petite balle avec lepremier gant (gardez-le dans votremain nue), et puis roulez l’autre encommençant au poignet, avec votremain déjà nue. Placez-les dans le sacdéchets infectieux rouge.9 Le sac déchets infectieux rouge doitêtre clos en faisant un nœud au bordou bien en le liant clos à l’aide d’uneficelle...10 Le sac doit être placé à l’endroitdésigné, pour qu’il soit ramassé etbrûlé ou bien enfoui.11 Pour en finir, lavez-vous les mains, lesavant-bras et la figure avec du savonet de l’eau!Le formateur prend laparole:Donc, voilà un survol très rapide del’équipement compris dans votre troussed’EPI fourni par l’USAID.Puisque notre tout dernier pas a étécelui de nous laver les mains, prenonsquelques minutes pour discuter commentet quand il faut vous laver les mains.Vous pouvez suivre mes explicationsà l’aide de la Fiche Mémo pour leParticipant n o 3 – La manièrecorrecte de se laver les mainsComment vous laver les mainscorrectement• Mouillez vos mains avec de l’eau etsavonnez-les. Utilisez de l’eau courantesi elle est disponible.• Frottez vos mains pour produire dela mousse et frictionnez toute leursurface.• Continuez à vous frotter les mainspendant 20 secondes.• Bien se rincer les mains sous de l’eaucourante.• Lavez-vous les avant-bras et la figureau savon et de l’eau, et puis rincezvousavec de l’eau.• Laissez vos mains se sécher à l’airlibre ou séchez-les avec une serviettepropre, si vous en avez une.Quand doit-on se laver les mainspendant l’utilisation de l’EPI?• Avant de mettre l’EPI• Avant de remettre vos gants ou votreAPR après avoir pris une pause-repos• Avant et après de changer votre APR• Après avoir ôtés vos gants et les restede votre EPI, et les avoir placés dans lesac déchets rouge• À chaque occasion que vos mainsnues sont entrées en contact avecdes animaux, de l’équipement ou dessurfaces potentiellement infectés.Avez-vous des questions sur la procédureadéquate pour se laver les mains avantque l’on continue?Remarque au formateur:Vérifiez s’il y a des questions à proposde la procédure correcte pour selaver les mains et donnez les réponsesappropriées, puis continuez avecl’Activité 3.Version préliminaire, p. 9

Le formateur prend laparole:Je vous ai dit il y a une minute que nousallions parler un peu plus à propos desAPR N-95 compris dans votre trousse,alors, nous ferons justement ça avecl’Activité n o 3.Activité 3: Jeu: Apparier lesénoncés—Que sais-je à proposde l’appareil de protectionrespiratoire (APR) N-95?Remarque au formateur:Cette activité (tard dans le matin)est censée donner l’occasion auxparticipants de se lever de leurs sièges,prendre une petite pause-repos, etavoir l’opportunité de converserles uns avec les autres pendantqu’ils apprennent un peu plus surl’importance de porter un APR.Le formateur prend laparole:Le APR compris dans votre trousse est unmodèle N-95 qui filtre les particulesinfectieuses dans l’air. Il y a certaineschoses qu’il faut savoir à propos de cetAPR. Mais, plutôt que rester ici deboutà vous raconter ce je sais à propos decet APR, nous allons jouer à essayerd’apparier quelques énoncés.Chacun de vous va recevoir une feuillede papier. La moitié parmi vous recevraune feuille contenant un énoncé avecun espace vide là où il manque un motou une phrase. Les autres recevront unefeuille contenant un mot ou une phrase– ce qui manque aux énonces.Une fois que vous aurez reçu vos feuilles,vous allez vous mettre debout. Ensuite,vous allez prendre quelques minutes pourconverser avec vos collègues, vous allezvérifier ce qu’il y a dans les feuilles dechacun, et vous allez essayer de trouvervotre «moitié» à vous. Quand vous aureztrouvé la personne dont la feuille contientle complément de la vôtre, ayez la bontéde rester ensemble et levez vos mains.Remarque au formateur:Donnez une feuille à chaqueparticipant, et assurez vous dedistribuer la compagne de chacune desfeuilles que vous utilisez. (Vous devezcalculer le nombre de feuilles qu’ilvous faudra et les mélanger pour quece ne soit pas évident quelles feuillesappartiennent ensemble). Consultezl’Annexe A à la fin du Moduled’apprentissage 1 pour descopies des énonces et leurs motscorrespondants.Surveillez ce que font les participants,et assistez-les seulement si voustrouvez qu’ils sont vraiment confonduset ne comprennent ce qu’ils doiventfaire. Une fois que tous aient trouvéleur «moitié», continuez.Le formateur prend laparole:Chaque couple nous lira son énoncé. Sivous avez composé un «fait» précis, vouspourrez l’afficher au mur et vous pourrezretourner à vos sièges. Si nous trouvonsde «faits» mélangés, nous vous aideronsà trouver votre vrai «moitié» avant de lesafficher au mur. Commençons avec cecouple.Version préliminaire, p. 10

Remarque au formateur:Faites que chaque couple lise l’énoncéqu’ils ont complété à haute voix.Vérifiez l’énoncé dans l’Annexe Apour vous assurer qu’il est correct.S’il est correct, soulignez-le dans votreliste pour tenir le compte des pairesde feuilles. Demandez à chaque coupled’afficher leur énoncé (ou de le collerau mur) et de reprendre leurs sièges.Si l’énoncé n’est pas correct, lisez lemot ou phrase correcte et trouvezle partenaire correct. Ensuite, vérifiezque les feuilles des deux personnesqui n’ont plus de partenaire ont desréponses qui s’adaptent correctement.S’ils ont une bonne réponse, invitez-lesà le lire et à l’afficher au mur, si ce n’estpas le cas, continuez avec un autrecouple.Une fois que toutes les réponses ontété affichées au mur, vous pouvezcontinuer.Le formateur prend laparole:On laissera ces réponses affichées aumur pour que vous puissiez les vérifierpendant le reste de la journée.• Est-ce que un de ces énoncés vous asurpris?• Qu’est-ce que vous saviez déjà?Remarque au formateur:Attendez à ce qu’un des participantsfasse un bref commentaire des choix.Permettez que quelques participantsmentionnent les énoncés qui lesont intéressés. Élucidez les soucisou malentendus que les participantspuissent avoir. Accentuez les objectifsde l’atelier. Soulignez et/ou mentionnezdes points que vous allez discuterplus tard dans l’atelier. Rassurez auxparticipants que certaines de cesinformations peuvent être nouvellespour certain d’entre eux et déjàconnues pour des autres. Ensuite,continuez avec l’Activité 4: Testd’ajustement pour l’APR N-95.Le formateur prend laparole:Maintenant que nous avons entenduparler un peu de l’APR N-95, apprenonscomment on peut en ajuster un à notrevisage. À ce moment, nous travailleronssur l’Activité 4 et nous travaillerons encouples.Activité 4: Test d’ajustementpour l’APR N-95Le formateur prend laparole:Chaque fois que vous mettez votreEPI, il est important de vous assurer dece que votre APR N-95 s’ajuste auxcontours individuels de votre visage. Iln’y a pas deux visages identiques, doncil est important que l’APR soit ajusté àvotre visage autant que possible. Danscette section nous allons apprendre deuxfaçons de tester l’ajustement de l’APR:1 Comment réaliser le testd’ajustement quand un testeurofficiel n’est pas disponible.Version préliminaire, p. 11

2 Comment réaliser le testd’ajustement quand un testeurofficiel est disponible.Il est aussi très important de serenseigner autant que possible à proposde l’APR N-95 avant de passer le testd’ajustement. Alors, repassons les faitsessentiels liés à l’utilisation de l’APR N-95.La première chose à savoir ce quepersonne ne porte l’APR pour s’amuser!Il n’est pas confortable et peut êtrequ’il nous fera avoir l’air un peut idiot,mais l’APR est très important parce qu’ilnous empêche d’inhaler des particulesdangereuses qui sont dans l’air. Dansle cas d’une flambée de grippe aviaire,l’APR N-95 protège l’utilisateur contrela poussière et d’autres particulessuspendues dans l’air, telles que lesexcréments de poulet contenant lagrippe aviaire. En bref, l’APR N-95protège vos poumons et votre vie!La procédure de vous assurer que votreAPR s’ajuste correctement à votrevisage est équivalente à celle de choisirla pointure correcte pour une nouvellepaire de chaussures. Si vous achetezdes chaussures qui sont trop petites outrop grandes, elles vont finir par vouscauser des ampoules où devenir trèsinconfortables. Dès que possible, qu’est-ceque vous allez faire avec ces chaussuresinconfortables? Vous allez les ôter, n’estcepas? Bien, ce sera la même histoireavec un APR-95 mal réglé. S’il n’est pasréglé correctement et qu’il ne s’ajustepas suffisamment bien pour que vousvous sentiez protégé, vous aurez peutêtre envie de l’enlever, même si vousêtes en train de travailler dans une airecontaminée.Alors, d’abord on va démontrer laprocédure pour mettre l’APR et l’ajuster ànotre visage avec l’assistance d’une autrepersonne. Nous travaillerons en couplesencore une fois.Remarque au formateur:Indiquez aux couples de se mettredebout, chacun des deux avec sonpropre APR N-95.Le formateur prend laparole:1 La première chose dont on doit sesouvenir ce que ce n’est pas vousà passer le test. Ceci est un testd’ajustement pour l’APR. Vous nepouvez pas «coller» ce test – soitl’APR s’ajuste à votre visage, ou il n’estpas la taille juste.2 Quand vous mettez l’APR, les deuxattaches doivent entourer le derrièrede votre tête. L’attache inférieuredoit être placée sous les oreillespour rejoindre la nuque et l’attachesupérieure doit être placée au-dessusdes oreilles, sur le derrière de la tête3 Vous pouvez vous aider les uns auxautres mettre l’APR et vous assurerque les attaches sont placées dansl’endroit juste.4 S’il y a un miroir à l’endroit où vousallez travailler, c’est une bonne idée del’utiliser pour bien voir comment l’APRs’ajuste à votre visage. L’APR N-95 aune pince nasale métallique au bordsupérieur. Des que vous avez agencéles attaches, serrez la pince gentimentpour que le métal s’accole à la racinede votre nez.Version préliminaire, p. 12

Essayons de le faire tous ensemblemaintenant.5 Ensuite, placez vos mains au longdes contours de l’APR. Repositionnezl’APR au besoin jusqu’à ce qu’il n’y aitaucune fuite d’air.6 Il est important de porter l’APRpendant quelques minutes avant decommencer vos activités de travail.Attendre quelques minutes vous aideraà vous habituer à l’APR et vous donnedu temps pour vous rendre compte s’ily a des problèmes avec l’ajustementou s’il est tellement inconfortablequ’il vous est impossible de le porter.L’APR ne devrait pas vous faire mal auvisage.Remarque au formateur:Assurez-vous que tout le monde a misl’APR sur leur visage, que les attachesont été ajustées et que tous ont vérifiéle contour des bords de l’APR pourdétecter s’il y a des fuites d’air.Le formateur prend laparole:Ensuite, nous allons essayer de parler ànotre partenaire maintenant que notreAPR est sur place.7 Essayez de vous parler les uns auxautres pendant que vous portez l’APRN-95. N’enlevez pas votre APR pourvous parler. Vous pouvez parler àtravers l’APR, même si votre voix peutavoir un son différent et pas si fort quedans des circonstances normales.Remarque au formateur:Accordez aux participants quelquesminutes pour qu’ils se parlent les unsaux autres.Le formateur prend laparole:Je vous prie de garder vos APR sur placependant la dernière partie de cettedémonstration.8 Il est toujours préférable qu’un testeurofficiel conduise le test d’ajustement.Mais dans le cas où un testeur n’estpas disponible, la plupart des individussont capables de tester leurs propresAPR en plaçant leurs mains par-dessusl’APR gentiment (sans l’écraser) et eninspirant et expirant tout lentement.Si vous percevez que l’air croisse lecentre de votre APR, ça c’est un bonsigne. S’il y a des fuites d’air autour dunez, du menton ou sur les joues, çaveut dire que l’ajustement n’est pasadéquat et que l’APR a besoin d’êtrerajusté.Continuez à travailler en paires etregardez-vous les uns aux autrespendant que vous essayez l’exercicedécrit ci-dessus. Une fois que chacun devous ait essayé cet exercice, vous pourrezôter votre APR.Maintenant, parlons de ce que vous avezressenti pendant ces exercices et, plusgénéralement, comment était la sensationde porter l’APR.Version préliminaire, p. 13

Remarque au formateur:Ne soyez pas surpris si lesparticipants vous disent que l’APRétait inconfortable, encombrant oumême étrange. Ce sont toutes desdescriptions justes des sensations quel’on peut éprouver si l’APR n’est pasajusté correctement. Il vaut mieuxreconnaître ces sentiments.Essayez de sonder plus d’informationsen posant les questions que voici:«Une fois que vous l’aviez portépendant quelques minutes, est-ce quevous ressentiez que vous vous étiezhabitué a l’APR?»«Est-ce que vous avez été capable decomprendre à votre partenaire quandil vous a parlé?»«Est-ce que vous avez ressenti quel’APR vous empêcherait d’inhaler desparticules nocives?»Assurez-vous de noter toutes lesréponses et commentaires au chevaletà feuilles mobiles ou au tableau noir etde les reconnaître, qu’ils soient positifsou négatifs. Puis, continuez au prochainpoint.Le formateur prend laparole:Je vous remercie d’avoir partagé vosimpressions de ce que vous avez ressentipendant que vous portiez l’APR. Je croisque plus nous saurons à propos de l’APRet pourquoi nous en avons besoin, plusnous nous habituerons à le porter nousmêmes et à encourager à nos collèguesà le porter aussi.Maintenant, nous allons voir encore unefois comment l’on doit mettre l’APR et ceque l’on ressent quand un testeur officielconduit un test d’ajustement pour nous.1 La première chose que le testeur ferasera de vous expliquer ce qu’impliquele test, pour que vous sachiez ce quevous pouvez attendre.2 Ensuite, le testeur vous aidera à mettregentiment une cagoule d’une couleurvive par-dessus de votre tête SANSAPR. Il s’agit d’un test pour assurer quevous être capable de sentir ou goûterune solution que l’on appelle Bitrexdans des concentrations assez basses.Il est important que l’on détermine sivous êtes capable de goûter le Bitrex(il y a des gens qui n’y parviennentpas) avant d’effectuer le test réel.La solution initiale est une version diluée(avec de l’eau) de celle que l’on utiliselors du test réel. Le testeur utilisera aussiun outil que l’on appelle un nébuliseur.Le nébuliseur est un petit bulbe(ressemblant un oignon) qui contientla solution. L’on serre ce bulbe toutgentiment en l’introduisant dans un troude la cagoule pour libérer de la solutiondans l’air à l’intérieur de la cagoule. Siaprès avoir serré le nébuliseur 30 fois leparticipant ne parvient pas à sentir ougoûter le Bitrex, le test doit être avorté etl’on devrait utiliser un autre type de testd’ajustement.Remarque au formateur:Lorsque vous en parlez, levez lacagoule et le nébuliseur pour que touspuissent les voir.Version préliminaire, p. 14

3 Une fois que l’on a conduit ce testinitial et que vous avez répondu quevous pouvez goûter le Bitrex,vous pourrez ôter la cagoule etvous devrez attendre quelquesminutes pour que le goût disparaissede votre bouche. Ensuite, l’oncommencera le test d’ajustementréel, pendant lequel vous allezporter votre APR.4 Une fois que vous avez mis votreAPR, le testeur placera la cagoulepar-dessus votre tête et l’abaisserajusqu’à vos épaules une deuxièmefois.Comme vous voyez, la cagoule a unepetite fenêtre, et donc celui qui laporte peut voir le testeur. Quelquesfois la cagoule arrive recouverte enpapier. Il suffit de déchirer le papierpour trouver la fenêtre. Il y a aussiun petit trou dans la fenêtre.5 Le testeur mettra une petite cuillèred’une substance appelée Bitrex,dans le nébuliseur. Le Bitrex, dontle goût est très amer, est gentimentnébulisé dans la cagoule pendantque l’on réalise les exercices décritsci-dessous. Le Bitrex est introduitdans la cagoule (environ chaque 30secondes) chaque fois que le testeurserre le nébuliseur. Si à un momentdonné vous pouvez sentir ou goûterle Bitrex, l’ajustement de votre APRn’est pas correct, et il devra êtrerajusté et le test doit être effectuéencore une fois.6 Même si le Bitrex a un goût assezmauvais, il est très sûr. 95% duBitrex consiste de l’eau; les autresingrédients dans Bitrex sont .168%de benzoate 5% de chlorure desodium.Remarque au formateur:Invitez un volontaire pour modeler lespoints ci-dessous. Faites-le mettre l’APRet la cagoule, et dites que vous (leformateur) jouerez le rôle de testeur.Conduisez la démonstration des pointsci-dessous pour le group entier, ensimulant de serrer le nébuliseur dansla cagoule. À ce point, il ne faut pasutiliser le Bitrex pour de vrai. Cetexercice permet aux participantsde mieux comprendre l’idée du testd’ajustement, sans éprouver un testd’ajustement réel.Le formateur prend laparole:D’accord, je vous remercie d’être notrevolontaire. Maintenant que vous avez misvotre APR et la cagoule, nous pouvonscommencer le test. Vous êtes prêt?Le volontaire ne doit pas parler pendantcet exercice à moins que le formateur luidemande de le faire.Alors, commençons avec...7 Respirez de façon normalependant 60 secondes. Restez dansune position debout normale, sansparler, et respirez normalement.Ensuite, nous allons essayer des...Version préliminaire, p. 15

8 Respirations profondes pendant60 secondes. Restez dans uneposition debout normale, respirez lenteet profondément, faites attention à nepas vous surventiler.Puis...9 Essayez de tourner la têted’un côté à l’autre pendant 60secondes. Restez debout, tournezla tête lentement d’un côté à l’autre.Arrêtez brièvement vos mouvements àchaque côté pour inspirer.Puis...10 Bougez la tête de haut en bascomme si vous étiez en traind’assentir à quelque chose.Faites ceci pendant 60 secondes.Debout, bougez la tête de haut enbas tout lentement. Inspirez lorsquevous regardez vers le plafond.Ensuite,...11 Parlez, (maintenant vous pouvezparler) récitez l’alphabet, soitau moins deux fois ou bienpendant 60 secondes (choisissezce qui vous prendra le plusde temps). Parlez à haute voixlentement et suffisamment fort pourque le testeur puisse vous entendreclairement.Puis...12 Courbez-vous pendant 60secondes. Courbez-vous à la taillecomme si vous vouliez vous toucherles orteils.Pour en finir, encore une fois...13 Respirez de façon normalependant 60 secondes. Restez dansune position debout normale, sansparler, et respirez normalement.Si vous complétez tous ces pas sansdétecter un goût amer dans votre bouche,votre APR a réussi le test d’ajustement etl’on considère qu’il vous va correctement.Naturellement, je ne me suis pas servi duBitrex; je voulais tout juste que vous vousfaisiez une idée de la mécanique du test.Remarque au formateur:S’il reste du temps, permettezque d’autres participants jouent lerôle de «volontaires» pour qu’ilsaient l’opportunité de faire testerl’ajustement de leurs APR. S’il n’y a pasassez de temps, vous pouvez continueravec l’exercice suivant.Le formateur prend laparole:Avant de continuer, il nous reste quelquespoints à discuter à propos du testd’ajustement.Si l’individu en train d’être testé détecte legoût amer du Bitrex, le test d’ajustementest avorté parce que ceci signale quel’APR ne s’ajuste pas correctement àson visage. Le testeur vous demanderad’attendre pendant 15 minutes, et puis,après que vous ayez remis votre APR, ilessaie de faire le test encore une fois.Si vous êtes désigné pour devenir untesteur officiel pour votre aire de travail,il est important que vous sachiez queles nébuliseurs et la cagoule doivent êtrenettoyés. Immédiatement après avoirVersion préliminaire, p. 16

conclu les tests, versez les solutions Bitrexque vous n’ayez pas utilisées dans leursbouteilles. Rincez les nébuliseurs à l’eaupour éviter les obstructions. Essuyezl’intérieur de la cagoule avec une toileou une serviette humide et enlevez lessédiments de Bitrex (s’ils y en restent).Il est aussi important de saisir que le portoptimal de l’APR N-95 n’est pas possiblepour tout le monde. Les gens possèdentdes visages et des têtes de taillesdiverses, et les barbes et les moustachespeuvent empêcher de bien ajuster l’APRau visage pour bien lutter contre le risqued’infiltration des particules du virus. Dansces cas, si votre test d’ajustement estraté et que vous n’arrivez pas à porterl’APR comme il le faut, vous devriez êtreengagé à vous occuper d’une tâche pourlaquelle on n’a pas besoin de porter unAPR N-95.Remarque au formateur:Pour mieux vous informer, la fichetechnique sur les matériaux de sûreté(Material Safety Data Sheet (MSDS)appartenant à la solution Bitrex n o 1et n o 2 pour des tests de sensitivité estannexée aux Modules d’apprentissage1 et 2.En plus des documents MSDS, il yexiste beaucoup de ressources surInternet pour apprendre plus à proposdu test d’ajustement des APR, tellesque celles chez l’U.S. OccupationalSafety and Health Administration.Voici la référence: http://www.osha.gov/pls/oshaweb/owadisp.show_document?p_table=STANDARDS&p_id=9780Activité 5 et Activité 6:Démonstration: Commentmettre, ôter et se débarrasser del’EPILe formateur prend laparole:Maintenant il vous faudra encore un foistrouver un partenaire et prendre destours pour mettre et pour enlever tousles éléments de la trousse d’EPI – dansl’ordre correct – pendant que votrepartenaire vous observe. Pour mieuxsuivre cette procédure vous pouvezutiliser encore un fois les Fiches Mémopour le Participants n o 1 et n o 2 oubien la fiche d’instructions pour l’EPI del’USAID que vous trouverez à l’AnnexeB.Remarque au formateur:Accordez du temps aux participantspour qu’ils trouvent un partenaire etpour que chacun prenne son tour àmettre et à enlever leur EPI, pendantque leur partenaire les observe etfait le compte rendu à l’aide desfiches d’instructions pour l’EPI dansl’Annexe B, ou bien avec les FichesMémo pour le Participants n o 1and n o 2.Si vous avez du charbon ou du cacaoen poudre disponibles, vous pourriezessayer de faire que les participantsen saupoudrent un peu sur leurs gantsainsi que sur les soles de leur couvrechaussuresavant d’ôter leurs EPI, pourles montrer comment les particules duvirus peuvent s’étaler sur le reste del’équipement.Version préliminaire, p. 17

Le formateur prend laparole:Maintenant vous voyez que vous avezune liste inventaire de tous les élémentscompris dans la trousse d’EPI. Repassezles contenus de votre trousse et assurezvousqu’elle contient tous les matériauxqui apparaissent dans l’inventaire.Remarque au formateur:Attendez à ce que les participantsrepassent le contenu de l’inventaire etidentifient les éléments correspondantsdans la trousse d’EPI.Le formateur prend laparole:Une autre chose dont il faut serappeler soit lorsque l’on facilite uneséance de formation, ou bien lorsquel’on surveille d’autres travailleurs sur lechamp, ce que les EPI arriveront dansdes colis, en général il y a aura 25trousses dans chaque colis. La plupartdes combinaisons seront taille «trèsgrand» (XL). Il est normale que lescombinaisons soient un peu trop grandes,mais si n’importe quel élément de votreéquipement est trop petit ça peut poserdes problèmes: Si votre combinaison ouvos couvre-chaussures sont trop étroites,elles peuvent se déchirer et exposer vosvêtements ou votre peau au virus. Descombinaisons trop petites peuvent aussilimiter et compliquer vos mouvementset vous empêcher de faire votre travailproprement.Si les matériaux son trop petits pourvous, vous devriez trouver d’autrestâches que vous pourriez accomplir quin’impliquent pas la nécessité de vousdéplacer dans des aires où il peut avoirune flambée du virus de la grippe aviaire.Donc, si l’équipement que nous vousavons fourni aujourd’hui est trop petitpour vous, il est possible que les EPI quevous recevrez au travail contiendront desmatériaux trop petits aussi. Dans ce cas,vous devriez contacter votre organisationpour que l’on essaie d’obtenir destrousses en tailles plus grandes pour vous.Ok, maintenant nous allons utiliser nosfiches avec les instructions pour mettreet ôter le EPI – ainsi que les FichesMémo pour le Participant n o 1 etn o 2 – pour suivre la démarche pourmettre l’EPI point par point. Il y a deuxcôtés dans la fiche d’instructions – leverso explique comment mettre l’EPI, etle dorso explique comment l’enlever.La procédure pour mettre l’EPI et pourl’enlever deviendra très naturelle pourvous puisque chaque fois que vousprendrez une pause pour aller auxtoilettes, pour fumer une cigarette, pourtéléphoner, vous devrez enlever votre EPIet le remplacer avec un tout nouveau. Jesais que cette directive peut sembler unpeu exagérée, mais croyez moi, elle a étémise en place pour vous maintenir toussûrs. Rappelez-vous que la grippe aviaireest une maladie grave.Encore une autre chose très importante– Je vous prie de me poser toutes lesquestions que vous voudrez pendant cetatelier. Il vaut mieux poser des questionsici, maintenant, que lorsque vous êtesdans les fermes à travailler avec despoulets ou des personnes qui peuventêtre infectés.Version préliminaire, p. 18

Remarque au formateur:Surveillez les paires lorsqu’ils mettentleurs EPI et corrigez leurs erreurs, sivous en détectez.Le formateur prend laparole:Vous avez fait un travail excellent decette pratique pour mettre, ôter et jetervotre EPI. Maintenant, travaillons surl’Activité 7, laquelle examine troisscénarios ou défis à l’utilisation de l’EPI.Commençons avec l’Étude de cas n o 1.Prenez quelques minutes pour le lire.Étude de cas n o 1: Un travailleurveut garder son EPIPourquoi dois-je me débarrasserde tous ces trucs en bon état?Je pourrais m’en servir un autrejour!On vous a appelé à une ferme pouraider dans l’abattage d’une voléemalade. Quand vous arrivez et vousrendez à l’endroit désigné pourobtenir votre trousse d’EPI, il y adéjà beaucoup d’autres travailleursen train de mettre leurs EPI. Pendantque vous commencez à mettrevotre équipement, vous entendez untravailleur qui dit:“Je trouve tous ces trucs incroyables! C’estun vrai gaspillage de ne les utiliser qu’unefois et les jeter après. Je crois que lorsqueje serai fini aujourd’hui je vais garderquelques pièces de cet équipement.Après tout, il est probable que j’en auraibesoin un autre jour.”Vous remarquez que quelques autrestravailleurs sont en train d’assentir à cequ’il dit. Vous savez très bien qu’il estimportant de se débarrasser de toutl’équipement après son utilisation etvous voulez dire quelque chose, maisvous n’êtes pas sûr comment vousdevez approcher le travailleur. Aprèstout, vous ne le connaissez pas et vousn’êtes pas originaire de son village(voisinage).Le formateur prend laparole:D’accord. Ici nous voyons que notre amise trouve dans une situation difficile. Ilpossède l’information correcte, mais ilne sait pas comment la partager demanière à ce qu’il puisse aider les autresa mieux décider ce qu’ils doivent faire.Si vous pouviez lui donner un conseil, quelui diriez-vous?Remarque au formateur:Notez toutes les réponses sur autableau noir ou au chevalet à feuillesmobiles, même si elles ne sont pastout à fait «correctes». Tenez comptedes réponses dont vous êtes sûrqu’elles sont incorrectes. Par exemple,si le conseil c’est tout simplementd’ignorer le travailleur et le laisser fairece qu’il voudra, alors puisque vousêtes le formateur il faudra que vousexpliquiez aux participants qu’ignorerle commentaire n’est pas la meilleuresolution et puis il faudra partager desmeilleures réponses avec eux.Version préliminaire, p. 19

Le formateur prend laparole:Bien, certains des ces réponses sontexcellentes, mais ne pensez-vous que ceserait ok de permettre aux travailleursd’emporter quelques lunettes chez eux iciet là? Quel est le danger dans cela? Vousallez utiliser les Fiches Mémo pourle Participant n o 4 and n o 5 pourrépondre à ma question.Note au formateur:Écoutez et affichez des réponses tellesque:• N’importe quel élément qu’ilsemportent chez eux pourrait êtrecontaminé.• Il est impossible de détectersi quelque chose est infectésimplement en la regardant.• Si vous permettez à un travailleurd’emporter une chose chez lui,vous lui donnez autorisationimplicite pour qu’il emporte chez luin’importe quoi, n’importe quand.• Le travailler doit être rassuré qu’il yaura toujours un nombre suffisant detrousses d’EPI, aux tailles correctes. Ilne doit pas se faire souci d’emporterdes matériaux chez lui et les garderpour «la prochaine fois».Le formateur prend laparole:Ok, vous avez tous fait du très bon travailavec la première Étude de cas. Voyonsune autre.Accordez aux participants 2-3 minutespour qu’ils lisent l’Étude de cas n o 2.Étude de cas n o 2: L’utilisation del’EPI causera de la paniqueCes vêtements ont l’airépouvantable. Les gens vont nousvoir dans ces «combinaisonspour astronautes» [ou «pourcosmonautes»] et ils vontpaniquer!On vous a appelé dans un villagepour aider au débarras des oiseauxmorts. Vous avez déjà fait ce travaildepuis quelques mois et vous doutezqu’il soit nécessaire le genre de tâchepour laquelle il faut mettre l’EPI. Enfait, vous n’aimez pas mettre l’EPI.Ça chauffe, et il est inconfortable, etvous avez remarqué que les gens auxvillages et fermes paniquent dès qu’ilsvous voient mettre votre combinaisonblanche que vous donne l’apparenced’un astronaute. Pourquoi causer del’inquiétude parmi les gens sans aucunmotif?Le formateur prend laparole:Ok. Voici une autre situation dans laquelleil y quelqu’un qui trouve une excusepour ne pas mettre son EPI. D’abord,examinons attentivement cette Étude decas. Combien de problèmes pouvez-vousidentifier dans cette Étude de cas?Remarque au formateur:Écoutez et affichez des réponses tellesque:Version préliminaire, p. 20

Manque de confort; douter qu’il soitvraiment nécessaire mettre l’EPI pourréaliser cette tâche, ne pas vouloir queles villageois, les voisins, les fermiers,et autres observateurs s’inquiètent oupaniquent; embarras causé pour devoirmettre des combinaisons blanches quivous donnent un air épouvantable.Le formateur prend laparole:Vous avez raison. Il y a beaucoup deproblèmes dans cette Étude de cas.Que pourrie vous dire ou faire pour cetravailleur pour qu’il change d’avis àpropos de l’utilisation de l’EPI? Utilisez lesFiches Mémo pour le Participantn o 4 et n o 5 pour justifier vos réponses.Remarque au formateur:Accordez aux participants assez detemps pour trouver quelques réponses.Écoutez et affichez des réponses tellesque:• Je lui dirais que, bien sûr, je suisd’accord avec lui: les combinaisonsEPI inquiètent les gens, mais ilss’inquièteraient et paniqueraientencore plus s’il devenait infecté parla grippe aviaire parce qu’il n’a pasmis son EPI.• Je lui suggérerais que, avant demettre l’EPI, l’on pourrait converserun peu avec les gens du voisinagequi peuvent être venus nousobserver, et leur expliquer quenous portons des EPI pour nousprotéger nous mêmes ainsi que lacommunauté, et que ce ne veut pasdire qu’ils devraient s’inquiéter ouqu’ils vont devenir infectés par lagrippe aviaire.• Je lui dirais qu’il pourrait mourir s’ildevenait infecté par la grippe aviaire.• Je lui dirais que moi aussi je crois quequelques éléments de l’équipementchauffent et ne sont pasconfortables. Mais je sais que mêmeça c’est mieux que l’alternative dene pas les utiliser: étaler la grippeaviaire partout.• Je lui dirais que je me fais des soucispour lui et lui prierais de mettre sonEPI même s’il est inconfortable ou illui cause de l’embarras.Le formateur prend laparole:Vous avez eu beaucoup de bons conseilspour ce travailleur. Maintenant, continuonsavec l’Étude de cas n o 3. Prenez quelquesminutes pour le lire.Étude de cas n o 3: Pourquoiutiliser l’EPI?Faut-il vraiment que je mettetout ça? Mais vous plaisantez!Un travailleur se présente pour réaliserle nettoyage d’une ferme avicoleoù l’on soupçonne une flambée dela grippe aviaire. La flambée n’a étéencore confirmée. Le travailleur aété formé à l’utilisation de l’EPI, maiscelle ci est sa première fois à mettrel’équipement. Il ouvre la trousse d’EPIfourni par l’USAID et n’arrive pas àcroire combien d’éléments sont làdedans. Mais au lieu d’être contentVersion préliminaire, p. 21

d’avoir l’EPI, il pense que l’équipementexagère le danger de la situation. Vousvous approchez de lui et lui demandezs’il a besoin de l’aide pour mettre sonéquipement, et il vous répond:«Je ne mettrai pas tout ceci pournettoyer une simple cour à poulets!Nous n’avons pas besoin de tout ceci.J’ai mes bottes à moi. Je peux mecouvrir le visage avec une écharpe oudu tissu. Finissons ce travail, et partons.Tous ces trucs ne sont qu’une pertede temps. Pourquoi est-ce que tout lemonde veut agir si dramatiquement?»Le formateur prend laparole:Nous pouvons utiliser notre FicheMémo pour le Participant n o 6:Pourquoi utiliser l’EPI? Pour aider cetravailleur. Qu’est-ce que vous lui diriezpour l’aider à choisir des options plussûres?Remarque au formateur:Écoutez et affichez des réponses tellesque:Je lui dirais que:• La plupart des cas d’infection pargrippe aviaire chez les humainsont eu lieu à partir du contact, enquelque manière, avec les pouletsinfectés ou avec des choses quiont été en contact avec les volaillesinfectées et lors que l’on se toucheaux yeux, au nez ou à la bouche.Voilà pourquoi les gants et lesmatériaux pour protéger le visagetels que les APR et les lunettes deprotection sont si importants.• Les déjections et les nids des volaillesappartenant à des volées infectéespar le virus de la grippe aviairepeuvent contaminer la poussièreet le sol, et causent des infectionsquand la poussière contaminée estinhalé à travers le nez et la bouche– voilà pourquoi le port de l’APR N-95 est vital.• Les mains/la peau, les vêtementsou les chaussures peuvent devenircontaminées avec le virus de lagrippe aviaire, soit directementà partir des volailles, soit à partirdes excréments/nids contaminés– étalant ainsi le virus vers desnouvelles aires. Au delà de protégercelui qui le porte, l’EPI protège aussiles gens, les animaux, et les fermesavec lesquels le travailleur entrera encontact dans un futur prochain.• The virus peut vivre dansl’environnement – en dehors d’unhôte infecté. Le virus peut survivredans les excréments, à températuresfraîches, pendant au moins troismois. Dans l’eau, le virus peutsurvivre jusqu’à quatre jours à 22oC et au delà de 30 jours à 0o C.Même s’il semble dramatique, il fauttoujours assumer que il ya du virusdans le fumier, les nids, le sol, lesplumes, la poussière et les partiesde poulet. Assumer la pire situationpeut nous motiver à mettre l’EPIpour réaliser toutes nos tâches, àchaque fois que nous les réalisons.• Dans des recherches sur la grippeaviaire on a trouvé qu’un seulgramme de fumier contaminé peutcontenir une quantité suffisanteVersion préliminaire, p. 22

de virus pour infecter 1 milliond’oiseaux. Un gramme n’a que lesmêmes dimensions qu’une agrafe debureau. Un seul travailleur portantdes chaussures ou des bottesinfectées avec de la poussière ou dufumier peut déclencher une énormeflambée.Clôture 1er jourLe formateur prend laparole:Vous avez tous travaillé très bienensemble aujourd’hui. Maintenantque nous savons plus à propos del’équipement de protection individuelle,nous dédierons notre temps demain àdiscuter les meilleures façons d’utiliserl’équipement de décontamination, etla manière sûre et efficace d’effectuerdes prélèvements d’échantillons chezles animaux et chez les humains etles procédures pour les emballer ceséchantillons et expédier aux laboratoires.Avant de partir aujourd’hui, je veux êtresûr de faire mention de quelques détailsadministratifs. D’abord, j’espère quevous ayez déjà rempli vos cordonnéessur notre formulaire d’inscription. Si vousn’avez pas écrit votre nom et votreinformation de contact sur ce papier,ayez la bonté de le faire maintenant,avant de partir. Ne vous faites souci–cette information ne sera pas distribuéeau grand public. Nous en avons besoin sinous avons de nouvelles informations, etaussi pour tenir le compte du nombre depersonnes –et les types de personnes–que nous avons formées.Vous devriez avoir aussi des formulairesd’évaluation dans vos ensembles dematériaux, vous pouvez les utiliser pournoter vos opinions à propos de cetatelier de formation. Cette informationfait possible continuer à améliorer cesséances de formation, et nous donneaussi les types de commentaires leplus utiles pour vous et vos collègues.Personne ne profitera si vous vousplaignez au sujet de l’atelier auprèsde vos amis la semaine prochaine.Vous devez nous indiquer les points àaméliorer, et bien sûr, ce que nous faisonscorrectement, afin que nous puissionscontinuer à le faire. Cela permettraaux gens qui suivront la formationdans l’avenir de profiter du meilleurenseignement possible.Il n’est pas nécessaire que vouscomplétiez les formulaires d’évaluationmaintenant. Vous pouvez commencerpar prendre quelques notes aujourd’huiet les finir après la séance de demain.Nous apprécions vos opinions, et vousremercions à l’avance de nous faireparvenir vos idées!Note au formateur:Circulez le formulaire d’inscription pourque les participants y écrivent leursnoms et leurs cordonnées, s’ils ne l’ontencore fait. Une copie de cette feuilleest disponible sous l’Annexe F à la findu Module d’apprentissage 3.Signalez aussi aux participantsl’emplacement des formulairesd’évaluation dans leurs ensembles dematériaux. Vous trouverez des copiesde ces formulaires sous Annexe E àla fin du Module d’apprentissage 3.Version préliminaire, p. 23

Assurez-vous d’en préparer assez decopies pour tous les participants avantde commencer l’atelier.Répondez aux questions que lesparticipants puissent vous poser àpropos de l’atelier, l’ordre du jourpour la deuxième séance, ainsi quetoute autre information spécifiqueliée à votre région ou à votreséance de formation, par exemple:comment obtenir du transport ou del’hébergement, où manger ou acheterde la nourriture, et ainsi de suite.Assurez vous de rappeler auxparticipants de l’heure à laquelle ilsdoivent revenir à la salle de formationle matin suivant.Version préliminaire, p. 24

FICHES MÉMO POUR LES PARTICIPANTSFiches Mémo pour lesParticipantsFiche Mémo pour le Participantn o 1 – Procédure à sept pas pourmettre l’EPIFiche Mémo pour le Participantn o 2 – Procédure à dix pas pour ôteret jeter l’EPIFiche Mémo pour le Participantn o 3 – Manière propre de se laver lesmainsAnnexesAnnexe A: Énoncés pour le jeu:«Apparier les énoncés» Fiche pourl’Activité 3 – APR N-95Annexe B: Pliant EPI et ListeInventaireAnnexe C: Material Safety DataSheet (MSDS) for Bitrex Fit SensitivitySolution #1 and Solution #2Fiche Mémo pour le Participantn o 4 – Des points importants à serappeler pendant l’utilisation destrousses d’EPI fournies par l’USAIDFiche Mémo pour le Participantn o 5 – Avantages et défis liés àl’utilisation de l’EPIFiche Mémo pour le Participantn o 6 – Pourquoi utiliser l’EPI?Fiche Mémo pour le Participantn o 7 – L’appareil de protectionrespiratoire (APR) N-95Fiche Mémo pour le Participantn o 8 – Les contenus de la trousse EPIVersion préliminaire, p. 25

Fiche Mémo pour le Participant n o 1Procédure à dix pas pour mettre l’EPIAvant de commencer à mettre votre EPI, il est important de désigner un endroit propreoù l’on puisse mettre l’équipement. Il est préférable que cet endroit soit bien à l’écart detoute chose qui puisse être contaminée par le virus de la grippe aviaire ou d’autres virus.Essayez aussi de vous laver les mains au savon et à l’eau –s’ils sont disponibles – avantde commencer, et enlevez montres ou d’autres bijoux non lisses comme les bracelets.1. CombinaisonD’abord, mettez la combinaison.Commencez par placer vos pies dansles «pieds» de la combinaison etenfilez-la. Fermez la fermeture éclairde la combinaison. Vous devez gardervos vêtements et vos chaussures sousvotre combinaison.3. APR2. Couvre-chaussuresLes couvre-chaussures sont ledeuxième élément à mettre. Ellesdoivent être placées par dessus les«pieds» de la combinaison, vousdonnant ainsi une autre couche deprotection contre la contaminationpour vos chaussures.Mettez l’APR de façon à ce qu’ilrecouvre le menton et le nez. Tirezde l’attache inférieure, mettez-la pardessus votre tête et placez-la autourde votre nuque, sous vos oreilles.Ensuite, tirez de l’attache supérieureet placez-la sur le dessus de la tête.Mettez les pointes des doigts surla pince nasale en métal au bordsupérieur de l’APR. En utilisant vosdeux mains, serrez la pince autourde la racine de votre nez et assurezvousque les bords latérales sont bienaccolés sur les joues et le nez.

5. TablierLes tabliers sont fournis pour êtremis par-dessus la combinaison. Ils setrouvent dans un petit sachet que vousallez ouvrir. Mettez le tablier par-dessusvotre tête et nouez-le par derrière.4. Lunettes de protectionLes lunettes sont ajustables et doiventêtre bien serrés par-dessus et autourde vos yeux. Si vous portez deslunettes personnelles, les lunettes deprotection peuvent être placées pardessusvos lunettes.

6. Gants intérieursMettez les gants intérieurs d’abord(en général ils seront blancs outransparents).7. Gants extérieursEn général, ils seront d’une couleurdifférente à celle des gants intérieurs etils peuvent être plus épais. Mettez-lespar dessus les gants intérieurs. Tirez lebord des gants par- dessus les manchesde votre combinaison pour recouvrirles poignets, si possible.

Fiche Mémo pour le Participant n o 2Procédure à dix pas pour ôter et jeter l’EPIAvant de commencer la procédure pour enlever votre EPI, vous devriez trouverune aire qui ne soit pas contaminée avec du sang, de la terre, des excréments oud’autres déchets.1. Ouvrez le sachet qui contient lalingette germicide et utilisez cellecid’abord pour essuyer vos gantsextérieurs et puis vos couvrechaussures.Jetez-la dans le sacdéchets infectieux rouge quand vousaurez terminé.

2. Enlevez votre tablier et jetez-le dansle sac infectieux rouge.4. Enlevez vos gants extérieurs et jetezlesdans le sac infectieux rouge.5. Ouvrez la fermeture éclair de votrecombinaison, et roulez celle-ci versvos pieds jusqu’à ce que elle soit àl’envers, puis sortez d’elle. Jetez lacombinaison dans le sac infectieuxrouge.3. Ôtez vos couvre-chaussures et jetezlesdans le sac infectieux rouge.

6. Enlevez vos lunettes de protectionen les tirant au dessus de votre tête.Vous devez les tenir par les attaches.Jetez-les dans le sac infectieux rouge.7. Enlevez votre APR. Tirez d’abordl’attache elastique supérieure et puisl’inférieure au dessus de votre tête.Placez l’APR dans le sac déchetsinfectieux rouge.8. Enlevez vos gants intérieurs.Commencez avec une mainet roulez le gant à l’envers,commençant au poignet vers lespointes de vos doigts. Faites unepetite balle avec le premier gant(gardez-le dans votre main nue), etpuis roulez l’autre en commençantau poignet, avec votre main déjànue. Placez-les dans le sac déchetsinfectieux rouge.

9. Fermez le sac déchets infectieuxrouge en faisant un nœud au bordou bien en le liant clos à l’aided’une ficelle.. Le sac doit être placéà un endroit désigné, pour qu’il soitramassé et brûlé ou bien enfoui.10. Lavez-vous les mains et les avantbrasà l’eau, avec du savon.

Fiche Mémo pour le Participant n o 3La manière correcte de se laver les mainsComment vous laver les mainscorrectement• Mouillez vos mains avec de l’eauet savonnez-les. Utilisez de l’eaucourante si elle est disponible.• Frottez vos mains pour produire dela mousse et frictionnez toute leursurface.• Continuez a vous frotter les mainspendant 20 secondes.• Bien se rincer les mains sous del’eau courante.• Lavez-vous les avant-bras et la figureau savon et de l’eau, et puis rincezvousavec de l’eau.Quand doit-on se laver les mainspendant l’utilisation de l’EPI?• Avant de mettre l’EPI• Avant de remettre vos gants ouvotre APR après avoir pris unepause-repos• Avant et après de changer votreAPR• Après avoir enlevé vos gants et lesreste de votre EPI, et les avoir placésdans le sac déchets rouge• À chaque occasion que vos mainsnues ont été en contact avec desanimaux, de l’équipement ou dessurfaces potentiellement infectés.• Laissez vos mains se sécher àl’air libre ou séchez-les avec uneserviette propre, si vous en avezune.

Fiche Mémo pour le Participant n o 4Des points importants à se rappeler pendant l’utilisationdes trousses d’EPI fournies par l’USAIDLe port de l’EPI• Tous les éléments inclus dans latrousse d’EPI sont jetables et à usageunique.• Aucun des EPI fournis ne doive êtreréutilisé ou lavé pour être réutilisé– la réutilisation pourrait résulter envotre infection ou celle de quelqu’und’autre.• N’utilisez jamais des APR N-95, niles fournissez à qui que ce soit, sansavoir obtenu ou donné formationà l’égard des risques sanitairesassociés à ces appareils. Par exemple,des travailleurs avec des maladiespulmonaires ne pourraient pas êtrecapables de porter ces APR.• Si vous pouvez, effectuez un testd’ajustement pour vous assurer del’étanchéité aux particules de l’APR.• Les APR N-95 ne doivent pas êtresuspendus autour de votre coulorsque vous travaillez, portez-lestoujours pendant que vous travaillez.• Les EPI doivent être échangésimmédiatement s’ils deviennentsouillés ou s’ils se déchirent.• Il faut désigner un endroit pourmettre les EPI et tout le personneldevra utiliser cet aire pour mettreleurs EPI. L’endroit idéal serait uneaire propre à l’écart des oiseaux oude n’importe quels équipementspotentiellement contaminés, commedes cages, des caisses à claire-voieou des outils fermiers.• Il faut désigner un endroit où lepersonnel puisse ôter leurs EPI ettout le personnel devrait utilisercette aire pour y ôter leurs EPI.L’endroit idéal se trouverait àl’écart des aires où l’on vientd’effectuer des abattages ou desdécontaminations.• Les travailleurs ont indiqué quel’utilisation des EPI peut, en occasion,rendre leur travail plus difficile àréaliser parce que les EPI peuventêtre encombrants, chauds, ouinconfortables. Néanmoins, ils saventaussi que les EPI sont nécessairespour prévenir les infections etl’étalage du virus vers d’autresfermes ou personnes, surtout cellesqu’ils aiment le plus.Gestions des déchets• Tous les EPI doivent être enlevés etjetés avant des pauses-repos. Aprèsla pause, l’on doit en mettre un EPItout nouveau.• Il faut se débarrasser des EPI usagésimmédiatement après leur utilisationen suivant la démarche conseillée(c’est à dire les enfouir ou lesbrûler).

• Des sacs rouges en plastique sontfournis dans la trousse d’EPI pource but. Ils doivent être bien ferméset détruits selon les procéduresconseillés. Ceci veut dire qu’ilfaudra suivre les instructions desfonctionnaires locaux ou de lapersonne chargé de surveiller letravail et placer les sacs déchetsinfectieux rouges là où ils l’indiquent.• La manière de se débarrasser desEPI usagés peut varier selon lasituation où la localité. Ce serontles fonctionnaires locaux ou ceuxchargés de surveiller le travail quidécideront, en toute probabilité, lameilleur manière de se débarrasserdes EPI usagés et d’autres matériauxqui peuvent avoir été en contactavec le virus.

Fiche Mémo pour le Participant n o 5Avantages et défis liés à l’utilisation de l’EPIAvantages• Ils sont efficaces.• Ils maintiennent le travailleur sûr eten bonne santé• Ils protègent l’ensemble dupersonnel – personnel dont on a ungrand besoin pour aider à contrôlerles flambées de grippe aviaire.• Les travailleurs qui les utilisentprotègent leurs familles,communautés, fermes etcommerces. Ils protègent la sécuritééconomique d’une région.Défis• Il est difficile de réalisercertaines tâches lorsque l’onporte l’équipement; il limite lesmouvements du corps.• Il est difficile de se communiquer: Ilest difficile de comprendre ce quedit quelqu’un qui porte un ARF N-95• Il est difficile de bien voir/ la visibilitéest limitée: les lunettes de protectionpeuvent limiter le champ visuel decelui qui les porte et elles peuventaccumuler de la buée.• Celui qui le porte peut devenir trèschaud/inconfortable; donc, il aurabesoin de plus de pauses-repos.• Puisque les EPI sont difficiles àmettre et à enlever, les utilisateurssont plus susceptibles d’éviter lesenlever pendant les repos, ce queaugmente leur risque d’infection oude contamination de leur vêtements.• Les travailleurs doivent être apprisles raisons pour lesquelles ils doiventse changer et les procéduresconcernant l’enlèvement des EPIdoivent être mises en force.• Récontamination: Les utilisateurspeuvent devenir contaminéslorsqu’ils enlèvent leur équipementà moins qu’ils suivent les procéduresconcernant la décontaminationet l’enlèvement de l’équipementattentivement.

• Les EPI peuvent être intimidants:Quand les gens voient les travailleursdans leurs EPI cela leur indique qu’ilpeut y avoir un problème grave, ceque peut causer de la panique etinterférer avec la communication etla coopération entre les travailleurs.

Fiche Mémo pour le Participant n o 6Pourquoi doit-on utiliser l’EPI?• Le virus de la grippe aviairepeut infecter une personne àtravers les yeux, le nez ou labouche. En fait, la plupart des casd’infection par grippe aviaire chezles humains ont eu lieu à partirdu contact, en quelque manière,avec les poulets infectés ou avecdes choses qui ont été en contactavec les volailles infectées et lorsque l’on se touche aux yeux, aunez ou à la bouche. Voilà pourquoiles gants et les matériaux pourprotéger le visage tels que les APRet les lunettes de protection sont siimportants.• Le virus peut être présentdans l’air que nous respirons.Les déjections et les nids desvolailles appartenant à des voléesinfectées par le virus de la grippeaviaire peuvent contaminer lapoussière et le sol, et causentdes infections quand la poussièrecontaminée est inhalé à travers lenez et la bouche – voilà pourquoile port de l’APR N-95 est vital pourvotre santé et bien-être.• Le virus peur être porté versautres fermes. Les mains/la peau,les vêtements ou les chaussurespeuvent devenir contaminées avecle virus de la grippe aviaire, soitdirectement à partir des volailles,soit à partir des excréments/nidscontaminés – étalant ainsi le virusvers des nouvelles aires. Au delàde protéger celui qui le porte, l’EPIprotège aussi les gens, les animaux,et les fermes avec lesquels letravailleur entrera en contact dansun futur prochain.• Le virus peut survive dansl’environnement. The virus peutvivre dans l’environnement – endehors d’un hôte infecté. Le viruspeut survivre dans les excréments,à températures fraîches, pendant aumoins trois mois. Dans l’eau, le viruspeut survivre jusqu’à quatre jours à22o C et au delà de 30 jours à 0oC. Même s’il semble dramatique, ilfaut toujours assumer que il ya duvirus dans le fumier, les nids, le sol,les plumes, la poussière et les partiesde poulet. Assumer la pire situationpeut nous motiver à mettre l’EPIpour réaliser toutes nos tâches, àchaque fois que nous les réalisons.• Il suffit d’un gramme pourinfecter 1 million d’oiseaux.Dans des recherches sur la grippeaviaire on a trouvé qu’un seulgramme de fumier contaminé peutcontenir une quantité suffisantede virus pour infecter 1 milliond’oiseaux. Un gramme n’a que lesmêmes dimensions qu’une agrafede bureau ou un ongle. Un seultravailleur portant des chaussuresou des bottes infectées avec dela poussière ou du fumier peutdéclencher une énorme flambée.

Fiche Mémo pour le Participant n o 7L’appareil de protection respiratoire (APR) N-95L’appareil de protection respiratoire compris dans votre trousse s’appelle l’APR N-95. Voici quelques points qu’il vaut la peine saisir à propos de votre APR:• Ces APR ont été conçus pouradultes, on ne recommande pas leurusage par des enfants.• L’utilisation des APR N-95 tout seulne vous protégera complètementd’une infection par le virus de lagrippe aviaire – ils doivent êtreutilisés avec l’ensemble des autreséléments compris dans votretrousse.• Les APR N-95 doivent être ajustésà chaque visage. Un APR N-95 quin’a pas été ajusté correctementpeut laisser de fuites d’air entrel’APR et votre visage qui peuventcompromettre son efficacité.• Les barbes, les moustaches ou destraits peu communs peuvent rendredifficile l’ajustement correct des APRN-95. Les APR N-95 ne peuventêtre portés de manière sûre pardessusdes barbes ou des visagesnon rasés.• Les APR doivent être jetés etremplacés après 4-6 heures d’usage.Vous pouvez utiliser le reste devotre EPI pendant la durée de vosactivités.• Les masques chirurgicaux nesont pas des APR! Les masqueschirurgicaux ont été conçuspour protéger les patients descontaminants générés par lapersonne qui porte le masque. Ilsfiltrent les particules plus grandesdans l’air mais ils offrent peu deprotection contre le virus de lagrippe aviaire.• Les APR N-95 ne doivent pas êtresuspendus autour de votre coupendant que vous travaillez. Vousdevez les porter correctementpendant que vous travaillez, toujours.• Les APR N-95 perdent leur efficacitéet doivent être changés lorsqu’ilsdeviennent mouillés avec de la saliveou des secrétions respiratoires.• Si un APR est éclaboussé et devientmouillé, il doive être change suivantstrictement les procédures pour selaver les mains et échanger ses gants.

Fiche Mémo pour le Participant n o 8Contenus de la trousse d’EPI1 Paire COMBINAISON TYVEK1 Paire COUVRE-CHAUSSURESEXTERNES2 Paires GANTS EN NITRILE1 TABLIER EN PLASTIQUE[dans un sachet plastique]1 APPAREIL DE PROTECTIONRESPIRATOIRE N-951 Paire LUNETTES DEPROTECTION (avec évents àdéflecteur)4 LINGETTES ALCOOLISÉES1 LINGETTE SANITAIREVIRUCIDE PDI1 SAC DÉCHETS INFECTIEUX(ROUGE)

ANNEXESAnnexe A:Énoncés pour le jeu de l’Activité 3 – l’APR N-95Remarque au formateur:Coupez les énoncés suivants pourque les mots ou phrases entreparenthèses soient séparés du restede l’énoncé et donnez un morceaude papier à chaque participant. Ilsmarcheront dans la salle et essaierontde «apparier» ces mots ou phrasesaux énoncés correspondants. Quandtous les énoncés aient été appariéscorrectement ils ressembleront ceuxci-dessous:• Ces APR ont été conçus pour desadultes, on ne recommande pas leurusage par des [enfants].• L’utilisation des APR N-95 tout seulne vous protégera complètementd’une infection par le virus de lagrippe aviaire – [ils doivent êtreutilisés avec l’ensemble des autreséléments compris dans votretrousse.]• Les APR N-95 doivent être ajustés àchaque [visage.]• Un APR N-95 qui n’a pas été ajustécorrectement peut laisser de fuitesd’air entre l’APR et votre visagequi peuvent compromettre son[efficacité.]• [Les barbes, les moustaches ou destraits peu communs] peuvent rendredifficile l’ajustement correct des APRN-95. Les APR N-95 ne peuventêtre portés de manière sûre pardessusdes barbes ou des visagesnon rasés.• Les APR N-95 perdent leurefficacité et doivent être changéslorsqu’ils [deviennent mouillésavec de la salive ou des secrétionsrespiratoires.]• Si un APR est éclaboussé et devientmouillé, il doive être changé [suivantstrictement les procédures pour selaver les mains et échanger ses gantsavant d’en mettre un autre.]• Les APR peuvent devenir encombréspar la poussière et d’autresparticules et doivent être jetéset remplacés [si l’on éprouve desdifficultés pour respirer,] même si lereste de votre équipement est enbonne condition.• Les [masques chirurgicaux] nesont pas des APR! Les masqueschirurgicaux ont été conçuspour protéger les patients descontaminants générés par lapersonne qui porte le masque. Ilsfiltrent les particules plus grandesdans l’air mais ils offrent peu deprotection contre le virus de lagrippe aviaire.• Les APR N-95 ne doivent pas [êtresuspendus autour de votre coupendant que vous travaillez.] Vousdevez les porter correctementpendant que vous travaillez, toujours.

Remarque au formateur:Copiez, coupez et distribuez auxparticipantsCes APR ont été conçus pour desadultes, on ne recommande pas leurusage par des__________________ .[enfants]L’utilisation des APR N-95 tout seulne vous protégera complètementd’une infection par le virus de la grippeaviaire – ________________________________[ils doivent être utilisés avecl’ensemble des autres élémentscompris dans votre trousse.]Les APR N-95 doivent être ajustés àchaque _______________________ .[visage]Un APR N-95 qui n’a pas été ajustécorrectement peut laisser de fuitesd’air entre l’APR et votre visage quipeuvent compromettre son[efficacité]____________________________peuvent rendre difficile l’ajustementcorrect des APR N-95. Les APR N-95ne peuvent être portés de manièresûre par-dessus des barbes ou desvisages non rasés.[Les barbes, les moustaches ou destraits peu communs]Les APR N-95 perdent leur efficacitéet doivent être changés lorsqu’ils_____________________________________________.[deviennent mouillés avecde la salive ou des secrétionsrespiratoires.]Si un APR est éclaboussé et devientmouillé, il devra être changé[suivant strictement les procédurespour se laver les mains et échangerses gants avant d’en mettre unautre.]Les APR peuvent devenir encombréspar la poussière et d’autres particuleset doivent être jetés et remplacés_____________________________________, même si le reste de votreéquipement est en bonne condition.[si l’on éprouve des difficultés pourrespirer]Les __________________________ne sont pas des APR! Les masqueschirurgiques ont été conçus pourprotéger les patients des contaminantsgénérés par la personne qui porte lemasque. Ils filtrent les particules plusgrandes dans l’air mais ils offrent peude protection contre le virus de lagrippe aviaire.[masques chirurgiques]Les APR N-95 ne doivent pas _________________________________________________________ Vous devezles porter correctement pendant quevous travaillez, toujours.[être suspendus autour de votrecou pendant que vous travaillez.]

Annexe B:Pliant EPI par l’USAID et Feuille Inventaire

HOW TO WEAR PERSONAL PROTECTIVE EQUIPMENT (PPE)12You will put your coveralls on FIRST.You will put your shoe coverson SECOND.3 3i4 4iYou will put your respirator on THIRD.You will put your goggles on FOURTH, after you put onyour respirator.4ii 56 6iYou will put your apronon FIFTH.You will put on your gloves 2 pairs of them for theSIXTH and SEVENTH steps.

HOW TO REMOVE PERSONAL PROTECTIVE EQUIPMENT (PPE)1 1i1ii 1iiiAfter outer gloves and outer boots have been wiped off, put the used wipe in your open red biohazard bag.1iv 22i 3Then remove and dispose of your apron.Next remove and dispose ofyour outer shoe covers.4 55i 6Then remove and dispose ofyour outer gloves.Then unzip and roll down your coverall until it is inside-out,and then step out of it. Then place the coveralls into the redbiohazard bag.Next, remove your goggles bypulling them up over your head.You should handle them by theheadband or ear pieces. Placethem in the red biohazard bag.7 7i88iThen remove your respirator by grabbing the top and then thebottom elastic bands and pulling them up over your head.Place the respirator in the red biohazard bag.Finally, remove your inside gloves. Begin with one hand, rollingdown the glove (with your other hand), starting at the wrist untilthe glove is inside out. Hold the removed glove in your hand in alittle ball, and then roll down the other glove—starting at the wrist—with your first hand. Place them in the red biohazard bag.9 The red biohazard bag should be closed by tying a knot at the top or otherwise tying it shut.10 The red biohazard bag should be placed at a designated location so that it can be collected and burneor buried.11 Finally, wash your hands, forearms and face with soap and water!

PERSONAL PROTECTIVE EQUIPMENT (PPE)

Annexe C:Material Safety Data Sheet (MSDS) for Bitrex FitSensitivity Solution #1 and Solution #2(Fiche technique sur les matériaux de sûreté appartenant aux solutions Bitrex no 1 etno 2 pour des tests de sensitivité)

US Department of LaborOccupational Safety and Health AdministrationHazard Communication Standard29 CFR 1910.1200MATERIAL SAFETY DATA SHEETPrepared By: U.S.SAFETY8101 Lenexa Drive, Lenexa, KS 66214, 1-800-821-5218U.S.SAFETY Part No. 79262SECTION I:Identification & General InformationAllegro Industries Chemtrac 800-424-93006403 E. Alondra Blvd.Paramount, CA 90723310-633-4861Allegro Product Number: 2041-01Chemical Name: Bitrex Sensitivity Solution #1Chemical Family:Benzyldiethyl ammonium, Benzoate, Sodium Chloride, WaterSynonyms:Liquid Mixture, Bittering AgentSECTION II:Contains:SECTION III:Hazardous Ingredients/Identity InformationBenzyldiethyl ammonium, Benzoate, Sodium Chloride, WaterPhysical/Chemical CharacteristicsBoiling Point (Deg C): N/D Flashpoint: N/AMelting Point (Deg C): N/A Vapor Density: N/ASpecific Gravity: N/A Volatile: N/ARefractive Index: N/A Water Content: 95%Alcohol Content: NONEVapor Pressure: N/ASolubility in Water: N/AAppearance:Clear, odorless liquid, extreme bitter tasteSECTION IV:Extinguishing Media:Special Fire FightingProcedures:Unusual Fire andExplosive Hazards:SECTION V:Fire and Explosion Hazard DataN/AUse of self-contained breathing apparatus and protective clothingis recommended.None, may liberate CO NoxHealth Hazard DataThreshold Limit Value (ACGIH TLV): LD50, 612 MG/KGThreshold Limit Value (OSHA PEL): N/ACarcinogencity:NOT LISTED

Health Hazards (Acute and Chronic)Ingestion:Profuse bad tasteInhalation:Profuse bad tasteSkin Contact: Flush with waterIrritation (Skin): Causes irritationIrritation (Eye): Causes eye irritation, flush with waterSECTION VI:Emergency First Aid ProceduresEye Contact: Flush immediately with cold clean water for at least 15 minutes.Skin Contact: The affected area should be thoroughly washed with soap and water. Flushwith large quantities of water. If irritation persists, call a physician.Inhalation: Remove to fresh air and contact physician if necessary.Ingestion: Administer water or milk to dilute. Contact a physician or local poison control centerimmediately.SECTION VII:Reactivity DataThis material presents no significant reactivity hazard. Hazardous Polymerization will not occur and it willnot react violently with water.Contact with highly reactive chemical oxidants should be avoided.SECTION VIII:Eyes:Respiratory:Personal ProtectionThe use of goggles or a faceshield is recommended.Respiratory protection is normally not required.Other Protective Equipment:Ventilation:Chemical resistant gloves are recommended.Ventilation meeting ACGIH standard should be employed.Work/Hygienic Practices:Use good personal hygiene practices. Limit exposure to productwhenever possible. Wash after any contact. Thoroughly washany contaminated clothing or shoes before reuse.SECTION IX:Spill, Leak and Waste Disposable ProceduresAbsorb spills with vermiculite or other suitable absorbent material and remove to an approved disposablecontainer. Dispose of in accordance with current laws and regulations.SECTION X:Storage and HandlingStore in tight containers in a cool dry place away from light and heat. The user of any chemical products should beaware of the potential hazards, known and unknown, and their effect on the human system. We strongly urge thatall users minimize their exposure to all chemicals, including this product and to keep the level of exposurecommensurate with good industrial hygiene practices.DISCLAIMER: THE INFORMATION FURNISHED HEREIN IS BELEIVED TO BE ACCURATEAND REPRESENTS THE BEST DATA CURRENTLY AVAILABLE TO US. NO WARRANTY,EXPRESSED OR IMPLIED IS MADE AND U. S. SAFETY ASSUMES NO LEGAL RESPONSIBILITYOR LIABILITY RESULTING FROM ITS USE.P-674 1/97

US Department of LaborOccupational Safety and Health AdministrationHazard Communication Standard29 CFR 1910.1200MATERIAL SAFETY DATA SHEETPrepared By: U.S.SAFETY8101 Lenexa Drive, Lenexa, KS 66214, 1-800-821-5218U.S.SAFETY Part No. 79261SECTION I:Identification & General InformationAllegro Industries Chemtrac 800-424-93006403 E. Alondra Blvd.Paramount, CA 90723310-633-4861Allegro Product Number: 2041-02Chemical Name: Bitrex Fit Test Solution #2Chemical Family:Benzyldiethyl ammonium, Benzoate, Sodium Chloride, WaterSynonyms:Liquid Mixture, Bittering AgentSECTION II:Contains:SECTION III:Hazardous Ingredients/Identity InformationBenzyldiethyl ammonium, Benzoate, Sodium Chloride, WaterPhysical/Chemical CharacteristicsBoiling Point (Deg C): N/D Flashpoint: N/AMelting Point (Deg C): N/A Vapor Density: N/ASpecific Gravity: N/A Volatile: N/ARefractive Index: N/A Water Content: 95%Alcohol Content: NONEVapor Pressure: N/ASolubility in Water: N/AAppearance:Clear, odorless liquid, extreme bitter tasteSECTION IV:Extinguishing Media:Special Fire FightingProcedures:Unusual Fire andExplosive Hazards:SECTION V:Fire and Explosion Hazard DataN/AUse of self-contained breathing apparatus and protective clothingis recommended.None, may liberate CO NoxHealth Hazard DataThreshold Limit Value (ACGIH TLV): LD50, 612 MG/KGThreshold Limit Value (OSHA PEL): N/ACarcinogencity:NOT LISTED

Health Hazards (Acute and Chronic)Ingestion:Profuse bad tasteInhalation:Profuse bad tasteSkin Contact: Flush with waterIrritation (Skin): Causes irritationIrritation (Eye): Causes eye irritation, flush with waterSECTION VI:Emergency First Aid ProceduresEye Contact: Flush immediately with cold clean water for at least 15 minutes, obtain medical advice.Skin Contact: The affected area should be thoroughly washed with soap and water. Flushwith large quantities of water. If irritation persists, call a physician.Inhalation: Remove to fresh air and contact physician if necessary.Ingestion: Administer water or milk to dilute. Contact a physician or local poison control centerimmediately.SECTION VII:Reactivity DataThis material presents no significant reactivity hazard. Hazardous Polymerization will not occur and it willnot react violently with water.Contact with highly reactive chemical oxidants should be avoided.SECTION VIII:Personal ProtectionEyes:Respiratory:Other Protective Equipment:Ventilation:The use of goggles or a faceshield is recommended.Respiratory protection is normally not required.Chemical resistant gloves are recommended.Ventilation meeting ACGIH standard should be employed.Local exhaust, Mechanical.Work/Hygienic Practices:Use good personal hygiene practices. Limit exposure to productwhenever possible. Wash after any contact. Thoroughly washany contaminated clothing or shoes before reuse.SECTION IX:Spill, Leak and Waste Disposable ProceduresAbsorb spills with vermiculite or other suitable absorbent material and remove to an approved disposablecontainer. Dispose of in accordance with current laws and regulations.SECTION X:Storage and HandlingStore in tight containers in a cool dry place away from light and heat. The user of any chemical products should beaware of the potential hazards, known and unknown, and their effect on the human system. We strongly urge thatall users minimize their exposure to all chemicals, including this product and to keep the level of exposurecommensurate with good industrial hygiene practices.DISCLAIMER: THE INFORMATION FURNISHED HEREIN IS BELEIVED TO BE ACCURATEAND REPRESENTS THE BEST DATA CURRENTLY AVAILABLE TO US. NO WARRANTY,EXPRESSED OR IMPLIED IS MADE AND U. S. SAFETY ASSUMES NO LEGAL RESPONSIBILITYOR LIABILITY RESULTING FROM ITS USE.P-673 1/97

MODULE D’APPRENTISSAGE 2FORMATION SUR LA DÉCONTAMINATION ET LATROUSSE DE DÉCONTAMINATION DE L’USAIDNOTES POUR LE FORMATEUR2ème jour: Séance MatinLe formateur prend laparole:Bonjour à tous! Je vous souhaite labienvenue à la deuxième journée decet atelier de formation sur Santé etSûreté pour Travailleurs Sanitaires chargésd’Animaux et Humains. Vous verrezdans l’ordre du jour que nous allonscommencer ce matin en reconsidérantles objectifs pour cette portion del’entraînement.Remarque au formateur:Repassez les objectifs avec lesparticipants. Les objectifs doivent êtreécrits au chevalet de feuilles mobilesou au tableau noir. Lisez-les à hautevoix.Le formateur prend laparole:Objectifs• Apprendre sur les méthodes proprespour effectuer une décontamination• Définir correctement qu’est-ce que ladécontamination• Lister ou donner 3 raisons pourlesquelles il est important d’effectuerune décontamination pendant uneflambée de la grippe aviaire• Nommer ou indiquer deux situationsoù le virus peut survivre• Identifier les éléments contenus dansla trousse de décontamination fourniepar l’USAID• Décrire au moins deux conceptsgénéraux dont on doit serappeler lorsque l’on planifie unedécontaminationDonc, comme vous voyez, le thème cibléaujourd’hui c’est la décontamination—comment l’on peut prévenir l’étalage desvirus et des germes—spécifiquementle virus H5N1, la souche du virus de lagrippe aviaire qui est responsable desflambées actuelles. Nous allons réaliserquelques activités pour nous aider àdéfinir la décontamination et pournous aider à comprendre des raisonsimportantes pour décontaminer: lasécurité et la santé.Nous travaillerons en paires ce matin,donc chacun doit choisir un partenaire.Vous pouvez choisir la personne assisse àcôté de vous, si vous voulez.Version préliminaire, p. 53

Remarque au formateur:Assurez-vous que chaque participant atrouvé un partenaire pour travailler.Activité 1: Définir qu’est-ce quela décontaminationLe formateur prend laparole:Vous travaillerez avec votrepartenaire pour définir ce que le mot“décontamination” signifie pour vous.Ensuite, vous travaillerez avec votrepartenaire pour énumérer autant deraisons auxquelles vous pouvez penser,pour lesquelles il faut décontaminerpendant une flambée de grippe aviaire.Prenez environ dix minutes pour réalisercette activité. Vous pouvez mettre vosdéfinitions et idées par écrit, si vousvoulez.Remarque au formateur:Accordez 5 minutes pour cette activité.Le formateur prend laparole:Le temps accordé s’est épuisé. Voyons,donc, quelles paires voudraient partagerleurs définitions et leurs raisons pourfaire la décontamination pendant uneflambée de grippe aviaire avec le restedu groupe?Remarque au formateur:Écrivez les réponses sur le chevalet ouau tableau, et ne donnez les réponsesexactes que si un participant énoncedes idées erronées ou confuses.Le formateur prend laparole:Vous tous avez fait un bon travaildéfinissant la décontamination. Pour notreséance aujourd’hui nous allons définir ladécontamination comme voiciUne méthode pour se débarrasser desgermes et des virus aussi rapidement etaussi efficacement comme possible.Avez-vous des questions au sujet de cettedéfinition avant que nous continuions?Remarque au formateur:Répondez à toutes les questions, puiscontinuez.Activité 2: Raisons pourdécontaminer pendant uneflambée de grippe aviaireMaintenant nous aurons des paires devolontaires nous raconter leurs raisonspour faire la décontamination pendantune flambée de grippe aviaire.Remarque au formateur:Demandez aux volontaires de vousfournir des réponses et écrivez-les auchevalet ou au tableau. Fournissez lesréponses exactes seulement au cas oùles réponses données sont incorrectesou confuses.Le formateur prend laparole:Remercions nos volontaires.Vos réponses sont très bonnes. Ladécontamination est fondamentalementde la prévention. Pour notre formationVersion préliminaire, p. 54

aujourd’hui nous dirons que trois motifsimportants pour décontaminer incluent:1 La décontamination empêchela contamination des personneset l’environnement en tuant lesorganismes qui portent l’infection.2 La décontamination empêche que levirus se propage davantage pendantune flambée.3 La décontamination permet larepopulation sûre des voléesaprès une période appropriée dequarantaine.Maintenant que nous avons définila décontamination et décrit troismotifs importants pour décontaminer,continuons.Activité 3: Comment le viruspeut survivreLe formateur prend laparole:Nous avons parlé hier, pendant notreformation sur l’EPI, au sujet de plusieursraisons pour l’utilisation de l’équipementde protection individuelle(EPI) lorsquel’on travaille avec des volailles malades.Une de ces raisons était que le virusde la grippe aviaire peut survivre dansl’environnement, hors un hôte infecté.Repassons, donc, encore les nombreuxendroits et les nombreuses manières quele virus peut survivre après une flambée.Vous pouvez vous référer à la FicheMémo pour le participant n o 2 poursuivre cette discussion.Nous nous rappelons qu’après uneflambée de grippe aviaire, le virus peutsurvivre pour:• Au moins 35 jours à 4°C dans lesexcréments de volaille (crottes). Mêmeune toute petite quantité de crottesinfectées peuvent contenir assez devirus pour infecter un grand nombred’oiseaux.• Plusieurs jours en carcasses à l’air ou àtempérature ambiante.• Jusqu’à 23 jours si frigorifié à 4o C• Jusqu’à quatre jours à 22o C et plusde 30 jours à 0o C s’il est dans l’eau• En général, les températures pluschaudes tuent le virus plus rapidement,alors que les températures plus froidesl’aident à vivre plus longtemps. Ceciest un détail important à considéreraux endroits où il y a des hiversfroids puisque dans ces circonstancesla grippe aviaire peut survivrepotentiellement plus longtemps dansl’environnement.Nous avons appris aussi que:• Les mains/la peau, les vêtementsou les chaussures peuvent devenircontaminées avec le virus de la grippeaviaire, soit directement à partir desvolailles, soit à partir des excréments,nids, cages ou d’autres matériaux quiaient été en contact avec des oiseauxinfectés. Le virus peut être porté auxfermes indemnes dans les chaussures,l’habillement, les pneus et le matérield’élevage – étalant ainsi le virus versdes nouvelles aires.Version préliminaire, p. 55

• La grippe aviaire peut être propagéedirectement par l’alimentation, l’eau etl’équipement souillés. Par conséquent,le nettoyage et la désinfection desaires où l’on garde les volaillessont quelques des étapes les plusimportantes qui peuvent être prisespour éliminer la diffusion du virus àdes volées “nettes”.• Serrer et grouper un grand nombre depoulets, comme il arrive souvent auxmarchés d’oiseaux vifs, s’est avéré unesource importante de transmission dela grippe aviaire. Puisque le virus dela grippe aviaire peut être étalé auxoiseaux non infectés par déjectionsinfectés, salive, mucus ou autresfluides animaux, il est important depratiquer des procédures sanitairesstrictes au marché – y compris ladécontamination des véhicules, del’alimentation, de l’eau, des cageset de tout autre équipement utiliséau marché — pour réduire latransmission du virus à d’autresoiseaux et aux humains.Ainsi, nous savons que la plupart des casd ‘infection par grippe aviaire chez leshumains ont résulté du contact, d’unemanière quelconque, avec la volaille, desrésidus ou des surfaces infectées. Parexemple, l’engrais de volaille et la literiedes bandes atteintes du virus peuventsouiller la poussière et le sol, causantl’infection dans les personnes quand lapoussière souillée est inhalée ou entredans leurs yeux, nez ou bouche.Est-ce qu’il y a des questions sur la façondont le virus de la grippe aviaire survitet la façon dont il infecte des fermeset d’autres secteurs? Est-ce qu’il y ad’autres questions à propos des raisonspour lesquelles il est si important dedécontaminer?Remarque au formateur:Répondez à toutes les questions puiscontinuez.Le formateur prend laparole:Dans cette prochaine activité je vaisdonner à chacun de vous une illustrationd’une basse-cour. De beaucoup demanières elle ressemble beaucoup àla ferme que nous avons décrite hierlorsque nous nous “faisons une imagede notre journée”. En utilisant votrecrayon ou stylo, marquez tous les endroitsou articles sur la page qui pourraientpotentiellement devenir souillés avec levirus de la grippe aviaire.Remarque au formateur:Vous devriez tirer des copies duschéma dans la fiche Mémo pour leparticipant n o 10 pour chacun desparticipants de l’atelier. Distribuezune copie de l’illustration à chaquepersonne. Fournissez les stylos ou lescrayons si les participants n’apportentpas leurs propres.Le formateur prend laparole:Ok, vous devriez avoir identifié beaucoupd’articles à la ferme qui pourraient êtresouillés. L’on fera un tour de la salle etchaque personne peut mentionner unarticle qu’ils ont marqué et pourquoi ilsl’ont marqué.Version préliminaire, p. 56

Remarque au formateur:Demandez à chaque participant dementionner an article qu’il a identifiécomme étant potentiellement infecté.Écoutez et affichez des réponses tellesque:Les cages, les caisses d’oeufs, les balais,les pneus de bicyclette, les pneusde moto (ou camion), les pelles, lesrécipients d’alimentation et d’eau, laterre où les poulets flânent, les seaux,et les murs ou la clôture qui entourentles endroits où l’on garde la volaille.Le formateur prend laparole:C’était super. Merci de votre participation.Quoique la grippe aviaire puisse survivredans quelques circonstances, la bonnenouvelle c’est qu’elle peut également êtrefacilement détruite par des désinfectantsou même en réalisant un simplenettoyage à fond avec de l’eau et dusavon!Activité 4: Se familiariser avecles produits chimiques quidésinfectentLe formateur prend laparole:Parlons maintenant au sujet de certainsdes produits chimiques qui peuvent êtreemployés pour décontaminer certaineschoses. Vous pouvez examiner la FicheMémo pour le participant n o 3pendant que nous discutons certainsdes groupes de produits chimiques quidésinfectent.D’abord, il est important de savoirque des désinfectants, lorsqu’ils sontutilisés correctement, peuvent êtreemployés pour décontaminer les mains,l’habillement, les chaussures, les surfaces,l’alimentation, l’eau, les cages et toutautre équipement avicole.Des désinfectants sont typiquementgroupés dans sept catégories chimiques.Bon nombre d’entre vous emploientdes désinfectants dans certaines deces catégories chimiques chaque jour,mais peut être vous ne le savez pas.Par exemple, qui parmi vous a employéle peroxyde d’hydrogène pour nettoyerune blessure ou une éraflure? Si vousavez fait cela, alors vous avez employéun produit chimique connu sous lenom de “oxydant.” Un autre oxydantdont nous entendrons parler beaucoupaujourd’hui s’appelle Virkon®. Virkon estun nom de marque déposée pour undésinfectant en poudre qui contient duperoxymonosulfate de potassium et duchlorure de sodium comme substancesactives - tels sont les noms chimiquespour Virkon®.Qui parmi vous a utilisé de l’alcool defrottement pour nettoyer une blessure ouune écorchure ou a eu votre bras nettoyéavec de l’alcool avant de vous fairepratiquer une injection? Dans ce cas-ci,vous avez employé le groupe de produitschimiques appelés les “alcools.”Et lequel parmi vous a employé de l’eaude javel pour nettoyer une clinique desanté ou des parties de votre propremaison? Si c’est le cas, vous avezemployé un groupe chimique connusous le nom de “halogènes.” Tous leshalogènes, y compris les agents deVersion préliminaire, p. 57

lanchiment comme l’’eau de javel, tuentle virus grippe de la grippe aviaire.Voici une liste de ces désinfectants pluscommuns et de leurs groupes chimiques.Remarque au formateur:Affichez la table suivante sur le tableaude conférence ou sur un morceau depapier à l’avant de la salle.Groupesde produitschimiques quidésinfectentOxydantsAlcoolsHalogènesPhénoliquesAmmoniumsquaternaires“Quats”Nomscommuns pourdes produitschimiquesPeroxyded’hydrogèneVirkon®L’alcool defrottement utiliséaux cliniques desantéProduits chimiquesbasés au chlorecomme les agentsde blanchimentLysolBenzaRidLe formateur prend laparole:Alors, la bonne nouvelle est que le virusde la grippe aviaire peut être renduinactif par les produits chimiques surnotre liste que voici, et par les savons etles détergents réguliers. Donc même sile virus est fort, une fois que les produitschimiques – ou le savon et l’eau – sontemployés pendant la procédure dedécontamination il devient relativementfacile de détruire.Il est plus facile inactiver le virus de lagrippe aviaire que beaucoup d’autresvirus parce qu’il est très sensible auxdétergents qui détruisent sa coucheexterne riche en matières grasses. Levirus a besoin de cette couche pourattaquer les cellules des animaux, donc sion élimine cette couche, le virus devientinefficace. La plupart des marquesindustrielles et de ménage des savons etdes détergents peuvent être employéescomme agents de décontamination.Cependant, pour les buts de cetteformation, vous serez instruit sur lafaçon correcte dont on doit employer lesdésinfectants chimiques.Le désinfectant spécifique qui est fournidans les trousses de décontaminationfournies par l’USAID s’appelle Virkon®.Vous pouvez passer en revue quelquesfaits sur Virkon® en examinant laFiche Mémo pour le participantn o 9, mais nous parlerons égalementdavantage au sujet de la façon employerVirkon® plus tard pendant cette session.Un autre point à maintenir dans l’espritc’est que l’eau chaude, le brossage etle frottement augmentent l’efficacitédu nettoyage et le procédé dedécontamination. En d’autres termes,le frottement, le brossage et employerde l’eau chaude facilitent l’enlèvementdes résidus et la saleté des surfaces àdécontaminer. Mais ne vous inquiétez passi vous disposez pas de l’eau chaude.Version préliminaire, p. 58

Activité 5: Articles contenus dansla trousse de décontaminationLe formateur prend laparole:Maintenant que nous avons parlé del’importance de la décontamination etdes types de produits chimiques quenous pouvons employer, voyons ce quiest dans le kit de décontamination. Vouspouvez employer la Fiche Mémo pourle participant n o 4 pour cette activité.Vous verrez que le kit contient cinqcomposants importants - vos troussesEPI, désinfectants, produits pour lenettoyage et la décontamination, produitspour le control des agents infectieux,et un pulvérisateur que vous pouvezattacher sur votre dos et utiliser pourpulvériser le désinfectant aux secteursaffectés.Remarquez que l’EPI apparaît le premiersur la liste. Compte tenue de la séancede formation que nous avons faite hier,pourquoi pensez-vous que c’est ainsi?Remarque au formateur:Écoutez et affichez des réponses tellesque:• Nous devons les mettre d’abord,avant de faire la décontamination• Parce que les EPI nous gardentsûrs pendant que nous réalisons ladécontamination• Nous ne pouvons pas préparer ouemployer des produits chimiquessans porter notre EPI• Nous pourrions tomber malades àcause des produits chimiques si nousn’employons pas nos EPI.Si personne ne mentionne ces points;vous, dans votre rôle de formateur,devez être sûr de les dire.Le formateur prend laparole:Maintenant nous emploierons la FicheMémo pour le participant n o 4pour identifier tous les articles dansnotre trousse de décontamination. Il y a18 articles au total, mais bon nombred’entre eux vous seront déjà bien connus.Remarque au formateur:Pendant que vous lisiez la liste descontenus, levez et montrez chaquearticle que vous mentionnez et, sipossible, passez l’article autour dela salle de sorte que les participantspuissent le voir de plus près.Le formateur prend laparole:Liste des contenus de la trousse dedécontaminationD’abord, il y a l’EPI, l’équipement deprotection personnel. Rappelez-vous, nousl’avons examiné hier.Les trousses d’EPI dans la trousse dedécontamination incluent:• une combinaison (Enviroguard aveccagoule intégrée et des bottes)• un APR N-95• gants externes - en nitrileVersion préliminaire, p. 59

• gants intérieurs – ceux-ci sont en vinyle• lunettes de protection• couvre-chaussures• un tablier en plastique qui vient dansune sachet• une trousse de produits pour effectuerdes tests d’ajustement des APR (avecde la solution de Bitrex)Puis, il y a les désinfectants. Ceux-ciincluent:• un récipient de 5 kilogrammes dedésinfectant Virkon®• Lingettes désinfectantes Sani Cloth– vous trouverez une boîte métalliquecontenant 160 lingettesEnsuite, il y a les produits de nettoyageet de décontamination. Ceci inclut:• une brosse de frottement pour enleverla saleté et d’autres particules avantd’employer des désinfectants• quatre barres de savon que vouspouvez utiliser pour vous laver mainset le visage• un bassin gonflable que vous pouvezemployer pour créer un bain de pieds• un grand seau qui peut tenirapproximativement 19 litres – vousl’emploierez ceci mélanger la poudredésinfectante de Virkon® avec del’eau.Pour en finir, il y a les matériaux pourcontrôler les agents infectieux. Ceux-ciincluent:• quelques lingettes alcoolisées – cellescisont généralement employés pouressuyer vos mains après l’enlèvementde votre EPI• un sac rouge pour placer les déchetsinfectieux• un récipient avec un bec pulvérisateur.Le kit de décontamination devraitcontenir aussi des courroies simplesque vous pouvez employer pourattacher ce récipient pulvérisateursur votre dos. Si vous ne pouvez pastrouver des courroies dans le kit, vouspouvez employer n’importe quellecorde ou d’autres bandes de tissu pourattacher le pulvérisateur sur votre dos.L’attacher sur votre dos sera beaucoupplus facile que de le porter.• un grand chiffon virucide Sani-ClothActivité 6: Concepts dont on doitse rappeler pendant que l’ontravaille à une décontaminationLe formateur prend laparole:Maintenant que nous avons examiné latrousse de décontamination et ce qu’ellecontient, discutons quelques conceptsgénéraux dont il faut se rappeler lorsquel’on fait des projets pour décontaminerdes secteurs souillés avec le virus dela grippe aviaire. Nous allons utiliser laFiche Mémo pour le participant n o5 pour repasser ces conceptsLes voici:• Les résidus d’oiseau représentent leplus grand danger de propagation duvirus de la grippe aviaire.Version préliminaire, p. 60

Le virus de la grippe aviaire aime desconditions moites et sales, comme cellesque l’on trouve là où les excrémentssont présents. Il est donc essentiel dedésinfecter complètement les articlesqui ont été en contact avec des crottesd’oiseau - cages, chaussures, vêtements- avant de travailler avec la volaille ouentrer dans un endroit où l’on garde lavolaille.• Le matériel organique tel que lesrésidus ou la saleté peut absorberquelques désinfectants chimiques etles rendre moins efficaces.La présence des résidus ou des couchesde saleté rendent beaucoup plus difficilel’anéantissement du virus. Par conséquent,le matériel organique tel que la saleté etles résidus doit d’abord être enlevé par lefrottement ou le brossage avec du savonet de l’eau ou du désinfectant avantque la désinfection par n’importe quelleméthode puisse être efficace.• Le virus survit bien dans l’eau.Le simple lavage ou la pulvérisationavec de l’eau ne tuera pas le virus, etpeut même aider le virus à s’étalerdans des secteurs où il peut infecter desoiseaux. Par conséquent, n’importe quellavage pour enlever la contaminationdevrait toujours être fait avec desdétergents (ou de l’eau savonneuse) oudes désinfectants spécifiques tels que leVirkon® contenu dans votre trousse. Lerinçage fait avec de l’eau seulement n’estpas suffisant.• La transmission du virus a étéfortement liée au transport desoiseaux vivants, des oiseaux mortsinfectés, ou aux ordures dans desvéhicules.Il est très important de se rappeler dedécontaminer n’importe quel équipementutilisé pour déplacer les oiseaux vivants,malades ou morts. Ceci inclut les cages,les caisses, les boîtes/casiers, les panierset les véhicules. Pour éviter d’infecterun secteur encore, il est importantd’enlever les oiseaux des lieux avantd’entreprendre la décontaminationet de veiller que tout véhicule ouéquipement introduit dans un secteuraprès la décontamination soit égalementdécontaminé.• Le virus de la grippe aviaireest anéanti par la plupart desdésinfectants.Comme l’on discutait avant, le virus de lagrippe aviaire est sensible aux détergentsqui détruisent la graisse contenant lacouche externe du virus. Le virus abesoin de cette couche pour attaquer lescellules des animaux, donc si l’on éliminela couche, le virus devient inefficace.• Il est important de déterminerla concentration et la quantitéappropriées des désinfectants pourqu’ils soient efficaces.Quant au Virkon® dans vos trousses dedécontamination, vous devrez mélangerchaque 10 grammes de poudre à un litrede l’eau.• Afin que le désinfectant soit efficace,il doive être mis en contact avec dessurfaces et équipements sur lesquelsne reste qu’un minimum de matérielorganique.Version préliminaire, p. 61

Il est important de brosser, balayer ou sedébarrasser de tous les excréments avantd’employer le désinfectant. Il ne pourraitpas être efficace s’il y a des débris surl’article étant désinfecté.• Considérez toujours des facteurs telsque le temps (la température) etcomment les désinfectants pourraientagir l’un sur l’autre avec d’autresmatériaux dans le secteur étantdécontaminé.Les désinfectants pourraient avoir desréactions dangereuses à d’autres produitschimiques dans le secteur - tel queVirkon®, qui généralement ne devraitpas être employé près de la lessive. Lemeilleur c’est de vérifier l’étiquette dudésinfectant que vous employez pourvous assurer qu’il n’y a aucun autrematériel dangereux que vous devriezéviter.Y a-t-il des questions au sujet de cesconcepts avant que nous continuions?Remarque au formateur:Répondez à toutes les questions, etpuis continuez.Activité 7: Pré-Activités,Première phase dedécontamination et Deuxièmephase de décontaminationLe formateur prend laparole:Maintenant examinons les procéduresgénérales de décontamination quiseraient employées pendant une flambéede grippe aviaire. Formons trois petitsgroupes. En utilisant la Fiche Mémopour le participant n o 6, travaillezdans votre groupe pour passer en revueles procédures. Prenez cinq minutes pourfaire ceci.Le groupe 1 regardera la 1ère sectiondes Pré-activités, le groupe 2 regarderales activités liées à la Première Phaseet le groupe 3 regardera les activitéscorrespondantes à la Deuxième Phase.Tandis que vous travaillez dans votrepetit groupe, choisissez une personnepour rapporter vos recherches au groupeentier. Chaque groupe fera rapport augroupe entier de sorte que tout le mondeentende quelles activités se produisentdans chaque phase de décontamination.Remarque au formateur:Accordez 10 minutes aux participantspour examiner les fiches et puisdemandez aux porte-parole de chaquegroupe – Pré-activités (groupe 1),activités de la Première Phase (groupe2) et activités de la Deuxième Phase(groupe 3) – de présenter leurssections au groupe entier. Soyez sûrd’accentuer les points suivants dans lesprésentations de chaque group:Pre-activités — Port de l’EPI etPréparation du Virkon®• Avant de commencer n’importequelle des procédures dedécontamination, chacun devraitmettre leur EPI pour se protéger• Virkon® est le désinfectantfourni dans les trousses dedécontamination. Il vient sous laforme d’un poudre qui peut êtremélangé avec de l’eau.Version préliminaire, p. 62

• Il est important de porter l’EPIpendant que l’on mélange et utiliseVirkon® parce qu’il peut irriter lapeau et les yeux.Première Phase de Désinfection• Désinfectez toutes les carcassesd’oiseau avec du désinfectant oude l’eau savonneuse avant de lesenlever pour les brûler ou enterrer.• Lavez avec un désinfectant ou del’eau savonneuse tous les secteursavec lesquels les oiseaux ont eu ducontact direct ou indirect (tel quebâtiments, cages, cours);• Imbibez complètement toutes lesliteries, débris et matériel fécal; lesmurs et espaces intérieurs du toitoù l’on loge des oiseaux; ainsi quetoutes les routes vers la ferme/village, basses-cours, et sentierspiétons qui ont pu entrer en contactavec des oiseaux infectés.• Les murs externes doiventseulement être désinfectés quandils font face à un secteur où desoiseaux infectés ont été gardés ousont passés pendant le procédé dedécontamination.• Permettez que le désinfectants’imbibe dans toutes les surfacespendant 24 heures - ne le rincez pasimmédiatement.• Essayez d’éliminer des rongeurs àl’aide d’un programme de contrôledes parasites parce que la grippeaviaire peut être écartée sur lespieds de rongeurs.Deuxième Phase de Désinfection• Attendez au moins 24 heures entrela première et la deuxième phasesde désinfection• D’abord, débarrassez les bâtimentsde toute matière organique (déchetset saleté) – soit en l’enterrant sur leslieux, ou en la mettant dans des sacset en la prenant à un remblai ouincinérateur désigné.• Nettoyez les systèmes de ventilationet puis désinfectez-les employant untissu imbibé dans Virkon®.• Après avoir enlevé les déchets et lasaleté, frottez les secteurs accessiblesavec des brosses et puis accordezau moins 10 minutes pour que ledétergent pénètre et détache lasaleté de toutes les surfaces avant lerinçage avec de l’eau propre.• Assurez-vous alors que toutl’équipement est complètementdésinfecté avec Virkon® (ou unautre désinfectant que vous soyezen train d’employer).• Après avoir effectué le traitementde tous les secteurs (bâtimentsde ferme, quais de chargement,chemins, basses-cours, et cetera...)avec le désinfectant, il est importantde le laisser s’imbiber pendant aumoins 30 minutes avant de le rinceravec de l’eau.• Le procédé complet dedécontamination de la deuxièmephase devrait être répété après sept(7) jours.Version préliminaire, p. 63

• La repopulation des secteurs infectésavec des oiseaux non infectés nedevrait pas se produire jusqu’à ceque la flambée de grippe aviaireait été déclarée supprimée par lesfonctionnaires responsables de lasanté des animaux. Attendez alors21 jours additionnels (3 semaines)avant d’apporter de nouveauxoiseaux.Cette information est égalementdisponible dans la Fiche pour leformateur n o 1.Le formateur prend laparole:Vous avez tous fait un travail superbe deprésenter cette information au groupeentier. Y a-t-il des questions sur n’importelaquelle de ces activités ou phases avantque nous continuions?Remarque au formateur:Répondez à toutes les questions, etpuis continuez.Activité 8: Pour bien comprendreles démarches en matière dedécontamination liées à labiosécurité de routine et auxmarchés d’oiseaux vivantsLe formateur prend laparole:Sans compter que des procéduresgénérales de décontamination pendantune flambée de grippe aviaire il y a deuxautres scénarios communs pour l’usagedes procédures de décontamination dontvous devriez être au courant. L’un de cesscénarios correspond aux procéduresliées à la biosécurité de routine.L’autre adresse la décontaminationdes marchés d’oiseaux vivants. C’estle type d’information que vous devriezconnaître pour pouvoir répondre à desquestions des fermiers, membres dela communauté et d’autres gens vouspouvez rencontrer en travaillant pendantdes flambées de grippe aviaire.Jetons un coup d’oeil aux FichesMémo pour le participant n o 7 etn o 8 pendant que nous discutons cetteinformation sur la biosécurité de routineet les marchés d’oiseaux vivants.La biosécurité de routine est importantdans les basse-cours, fermes avicolescommerciales, et partout où l’on gardedes oiseaux vivants. Les procédures dedécontamination liées à la biosécuritése concentrent sur l’habillement, leschaussures, les véhicules et l’équipement.Pour l’habillement, tous les visiteursaux fermes ou aux installations pourl’abatage de la volaille sont requis deporter des combinaisons ou d’autresvêtements de protection. Cet habillementdevrait être nettoyé avec du savon etl’eau (ou du détergent) après chaqueutilisation, à moins qu’il soit jetable. Sivous portez des combinaisons jetables,des tabliers ou d’autres vêtements, vousdevriez vous débarrasser d’eux dans unsac pour déchets infectieux – commenous apprenions hier - et vous assurezqu’ils sont correctement brûlés ouenterrés.Quant aux chaussures, s’il s’agit desfermes ‘propres’ les visiteurs devraientidéalement porter des chaussuresfournies par la ferme qu’ils sont en trainVersion préliminaire, p. 64

de visiter. Si aucune chaussure n’estdisponible, vous devriez d’abord bienfrotter tous les débris des chaussuresque vous portez, et alors les laver avecde l’eau et du savon. Pour en finir,nettoyez-les avec un désinfectant. Dansle meilleur des cas, des bains de piedscontenant du désinfectant devraientêtre placés à l’entrée des maisons devolaille pour nettoyer les chaussureslors des entrées et sorties. Vous devriezd’abord frotter ou brosser les débris devos chaussures avant de marcher dansle bain de pieds. Typiquement, le bain depieds a 5 centimètres de profondeur etdevrait couvrir entièrement le fond de lachaussure.La désinfection des véhicules estimportante parce que la transmissiondu virus de la grippe aviaire a étéfortement liée au transport des oiseauxvivants, aux oiseaux infectés morts, ouà la literie dans des véhicules. Tous lestrains d’atterrissage, pneus et wagons desvéhicules devraient être désinfectés avantque les véhicules entrent dans la fermeà l’aide d’un pulvérisateur de pompestandard contenant du désinfectant.Pendant que vous réalisez la désinfection,restez environ 30 centimètres à l’écart duvéhicule si vous utilisez un pulvérisateurde main. Pour des pulvérisateurs depuissance, vous devriez vous tenirenviron 1 mètre à l’écart du véhicule,et vous assurer que toutes les surfacesdu véhicule qui sont désinfectées sonthumides et égouttement.Tout l’équipement apporté sur une fermenon infectée devrait être nettoyé etdésinfecté avant d’y être introduit. Cecisignifie des cages, caisses, outils agricoles,des balais, des pelles, des véhicules etleurs pneus. Ils devraient d’abord êtrebrossés ou frottés de sorte que les débrissoient enlevés, et puis être lavés avecde l’eau détersive ou savonneuse, suiviedu désinfectant. Tout l’équipement à laferme devrait être nettoyé et désinfectéde façon régulière. Par exemple, desvéhicules devraient être nettoyés chaquefois qu’ils entrent dans la basse-cour d’unautre endroit.Les procédures de décontaminationpour les marchés d’oiseaux vivants sontégalement importantes. Ces procéduresincluent ce qui suit:• Le marché devrait être nettoyé etdésinfecté après chaque jour de vente.Ceci signifie que chaque surface quientre en contact direct ou secondaireavec les oiseaux ou leurs excrémentsdoit être nettoyé et essuyé oupulvérisé avec du désinfectant.• Tous les équipements et surfaces quisont en contact direct ou secondaireavec des oiseaux ou leurs résidusdevraient également être nettoyés etdésinfectés, y comprises les caissesde poulet, leurs cages et l’équipementd’alimentation/eau, les balances, lescompteurs et les planchers.• Tous les équipements et caissesdevraient être nettoyés et désinfectésavant qu’ils soient retournés à la fermeou au ménage.Version préliminaire, p. 65

• Lors du nettoyage des véhicules oul’équipement, il est recommandé quechaque article soit démonté: ainsivous pouvez atteindre tous les endroitsoù le virus a pu être pénétrer. D’abord,lavez l’équipement de l’eau et dusavon, rincez-le, et puis pulvérisez ouessuyez-le avec un désinfectant tel queVirkon®.Rappelez-vous, la transmission du virusde la grippe aviaire a été fortement liéeau transport des oiseaux vivants, auxoiseaux infectés/morts, ou aux orduresdans les véhicules. Donc, il est importantde décontaminer tous les véhicules – ycompris leurs pneus, les soutes de trainet le train d’atterrissage – qui arriventaux portes, aux environs, aux quaisde chargement et aux réceptions demarchandises du marché. Les véhiculesdevraient généralement être garés aumoins 30 mètres de parti des maisonsde volaille.Le formateur prend laparole:Nous avons achevé la deuxièmepartie de cette formation sur ladécontamination. Vous savez maintenantofficiellement comment devenir destueurs du virus de la grippe aviaire!Nous pouvons prendre une courte pausepour nous reposer et nous continueronsensuite avec notre session finale deformation où l’on apprendra commentréaliser correctement le prélèvementd’échantillons chez les animaux et chezles humains, et les empaqueter pour leurlivraison aux laboratoires.Merci de votre attention etparticipation.Est-ce qu’il y a des questions au sujetde la biosécurité ou les procéduresde décontamination à suivre dans lesmarchés d’oiseaux vivants?Remarque au formateur:Répondez à toutes les questions queles participants puissent avoir, et puiscontinuez.Conclusion du Moduled’apprentissage 2 – DésinfectionVersion préliminaire, p. 66

FICHES MÉMO POUR LES PARTICIPANTSFiche Mémo pour le formateur n o 1Procédures générales de décontamination pendant lessituations de flambée de grippe aviaireA. Pre-activités—Le port de l’EPIet la préparation du Virkon®Avant de commencer toutes lesprocédures de décontamination tout lepersonnel doit être fourni des EPI (etl’avoir mis). L’EPI contient:• Appareil de protection respiratoireN-95, y compris un test d’ajustement• Lunettes de protection• Combinaison• Gants – 2 paires• Des couvre-chaussures ou desbottesVirkon® a été choisi par l’Organisationdes Nations Unies pourl’Alimentation et l’Agriculture (FAOen anglais) comme le désinfectant dechoix et est fourni par l’USAID dansces trousses de décontamination.Quoique l’emploi du Virkon® sesoit avéré sûr, évitez de le laisserentrer en contact avec votre peau.Donc, vous devez vous rappelerd’employer votre EPI pendant quevous mélangez et utilisez Virkon®pour protéger votre peau, yeux, nezet bouche.Virkon® est distribuée sousforme d’une poudre qui peut êtrefacilement mélangée avec de l’eauà l’emplacement d’une flambée degrippe aviaire avant son emploi surdes secteurs souillés. Si l’eau manque,ou si vous êtes dans des secteurshumides ou marécageux, vous pouvezsaupoudrer le secteur à désinfecter.Cependant, on ne s’est pas encoreavéré que ceci est aussi efficace quemélanger la poudre avec de l’eau et lapulvériser.Il y a un certain nombre de procédureset de programmes de décontaminationrecommandés pour des situations deflambeé de la grippe aviaire. Ce quisuit est le procédé recommandé parle fabricant de Virkon® (Dupont -Procédures de décontamination pourle nettoyage et la désinfection des lieuxde ferme atteints de grippe aviaire) eton l’utilise comme un exemple.Lien de ressource: http://www.antecint.co.uk/main/avidecontam.htmB. Première Phase deDésinfection• Désinfectez toutes les carcassesd’oiseau avec du désinfectant oude l’eau savonneuse avant de lesenlever pour les brûler ou enterrer.Version préliminaire, p. 67

• Lavez avec un désinfectant ou del’eau savonneuse tous les secteursavec lesquels les oiseaux ont eu ducontact direct ou indirect (tel quebâtiments, cages, cours)• Imbibez complètement toutes lesliteries, débris et matériel fécal; lesmurs et espaces intérieurs du toitoù l’on loge des oiseaux. Les mursexternes doivent seulement êtredésinfectés quand ils font face à unsecteur où des oiseaux infectés ontété gardés ou sont passés pendantle procédé de décontamination.• Permettez que le désinfectants’imbibe dans toutes les surfacespendant 24 heures - ne le rincez pasimmédiatement.• Désinfectez les routes, les bassescours,et les sentiers piétons desfermes/villages complètement,en vous assurant que les coursd’eau sont protégés contre lacontamination par le virus. Lameilleure manière est de choisirdes emplacements pour réaliserla disinfection qui soient loin desfossés ou des vidanges, et de dirigerl’écoulement du désinfectant auxaires herbeuses où il sera peususceptible de se vider dans dessources d’eau.• Lorsque vous vous débarrassez dudésinfectant, vous pouvez le verserdans la boue ou dans l’engrais.Quand ce n’est pas possible, despetites quantités de désinfectantpeuvent être versées sur une aireverte qui ne soit pas près de l’eau,dans des vidanges ou dans desréservoirs septiques. La paille qui aété imbibée avec du désinfectantdevrait être compostée ou mise ensacs et prise à un emplacement deremblai ou d’incinération.• Puisque le virus de la grippe aviairepeut être écarté sur les pieds derongeurs, il est également importantde mettre en place un programmeefficace pour le contrôle desrongeurs ou un programme intégréde contrôle des parasites.Lien de ressource: http://www2a.cdc.gov/PHTNOnline/registration/detailpage.asp?res_id=828C. Deuxième Phase deDésinfectionIl est important d’attendre au moins24 heures entre la première et ladeuxième phase de désinfection• D’abord, débarrassez les bâtimentsde toute matière organique (déchetset saleté) – soit en l’enterrant sur leslieux, ou en la mettant dans des sacset en la prenant à un remblai ouincinérateur désigné.• Nettoyez les systèmes de ventilationet puis désinfectez-les employantun tissu imbibé dans Virkon®. Siles systèmes ne peuvent pas êtrenettoyés en place, enlevez-les pourbien nettoyer le secteur et pour ledésinfecter avant de les remplacer.• Si vous avez une rondelle depression, remplissez-le avec de l’eaule détergent et employez-la (surun réglage à basse pression) pourimbiber complètement les planchers,les murs, les plafonds, les espacesde toit, les boîtes de literie et

d’alimentation en tous les bâtimentsqui ont été en contact direct avecles oiseaux infectés.• Frottez les secteurs qui sontaccessibles avec les brosses fourniesdans la trousse de décontamination.volaille. Les oiseaux sentinelles sontdes oiseaux non vaccinés qui sontsusceptibles au virus de la grippeaviaire et deviendraient infectés/mourraient si le virus était encoreprésent ou réintroduit.• Accordez au moins 10 minutes pourque le détergent pénètre et détachela saleté de toutes les surfaces avantle rinçage avec de l’eau propre.• Assurez-vous alors que toutl’équipement est complètementdésinfecté avec Virkon® (ou unautre désinfectant que vous soyezen train d’employer).• Après avoir effectué le traitementde tous les secteurs (bâtimentsde ferme, quais de chargement,chemins, basses-cours, et cetera...)avec le désinfectant, il est importantde le laisser s’imbiber pendant aumoins 30 minutes; puis, si possiblerincez-le avec de l’eau.• Après sept (7) jours, répétezle procédé complet dedécontamination de la deuxièmephase.La repopulation des secteurs infectésavec des oiseaux non infectés nedevrait pas se produire jusqu’à ceque la flambée de grippe aviaireait été déclarée supprimée par lesfonctionnaires responsables de lasanté des animaux. Attendez alors 21jours additionnels (3 semaines) avantd’apporter de nouveaux oiseaux. Ilse peut qu’il vous faille introduiredes oiseaux sentinelles pour tester lesecteur avant d’apporter de la nouvelle

FICHES MÉMO POUR LES PARTICIPANTSFiches Mémo pour lesParticipantsFiche Mémo pour le Participantn o 1 – Faits sur la décontaminationFiche Mémo pour le Participantn o 2 – Survie du virus de la grippeaviaireFiche Mémo pour le Participantn o 3 – Désinfectants utilisés pour ladécontaminationFiche Mémo pour le Participantn o 4 – Liste des articles contenus dansla trousse de décontaminationFiche Mémo pour le Participantn o 5 – Concepts généraux donton doit se rappeler pendant ladécontamination des secteurspotentiellement infectésFiche Mémo pour le Participantn o 6 – Procédures générales dedécontamination à suivre pendant desflambées de grippe aviaireFiche Mémo pour le Participantn o 7 – Biosécurité de routineFiche Mémo pour le Participantn o 8 – Procédures de décontaminationpour les marchés d’oiseaux vivantsFiche Mémo pour le Participantn o 9 – Fiche technique d’informationdu désinfectant Virkon®Fiche Mémo pour le Participantn o 10 – Illustration d’une basse-cour

Fiche Mémo pour le Participant n o 1Faits sur la décontaminationQu’est-ce que la décontaminationLa décontamination est le processus denettoyer pour détruire les organismesinfectieux et les empêcher detransmettre des maladies.Pour quoi décontaminer?Il y a trois motifs importants pourdécontaminer lors d’une flambée de lagrippe aviaire:1 La décontamination empêche lacontamination des personnes et del’environnement.2 La décontamination empêche que levirus se propage davantage pendantune flambée.3 La décontamination permet larepopulation sûre des bandesaprès une période appropriée dequarantaine.

Fiche Mémo pour le Participant n o 2Survie du virus de la grippe aviaireAprès une flambée de grippeaviaire, le virus peut survivrependant:• Au moins 35 jours à 4°C dans lesexcréments de volaille (crottes).Même une toute petite quantité decrottes infectées peuvent contenirassez de virus pour infecter ungrand nombre d’oiseaux.• Plusieurs jours en carcasses à l’air ouà température ambiante.• Jusqu’à 23 jours si frigorifié à 4o C• Jusqu’à quatre jours à 22o C et plusde 30 jours à 0o C s’il est dans l’eau• En général, les températuresplus chaudes tuent le virusplus rapidement, alors que lestempératures plus froides l’aidentà vivre plus longtemps. Ceci est undétail important à considérer auxendroits où il y a des hivers froidspuisque dans ces circonstancesla grippe aviaire peut survivrepotentiellement plus longtemps dansl’environnement.Les chercheurs scientifiquesdans ce domaine ont égalementtrouvé que:• Les mains/la peau, les vêtementsou les chaussures peuvent devenircontaminées avec le virus de lagrippe aviaire, soit directementà partir des volailles, soit à partirdes excréments, nids, cages oud’autres matériaux qui aient été encontact avec des oiseaux infectés.Le virus peut être porté aux fermesindemnes dans les chaussures,l’habillement, les pneus et le matérield’élevage – étalant ainsi le virus versdes nouvelles aires.• La grippe aviaire peut être propagéedirectement par l’alimentation,l’eau et l’équipement souillés. Parconséquent, le nettoyage et ladésinfection des aires où l’on gardeles volailles sont quelques des étapesles plus importantes qui peuventêtre prises pour éliminer la diffusiondu virus à des bandes en bonnesanté.• L’engrais de volaille et la literie desbandes atteintes du virus peuventsouiller la poussière et le sol, causantl’infection dans les personnes quandla poussière souillée est inhaléeou entre dans leurs yeux, nez oubouche.• Les marchés d’oiseaux vifs, sesont avérés comme une sourceimportante de transmission de lagrippe aviaire. Puisque le virus de lagrippe aviaire peut être étalé auxoiseaux non infectés par déjectionsinfectés, salive, mucus ou autresfluides animaux, il est important depratiquer des procédures sanitairesstrictes pendant que la volaille estau marché. Ces procédures incluentla décontamination de l’alimentation,de l’eau, des cages et de tout autreéquipement utilisé au marché avantet après le marché.

Fiche Mémo pour le Participant n o 3Désinfectants utilisés pour la décontaminationGroupesde produitschimiques quidésinfectentOxydantsAlcoolsHalogènesPhénoliquesAmmoniumsquaternaires“Quats”Nomscommuns pourdes produitschimiquesPeroxyded’hydrogèneVirkon®L’alcool defrottement utiliséaux cliniques desantéProduits chimiquesbasés au chlorecomme les agentsde blanchimentLysolBenzaRid

Fiche Mémo pour le Participant n o 4Liste des articles contenus dans la trousse de décontaminationÉquipment de protectionindividuelle (EPI)• Combinaison (Enviroguard aveccagoule intégrée et des bottes)• APR N-95• Gants externes (en nitrile, taille 10,11mm)• Gants intérieurs (en vinyle, 4mm)• Lunettes de protection (à preuved’éclaboussures chimiques)• Couvre-chaussures (DuPontProshield III)• Tablier (en plastique, dans un sachet)Produits pour le contrôle desmatériaux infectieux• Chiffon viricide PDI HB Sani Cloth(un grand chiffon à usage individuel)• Lingettes alcoolisées, 70% -- Généralement employéspour s’essuyer les mains aprèsl’enlèvement de l’ EPI• Sac pour déchets infectieux• Bec pulvérisateur• Récipient de pulvérisateur (capacitéde 8.52 litres) pour distribuerVirkon® ou tout autre désinfectant• Produits pour effectuer des testsd’ajustement (avec de la solution deBitrexDésinfectants• Désinfectant Virkon® (tambour 5kilogrammes)• Lingettes désinfectantes Sani Cloth( boîte métallique contenant 160lingettes PDI HB Sani Cloth)Produits de nettoyage/décontamination• Brosse de frottement• Barre de savon (4 dans chaquetrousse) pour se laver les mains• Bassin gonflable pour créer un bainde pieds• Seau (capacité de 19 litres,approximativement)

Fiche Mémo pour le Participant n o 5Concepts généraux dont on doit se rappeler pendant ladécontamination des secteurs potentiellement infectésLes résidus d’oiseaureprésentent le plus granddanger de propagation du virusde la grippe aviaire.Le virus de la grippe aviaire aime desconditions moites et sales, commecelles que l’on trouve là où lesexcréments sont présents. Il est doncessentiel de désinfecter complètementles articles qui ont été en contact avecdes crottes d’oiseau - cages, chaussures,vêtements - avant de travailler avec lavolaille ou entrer dans un endroit oùl’on garde la volaille.Le matériel organique tel queles résidus ou la saleté peutabsorber quelques désinfectantschimiques et les rendre moinsefficaces.La présence des résidus ou descouches de saleté rendent beaucoupplus difficile l’anéantissement du virus.Par conséquent, le matériel organiquetel que la saleté et les résidus doitd’abord être enlevé par le frottementou le brossage avec du savon et del’eau ou du désinfectant avant quela désinfection par n’importe quelleméthode puisse être efficace.Le virus survit bien dans l’eau.Le simple lavage ou la pulvérisationavec de l’eau ne tuera pas le virus,et peut même aider le virus às’étaler dans des secteurs où il peutinfecter des oiseaux. Par conséquent,n’importe quel lavage pour enlever lacontamination devrait toujours êtrefait avec des détergents (ou de l’eausavonneuse) ou des désinfectantsspécifiques tels que le Virkon®contenu dans votre trousse. Le rinçagefait avec de l’eau seulement n’est passuffisant.La transmission du virus a étéfortement liée au transportdes oiseaux vivants, des oiseauxmorts infectés, ou aux orduresdans des véhicules.Il est très important de se rappelerde décontaminer n’importe queléquipement utilisé pour déplacer lesoiseaux vivants, malades ou morts. Ceciinclut les cages, les caisses, les boîtes/casiers, les paniers et les véhicules. Pouréviter d’infecter un secteur encore, ilest important d’enlever les oiseauxdes lieux avant d’entreprendre ladécontamination et de veiller que toutvéhicule ou équipement introduit dansun secteur après la décontaminationsoit également décontaminé.Le virus de la grippe aviaireest anéanti par la plupart desdésinfectants.Comme l’on discutait avant, le virusde la grippe aviaire est sensible auxdétergents qui détruisent la graissecontenant la couche externe du virus.Le virus a besoin de cette couchepour attaquer les cellules des animaux,donc si l’on élimine la couche, le virusdevient inefficace.

Il est important de déterminerla concentration et la quantitéappropriées des désinfectantspour qu’ils soient efficaces.Quant au Virkon® dans vos troussesde décontamination, vous devrezmélanger chaque 10 grammes depoudre à un litre de l’eau.Pour que le désinfectant soit efficace,il doit être en contact avec le matérielou la surface infecté pour une quantitéde temps qui correspond à son dégréde contamination. Dans le cas dessurfaces/articles très souillés, il fautlaisser le désinfectant là-dessus pluslongtemps. Le fabricant de Virkon®recommande qu’il reste en contactavec des secteurs (sales) fortementinfectés pendant 24 heures sans êtrerincé.Considérez toujours desfacteurs tels que le temps (latempérature) et comment lesdésinfectants pourraient agirl’un sur l’autre avec d’autresmatériaux dans le secteur étantdécontaminé.Les désinfectants pourraient avoirdes réactions dangereuses à d’autresproduits chimiques dans le secteur- tel que Virkon®, qui généralementne devrait pas être employé près dela lessive. Le meilleur c’est de vérifierl’étiquette du désinfectant que vousemployez pour vous assurer qu’il n’y aaucun autre matériel dangereux quevous devriez éviter.

Fiche Mémo pour le Participant n o 6Procédures générales de décontamination à suivrependant des flambées de grippe aviaireA. Pre-activités—Le portde l’EPI et la préparation duVirkon®Avant de commencer n’importe quelledes procédures de décontamination,tous les membres du personneldevront recevoir (et mettre) leurs EPIpour se protéger. L’EPI consiste de:• Un APR N-95• Lunettes de protection• Une combinaison• 2 paires de gants• Couvre-chaussures ou des bottesVirkon® a été choisi par l’Organisationdes Nations Unies pour l’Alimentationet l’Agriculture (FAO en anglais)comme le désinfectant de choix et estfourni par l’USAID dans ces troussesde décontamination. Quoique l’emploidu Virkon® se soit avéré sûr, évitezde le laisser entrer en contact avecvotre peau. Donc, vous devez vousrappeler d’employer votre EPI pendantque vous mélangez et utilisez Virkon®pour protéger votre peau, yeux, nez etbouche.Virkon® est distribuée sousforme d’une poudre qui peut êtrefacilement mélangée avec de l’eauà l’emplacement d’une flambée degrippe aviaire avant son emploi surdes secteurs souillés. Si l’eau manque,ou si vous êtes dans des secteurshumides ou marécageux, vous pouvezsaupoudrer le secteur à désinfecter.Cependant, on ne s’est pas encoreavéré que ceci est aussi efficace quemélanger la poudre avec de l’eau et lapulvériser.Il y a un certain nombre de procédureset de programmes de décontaminationrecommandés pour des situations deflambée de la grippe aviaire. Ce quisuit est le procédé recommandé parle fabricant de Virkon® (Dupont -Procédures de décontamination pourle nettoyage et la désinfection des lieuxde ferme atteints de grippe aviaire) eton l’utilise comme un exemple.Lien ressource: http://www.antecint.co.uk/main/avidecontam.htmB. Première Phase deDésinfection• Désinfectez toutes les carcassesd’oiseau avec du désinfectant oude l’eau savonneuse avant de lesenlever pour les brûler ou enterrer.• Lavez avec un désinfectant ou del’eau savonneuse tous les secteursavec lesquels les oiseaux ont eu ducontact direct ou indirect (tel quebâtiments, cages, cours)• Imbibez complètement toutes lesliteries, débris et matériel fécal; lesmurs et espaces intérieurs du toitoù l’on loge des oiseaux. Les mursexternes doivent seulement êtredésinfectés quand ils font face à unsecteur où des oiseaux infectés ontété gardés ou sont passés pendantle procédé de décontamination.

• Permettez que le désinfectants’imbibe dans toutes les surfacespendant 24 heures - ne le rincez pasimmédiatement.• Désinfectez les routes, les bassescours,et les sentiers piétons desfermes/villages complètement,en vous assurant que les coursd’eau sont protégés contre lacontamination par le virus. Lameilleure manière est de choisirdes emplacements pour réaliserla désinfection qui soient loin desfossés ou des vidanges, et de dirigerl’écoulement du désinfectant auxaires herbeuses où il sera peususceptible de se vider dans dessources d’eau.• Lorsque vous vous débarrassez dudésinfectant, vous pouvez le verserdans la boue ou dans l’engrais.Quand ce n’est pas possible, despetites quantités de désinfectantpeuvent être versées sur une aireverte qui ne soit pas près de l’eau,dans des vidanges ou dans desréservoirs septiques. La paille qui aété imbibée avec du désinfectantdevrait être compostée ou mise ensacs et prise à un emplacement deremblai ou d’incinération.• Puisque le virus de la grippe aviairepeut être écarté sur les pieds derongeurs, il est également importantde mettre en place un programmeefficace pour le contrôle desrongeurs ou un programme intégréde contrôle des parasites.Lien ressource: http://www2a.cdc.gov/PHTNOnline/registration/detailpage.asp?res_id=828C. Deuxième Phase deDésinfectionIl est important d’attendre au moins24 heures entre la première et ladeuxième phase de désinfection• D’abord, débarrassez les bâtimentsde toute matière organique (déchetset saleté) – soit en l’enterrant sur leslieux, ou en la mettant dans des sacset en la prenant à un remblai ouincinérateur désigné.• Nettoyez les systèmes de ventilationet puis désinfectez-les employantun tissu imbibé dans Virkon®. Siles systèmes ne peuvent pas êtrenettoyés en place, enlevez-les pourbien nettoyer le secteur et pour ledésinfecter avant de les remplacer.• Si vous avez une rondelle depression, remplissez-le avec de l’eaule détergent et employez-la (surun réglage à basse pression) pourimbiber complètement les planchers,les murs, les plafonds, les espacesde toit, les boîtes de literie etd’alimentation en tous les bâtimentsqui ont été en contact direct avecles oiseaux infectés. Si vous n’avezpas une rondelle de pression, vouspouvez utiliser le pulvérisateur pourfaire ceci.• Frottez les secteurs qui sontaccessibles avec les brosses fourniesdans la trousse de décontamination.• Accordez au moins 10 minutes pourque le détergent pénètre et détachela saleté de toutes les surfaces avantle rinçage avec de l’eau propre.

• Assurez-vous alors que toutl’équipement est complètementdésinfecté avec Virkon® (ou unautre désinfectant que vous soyez entrain d’employer).• Après avoir effectué le traitementde tous les secteurs (bâtiments deferme, quais de chargement, chemins,basses-cours, et cetera...) avec ledésinfectant, il est important de lelaisser s’imbiber pendant au moins30 minutes; puis, si possible rincez-leavec de l’eau.Après sept (7) jours, répétezle procédé complet dedécontamination de la deuxièmephase.• La repopulation des secteurs infectésavec des oiseaux non infectés nedevrait pas se produire jusqu’à ceque la flambée de grippe aviaireait été déclarée supprimée par lesfonctionnaires responsables de lasanté des animaux. Vous devriezattendre 21 jours additionnels (3semaines) avant d’apporter denouveaux oiseaux.• Il se peut qu’il vous faille introduiredes oiseaux sentinelles pour testerle secteur avant d’apporter dela nouvelle volaille. Les oiseauxsentinelles sont des oiseaux nonvaccinés qui sont susceptiblesau virus de la grippe aviaire etdeviendraient infectés/mourraientsi le virus était encore présent ouréintroduit.

Fiche Mémo pour le Participant n o 7Biosécurité de RoutineLa biosécurité de routine est importantdans les basse-cours, fermes avicolescommerciales, et partout où l’on gardedes oiseaux vivants.Les procédures dedécontamination liées à labiosécurité se concentrent surl’habillement, les chaussures, lesvéhicules et l’équipement.Quant à l’habillement, tous lesvisiteurs aux fermes ou aux installationspour l’abatage de la volaille sontrequis de porter des combinaisons oud’autres vêtements de protection. Cethabillement devrait être nettoyé avecdu savon et l’eau (ou du détergent)après chaque utilisation, à moinsqu’il soit jetable. Si vous portez descombinaisons jetables, des tabliers oud’autres vêtements, vous devriez vousdébarrasser d’eux dans un sac pourdéchets infectieux – comme nousapprenions hier - et vous assurez qu’ilssont correctement brûlés ou enterrés.Quant aux chaussures, s’il s’agit desfermes ‘propres’ les visiteurs devraientidéalement porter des chaussuresfournies par la ferme qu’ils sont entrain de visiter. Si aucune chaussuren’est disponible, vous devriez d’abordbien frotter tous les débris deschaussures que vous portez, et alorsles laver avec de l’eau et du savon.Pour en finir, nettoyez-les avec undésinfectant. Dans le meilleur descas, des bains de pieds contenant dudésinfectant devraient être placésà l’entrée des maisons de volaillepour nettoyer les chaussures lors desentrées et sorties. Vous devriez d’abordfrotter ou brosser les débris de voschaussures avant de marcher dans lebain de pieds. Typiquement, le bain depieds a 5 centimètres de profondeuret devrait couvrir entièrement le fondde la chaussure.La désinfection des véhicules estimportante parce que la transmissiondu virus de la grippe aviaire a étéfortement liée au transport desoiseaux vivants, aux oiseaux infectésmorts, ou à la literie dans des véhicules.Tous les trains d’atterrissage, pneus etwagons des véhicules devraient êtredésinfectés avant que les véhiculesentrent dans la ferme à l’aide d’unpulvérisateur de pompe standardcontenant du désinfectant. Pendantque vous réalisez la désinfection, restezenviron 30 centimètres à l’écart duvéhicule si vous utilisez un pulvérisateurde main. Pour des pulvérisateurs depuissance, vous devriez vous tenirenviron 1 mètre à l’écart du véhicule,et vous assurer que toutes les surfacesdu véhicule qui sont désinfectées sonthumides et égouttement.Tout l’équipement apporté sur uneferme non infectée devrait êtrenettoyé et désinfecté avant d’y êtreintroduit. Ceci signifie des cages,caisses, outils agricoles, des balais, despelles, des véhicules et leurs pneus.Ils devraient d’abord être brossés oufrottés de sorte que les débris soientenlevés, et puis être lavés avec de

l’eau détersive ou savonneuse, suiviedu désinfectant. Tout l’équipementà la ferme devrait être nettoyé etdésinfecté de façon régulière. Parexemple, des véhicules devraient êtrenettoyés chaque fois qu’ils entrent dansla basse-cour d’un autre endroit.

Fiche Mémo pour le Participant n o 8Procédures de décontamination pour les marchésd’oiseaux vivantsLes procédures de décontaminationpour les marchés d’oiseaux vivantssont également importantes. Cesprocédures incluent ce qui suit:• Le marché devrait être nettoyéet désinfecté après chaque jourde vente. Ceci signifie que chaquesurface qui entre en contact directou secondaire avec les oiseaux ouleurs excréments doit être nettoyéet essuyé ou pulvérisé avec dudésinfectant.• Tous les équipements et surfaces quisont en contact direct ou secondaireavec des oiseaux ou leurs résidusdevraient également être nettoyéset désinfectés, y comprises lescaisses de poulet, leurs cages etl’équipement d’alimentation/eau,les balances, les compteurs et lesplanchers.Rappelez-vous, la transmission du virusde la grippe aviaire a été fortementliée au transport des oiseaux vivants,aux oiseaux infectés morts, ou auxordures dans les véhicules. Donc, il estimportant de décontaminer tous lesvéhicules – y compris leurs pneus, lessoutes de train et le train d’atterrissage-- qui arrivent aux portes, aux environs,aux quais de chargement et auxréceptions de marchandises du marché.Les véhicules devraient généralementêtre garés au moins 30 mètres à l’écartdes maisons de volaille.• Tous les équipements et caissesdevraient être nettoyés etdésinfectés avant qu’ils soientretournés à la ferme ou au ménage.• Lors du nettoyage des véhicules oul’équipement, il est recommandéque chaque article soit démonté:ainsi vous pouvez atteindre tousles endroits où le virus a pu êtrepénétrer. D’abord, lavez l’équipementde l’eau et du savon, rincez-le, etpuis pulvérisez ou essuyez-le avec undésinfectant tel que Virkon®.

Fiche Mémo pour le Participant n o 9Fiche technique d’information du désinfectant Virkon®Virkon® est le plus souvent unepoudre colorée rose/gris/ jaune/orangequi est mélangée avec de l’eau pourformer une solution de 1% ou de2% (c.-à-d., 10g ou 20g par litre). Lacouleur est utile parce qu’elle se faneau fur et à mésure que le désinfectantest employé, indiquant aux gens quela solution désinfectante doit êtreremplacée.En général, la poudre (une fois mélangéavec de l’eau) rends une solution quireste stable pendant 7 jours.Lien de ressource: www.antecent.co.uk/main/virhous.htmProcédures de mélange• Utilisez des gants en latex lorsquevous mélangez et manipulez lapoudre et la solution.• Portez un APR N-95 pour éviterl’inhalation de la poussière finependant que vous préparez lasolution.• Une masque et de la protectionpour les yeux (lunettes deprotection) devraient être employéslorsque l’on travaille avec cessolutions finement pulvérisées ouleurs vapeurs.• La solution de Virkon® est utilisablependant les 7 jours qui suivent sapréparation ou jusqu’à ce que sacouleur, qui vient d’un colorantindicateur incorporé, se fane.• La poudre de Virkon® absorbe lesliquides, les décontaminant et lesrendant faciles à enlever sans crainted’infecter toute autre chose.Points de sûreté pur l’utilisationde Virkon®• Virkon® n’est pas toxique mais ilfaut tout de même éviter le mettreen contact avec la peau et les yeux.(Virkon® porte l’étiquette standardde pesticide, mais des études ontprouvé qu’il est non-irritant à lapeau et aux yeux).• Si vous utilisez du Virkon® surdes surfaces désignés pour lapréparation de la nourriture, il estimportant de bien rincer le secteuravec de l’eau après le sèchement àl’air libre.Dosage• Virkon® doit être dosé à 1% w/v(c.-à-d., 10 grammes/litre de l’eau)• Un temps de contact de 10 minutestiendra compte de la désinfectionà niveau élevé pour tous les virusconnus

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MODULE D’APPRENTISSAGE 3FORMATION SUR LES TROUSSES DE LABORATOIRE,L’UTILISATION DES TESTS DE DÉPISTAGE RAPIDE, ETL’EMBALLAGE / LA MANUTENTION / L’EXPÉDITIONDES ÉCHANTILLONSNOTES DU FORMATEUR2ème jour: séance del’après-midiLe formateur prend laparole:Bon après-midi à tous, et bienvenueau dernier module de cet atelier deformation de deux jours sur la santéet la sécurité. Le module 3 vousexplique comment utiliser les troussesde laboratoire, dont le prélèvementd’échantillons auprès des humainset des animaux sur le terrain, etl’importance de suivre les procéduresexactes d’emballage, de manutentionet d’expédition. Commençons donc dèsmaintenant.Comme vous pouvez le constater, lesobjectifs de ce module sont indiqués surle chevalet. Passons-les en revue un parun.Remarque au formateur:Écrivez les objectifs suivants au tableauou sur le chevalet, et lisez-les à hautevoix:Activité 1: Pourquoi est-il important deprélever et de soumettredes échantillons à des finsd’analyseActivité 2: Introduction au contenu dela trousse de laboratoireActivité 3: Comment prélever deséchantillons et effectuer destests de diagnostic rapidesur les oiseauxActivité 4: Comment prélever deséchantillons et effectuer destests de diagnostic rapidesur les humainsActivité 5: Comment emballer etpréparer des échantillons envue du transport vers unlaboratoire du paysActivité 6: Techniques de mise auxrebutsÀ L’USAGE EXCLUSIFDU PERSONNEL DELABORATOIREModule 4: Emballage etexpédition d’échantillons auxLaboratoires de référenceinternationale selon lesrègles de l’AITA (Associationinternationale du transportaérien, IATA en anglais)Activité 1: Programme de formation del’AITA ou de SAF-T-PACVersion préliminaire, p. 93

Activité 2: Préparation de ladocumentation et desétiquettes d’expéditionActivité 3: Passer l’épreuved’homologation de l’AITApour l’expéditionLe formateur prend laparole:Vous constaterez que des objectifssupplémentaires ont été définis àl’intention du personnel de laboratoirequi assiste à cette séance. Le personnelvétérinaire et de laboratoire assisteraau premier segment de la séance del’après-midi sur le module 3. Ensuite, seulle personnel de laboratoire demeurerapour le dernier segment de la formation,afin de passer l’épreuve d’homologationsur les procédures internationalesd’emballage et d’expédition.Avant de poursuivre, y en a-t-il qui ontdes questions sur l’horaire? La formationest presque terminée!Remarque au formateur:Répondez aux questions s’il y a lieu;ensuite, poursuivez.Activité 1: Pourquoi il estimportant de prélever et desoumettre des échantillons à desfins d’analyseLe formateur prend laparole:S’il n’y a pas d’autres questions,commençons par discuter de l’importancede suivre les procédures exactes deprélèvement et de soumission deséchantillons pour fins d’analyse.La seule façon de confirmer la flambéede la grippe aviaire dans votre régionconsiste à prélever de bons échantillonsdu virus, et de vous assurer qu’ils serendent à bon port pour être analysés.En fait, une flambée n’est pas considéréecomme flambée (et non compilée dansles statistiques internationales) à moinsque les échantillons n’aient été soumisà l’Organisation mondiale de la santé(OMS) et à l’Organisation mondiale dela santé animale (OIE) afin de confirmercette flambée. Les échantillons qui sontexpédiés aux laboratoires internationauxseront également analysés à des finsde typage génétique, ce qui aide leschercheurs à assurer le suivi du virus etsa propagation, et à informer les gens quidéveloppent des vaccins contre la grippeaviaire. Cette procédure d’échantillonnage,d’emballage et d’expédition constitueun élément très important, voire mêmele plus important, de la prévention etdu contrôle du virus de la grippe aviairedans le monde.Durant cette séance de formation, nousvous expliquerons les étapes à suivrepour vous assurer de bien prélever,emballer et expédier les échantillons, etainsi aider à contenir la grippe aviairedans votre région.Version préliminaire, p. 94

Nous commencerons par passer enrevue certains renseignements générauxsur le prélèvement d’échantillons humainset animaux à des fins d’analyse enlaboratoire. Certains d’entre vous sontdéjà familiers avec ces méthodes, maisune révision est toujours utile.La chose la plus importante à serappeler est que vous devez toujoursprocéder aux tests sur les animauxou les humains malades. Les tests neseront pas efficaces si vos échantillonsproviennent d’animaux ou d’humains quine démontrent aucun symptôme relatif àun cas de la grippe aviaire.Chez les animaux, il est préférable deprélever un échantillon dans la trachéeou les voies respiratoires d’un oiseauvivant. Comme la grippe aviaire peutaffecter le tractus intestinal des oiseaux(en plus des voies respiratoires), vouspouvez également utiliser les échantillonscloacaux provenant d’oiseaux maladesou morts récemment.Vous pouvez tester les échantillonsfécaux (ou les déjections) collectés dansles cages ou dans l’environnement, maisuniquement si vous ne pouvez obtenird’échantillons cloacaux et trachéaux.Avec les échantillons fécaux, vous n’êtespas certain s’ils proviennent des oiseauxvivant en cage ou de l’environnement.Si les oiseaux sont morts, vous pouvezobtenir des échantillons par le biaisd’un lavage des poumons, des tissusde la trachée et des poumons, ou desdéjections.Chez les humains, il existe trois méthodespour obtenir des échantillons visant àdiagnostiquer la présence de la grippeaviaire dans les voies respiratoires:• écouvillon nasal• écouvillon dans la gorge• écouvillon trachéalNous discuterons plus longuement de cestrois méthodes au moment d’expliquerle test de diagnostic rapide de la grippeaviaire chez les humains.Activité 2: Introduction aucontenu de la trousse delaboratoireLe formateur prend laparole:Pour obtenir ces échantillons, vous aurezbesoin de plusieurs articles compris dansvotre trousse de laboratoire. Regardonsmaintenant la Fiche Mémo pourle participant n o 7, qui énumèretous les articles de votre trousse delaboratoire. Chaque trousse de laboratoireest expédiée dans une grande boîte decarton.Version préliminaire, p. 95

Remarque au formateur:Lisez la liste des articles de la trousse de laboratoire fournie par l’USAID, etmontrez chaque article durant cette nomenclature. Le tableau suivant vous sertde guide.Articles de la trousse delaboratoire USAIDQuantitéÉquipement de protection individuelleSac à déchets infectieuxTampons alcoolisés, 70%Essuie-tout PDI Sani ClothCombinaison blanche DuPont Tyvekavec capuchon et bottesCouvre-chaussures DuPont Proshield IIIGants internes en vinyle, 4 milLunettes de protection contre les éclaboussuresavec évents à déflecteurAPR N-95Nécessaire pour test d’APR(solution Bitrex)Tablier en plastique4 par trousse16 par trousse1 boîte de 150 essuie-tout partrousse4 par trousse4 paires par trousse4 paires par trousse4 paires par trousse4 paires par trousse1 test par trousse4 par trousseÉquipement d’échantillonnage et de testNécessaire pour test d’antigènes de lagrippe aviaire de type A SynbioticsTrousse combo de transport viral universelBDModule d’échantillonnage biologiqueTrousse de test Directigen A+B BDpour les humainsPince à tissu 1x2 Pince à dents5-1/2 po1 boîte de 30 tests1 boîte de 50 trousses1 par trousse1 boîte de 30 tests4 par trousseVersion préliminaire, p. 96

Ciseaux chirurgicaux droits CRSCiseaux à volaille, coutellerieHeritage 7220Solution salineÉcouvillons en polyuréthanePipettes5 par trousse4 par trousse1 bouteille de 1 000 ml par trousse5 écouvillons (2,7 po) par trousse5 pipettes (5 mL) par trousseÉquipement d’échantillonnage et de testÉtiquettes-adressesEmballage d’expédition isolé dematières infectieuses Safe-T-PakSTP-310Bloc réfrigérant Safe-T-Pak STP 314Bloc réfrigérant au nitrated’ammoniumMarqueurs SharpieBandes élastiquesSacs de collection d’échantillonsstériles Whirl-Pak 5x12 poBloc réfrigérant IglooRuban d’emballage 3 poActivité 3: Comment préleverdes échantillons et procéder àdes tests de diagnostic rapide surles oiseauxNous vous expliquerons maintenantcomment procéder à des tests dediagnostic rapide à l’aide des troussesqui sont devant vous. Des testsde diagnostic rapide peuvent êtreexécutés autant sur les humains quesur les animaux. Commençons par letest sur les animaux (vétérinaire), etensuite, nous passerons aux tests surles humains.1 rouleau de 100 étiquettes1 boîte de 4 emballages d’expédition1 boîte par trousse12 par trousse1 douzaine par trousse1 sac de 25Paquet de 5001 par trousse1 rouleau par trousseLe formateur prend laparole:Avant d’examiner la trousse de test,j’aimerais vous poser une question.Lorsque vous testez un oiseau pourdépister le virus de la grippe, est-ilnécessaire de porter l’EPI? Qui dit «oui»?Qui dit «non»?En fait, vous devez porter l’EPI pourdiverses raisons, dont nous avons discutéhier dans le cadre du module surl’équipement de protection individuelle. Jevous invite maintenant à vous diviser enVersion préliminaire, p. 97

trois groupes afin de discuter de ce quisuit:Pourquoi croyez-vous qu’il est nécessairede porter l’EPI au moment de tester lesanimaux ou les humains pour dépisterla grippe? Quel EPI recommanderiezvousà un collègue qui a le mandat detester des animaux soupçonnés d’êtremalades? Que diriez-vous à un collèguequi ne veut pas porter l’EPI lorsqu’ilteste une personne présentant lessymptômes de la grippe? Écrivez vosmotifs et recommandations, car nous endiscuterons en groupe dans quelquesminutes.Remarque au formateur:Dans 10 minutes, demandez auxparticipants de vous faire part de leursobservations. Écrivez les réponsessur le chevalet ou au tableau, et nedonnez les réponses exactes que si unparticipant énonce des idées erronéesou confuses.Le formateur prend laparole:Je suis fier de constater que la plupartd’entre vous reconnaissez l’importancede l’EPI lors des tests. Maintenant quenous portons notre EPI, à tout le moinsdans l’esprit, poursuivons l’exerciced’apprentissage sur le test de diagnosticrapide des oiseaux.Le test dont nous parlerons est un testsensible et particulier pour le dépistagedu virus de la grippe aviaire de type A.C’est un test rapide, car vous obtenezles résultats en 15 minutes. Voici d’autrescaractéristiques uniques à ce test:• Il est convivial.• Il peut être utilisé autant aulaboratoire qu’à la ferme.• Il est très sensible, même si le virus està peine présent.• Il détecte tous les sous-types de virusde la grippe de type A, qui est le typede la grippe ayant causé toutes lesflambées de la grippe aviaire.• Il peut être utilisé pour tester tous lestypes d’oiseaux, dont les troupeauxde poulets, de dindes, de canards oud’oiseaux migrateurs, afin de dépisterl’exposition active au virus de la grippe.Le test est appelé Flu Detect, et futélaboré par Synbiotics Corporation.Il est utilisé partout dans le monde,notamment pat USAID (qui vous fournitces trousses), ainsi que par l’Organisationdes Nations Unies pour l’alimentation etl’agriculture (FAO) dans les pays infectéset à haut risque.Voici donc des trousses dont nousexaminerons le contenu. Vous pouvezégalement consulter la Fiche Mémopour le participant n o 1 pour obtenirde plus amples renseignements sur letrousse de test Flu Detect pour animaux.Remarque au formateur:Remettez les trousses aux participants.Il y a suffisamment de trousses pourchacun des participants. Assurez-vousque ceux-ci sont répartis en petitsgroupes, et que chacun possède sapropre trousse qu’il peut examiner etmanipuler.Version préliminaire, p. 98

Le formateur prend laparole:La trousse Flu Detect a été conçuepour tester les échantillons trachéaux,mais elle peut servir également àtester les échantillons cloacaux. Voici lepremier article dont vous aurez besoin:l’écouvillon qui sert à prélever l’échantillond’un oiseau. Prenez donc l’écouvillon dansvotre trousse.Flu Detect – Test d’un écouvillontrachéal uniqueLes échantillons trachéaux doivent êtreprélevés derrière la langue de l’oiseau,tel qu’indiqué à la figure 1 de la FicheMémo pour le participant n o 2.La trachée des oiseaux vivants estécouvillonnée en insérant un écouvillondans la trachée, et en écouvillonnantdoucement la paroi. L’écouvillon estensuite placé dans le moyen de transportutilisé.Vos trousses de laboratoire doiventcomporter des moyens de transport.Sinon, vous pouvez fabriquer votre propremoyen de transport viral en suivant leslignes directrices de l’OIE (Organisationmondiale de la santé animale).Bien. Vous pouvez également préleverdes écouvillons trachéaux d’animauxmorts après avoir retiré les poumonset la trachée de la carcasse. Tenez latrachée avec une main gantée et insérezl’écouvillon dans le sens de la longueur.Écouvillonnez la paroi avec vigueur.Placez ensuite l’écouvillon dans le moyende transport.Si vos testez un échantillon trachéalsur place avant d’emballer les autreséchantillons à des fins d’expédition,veuillez suivre le processus indiqué dansla Fiche Mémo pour le participantn o 3, que nous allons lire ensemble.Tous les échantillons doivent reposer àla «température ambiante» avant d’êtretestés.• Versez 8 gouttes (environ 250 µl)de tampon d’extraction dans uneéprouvette propre.• Placez l’écouvillon contenantl’échantillon dans l’éprouvette, ettournez l’écouvillon 5 à 10 fois dans letampon.• Lorsque vous retirez l’écouvillon del’éprouvette, appuyez l’écouvillon contrela paroi de l’éprouvette de façonrépétitive jusqu’à ce qu’il n’y ait plusde liquide qui s’écoule de l’écouvillon.• Mettez l’écouvillon aux rebuts dansun conteneur de matières nocives (parexemple, le sac rouge pour matièresnocives compris dans l’EPI).• Si les échantillons ne sont pas testésimmédiatement, mettez le capuchonsur l’éprouvette et rangez l’échantillondans la glacière comprise dans latrousse.• Insérez la bandelette réactive dansl’éprouvette.• Laissez l’éprouvette reposer à latempérature ambiante pendant 15minutes.• Lisez les résultats de la bandeletteréactive.Flu Detect – Test d’un seulécouvillon cloacalVersion préliminaire, p. 99

Les échantillons cloacaux doivent êtreprélevés dans la région cloacale del’oiseau pour éviter la présence d’unegrande quantité de matières fécalessolides ou de sang visible, tel qu’illustré àla figure 2 de la Fiche Mémo pour leparticipant n o 2.Pour obtenir un écouvillon cloacald’un oiseau vivant, insérez l’écouvillonprofondément dans l’orifice etécouvillonnez vigoureusement la paroi.L’écouvillon doit être taché de matièresfécales. Placez-le ensuite dans le moyende transport.Les échantillons fécaux provenant descages d’un poulailler malade dans lesmarchés d’oiseaux ou des oiseauxsauvages dans les champs sontprélevés à partir de selles humidesfraîchement déposées; l’écouvillon doitêtre entièrement recouvert de ces selles.L’écouvillon est ensuite placé dans lemoyen de transport.Si vous testez un seul écouvillon cloacalsur place, veuillez suivre le processusénoncé dans la Fiche Mémo pour leparticipant n o 3, que nous allons lireensemble.Tous les échantillons doivent reposer àla «température ambiante» avant d’êtretestés.• Versez 0,5 ml de liquide BHI ou deliquide servant au transport viral dansune éprouvette propre.• Trempez 1 écouvillon cloacal dans leliquide BHI ou le liquide servant autransport viral.• Placez l’écouvillon contenantl’échantillon dans l’éprouvette, ettournez l’écouvillon 5 à 10 fois dans letampon.• Lorsque vous retirez l’écouvillon del’éprouvette, appuyez l’écouvillon contrela paroi de l’éprouvette de façonrépétitive jusqu’à ce qu’il n’y ait plusde liquide qui s’écoule de l’écouvillon.• Mettez l’écouvillon aux rebuts dansun conteneur de matières nocives (parexemple, le sac rouge pour matièresnocives compris dans l’EPI).• Versez 200 µl de l’échantillon extraitdans une autre éprouvette.• Si les échantillons ne sont pas testésimmédiatement, mettez le capuchonsur l’éprouvette et rangez l’échantillondans la glacière comprise dans latrousse.• Insérez la bandelette réactive dansl’éprouvette.• Laissez l’éprouvette reposer à latempérature ambiante pendant 15minutes.• Lisez les résultats de la bandeletteréactive.Maintenant que nous avons lu cesétapes, j’aimerais que vous suiviez cesconsignes, ainsi que les directives étapepar étape énoncées dans la FicheMémo pour le participant n o 4, touten utilisant les articles de votre troussede test afin que vous vous exerciez àmanipuler les accessoires. N’hésitez pasà me poser des questions, car c’est lemoment idéal pour y répondre, et nonlorsque vous serez sur place en train deprocéder à un test.Version préliminaire, p. 100

La Fiche Mémo pour le participantn o 5 comporte une foire aux questionssur le test. Ce sont des Questions etréponses sur l’utilisation de Flu DETECTde Synbiotics. 1 Vous pouvez maintenantcommencer l’exercice.Remarque au formateur:Assurez-vous que chaque participantou petit groupe possède sa propretrousse, et que chaque membre dugroupe a la chance de s’exercer.Activité 4: Comment préleverdes échantillons et procédera destests de diagnostic rapide sur leshumainsLe formateur prend laparole:Notre discussion concernant lesprocédures de test de diagnostic surles animaux fut excellente. Examinonsmaintenant les procédures de testsur les humains. Je commence doncpar vous poser la même questionqu’auparavant. Est-il nécessaire de porterl’EPI au moment de tester les humains.La réponse est oui. Dans ce cas, unepersonne est soupçonnée d’être atteintede la grippe aviaire. Il est donc logique deporter l’EPI.Je vais maintenant vous expliquercomment tester les gens pour le virusde la grippe aviaire. Je vous remettraides trousses afin que nous puissionstous examiner le contenu de celles-ci. Latrousse s’appelle «test de la grippe A+BDirectigen EZ.»Remarque au formateur:Remettez une trousse à tous lesparticipants, ou à chaque petit groupeafin que tout le monde puisse enmanipuler le contenu.Le formateur prend laparole:Le test de la grippe A+B Directigen EZpermet de dépister les virus A et B dela grippe à partir d’écouvillons du nez etde la gorge chez les gens qui présententles symptômes de la grippe aviaire.Comme vous le savez probablement, lessymptômes sont une fièvre soudaine, desfrissons, un mal de tête, la fatigue et latoux.Ce test permet de différencier le virusA du virus B de la grippe. C’est doncdire qu’en plaçant un échantillon dans ledispositif de test, vous pouvez déterminersi la personne est atteinte de la grippe B,de la grippe A, ou des deux. Les résultatssont disponibles en 15 minutes, d’oùl’appellation test rapide.Il est important de déterminer si lagrippe A ou B cause une maladiesymptomatique dans ce cas, car si letest de la grippe B s’avère positif, voussavez que la personne ne souffre pas dela grippe aviaire (pas le type qui circuleactuellement). Cela signifie qu’elle souffred’un autre type de la grippe causant cessymptômes.Le fabricant du test recommande deconfirmer tous les résultats de testnégatifs.1La rubrique traitant du test de diagnostic rapide Flu Detect pour la grippe de type A est inspiréed’une présentation de Brenda Glidewell, M.S., Synbiotics Corporation.Version préliminaire, p. 101

Chaque trousse de test de la grippe A+BDirectigen EZ contient 30 tests. Chaquetest renferme les articles suivants:• une bouteille de 4,5 ml de Reagent E• une bouteille de 2,8 ml de A+/B-Control• une bouteille de 2,8 ml de A-/B+Control• 30 dispositifs Directigen EZ Flu A+B• 30 éprouvettes DispensTube• 30 écouvillons DispensTubeRegardons ensemble la Fiche Mémopour le participant n o 6 pourconnaître les différents types de résultatsque le test vous procure.Chaque dispositif Directigen EZ Flu A+Brenferme des contrôles de procédure/internes positifs et négatifs pour vousindiquer si le test est efficace. Parexemple:Si vous voyez une ligne de contrôle rougemauvedans les fenêtres Flu A et/ou FluB à la position de contrôle «C», celasignifie que le test est efficace, et que laprocédure exacte a été suivie.La zone entourant le test Flu A et/ou FluB, ainsi que les lignes de contrôle, est lecontrôle négatif d’intervalle du dispositif.Si l’arrière-plan est blanc ou rose pâle,cela signifie que le test est efficace.Si les contrôles de la trousse nefonctionnent pas adéquatement, necommuniquez pas les résultats aupatient. Utilisez un autre test quifonctionne bien.Voici quelques éléments à retenirconcernant ce test:Premièrement, les réactifs de la trousserenferment de l’azoture de sodium, unesubstance nocive en cas d’ingestion oud’inhalation, ou de contact avec la peau.Si les réactifs entrent en contact avecvotre peau, rincez à grande eau. Si vousjetez les réactifs dans les tuyaux dedescente d’eaux ménagères en plombou en cuivre, assurez-vous de verser degrandes quantités d’eau en même temps.Autres points à retenir:• Vous ne devez pas utiliser quelconqueélément de la trousse après la dated’expiration.• Vous ne devez jamais mélanger desréactifs provenant de trousses dont lesnuméros de série diffèrent.• Vous ne devez pas réutiliser ledispositif.• Vous ne devez jamais utiliser cettetrousse si le Contrôle A+/B- et leContrôle B+/A- n’indiquent pas desrésultats appropriés.Maintenant, je vais vous expliquercomment utiliser tous ces articles pourtester une personne susceptible d’êtreatteinte de la grippe aviaire. Tel que nousl’avons mentionné, la meilleure façon deprélever un échantillon chez les humainsconsiste à le faire dans le nez ou lagorge.Dans le cas des échantillons nasaux,insérez un écouvillon sec dans la narine,parallèle au palais, laissez-le en placependant quelques secondes. Retirezensuite lentement l’écouvillon en leVersion préliminaire, p. 102

faisant tourner à l’intérieur du nez. Vouspouvez obtenir un échantillon des deuxnarines avec le même écouvillon. Ensuite,insérez l’embout de l’écouvillon dansune fiole contenant 2-3 ml de liquidede transport, et brisez le bâtonnet del’applicateur.Dans le cas des échantillonsprélevés dans la gorge, écouvillonnezvigoureusement la gorge, et placezl’écouvillon dans le liquide de transport.Maintenant que je vous ai expliqué cesétapes, veuillez vous exercer en utilisantles articles compris dans votre trousse,et en suivant les procédures du test, quevous trouverez dans la Fiche Mémopour le participant n o 8. N’hésitezpas à me poser des questions. Vouspouvez commencer l’exercice.Remarque au formateur:Assurez-vous que chaque participantou petit groupe possède sa propretrousse, et que chaque membre dugroupe a la chance de s’exercer.Activité 5: Comment emballer etpréparer des échantillons en vuedu transport vers un laboratoiredu paysLe formateur prend laparole:Maintenant que vous savez commentutiliser le test, vous devez apprendrecomment manipuler et emballer leséchantillons correctement afin qu’ilssoient livrés en toute sécurité aulaboratoire pour fins d’analyse.Comme nous l’avons déjà mentionné,la préparation des échantillons envue de l’expédition aux laboratoiresinternationaux est un aspect du travailque seuls les employés de laboratoiredoivent apprendre, et pour lequel ilsobtiendront un certificat d’achèvementaprès cet atelier.Vous devriez tous connaître certainesétapes importantes du processus,telles que la préparation des fiolesde prélèvement d’échantillons, laconservation des échantillons, et leurpréparation à des fins d’expédition. Cesconsignes se trouvent dans la FicheMémo pour le participant n o 9.Préparation des fioles deprélèvement d’échantillons• Prenez d’abord les fioles stériles aveccapuchon à vis.• Versez 1,0-2,0 ml de liquide detransport dans chaque fiole.Il est préférable de conserver ces fioles àune température de –20 °C jusqu’à ceque vous soyez prêt à les utiliser. Ellespeuvent également être conservées àune température de 4 °C pendant 48–96 heures, ou à la température ambiantependant une courte période de temps,soit un ou deux jours.• Attribuez à chaque fiole un nombrecorrespondant à celui indiquésur la feuille de prélèvement desdonnées sur le terrain. Si possible, lesrenseignements suivants doivent êtreinscrits sur la feuille de prélèvementdes données sur le terrain: typed’animal sur lequel est prélevél’échantillon, espèce, type d’échantillon,Version préliminaire, p. 103

date du prélèvement, et emplacementgéographique du prélèvement del’échantillon.• Les échantillons doivent ensuiteêtre recueillis (voir la rubriquedes techniques de prélèvementd’échantillons), puis insérés dansun moyen de transport. Tous leséchantillons doivent être conservésdans la glace ou à une températurede 4 °C.Si l’on vous demande de prélever deséchantillons de tissu, essayez de lescongeler immédiatement, sans moyen detransport.Très rarement, on peut vous demanderd’entreposer un échantillon de sang. Lecas échéant, laissez le sang coaguler,puis utilisez une centrifugeuse à 2500 tr/min pendant 15 minutes pourséparer les globules rouges et le sérum.Celui-ci doit être retiré avec une pipette,et les globules doivent être jetés. Ceséchantillons doivent être conservés à unetempérature de –20 °C.Entreposage des échantillonsComme nous l’avons mentionné, leséchantillons doivent être conservés dansun moyen de transport viral à 4 °C,et transportés au laboratoire dès quepossible. Si les échantillons ne sont pastransportés dans les 2 jours suivant leprélèvement, ils doivent être conservésà 4 °C. Vous pouvez maintenir cettetempérature en utilisant la glacière etles blocs réfrigérants compris dans cettetrousse.S’il faut plus que deux jours pour faireparvenir les échantillons au laboratoire,vous devez les congeler à unetempérature de –70 °C jusqu’à ce qu’ilssoient livrés au laboratoire. Vous devezabsolument éviter de congeler et dedégeler les échantillons à répétition, carcela peut éliminer toute trace d’infection.Les échantillons de sang peuvent êtreconservés à une température de 4 °Cpendant environ une semaine, maisensuite, ils doivent être congelés à –20°C.Préparation des échantillons envue de l’expéditionVous pouvez mettre les échantillons dansun emballage d’expédition isolé Safe-T-Pak, avec les blocs réfrigérants.Les échantillons de la grippe ne peuventêtre entreposés ou expédiés dans laglace sèche (bioxyde de carbone solide)ou dans un sac en plastique doublehermétiquement fermé et rubané, car lebioxyde de carbone peut tuer les virusde la grippe s’il entre en contact avec leséchantillons.Il est important de mettre les échantillonsdans l’emballage d’expédition isoléafin d’éviter qu’ils ne se brisent, qu’ilsne soient percés, ou que le contenune se déverse, dans des conditions detransport «normales». Généralement,les échantillons doivent être enveloppésdans un emballage interne, puis placésdans un emballage externe dont lematériel peut servir de coussin afinde les protéger contre tout risqued’endommagement. Les conteneurs quevous utilisez doivent être à l’épreuve desfuites.Version préliminaire, p. 104

L’Organisation mondiale de la santé émetdes lignes directrices sur le transport deséchantillons de maladies infectieuses.Pour de plus amples renseignements,veuillez consulter l’annexe C. Chaquepays émet généralement sa propreréglementation sur le transport desmatières infectieuses à l’intérieur de sesfrontières; vous devez donc connaître lesprocédures en vigueur dans votre pays.Tel que mentionné plus tôt, vos collèguesdes laboratoires suivront une formationsur la préparation et le transportdes échantillons dans un autre pays.Les envois internationaux doiventêtre conformes aux règles sur lesmatières dangereuses de l’Associationinternationale du transport aérien (AITA)actuellement en vigueur, qui serontenseignés sous peu aux employés delaboratoire.Y a-t-il des questions à ce sujet?Remarque au formateur:Répondez à toutes les questions quivous sont posées, et poursuivez.Le formateur prend laparole:Bien. Le prochain aspect de la séance deformation ne concerne que le personnelde laboratoire. Voici quelques-uns dessujets que nous aborderons:• Traitement des écouvillons recueillis surle terrain• Emballage et expédition deséchantillons aux laboratoiresde référence de l’OIE et l’OMSconformément aux règlements del’AITA• Programme de formation SAF-T-PAC• Préparation des étiquettes et de ladocumentation d’expédition selon lepaysSuite à cette discussion, vous serezen mesure de passer l’épreuved’homologation de l’AITA pourl’expédition. Vous recevrez un certificatsigné si vous réussissez l’épreuve. Ensuite,vous serez prêt à traiter, emballer etexpédier les échantillons de la grippeaviaire.ConclusionÀ tous ceux qui ne travaillent pas dansles laboratoires, je vous remercie de votreprésence, car la formation est terminée!Avant de quitter, je dois vous mentionnerquelques détails administratifs.Premièrement, veuillez inscrire voscoordonnées sur notre feuille d’inscription,si ce n’est déjà fait. Ne vous inquiétezpas, ces renseignements demeurentconfidentiels. Nous désirons simplementêtre en mesure de vous informer des plusrécents développements à ce sujet, et detenir un registre du nombre et du typede personnes à qui nous enseignons.Vous devriez également avoir en votrepossession des formulaires d’évaluationsur lesquelles vous nous ferez part devotre opinion sur la formation. Celanous aide à améliorer ces ateliers deformation et à vous communiquer desrenseignements utiles, ainsi qu’à voscollègues. Vous n’aidez personne si vousvous plaignez de la formation à vos amisVersion préliminaire, p. 105

la semaine prochaine. Vous devez nousindiquer les points à améliorer, et bien sûr,ce que nous faisons correctement, afinque nous puissions continuer à le faire.Cela permettra aux gens qui suivrontla formation dans l’avenir de profiter dumeilleur enseignement possible.Votre opinion est très importante pournous. Nous vous remercions donc àl’avance de nous faire parvenir voscommentaires!Avant de quitter, nous vous remettrons àtous un certificat d’achèvement pour cetatelier de formation. Félicitations!Merci encore d’avoir participé à notreatelier de formation!Remarque au formateur:L’annexe D comprend un exemple decertificat d’achèvement.Assurez-vous de recueillir lesformulaires d’évaluation, ainsi que ledocument indiquant les coordonnéesdes participants.Veuillez également remplir le formulaired’évaluation du formateur et suivre lesconsignes d’expédition à USAID. Mercipour votre travail acharné!Version préliminaire, p. 106

FICHES MÉMO POUR LES PARTICIPANTSFiches Mémo pour lesParticipantsFiche Mémo pour le participantn o 1 – Trousse de dépistage de lagrippe de type A (pour les animaux)Fiche Mémo pour le participantn o 2 – Méthodes de prélèvementd’échantillons chez les oiseauxFiche Mémo pour le participantn o 3 – Flu Detect – Test d’unécouvillon trachéal unique et test d’unécouvillon cloacal uniqueFiche Mémo pour le participantn o 4 – Utilisation de la bandeletteréactive Flu Detect (pour les animaux)AnnexesAnnexe A – Fiche signalétique de latrousse de dépistage de la grippe (pourles animaux)Annexe B – Fiche signalétique de latrousse de dépistage A+B de la grippeavec Directigen EZ (pour les humains)Annexe C – Lignes directrices del’Organisation mondiale de la santé surle transport d’échantillons de maladieinfectieuseAnnexe D – Certificat d’achèvementFiche Mémo pour le participantn o 5 – Questions et réponsessur l’utilisation de Flu DETECT deSynbiotics (pour les animaux)Fiche Mémo pour le participantn o 6 – Test de la grippe A+BDirectigen EZ (pour les humains)Fiche Mémo pour le participantn o 7 – Articles de la trousse delaboratoireFiche Mémo pour le participantn o 8 – Mode d’emploi du test de lagrippe A+B Directigen EZFiche Mémo pour le participantn o 9 – Préparation, entreposage etemballage des échantillons à des fins detransport

Fiche Mémo pour le participant n o 1Trousse de dépistage de la grippe de type A (pour les animaux)

Fiche Mémo pour le participant n o 2Méthodes de prélèvement d’échantillons chez les oiseauxFigure 1 – Prélèvement d’un échantillon trachéalFigure 2 – Prélèvement d’un échantillon cloacal

Fiche Mémo pour le participant n o 3Flu Detect – Test d’un écouvillon trachéal uniqueLes échantillons trachéaux doivent êtreprélevés derrière la langue de l’oiseau.La trachée des oiseaux vivants estécouvillonnée en insérant un écouvillondans la trachée, et en écouvillonnantdoucement la paroi. L’écouvillonest ensuite placé dans le moyen detransport utilisé.Vous pouvez également préleverdes écouvillons trachéaux d’animauxmorts après avoir retiré les poumonset la trachée de la carcasse. Tenezla trachée avec une main gantée etinsérez l’écouvillon dans le sens de lalongueur. Écouvillonnez la paroi avecvigueur. Placez ensuite l’écouvillon dansle moyen de transport.Procédez ainsi pour tester unéchantillon sur place:• Versez 8 gouttes (environ 250 µl)de tampon d’extraction dans uneéprouvette propre.• Placez l’écouvillon contenantl’échantillon dans l’éprouvette, ettournez l’écouvillon 5 à 10 fois dansle tampon.• Lorsque vous retirez l’écouvillon del’éprouvette, appuyez l’écouvilloncontre la paroi de l’éprouvette defaçon répétitive jusqu’à ce qu’il n’yait plus de liquide qui s’écoule del’écouvillon.• Mettez l’écouvillon aux rebuts dansun conteneur de matières nocives(par exemple, le sac rouge pourmatières nocives compris dans l’EPI).• Si les échantillons ne sont pastestés immédiatement, mettezle capuchon sur l’éprouvette etrangez l’échantillon dans la glacièrecomprise dans la trousse.• Insérez la bandelette réactive dansl’éprouvette.• Laissez l’éprouvette reposer à latempérature ambiante pendant 15minutes.• Lisez les résultats de la bandeletteréactive.Flu Detect – Test d’un seulécouvillon cloacalLes échantillons cloacaux doivent êtreprélevés dans la région cloacale del’oiseau pour éviter la présence d’unegrande quantité de matières fécalessolides ou de sang visible.Pour obtenir un écouvillon cloacald’un oiseau vivant, insérez l’écouvillonprofondément dans l’orifice etécouvillonnez vigoureusement laparoi. L’écouvillon doit être taché dematières fécales. Placez-le ensuite dansle moyen de transport.Les échantillons fécaux provenantdes cages d’un poulailler infectédans les marchés d’oiseaux ou desoiseaux sauvages dans les champs sontprélevés à partir de selles humidesfraîchement déposées; l’écouvillon doitêtre entièrement recouvert de cesselles. L’écouvillon est ensuite placédans le moyen de transport.

Procédez ainsi pour tester unéchantillon sur place:• Tous les échantillons doivent reposerà la «température ambiante» avantd’être testés.• Laissez l’éprouvette reposer à latempérature ambiante pendant 15minutes.• Lisez les résultats de la bandeletteréactive.• Versez 0,5 ml de liquide BHI ou deliquide servant au transport viraldans une éprouvette propre.• Trempez 1 écouvillon cloacal dans leliquide BHI ou le liquide servant autransport viral.• Placez l’écouvillon contenantl’échantillon dans l’éprouvette, ettournez l’écouvillon 5 à 10 fois dansle tampon.• Lorsque vous retirez l’écouvillon del’éprouvette, appuyez l’écouvilloncontre la paroi de l’éprouvette defaçon répétitive jusqu’à ce qu’il n’yait plus de liquide qui s’écoule del’écouvillon.• Mettez l’écouvillon aux rebuts dansun conteneur de matières nocives(par exemple, le sac rouge pourmatières nocives compris dans l’EPI).• Versez 200 µl de l’échantillon extraitdans une autre éprouvette.• Si les échantillons ne sont pastestés immédiatement, mettezle capuchon sur l’éprouvette etrangez l’échantillon dans la glacièrecomprise dans la trousse.• Insérez la bandelette réactive dansl’éprouvette.

Fiche Mémo pour le participant n o 4Utilisation de la bandelette réactive de dépistage de lagrippe (pour les animaux)Étape 18 gouttes (~250µl) de tampond’extraction dans une éprouvetteÉtape 3IInsérez la bandelette réactive, côtéétiquette vers le haut, afin que letampon rose soit submergé dansl’échantillon extrait. Incubez pendant15 minutes. Retirez la bandelette etlisez les résultats.Étape 2Insérez l’écouvillon et faites-le tourner.Appuyez l’écouvillon contre la paroide l’éprouvette pour extraire le liquide.Mettez l’écouvillon aux rebuts.Étape 4Reading results and validation: Controlline at top, closest to handle. Absenceof control line indicates invalid test.

Fiche Mémo pour le participant n o 5Questions et réponses sur l’utilisation de Flu DETECTde Synbiotics (pour les animaux)1 À quelle température lesbandelettes réactives decapture d’antigène FluDETECT de Synbioticsdoivent-elles être expédiées etentreposées?Les bandelettes réactives Flu DETECTsont conçues pour être expédiéeset entreposées à la températureambiante, soit de 15 à 25 °C. Dansle cas d’un entreposage prolongé,la trousse peut être conservé à latempérature d’un réfrigérateur, soit 4°C.2 Quelle est la durée de validitédes bandelettes réactivesde capture d’antigène FluDETECT de Synbiotics?La durée de validité des bandelettesréactives Flu DETECT est de 18 moisà partir de la date de fabrication.3 Est-il possible de grouperplusieurs échantillons et deles tester avec une seulebandelette réactive?Oui, Cependant, nous vousrecommandons de ne pas utiliser plusde six (6) écouvillons à la fois.La procédure suivante estrecommandée:• Versez 2,5 ml de liquide BHI oude liquide de transport viral dansl’éprouvette, et après avoir ajoutéchaque écouvillon, brassez et retirez.• Transférez 200µl de la matièreservant à l’échantillonnage BHI dansune autre éprouvette.• Ajoutez 3 gouttes de tampond’extraction provenant de la trousse.• Testez la bandelette réactiveselon les directives énoncées dansl’emballage.• Le reste de la matière servant àl’échantillonnage peut être utilisépour RT-PCR ou VI.4 Que dois-je faire pour testerdes échantillons trachéauxgroupés avec Virus Isolation ouRT-PCR en même temps?Si vous testez des échantillonsavec Virus Isolation, nous vousrecommandons la procédure suivante:• Ne groupez pas plus de 6écouvillons à la fois. Versez 2,5 mlde liquide BHI ou de liquide detransport viral sur les 6 écouvillons.• Retirez 200 µl de liquide etmélangez-le à 150µl de tampond’extraction.• Testez la bandelette réactiveselon les directives énoncées dansl’emballage.• Le reste de la matière servant àl’échantillonnage peut être utilisépour RT-PCR ou Virus Isolation.5 Comment puis-je conserverdes échantillons en vue dutransport au laboratoire?

Après le prélèvement, des échantillonspeuvent être extraits, ou desécouvillons peuvent être retirés dumanche (en brisant le manche juste audessusde l’écouvillon), puis conservésdans une éprouvette à capuchon àdes fins de test ultérieur. Si plusieursécouvillons s’avèrent nécessaires pourisoler le virus, versez le liquide BHIou le liquide de transport viral dansl’éprouvette, ajoutez l’écouvillon, brisezle manche de celui-ci, et mettez lecapuchon sur l’éprouvette. Suivez lesprocédures énoncées ci-dessus poureffectuer le test.6 Est-il possible d’utiliserles bandelettes réactivesde capture d’antigène FluDETECT de Synbiotics pourtester d’autres hôtes aviaires,tels que les dindes, canards,oies, oiseaux migrateurs, etcetera?Oui. Les bandelettes réactives FluDetect dépistent la grippe de type Aautant chez ces hôtes aviaires que chezles poulets.7 Est-il possible d’utiliserles bandelettes réactivesde capture d’antigène FluDETECT de Synbiotics pourprocéder à l’identificationgénérale des isolats aviairesdans les embryons de poulet?Oui. Retirez 100µl de liquideallantoïque, transférez-le dans uneéprouvette, puis ajoutez 100µlde tampon d’extraction. Testez labandelette réactive selon les directivesénoncées dans l’emballage.

Fiche Mémo pour le participant n o 6Test de la grippe A+B Directigen EZ (pour les humains)The following components are included in the Directigen EZ Flu A+B kitDispositifs BD FluA+BRéactif EContrôle A+/B-Contrôle B+/A-ÉprouvettesDispensTubeEmboutsDispensTube30 dispositifs4,7 ml2,8 ml2,8 ml3030Dispositif en sachet métallisé contenantdeux bandelettes réactives. Chaquebandelette est dotée d’une ligne detest d’anticorps monoclonal spécifiqueà l’antigène viral de la grippe de type Aou de type B, et une ligne de contrôled’anticorps anti-espèce.Détergent, avec 0,2% d’azoture desodium (agent de conservation).Contrôle positif de la grippe de typeA et négatif de type B, antigène de lagrippe de type A inactivé (nucléoprotéinerecombinante) avec 0,1% d’azoture desodium (agent de conservation).Contrôle positif de la grippe de typeB et négatif de type A, antigène de lagrippe de type A inactivé (nucléoprotéinerecombinante) avec 0,1% d’azoture desodium (agent de conservation).Éprouvettes pour traitement et livraisond’échantillons dans les dispositifs.Embouts servant à filtrer l’échantillonlorsqu’il est livré dans les dispositifs.

Fiche Mémo pour le participant n o 7Articles de la trousse de laboratoireArticles de la trousse delaboratoire USAIDQuantitéÉquipement de protection individuelleSac à déchets infectieuxTampons alcoolisés, 70%Essuie-tout PDI Sani ClothCombinaison blanche DuPont Tyvekavec capuchon et bottesCouvre-chaussures DuPont Proshield IIIGants internes en vinyle, 4 milLunettes de protection contre les éclaboussuresavec évents à déflecteurAPR N-95Nécessaire pour test d’APR(solution Bitrex)Tablier en plastique4 par trousse16 par trousse1 boîte de 150 essuie-tout partrousse4 par trousse4 paires par trousse4 paires par trousse4 paires par trousse4 paires par trousse1 test par trousse4 par trousseÉquipement d’échantillonnage et de testNécessaire pour test d’antigènes de lagrippe aviaire de type A SynbioticsTrousse combo de transport viral universelBDModule d’échantillonnage biologiqueTrousse de test Directigen A+B BDpour les humainsPince à tissu 1x2 Pince à dents5-1/2 po1 boîte de 30 tests1 boîte de 50 trousses1 par trousse1 boîte de 30 tests4 par trousse

Ciseaux chirurgicaux droits CRSCiseaux à volaille, coutellerieHeritage 7220Solution salineÉcouvillons en polyuréthanePipettes5 par trousse4 par trousse1 bouteille de 1 000 ml par trousse5 écouvillons (2,7 po) par trousse5 pipettes (5 mL) par trousseÉquipement d’échantillonnage et de testÉtiquettes-adressesEmballage d’expédition isolé dematières infectieuses Safe-T-PakSTP-310Bloc réfrigérant Safe-T-Pak STP 314Bloc réfrigérant au nitrated’ammoniumMarqueurs SharpieBandes élastiquesSacs de collection d’échantillonsstériles Whirl-Pak 5x12 poBloc réfrigérant IglooRuban d’emballage 3 po1 rouleau de 100 étiquettes1 boîte de 4 emballages d’expédition1 boîte par trousse12 par trousse1 douzaine par trousse1 sac de 25Paquet de 5001 par trousse1 rouleau par trousse

Fiche Mémo pour le participant n o 8Mode d’emploi du test de la grippe A+B Directigen EZ

RevisionsRev from Rev to ECO #N/A 0605 3086-04SO 0191-5Notes:1. BD Cat. Number 2560502. Blank (Sheet) Size : Length: 8.5” Width: 11”Number of Pages: 44 Number of Sheets: 11Page Size: Length 8.5” Width 5.5” Final Folded Size: 8.5” x 5.5”3. Style (see illustrations below): # 5#1 #2 #3 #4#5 #6 #74. See Specification Control Number 8010589 for Material InformationX5. Ink Colors: Printed two sides Yes NoNo. of Colors: 2 PMS# 2755 Blue and PMS# 2718 Blue6. Graphics are approved by Becton, Dickinson and Company. Supplier has theresponsibility for using the most current approved revision level.Label DesignProoferChecked ByPart Number:8010589DateDateDateCOMPANY CONFIDENTAL. THIS DOCUMENT ISTHE PROPERTY OF BECTON, DICKINSON ANDCOMPANY AND IS NOT TO BE USED OUTSIDE THECOMPANY WITHOUT WRITTEN PERMISSIONCategory and DescriptionPackage Insert,Directigen EZ Flu A & BBecton, Dickinson and Company7 Loveton CircleSparks, MD 21152 USASheet: 1 of 45Scale:N/AA

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 1!Directigen EZ8010589Flu A+B 2005/06For the Differentiated, Direct Detectionof Influenza A and B Viral AntigensPour la détection directe, différenciée desantigènes viraux d’influenza A et BFür den differenzierten, direkten Nachweis vonVirusantigenen gegen Influenza A und BPer la rilevazione diretta differenziata degliantigeni dei virus influenzali A e BPara una detección directa y diferenciada de losantígenos virales de influenza A y BEnglish: pages 2 – 10 Italiano: pagine 27 – 34Français : pages 10 – 18 Español: páginas 35 – 42Deutsch: Seiten 18 – 26!30DeterminationsDéterminationsBestimmungenDeterminazioniDeterminaciones

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 2" Directigen EZ Flu A+BFor the Differentiated, Direct Detection ofInfluenza A and B Viral Antigens80105892005/06INTENDED USEThe Directigen EZ Flu A+B test is a rapid chromatographic immunoassay for the direct and qualitative detection ofinfluenza A and B viral antigens from nasopharyngeal washes/aspirates and throat swabs of symptomatic patients.The Directigen EZ Flu A+B test is a differentiated test, such that influenza A viral antigens can be distinguished frominfluenza B viral antigens from a single processed sample using a single device. The test is to be used as an aid in thediagnosis of influenza A and B viral infections. All negative test results should be confirmed by cell culture.SUMMARY AND EXPLANATIONInfluenza illness classically presents with sudden onset of fever, chills, headache, myalgias, and a non-productivecough. Epidemics of influenza typically occur during winter months with estimated 114,000 hospitalizations 1 and36,000 deaths 2 per year in the U.S. Influenza viruses can also cause pandemics, during which rates of illness anddeath from influenza-related complications can increase dramatically.Patients who present with suspected influenza may benefit from treatment with an antiviral agent especially if givenwithin the first 48 h of onset of illness. It is important to rapidly distinguish influenza A from influenza B in order toallow physicians a choice in selective antiviral intervention. Moreover, it is important to determine if influenza A or Bis causing symptomatic disease in a particular institution (e.g., nursing home) or community, so that appropriatepreventative intervention can be taken for susceptible individuals. It is therefore important to not only rapidlydetermine whether influenza is present, but also which type of influenza virus is present.Diagnostic tests available for influenza include rapid immunoassay, immunofluorescence assay, polymerase chainreaction (PCR), serology, and viral culture. 3-10 Immunofluorescence assays entail staining of specimens immobilizedon microscope slides using fluorescent-labeled antibodies for observation by fluorescence microscopy. 5,11,12 Culturemethods employ initial viral isolation in cell culture, followed by hemadsorption inhibition, immunofluorescence, orneutralization assays to confirm the presence of the influenza virus. 12-14The Directigen EZ Flu A+B test is a chromatographic immunoassay to detect influenza A or B antigens fromrespiratory specimens of symptomatic patients with time to results of 15 min.The speed and simplified workflow of the Directigen EZ Flu A+B test make it applicable as a "STAT" influenza A andB antigen detection test providing relevant information to assist with the diagnosis of influenza. The use of theDirectigen EZ Flu A+B test to differentiate Flu A from Flu B infection can provide the opportunity for greaterselectivity of antiviral intervention.PRINCIPLES OF THE PROCEDUREThe Directigen EZ Flu A+B test is a chromatographic assay to qualitatively detect influenza A and B viral antigens insamples processed from respiratory specimens. When specimens are processed and added to the test device,influenza A or B viral antigens bind to anti-influenza antibodies conjugated to visualizing particles in thecorresponding A and B test strips. The antigen-conjugate complex migrates across the test strip to the reaction areaand is captured by the line of antibody on the membrane. A positive result for influenza A is visualized as a reddishpurple line at the Test "T" position and the Control "C" position in the Directigen EZ Flu A read window. A positiveresult for influenza B is visualized as a reddish purple line at the Test "T" position and the Control "C" position inthe Directigen EZ Flu B read window.REAGENTSThe following components are included in the Directigen EZ Flu A+B kit:BD Flu A+B Devices 30 Devices Foil pouched device containing two reactive strips. Each strip hasa test line of monoclonal antibody specific to either Flu A or Flu Binfluenza viral antigen and a control line of anti-species antibody.Reagent E 4.7 mL Detergent, with 0.2% sodium azide (preservative).Control A+/B- 2.8 mL Flu A Positive and Flu B Negative Control, inactivated influenza Aantigen (recombinant nucleoprotein) with 0.1% sodium azide(preservative).Control B+/A- 2.8 mL Flu B Positive and Flu A Negative Control, inactivated influenza Bantigen (recombinant nucleoprotein) with 0.1% sodium azide(preservative).DispensTube Tubes 30 Tubes for specimen processing and sample delivery into devices.DispensTube Tips 30 Tips to filter sample when delivered into devices.Materials Required But Not Provided: Pipette (capable of delivering 300 µL), timer, vortex mixer, transport media (seeSpecimen Collection and Handling), normal saline and polyurethane (foam) swabs.2

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 3Warnings and Precautions:For in vitro Diagnostic Use.1. Pathogenic microorganisms, including hepatitis viruses and Human Immunodeficiency Virus, may be presentin clinical specimens. "Standard Precautions" 15-18 and institutional guidelines should be followed in handlingall items contaminated with blood and other body fluids.2. Reagents contain sodium azide, which is harmful if inhaled, swallowed or in contact with skin. Contact withacids liberates very toxic gas. If there is contact with skin, wash immediately with plenty of water. Sodiumazide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive metal azides. On disposal, flush witha large volume of water to prevent azide build-up.3. Do not use kit components beyond the expiration date.4. Do not mix reagents from different kit lot numbers.5. Do not reuse the device.6. Do not use the kit if the Control A+/B- and Control B+/A- do not yield appropriate results.7. Use only polyurethane (foam) swabs.Storage and Handling: Kits may be stored at 2–25°C. DO NOT FREEZE. Reagents and devices must be at roomtemperature (15–25°C) when used for testing.SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATIONSpecimen Transport and Storage:Freshly collected specimens should be processed immediately. If necessary, specimens may be stored in suitabletransport medium and maintained at 2–8°C for up to 72 h or at –20°C for up to seven days.It is essential that correct specimen collection and preparation methods be followed. Do not centrifuge specimensprior to use, as the removal of cellular material may adversely affect test sensitivity. Specimens obtained early in thecourse of the illness will contain the highest viral titers.Transport Media: The following transport media have been tested and found to be compatible with the DirectigenEZ Flu A+B Test:Bartel ViraTrans MediumPBS plus 0.5% BSACellmaticsPBS plus 0.5% gelatinEarle's Minimal Essential Medium (EMEM) Phosphate Buffered Saline (PBS)EMEM plus 0.5% BSAStarplex MultitransEMEM plus 1% BSASucrose Phosphate (2-SP)Hanks Basal Salt SolutionTrypticase Soy BrothM4 MediumTrypticase Soy Broth + 0.5% gelatinM4 RT MediumTrypticase Soy Broth + 0.5% BSAM5 MediumVeal Infusion Broth (VIB)Normal Saline*VIB plus 0.5% BSABD Universal Viral Transport Medium*Frozen storage of specimens collected in normal saline is not recommended for testing with the Directigen EZFlu A+B test.Other transport media may be utilized if an appropriate qualification exercise is performed.NOTE: EMEM media containing lactalbumin (i.e., 0.5% or 1.0%) or any other transport media containing lactalbuminare not compatible with the Directigen EZ Flu A+B test.Specimen Collection and Preparation: Acceptable specimens for testing with the Directigen EZ Flu A+B test includenasopharyngeal washes/aspirates and throat swabs.Procedure for Nasopharyngeal Wash/Aspirate Specimens:1. Sample volumes of 1 to 3 mL are recommended. If transport medium is used, minimal dilution of specimen ispreferred.2. Excessive wash volumes should be avoided as they may result in decreased test sensitivity.3. Process specimen as described in "Test Procedure."Procedure for Throat Swab Specimens (polyurethane [foam] swabs are required - See "Availability" Section):1. Swab specimens must be processed without dilution in transport medium as described in "Test Procedure."PROCEDURETest ProcedureNOTES:• Reagents, specimens and devices must be at room temperature (15–25°C) for testing.• Thoroughly mix all specimens prior to removal of an aliquot for processing. Do not centrifuge specimens.• DispensTube tubes and reagent bottles must be held vertically (approximately one inch above the Directigen EZFlu A+B device sample well or DispensTube tube), while gently dispensing one drop at a time.1. Remove the Directigen EZ Flu A+B device from its foil pouch immediately before testing.2. Label one device and one DispensTube tube for each control and specimen to be tested.3. Place the labeled DispensTube tube(s) in the designated area of the workstation or rack.3

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 44. Gently mix Reagent E. Dispense 4 drops into the DispensTubetube. Hold reagent bottle vertically (approximately one inchabove the DispensTube tube) while dispensing drops.E5. Thoroughly mix the specimen or control and process asdirected below:a. For nasopharyngeal wash/aspirate specimens:1. Vortex or thoroughly mix specimen. Do not centrifuge.2. Pipette 300 µL of specimen into DispensTube tube(containing Reagent E).b. For throat swab specimens:1. Add 300 µL of normal saline, to the DispensTube tube(containing Reagent E).2. Insert swab and express by rotating swab 6-8 times whilepinching tube.3. Remove swab (pinch tube to remove excess fluid from theswab tip).c. For Kit Controls:1. Gently mix the Control A+/B- and Control B+/A- vials.2. Add 6 drops of Control A+/B- to the appropriately labeledDispensTube tube (containing Reagent E).3. Add 6 drops of Control B+/A- to the appropriately labeledDispensTube tube (containing Reagent E).A+/B-B+/A-6. Insert a DispensTube Tip into the DispensTube tube containingthe processed specimen or control.Note: Do not use tips from other Directigen products.4

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 57. Vortex or mix thoroughly.8. Invert the DispensTube tube and, holding the tube on theupper half away from the tip, gently squeeze three (3) dropsof the processed specimen into the Flu A sample well andthree (3) drops into the Flu B sample well of the appropriatelylabeled Directigen EZ Flu A+B device.Note: Squeezing the tube close to the tip may result inejection of the tip and leakage of the contents from the tube.9. After sample addition, read result at 15 min and record test result.Quality Control:Quality control requirements must be performed in accordance with local, state and/or federal regulations oraccreditation requirements and your laboratory's standard Quality Control procedures.Each Directigen EZ Flu A+B device contains both positive and negative internal/procedural controls:• The appearance of a reddish purple control line in the Flu A and/or Flu B read windows at the Control "C"position provides an internal positive control that validates the proper reagent function and assures that thecorrect test procedure was followed.• The membrane area surrounding the Flu A and/or Flu B test and control lines is the internal negative controlfor the device. A background area that is white to light pink indicates that the test is performing correctly.Each Directigen EZ Flu A+B kit contains liquid Control A+/B- and Control B+/A- kit controls:These controls are tested in the same manner as patient specimens and provide a means of external quality control.At a minimum, these liquid controls should be run as a quality control procedure for each new kit lot or shipmentreceived. If desired, appropriate reagent performance and proper testing technique may also be determined byusing specimens qualified as positive or negative for the influenza A or B virus.The formation of a reddish purple line on the membrane in the Flu A read window at the Test (T) position andControl (C) position when the Control A+/B- is tested, and in the Flu B read window at the Test (T) position andControl (C) position when the Control B+/A- is tested, indicates that the influenza antigen binding property of thetest strip is functional.The formation of a reddish purple control line at the Control (C) position in the Flu B read window and the absenceof a reddish purple test line at the Test (T) position when the Control A+/B- is employed is an appropriate Flu Bnegative control result that indicates proper reagent function and that the proper test procedure was followed.Similarly, the formation of a reddish purple control line at the Control (C) position on the Flu A read window andthe absence of a reddish purple test line at the Test (T) position when the Control B+/A- is tested indicates anappropriate Flu A negative control result.If the kit controls do not perform as expected, do not report patient results. Contact your local BD representative orTechnical Services for assistance.INTERPRETATION OF RESULTSNOTE: The control line intensity may vary between the Flu A and Flu B read windows. Variability in control lineintensity is acceptable. The background area should be white to light pink and may vary in intensity between theFlu A and Flu B read windows.ACTBFlu A+(Flu A Positive)ACTBFlu B+(Flu B Positive)Positive Test for Flu A (influenza A antigen present) - A reddish purple line appearsat the Test "T" position and the Control "C" position in the Directigen EZ Flu A readwindow. A reddish purple line should also appear at the Control "C" position in theDirectigen EZ Flu B read window. This indicates influenza A antigen was detected inthe specimen. The background area should be white to light pink.Positive Test for Flu B (influenza B antigen present) - A reddish purple line appears atthe Test "T" position and the Control "C" position in the Directigen EZ Flu B readwindow. A reddish purple line should also appear at the Control "C" position in theDirectigen EZ Flu A read window. This indicates influenza B antigen was detected inthe specimen. The background area should be white to light pink.ACTBNegativeNegative Test for Flu A or Flu B (no antigen detected) - No reddish purple line visibleat the Test "T" position in either the Flu A or the Flu B read window indicates thatinfluenza A antigen, or influenza B antigen, or both, were not detected in thespecimen. A reddish purple line at the Control "C" position in the Flu A readwindow, the Flu B read window, or in both read windows indicates properperformance of test procedure and reagents. The background area should be whiteto light pink.5

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 6CTCTCTInvalid Test - The test is invalid either for Flu A, or Flu B, or for both Flu Aand Flu B, if no reddish purple line is visible next to the Control "C"position in the respective read window(s). The test is also invalid if areddish purple line appears at the Test "T" position in both the Flu A andFlu B read windows for the same specimen. If invalid, the test must berepeated.InvalidInvalidInvalidREPORTING OF RESULTSPositive Test Positive for the presence of influenza A or influenza B antigen. A positive result may occur in theabsence of viable virus.Negative Test Negative for the presence of influenza A or influenza B antigen. Infection due to influenzacannot be ruled-out because the antigen present in the sample may be below the detection limitof the test. Culture confirmation of negative samples is recommended.Invalid Test Test result is inconclusive. Do not report results.LIMITATIONS OF THE PROCEDUREThe etiology of respiratory infection caused by microorganisms other than influenza A or B virus will not beestablished with this test. Directigen EZ Flu A+B is capable of detecting both viable and non-viable influenzaparticles. The Directigen EZ Flu A+B test performance depends on antigen load and may not correlate with cellculture performed on the same specimen.Inadequate specimen collection, improper sample handling/transport or low levels of virus shedding may yield afalse-negative result. Accordingly, a negative test result does not eliminate the possibility of an influenza A orinfluenza B, or both influenza A and B infection. The validity of Directigen EZ Flu A+B has not been proven foridentification or confirmation of cell culture isolates.EXPECTED VALUESThe rate of positivity observed in respiratory testing will vary depending on the method of specimen collection,handling/transport system employed, detection method utilized, the time of year, age of the patient, geographiclocation, and most importantly, local disease prevalence. The overall prevalence observed with culture during the2003-2004 clinical study was 24.3% for influenza A and 3.8% for influenza B. During the 2004-2005 clinical study, theoverall prevalence observed with culture was 26.0% for influenza A and 31.2% for influenza B.PERFORMANCE CHARACTERISTICSPerformance characteristics for the Directigen EZ Flu A+B test were established in a multi-center study conducted atfive trial sites during the 2003-2004 respiratory season and 13 trial sites during the 2004-2005 respiratory season. Theclinical centers were located in geographically diverse areas within the United States, Japan and Hong Kong.A total of 735 prospective specimens were evaluated using the Directigen EZ Flu A+B test and cell culture. Thesespecimens consisted of nasopharyngeal washes, nasopharyngeal aspirates, and throat swabs from patients suspectedof having influenza.Clinical Performance:The performance characteristics for Directigen EZ Flu A+B test as compared to cell culture for each specimen type arepresented in Table 1 through Table 4.Table 1: Summary of the Performance of the Directigen EZ Flu A+B Test Compared to Culture for all SpecimenTypes - Influenza A Combined 2003-2004 and 2004-2005 Respiratory SeasonsCell CultureDirectigenSpecimen Type EZ Flu A+B Test P NNasopharyngeal P 115 2washes/aspirates N 19 330Sensitivity: 86% (95% CI: 79% - 91%)Specificity: 99% (95% CI: 98% - 100%)P 43 29Throat swabsN 13 184Sensitivity: 77% (95% CI: 64% - 87%)Specificity: 86% (95% CI: 81% - 91%)6

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 7Table 2: Summary of the Performance of the Directigen EZ Flu A+B Test Compared to Culture for allSpecimen Types - Influenza B Combined 2003-2004 and 2004-2005 Respiratory SeasonsCell CultureDirectigenSpecimen Type EZ Flu A+B Test P NNasopharyngeal P 57 1washes/aspirates N 14 394Sensitivity: 80% (95% CI: 69% - 89%)Specificity: 100% (95% CI: 99% - 100%)P 38 3Throat swabsN 17 211Sensitivity: 69% (95% CI: 55% - 81%)Specificity: 99% (95% CI: 96% - 100%)Table 3: Summary of the Performance of the Directigen EZ Flu A+B Test Compared to Culture for allSpecimen Types by Population - Influenza A Combined 2003-2004 and 2004-2005 Respiratory SeasonsCell CultureSpecimen Type Directigen Pediatric AdultEZ Flu A+B TestP N P NNasopharyngeal P 94 2 21 0washes/aspirates N 11 294 8 36Sensitivity: Pediatric: 90% (95% CI: 82% - 95%); Adult: 72% (95% CI: 53% - 87%)Specificity: Pediatric: 99% (95% CI: 98% - 100%); Adult: 100% (95% CI: 90% - 100%)Specimen Type Directigen Pediatric AdultEZ Flu A+B TestP N P NP 38 23 5 6Throat swabsN 10 151 3 33Sensitivity: Pediatric: 79% (95% CI: 65% - 90%); Adult: 63% (95% CI: 24% - 91%)Specificity: Pediatric: 87% (95% CI: 81% - 91%); Adult: 85% (95% CI: 69% - 94%)Table 4: Summary of the Performance of the Directigen EZ Flu A+B Test Compared to Culture for allSpecimen Types by Population - Influenza B Combined 2003-2004 and 2004-2005 Respiratory SeasonsCell CultureSpecimen Type Directigen Pediatric AdultEZ Flu A+B TestP N P NNasopharyngeal P 49 1 8 0washes/aspirates N 13 338 1 56Sensitivity: Pediatric: 79% (95% CI: 67% - 88%); Adult: 89% (95% CI: 52% - 100%)Specificity: Pediatric: 100% (95% CI: 98% - 100%); Adult: 100% (95% CI: 94% - 100%)Specimen Type Directigen Pediatric AdultEZ Flu A+B TestP N P NP 19 1 19 2Throat swabsN 12 190 5 21Sensitivity: Pediatric: 61% (95% CI: 42% - 78%); Adult: 79% (95% CI: 58% - 93%)Specificity: Pediatric: 99% (95% CI: 97% - 100%); Adult: 91% (95% CI: 72% - 99%)Reproducibility: The reproducibility of the Directigen EZ Flu A+B test was evaluated at four sites. The reproducibilitypanel was composed of 20 simulated influenza samples. These samples included low Flu A or Flu B positive samples(near the assay limit of detection), moderate Flu A or Flu B positive samples and negative samples. The overallreproducibility for the Directigen EZ Flu A+B test was 99.6%.7

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 8Analytical StudiesAnalytical Sensitivity (Limit of Detection)The limit of detection (LOD) for the Directigen EZ Flu A+B test was established for a total of 15 influenza strains;nine influenza A and six influenza B.Type Influenza Viral Strain LOD (CEID 50 /mL*)A A/PR/8/34 (H1N1) 1.75 X 10 4A A/FM/1/47 (H1N1) 1.98 X 10 3A A/NWS/33 (H1N1) 1.00 X 10 4A A1/Denver/1/57 (H1N1) 5.56 X 10 3A A/New Jersey/8/76 (H1N1) 4.45 X 10 3A A/Port Chalmers/1/73 (H3N2) 1.00 X 10 3A A/Hong Kong/8/68 (H3N2) 2.78 X 10 2A A2/Aichi2/68 (H3N2) 3.50 X 10 3A A/Victoria/3/75 (H3N2) 2.78 X 10 4B B/Lee/40 6.95 X 10 5B B/Allen/45 2.00 X 10 3B B/GL/1739/54 5.56 X 10 3B B/Taiwan/2/62 3.50 X 10 2B B/Maryland/1/59 2.23 X 10 4B B/Hong Kong/5/72 2.23 X 10 4* CEID 50 /mL = Chick Embryo Infectious Dose at which 50% of the embryos perishAnalytical Specificity (Cross Reactivity)The Directigen EZ Flu A+B test was evaluated with a total of 98 microorganisms. The 51 bacteria and two yeastswere tested at a concentration of ~10 8 CFU/mL (CFU - Colony Forming Units). Mycoplasma pneumoniae andMycoplasma orale were tested at concentrations of > 10 6 and >10 7 CCU/mL (CCU - Color Changing Units),respectively. The three mycobacteria strains were inoculated at 10 7 CFU/mL and Chlamydia trachomatis LGVII wastested at 2.5 X 10 8 EB/mL (EB = elementary bodies). The 39 viruses tested were evaluated at concentrations of 10 4 to10 9 TCID 50 /mL (TCID 50 - Tissue Culture Infectious Dose at which 50% of the cells are lysed) or 10 4 to 10 8 CEID 50 /mL(CEID 50 - Chick Embryo Infectious Dose at which 50% of the chick embryos are infected). All microorganisms (otherthan influenza viruses) resulted in negative Flu A and Flu B test results. The influenza A viruses tested (n = 2)resulted in Flu A positive and Flu B negative test results. The influenza B viruses tested (n = 6) ) resulted in Flu Bpositive and Flu A negative test results.Acinetobacter baumannii (calcoaceticus) Neisseria meningitidisCoxsackievirus Type A9 (Griggs)Actinobacillus suis Neisseria mucosa Coxsackievirus Type A9 (P.B. Bozek)Bacteroides fragilis Neisseria sicca Coxsackievirus Type B5 (Faulkner)Bordetella pertussis Neisseria subflava Coxsackievirus Type B6 (Schmitt)Candida albicans Peptostreptococcus anaerobius Coxsackievirus Type A21 (Kuykendall)Candida glabrata Porphyromonas asaccharolyticus Cytomegalovirus (AD-169)Cardiobacterium hominis Prevotella oralis Echovirus Type 2 (Cornelis)Chlamydia trachomatis LGVII Proteus mirabilis Echovirus Type 3 (Morrisey)Corynebacterium diphtheriae Proteus vulgaris Echovirus Type 6 (D'Amori)Eikenella corrodens Pseudomonas aeruginosa HSV Type 1 (HF)Enterococcus faecalis Salmonella choleraesuis HSV Type 2 (MS)Enterococcus gallinarum sub minnesota Influenza A/PR/8/34 (H1N1)Escherichia coli Serratia marcescens Influenza A/Victoria/3/75 (H3N2)Fusobacterium nucleatum Staphylococcus aureus Influenza B/Hong Kong/5/72Gardnerella vaginalis Staphylococcus aureus-Cowan 1 Influenza B /Lee/40Haemophilus aphrophilus Streptococcus bovis II group D Influenza B/Allen/45Haemophilus influenzae Staphylococcus epidermidis Influenza B/GL/1739/54Haemophilus parainfluenzae Streptococcus mutans Influenza B/Maryland/1/59Haemophilus paraphrophilus Streptococcus oralis Influenza B/Taiwan/2/62Kingella kingae Streptococcus pneumoniae Measles virus (Edmonston)Klebsiella pneumoniae Streptococcus pyogenes group A Mumps virus (Enders)Lactobacillus casei Streptococcus sanguis Parainfluenza Type 1 (Sendia/52)Lactobacillus fermentum Streptococcus sp. group B Parainfluenza Type 2 (Greer)Lactobacillus plantarum Streptococcus sp. group C Parainfluenza Type 3 (C243)Legionella pneumophila Streptococcus sp. group F Rhinovirus Type 1A (2060)Listeria monocytogenes Streptococcus sp. group G Rhinovirus Type 2 (HGP)Moraxella catarrhalis Veillonella parvula Rhinovirus Type 13 (353)Mycobacterium avium Adenovirus, Type 3 (GB) Rhinovirus Type 15 (1734)Mycobacterium intracellulare Adenovirus, Type 5 (Adenoid 75) Rhinovirus Type 16 (11757)Mycobacterium tuberculosis Adenovirus, Type 7 (Gomen) Rhinovirus Type 37 (151-1)Mycoplasma orale Adenovirus, Type 10 (J.J.) RSV Type A (Long)Mycoplasma pneumoniae Adenovirus, Type 18 (D. C.) RSV Type B (Wash/18537/62)Neisseria gonorrhoeae Coronavirus (229E) VZV (Ellen)8

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 9Strain Reactivity with Influenza A and B virusesThe Directigen EZ Flu A+B test was evaluated using a panel of 37 influenza strains. All known hemagglutinin (15)and neuraminidase (9) subtypes of influenza A were represented in this panel. All of the human and animalinfluenza A strains showed positive Flu A test results and negative Flu B test results. Conversely, all of the influenza Bstrains showed positive Flu B test results and negative Flu A test results.Influenza Virus (Human Strain) Viral Type Influenza Virus (Animal Strain) Viral TypeA/NWS/33 A (H1N1) A/Turkey/Kansas/4880/80 A (H1N1)A/PR/8/34 A (H1N1) A/Mallard/New York/6750/78 A (H2N2)A1/FM/1/47 A (H1N1) A/Turkey/England/69 A (H3N2)A1/Denver/1/57 A (H1N1) A/Chicken/Alabama/75 A (H4N8)A/New Jersey/8/76 (Hsw N1) A (H1N1) A/Turkey/Wisconsin/68 A (H5N9)A/Port Chalmers/1/73 A (H3N2) A/Turkey/Canada/63 A (H6N8)A/Victoria/3/75 A (H3N2) A/Turkey/Oregon/71 A (H7N3)A/Vietnam/3028/04 A (H5N1) A/Turkey/Ontario/6118/67 A (H8N4)A/Thailand/MK2/04 A (H5N1) A/Turkey/Wisconsin/66 A (H9N2)A/Hong Kong/486/97 A (H5N1) A/Chicken/Germany/N/49 A (H10N7)A/California/07/2004 A (H3N2) A/Duck/Memphis/546/74 A (H11N9)B/Lee/40 B A/Duck/Alberta/60/76 A (H12N5)B/Allen/45 B A/Gull/MD/704/77 A (H13N6)B/GL/1739/54 B A/Mallard/Gurjev/263/82 A (H14N5)B/Maryland/1/59 B A/Shearwater/WA/2576/79 A (H15N6)B/Taiwan/2/62BB/Mass/3/66BB/Hong Kong/5/72BB/Victoria/504/00BB/Tokyo/53/99BB/Quingdao/102/91BB/Leningrad/86/93BInterfering SubstancesVarious substances were evaluated with the Directigen EZ Flu A+B test. These substances included whole blood (2%)and various medications. No interference was noted with this assay for any of the substances tested.Medications EvaluatedThree over the counter mouthwashes at 25%Three OTC throat drops at 25%Three OTC nasal sprays at 10%4-Acetamidophenol (10 mg/mL)Acetylsalicylic acid (20 mg/mL)Chlorpheniramine maleate (5 mg/mL)Dextromethoraphan (10 mg/mL)Fexofenadine (500 ng/mL)Amantadine (500 ng/mL)Albuterol (0.083 mg/mL)Ribavirin (500 ng/mL)Pseudoephedrine HCl (20 mg/mL)Guaiacol Glyceryl Ether (20 mg/mL)Ibuprofen (10 mg/mL)Oxymetazoline (0.05 mg/mL)Phenylephrine (1 mg/mL)Loratidine (100 ng/mL)Diphenhydramine HCl (5 mg/mL)Zanamivir (1 mg/mL)Rimantadine (500 ng/mL)Oseltamivir (500 ng/mL)Synagis (0.1 mg/mL)AVAILABILITYCat. No. Description256050 Directigen EZ Flu A+B 30 Test Kit220144 CultureSwab EZ 100 (single swab)220145 CultureSwab EZ II 100 (double swab)221819 Normal, saline, 5 mL, Ctn. of 100REFERENCES1. Simonsen L., Fukuda K, Schonberger LB, Cox NJ. Impact of influenza epidemics on hospitalizations. J. Infect. Dis.2000; 181:831-72. Thompson WW, Shay DK, Weintraub E, et al. Mortality associated with influenza and respiratory syncytial virus inthe United States. JAMA 2003: 289: 179-863. Kaiser, L., Couch, R.B., Galasso, G.J., Glezen, W.P., Webster, R.G., Wright, P.F., and Hayden, F.G. 1999. Firstinternational symposium on influenza and other respiratory viruses: summary and overview Kapalua, Maui,Hawaii, December 4-6, 1998. Antiviral Res., 42:149-1764. Cox, N.J., and Bender, C.A. 1995. The molecular epidemiology of influenza viruses. Virology, 6:359-370.5. Todd, S.J., Minnich, L., and Waner, J.L. 1995. Comparison of rapid immunofluorescence procedure with TestPackRSV and Directigen Flu A for diagnosis of respiratory syncytial virus and influenza A virus. J. Clin. Microbiol.33:1650-1651.9

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 106. Harris, P.O. 1989. Clinical relevance and efficient detection of seven major respiratory viruses. ACL. p. 15-19.7. McElhaney, J.E., Gravenstein, S., Krause, P., Hooton, J.W., Upshaw, C.M., and Drinka, P. 1998. Assessment ofmarkers of the cell-mediated immune response after influenza virus infection in frail older adults. Clin. Diag.Lab. Immunol. 5:840-844.8. Fan, J., Henrickson, K.J., and Savatski, L.L. 1998. Rapid simultaneous diagnosis of infections with respiratorysyncytial viruses A and B, influenza viruses A and B, and human parainfluenza virus types 1,2, and 3 by multiplexquantitative reverse transcription-polymerase chain reaction-hybridization assay (hexaplex). Clin. Infect. Disease26:1397-1402.9. Wright, K.E., Wilson, G.A.R., Novosad, D., Dimock, C., Tan, D., and Weber, J.M. 1995. Typing and subtyping ofinfluenza viruses in clinical samples by PCR. J. Clin. Microbiol. 33:1180-1184.10. Kendal, A.P. 1985. Influenza Viruses. p. 341-357. Laboratory Diagnosis of Viral Infections, In H. Lennette, (ed.)Marcel Dekker, Inc., New York.11. McQuillen, J., Madeley, C.R., and Kendal, A.P. 1985. Monoclonal antibodies for the rapid diagnosis of influenza Aand B virus infections by immunofluorescence. Lancet. ii: 911-914.12. Guenthner, S.H., and Linnemann, C.C., Jr. 1988. Indirect immunofluorescence assay for rapid diagnosis ofinfluenza virus. Laboratory Medicine. 19: 581-58313. Minnick, L.L., and Ray, C.G. 1986. Early testing of cell cultures for detection of hemadsorbing viruses. J. Clin.Microbiol. 25: 421-422.14. Schmidt, N.J., Ota, M., Gallo, D., and Fox, V.L. 1982. Monoclonal antibodies for rapid, strain specific identificationof influenza virus isolates. J. Clin. Microbiol. 16: 763-765.15. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2001. Approved Guideline M29-A2. Protection oflaboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed. NCCLS, Wayne, Pa.16. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health andHuman Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals.Infect. Control Hospital Epidemiol. 17:53-80.17. U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories,HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S Government Printing Office, Washington, D.C.18. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection ofworkers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within themeaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EECP). Office Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045." Directigen EZ Flu A+BPour la détection directe, différenciée des antigènesviraux d’influenza A et BFrançaisAPPLICATIONLe test Directigen EZ Flu A+B est un dosage immunologique chromatographique rapide conçu pour la détectionqualitative et directe des antigènes viraux d'influenza A et B à partir de lavages et aspirations rhino-pharyngés etdes écouvillonnages de gorge chez des malades présentant des symptômes. Le test Directigen EZ Flu A+B est un testde différenciation, tel que les antigènes viraux d'influenza A peuvent être distingués de ceux d'influenza B à partird'un même échantillon analysé sur un même dispositif. Le test devrait servir comme aide au diagnostic des infectionspar les virus influenza A ou B. Tout résultat négatif du test doit être confirmé par une culture sur cellules.RESUME ET EXPLICATIONLa grippe se manifeste de manière classique par une subite poussée de fièvre, des frissons, des myalgies, un mal detête, et une toux improductive. Les épidémies de grippe ont lieu en général pendant les mois d'hiver et sontresponsables d'environ 114 000 hospitalisations 1 et 36 000 décès 2 chaque année aux Etats-Unis. Les virus influenzapeuvent aussi causer des pandémies pendant lesquelles les taux de morbidité et de mortalité relevant decomplications liées à la grippe augmentent de façon spectaculaire.Les patients suspectés d'avoir la grippe peuvent bénéficier de traitements avec un agent antiviral surtout si cetraitement est administré dans les 48 h suivant le début de la maladie. Il est important de différencier rapidemententre le virus influenza A ou le virus influenza B pour pouvoir offrir un choix d'interventions antivirales sélectivesaux médecins. De plus, il est important de déterminer si le virus influenza A ou le virus influenza B est la cause d'unemaladie symptomatique dans une institution donnée (par ex., maison de soins) ou une communauté de sorte desmesures préventives appropriées puissent être prises en ce qui concerne les personnes susceptibles. Par conséquent, ilest essentiel non seulement de déterminer rapidement si le virus influenza est présent mais aussi de quel type devirus influenza il s'agit.Les tests de diagnostic disponibles pour les virus influenza comprennent le dosage immunologique rapide,l'immunofluorescence, la polymérisation en chaîne (PCR), la sérologie et la culture virale. 3-10 Les essaisd'immunofluorescence consistent à colorer les échantillons immobilisés sur des lames de microscope au moyend'anticorps à marqueurs fluorescents et à les observer en microscopie à fluorescence. 5,11,12 Les méthodes de cultureconsistent en l'isolement initial du virus en culture sur cellules, suivi de tests d'inhibition de l'hémadsorption, de testsd'immunofluorescence ou de neutralisation pour confirmer la présence de virus influenza. 12-14Le test Directigen EZ Flu A+B est un dosage immunologique chromatographique servant à déceler les antigènesviraux d'influenza A et B à partir d'échantillons des voies respiratoires de patients présentant des symptômes, avecun temps d'obtention des résultats de 15 min.10

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 11La rapidité et la simplicité de la mise en oeuvre du test Directigen EZ Flu A+B en font un test de détection desantigènes viraux d'influenza A et B, adapté au diagnostic d'urgence, fournissant rapidement des informationspertinentes pour aider au diagnostic de grippe. L'utilisation du test Directigen EZ Flu A+B pour différencier les virusinfluenza A des virus influenza B peut fournir la possibilité d'un choix plus sélectif d'intervention antivirale.PRINCIPES DE LA METHODELe test Directigen EZ Flu A+B est un essai chromatographique permettant de déceler qualitativement les antigènesviraux d'influenza A et B dans des échantillons préparés à partir de prélèvements respiratoires. Lorsque lesprélèvements sont préparés et ajoutés dans le dispositif de test, les antigènes viraux d'influenza A et B se lient à desanticorps anti-virus influenza, conjugués à des particules de visualisation sur les bandelettes réactives A et Bcorrespondantes. Le complexe anticorps-conjugué migre à travers la bandelette réactive vers la zone réactionnelle oùil est capturé par la ligne d'anticorps présents sur la membrane. Un résultat positif pour l'influenza A apparaît sousforme de ligne rouge pourpre à la position " T " de test et la position " C " de contrôle dans la fenêtre de lecture deDirectigen EZ Flu A. Un résultat positif pour l'influenza B apparaît sous forme de ligne rouge pourpre à la position " T "de test et la position " C " de contrôle dans la fenêtre de lecture de Directigen EZ Flu B.REACTIFSLa trousse Directigen EZ Flu A+B kit comprend les éléments suivants :Dispositifs BD Flu A+B 30 dispositifs Dispositif en pochette aluminium contenant deux bandelettesréactives. Chaque bandelette dispose d'une ligne témoind'anticorps monoclonaux réagissant soit avec l'antigène virald'influenza A ou B et d'une ligne de contrôle d'anticorps antiespèce.Réactif E 4,7 mL Détergent avec 0,2 % d'azide de sodium (agent conservateur).Contrôle A+/B- 2,8 mL Contrôle positif du virus influenza A et négatif du virus influenza B,antigène du virus influenza A inactivé (nucléoprotéinerecombinante) avec 0,1 % d'azide de sodium (agent conservateur).Contrôle B+/A- 2,8 mL Contrôle positif du virus influenza B et négatif du virus influenza A,antigène du virus influenza B inactivé (nucléoprotéinerecombinante) avec 0,1 % d'azide de sodium (agent conservateur).Tubes DispensTube 30 Tubes pour l'extraction et la préparation de l'échantillon et sonintroduction dans le dispositif.Embouts DispensTube 30 Embouts de filtration pour l'introduction de l'échantillon dans ledispositif.Matériaux requis mais non fournis : Pipette (capable de distribuer 300 µL), compte-minutes, agitateur à vortex,milieux de transports (cf. Prélèvement et manipulation des échantillons), sérum physiologique normal et écouvillonsen polyuréthane (mousse).Avertissements et précautions :Pour le diagnostic in vitro.1. Des microorganismes pathogènes, notamment les virus de l'hépatite et de l'immunodéficience humaine, sontsusceptibles d'être présents dans les échantillons cliniques. Respecter les « Précautions standard » 15-18 et lesconsignes en vigueur dans l'établissement pour manipuler tout objet contaminé avec du sang ou d'autresliquides organiques.2. Les réactifs contiennent de l'azide de sodium qui est nocif en cas d'inhalation, d'ingestion ou de contactdermique. Au contact d'un acide, un gaz très toxique est dégagé. En cas de contact avec la peau, laverimmédiatement à grande eau. L'azide de sodium peut réagir au contact du plomb ou du cuivre descanalisations et former des azides métalliques très explosifs. Lors de l'élimination, faire couler un volumed'eau important pour éviter l'accumulation d'azides.3. Ne pas utiliser les composants de la trousse au-delà de la date de péremption.4. Ne pas mélanger des réactifs provenant de trousses portant des numéros de lot de kit différents.5. Ne pas réutiliser le dispositif.6. Ne pas utiliser la trousse si le Contrôle A+/B- et le Contrôle B+/A- ne donnent pas les résultats escomptés.7. Utiliser seulement des écouvillons en polyuréthane (mousse).Manipulation et conservation : Les trousses peuvent être conservées à 2-25 °C. NE PAS CONGELER. Les réactifs et lesdispositifs doivent se trouver à température ambiante (15-25 °C) au moment du test.PRELEVEMENT ET PREPARATION DES ECHANTILLONSTransport et conservation des échantillons :Les échantillons fraîchement prélevés doivent être immédiatement préparés et analysés. Si nécessaire, leséchantillons peuvent être conservés dans un milieu de transport approprié à 2-8 °C jusqu'à 72 h ou à -20 °C pendantsept jours au plus.Il est indispensable de se conformer à la méthode adéquate de prélèvement et de préparation des échantillons. Nepas centrifuger les échantillons avant de les utiliser parce que le retrait du matériau cellulaire peut diminuer lasensibilité du test. Les échantillons prélevés au début de la maladie contiendront les titres viraux les plus élevés.11

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 12Milieux de transport : les milieux de transport suivants ont été testés et se sont avérés compatibles avec le testDirectigen EZ Flu A+B :Milieu Bartel ViraTransPBS à 0,5 % de sérum albumine bovine (BSA)CellmaticsPBS à 0,5 % de gélatineMilieu essentiel minimum d'Earle (EMEM) Sérum physiologique tamponné au phosphate (PBS)EMEM avec 0,5 % de BSAStarplex MultitransEMEM avec 1 % de BSAPhosphate de saccharose (2-SP)Soluté de base de HanksBouillon Trypticase sojaMilieu M4Bouillon Trypticase soja + 0,5 % de gélatineMilieu M4 RTBouillon Trypticase soja + 0,5 % de BSAMilieu M5Bouillon d'infusion de veau (VIB)Sérum physiologique normal*VIB avec 0,5 % de BSAMilieu de transport viral universel BD*La conservation au congélateur des échantillons prélevés dans du sérum physiologique normal est déconseillée pourles tests effectués avec Directigen EZ Flu A+B.D'autres milieux de transport peuvent être utilisés après validation par un contrôle approprié.REMARQUE : Les milieux EMEM contenant de la lactalbumine (c.-à-d. 0,5 ou 1,0 %) ou tout autre milieu de transportcontenant de la lactalbumine ne sont pas compatibles avec le test Directigen EZ Flu A+B.Prélèvement et préparation des échantillons : Les échantillons appropriés au test Directigen EZ Flu A+B sont leslavages et aspirations rhino-pharyngés et les écouvillonnages de gorge.Procédure pour les échantillons prélevés au moyen de lavages et d’aspirations rhino-pharyngés :1. Prélever de préférence 1 à 3 mL d'échantillon. Si un milieu de transport est utilisé, préférer le niveau dedilution minimale de l'échantillon2. Eviter de recourir à un volume de lavage trop important pour ne pas risquer de diminuer la sensibilité du test.3. Traiter l'échantillon comme indiqué au paragraphe « Mode opératoire du test ».Procédure pour les échantillons prélevés par écouvillonnage de gorge (des écouvillons en polyuréthane [mousse]sont requis – voir « Conditionnement ») :1. Les échantillons prélevés par écouvillonnage doivent être préparés sans être dilués dans le milieu de transportcomme décrit dans « Mode opératoire du test ».METHODEMode opératoire du testREMARQUES :• Les réactifs, les échantillons et les dispositifs doivent se trouver à température ambiante (15-25 °C) au momentdu test.• Bien mélanger tous les échantillons avant de prélever une aliquote pour le test. Ne pas centrifuger les échantillons.• Tenir les tubes DispensTube et les flacons de réactifs verticalement (à environ 2,5 cm au-dessus du puits d'échantillondu dispositif Directigen EZ Flu A+B ou du tube DispensTube) et faire tomber les gouttes doucement une à une.1. Retirer le dispositif Directigen Flu A+B de sa pochette en aluminium immédiatement avant utilisation.2. Etiqueter un dispositif et un tube DispensTube pour chaque contrôle et chaque échantillon à tester.3. Placer le(s) tube(s) DispensTube étiqueté(s) dans le logement correspondant du poste de travail ou du portoir.4. Mélanger doucement le Réactif E. Ajouter 4 gouttes dans letube DispensTube. Maintenir la bouteille de réactif verticale(environ 2,5 cm au-dessus du tube DispensTube) tout enEdistribuant les gouttes.5. Bien mélanger l'échantillon ou le contrôle et le traiter suivantla procédure ci-dessous :a. Pour les échantillons de lavage/aspiration rhino-pharyngés :1. Agiter au vortex ou mélanger soigneusementl'échantillon. Ne pas centrifuger.2. Distribuer à la pipette, 300 µL d'échantillon dans le tubeDispensTube (contenant le Réactif E).12

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 13b. Pour les échantillons d’écouvillonnage de gorge :1. Ajouter 300 µL de sérum physiologique au tubeDispensTube (contenant le Réactif E).2. Introduire l'écouvillon et extraire en tournant l'écouvillon6-8 fois tout en pinçant le tube.3. Retirer l’écouvillon (pincer le tube pour éliminer l’excès defluide de l’embout de l’écouvillon)c. Pour les contrôles en trousse :1. Mélanger doucement les flacons de Contrôle A+/B- etContrôle B+/A-.2. Ajouter 6 gouttes de Contrôle A+/B- au tube DispensTubeavec l’étiquette correspondante (contenant le Réactif E).3. Ajouter 6 gouttes de Contrôle B+/A- au tube DispensTubeavec l’étiquette correspondante (contenant le Réactif E).A+/B-B+/A-6. Introduire un embout DispensTube dans le tube DispensTubecontenant l’échantillon préparé ou le contrôle.Remarque : Ne pas utiliser d’embouts provenant d’autresproduits Directigen.7. Agiter au vortex ou bien mélanger.8. Inverser le tube DispensTube et en le tenant par sa moitiésupérieure loin de l’embout, presser doucement afin d’extrairetrois (3) gouttes de l’échantillon préparé dans le puitsd’échantillon Flu A et trois (3) gouttes dans le puitsd’échantillon Flu B du dispositif étiqueté Directigen EZ Flu A+B.Remarque : ne pas presser le tube à proximité de l’extrémitépour éviter d’éjecter l’embout et provoquer ainsi la fuite ducontenu du tube.9. Après l’addition de l’échantillon, lire le résultat au bout de 15 min et enregistrer ce résultat.Contrôle de qualité :Effectuer les contrôles de qualité conformément à la réglementation nationale et/ou internationale, aux exigencesdes organismes normatifs concernés et aux procédures de contrôle de qualité en vigueur dans l'établissement.Chaque dispositif Directigen EZ Flu A+B contient des contrôles internes de procédure positif et négatif :• L'apparition d'une ligne témoin rouge pourpre dans la fenêtre de lecture de Flu A et /ou Flu B à la position« C » de contrôle constitue un contrôle interne positif qui valide le fonctionnement correct des réactifs etatteste l'utilisation du mode opératoire de test correct.• La membrane autour des lignes témoins et de test Flu A et/ou Flu B sert de contrôle négatif interne pour ledispositif. Un arrière plan de couleur blanche ou rose pâle indique que le test s'exécute correctement.Chaque trousse Directigen EZ Flu A+B contient les Contrôles liquides A+/B- et B+/A- :Ces contrôles sont testés de la même manière que les échantillons de patient et constituent un moyen externe decontrôle de la qualité. Au minimum, ces contrôles liquides doivent être analysés pour servir de procédure de contrôlede la qualité de chaque nouveau lot ou arrivage reçu par le laboratoire. Si désiré, on peut vérifier la bonneperformance des réactifs et la bonne application du mode opératoire de test correct en utilisant des échantillonsconnus comme étant positif ou négatif pour les virus influenza A ou B.La formation d'une ligne rouge pourpre sur la membrane de la fenêtre de lecture Flu A à la position de test (T) et àla position de contrôle (C) lorsque le Contrôle A+/B- est testé et dans la fenêtre Flu B à la position de test (T) et à laposition de contrôle (C) lorsque le Contrôle B+/A- est testé, atteste que la capacité de fixation de l'antigèned'influenza de la bandelette réactive est fonctionnelle.13

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 14La formation d'une ligne témoin rouge pourpre à la position de contrôle (C) dans la fenêtre de lecture Flu B etl'absence d'une ligne rouge pourpre à la position de test (T) de cette même fenêtre lorsque le Contrôle A+/B- estutilisé constitue un résultat de contrôle négatif pour Flu B approprié qui atteste un fonctionnement correct desréactifs et l'utilisation du mode opératoire de test approprié. De même, la formation d'une ligne témoin rougepourpre à la position de contrôle (C) de la fenêtre de lecture Flu A et l'absence d'une ligne rouge pourpre à laposition de test (T) de cette même fenêtre lorsque le contrôle B+/A- est testé constitue un résultat de contrôlenégatif approprié pour le virus influenza A.Si les contrôles de la trousse ne donnent pas les résultats escomptés, ne pas communiquer les résultats cliniques.Contacter le représentant local ou le service technique de BD pour toute assistance complémentaire.INTERPRETATION DES RESULTATSREMARQUE : l'intensité de la ligne témoin peut varier de la fenêtre de lecture Flu A à celle de Flu B. Une variabilitéde l'intensité de la ligne témoin est acceptable. L'arrière plan doit être de blanche à rose clair et peut varierd'intensité entre les fenêtres de lecture Flu A et Flu B.Test positif pour Flu A (antigène de l'influenza A présent) – Une ligne visible rougeACTBCTFlu A+ Flu B+(Positif pour Flu A) (Positif pour Flu B)ACTBNégatifABpourpre apparaît à la position « T » de test et la position « C » de contrôle dans lafenêtre de lecture de Directigen EZ Flu A. Une ligne rouge pourpre doit aussiapparaître à la position « C » de contrôle dans la fenêtre de lecture Directigen EZFlu B. Ceci indique que l'antigène d'influenza A a été décelé dans l'échantillon. Lacouleur de l'arrière plan peut aller du blanc au rose clair.Test positif pour Flu B (antigène de l'influenza B présent) – Une ligne rougepourpre apparaî t à la position « T » de test et la position « C » de contrôle dans lafenêtre de lecture de Directigen EZ Flu B. Une ligne rouge pourpre doit aussiapparaî tre à la position « C » de contrôle dans la fenêtre de lecture Directigen EZFlu A. Ceci indique que l'antigène d'influenza B a été décelé dans l'échantillon. Lacouleur de l'arrière plan peut aller du blanc au rose clair.Test négatif pour Flu A ou Flu B (pas d'antigène détecté) – Aucune ligne rougepourpre n'est visible à la position « T » de test ou dans la fenêtre de lecture FluA ou la fenêtre de lecture Flu B, ce qui indique que l'antigène d'influenza A oul'antigène d'influenza B ou les deux n'ont pas été décelés dans l'échantillon.Une ligne rouge pourpre à la position « C » de contrôle de la fenêtre de lectureFlu A et de la fenêtre de lecture Flu B ou dans les deux fenêtres de lectureconfirme la performance correcte du mode opératoire du test et des réactifs. Lacouleur de l'arrière plan peut aller du blanc au rose clair.CTCTCTTest non valide - Le test est non valide ou pour Flu A ou pour Flu B oupour les deux s'il n'y a aucune ligne rouge pourpre près de la position« C » dans la/les fenêtre(s) de lecture correspondante(s). Le test estaussi non valide si une ligne rouge pourpre apparaît à la position « T »dans les deux fenêtres de lecture Flu A et Flu B pour le mêmeéchantillon. Recommencer le test dans ce cas.Non valideNon valideNon valideRAPPORT DES RESULTATSTest positifPositif pour la présence de l'antigène d'influenza A ou d'influenza B. Un résultat positif peutêtre obtenu en l'absence de virus viable.Test négatifNégatif pour la présence de l'antigène d'influenza A ou d'influenza B. Une infection grippalene peut pas être écartée car la concentration de l'antigène présent dans l'échantillon peutêtre inférieure à la limite de détection du test. Il est recommandé de confirmer un résultatnégatif par une mise en culture.Test non valide Le résultat du test n'est pas concluant. Ne pas rapporter de résultats.LIMITES DE LA METHODEL'étiologie des infections respiratoires dues à des microorganismes autres que les virus influenza A ou B ne peut êtreétablie par ce test. Le test Directigen EZ Flu A+B peut détecter des particules d'influenza viables et non viables. Lesperformances du test Directigen EZ Flu A+B dépendent de la charge en antigène et ne sont pas nécessairementcorrélées aux résultats obtenus en culture cellulaire pour le même échantillon.Des faux négatifs risquent d'être obtenus si le prélèvement, la manipulation ou le transport des échantillons ont étémal effectués, ou si les décharges de virus sont faibles. un résultat négatif n'élimine pas la possibilité d'une infectionpar le virus influenza A ou B ou des virus des deux types. La validité du test Directigen EZ Flu A+B n'a pas étéprouvée pour l'identification ou la confirmation d'isolats en cultures cellulaires.VALEURS ESCOMPTÉESLe taux de résultats positifs observé pour les échantillons respiratoires testés variera en fonction de la méthode deprélèvement des échantillons, du système de manipulation ou de transport employé, de la méthode de détectionutilisée, de la période de l'année, de l'âge du patient, de la région géographique et, surtout, de la prévalence localede la maladie. La prévalence générale observée avec la culture pendant l'étude clinique 2003-2004 a été de 24,3 %pour l'influenza A et 3,8 % pour l'influenza B. Pendant l'étude clinique 2004-2005, la prévalence générale observéeavec la culture a été de 26,0 % pour l'influenza A et 31,2 % pour l'influenza B.14

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 15CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCESLes caractéristiques de performances du test Directigen EZ Flu A+B ont été établies dans une étude multicentriquemenée dans cinq centres d'investigation clinique pendant la saison 2003-2004 des affections respiratoires. Les centresinvestigateurs se situaient dans des régions éloignées géographiquement aux Etats-Unis, au Japon et à Hong Kong.Un total de 735 échantillons ont été évalués en utilisant le test Directigen EZ Flu A+B et la culture cellulaire. Ceséchantillons consistaient en en lavages et en aspirations naso-pharyngés et en écouvillonnages de gorge provenantde patients suspects de grippe.Performance clinique :Les tableaux 1 à 4 donnent la performance du test Directigen EZ Flu A+B comparée à celle de la culture cellulairepour chaque type d'échantillon.Tableau 1 : Résumé des performances du test Directigen EZ Flu A+B comparées à celles de la culture cellulaire pourtous les types d'échantillons - influenza A pour les saisons de troubles respiratoires 2003-2004 et 2004-2005 combinéesCulture cellulaireType d’échantillon Test Directigen P NEZ Flu A+BLavages/aspirations rhino-pharyngés P 115 2N 19 330Sensibilité : 86 % (95 % IC : 79 % – 91 %)Spécificité : 99 % (95 % IC : 98 % – 100 %)Ecouvillonnages de gorge P 43 29N 13 184Sensibilité : 77 % (95 % IC : 64 % – 87 %)Spécificité : 86 % (95 % IC : 81 % – 91 %)Tableau 2 : Résumé des performances du test Directigen EZ Flu A+B comparées à celles de la culture cellulaire pourtous les types d'échantillons - influenza B pour les saisons de troubles respiratoires 2003-2004 et 2004-2005 combinéesCulture cellulaireType d’échantillon Test Directigen P NEZ Flu A+BLavages/aspirations rhino-pharyngés P 57 1N 14 394Sensibilité : 80 % (95 % IC : 69 % – 89 %)Spécificité : 100 % (95 % IC : 99 % – 100 %)Ecouvillonnages de gorge P 38 3N 17 211Sensibilité : 69 % (95 % IC : 55 % – 81 %)Spécificité : 99 % (95 % IC : 96 % – 100 %)Tableau 3 : Résumé des performances du test Directigen EZ Flu A+B comparées à celles de la culture cellulaire pourtous les types d'échantillons par population - influenza A pour les saisons de troubles respiratoires 2003-2004 et2004-2005 combinéesCulture cellulaireType d’échantillon Test Directigen Pédiatrique AdulteEZ Flu A+BP N P NLavages/aspirations rhino-pharyngés P 94 2 21 0N 11 294 8 36Sensibilité : Pédiatrique : 90 % (95 % CI: 82 % - 95 %); Adulte : 72 % (95 % CI: 53 % - 87 %)Spécificité : Pédiatrique : 99 % (95 % CI: 98 % - 100 %); Adulte : 100 % (95 % CI: 90 % - 100 %)Type d’échantillon Test Directigen Pédiatrique AdulteEZ Flu A+BP N P NP 38 23 5 6Ecouvillonnages de gorgeN 10 151 3 33Sensibilité : Pédiatrique : 79 % (95 % CI: 65 % - 90 %); Adulte : 63 % (95 % CI: 24 % - 91 %)Spécificité : Pédiatrique : 87 % (95 % CI: 81 % - 91 %); Adulte : 85 % (95 % CI: 69 % - 94 %)15

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 16Tableau 4 : Résumé des performances du test Directigen EZ Flu A+B comparées à celles de la culture cellulaire pourtous les types d'échantillons par population - influenza B pour les saisons de troubles respiratoires 2003-2004 et2004-2005 combinéesCulture cellulaireType d’échantillon Test Directigen Pédiatrique AdulteEZ Flu A+BP N P NLavages/aspirations rhino-pharyngés P 49 1 8 0N 13 338 1 56Sensibilité : Pédiatrique : 79 % (95 % CI: 67 % - 88 %); Adulte : 89 % (95 % CI: 52 % - 100 %)Spécificité : Pédiatrique : 100 % (95 % CI: 98 % - 100 %); Adulte : 100 % (95 % CI: 94 % - 100 %)Type d’échantillon Test Directigen Pédiatrique AdulteEZ Flu A+BP N P NEcouvillonnages de gorgeP 19 1 19 2N 12 190 5 21Sensibilité : Pédiatrique : 61 % (95 % CI: 42 % - 78 %); Adulte : 79 % (95 % CI: 58 % - 93 %)Spécificité : Pédiatrique : 99 % (95 % CI: 97 % - 100 %); Adulte : 91 % (95 % CI: 72 % - 99 %)Reproductibilité : la reproductibilité du test Directigen EZ Flu A+B a été évaluée dans quatre sites. Le panel dereproductibilité était composé de 20 échantillons simulés de virus influenza. Ces échantillons comprenaient deséchantillons faiblement positifs pour le virus influenza A ou le virus influenza B (voisins du seuil limite de détection),des échantillons modérément positifs pour le virus influenza A ou B et des échantillons négatifs. La reproductibilitéglobale du test Directigen EZ Flu A+B était de 99,6 %.Etudes analytiquesSensibilité analytique (limite de détection)La limite de détection (LDD) du test Directigen EZ Flu A+B a été établie sur un total de 15 souches de virus influenza ;neuf souches d'influenza A et six souches d'influenza B.Type Souche du virus influenza LDD (CEID 50 /mL)*A A/PR/8/34 (H1N1) 1.75 X 10 4A A/FM/1/47 (H1N1) 1.98 X 10 3A A/NWS/33 (H1N1) 1.00 X 10 4A A1/Denver/1/57 (H1N1) 5.56 X 10 3A A/New Jersey/8/76 (H1N1) 4.45 X 10 3A A/Port Chalmers/1/73 (H3N2) 1.00 X 10 3A A/Hong Kong/8/68 (H3N2) 2.78 X 10 2A A2/Aichi2/68 (H3N2) 3.50 X 10 3A A/Victoria/3/75 (H3N2) 2.78 X 10 4B B/Lee/40 6.95 X 10 5B B/Allen/45 2.00 X 10 3B B/GL/1739/54 5.56 X 10 3B B/Taiwan/2/62 3.50 X 10 2B B/Maryland/1/59 2.23 X 10 4B B/Hong Kong/5/72 2.23 X 10 4* CEID 50 /mL = Dose infectieuse pour l’embryon de poulet à laquelle 50 % des embryons périssentSpécificité analytique (réactivité croisée)Le test Directigen EZ Flu A+B a été évalué sur un total de 98 microorganismes. Les 51 bactéries et les deux levuresont été testées à une concentration de ~10 8 UFC/mL (UFC - Unités Formant Colonies). Mycoplasma pneumoniae etMycoplasma orale ont été respectivement testés à une concentration de > 10 6 et de >10 7 UCC/mL (UCC - UnitésChangeant de Couleur). Les trois souches de mycobactéries ont été ensemencées à raison de 10 7 UFC/mL etChlamydia trachomatis LGVII a été testée à 2,5 X 10 8 CI/mL (CI = corps d'inclusion). Les 39 virus testés ont été évaluésaux concentrations de 10 4 à 10 9 TCID 50 /mL (TCID 50 - Dose infectieuse en culture tissulaire à laquelle 50 % des cellulessont lysées) ou de 10 4 à 10 8 CEID 50 /mL (CEID 50 - Dose infectieuse pour l'embryon de poulet à laquelle 50 % desembryons de poulet sont infectés). Tous les micro-organismes (autres que les virus de l'influenza) ont montré desrésultats de test d'influenza A et B négatifs. Les virus de l'influenza A testés (n = 2) ont montré des résultats de testpositifs pour l'influenza A et négatifs pour l'influenza B. Les virus de l'influenza A testés (n = 6) ont montré desrésultats de test positifs pour l'influenza B et négatifs pour l'influenza A.Acinetobacter baumannii (calcoaceticus) Neisseria meningitidisCoxsackievirus Type A9 (Griggs)Actinobacillus suis Neisseria mucosa Coxsackievirus Type A9 (P.B. Bozek)Bacteroides fragilis Neisseria sicca Coxsackievirus Type B5 (Faulkner)Bordetella pertussis Neisseria subflava Coxsackievirus Type B6 (Schmitt)Candida albicans Peptostreptococcus anaerobius Coxsackievirus Type A21 (Kuykendall)Candida glabrata Porphyromonas asaccharolyticus Cytomegalovirus (AD-169)Cardiobacterium hominis Prevotella oralis Echovirus Type 2 (Cornelis)Chlamydia trachomatis LGVII Proteus mirabilis Echovirus Type 3 (Morrisey)16

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 17Corynebacterium diphtheriae Proteus vulgaris Echovirus Type 6 (D'Amori)Eikenella corrodens Pseudomonas aeruginosa HSV Type 1 (HF)Enterococcus faecalis Salmonella choleraesuis HSV Type 2 (MS)Enterococcus gallinarum sub minnesota Influenza A/PR/8/34 (H1N1)Escherichia coli Serratia marcescens Influenza A/Victoria/3/75 (H3N2)Fusobacterium nucleatum Staphylococcus aureus Influenza B/Hong Kong/5/72Gardnerella vaginalis Staphylococcus aureus-Cowan 1 Influenza B /Lee/40Haemophilus aphrophilus Streptococcus bovis II groupe D Influenza B/Allen/45Haemophilus influenzae Staphylococcus epidermidis Influenza B/GL/1739/54Haemophilus parainfluenzae Streptococcus mutans Influenza B/Maryland/1/59Haemophilus paraphrophilus Streptococcus oralis Influenza B/Taiwan/2/62Kingella kingae Streptococcus pneumoniae Measles virus (Edmonston)Klebsiella pneumoniae Streptococcus pyogenes group A Mumps virus (Enders)Lactobacillus casei Streptococcus sanguis Parainfluenza Type 1 (Sendia/52)Lactobacillus fermentum Streptococcus sp. groupe B Parainfluenza Type 2 (Greer)Lactobacillus plantarum Streptococcus sp. groupe C Parainfluenza Type 3 (C243)Legionella pneumophila Streptococcus sp. groupe F Rhinovirus Type 1A (2060)Listeria monocytogenes Streptococcus sp. groupe G Rhinovirus Type 2 (HGP)Moraxella catarrhalis Veillonella parvula Rhinovirus Type 13 (353)Mycobacterium avium Adenovirus, Type 3 (GB) Rhinovirus Type 15 (1734)Mycobacterium intracellulare Adenovirus, Type 5 (Adenoid 75) Rhinovirus Type 16 (11757)Mycobacterium tuberculosis Adenovirus, Type 7 (Gomen) Rhinovirus Type 37 (151-1)Mycoplasma orale Adenovirus, Type 10 (J.J.) RSV Type A (Long)Mycoplasma pneumoniae Adenovirus, Type 18 (D. C.) RSV Type B (Wash/18537/62)Neisseria gonorrhoeae Coronavirus (229E) VZV (Ellen)Réactivité des souches avec les virus de l'influenza A et BLe test Directigen EZ Flu A+B a été évalué sur un total de 37 souches d'influenza. Tous les sous-types connusd'hémagglutinine (15) et de neuraminidase (9) d'influenza A étaient représentés. Toutes les souches d'influenza Ahumaine et animale ont donné des résultats positifs pour Flu A et négatifs pour Flu B. Réciproquement, toutes lessouches d'influenza B ont donné des résultats positifs pour Flu B et des résultats négatifs pour Flu A.Virus influenza (Souche humaine) Type viral Virus influenza (Souche animale) Type viralA/NWS/33 A (H1N1) A/Turkey/Kansas/4880/80 A (H1N1)A/PR/8/34 A (H1N1) A/Mallard/New York/6750/78 A (H2N2)A1/FM/1/47 A (H1N1) A/Turkey/England/69 A (H3N2)A1/Denver/1/57 A (H1N1) A/Chicken/Alabama/75 A (H4N8)A/New Jersey/8/76 (Hsw N1) A (H1N1) A/Turkey/Wisconsin/68 A (H5N9)A/Port Chalmers/1/73 A (H3N2) A/Turkey/Canada/63 A (H6N8)A/Victoria/3/75 A (H3N2) A/Turkey/Oregon/71 A (H7N3)A/Vietnam/3028/04 A (H5N1) A/Turkey/Ontario/6118/67 A (H8N4)A/Thailand/MK2/04 A (H5N1) A/Turkey/Wisconsin/66 A (H9N2)A/Hong Kong/486/97 A (H5N1) A/Chicken/Germany/N/49 A (H10N7)A/California/07/2004 A A/Duck/Memphis/546/74 A (H11N9)B/Lee/40 B A/Duck/Alberta/60/76 A (H12N5)B/Allen/45 B A/Gull/MD/704/77 A (H13N6)B/GL/1739/54 B A/Mallard/Gurjev/263/82 A (H14N5)B/Maryland/1/59 B A/Shearwater/WA/2576/79 A (H15N6)B/Taiwan/2/62BB/Mass/3/66BB/Hong Kong/5/72BB/Victoria/504/00BB/Tokyo/53/99BB/Quingdao/102/91BB/Leningrad/86/93BSubstances interférentesL'action de diverses substances a été évaluée avec le test Directigen EZ Flu A+B. Ces substances comprenaient dusang total (2 %) et des médicaments variés. Aucune interférence n'a été notée pour ce test avec aucune dessubstances testées.17

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 18Médicaments évaluésTrois bains de bouche à 25 %Trois produits de gouttes pour la gorge à 25 %Trois pulvérisations nasales à 10 %4-acétamidophénol (10 mg/mL)Acide acétylsalicylique (20 mg/mL)Maléate de chlorphéniramine (5 mg/mL)Dextrométhoraphan (10 mg/mL)Fexofénadine (500 ng/mL)Amantadine (500 ng/mL)Albutérol (0,083 mg/mL)Ribavirin (500 ng/mL)Chlorhydrate de pseudoéphédrine (20 mg/mL)Ether glycérique du gaïacol (20 mg/mL)Ibuprofène (10 mg/mL)Oxymétazoline (0,05 mg/mL)Phényléphrine (1 mg/mL)Loratidine (100 ng/mL)Chlorhydrate de diphénhydramine (5 mg/mL)Zanamivir (1 mg/mL)Rimantadine (500 ng/mL)Oseltamivir (500 ng/mL)Synagis (0,1 mg/mL)CONDITIONNEMENTN° réf. Description256050 Trousse de 30 tests Directigen EZ Flu A+B220144 CultureSwab EZ 100 (écouvillon unique)220145 CultureSwab EZ II 100 (écouvillon double)221819 Sérum physiologique normal, 5 mL, boî te de 100REFERENCES : - voir la rubrique "References" du texte anglais" Directigen EZ Flu A+BFür den differenzierten, direkten Nachweis vonVirusantigenen gegen Influenza A und BDeutschVERWENDUNGSZWECKDer Directigen EZ Flu A+B-Test ist ein schneller chromatographischer Immunoassay für den direkten qualitativenNachweis von Virusantigenen gegen Influenza A und B in Nasopharyngeal-Spülungen/-Aspiraten undRachenabstrichen von symptomatischen Patienten. Beim Directigen EZ Flu A+B-Test handelt es sich um einendifferenzierten Test, so dass Influenza-A-Antigene mit einem einzigen Gerät und einer aufbereiteten Probe vonInfluenza-B-Virusantigenen unterschieden werden können. Der Test kommt bei der Diagnose von Virusinfektionenmit Influenza A und B zum Einsatz. Alle negativen Testergebnisse sollten anhand einer Zellkultur bestätigt werden.ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLÄRUNGTypische Symptome für eine Influenza-Erkrankung sind das plötzliche Auftreten von Fieber, Schüttelfrost, Kopfschmerzen,Muskelschmerzen und trockener Husten. Influenza-Epidemien treten in der Regel in den Wintermonaten auf. Dabeiwerden in den USA pro Jahr schätzungsweise 114.000 Patienten stationär 1 behandelt und 36.000 2 Todesfälle verzeichnet.Influenza-Viren können auch Pandemien auslösen, bei denen die Erkrankungs- und Todesrate durch Influenza-bedingteKomplikationen dramatisch ansteigen kann.Patienten, bei denen der Verdacht auf eine Influenza-Erkrankung besteht, können von einer Behandlung mit einemVirostatikum profitieren. Das gilt besonders, wenn es innerhalb der ersten 48 h nach Beginn der Erkrankungverabreicht wird. Dabei ist eine schnelle Unterscheidung von Influenza A und Influenza B von Bedeutung, damit sichder Arzt für eine spezifische antivirale Behandlung entscheiden kann. Darüber hinaus ist es wichtig festzustellen, obInfluenza A oder B die Ursache für eine symptomatische Erkrankung in einer bestimmten Einrichtung (z. B. einemPflegeheim) oder einer Gemeinde ist, damit bei anfälligen Personen entsprechende vorbeugende Maßnahmenergriffen werden können. Daher muss nicht nur schnell festgestellt werden, ob eine Influenza-Erkrankung vorliegt,sondern auch um welchen Typ Influenza-Virus es sich handelt.Als diagnostische Tests auf Influenza stehen unter anderem der schnelle Immunoassay, der Immunfluoreszenzassay,die Polymerase-Kettenreaktion (PCR), die Serologie und die Viruskultur zur Verfügung. 3–10 BeiImmunfluoreszenzassays werden auf Objektträger fixierte Proben anhand von mit fluoreszierendem Farbstoffmarkierten Antikörpern eingefärbt und mit Hilfe der Fluoreszenzmikroskopie untersucht. 5,11,12 Bei Kulturmethodenwird zunächst eine Virusisolation in Zellkulturen vorgenommen, gefolgt von einer Hämadsorptionhemmung,Immunfluoreszenz oder eines Neutralisationstests zur Bestätigung des Vorhandenseins des Influenza-Virus. 12–14Der Directigen EZ Flu A+B-Test ist ein chromatographischer Immunoassay für den Nachweis von Influenza-A- oderInfluenza-B-Antigenen in Atemwegsproben von symptomatischen Patienten, bei dem das Ergebnis innerhalb von15 Min feststeht.Aufgrund seiner schnellen und vereinfachten Durchführbarkeit eignet sich der Directigen EZ Flu A+B-Test zumNachweis des Influenza-A- und Influenza-B-Antigens im Notfall; er liefert relevante Informationen für die Diagnosevon Influenza. Der Einsatz des Directigen EZ Flu A+B-Tests zur Unterscheidung einer Flu A- von einer Flu B-Infektionbietet die Möglichkeit einer höheren Selektivität bei der antiviralen Behandlung.18

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 19TESTPRINZIPBeim Directigen EZ Flu A+B-Test handelt es sich um einen chromatographischen Assay für den qualitativen Nachweis vonInfluenza-A- und Influenza-B-Virusantigenen in aufbereiteten Atemwegsproben. Wenn Proben aufbereitet und in dieTestvorrichtung gegeben werden, werden Influenza-A- oder Influenza-B-Virusantigene an Anti-Influenza-Antikörpergebunden, die zur Visualisierung an Partikel in den entsprechenden A- und B-Teststreifen konjugiert wurden. Der Antigen-Konjugat-Komplex wandert auf dem Teststreifen zum Reaktionsbereich und wird auf der Membran von der Linie ausAntikörper erfasst. Ein positives Ergebnis für Influenza A wird als eine rot-violette Linie an der Testposition „T“ und derKontrollposition „C“ im Directigen EZ Flu A-Ergebnisfenster sichtbar gemacht. Ein positives Ergebnis für Influenza B wirdals eine rot-violette Linie an der Testposition „T“ und der Kontrollposition „C“ im Directigen EZ Flu B-Ergebnisfenstersichtbar gemacht.REAGENZIENDas Directigen EZ Flu A+B-Kit umfasst die folgenden Komponenten:BD Flu A+B Vorrichtungen 30 Vorrichtungen Vorrichtung in Folienverpackung mit zwei reaktiven Streifen. JederStreifen umfasst eine Testlinie aus monoklonalem Antikörper, derentweder spezifisch auf Flu A- oder Flu B-Influenza-Virusantigenenreagiert, sowie eine Kontrolllinie aus Antikörper, der auf eine Speziesreagiert.Reagenz E 4,7 mL Reinigungsmittel, mit 0,2 % Natriumazid (Konservierungsmittel).Kontrolle A+/B- 2,8 mL Flu A-Positiv- und Flu B-Negativkontrolle, deaktiviertes Influenza-A-Antigen (rekombinantes Nukleoprotein) mit 0,1 % Natriumazid(Konservierungsmittel).Kontrolle B+/A- 2,8 mL Flu B-Positiv- und Flu A-Negativkontrolle, deaktiviertes Influenza-B-Antigen (rekombinantes Nukleoprotein) mit 0,1 % Natriumazid(Konservierungsmittel).DispensTube-Röhrchen 30 Röhrchen für die Probenaufbereitung und die Abgabe der Probe indie Vorrichtungen.DispensTube-Spitzen 30 Spitzen zum Filtrieren der Probe bei der Abgabe in die Vorrichtungen.Benötigtes, jedoch nicht mitgeliefertes Material: Pipette (für 300 µL), Timer, Vortexmischer, Transportmedien (siehe„Probenentnahme und -handhabung“), physiologische Kochsalzlösung und Tupfer mit Polyurethanspitze (Schaumstoff).Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen:In-vitro-Diagnostikum.1. Klinische Proben können pathogene Mikroorganismen wie Hepatitis-Viren und HIV enthalten. Beim Umgangmit allen mit Blut oder anderen Körperflüssigkeiten kontaminierten Artikeln sind die „AllgemeinenVorsichtsmaßnahmen“ 15–18 sowie die einschlägigen Institutionsrichtlinien zu beachten.2. Reagenzien enthalten Natriumazid, das bei Einatmen, Verschlucken oder Kontakt mit der Hautgesundheitsgefährdend ist. Bei Kontakt mit Säuren entstehen hochgiftige Gase. Bei Hautkontakt sofort mitreichlich Wasser abwaschen. Natriumazid kann mit Blei- und Kupferleitungen reagieren und hochexplosiveMetallazide bilden. Beim Entsorgen mit sehr viel Wasser nachspülen, um Ansammlungen von Azid zu vermeiden.3. Kitkomponenten nach Ablauf des Verfallsdatums nicht mehr verwenden.4. Ausschließlich Reagenzien derselben Chargen-Nr. verwenden.5. Die Vorrichtung nicht wieder verwenden.6. Das Kit nicht verwenden, wenn Kontrolle A+/B- und Kontrolle B+/A- nicht die korrekten Resultate liefern.7. Nur Tupfer mit Polyurethanspitze (Schaumstoff) verwenden.Lagerung und Handhabung: Die Kits können bei 2–25 °C aufbewahrt werden. NICHT EINFRIEREN. Reagenzien undVorrichtungen müssen Raumtemperatur haben (15–25 °C), wenn Sie für Tests verwendet werden.ENTNAHME UND VORBEREITUNG DER PROBENTransport und Aufbewahrung von Proben:Frische Proben sollten umgehend aufbereitet werden. Bei Bedarf können Proben in einem geeignetenTransportmedium bei 2–8 °C bis zu 72 h oder bei –20 °C bis zu 7 Tage aufbewahrt werden.Die Einhaltung der korrekten Entnahme- und Vorbereitungsverfahren für die Proben ist unerlässlich. Proben vorGebrauch nicht zentrifugieren, da das Entfernen der zellulären Bestandteile die Sensibilität des Test negativbeeinflussen kann. Proben, die im Frühstadium der Krankheit entnommen wurden, enthalten die höchsten viralen Titer.19

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 20Transportmedien: Die folgenden Transportmedien wurden geprüft und als für den Directigen EZ Flu A+B-Testgeeignet befunden:Bartels ViraTrans-MediumPhosphatgepufferte Kochsalzlösung + 0,5 % RinderserumalbuminCellmaticsPhosphatgepufferte Kochsalzlösung + 0,5 % GelatineEarle’s Minimal Essential Medium (EMEM) Phosphatgepufferte KochsalzlösungEMEM 0,5 % RinderserumalbuminStarplex MultitransEMEM 1 % RinderserumalbuminSaccharose-Phosphat (2-SP)Gepufferte Salzlösung nach HanksTrypticase-Soja-BouillonM4-MediumTrypticase-Soja-Bouillon + 0,5 % GelatineM4 RT-MediumTrypticase-Soja-Bouillon + 0,5 % RinderserumalbuminM5-MediumNährbouillon-Infusion vom Kalb (VIB)Physiologische Kochsalzlösung*VIB mit 0,5 % Rinderserumalbumin (BSA)BD virales Universal-Transport-Medium*Gefrorene, in physiologischer Kochsalzlösung aufbewahrte Proben sind zur Verwendung mit dem Directigen EZ FluA+B-Test nicht zu empfehlen.Nach Durchführung eines entsprechenden Qualifizierungsverfahren können auch andere Transportmedienverwendet werden.HINWEIS: EMEM-Medien mit Lactalbumin (d. h. 0,5 % oder 1,0 %) oder andere Transportmedien mit Lactalbuminsind nicht mit dem Directigen EZ Flu A+B-Test kompatibel.Probenentnahme und -vorbereitung: Zu den geeigneten Proben für den Directigen EZ Flu A+B-Test zählenNasopharyngeal-Spülungen/-Aspirate und Rachenabstriche.Vorgehen bei der Probenentnahme als Nasopharyngeal-Spülung/-Aspirat:1. Als Probenvolumen sind 1–3 mL zu empfehlen. Bei Verwendung eines Transportmediums wird eine minimaleVerdünnung der Probe bevorzugt.2. Übermäßig große Spülvolumina sind zu vermeiden, da sie die Testempfindlichkeit beeinträchtigen können.3. Die Probe wie unter „Testverfahren“ beschrieben weiterverarbeiten.Vorgehen bei der Probenentnahme als Rachenabstrich (Tupfer mit Polyurethanspitze [Schaumstoff] sind erforderlich– siehe Abschnitt „Lieferbare Produkte“):1. Abstrichproben müssen unverdünnt im Transportmedium weiterverarbeitet werden, wie unter„Testverfahren“ beschrieben.METHODETestverfahrenHINWEISE:• Die Reagenzien, Proben und Vorrichtungen müssen zur Testdurchführung Zimmertemperatur aufweisen (15–25 °C).• Vor der Entnahme einer Teilmenge für die Aufbereitung alle Proben gut durchmischen. Proben nichtzentrifugieren.• DispensTube-Röhrchen und Reagenzfläschchen sind senkrecht zu halten (in ca. 2,5 cm Abstand über demTestfeld der Directigen EZ Flu A+B-Vorrichtung bzw. zum DispensTube-Röhrchen) und die Tropfen behutsameinzeln abzugeben.1. Unmittelbar vor der Testdurchführung die Directigen EZ Flu A+B-Vorrichtung aus ihrer Folienpackung nehmen.2. Eine Vorrichtung und ein DispensTube-Röhrchen mit der jeweiligen zu testenden Kontrolle und Probe beschriften.3. Das bzw. die so gekennzeichnete(n) DispensTube-Röhrchen im vorgesehenen Bereich der Arbeitsstation oderdes Ständers platzieren.4. Reagenz E behutsam mischen. 4 Tropfen in das DispensTube-Röhrchen geben. Reagenzfläschchen senkrecht halten (in ca.2,5 cm Abstand über dem DispensTube-Röhrchen) und dieETropfen abgeben.20

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 215. Die Probe oder Kontrolle gut durchmischen und wie imFolgenden beschrieben verarbeiten:a. Für Proben aus Nasopharyngeal-Spülungen/-Aspiraten:1. Probe im Vortexmischer oder auf sonstige Weise gutdurchmischen. Nicht zentrifugieren.2. 300 µL Probenflüssigkeit in ein DispensTube-Röhrchen (mitReagenz E) pipettieren.b. Für Proben aus Rachenabstrichen:1. 300 µL physiologische Kochsalzlösung in das DispensTube-Röhrchen (mit Reagenz E) geben.2. Abstrichtupfer zugeben und ausdrücken. Dabei Tupfer6–8 Mal hin und her drehen und gleichzeitig das Röhrchenzusammendrücken.3. Tupfer entnehmen (Röhrchen zusammendrücken, umüberschüssige Flüssigkeit von der Tupferspitze zuentfernen).c. Für Kitkontrollen:1. Fläschchen mit Kontrolle A+/B- und Kontrolle B+/Abehutsammischen.2. 6 Tropfen von Kontrolle A+/B- in das entsprechendbeschriftete DispensTube-Röhrchen (mit Reagenz E) geben.3. 6 Tropfen von Kontrolle B+/A- in das entsprechendbeschriftete DispensTube-Röhrchen (mit Reagenz E) geben.A+/B-B+/A-6. Auf dem DispensTube-Röhrchen mit der aufbereiteten Probeoder Kontrolle eine DispensTube-Spitze anbringen.Hinweis: Keine Spitzen anderer Directigen-Produkteverwenden.7. Auf dem Vortexmischer oder auf sonstige Weise gut durchmischen.8. Das DispensTube-Röhrchen umdrehen und in der oberenHälfte fassen (nicht im Spitzenbereich); behutsam drei (3)Tropfen der aufbereiteten Probe in das Flu A-Testfeld sowiedrei (3) Tropfen in das Flu B-Testfeld der entsprechendbeschrifteten Directigen EZ Flu A+B-Vorrichtung auspressen.Anmerkungen: Wird das Röhrchen im Spitzenbereichzusammengepresst, kann dies zum Ausstoßen der Spitze undzum Auslaufen des Röhrcheninhalts führen.9. 15 Min nach Zugabe der Probe das Ergebnis ablesen und das Testergebnis protokollieren.Qualitätskontrolle:Es sind die geltenden gesetzlichen und behördlichen und in den Akkreditierungsbedingungen festgelegtenVorschriften zur Qualitätskontrolle sowie die laborinternen Standardvorgaben zur Qualitätskontrolle zu beachten.21

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 22Jede Directigen EZ Flu A+B-Vorrichtung enthält sowohl positive als auch negative interneKontrollen/Verfahrenskontrollen:• Das Erscheinen einer rot-violetten Kontrolllinie im Flu A- und/oder Flu B-Ergebnisfenster an Kontrollposition„C“ dient als positive interne Kontrolle zur Bestätigung der ordnungsgemäßen Reaktionsfähigkeit derReagenzien und der korrekten Durchführung des Tests.• Der Membranbereich um den Flu A- und/oder Flu B-Test sowie die Kontrolllinien dient als interne negativeKontrolle für das Gerät. Ein weißer bis hellrosa Hintergrund weist darauf hin, dass der Test korrektdurchgeführt wurde.Jedes Directigen EZ Flu A+B-Kit enthält flüssige Kitkontrollen (Kontrolle A+/B- und Kontrolle B+/A-):Diese Kontrollen werden auf die gleiche Weise wie Patientenproben getestet und dienen als externeQualitätskontrolle. Diese Flüssigkontrollen sollten zumindest für jedes neue Kit oder jede eingegangene Lieferungals Qualitätskontrolle analysiert werden. Bei Bedarf können die Reagenzienleistung und die korrekteTestdurchführung auch anhand von Proben ermittelt werden, die als positiv oder negativ für das Virus Influenza Aoder B qualifiziert wurden.Die Ausbildung einer rot-violetten Linie auf der Membran im Flu A-Ergebnisfenster an der Testposition („T“) undKontrollposition („C“) bei Testen der Kontrolle A+/B- sowie im Flu B-Ergebnisfenster an der Testposition („T“) undKontrollposition („C“) bei Testen der Kontrolle B+/A- bestätigt, dass die Influenza-Antigen-Bindungsfähigkeit desTeststreifens funktionstüchtig ist.Die Ausbildung einer rot-violetten Kontrolllinie an der Kontrollposition („C“) im Flu B-Ergebnisfenster sowie dasFehlen einer rot-violetten Testlinie an der Testposition („T“) bei Verwendung der Kontrolle A+/B- ist einangemessenes negatives Kontrollergebnis für Flu B, das eine ordnungsgemäßen Reaktionsfähigkeit der Reagenzienund die korrekte Durchführung des Tests bestätigt. Ebenso ist die Ausbildung einer rot-violetten Kontrolllinie an derKontrollposition („C“) im Flu A-Ergebnisfenster sowie das Fehlen einer rot-violetten Testlinie an der Testposition(„T“) bei Verwendung der Kontrolle B+/A- ein angemessenes negatives Kontrollergebnis für Flu A.Falls die Kitkontrollen nicht die erwarteten Ergebnisse liefern, keine Patientenergebnisse ausgeben. Setzen Sie sich indiesem Fall bitte mit Ihrem BD-Vertreter oder dem zuständigen technischen Kundendienst in Verbindung.INTERPRETATION DER ERGEBNISSEHINWEIS: Die Intensität der Kontrolllinie kann im Flu A- und im Flu B-Ergebnisfenster unterschiedlich sein.Abweichungen in der Intensität der Kontrolllinie sind zulässig. Der Hintergrund sollte weiß bis hellrosa sein, undkann zwischen den Flu A- und Flu B-Ergebnisfenstern eine unterschiedliche Intensität haben.Positiver Test für Flu A (Influenza A-Antigen liegt vor) – Eine rot-violette LinieACTBFlu A+(Flu A Positiv)ACTBFlu B+(Flu B Positiv)erscheint an der Testposition „T“ und der Kontrollposition „C“ im Directigen EZFlu A-Ergebnisfenster. Außerdem sollte an der Kontrollposition „C“ im DirectigenEZ Flu B-Ergebnisfenster eine rot-violette Linie zu sehen sein. Dies bedeutet, dassin der Probe Influenza-A-Antigen nachweisbar war. Der Hintergrund sollte weißbis hellrosa sein.Positiver Test für Flu B (Influenza B-Antigen liegt vor) – Eine rot-violette Linieerscheint an der Testposition „T“ und der Kontrollposition „C“ im Directigen EZFlu B-Ergebnisfenster. Außerdem sollte an der Kontrollposition „C“ im DirectigenEZ Flu A-Ergebnisfenster eine rot-violette Linie zu sehen sein. Dies bedeutet, dassin der Probe Influenza-B-Antigen nachweisbar war. Der Hintergrund sollte weißbis hellrosa sein.ACTBNegativNegativer Test für Flu A oder Flu B (kein Antigen nachgewiesen) – An derTestposition „T“ ist weder im Flu A- noch im Flu B-Ergebnisfenster eine rotvioletteLinie sichtbar. Dies bedeutet, dass weder Influenza-A-Antigen nochInfluenza-B-Antigen in der Probe nachgewiesen werden konnte. Eine rot-violetteLinie an der Kontrollposition „C“ im Flu A-Ergebnisfenster, im Flu B-Ergebnisfenster oder in beiden Ergebnisfenstern bestätigt die korrekteTestdurchführung und eine angemessene Reagenzienleistung. Der Hintergrundsollte weiß bis hellrosa sein.CTCTCTUngültiger Test – Der Test ist ungültig, wenn weder für Flu A noch fürFlu B im jeweiligen Ergebnisfenster eine rot-violette Linie neben derKontrollposition „C“ sichtbar ist. Der Test ist auch ungültig, wenn inbeiden Ergebnisfenstern (sowohl Flu A als auch Flu B) eine rot-violetteLinie an der Testposition „T“ erscheint. Ein ungültiger Test ist zuwiederholen.UngültigUngültigUngültigDOKUMENTATION DER TESTERGEBNISSEPositiver Test Positiv für das Vorliegen von Influenza-A- oder Influenza-B-Antigen. Ein positives Ergebniskann auftreten, selbst wenn keine lebensfähigen Viren vorhanden sind.Negativer Test Negativ für das Vorliegen von Influenza-A- oder Influenza-B-Antigen. Das Vorliegen einerInfektion mit Influenza kann nicht ausgeschlossen werden, da in der Probe Antigen in einerMenge unterhalb der Nachweisgrenze vorhanden sein könnte. Es wird empfohlen, negativeProben durch eine Kultur zu bestätigen.Ungültiger Test Der Test ist ergebnislos. Keine Ergebnisse berichten.22

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 23VERFAHRENSBESCHRÄNKUNGENDurch andere Erreger als Influenza A oder Influenza B verursachte Atemwegsinfektionen können mit diesem Testnicht nachgewiesen werden. Mit dem Directigen EZ Flu A+B-Test können sowohl vermehrungsfähige als auch nichtvermehrungsfähige Influenza-Partikel nachgewiesen werden. Die Leistungsfähigkeit des Directigen EZ Flu A+B-Testshängt von der Antigenmenge ab und korreliert nicht unbedingt mit den Ergebnissen einer von derselben Probeangelegten Zellkultur.Unzulängliche Probenentnahme, inkorrekte(r) Probenhandhabung/-transport oder geringe Virusabscheidung könnenzu einem falsch-negativen Ergebnis führen. Daher schließt ein negatives Testergebnis das Vorliegen einer möglichenInfektion mit Influenza A und/oder Influenza B nicht aus. Die Eignung des Directigen EZ Flu A+B-Tests für dieIdentifizierung oder Bestätigung von Isolaten aus Zellkulturen ist nicht erwiesen.ZU ERWARTENDE ERGEBNISSEDie Anzahl der positiven Testergebnisse bei Verwendung von Atemwegsproben ist abhängig von derProbenentnahmemethode, dem verwendeten Handhabungs-/Transportsystem, der angewandten Nachweismethode,der Jahreszeit, dem Patientenalter, der geografischen Region und vor allem dem lokalen Krankheitsvorkommen. Dieim Rahmen der klinischen Studie 2003/2004 bei Kulturen beobachtete Häufigkeit betrug 24,3 % für Influenza A und3,8 % für influenza B. In der klinischen Studie 2004/2005 betrug sie 26,0 % für Influenza A und 31,2 % fürInfluenza B.LEISTUNGSMERKMALEDie Leistungsmerkmale des Directigen EZ Flu A+B-Tests wurden im Rahmen einer in der Erkältungssaison 2003/2004an 5 Studienzentren und 2004/2005 an 13 Studienzentren durchgeführten Studie ermittelt. Diese klinischen Zentrenbefanden sich in verschiedenen geografischen Regionen der USA, Japan und in Hongkong.Es wurden insgesamt 735 prospektive Proben mit dem Directigen EZ Flu A+B Test und einer Zellkultur evaluiert.Diese Proben bestanden aus nasopharyngealen Spülungs- und Aspiratproben sowie Rachenabstriche von Patientenmit Verdacht auf Influenza.Klinische Leistung:Die Leistungsmerkmale des Directigen EZ Flu A+B-Tests im Vergleich zur Zellkultur werden für die jeweiligeProbenart in Tabelle 1 und Tabelle 4 dargestellt.Tabelle 1: Zusammenfassung der Leistung des Directigen EZ Flu A+B-Tests im Vergleich zur Kultivierung (Kultur) füralle Probenarten – Influenza A, Erkältungssaison 2003/2004 und 2004/2005 kombiniertZellkulturProbenart Directigen EZ P NFlu A+BNasopharyngeal- P 115 2Spülungen/-Aspirate N 19 330Empfindlichkeit: 86 % (95-%-VI: 79 % bis 91 %)Spezifität: 99 % (95-%-VI: 98 % bis 100 %)P 43 29RachenabstricheN 13 184Empfindlichkeit: 77 % (95-%-VI: 64 % bis 87 %)Spezifität: 86 % (95-%-VI: 81 % bis 91 %)Tabelle 2: Zusammenfassung der Leistung des Directigen EZ Flu A+B-Tests im Vergleich zur Kultivierung(Kultur) für alle Probenarten – Influenza B, Erkältungssaison 2003/2004 und 2004/2005 kombiniertZellkulturProbenart Directigen EZ P NFlu A+BNasopharyngeal- P 57 1Spülungen/-Aspirate N 14 394Empfindlichkeit: 80 % (95-%-VI: 69 % bis 89 %)Spezifität: 100 % (95-%-VI: 99 % bis 100 %)P 38 3RachenabstricheN 17 211Empfindlichkeit: 69 % (95-%-VI: 55 % bis 81 %)Spezifität: 99 % (95-%-VI: 96 % bis 100 %)23

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 24Tabelle 3: Zusammenfassung der Leistung des Directigen EZ Flu A+B-Tests im Vergleich zur Kultivierung (Kultur) füralle Probenarten nach Population – Influenza A, Erkältungssaison 2003/2004 und 2004/2005 kombiniertZellkulturProbenart Directigen EZ Pädiatrie ErwachseneFlu A+B TestP N P NNasopharyngeale P 94 2 21 0Spülungen/-Aspirate N 11 294 8 36Empfindlichkeit: Pädiatrie: 90 % (95-%-VI: 82 % - 95 %); Erwachsene: 72 % (95 %-VI: 53 % - 87 %)Spezifität: Pädiatrie: 99 % (95 %-VI: 98 % -100 %); Erwachsene: 100 % (95 %-VI: 90 % - 100 %)Probenart Directigen EZ Pädiatrie ErwachseneFlu A+B TestP N P NRachenabstricheP 38 23 5 6N 10 151 3 33Empfindlichkeit: Pädiatrie: 79 % (95 %-VI: 65 % - 90%); Erwachsene: 63 % (95 %-VI: 24 % - 91 %)Spezifität: Pädiatrie: 87 % (95 %-VI: 81 % - 91 %); Erwachsene: 85 % (95 %-VI: 69 % - 94 %)Tabelle 4: Zusammenfassung der Leistung des Directigen EZ Flu A+B-Tests im Vergleich zur Kultivierung(Kultur) für alle Probenarten nach Population – Influenza B, Erkältungssaison 2003/2004 und 2004/2005kombiniertZellkulturProbenart Directigen EZ Pädiatrie ErwachseneFlu A+B TestP N P NNasopharyngeale P 49 1 8 0Spülungen/-Aspirate N 13 338 1 56Empfindlichkeit: Pädiatrie: 79 % (95-%-VI: 67 % - 88 %); Erwachsene: 89 % (95 %-VI: 52 % - 100 %)Spezifität: Pädiatrie: 100 % (95 %-VI: 98 % - 100 %); Erwachsene: 100 % (95 %-VI: 94 % - 100 %)Probenart Directigen EZ Pädiatrie ErwachseneFlu A+B TestP N P NRachenabstricheP 19 1 19 2N 12 190 5 21Empfindlichkeit: Pädiatrie: 61 % (95 %-VI: 42 % - 78%); Erwachsene: 79 % (95 %-VI: 58 % - 93 %)Spezifität: Pädiatrie: 99 % (95 %-VI: 97 % - 100 %); Erwachsene: 91 % (95 %-VI: 72 % - 99 %)Reproduzierbarkeit: Die Reproduzierbarkeit des Directigen EZ Flu A+B-Tests wurde an vier Standorten überprüft. DasReproduzierbarkeitsprofil bestand aus 20 simulierten Influenza-Proben. Diese Proben umfassten schwach positive FluA- oder Flu B-Proben (nahe der Nachweisgrenze des Tests), mäßig positive Flu A- oder Flu B-Proben und negativeProben. Die gesamte Reproduzierbarkeit des Directigen EZ Flu A+B-Tests lag bei 99,6 %.Analytische StudienTestempfindlichkeit (Nachweisgrenze)Die Nachweisgrenze des Directigen EZ Flu A+B-Tests wurde anhand von insgesamt 15 Influenza-Stämmen, davon 9Influenza-A und 6 Influenza-B, ermittelt.Typ Influenza-Virusstamm Nachweisgrenze (CEID 50 /mL)*A A/PR/8/34 (H1N1) 1,75 X 10 4A A/FM/1/47 (H1N1) 1,98 X 10 3A A/NWS/33 (H1N1) 1,00 X 10 4A A1/Denver/1/57 (H1N1) 5,56 X 10 3A A/New Jersey/8/76 (H1N1) 4,45 X 10 3A A/Port Chalmers/1/73 (H3N2) 1,00 X 10 3A A/Hong Kong/8/68 (H3N2) 2,78 X 10 2A A2/Aichi2/68 (H3N2) 3,50 X 10 3A A/Victoria/3/75 (H3N2) 2,78 X 10 4B B/Lee/40 6,95 X 10 5B B/Allen/45 2,00 X 10 3B B/GL/1739/54 5,56 X 10 3B B/Taiwan/2/62 3,50 X 10 2B B/Maryland/1/59 2,23 X 10 4B B/Hong Kong/5/72 2,23 X 10 4* CEID 50 /mL = Hühnerembryo-Infektionsdosis, bei der 50 % der Embryos sterben24

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 25Analytische Spezifität (Kreuzreaktion)Der Directigen EZ Flu A+B-Test wurde unter Verwendung von insgesamt 98 Mikroorganismen beurteilt. Dabei wurden51 Bakterien und zwei Hefepilze in einer Konzentration von ~10 8 KBE/mL getestet (KBE – koloniebildende Einheiten).Mycoplasma pneumoniae und Mycoplasma orale wurden in Konzentrationen von > 10 6 bzw. > 10 7 CCU/mL getestet(CCU – Color Changing Units, Farbumschlagseinheiten). Die drei Mykobakterienstämme wurden mit 10 7 KBE/mLbeimpft und Chlamydia trachomatis LGVII wurde mit 2,5 X 10 8 EK/mL getestet (EK = Elementarkörperchen). Die 39getesteten Viren wurden in Konzentrationen von 10 4 bis 10 9 TCID 50 /mL (TCID 50 – Gewebekultur-Infektionsdosis, beider 50 % der Zellen lysiert werden) oder 10 4 bis 10 8 CEID 50 /mL untersucht (CEID 50 – Hühnerembryo-Infektionsdosis,bei der 50 % der Embryos infiziert waren). Alle Mikroorganismen (außer Influenza-Viren) ergaben negative Flu A undFlu B Testergebnisse. Die getesteten Influenza A-Viren (n = 2) ergaben mit Flu A positive und Flu B negativeTestergebnisse. Die getesteten Influenza B-Viren (n = 6) ergaben mit Flu B positive und Flu A negative Testergebnisse.Acinetobacter baumannii (calcoaceticus) Neisseria meningitidis Coxsackievirus Typ A9 (Griggs)Actinobacillus suis Neisseria mucosa Coxsackievirus Typ A9 (P.B. Bozek)Bacteroides fragilis Neisseria sicca Coxsackievirus Typ B5 (Faulkner)Bordetella pertussis Neisseria subflava Coxsackievirus Typ B6 (Schmitt)Candida albicans Peptostreptococcus anaerobius Coxsackievirus Typ A21 (Kuykendall)Candida glabrata Porphyromonas asaccharolyticus Cytomegalovirus (AD-169)Cardiobacterium hominis Prevotella oralis Echovirus Typ 2 (Cornelis)Chlamydia trachomatis LGVII Proteus mirabilis Echovirus Typ 3 (Morrisey)Corynebacterium diphtheriae Proteus vulgaris Echovirus Typ 6 (D'Amori)Eikenella corrodens Pseudomonas aeruginosa HSV Typ 1 (HF)Enterococcus faecalis Salmonella choleraesuis HSV Typ 2 (MS)Enterococcus gallinarum sub minnesota Influenza A/PR/8/34 (H1N1)Escherichia coli Serratia marcescens Influenza A/Victoria/3/75 (H3N2)Fusobacterium nucleatum Staphylococcus aureus Influenza B/Hong Kong/5/72Gardnerella vaginalis Staphylococcus aureus-Cowan 1 Influenza B /Lee/40Haemophilus aphrophilus Streptococcus bovis II Gruppe D Influenza B/Allen/45Haemophilus influenzae Staphylococcus epidermidis Influenza B/GL/1739/54Haemophilus parainfluenzae Streptococcus mutans Influenza B/Maryland/1/59Haemophilus paraphrophilus Streptococcus oralis Influenza B/Taiwan/2/62Kingella kingae Streptococcus pneumoniae Masern-Virus (Edmonston)Klebsiella pneumoniae Streptococcus pyogenes group A Mumps-virus (Enders)Lactobacillus casei Streptococcus sanguis Parainfluenza Typ 1 (Sendia/52)Lactobacillus fermentum Streptococcus sp. Gruppe B Parainfluenza Typ 2 (Greer)Lactobacillus plantarum Streptococcus sp. Gruppe C Parainfluenza Typ 3 (C243)Legionella pneumophila Streptococcus sp. Gruppe F Rhinovirus Typ 1A (2060)Listeria monocytogenes Streptococcus sp. Gruppe G Rhinovirus Typ 2 (HGP)Moraxella catarrhalis Veillonella parvula Rhinovirus Typ 13 (353)Mycobacterium avium Adenovirus, Typ 3 (GB) Rhinovirus Typ 15 (1734)Mycobacterium intracellulare Adenovirus, Typ 5 (Adenoid 75) Rhinovirus Typ 16 (11757)Mycobacterium tuberculosis Adenovirus, Typ 7 (Gomen) Rhinovirus v 37 (151-1)Mycoplasma orale Adenovirus, Typ 10 (J.J.) RSV Typ A (Long)Mycoplasma pneumoniae Adenovirus, Typ 18 (D. C.) RSV Typ B (Wash/18537/62)Neisseria gonorrhoeae Coronavirus (229E) VZV (Ellen)25

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 26Reaktivität der Virusstämme Influenza A und BDer Directigen EZ Flu A+B-Test wurde unter Verwendung eines Panels von 37 Influenzastämmen beurteilt. Allebekannten Hämagglutinin- (15) und Neuraminidase-Subtypen (9) der Influenza A waren in diesem Panel vertreten.Alle menschlichen und tierischen Influenza-A-Stämme wiesen positive Flu A-Testergebnisse und negative Flu B-Testergebnisse auf. Dagegen wiesen alle Influenza-B-Stämme positive Flu B-Testergebnisse und negative Flu A-Testergebnisse auf.Influenza-Virus (menschlicher Stamm) Virustyp Influenza-Virus (tierischer Stamm) VirustypA/NWS/33 A (H1N1) A/Turkey/Kansas/4880/80 A (H1N1)A/PR/8/34 A (H1N1) A/Mallard/New York/6750/78 A (H2N2)A1/FM/1/47 A (H1N1) A/Turkey/England/69 A (H3N2)A1/Denver/1/57 A (H1N1) A/Chicken/Alabama/75 A (H4N8)A/New Jersey/8/76 (Hsw N1) A (H1N1) A/Turkey/Wisconsin/68 A (H5N9)A/Port Chalmers/1/73 A (H3N2) A/Turkey/Canada/63 A (H6N8)A/Victoria/3/75 A (H3N2) A/Turkey/Oregon/71 A (H7N3)A/Vietnam/3028/04 A (H5N1) A/Turkey/Ontario/6118/67 A (H8N4)A/Thailand/MK2/04 A (H5N1) A/Turkey/Wisconsin/66 A (H9N2)A/Hong Kong/486/97 A (H5N1) A/Chicken/Germany/N/49 A (H10N7)A/California/07/2004 A (H3N2) A/Duck/Memphis/546/74 A (H11N9)B/Lee/40 B A/Duck/Alberta/60/76 A (H12N5)B/Allen/45 B A/Gull/MD/704/77 A (H13N6)B/GL/1739/54 B A/Mallard/Gurjev/263/82 A (H14N5)B/Maryland/1/59 B A/Shearwater/WA/2576/79 A (H15N6)B/Taiwan/2/62BB/Mass/3/66BB/Hong Kong/5/72BB/Victoria/504/00BB/Tokyo/53/99BB/Quingdao/102/91BB/Leningrad/86/93BStörsubstanzenEs wurden verschiedene Substanzen mit dem Directigen EZ Flu A+B-Test analysiert, Diese Substanzen enthieltenVollblut (2 %) und verschiedene Medikamente. Keine der Substanzen störte den Assay.Auswertung der MedikamenteDrei rezeptfreie Mundwässer (25 %)Drei rezeptfreie Rachentropfen (25 %)Drei rezeptfreie Nasensprays (10 %)4-Acetamidophenol (10 mg/mL)Acetylsalicylsäure (20 mg/mL)Chlorpheniramin-Maleat (5 mg/mL)Dextromethorphan (10 mg/mL)Fexofenadin (500 ng/mL)Amantadin (500 ng/mL)Albuterol (0,083 mg/mL)Ribavirin (500 ng/mL)Pseudoephedrin-HCl (20 mg/mL)Guajacol-Glycerylether (20 mg/mL)Ibuprofen (10 mg/mL)Oxymetazolin (0,05 mg/mL)Phenylephrin (1 mg/mL)Loratidin (100 ng/mL)Diphenhydramin-HCl (5 mg/mL)Zanamivir (1 mg/mL)Rimantadin (500 ng/mL)Oseltamivir (500 ng/mL)Synagis (0,1 mg/mL)LIEFERBARE PRODUKTEBest.- Nr. Beschreibung256050 Directigen EZ Flu A+B (Kit mit je 30 Tests)220144 CultureSwab EZ 100 (Einzeltupfer)220145 CultureSwab EZ II 100 (Doppeltupfer)221819 Physiologische Kochsalzlösung, 5 mL, 100 pro KartonLITERATUR : "References" im englischen Text.26

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 27" Directigen EZ Flu A+BPer la rilevazione diretta differenziata degli antigenidei virus influenzali A e BItalianoUSO PREVISTOIl test Directigen EZ Flu A+B è un dosaggio immunoenzimatico cromatografico rapido per la rilevazione diretta equalitativa degli antigeni dei virus influenzali A e B da lavaggi/aspirati nasofaringei e tamponi faringei di pazientisintomatici. Il test Directigen EZ Flu A+B è differenziato e consente pertanto di distinguere gli antigeni dei virusinfluenzali A da quelli B a partire da un solo campione trattato, usando un unico dispositivo. Il test è destinato aessere utilizzato come supporto nella diagnosi di infezione da virus influenzale A e B. Confermare tutti i risultatinegativi mediante coltura cellulare.SOMMARIO E SPIEGAZIONEL’influenza è una malattia che si presenta generalmente con improvvisa comparsa di febbre, brividi, cefalea, mialgiee tosse non produttiva. Le epidemie influenzali si verificano di norma nei mesi invernali provocando, negli StatiUniti, 114.000 ospedalizzazioni 1 e 36.000 decessi 2 annui. I virus dell’influenza possono anche causare pandemie, nelcorso delle quali i tassi di morbilità e mortalità dovute a complicanze correlate all’influenza possono aumentare inmodo significativo.I pazienti con sospetta influenza possono beneficiare del trattamento con un agente antivirale, specie sesomministrato entro 48 h dalla comparsa della sintomatologia. La differenziazione rapida dell’influenza A dalla B èimportante al fine di consentire ai medici l’adozione di un intervento antivirale selettivo. È inoltre essenzialedeterminare se l’influenza A o B causi malattia sintomatica in una particolare struttura (es. residenza assistita) ocomunità allo scopo di adottare misure preventive appropriate per i soggetti suscettibili. Di conseguenza, èfondamentale accertare rapidamente non soltanto l’eventuale presenza di influenza ma anche il tipo di virusinfluenzale presente.I test diagnostici per l’influenza disponibili comprendono dosaggi immunoenzimatici rapidi, test diimmunofluorescenza, reazione a catena della polimerasi (PCR), sierologia e coltura virale. 3-10 Nei test diimmunofluorescenza, i campioni fissati su vetrino vengono colorati con anticorpi marcati con un agente fluorescentee osservati mediante microscopia a fluorescenza. 5,11,12 I metodi colturali consistono nell’isolamento virale iniziale incoltura cellulare seguito da inibizione dell’emoadsorbimento, immunofluorescenza o test di neutralizzazione perconfermare la presenza del virus dell’influenza. 12-14Il test Directigen EZ Flu A+B è un dosaggio immunoenzimatico cromatografico per la rilevazione degli antigeni deivirus influenzali A e B da campioni respiratori di pazienti sintomatici che consente di avere i risultati entro 15 min.Grazie alla rapidità e facilità di esecuzione, il dosaggio Directigen EZ Flu A+B può essere usato come test “STAT” dirilevazione degli antigeni dei virus influenzali A e B offrendo informazioni importanti ai fini della diagnosi diinfluenza. L’uso del test Directigen EZ Flu A+B per la differenziazione dell’infezione da virus A da quella da virus Bpuò fornire una maggiore scelta a livello di intervento antivirale.PRINCIPI DELLA PROCEDURAIl test Directigen EZ Flu A+B è un dosaggio cromatografico per la rilevazione qualitativa degli antigeni dei virusinfluenzali A e B in campioni derivati dalle vie respiratorie. Una volta trattati e dispensati i campioni nel dispositivodi analisi, gli antigeni dei virus influenzali A o B si legano agli anticorpi anti-influenza coniugati con particelle divisualizzazione nelle strisce di test A e B corrispondenti. Il complesso antigene-coniugato migra sulla striscia del testfino all'area reattiva e viene catturato dalla riga di anticorpi sulla membrana. Se il test per influenza A è positivo,compare una riga di colore rosso-porpora in corrispondenza della posizione di test "T" e della posizione di controllo"C" nella finestra di lettura Directigen EZ Flu A. Se il test per influenza B è positivo, compare una riga di colorerosso-porpora in corrispondenza della posizione di test "T" e della posizione di controllo "C" nella finestra di letturaDirectigen EZ Flu B.REAGENTIIl kit Directigen EZ Flu A+B comprende i seguenti componenti.Dispositivi BD Flu A+B 30 dispositivi Dispositivo in busta di foglio alluminio contenente due strisce reattive.Ogni striscia contiene una riga di test di anticorpi monoclonali specificiper l’antigene del virus influenzale A o B e una riga di controllo dianticorpi anti-specie.Reagente E 4,7 mL Detergente, con sodio azide allo 0,2% (conservante)Controllo A+/B- 2,8 mL Controllo positivo Flu A e negativo Flu B, antigene inattivato del virusinfluenzale A (nucleoproteina ricombinante) con sodio azide allo 0,1%(conservante)Controllo B+/A- 2,8 mL Controllo positivo Flu B e negativo Flu A, antigene inattivato del virusinfluenzale B (nucleoproteina ricombinante) con sodio azide allo 0,1%(conservante)Provette DispensTube 30 Provette per il trattamento dei campioni e la dispensazione deicampioni nei dispositivi.Puntali DispensTube 30 Puntali per filtrare il campione dispensato nei dispositivi.27

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 28Materiali necessari ma non forniti - Pipetta (in grado di dispensare 300 µL), cronometro, vortex, terreno di trasporto(vedere Raccolta e trattamento dei campioni), soluzione fisiologica e tamponi in (schiuma di) poliuretano.Avvertenze e precauzioniPer uso diagnostico in vitro.1. I campioni clinici possono contenere microrganismi patogeni, inclusi i virus dell'epatite e i virusdell'immunodeficienza umana. Manipolare tutti i materiali e gli articoli contaminati con sangue e altri fluidibiologici in conformità alle linee guide dell’istituto e alle “Precauzioni standard”. 15-182. I reagenti contengono sodio azide, una sostanza nociva per inalazione, ingestione o contatto con la pelle. Acontatto con acidi, la sodio azide libera gas estremamente tossici. In caso di contatto con la pelle, lavarsiimmediatamente e abbondantemente con acqua. La sodio azide può reagire con il piombo e il rame delletubature, formando azidi metalliche altamente esplosive. Eliminare la sodio azide facendo scorrereabbondante acqua negli scarichi per impedire l’accumulo di azidi.3. Non usare i componenti del kit oltre la data di scadenza.4. Non mescolare i reagenti di kit con numeri di lotto diversi.5. Non riutilizzare il dispositivo.6. Non usare il kit se il Controllo A+/B- e il Controllo B+/A- non forniscono i risultati appropriati.7. Usare esclusivamente tamponi in (schiuma di) poliuretano.Conservazione e manipolazione - I kit possono essere conservati a 2–25 °C. NON CONGELARE. Al momento dell’usoper il test, i reagenti e i dispositivi devono essere a temperatura ambiente (15–25 °C).RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONITrasporto e conservazione dei campioniTrattare immediatamente i campioni appena raccolti. Se necessario, i campioni possono essere conservati in unterreno di trasporto adatto e mantenuti a 2–8 °C per un massimo di 72 h oppure a –20 °C per non più di sette giorni.È essenziale seguire le corrette metodiche di raccolta e preparazione dei campioni. Non centrifugare i campioniprima di usarli in quanto la rimozione del materiale cellulare può influire negativamente sulla sensibilità del test. Icampioni raccolti nella fase iniziale della malattia contengono i titoli virali più elevati.Terreni di trasporto - I seguenti terreni di trasporto sono stati testati risultando compatibili con il test Directigen EZFlu A+B.Terreno Bartel ViraTransSoluzione fisiologica tamponata con fosfato (PBS)più sieroalbumina bovina (BSA) allo 0,5%Cellmatics PBS più gelatina allo 0,5%Terreno minimo essenziale di Earle (EMEM) Soluzione fisiologica tamponata con fosfato (PBS)EMEM + BSA all’0,5%Starplex MultitransEMEM + BSA all’1%Fosfato di saccarosio (2-SP)Soluzione di sali basici di HanksTrypticase Soy BrothTerreno M4 Trypticase Soy Broth + gelatina allo 0,5%Terreno M4 RT Trypticase Soy Broth + BSA allo 0,5%Terreno M5Brodo di infuso di vitello (VIB)Soluzione fisiologica* VIB più BSA allo 0,5%Terreno di trasporto virale universale BD*Per test con Directigen EZ Flu A+B, si sconsiglia l’uso di campioni congelati raccolti in soluzione fisiologica.Si possono utilizzare altri terreni di trasporto purché opportunamente validati in precedenza.NOTA: terreni EMEM contenenti lattalbumina (0,5% o 1,0%) o altri terreni di trasporto contenenti lattalbumina nonsono compatibili con il test Directigen EZ Flu A+B.Raccolta e preparazione dei campioni - I campioni accettabili per analisi con il test Directigen EZ Flu A+B includonolavaggi/aspirati nasofaringei e tamponi faringei.Procedura per campioni da lavaggio/aspirato nasofaringeo1. Si raccomandano campioni di 1–3 mL di volume. In caso di utilizzo di terreno di trasporto, è preferibile unadiluizione minima del campione.2. Evitare campioni di lavaggio di volume eccessivo in quanto potrebbero ridurre la sensibilità del test.3. Trattare il campione come descritto in “Procedura del test”.Procedura per campioni da tamponi faringei (sono necessari tamponi in [schiuma di] poliuretano – Vedere la sezione“Disponibilità”)1. Trattare i campioni da tamponi senza diluizione nel terreno di trasporto come descritto in “Procedura del test”.PROCEDURAProcedura del testNOTE:• Al momento del test, reagenti, campioni e dispositivi devono essere a temperatura ambiente (15–25 °C).• Mescolare accuratamente tutti i campioni prima di prelevarne un'aliquota da sottoporre alla procedura. Noncentrifugare i campioni.• Mantenere i flaconi dei reagenti e le provette DispensTube in posizione verticale (a circa 2,5 cm dal pozzetto percampione del dispositivo Directigen EZ Flu A+B o dalla provetta DispensTube), dispensando delicatamente unagoccia alla volta.28

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 291. Rimuovere il dispositivo Directigen EZ Flu A+B dalla busta in foglio d’alluminio immediatamente prima del test.2. Etichettare un dispositivo e una provetta DispensTube per ciascun controllo e campione da testare.3. Posizionare la provetta DispensTube etichettata nell’area designata della workstation o del rack.4. Mescolare delicatamente il reagente E e dispensarne 4 goccenella provetta DispensTube. Dispensare le gocce tenendo ilEflacone di reagente in posizione verticale (a circa 2,5 cm dallaprovetta DispensTube).5. Mescolare accuratamente il campione o il controllo esottoporlo alla procedura indicata di seguito.a. Per campioni da lavaggio/aspirato nasofaringeo1. Vortexare o mescolare accuratamente. Non centrifugare.2. Pipettare 300 µL di campione nella provetta DispensTube(contenente il reagente E).b. Per campioni da tamponi faringei1. Dispensare 300 µL di soluzione fisiologica nella provettaDispensTube (contenente il reagente E).2. Inserire il tampone e schiacciarlo ruotandolo 6-8 volte,comprimendo al contempo la provetta.3. Rimuovere il tampone (comprimendo la provetta pereliminare il liquido in eccesso dalla punta del tampone).c. Per i controlli del kit1. Mescolare delicatamente i flaconi di Controllo A+/B- eControllo B+/A-.2. Dispensare 6 gocce di Controllo A+/B- nella provettaDispensTube recante l’etichetta appropriata (contenente ilreagente E).3. Dispensare 6 gocce di Controllo B+/A- nella provettaDispensTube recante l’etichetta appropriata (contenente ilreagente E).A+/B-B+/A-6. Inserire un puntale DispensTube nella provetta DispensTubecontenente il campione trattato o il controllo.N.B.: non utilizzare puntali di altri prodotti Directigen.7. Vortexare o mescolare accuratamente.29

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 308. Capovolgere la provetta DispensTube e tenendola sulla metàsuperiore, lontano dal puntale, comprimerla delicatamente perdispensare tre (3) gocce di campione trattato nell’appositopozzetto Flu A e tre (3) in quello Flu B del dispostivoDirectigen EZ Flu A+B recante l’etichetta appropriata.Nota: comprimendo la provetta in prossimità del puntale sirischia di espellere quest’ultimo e provocare la fuoriuscita delcontenuto dalla provetta.9. Trascorsi 15 min dall’aggiunta del campione, leggere e annotare i risultati del test.Controllo di qualitàLe procedure prescritte per il controllo di qualità devono essere effettuate in conformità alle norme vigenti o airequisiti di accreditazione e alla prassi di controllo di qualità in uso nel laboratorio.Ogni dispositivo Directigen EZ Flu A+B contiene controlli procedurali/interni positivi e negativi:• La comparsa di una riga di controllo rosso-porpora nelle finestre di lettura Flu A e/o Flu B in corrispondenzadella posizione di controllo “C” rappresenta un controllo interno positivo che valida il correttofunzionamento del reagente e garantisce che è stata seguita la corretta procedura di test.• L’area della membrana circostante le righe del test Flu A e/o Flu B e le righe di controllo rappresenta ilcontrollo interno negativo del dispositivo. Il colore bianco - rosa chiaro dell’area di fondo indica che il testfornisce le prestazioni corrette.Ogni kit Directigen EZ Flu A+B contiene soluzioni di controllo per il kit Controllo A+/B- e Controllo B+/A-.Questi controlli vengono testati con la stessa procedura seguita per i campioni e costituiscono un sistema di controllodi qualità esterno. Usare tali soluzioni di controllo come procedura di controllo di qualità almeno per ciascun nuovolotto di kit o ciascuna spedizione ricevuta. Se lo si desidera, è possibile determinare anche la correttezza delleprestazioni dei reagenti e della tecnica di test usando campioni di positività o negatività accertata per il virusinfluenzale A o B.La formazione di una riga rosso-porpora nella membrana nella finestra di lettura Flu A in corrispondenza dellaposizione di test (T) e di controllo (C) durante l’analisi del Controllo A+/B- e nella finestra di lettura Flu B incorrispondenza della posizione di test (T) e di controllo (C) durante l’analisi del Controllo B+/A-, indica che leproprietà leganti dell’antigene influenzale della striscia di test sono efficaci.La formazione di una riga di controllo rosso-porpora in corrispondenza della posizione di controllo (C) nella finestradi lettura Flu B e l’assenza di una riga di controllo rosso-porpora in corrispondenza della posizione di test (T) durantel’impiego del Controllo A+/B- rappresenta un risultato di controllo negativo Flu B appropriato che indica il correttofunzionamento del reagente e che è stata seguita la corretta procedura di test. Analogamente, la formazione di unariga di controllo rosso-porpora in corrispondenza della posizione di controllo (C) nella finestra di lettura Flu A el’assenza di una riga di controllo rosso-porpora in corrispondenza della posizione di test (T) durante l’analisi delControllo B+/A- indica un risultato di controllo negativo Flu A appropriato.Se i controlli del kit non forniscono i risultati attesi, non refertare i risultati dei test dei pazienti. Per assistenza,contattare il rappresentante di zona di BD o il servizio tecnico.INTERPRETAZIONE DEI RISULTATINOTA: l’intensità della riga di controllo nelle finestre di lettura Flu A e Flu B può essere diversa. Una differenzanell’intensità della riga di controllo è accettabile. L’area di fondo deve essere di colore bianco - rosa chiaro el’intensità nelle finestre di lettura Flu A e Flu B può essere diversa.Test positivo per Flu A (antigene virus influenzale A presente) – Compare unaACTBCTFlu A+ Flu B+(Positivo per Flu A) (Positivo per Flu B)ACTBNegativoABriga di colore rosso-porpora in corrispondenza della posizione di test "T" e dellaposizione di controllo "C" nella finestra di lettura Directigen EZ Flu A. Una riga dicolore rosso-porpora deve comparire anche in corrispondenza della posizione dicontrollo "C" nella finestra di lettura Directigen EZ Flu B. Ciò indica che è statorilevato l'antigene del virus influenzale A nel campione. L’area di fondo deveessere di colore bianco - rosa chiaro.Test positivo per Flu B (antigene virus influenzale B presente) – Compare unariga di colore rosso-porpora in corrispondenza della posizione di test "T" e dellaposizione di controllo "C" nella finestra di lettura Directigen EZ Flu B. Una riga dicolore rosso-porpora deve comparire anche in corrispondenza della posizione dicontrollo "C" nella finestra di lettura Directigen EZ Flu A. Ciò indica che è statorilevato l'antigene del virus influenzale B nel campione. L’area di fondo deveessere di colore bianco - rosa chiaro.Test negativo per Flu A o Flu B (nessun antigene rilevato) – Nella finestra dilettura Flu A o Flu B non è visibile alcuna riga di colore rosso-porpora incorrispondenza della posizione di test "T"; ciò indica che non è stato rilevatol’antigene del virus influenzale A o B o di entrambi. La presenza di una rigarosso-porpora in corrispondenza della posizione di controllo “C” nella finestra dilettura Flu A, Flu B o in entrambe le finestre di lettura, indica che le prestazionidella procedura di test e dei reagenti sono corrette. L’area di fondo deve esseredi colore bianco - rosa chiaro.30

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 31CTCTCTTest non valido – Il test non è valido se per Flu A o per Flu B oppureper entrambi (sia Flu A che Flu B) non è visibile alcuna riga rossoporporaaccanto alla posizione di controllo "C", nelle rispettive finestredi lettura. Il test è non valido anche nel caso in cui compaia una rigarosso-porpora in corrispondenza della posizione di test "T" sia nellafinestra di lettura Flu A che in quella Flu B per lo stesso campione.Ripetere il test qualora non fosse valido.Non validoNon validoNon validoREFERTAZIONE DEI RISULTATITest positivoPositivo per la presenza di antigene del virus influenzale A o B. Si può avere un risultatopositivo in assenza di virus vitali.Test negativo Negativo per la presenza di antigene del virus influenzale A o B. Non è possibile escludereun'infezione da virus influenzale in quanto l'antigene presente nel campione potrebbe nonraggiungere il limite di rilevazione del test. Si raccomanda di confermare mediante coltura icampioni negativi.Test non valido Il risultato del test non è conclusivo. Non refertare i risultati.LIMITI DELLA PROCEDURAQuesto test non definisce l’eziologia di infezione respiratoria causata da microrganismi diversi dal virus influenzale Ao B. Il test Directigen EZ Flu A+B è in grado di rilevare particelle di virus influenzali vitali e non vitali. Le prestazionidel test Directigen EZ Flu A+B dipendono dalla carica antigenica e possono non essere correlate con colture cellulariottenute dallo stesso campione.Una raccolta inadeguata del campione, un trattamento o trasporto inappropriato del campione o bassi livelli didiffusione del virus possono dare risultati falsamente negativi. Di conseguenza, un risultato negativo del test nonesclude la possibilità di infezione da virus influenzale A o B oppure di entrambi (sia A che B). La validità del testDirectigen EZ Flu A+B per l’identificazione o la conferma di isolati in colture cellulari non è stata accertata.VALORI ATTESIIl tasso di positività osservato nei test respiratori varia a seconda della metodica usata per la raccolta, del sistema ditrattamento/trasporto impiegato, della metodica di rilevazione adottata, del periodo dell’anno, dell’età del paziente,dell’area geografica e soprattutto della prevalenza della malattia nella regione. La prevalenza complessiva osservatanelle colture durante lo studio clinico 2003-2004 è risultata pari al 24,3% per influenza A e al 3,8% per influenza B.La prevalenza complessiva osservata nelle colture durante lo studio clinico 2004-2005 è risultata pari al 26,0% perinfluenza A e al 31,2% per influenza B.CARATTERISTICHE PRESTAZIONALILe caratteristiche prestazionali del test Directigen EZ FLU A+B sono state determinate in uno studio multicentricocondotto in cinque centri clinici durante la stagione epidemica respiratoria 2003-2004 e in 13 centri clinici durante lastagione epidemica 2004-2005. I centri clinici erano situati in varie aree geografiche degli Stati Uniti, Giappone e diHong Kong.Sono stati complessivamente valutati 735 campioni prospettici usando il test Directigen EZ Flu A+B e colturacellulare. Tali campioni erano costituiti da lavaggi nasofaringei, aspirati nasofaringei e tamponi faringei prelevati dapazienti con sospetta influenza.Prestazioni cliniche -Le Tabelle 1 e 4 illustrano le caratteristiche prestazionali di Directigen EZ Flu A+B rispetto a coltura cellulare perciascun tipo di campione.Tabella 1. Riepilogo delle prestazioni del test Directigen EZ Flu A+B rispetto a coltura per tutti i tipi di campione -Influenza A: stagioni epidemiche 2003-2004 e 2004-2005 combinateColtura cellulareTest DirectigenTipo di campione EZ Flu A+B P NLavaggi/aspirati nasofaringeiP 115 2N 19 330Sensibilità: 86% (IC 95%: 79% - 91%)Specificità: 99% (IC 95%: 98% - 100%)Tamponi faringeiP 43 29N 13 184Sensibilità: 77% (IC 95%: 64% - 87%)Specificità: 86% (IC 95%: 81% - 91%)31

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:00 PM Page 32Tabella 2. Riepilogo delle prestazioni del test Directigen EZ Flu A+B rispetto a coltura per tutti i tipi di campione -Influenza B: stagioni epidemiche 2003-2004 e 2004-2005 combinateColtura cellulareTest DirectigenTipo di campione EZ Flu A+B P NP 57 1Lavaggi/aspirati nasofaringeiN 14 394Sensibilità: 80% (IC 95%: 69% - 89%)Specificità: 100% (IC 95%: 99% - 100%)P 38 3Tamponi faringeiN 17 211Sensibilità: 69% (IC 95%: 55% - 81%)Specificità: 99% (IC 95%: 96% - 100%)Tabella 3. Riepilogo delle prestazioni del test Directigen EZ Flu A+B rispetto a coltura per tutti i tipi di campione perpopolazione - Influenza A: stagioni epidemiche 2003-2004 e 2004-2005 combinateColtura cellulareTipo di campione Test Directigen Pediatrico AdultoEZ Flu A+BP N P NLavaggi/aspirati nasofaringei P 94 2 21 0N 11 294 8 36Sensibilità: Pediatrico: 90% (IC 95%: 82% - 95%); Adulto: 72% (IC 95%: 53% - 87%)Specificità: Pediatrico: 99% (IC 95%: 98% - 100%); Adulto: 100% (IC 95%: 90% - 100%)Tipo di campione Test Directigen Pediatrico AdultoEZ Flu A+BP N P NTamponi faringeiP 38 23 5 6N 10 151 3 33Sensibilità: Pediatrico: 79% (IC 95%: 65% - 90%); Adulto: 63% (IC 95%: 24% - 91%)Specificità: Pediatrico: 87% (IC 95%: 81% - 91%); Adulto: 85% (IC 95%: 69% - 94%)Table 4: Riepilogo delle prestazioni del test Directigen EZ Flu A+B rispetto a coltura per tutti i tipi di campione perpopolazione - Influenza B: stagioni epidemiche 2003-2004 e 2004-2005 combinateColtura cellulareTipo di campione Test Directigen Pediatrico AdultoEZ Flu A+BP N P NLavaggi/aspirati nasofaringei P 49 1 8 0N 13 338 1 56Sensibilità: Pediatrico: 79% (IC 95%: 67% - 88%); Adulto: 89% (IC 95%: 52% - 100%)Specificità: Pediatrico: 100% (IC 95%: 98% - 100%); Adulto: 100% (IC 95%: 94% - 100%)Tipo di campione Test Directigen Pediatrico AdultoEZ Flu A+BP N P NTamponi faringeiP 19 1 19 2N 12 190 5 21Sensibilità: Pediatrico: 61% (IC 95%: 42% - 78%); Adulto: 79% (IC 95%: 58% - 93%)Specificità: Pediatrico: 99% (IC 95%: 97% - 100%); Adulto: 91% (IC 95%: 72% - 99%)Riproducibilità - La riproducibilità del test Directigen EZ Flu A+B è stata valutata in quattro centri. Il pannello diriproducibilità è consistito in 20 campioni di influenza simulata, comprendenti campioni a bassa positività per Flu A oFlu B (prossima al limite di rilevazione), campioni a moderata positività per Flu A o Flu B e campioni negativi. Lariproducibilità complessiva del test Directigen EZ Flu A+B è stata del 99,6%.32

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:01 PM Page 33Studi analiticiSensibilità analitica (limite di rilevazione)Il limite di rilevazione (LOD) del test Directigen EZ Flu A+B è stato stabilito per un totale di 15 ceppi di virus influenzale,nove di tipo A e sei di tipo B.Tipo Ceppo di virus influenzale LOD (CEID 50 /mL*)A A/PR/8/34 (H1N1) 1.75 X 10 4A A/FM/1/47 (H1N1) 1.98 X 10 3A A/NWS/33 (H1N1) 1.00 X 10 4A A1/Denver/1/57 (H1N1) 5.56 X 10 3A A/New Jersey/8/76 (H1N1) 4.45 X 10 3A A/Port Chalmers/1/73 (H3N2) 1.00 X 10 3A A/Hong Kong/8/68 (H3N2) 2.78 X 10 2A A2/Aichi2/68 (H3N2) 3.50 X 10 3A A/Victoria/3/75 (H3N2) 2.78 X 10 4B B/Lee/40 6.95 X 10 5B B/Allen/45 2.00 X 10 3B B/GL/1739/54 5.56 X 10 3B B/Taiwan/2/62 3.50 X 10 2B B/Maryland/1/59 2.23 X 10 4B B/Hong Kong/5/72 2.23 X 10 4* CEID 50 /mL = Chick Embryo Infectious Dose (dose infettante l’embrione di pollo) alla quale muore il 50% degli embrioni.Specificità analitica (reattività crociata)Il test Directigen EZ Flu A+B è stato valutato con un totale di 98 microrganismi. I 51 batteri e i due lieviti sono statitestati a una concentrazione di ~10 8 UFC/mL (UFC, unità formanti colonia). Mycoplasma pneumoniae e Mycoplasmaorale sono stati rispettivamente testati a una concentrazione di >10 6 e >10 7 UCC/mL (unità cambianti colore, UCC). Itre ceppi di micobatteri sono stati inoculati a una concentrazione di 10 7 UFC/mL e Chlamydia trachomatis LGVII èstato testato a 2,5 X 10 8 CE/mL (CE = corpi elementari). I 39 virus testati sono stati valutati a concentrazioni di10 4 –10 9 TCID 50 /mL (TCID 50 - Tissue Culture Infectious Dose, dose infettante la coltura tissutale, alla quale viene lisatoil 50% delle cellule) o di 10 4 –10 8 CEID 50 /mL (CEID 50 - Chick Embryo Infectious Dose, dose infettante l’embrione dipollo, alla quale viene infettato il 50% degli embrioni). Tutti i microrganismi (all’infuori dei virus influenzali) hannoevidenziato risultati negativi per Flu A e per Flu B. I virus influenzali A testati (n = 2) hanno evidenziato risultatipositivi per Flu A e negativi per Flu B. I virus influenzali B testati (n = 6) hanno evidenziato risultati positivi per Flu Be negativi per Flu A.Acinetobacter baumannii (calcoaceticus) Neisseria meningitidisCoxsackievirus Tipo A9 (Griggs)Actinobacillus suis Neisseria mucosa Coxsackievirus Tipo A9 (P.B. Bozek)Bacteroides fragilis Neisseria sicca Coxsackievirus Tipo B5 (Faulkner)Bordetella pertussis Neisseria subflava Coxsackievirus Tipo B6 (Schmitt)Candida albicans Peptostreptococcus anaerobius Coxsackievirus Tipo A21 (Kuykendall)Candida glabrata Porphyromonas asaccharolyticus Cytomegalovirus (AD-169)Cardiobacterium hominis Prevotella oralis Echovirus Tipo 2 (Cornelis)Chlamydia trachomatis LGVII Proteus mirabilis Echovirus Tipo 3 (Morrisey)Corynebacterium diphtheriae Proteus vulgaris Echovirus Tipo 6 (D'Amori)Eikenella corrodens Pseudomonas aeruginosa HSV Tipo 1 (HF)Enterococcus faecalis Salmonella choleraesuis HSV Tipo 2 (MS)Enterococcus gallinarum sub minnesota Influenza A/PR/8/34 (H1N1)Escherichia coli Serratia marcescens Influenza A/Victoria/3/75 (H3N2)Fusobacterium nucleatum Staphylococcus aureus Influenza B/Hong Kong/5/72Gardnerella vaginalis Staphylococcus aureus-Cowan 1 Influenza B /Lee/40Haemophilus aphrophilus Streptococcus bovis II gruppo D Influenza B/Allen/45Haemophilus influenzae Staphylococcus epidermidis Influenza B/GL/1739/54Haemophilus parainfluenzae Streptococcus mutans Influenza B/Maryland/1/59Haemophilus paraphrophilus Streptococcus oralis Influenza B/Taiwan/2/62Kingella kingae Streptococcus pneumoniae Virus del morbillo(Edmonston)Klebsiella pneumoniae Streptococcus pyogenes gruppo A Virus della parotite (Enders)Lactobacillus casei Streptococcus sanguis Parainfluenza Tipo 1 (Sendia/52)Lactobacillus fermentum Streptococcus sp. gruppo B Parainfluenza Tipo 2 (Greer)Lactobacillus plantarum Streptococcus sp. gruppo C Parainfluenza Tipo 3 (C243)Legionella pneumophila Streptococcus sp. gruppo F Rhinovirus Tipo 1A (2060)Listeria monocytogenes Streptococcus sp. gruppo G Rhinovirus Tipo 2 (HGP)Moraxella catarrhalis Veillonella parvula Rhinovirus Tipo 13 (353)Mycobacterium avium Adenovirus, Tipo 3 (GB) Rhinovirus v 15 (1734)Mycobacterium intracellulare Adenovirus, Tipo 5 (Adenoid 75) Rhinovirus Tipo 16 (11757)Mycobacterium tuberculosis Adenovirus, Tipo 7 (Gomen) Rhinovirus v 37 (151-1)Mycoplasma orale Adenovirus, Tipo 10 (J.J.) RSV Tipo A (Long)Mycoplasma pneumoniae Adenovirus, Tipo 18 (D. C.) RSV Tipo B (Wash/18537/62)Neisseria gonorrhoeae Coronavirus (229E) VZV (Ellen)33

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:01 PM Page 34Reattività per ceppo con virus influenzali A e BIl test Directigen EZ Flu A+B è stato valutato usando un pannello di 37 ceppi influenzali, in cui erano rappresentatitutti i sottotipi conosciuti di emagglutinina (15) e neuraminidasi (9) di influenza A. Tutti i ceppi di virus influenzale Aumani e animali hanno evidenziato risultati positivi per Flu A e negativi per Flu B. Per contro, tutti i ceppi di virusinfluenzale B hanno evidenziato risultati positivi per Flu B e negativi per Flu A.Virus dell’influenza (ceppo umano) Tipo di virus Virus dell’influenza (ceppo animale) Tipo di virusA/NWS/33 A (H1N1) A/Turkey/Kansas/4880/80 A (H1N1)A/PR/8/34 A (H1N1) A/Mallard/New York/6750/78 A (H2N2)A1/FM/1/47 A (H1N1) A/Turkey/England/69 A (H3N2)A1/Denver/1/57 A (H1N1) A/Chicken/Alabama/75 A (H4N8)A/New Jersey/8/76 (Hsw N1) A (H1N1) A/Turkey/Wisconsin/68 A (H5N9)A/Port Chalmers/1/73 A (H3N2) A/Turkey/Canada/63 A (H6N8)A/Victoria/3/75 A (H3N2) A/Turkey/Oregon/71 A (H7N3)A/Vietnam/3028/04 A (H5N1) A/Turkey/Ontario/6118/67 A (H8N4)A/Thailand/MK2/04 A (H5N1) A/Turkey/Wisconsin/66 A (H9N2)A/Hong Kong/486/97 A (H5N1) A/Chicken/Germany/N/49 A (H10N7)A/California/07/2004 A (H3N2) A/Duck/Memphis/546/74 A (H11N9)B/Lee/40 B A/Duck/Alberta/60/76 A (H12N5)B/Allen/45 B A/Gull/MD/704/77 A (H13N6)B/GL/1739/54 B A/Mallard/Gurjev/263/82 A (H14N5)B/Maryland/1/59 B A/Shearwater/WA/2576/79 A (H15N6)B/Taiwan/2/62BB/Mass/3/66BB/Hong Kong/5/72BB/Victoria/504/00BB/Tokyo/53/99BB/Quingdao/102/91BB/Leningrad/86/93BSostanze interferentiCon il test Directigen EZ Flu A+B sono state valutate varie sostanze, tra cui sangue intero (2%) e vari farmaci. Conquesto dosaggio non è stata rilevata alcuna interferenza.Farmaci valutatiTre colluttori da banco al 25%Tre preparazioni da banco in gocce per uso faringeo al 25%Tre spray nasali da banco al 10%4-acetamidofenolo (10 mg/mL)Acido acetilsalicilico (20 mg/mL)Clorfeniramina maleato (5 mg/mL)Destrometorafano (10 mg/mL)Fexofenadina (500 ng/mL)Amantadina (500 ng/mL)Albuterolo (0,083 mg/mL)Ribavirina (500 ng/mL)Pseudoefedrina cloridrato (20 mg/mL)Gliceril-etere guaiacolo (20 mg/mL)Ibuprofene (10 mg/mL)Ossimetazolina (0,05 mg/mL)Fenilefrina (1 mg/mL)Loratidina (100 ng/mL)Difenidramina cloridrato (5 mg/mL)Zanamivir (1 mg/mL)Rimantadina (500 ng/mL)Oseltamivir (500 ng/mL)Sinagis (0,1 mg/mL)DISPONIBILITÀN. di cat. Descrizione256050 Directigen EZ Flu A+B 30 Test Kit220144 CultureSwab EZ 100 (tampone singolo)220145 CultureSwab EZ II 100 (tampone doppio)221819 Soluzione fisiologica, 5 mL, cartone da 100BIBLIOGRAFIA: Vedere "References" nel testo inglese.34

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:01 PM Page 35" Directigen EZ Flu A+BPara una detección directa y diferenciada de losantígenos de influenza tipo A y BEspañolUSO PREVISTOEl análisis Directigen EZ Flu A+B es un inmunoanálisis cromatográfico rápido para la detección directa y cualitativade los antígenos de influenza tipo A y B en muestras obtenidas mediante lavados y aspirados nasofaríngeos ytorundas faríngeas de pacientes sintomáticos. El Directigen EZ Flu A+B es un análisis diferenciado, que permitedistinguir los antígenos vírales de la influenza A de los de la influenza B a partir de una misma muestra procesada ypor medio de un único dispositivo. El análisis se utiliza como ayuda para el diagnóstico de las infecciones por losvirus de influenza A y B. Cualquier resultado negativo debería confirmarse mediante cultivo celular.RESUMEN Y EXPLICACIÓNLa enfermedad de la gripe normalmente hace acto de presencia con la aparición repentina de fiebre, escalofríos,cefalea, mialgias y tos no productiva. Las epidemias de gripe suelen producirse, por lo general, durante los meses deinvierno, y sólo en los Estados Unidos causan cada año unas 114.000 hospitalizaciones 1 y 36.000 muertes 2 . Los virusde la influenza también pueden ocasionar pandemias, durante las cuales pueden aumentar sensiblemente las tasasde enfermedad y de muerte causadas por complicaciones relacionadas con la influenza.Los pacientes que presentan síntomas de gripe pueden beneficiarse del tratamiento con un agente antivírico,especialmente si se administra en las primeras 48 h a partir del momento en que aparece la enfermedad. Esimportante distinguir rápidamente la influenza A de la influenza B con el fin de que el médico pueda seleccionar laintervención antivíral más adecuada. Asimismo, es importante determinar si la influenza A o B está causando unaenfermedad sintomática en un determinado centro (p. ej., un asilo de ancianos) o comunidad, con el fin de quepueda llevarse a cabo una intervención preventiva adecuada para las personas más propensas a contraer estaenfermedad. Por tanto, es fundamental determinar cuanto antes no sólo si está presente la influenza, sino tambiénel tipo de virus que está presente.Las pruebas de diagnóstico disponibles para la influenza incluyen el inmunoanálisis rápido, el análisis medianteinmunofluorescencia, la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), la serología y el cultivo de virus 3-10 . Los análisismediante inmunofluorescencia consisten en la tinción de muestras inmovilizadas en portaobjetos de microscopiomediante anticuerpos marcados con fluorescencia para su observación por medio de microscopía fluorescente 5,11,12 .Los métodos de cultivo emplean el aislamiento inicial del virus en cultivo celular, seguido de la inhibición de lahemadsorción, la inmunofluorescencia o el análisis de neutralización para confirmar la presencia del virus de lainfluenza 12-14 .El análisis Directigen EZ Flu A+B es un inmunoanálisis cromatográfico que detecta los antígenos de la influenza A o Ben muestras de las vías respiratorias de pacientes sintomáticos y ofrece resultados en 15 min.Gracias a su rapidez y sencillez, el análisis Directigen EZ Flu A+B resulta indicado como un análisis de detección deantígenos de la influenza A y B “STAT” que aporta información útil para asistir en el diagnóstico de la influenza. Eluso del análisis Directigen EZ Flu A+B para diferenciar las infecciones de Flu A y de Flu B puede proporcionar mayorselectividad en la intervención antivíral.PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTOEl análisis Directigen EZ Flu A+B es un análisis cromatográfico diseñado para detectar cualitativamente los antígenosde los virus de la influenza A y B en muestras procesadas obtenidas de las vías respiratorias. Cuando se procesan lasmuestras y se añaden al dispositivo de análisis, los antígenos de los virus de la influenza A o B se unen a losanticuerpos antinfluenza conjugados con partículas de visualización en las correspondientes tiras de análisis A y B. Elcomplejo antígeno-conjugado se desplaza a través de la tira de análisis hasta el área de reacción y es atrapado por lalínea de anticuerpo de la membrana. Un resultado positivo para la influenza A aparece como una línea de colormorado rojizo en la posición de análisis “T” y en la posición de control “C” de la ventana de lectura de Flu A delDirectigen EZ. Un resultado positivo para la influenza B aparece como una línea de color morado rojizo en laposición de análisis “T” y en la posición de control “C” de la ventana de lectura de Flu B del Directigen EZ.REACTIVOSEl kit Directigen EZ Flu A+B contiene los siguientes componentes:Dispositivos BD Flu A+B 30 dispositivos Dispositivo en bolsa de papel metalizado con dos tiras reactivas.Cada tira dispone de una línea de análisis de anticuerposmonoclonales específicos para el antígeno del virus de la influenzaFlu A o Flu B y una línea de control de anticuerpo antiespecie.Reactivo E 4,7 mL Detergente, con azida sódica al 0,2% (conservante).Control A+/B- 2,8 mL Control positivo de Flu A y negativo de Flu B, antígeno de lainfluenza A inactivado (nucleoproteína recombinante) con 0,1% deazida sódica (conservante).Control B+/A- 2,8 mL Control positivo de Flu B y negativo de Flu A, antígeno de lainfluenza B inactivado (nucleoproteína recombinante) con 0,1% deazida sódica (conservante).Tubos DispensTube 30 Tubos para el procesamiento y transferencia de muestras a losdispositivos.Puntas DispensTube 30 Puntas para filtrar las muestras al transferirlas a los dispositivos.35

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:01 PM Page 36Materiales necesarios pero no suministrados: Pipeta (con una capacidad de dispensación de 300 µL), reloj, agitadorvórtex, medios de transporte (véase el apartado “Recogida y preparación de las muestras”), solución salina normal ytorundas de (espuma de) poliuretano.Advertencias y precauciones:Para uso diagnóstico in vitro.1. En las muestras clínicas puede haber microorganismos patógenos, como los virus de la hepatitis y el virus dela inmunodeficiencia humana. Para la manipulación de todos los elementos contaminados con sangre u otroslíquidos corporales, deben seguirse las “Precauciones estándar” 15-18 y las directivas del centro.2. Los reactivos contienen azida sódica, que es nociva por inhalación, por ingestión o en contacto con la piel. Elcontacto con ácidos libera un gas muy tóxico. En caso de contacto con la piel, lavarla inmediatamente conabundante agua. La azida sódica puede reaccionar con las cañerías de plomo y cobre, formando azidasmetálicas muy explosivas. Al desechar el material, utilizar un gran volumen de agua para evitar laacumulación de azidas.3. No utilizar los componentes del kit después de la fecha de caducidad.4. No mezclar los reactivos de kits que tengan números de lote diferentes.5. No reutilizar el dispositivo.6. No utilizar el kit si los controles A+/B- y B+/A- no producen resultados adecuados.7. Sólo se deben utilizar torundas de poliuretano (espuma).Conservación y manipulación: Los kits se pueden conservar a una temperatura de 2–25 °C. NO CONGELAR. Losreactivos y los dispositivos deberán estar a temperatura ambiente (15–25 °C) en el momento de usarlos.RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRASTransporte y conservación de las muestras:Las muestras recién recogidas se deben procesar de inmediato. Si es necesario, las muestras podrán almacenarse enun medio de transporte adecuado y conservarse durante un máximo de 72 h a 2–8 °C o durante un máximo de sietedías a -20 °C.Es esencial seguir los métodos adecuados de recogida y preparación de las muestras. No centrifugar las muestrasantes de su uso, ya que la eliminación de material celular puede afectar adversamente a la sensibilidad del análisis.Las muestras obtenidas en las primeras fases de la enfermedad presentarán las concentraciones de virus más altas.Medios de transporte: Los siguientes medios de transporte se han sometido a prueba y se ha determinado que soncompatibles con el análisis Directigen EZ Flu A+B:Medio Bartel ViraTrans PBS + albúmina sérica bovina (BSA) al 0,5%Cellmatics PBS + gelatina al 0,5%Medio esencial mínimo de Earle (EMEM) Solución salina tamponada con fosfato (PBS)EMEM + BSA al 0,5%Starplex MultitransEMEM + BSA al 1%Fosfato de sacarosa (2-SP)Solución salina basal de HanksCaldo de soja TrypticaseMedio M4 Caldo de soja Trypticase + gelatina al 0,5%Medio RT M4 Caldo de soja Trypticase + BSA al 0,5%Medio M5Caldo de infusión de ternera (VIB)Solución salina normal* VIB + BSA al 0,5%Medio universal de transporte de virus BD* No se recomienda congelar las muestras recogidas en solución salina normal para su análisis con el Directigen EZFlu A+B.Pueden utilizarse otros medios de transporte si se realiza una validación apropiada.NOTA: Los medios EMEM que contienen lactoalbúmina (p. ej., 0,5% o 1,0%) o cualquier otro medio de transporteque contenga lactoalbúmina no son compatibles con el análisis Directigen EZ Flu A+B.Recogida y preparación de las muestras: Las muestras aceptables para su análisis con el Directigen EZ Flu A+B son lasobtenidas mediante lavados y aspirados nasofaríngeos y torundas faríngeas.Procedimiento para muestras obtenidas mediante lavados y aspirados nasofaríngeos:1. Se recomienda usar volúmenes de muestra de 1 a 3 mL. Si se utiliza un medio de transporte, es preferible unadilución mínima de la muestra.2. Deben evitarse los volúmenes de lavado excesivos, ya que podrían causar una disminución de la sensibilidad.3. Procesar la muestra tal como se describe en el apartado “Procedimiento de análisis”.Procedimiento para muestras obtenidas mediante torundas faríngeas (se necesitan torundas de poliuretano[espuma] - Véase el apartado “Disponibilidad”):1. Las muestras obtenidas mediante torundas se deben procesar sin dilución alguna en medio de transporte, talcomo se describe en “Procedimiento de análisis”.PROCEDIMIENTOProcedimiento de análisisNOTAS:• Los reactivos, las muestras y los dispositivos deberán estar a temperatura ambiente (15–25 °C) para el análisis.• Mezclar a conciencia todas las muestras antes de retirar una parte alícuota para su procesamiento. Nocentrifugar las muestras.36

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:01 PM Page 37• Los tubos DispensTube y los frascos de reactivos deben mantenerse en posición vertical (a una altura aproximadade 2,5 cm del pocillo de muestras del dispositivo Directigen EZ Flu A+B o del tubo DispensTube) mientras setransfiere el contenido gota a gota.1. Extraer el dispositivo Directigen EZ Flu A+B de su bolsa de papel metalizado justo antes de realizar el análisis.2. Rotular un dispositivo y un tubo DispensTube para cada control y muestra que se vaya a analizar.3. Colocar el tubo o los tubos DispensTube rotulados en el área designada de la estación de trabajo o de la gradilla.4. Mezclar suavemente el reactivo E. Dispensar 4 gotas en el tuboDispensTube. Mantener el frasco del reactivo en posiciónEvertical (a una altura aproximada de 2,5 cm del tuboDispensTube) mientras se dispensan las gotas.5. Mezclar a conciencia la muestra o el control y procesarlo talcomo se describe a continuación:a. Para muestras obtenidas mediante lavado o aspiradonasofaríngeo:1. Agitar en el mezclador vorticial o mezclar a conciencia lamuestra. No centrifugar.2. Pipetear 300 µL de muestra en el tubo DispensTube (quecontiene el reactivo E).b. Para muestras obtenidas mediante torundas faríngeas:1. Agregar 300 µL de solución salina normal al tuboDispensTube (que contiene el reactivo E).2. Insertar la torunda y exprimirla, haciéndola girar de 6 a 8veces mientras se aprieta el tubo.3. Retirar la torunda (apretar el tubo para eliminar el excesode líquido de la punta de la torunda).c. Para los controles del kit:1. Mezclar suavemente los frascos que contienen el ControlA+/B- y el Control B+/A-.2. Agregar 6 gotas de Control A+/B- al tubo DispensTube(que contiene el reactivo E) convenientemente rotulado.3. Agregar 6 gotas de Control B+/A- al tubo DispensTube(que contiene el reactivo E) convenientemente rotulado.A+/B-B+/A-6. Insertar una punta DispensTube en el tubo DispensTube quecontiene el control o la muestra procesada.Nota: No utilizar puntas de otros productos Directigen.7. Agitar en el agitador vorticial o mezclar a conciencia.37

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:01 PM Page 388. Invertir el tubo DispensTube y, mientras se sujeta por la mitadsuperior (la más alejada de la punta), presionar suavementepara dispensar tres (3) gotas de la muestra procesada en elpocillo de la muestra Flu A y tres (3) gotas en el pocillo de lamuestra Flu B del dispositivo Directigen EZ Flu A+Bconvenientemente rotulado.Nota: Si se presiona el tubo cerca de la punta, ésta podríasoltarse y podría producirse el escape del contenido del tubo.9. Después de agregar la muestra, leer el resultado al cabo de 15 min y registrarlo.Control de calidad:El control de calidad debe llevarse a cabo conforme a la normativa aplicable, a los requisitos de los organismos deacreditación y a los procedimientos estándar de control de calidad de su laboratorio.Cada dispositivo Directigen EZ Flu A+B contiene controles de procedimiento interno tanto positivo como negativo:• La aparición de una línea de control de color morado rojizo en las ventanas de lectura de Flu A y/o Flu B en laposición de control “C” proporciona un control positivo interno que valida el funcionamiento correcto delreactivo y garantiza que se ha seguido el procedimiento de análisis adecuado.• La zona de la membrana alrededor de las líneas de análisis y de control de Flu A y/o Flu B es el controlnegativo interno del dispositivo. Un área de fondo de color blanco a rosado claro indica que el análisis se estárealizando correctamente.Cada kit Directigen EZ Flu A+B contiene controles líquidos para los kits Control A+/B- y Control B+/A-:Estos controles se analizan de la misma manera que las muestras del paciente y ofrecen un medio de control decalidad externo. Como mínimo, estos controles líquidos deben analizarse como procedimiento de control de calidadpara cada lote de kits nuevo o envío recibido. Si se desea, también podrá determinarse si el rendimiento del reactivoes adecuado y si la técnica de análisis es la correcta, utilizando muestras validadas como positivas o negativas para elvirus de la influenza A o B.La formación de una línea morada rojiza en la membrana de la ventana de lectura de Flu A en la posición de análisis(T) y en la posición de control (C) cuando se analiza el Control A+/B-, y en la ventana de lectura de Flu B en laposición de análisis (T) y la posición de control (C) cuando se analiza el Control B+/A-, indica que la propiedad deunión de antígenos de influenza de la tira reactiva funciona correctamente.La formación de una línea de control de color morado rojizo en la posición de control (C) de la ventana de lectura deFlu B y la ausencia de una línea de análisis de color morado rojizo en la posición de análisis (T) cuando se utiliza elControl A+/B- es un resultado adecuado de control negativo de Flu B que indica que el funcionamiento del reactivoes correcto y se ha seguido el procedimiento de análisis adecuado. De forma análoga, la formación de una línea decontrol de color morado rojizo en la posición de control (C) de la ventana de lectura de Flu A y la ausencia de unalínea de análisis de color morado rojizo en la posición de análisis (T) cuando se analiza el Control B+/A- indica unresultado adecuado de control negativo de Flu A.Si los controles del kit no producen los resultados esperados, no deben registrarse los resultados del paciente.Póngase en contacto con el representante local o el servicio técnico de BD para solicitar asistencia.INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOSNOTA: La intensidad de la línea de control podrá variar entre las ventanas de lectura de Flu A y de Flu B. Lavariabilidad de la intensidad de la línea de control es aceptable. El color del área de fondo debe ser entre blanco yrosado claro y su intensidad podrá variar entre las ventanas de lectura de Flu A y de Flu B.Análisis positivo para Flu A (antígeno de la influenza A presente) - Aparece unaACTBCTFlu A+ Flu B+(Positivo para Flu A) (Positivo para Flu B)ACTBNegativoABlínea de color morado rojizo en la posición de análisis “T” y en la posición decontrol “C” de la ventana de lectura de Flu A del Directigen EZ. También deberíaaparecer una línea de color morado rojizo en la posición de control “C” de laventana de lectura de Flu B del Directigen EZ. Esto indica que se detectaronantígenos de la influenza A en la muestra. El color del área de fondo debe serentre blanco y rosado claro.Análisis positivo para Flu B (antígeno de la influenza B presente) - Aparece unalínea de color morado rojizo en la posición de análisis “T” y en la posición decontrol “C” de la ventana de lectura de Flu B del Directigen EZ. También deberíaaparecer una línea de color morado rojizo en la posición de control “C” de laventana de lectura de Flu A del Directigen EZ. Esto indica que se detectaronantígenos de la influenza B en la muestra. El color del área de fondo debe serentre blanco y rosado claro.Resultado negativo para Flu A o Flu B (no se detectan antígenos) - Si no apareceuna línea de color morado rojizo en la posición de análisis “T” de la ventana delectura de Flu A o de Flu B, ello indica que el antígeno de la influenza A o elantígeno de la influenza B, o ambos, no se detectaron en la muestra. Una líneade color morado rojizo en la posición de control “C” de la ventana de lectura deFlu A, de la ventana de lectura de Flu B o de ambas ventanas de lectura indica unrendimiento adecuado del procedimiento de análisis y de los reactivos. El colordel área de fondo debe ser entre blanco y rosado claro.38

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:01 PM Page 39CTCTCTAnálisis no válida - El análisis se considera no válida para Flu A o paraFlu B, o para Flu A y Flu B, si no aparece una línea visible de colormorado rojizo al lado de la posición de control “C” en la ventana oventanas de lectura respectivas. El análisis también se considera noválida si aparece una línea de color morado rojizo en la posición deanálisis “T” de las ventanas de lectura de Flu A y de Flu B para la mismamuestra. El análisis debe repetirse si no es válida.InválidoInválidoInválidoINFORME DE RESULTADOSPrueba positiva Resultado positivo para la presencia del antígeno de la influenza A o de la influenza B.Puede producirse un resultado positivo en ausencia de virus viables.Prueba negativa Resultado negativo para la presencia del antígeno de la influenza A o de la influenza B. Nopuede descartarse una infección por influenza, ya que la concentración de antígenos en lamuestra puede ser inferior al límite de detección del análisis. Se recomienda confirmar lasmuestras negativas con un cultivo.Prueba no válida El resultado del análisis no es concluyente. No se deben registrar los resultados.LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTONo es posible determinar con este análisis la etiología de una infección respiratoria causada por microorganismosque no sean el virus de la influenza A o B. El Directigen EZ Flu A+B es capaz de detectar partículas de influenzatanto viables como no viables. El rendimiento del análisis Directigen EZ Flu A+B depende de la carga antigénica ypodría no tener correlación con un cultivo celular realizado con la misma muestra.La recogida inadecuada de la muestra, la manipulación o transporte inapropiados de la muestra y niveles bajos desiembra del virus pueden producir un resultado falso negativo. Por consiguiente, un resultado de análisis negativono elimina la posibilidad de una infección por influenza A o por influenza B, o por influenza A y B. No se hademostrado la validez del Directigen EZ Flu A+B para la identificación o confirmación de aislados realizados encultivos celulares.VALORES PREVISTOSLa tasa de positividad observada en el análisis respiratorio variará en función del método de recogida y del sistemade manipulación y transporte de la muestra, del método de detección empleado, de la época del año, de la edad delpaciente, de la ubicación geográfica y, lo más importante, de la prevalencia local de la enfermedad. La prevalenciaglobal observada con los cultivos durante el estudio clínico de 2003–2004 fue del 24,3% para la influenza A y del3,8% para la influenza B. Durante el estudio clínico de 2004–2005, la prevalencia global observada con los cultivosfue del 26,0% para la influenza A y del 31,2% para la influenza B.CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTOLas características de rendimiento del análisis Directigen EZ Flu A+B se establecieron en un estudio multicéntricorealizado en siete centros de ensayo durante la temporada respiratoria 2003–2004 y en 13 centros de ensayo durantela temporada respiratoria 2004–2005. Los centros clínicos estaban ubicados en diversas áreas geográficas de losEstados Unidos, Japón y Hong Kong.Se evaluaron un total de 735 muestras prospectivas utilizando el análisis Directigen EZ Flu A+B y cultivos celulares.Estas muestras consistían en lavados nasofaríngeos, aspirados nasofaríngeos y torundas faríngeas de pacientes enquienes se sospechaba una infección de influenza.Rendimiento clínico:En las tablas 1 a 4 se muestran las características de rendimiento del Directigen EZ Flu A+B en comparación con loscultivos celulares para cada tipo de muestra.Tabla 1: Resumen del rendimiento del análisis Directigen EZ Flu A+B en comparación con el cultivo para todos lostipos de muestras - Influenza A, temporadas respiratorias combinadas de 2003–2004 y 2004–2005Cultivo celularAnálisisTipo de muestra Directigen EZ P NFlu A+BLavados y aspirados nasofaríngeosP 115 2N 19 330Sensibilidad: 86% (IC 95%: 79% - 91%)Especificidad: 99% (IC 95%: 98% - 100%)Torundas faríngeasP 43 29N 13 184Sensibilidad: 77% (IC 95%: 64% - 87%)Especificidad: 86% (IC 95%: 81% - 91%)39

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:01 PM Page 40Tabla 2: Resumen del rendimiento del análisis Directigen EZ Flu A+B en comparación con el cultivo para todos lostipos de muestras - Influenza B, temporadas respiratorias combinadas de 2003–2004 y 2004–2005Cultivo celularAnálisisTipo de muestra Directigen EZ P NFlu A+BLavados y aspirados nasofaríngeosP 57 1N 14 394Sensibilidad: 80% (IC 95%: 69% - 89%)Especificidad: 100% (IC 95%: 99% - 100%)Torundas faríngeasP 38 3N 17 211Sensibilidad: 69% (IC 95%: 55% - 81%)Especificidad: 99% (IC 95%: 96% - 100%)Tabla 3: Resumen del rendimiento del análisis Directigen EZ Flu A+B en comparación con el cultivo para todos lostipos de muestras por población - Influenza A, temporadas respiratorias combinadas de 2003–2004 y 2004–2005Cultivo celularAnálisisTipo de muestra Directigen EZ Pediátrico AdultoFlu A+BP N P NLavados y aspirados P 94 2 21 0nasofaríngeos N 11 294 8 36Sensibilidad: Pediátrica: 90% (IC 95%: 82% - 95%); Adulta: 72% (IC 95%: 53% - 87%)Especificidad: Pediátrica: 99% (IC 95%: 98% - 100%); Adulta: 100% (IC 95%: 90% - 100%)AnálisisTipo de muestra Directigen EZ Pediátrico AdultoFlu A+BP N P NTorundas faríngeasP 38 23 5 6N 10 151 3 33Sensibilidad: Pediátrica: 79% (IC 95%: 65% - 90%); Adulta: 63% (IC 95%: 24% - 91%)Sensibilidad: Pediátrica: 79% (IC 95%: 65% - 90%); Adulta: 63% (IC 95%: 24% - 91%)Tabla 4: Resumen del rendimiento del análisis Directigen EZ Flu A+B en comparación con el cultivo para todos lostipos de muestras por población - Influenza B, temporadas respiratorias combinadas de 2003–2004 y 2004–2005Cultivo celularAnálisisTipo de muestra Directigen EZ Pediátrico AdultoFlu A+BP N P NLavados y aspirados P 49 1 8 0nasofaríngeos N 13 338 1 56Sensibilidad: Pediátrica: 79% (IC 95%: 67% - 88%); Adulta: 89% (IC 95%: 52% - 100%)Especificidad: Pediátrica: 100% (IC 95%: 98% - 100%); Adulta: 100% (IC 95%: 94% - 100%)AnálisisTipo de muestra Directigen EZ Pediátrico AdultoFlu A+BP N P NTorundas faríngeasP 19 1 19 2N 12 190 5 21Sensibilidad: Pediátrica: 61% (IC 95%: 42% - 78%); Adulta: 79% (IC 95%: 58% - 93%)Sensibilidad: Pediátrica: 99% (IC 95%: 97% - 100%); Adulta: 91% (IC 95%: 72% - 99%)Reproducibilidad: La reproducibilidad del análisis Directigen EZ Flu A+B se evaluó en cuatro centros. El panel dereproducibilidad estaba compuesto por 20 muestras de influenza simuladas. Estas muestras incluyeron muestraspositivas de Flu A o Flu B de nivel bajo (próximas al límite de detección del análisis), muestras positivas de Flu A o Flu Bde nivel moderado y muestras negativas. La reproducibilidad global del análisis Directigen EZ Flu A+B fue del 99,6%.40

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:01 PM Page 41Estudios analíticosSensibilidad analítica (límite de detección)Se estableció el límite de detección (LOD) del análisis Directigen EZ Flu A+B para un total de 15 cepas de influenza,nueve de influenza A y seis de influenza B.Tipo Cepa de virus de la influenza LOD (CEID 50 /mL)*A A/PR/8/34 (H1N1) 1,75 X 10 4A A/FM/1/47 (H1N1) 1,98 X 10 3A A/NWS/33 (H1N1) 1,00 X 10 4A A1/Denver/1/57 (H1N1) 5,56 X 10 3A A/New Jersey/8/76 (H1N1) 4,45 X 10 3A A/Port Chalmers/1/73 (H3N2) 1,00 X 10 3A A/Hong Kong/8/68 (H3N2) 2,78 X 10 2A A2/Aichi2/68 (H3N2) 3,50 X 10 3A A/Victoria/3/75 (H3N2) 2,78 X 10 4B B/Lee/40 6,95 X 10 5B B/Allen/45 2,00 X 10 3B B/GL/1739/54 5,56 X 10 3B B/Taiwan/2/62 3,50 X 10 2B B/Maryland/1/59 2,23 X 10 4B B/Hong Kong/5/72 2,23 X 10 4* CEID 50 /mL = dosis infecciosa en embrión de polluelo a la cual mueren el 50% de los embrionesEspecificidad analítica (reactividad cruzada)Se evaluó el análisis Directigen EZ Flu A+B con un total de 98 microorganismos. Las 51 bacterias y las dos levaduras seanalizaron a una concentración de ~10 8 UFC/mL (CFU - unidades formadoras de colonias). Mycoplasma pneumoniae yMycoplasma orale se analizaron a una concentración de > 10 6 y >10 7 UCC/mL (CCU - unidades con cambio de color),respectivamente. Las tres cepas de micobacterias se inocularon a 10 7 UFC/mL y Chlamydia trachomatis LGVII se analizóa 2,5 x 10 8 CE/mL (CE = cuerpos elementales). Los 39 virus analizados se evaluaron a concentraciones de 10 4 a 10 9TCID 50 /mL (TCID 50 - dosis infecciosa en cultivo tisular a la cual se produce la lisis del 50% de las células) o 10 4 a10 8 CEID 50 /mL (CEID 50 - dosis infecciosa en embrión de polluelo a la cual se infectan el 50% de los embriones depolluelo). Todos los microorganismos (excepto los virus de la influenza) dieron lugar a resultados negativos de Flu A yFlu B. Los virus de la influenza A analizados (n = 2) dieron lugar a resultados positivos de Flu A y negativos de Flu B.Los virus de la influenza B analizados (n = 6) dieron lugar a resultados positivos de Flu B y negativos de Flu A.Acinetobacter baumannii (calcoaceticus) Neisseria meningitidisCoxsackievirus Tipo A9 (Griggs)Actinobacillus suis Neisseria mucosa Coxsackievirus Tipo A9 (P.B. Bozek)Bacteroides fragilis Neisseria sicca Coxsackievirus Tipo B5 (Faulkner)Bordetella pertussis Neisseria subflava Coxsackievirus Tipo B6 (Schmitt)Candida albicans Peptostreptococcus anaerobius Coxsackievirus Tipo A21 (Kuykendall)Candida glabrata Porphyromonas asaccharolyticus Cytomegalovirus (AD-169)Cardiobacterium hominis Prevotella oralis Echovirus Tipo 2 (Cornelis)Chlamydia trachomatis LGVII Proteus mirabilis Echovirus Tipo 3 (Morrisey)Corynebacterium diphtheriae Proteus vulgaris Echovirus Tipo 6 (D'Amori)Eikenella corrodens Pseudomonas aeruginosa HSV Type 1 (HF)Enterococcus faecalis Salmonella choleraesuis HSV Type 2 (MS)Enterococcus gallinarum sub minnesota Influenza A/PR/8/34 (H1N1)Escherichia coli Serratia marcescens Influenza A/Victoria/3/75 (H3N2)Fusobacterium nucleatum Staphylococcus aureus Influenza B/Hong Kong/5/72Gardnerella vaginalis Staphylococcus aureus-Cowan 1 Influenza B /Lee/40Haemophilus aphrophilus Streptococcus bovis II grupo D Influenza B/Allen/45Haemophilus influenzae Staphylococcus epidermidis Influenza B/GL/1739/54Haemophilus parainfluenzae Streptococcus mutans Influenza B/Maryland/1/59Haemophilus paraphrophilus Streptococcus oralis Influenza B/Taiwan/2/62Kingella kingae Streptococcus pneumoniae Virus del sarampión (Edmonston)Klebsiella pneumoniae Streptococcus pyogenes grupo A Virus de las paperas (Enders)Lactobacillus casei Streptococcus sanguis Parainfluenza Tipo 1 (Sendia/52)Lactobacillus fermentum Streptococcus sp. grupo B Parainfluenza Tipo 2 (Greer)Lactobacillus plantarum Streptococcus sp. grupo C Parainfluenza Tipo 3 (C243)Legionella pneumophila Streptococcus sp. grupo F Rhinovirus Tipo 1A (2060)Listeria monocytogenes Streptococcus sp. grupo G Rhinovirus Tipo 2 (HGP)Moraxella catarrhalis Veillonella parvula Rhinovirus Tipo 13 (353)Mycobacterium avium Adenovirus, Tipo 3 (GB) Rhinovirus Tipo 15 (1734)Mycobacterium intracellulare Adenovirus, Tipo 5 (Adenoid 75) Rhinovirus Tipo 16 (11757)Mycobacterium tuberculosis Adenovirus, Tipo 7 (Gomen) Rhinovirus Tipo 37 (151-1)Mycoplasma orale Adenovirus, Tipo 10 (J.J.) RSV Tipo A (Long)Mycoplasma pneumoniae Adenovirus, Tipo 18 (D. C.) RSV Tipo B (Wash/18537/62)Neisseria gonorrhoeae Coronavirus (229E) VZV (Ellen)41

8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:01 PM Page 42Reactividad de las cepas con los virus de la influenza A y BSe evaluó el análisis Directigen EZ Flu A+B mediante un panel de 37 cepas de la influenza. Todos los subtiposconocidos de hemaglutinina (15) y neuraminidasa (9) de la influenza A estaban representados en este panel. Todaslas cepas humanas y animales de influenza A mostraron resultados positivos en el análisis de Flu A y resultadosnegativos en el análisis de Flu B. Por el contrario, todas las cepas de influenza B mostraron resultados positivos en elanálisis de Flu B y resultados negativos en el análisis de Flu A.Virus de la influenza (cepa humana) Tipo de virus Virus de la influenza (cepa animal) Tipo de virusA/NWS/33 A (H1N1) A/Turkey/Kansas/4880/80 A (H1N1)A/PR/8/34 A (H1N1) A/Mallard/New York/6750/78 A (H2N2)A1/FM/1/47 A (H1N1) A/Turkey/England/69 A (H3N2)A1/Denver/1/57 A (H1N1) A/Chicken/Alabama/75 A (H4N8)A/New Jersey/8/76 (Hsw N1) A (H1N1) A/Turkey/Wisconsin/68 A (H5N9)A/Port Chalmers/1/73 A (H3N2) A/Turkey/Canada/63 A (H6N8)A/Victoria/3/75 A (H3N2) A/Turkey/Oregon/71 A (H7N3)A/Vietnam/3028/04 A (H5N1) A/Turkey/Ontario/6118/67 A (H8N4)A/Thailand/MK2/04 A (H5N1) A/Turkey/Wisconsin/66 A (H9N2)A/Hong Kong/486/97 A (H5N1) A/Chicken/Germany/N/49 A (H10N7)A/California/07/2004 A (H3N2) A/Duck/Memphis/546/74 A (H11N9)B/Lee/40 B A/Duck/Alberta/60/76 A (H12N5)B/Allen/45 B A/Gull/MD/704/77 A (H13N6)B/GL/1739/54 B A/Mallard/Gurjev/263/82 A (H14N5)B/Maryland/1/59 B A/Shearwater/WA/2576/79 A (H15N6)B/Taiwan/2/62BB/Mass/3/66BB/Hong Kong/5/72BB/Victoria/504/00BB/Tokyo/53/99BB/Quingdao/102/91BB/Leningrad/86/93BSustancias interferentesSe evaluaron diversas sustancias con el análisis Directigen EZ Flu A+B, Estas sustancias incluían sangre entera (2%) ydiversas medicaciones. Con este análisis no se observó ninguna interferencia en ninguna de las sustancias analizadas.Medicaciones avaluadasTres colutorios orales de venta sin receta al 25%Tres caramelos para la garganta al 25%Tres aerosoles nasales al 10%4-acetamidofenol (10 mg/mL)Ácido acetilsalicílico (20 mg/mL)Maleato de clorfenamina (5 mg/mL)Dextrometorfano (10 mg/mL)Fexofenadina (500 ng/mL)Amantadina (500 ng/mL)Albuterol (0,083 mg/mL)Ribavirina (500 ng/mL)Seudoefedrina HCl (20 mg/mL)Guayacol-gliceril-éter (20 mg/mL)Ibuprofeno (10 mg/mL)Oximetazolina (0,05 mg/mL)Fenilefrina (1 mg/mL)Loratidina (100 ng/mL)Difenhidramina HCl (5 mg/mL)Zanamivir (1 mg/mL)Rimantadina (500 ng/mL)Oseltamivir (500 ng/mL)Synagis (0,1 mg/mL)DISPONIBILIDADNº de cat. Descripción256050 Kit de 30 análisis Directigen EZ Flu A+B220144 CultureSwab EZ 100 (torunda individual)220145 CultureSwab EZ II 100 (torunda doble)221819 Solución salina normal, 5 mL, 100 unidadesREFERENCIAS Ver "References" en el texto en inglés.42

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8010589(0605).qxd 08/05/2005 2:01 PM Page 44"# Becton, Dickinson and Company7 Loveton CircleSparks, Maryland 21152 USA800-638-8663$BENEX LimitedBay K 1a/d, Shannon Industrial EstateShannon, County Clare, IrelandTel: 353-61-47-29-20Fax: 353-61-47-25-46Synagis is a trademark of MedImmune, Inc.ViraTrans is a trademark of Trinity Biotech, PLC.Multitrans is a trademark of Starplex Scientific, Inc.Cellmatics and CultureSwab are trademarks of Difco Laboratories, Inc., subsidiary of Becton, Dickinson and Company.BD, BD Logo, Directigen, DispensTube and Trypticase are trademarks of Becton, Dickinson and Company. © 2005 BD.

Fiche Mémo pour le participant n o 9Préparation, entreposage et emballage des échantillonsà des fins de transportPréparation des fioles deprélèvement d’échantillons• Prenez d’abord les fioles stérilesavec capuchon à vis.• Versez 1,0-2,0 ml de liquide detransport dans chaque fiole.Il est préférable de conserver cesfioles à une température de –20 °Cjusqu’à ce que vous soyez prêt à lesutiliser. Elles peuvent également êtreconservées à une température de4 °C pendant 48–96 heures, ou à latempérature ambiante pendant unecourte période de temps, soit un oudeux jours.• Attribuez à chaque fiole un nombrecorrespondant à celui indiquésur la feuille de prélèvement desdonnées sur le terrain. Si possible,les renseignements suivantsdoivent être inscrits sur la feuillede prélèvement des données sur leterrain: type d’animal sur lequel estprélevé l’échantillon, espèce, typed’échantillon, date du prélèvement,et emplacement géographique duprélèvement de l’échantillon.• Les échantillons doivent ensuiteêtre recueillis (voir la rubriquedes techniques de prélèvementd’échantillons), puis insérés dansun moyen de transport. Tous leséchantillons doivent être conservésdans la glace ou à une températurede 4 °C.Si l’on vous demande de prélever deséchantillons de tissu, essayez de lescongeler immédiatement, sans moyende transport.Très rarement, on peut vous demanderd’entreposer un échantillon de sang.Le cas échéant, laissez le sang coaguler,puis utilisez une centrifugeuse à 2500 tr/min pendant 15 minutes pourséparer les globules rouges et le sérum.Celui-ci doit être retiré avec unepipette, et les globules doivent êtrejetés. Ces échantillons doivent êtreconservés à une température de –20°C.Entreposage des échantillonsLes échantillons doivent être conservésdans un moyen de transport viral à4 °C, et transportés au laboratoiredès que possible. Si les échantillonsne sont pas transportés dans les2 jours suivant le prélèvement, ilsdoivent être conservés à 4 °C. Vouspouvez maintenir cette températureen utilisant la glacière et les blocsréfrigérants compris dans cette trousse.S’il faut plus que deux jours pourfaire parvenir les échantillons aulaboratoire, vous devez les congeler àune température de –70 °C jusqu’à cequ’ils soient livrés au laboratoire. Vousdevez absolument éviter de congeleret de dégeler les échantillons àrépétition, car cela peut éliminer toutetrace d’infection.

Les échantillons de sang peuvent êtreconservés à une température de 4 °Cpendant environ une semaine, maisensuite, ils doivent être congelés à –20°C.Préparation des échantillons envue de l’expéditionVous pouvez mettre les échantillonsdans un emballage d’expédition isoléSafe-T-Pak, avec les blocs réfrigérants.Les échantillons de la grippe nepeuvent être entreposés ou expédiésdans la glace sèche (bioxyde decarbone solide) ou dans un sac enplastique double hermétiquementfermé et rubané, car le bioxyde decarbone peut tuer les virus de lagrippe s’il entre en contact avec leséchantillons.Il est important de mettre leséchantillons dans l’emballaged’expédition isolé afin d’éviter qu’ils nese brisent, qu’ils ne soient percés, ouque le contenu ne se déverse, dans desconditions de transport «normales».Généralement, les échantillons doiventêtre enveloppés dans un emballageinterne, puis placés dans un emballageexterne dont le matériel peut servirde coussin afin de les protéger contretout risque d’endommagement. Lesconteneurs que vous utilisez doiventêtre à l’épreuve des fuites.Pour de plus amples renseignements,veuillez consulter les lignes directricesde l’Organisation mondiale de la santésur le transport des échantillons demaladies infectieuses (disponibles àl’annexe C), ainsi que la réglementationde votre pays.

ANNEXESAnnexe AFiche signalétique de la trousse de dépistage de la grippe(pour les animaux)

Annexe BFiche signalétique de la trousse de dépistage A+B de la grippeavec Directigen EZ (pour les humains)

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 1/5Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/20061 Identification of substance:· Product name: BD Universal Viral Transport Combo Swab Kit· Catalog number: 220222· Manufacturer/Supplier:BD Diagnostic Systems7 Loveton CircleSparks, MD 21152Telephone: (410) 771-0100 or (800) 638-8663· Information department: Technical Services· Emergency information:In case of a chemical emergency, spill, fire, exposure, or accident contact BD Diagnostic Systems at(410)771-0100 or (800)638-8663, or ChemTrec at (800)424-9300.2 Composition/Data on components:· Chemical characterization· Description: Mixture consisting of the following components.· Dangerous components: Void3 Hazards identification· Hazard description:This product contains no hazardous constituents, or the concentration of all chemical constituents arebelow the regulatory threshold limits described by Occupational Safety Health Administration HazardCommunication Standard 29 CFR 1910.1200 and the European Directive 91/155/EEC, and 93/112/EC.· Classification systemThe classification was made according to the latest editions of international substances lists, andexpanded upon from company and literature data.· NFPA ratings (scale 0-4)0 0 0Health = 0Fire = 0Reactivity = 04 First aid measures· General information No special measures required.· After inhalation Seek medical treatment in case of complaints.· After skin contact Immediately wash with water and soap and rinse thoroughly.· After eye contactRinse opened eye for several minutes under running water. If symptoms persist, consult a doctor.· After swallowing If symptoms persist consult doctor.· Information for doctor Show this product label or this MSDS.USA(Contd. on page 2)

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 2/5Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/2006Product name: BD Universal Viral Transport Combo Swab Kit(Contd. of page 1)5 Fire fighting measures· Suitable extinguishing agentsCO2, ABC multipurpose dry chemical or water spray. Fight larger fires with water spray or alcoholresistant foam.· Protective equipment: No special measures required.6 Accidental release measures· Person-related safety precautions: Not required.· Measures for environmental protection: Wipe up with damp sponge or mop.· Measures for cleaning/collecting: No special measures required.· Additional information: No dangerous substances are released.7 Handling and storage· Handling· Information for safe handling: No special measures required.· Information about protection against explosions and fires: No special measures required.· Storage· Requirements to be met by storerooms and receptacles: 2 - 25 C· Information about storage in one common storage facility: Store away from oxidizing agents.· Further information about storage conditions: Store in cool, dry conditions in well sealed containers.8 Exposure controls and personal protection· Additional information about design of technical systems: No further data; see item 7.· Components with limit values that require monitoring at the workplace:The product does not contain any relevant quantities of materials with critical values that have to bemonitored at the workplace.· Additional information: The lists that were valid during the creation were used as basis.· Personal Protective Equipment· General protective and hygienic measuresThe usual precautionary measures for handling chemicals should be followed.· Breathing equipment: Not required.· Protection of hands:Chemical resistant gloves (i.e. nitrile, or equivalent).· Eye protection: Safety glasses· Body protection: Protective work clothing (lab coat).USA(Contd. on page 3)

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 3/5Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/2006Product name: BD Universal Viral Transport Combo Swab Kit(Contd. of page 2)9 Physical and chemical properties:· General InformationForm:Color:Odor:LiquidLight orangeCharacteristic· Change in condition Undetermined· Melting point/Melting range: Not determined· Boiling point/Boiling range: Not determined· Flash point: Not applicable· Auto igniting: Product is not self igniting.· Danger of explosion: Product does not present an explosion hazard.· Density: Not determined· Solubility in / Miscibility withWater:Soluble· pH-value: 7.3 +/- 0.2· Solvent content:Organic solvents: 0.0 %10Stability and reactivity· Thermal decomposition / conditions to be avoided:No decomposition if used according to specifications.· Materials to be avoided: Incompatible material: strong oxidizers.· Dangerous reactions No dangerous reactions known· Dangerous products of decomposition: No dangerous decomposition products known.11Toxicological information· Acute toxicity:· Primary irritant effect:· on the skin: No irritating effect.· on the eye: No irritating effect.· Sensitization: No sensitizing effects known.· Additional toxicological information:The product is not subject to OSHA classification according to internally approved calculation methodsfor preparations.When used and handled according to specifications, the product does not have any harmful effectsaccording to our experience and the information provided to us.This product contains antibiotics. People with known or suspected allergies to antibiotics should useappropriate safety precautions when handling. People that are allergic to antibiotics may experienceeye, skin, and respiratory irritation.USA(Contd. on page 4)

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 4/5Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/2006Product name: BD Universal Viral Transport Combo Swab Kit(Contd. of page 3)12Ecological information:· Ecotoxical effects:· Other information:The ecological effects have not been thoroughly investigated, but currently none have been identified.· General notes: Generally not hazardous for water.13Disposal considerations· Product:· RecommendationSmaller quantities can be disposed of with solid waste.This product is not considered a RCRA hazardous waste.Dispose of material in accordance with federal (40 CFR 261.3), state and local requirements.· Uncleaned packagings:· Recommendation: Disposal must be made according to state and federal regulations.· Recommended cleansing agent: Water, if necessary with cleansing agents.14Transport information· DOT regulations:· Hazard class: -· Land transport ADR/RID (cross-border)· ADR/RID class: -· Maritime transport IMDG:· IMDG Class: -· Marine pollutant: No· Air transport ICAO-TI and IATA-DGR:· ICAO/IATA Class: -· Transport/Additional information:If a dashed line appears in the Hazard Class section for the type of transportation, this indicates theproduct is not regulated for transportation.15Regulations· SARA Section 355 (extremely hazardous substances)None of the ingredients is listed.· SARA Section 313 (specific toxic chemical listings)None of the ingredients is listed.· TSCA (Toxic Substances Control Act)10043-52-4 calcium chloride7487-88-9 magnesium sulfate7447-40-7 potassium chloride57-50-1 sucrose(Contd. on page 5)USA

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 5/5Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/2006Product name: BD Universal Viral Transport Combo Swab Kit52-90-4 L-cysteine143-74-8 phenol red6893-26-1 D-glutamic acid7558-79-4 sodium phosphate, dibasic7758-11-4 potassium phosphate, dibasic· California Proposition 65 - Chemicals known to cause cancerNone of the ingredients is listed.· California Proposition 65 - Chemicals known to cause reproductive toxicity for females:None of the ingredients is listed.· California Proposition 65 - Chemicals known to cause reproductive toxicity for males:None of the ingredients is listed.· California Proposition 65 - Chemicals known to cause developmental toxicity:None of the ingredients is listed.· Carcinogenicity categories· IARC (International Agency for Research on Cancer)None of the ingredients is listed.· NTP (National Toxicology Program)None of the ingredients is listed.(Contd. of page 4)· TLV (Threshold Limit Value established by ACGIH)57-50-1 sucrose A4· Product related hazard information:Observe the general safety regulations when handling chemicalsThe product is not subject to identification regulations pertaining to regulations on hazardous materials.· National regulations· Water hazard class: Generally not hazardous for water.16Other information:To the best of our knowledge, the information contained herein is accurate. However, neitherBecton,Dickinson and Company or any of its subsidiaries assumes any liabilities whatsoever for theaccuracy or completeness of the information contained herein. Final determination of suitability of anymaterial is the sole responsibility of the user. All materials may present unknown hazards and should beused with caution. Although certain hazards are described herein, we can not guarantee that these arethe only hazards that exist.· Department issuing MSDS: Safety and Environment Department· Contact: Technical Service RepresentativeUSA

RevisionsRev from Rev to ECO #0305 0705 3581-05SO 0191-5Notes:1. BD Cat. Number 220220, 220221, 220222, 220239, 2202402. Blank (Sheet) Size : Length: 8.5” Width: 16.5”Number of Pages: 6 Number of Sheets: 1Page Size: Length 8.5” Width 5.5” Final Folded Size: 8.5” x 5.5”3. Style (see illustrations below): # 4#1 #2 #3 #4#5 #6 #74. See Specification Control Number OEM for Material InformationX5. Ink Colors: Printed two sides Yes NoNo. of Colors: 1 PMS# 2755 Blue6. Graphics are approved by Becton, Dickinson and Company. Supplier has theresponsibility for using the most current approved revision level.Label DesignProoferChecked ByPart Number:45DateDateDateCOMPANY CONFIDENTAL. THIS DOCUMENT ISTHE PROPERTY OF BECTON, DICKINSON ANDCOMPANY AND IS NOT TO BE USED OUTSIDE THECOMPANY WITHOUT WRITTEN PERMISSIONCategory and DescriptionPackage Insert,BD Universal Viral TransportBecton, Dickinson and Company7 Loveton CircleSparks, MD 21152 USASheet: 1 of 7Scale:N/AA

45(0705).qxd 09/12/2005 8:14 AM Page 1! Universal Viral Transport452005/07INTENDED USEBD Universal Viral Transport System is intended for the collection and transport of clinical specimens containingviruses, chlamydiae, mycoplasmas or ureaplasmas from the collection site to the testing laboratory. This system canbe processed using standard clinical laboratory operating procedures for viral, chlamydial, mycoplasmal andureaplasmal culture.SUMMARY AND EXPLANATIONOne of the routine procedures in the diagnosis of infections caused by viruses, chlamydiae, mycoplasmas orureaplasmas involves the collection and safe transportation of biological samples. This can be accomplished using theBD Universal Viral Transport System. This system includes a universal transporting medium that is room temperaturestable, which can sustain viability (and infectivity) of a plurality of organisms that include clinically important viruses,chlamydiae, mycoplasmas and ureaplasmas during transit to the testing laboratory. The formulation of BD UniversalViral Transport medium includes protein for stabilization, antibiotics to minimize bacterial and fungalcontamination, and a buffer to maintain a neutral pH.BD Universal Viral Transport System is provided with labeled screw-cap vials designed for transport of the clinicalsample. This system is also supplied as a sample collection kit that comprises a package containing one screw-cap vialof medium and a peel pouch incorporating two sterile polyester specimen collection swabs, with scored shafts foreasy breakage.PRINCIPLES OF THE PROCEDUREBD Universal Viral Transport medium consists of modified Hank’s balanced salt solution supplemented with bovineserum albumin, cysteine, gelatin, sucrose and glutamic acid. The pH is buffered with HEPES buffer. Phenol red is usedto indicate pH. Vancomycin, amphotericin B and colistin are incorporated in the medium to inhibit growth ofcompeting bacteria and yeast. The medium is isotonic and non-toxic to mammalian host cells. The presence ofsucrose acts as a cryoprotectant which aids in the preservation of viruses and chlamydiae if specimens are frozen(-70°C) for prolonged storage.REAGENTSUniversal Viral Transport Medium ComponentsHank’s Balanced SaltsBovine Serum AlbuminL-CysteineGelatinSucroseL-Glutamic AcidHEPES BufferVancomycinAmphotericin BColistinPhenol RedpH 7.3 +/- 0.2 @ 25°CWarnings and PrecautionsFor in vitro Diagnostic Use.• Observe approved biohazard precautions and aseptic techniques. To be used only by adequately trained andqualified personnel.• Pathogenic microorganisms, including hepatitis viruses and Human Immunodeficiency Virus, may be present inclinical specimens. "Standard Precautions" 1-4 and institutional guidelines should be followed in handling allitems contaminated with blood and other body fluids.• Sterilize all biohazard waste including specimens, containers and media after their use.• Directions should be read and followed carefully.• Do not re-sterilize unused swabs.• Do not re-pack.• Not suitable to collect and transport microorganisms other than viruses, chlamydiae, mycoplasmas andureaplasmas.• Not suitable for any other application than intended use.• The use of this product in association with a rapid diagnostic kit or with diagnostic instrumentation should bepreviously validated by the user.• Do not use if the swab is visibly damaged (i.e., if the swab tip is broken).• Do not ingest the medium.• Do not use the Universal Viral Transport medium for premoistening or prewetting the applicator swab prior tocollecting the sample or for rinsing or irrigating the sampling sites.Storage: This product is ready for use and no further preparation is necessary. The product should be stored in itsoriginal container at 2–25°C until used. Do not overheat. Do not incubate, or freeze prior to use. Improper storage

45(0705).qxd 09/12/2005 8:14 AM Page 2will result in a loss of efficacy. Do not use after expiration date, which is clearly printed on the outer box and oneach individual sterile pouch unit and the specimen transport vial label.Product Deterioration: BD Universal Viral Transport should not be used if (1) there is evidence of damage orcontamination to the product, (2) there is evidence of leakage, (3) the color of the medium has changed from lightorange-red, (4) the expiration date has passed, (5) the swab pouch is open, or (6) there are other signs ofdeterioration.SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATIONSpecimens for viral, chlamydial, mycoplasmal or ureaplasmal investigation should be collected and handled followingpublished manuals and guidelines. 5-11 To maintain optimum viability, transport the specimen to the laboratory assoon as possible. Best recovery is obtained when specimens are refrigerated at 2–8°C or kept on wet ice followingcollection and while in transit. If there will be a long delay before processing, specimens should be frozen at –70°Cor colder and transported on dry ice. Storage at –20°C is less satisfactory than storage at 4°C or –70°C and can resultin the loss of infectivity. 12,13 Specific requirements for the shipment and handling of specimens should be in fullcompliance with state and federal regulations. 11,14,15 Shipping of specimens within medical institutions shouldcomply with internal guidelines of the institution. All specimens should be processed as soon as they are received inthe laboratory.PROCEDURESMaterials Provided: BD Universal Viral Transport System includes a screw-cap vial containing 3 mL of transportmedium plus three glass beads. Universal Viral Transport System vials of transport medium are supplied with one ofthe following specimen collection swab options:Two regular size plastic scored shaft swabs with polyester fiber tips.One regular size plastic scored shaft swab and one stainless steel wire-plastic scored shaft Minitip swab, both withpolyester fiber tips.These different swab applicator shafts facilitate the collection of specimens from various sites on a patient. Refer tothe individual product descriptions for specific information about materials supplied.Materials Required But Not Provided: Appropriate materials for isolating, differentiating and culturing viruses,chlamydiae, mycoplasmas and ureaplasmas. These materials include tissue culture cell lines, tissue culture medium,incubation systems and reading equipment. Refer to appropriate references for recommended protocols for isolationand identification of viral, chlamydial, mycoplasmal and ureaplasmal agents. 5-8,10Test ProcedureProper specimen collection from the patient is extremely critical for successful isolation and identification ofinfectious organisms. For specific guidance regarding specimen collection procedures, consult published referencemanuals. 5-11 Specimens should be collected as soon as possible after the clinical onset of disease. Highest viral titersare present during the acute illness.For Universal Viral Transport Medium Vials1. Aseptically remove cap from vial.2. Aseptically place vesicle aspirates, corneal or conjunctival scrapings, small pieces of tissue or stool samples intothe vial with medium.3. Replace cap on vial and close tightly.4. Label with appropriate patient information.5. Send to the laboratory for immediate analysis.For Universal Viral Transport Collection Kits1. Collect specimen with swab.2. Aseptically remove cap from vial.3. Insert swab into the vial with medium.4. Break swab shaft by bending it against the vial wall.For Minitip swabs, break shaft evenly at the pre-scored line.5. Replace cap on vial and close tightly.6. Label with appropriate patient information.7. Send to the laboratory for immediate analysis.Quality ControlAll lots of the Universal Viral Transport medium are tested for microbial contamination, toxicity to host cells and theability to maintain viability of desired agents. Procedures for quality control of Universal Viral Transport medium andviral culture media are described in a number of publications by the American Society for Microbiology 6,8,10 and byCLSI (formerly NCCLS). 16,17 If aberrant quality control results are noted, patient results should not be reported.RESULTSResults obtained will largely depend on proper and adequate specimen collection, as well as timely transport andprocessing in the laboratory.LIMITATIONS OF THE PROCEDURE1. Condition, timing and volume of specimen collected for culture are significant variables in obtaining reliableculture results. Follow recommended guidelines for specimen collection. 5-112. Repeated freezing and thawing of specimens may reduce the recovery of viable organisms.2

45(0705).qxd 09/12/2005 8:14 AM Page 33. Universal Viral Transport Systems are intended for use as a collection and transport medium for viral, chlamydial,mycoplasmal and ureaplasmal agents only. The medium can serve as a cryoprotectant for clinical viruses,including cytomegalovirus and varicella-zoster virus.4. Calcium alginate swabs are toxic for many enveloped viruses and may interfere with fluorescent antibody tests,so they should not be used for specimen collection. Wooden shaft swabs may contain toxins and formaldehydesand should not be used. Polyester-tipped swabs are suitable when specimen collection by a swab is appropriate.5. Performance Characteristics of BD Universal Viral Transport Systems are validated with BD Universal ViralTransport Swabs only. The use of tubes of medium or swabs from any other source has not been validated andcould affect the performance of the product.PERFORMANCE CHARACTERISTICSViability studies were performed using BD Universal Viral Transport with a variety of viruses, chlamydiae,mycoplasmas and ureaplasmas. Swabs accompanying each transport system were directly inoculated in triplicate with100 µL of organism suspension. Swabs were then placed in their respective transport medium vials and were held for0, 24 and 48 h at both 4°C and room temperature (20–25°C). At the appropriate time interval, each swab wasvortexed, removed from its transport medium vial and then an aliquot of this suspension was inoculated into shellvials or into appropriate culture media. All cultures were processed by standard laboratory culture technique andexamined after a specified incubation time. Organism viability was determined by fluorescing foci counts for viraland chlamydial strains and by CFU counts for mycoplasmal and ureaplasmal strains. Organisms evaluated were:adenovirus, cytomegalovirus, echovirus type 30, herpes simplex virus type 1, herpes simplex virus type 2, influenza A,parainfluenza 3, respiratory syncytial virus, varicella-zoster virus, Chlamydophila pneumoniae, Chlamydiatrachomatis, Mycoplasma hominis, Mycoplasma pneumoniae and Ureaplasma urealyticum.The results for the strains tested using BD Universal Viral Transport System are shown in the tables below.BD Universal Viral Transport System was able to maintain the viability of the following organisms for at least 48 h atboth room temperature (20–25°C) and in the refrigerator (2–8°C) under the test conditions described above:adenovirus, cytomegalovirus, echovirus type 30, herpes simplex virus type 1, herpes simplex virus type 2, influenza A,parainfluenza 3, respiratory syncytial virus, varicella-zoster virus, Chlamydophila pneumoniae, Chlamydiatrachomatis, Mycoplasma hominis, Mycoplasma pneumoniae and Ureaplasma urealyticum.Table 1Viability ViabilityIncubation Challenge ChallengeHolding Time Before at 4°C at RTOrganism Time Reading Foci of infected Foci of infectedOrganism Concentration (hours) (hours) cells/200 µL 2 cells/200 µL 210 -1 Neat Virus Stock Suspension* 0 24 123 119(dilution produces infectivity 24 24 62 47Adenovirusof 70% of cells) 48 24 68 6310 -2 Neat Virus Stock Suspension* 0 24 17 14(dilution produces infectivity 24 24 5 3of 42% of cells) 48 24 5 7Neat Virus Stock Suspension* 0 24 337 444(neat produces infectivity 24 24 582 1012Cytomegalovirusof 3% of cells) 48 24 394 5061:2 Neat Virus Stock Suspension* 0 24 49 195(dilution produces infectivity 24 24 63 80of 2% of cells) 48 24 72 22810 -1 Neat Virus Stock Suspension* 0 24 76 79(dilution produces infectivity 24 24 59 75Echovirus Type 30of 64% of cells) 48 24 66 6010 -2 Neat Virus Stock Suspension* 0 24 34 48(dilution produces infectivity 24 24 18 26of 35% of cells) 48 24 25 2010 -1 Neat Virus Stock Suspension* 0 24 491 412(dilution produces infectivity 24 24 387 301Herpes Simplex of 100% of cells) 48 24 282 164Virus Type 1 10 -2 Neat Virus Stock Suspension* 0 24 98 100(dilution produces infectivity 24 24 68 10of 100% of cells) 48 24 21 110 -1 Neat Virus Stock Suspension* 0 24 TNTC 1 TNTC 1(dilution produces infectivity 24 24 615 437Herpes Simplex of 90% of cells) 48 24 525 58Virus Type 2 10 -2 Neat Virus Stock Suspension* 0 24 228 315(dilution produces infectivity 24 24 170 73of 40% of cells) 48 24 75 7(continued)3

45(0705).qxd 09/12/2005 8:14 AM Page 4Table 1 (continued)Viability ViabilityIncubation Challenge ChallengeHolding Time Before at 4°C at RTOrganism Time Reading Foci of infected Foci of infectedOrganism Concentration (hours) (hours) cells/200 µL 2 cells/200 µL 2Neat Virus Stock Suspension* 0 16 129 134(neat produces infectivity 24 16 172 166Influenza Aof 59% of cells) 48 16 166 16910 -1 Neat Virus Stock Suspension* 0 16 123 115(dilution produces infectivity 24 16 71 72of 47% of cells) 48 16 67 65Neat Virus Stock Suspension* 0 24 24 32(neat produces infectivity 24 24 26 28Parainfluenza 3of 57% of cells) 48 24 26 1910 -1 Neat Virus Stock Suspension* 0 24 2 8(dilution produces infectivity 24 24 12 10of 51% of cells) 48 24 8 4Neat Virus Stock Suspension* 0 24 178 248(neat produces infectivity 24 24 251 208Respiratory of 47% of cells) 48 24 183 232Syncytial Virus 10 -1 Neat Virus Stock Suspension* 0 24 17 13(dilution produces infectivity 24 24 28 21of 8% of cells) 48 24 14 16Neat Virus Stock Suspension* 0 72 TNTC 1 TNTC 1(neat produces infectivity 24 72 TNTC 1 TNTC 1Varicella-Zoster of 8% of cells) 48 72 283 424Virus 1:2 Neat Virus Stock Suspension* 0 72 TNTC 1 TNTC 1(dilution produces infectivity 24 72 TNTC 1 TNTC 1of 2% of cells) 48 72 132 159* 100 µL of suspension dosed onto the swab tip then swab placed in Universal Viral Transport vial containing 3 mL oftransport medium1 TNTC= Too numerous to count2 Average of triplicate tests performed on 200 µL aliquots of Universal Viral Transport medium at each time pointTable 2ViabilityViabilityIncubation Challenge ChallengeTime at 4°C at RTHolding Before Fluorescing FluorescingOrganism Time Reading cytoplasmic cytoplasmicOrganism Concentration (hours) (days) inclusions/200 µL 2 inclusions/200 µL 2Neat Chlamydophila Stock 0 3 TNTC 1 TNTC 1Suspension* (neat produces TNTC 1 24 3 TNTC 1 TNTC 1cytoplasmic inclusions over entire 48 3 201 136Chlamydophila HeLa DHI shell vials coverslip)pneumoniae 10- 1 Neat Chlamydophila Stock 0 3 256 257Suspension* (dilution produces TNTC 1 24 3 175 276cytoplasmic inclusions over entire 48 3 39 17HeLa DHI shell vials coverslip)Neat Chlamydia Stock Suspension* 0 3 TNTC 1 TNTC 1(neat produces TNTC 1 cytoplasmic 24 3 TNTC 1 TNTC 1inclusions over entire BGMK DHI 48 3 317 50Chlamydiashell vials coverslip)trachomatis 10- 1 Neat Chlamydia Stock Suspension* 0 3 216 171(dilution produces TNTC 1 24 3 164 48cytoplasmic inclusions over entire 48 3 67 6BGMK DHI shell vials coverslip)* 100 µL of suspension dosed onto the swab tip then swab placed in Universal Viral Transport vial containing 3 mL oftransport medium1 TNTC= Too numerous to count2 Average of triplicate tests performed on 200 µL aliquots of Universal Viral Transport medium at each time point4

45(0705).qxd 09/12/2005 8:14 AM Page 5Table 3Incubation Viability ViabilityHolding Time Before Challenge ChallengeOrganism Time Reading at 4°C at RTOrganism Concentration (hours) (days) CFU/200 µL 2 CFU/200 µL 2Neat Mycoplasma Stock Suspension*:Four Mycoplasma hominis Bacti Disks0 7 ~ 1000, TNTC 1 ~ 1000, TNTCreconstituted into 20 mL of PPLO broth124 7 ~ 1000, TNTC 1 ~ 1000, TNTCand incubated in 5-10% CO 12 at 35°C - 37°C48 7 ~ 1000, TNTC 1 ~ 1000, TNTCMycoplasma for 48 h (reference Remel Mycoplasma1hominis Bacti Disk Pack Insert TI No. 19314)0 7 17 1610- 2 Neat Mycoplasma Stock Suspension* 24 7 17 1048 7 11 12Neat Mycoplasma Stock Suspension*:Four Mycoplasma pneumoniaeBacti Disks reconstituted into 20 mL 0 7 171 169of SP4 broth with glucose and incubated 24 7 219 238in ambient air at 35°C - 37°C for 48 7 183 1847-14 days until broth becomes yellowMycoplasma (reference Remel Mycoplasma Bacti Diskspneumoniae Pack Insert TI No. 19314)10- 1 Neat Mycoplasma Stock Suspension* 0 7 17 1824 7 22 2648 7 17 19Neat Ureaplasma Stock Suspension*:Ten Ureaplasma urealyticum Bacti Disks0 3 1020 1125reconstituted into 18 mL of 10B broth and24 3 1136 1083incubated in ambient air 35°C - 37°C48 3 1249 1056Ureaplasma for 24 h (reference Remel Ureaplasmaurealyticum Bacti Disks Pack Insert TI No. 19315)0 3 101 8310- 1 Neat Ureaplasma Stock Suspension* 24 3 107 10848 3 116 103* 100 µL of suspension dosed onto the swab tip then swab placed in Universal Viral Transport vial containing 3 mL oftransport medium1 TNTC= Too numerous to count2 Average of triplicate tests performed on 200 µL aliquots of Universal Viral Transport medium at each time pointAVAILABILITYCat. No. Description220220 BD Universal Viral Transport 3 mL Vial, carton of 50.220221 BD Universal Viral Transport Standard Kit; each kit contains 3 mL vial, package of 2 sterilepolyester-tip regular swabs with scored plastic shaft, carton of 50.220222 BD Universal Viral Transport Combo Kit; each kit contains 3 mL vial, package of 1 sterile polyestermini-tip swab with wire/plastic scored shaft and 1 sterile polyester-tip regular swab with scored plasticshaft, carton of 50.220239 BD Universal Viral Transport Regular Swabs, sterile polyester-tip with scored plastic shaft, 2 perpouch, carton of 100.220240 BD Universal Viral Transport Combo Swabs, 1 sterile polyester mini-tip swab with wire/plasticscored shaft and 1 sterile regular swab with scored plastic shaft, 2 per pouch, carton of 100.REFERENCES1. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 2001. Approved Guideline M29-A2. Protection oflaboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed. NCCLS, Wayne, Pa.2. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health andHuman Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals.Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: 53-80.3. U.S. Department of Health and Human Services. 1999. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories,HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C.4. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection ofworkers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within themeaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045.5. Murray, P.R., E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken. 1999. Manual of clinical microbiology. 7th ed.ASM, Washington, D.C.6. Gleaves, C.A., R.L. Hodinka, S.L.G. Johnston, and E.M. Swierkosz. 1994. Cumitech 15A. Laboratory diagnosis ofviral infections. ASM, Washington, DC.7. Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S Weissfeld. 1998. Bailey and Scott's diagnostic microbiology. 10th ed. Mosby, St.Louis, MO.5

45(0705).qxd 09/12/2005 8:14 AM Page 68. Wardford, A., M. Chernesky, and E. M. Peterson. 1999. Cumitech 19A, Laboratory diagnosis of Chlamydiatrachomatis infections. ASM, Washington, DC.9. Miller, J. M. 1999. A guide to specimen management in clinical microbiology, 2nd ed. ASM, Washington, DC.10. Isenberg, H. D., 2004. Clinical microbiology procedures handbook, 2nd ed. ASM, Washington, DC.11. Isenberg, H.D., 1998. Essential procedures for clinical microbiology. Chapter 14.12, Page 787. Packaging andshipping infectious substances.12. Maass, M. and K. Dalhoff. 1995. Transport and storage conditions for cultural recovery of Chlamydiapneumoniae. J. Clin. Microbiol. 33:1793-1796.13. Johnson, F. 2005. Transport of viral specimens. Clin. Microbiol. Rev 3:120-121.14. 42CFR72. Code of Federal Regulations, Title 42, Volume 1, Part 72. Interstate Shipment of Etiologic Agents.15. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). 1994. Procedures for handling and transport ofdiagnostic specimens and etiologic agents. Approved Standard H5-A3, NCCLS, Wayne, PA..16. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). 2003. Quality control of microbiological transportsystems. Approved Standard M40-A, NCCLS, Wayne, PA.17. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). 2004. Viral culture. Proposed Standard M41,NCCLS, Wayne, PA.Becton, Dickinson and Company7 Loveton CircleSparks, Maryland 21152 USA800-638-8663Made in Italy by CopanBacti Disks is a trademark of Remel, Inc.BD and BD Logo are trademarks of Becton, Dickinson and Company © 2005 BD.

03/23/2006Product codeKit componentsDescription256050 Directigen EZ Flu A & B Test KitComponents:256050a256050b256050cExtraction ReagentControl Flu A+/B-Control Flu A-/B+

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 1/6Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/20061 Identification of substance:· Product name: Extraction Reagent(Directigen EZ Flu A & B Test Kit)· Catalog number: 256050· Manufacturer/Supplier:BD Diagnostic Systems7 Loveton CircleSparks, MD 21152Telephone: (410) 771-0100 or (800) 638-8663· Information department: Technical Services· Emergency information:In case of a chemical emergency, spill, fire, exposure, or accident contact BD Diagnostic Systems at(410)771-0100 or (800)638-8663, or ChemTrec at (800)424-9300.2 Composition/Data on components:· Chemical characterization:· CAS No. Description:Not applicable· Identification number(s): Not applicable· Chemical characterization· Description: Mixture consisting of the following components.· Dangerous components:26628-22-8 sodium azide 0.2%3 Hazards identification· Hazard description:Xn Harmful· Information pertaining to particular dangers for man and environmentR 22 Harmful if swallowed.· Classification systemThe classification was made according to the latest editions of international substances lists, andexpanded upon from company and literature data.· NFPA ratings (scale 0-4)2 0 0Health = 2Fire = 0Reactivity = 0USA(Contd. on page 2)

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 2/6Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/2006Product name: Extraction Reagent(Directigen EZ Flu A & B Test Kit)(Contd. of page 1)4 First aid measures· General informationSymptoms of poisoning may even occur after several hours; therefore provide medical observation for atleast 48 hours after the accident.· After inhalation Supply fresh air; consult doctor in case of complaints.· After skin contact Immediately wash with water and soap and rinse thoroughly.· After eye contact Rinse opened eye for 15 minutes under running water. Then consult a doctor.· After swallowing Immediately call a doctor.· Information for doctor Show this product label or this MSDS.5 Fire fighting measures· Suitable extinguishing agentsCO2, ABC multipurpose dry chemical or water spray. Fight larger fires with water spray or alcoholresistant foam.· Special hazards caused by the material, its products of combustion or resulting gases:Nitrogen oxides (NOx)· Protective equipment: No special measures required.6 Accidental release measures· Person-related safety precautions: Not required.· Measures for environmental protection: Wipe up with damp sponge or mop.· Measures for cleaning/collecting: No special measures required.· Additional information:See Section 7 for information on safe handling.See Section 8 for information on personal protection equipment.See Section 13 for disposal information.7 Handling and storage· Handling· Information for safe handling: No special measures required.· Information about protection against explosions and fires: No special measures required.· Storage· Requirements to be met by storerooms and receptacles: 2 - 30 C· Information about storage in one common storage facility:Do not store together with oxidizing and acidic materials as well as heavy-metal compounds.· Further information about storage conditions: Store in cool, dry conditions in well sealed containers.8 Exposure controls and personal protection· Additional information about design of technical systems: No further data; see item 7.(Contd. on page 3)USA

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 3/6Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/2006Product name: Extraction Reagent(Directigen EZ Flu A & B Test Kit)· Components with limit values that require monitoring at the workplace:26628-22-8 sodium azideREL Short-term value: C 0.3** mg/m³, C 0.1* ppm*as HN3 vapor; **as NaN3TLV Short-term value: C 0.29** mg/m³, C 0.11* ppm*as HN3 vapor; **as NaN3· Additional information: The lists that were valid during the creation were used as basis.· Personal Protective Equipment· General protective and hygienic measuresKeep away from foodstuffs, beverages and feed.Wash hands before breaks and at the end of work.· Breathing equipment:In case of brief exposure, use a chemical fume hood or a NIOSH/MSHA-approved respirator.· Protection of hands:(Contd. of page 2)Chemical resistant gloves (i.e. nitrile, or equivalent).· Eye protection: Safety glasses· Body protection: Protective work clothing (lab coat).9 Physical and chemical properties:· General InformationForm:Color:Odor:LiquidClearCharacteristic· Change in conditionMelting point/Melting range: Not determinedBoiling point/Boiling range: Not determined· Flash point: Not applicable· Danger of explosion: Forms very sensitive explosive metallic compounds.· Density: Not determined· Solubility in / Miscibility withWater:Soluble10Stability and reactivity· Materials to be avoided:Incompatible material: strong oxidizers.Incompatible materials: acidic material and metals· Dangerous products of decomposition: Nitrogen oxides (NOx)(Contd. on page 4)USA

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 4/6Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/2006Product name: Extraction Reagent(Directigen EZ Flu A & B Test Kit)(Contd. of page 3)· Additional information:Sodium azide is present in this product. Contact with acidic solutions and metal compounds over timemay form potentially explosive metal azides. Should any of this material be introduced into a sanitarysewer system, flush with copious amounts of water.11Toxicological information· Acute toxicity:· LD/LC50 values that are relevant for classification:26628-22-8 sodium azideOral LD50 27 mg/kg (rat)· Primary irritant effect:· on the skin: No irritating effect.· on the eye: No irritating effect.· Sensitization: No sensitizing effects known.· Additional toxicological information:HarmfulThe product shows the following dangers according to internally approved calculation methods forpreparations:12Ecological information:· Ecotoxical effects:· Other information:The ecological effects have not been thoroughly investigated, but currently none have been identified.· General notes: Water hazard class 1 (Self-assessment): slightly hazardous for water.13Disposal considerations· Product:· RecommendationSmaller quantities can be disposed of with solid waste.Dispose of material in accordance with federal (40 CFR 261.3), state and local requirements.This product is not considered a RCRA hazardous waste.· Uncleaned packagings:· Recommendation: Disposal must be made according to state and federal regulations.· Recommended cleansing agent: Water, if necessary with cleansing agents.14Transport information· DOT regulations:· Hazard class: -(Contd. on page 5)USA

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 5/6Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/2006Product name: Extraction Reagent(Directigen EZ Flu A & B Test Kit)· Land transport ADR/RID (cross-border)· ADR/RID class: -· Maritime transport IMDG:· IMDG Class: -· Marine pollutant: No· Air transport ICAO-TI and IATA-DGR:· ICAO/IATA Class: -(Contd. of page 4)15Regulations· SARA Section 355 (extremely hazardous substances)26628-22-8 sodium azide· SARA Section 313 (specific toxic chemical listings)26628-22-8 sodium azide· TSCA (Toxic Substances Control Act)26628-22-8 sodium azide· California Proposition 65 - Chemicals known to cause cancerNone of the ingredients is listed.· California Proposition 65 - Chemicals known to cause reproductive toxicity for females:None of the ingredients is listed.· California Proposition 65 - Chemicals known to cause reproductive toxicity for males:None of the ingredients is listed.· California Proposition 65 - Chemicals known to cause developmental toxicity:None of the ingredients is listed.· Carcinogenicity categories· IARC (International Agency for Research on Cancer)None of the ingredients is listed.· NTP (National Toxicology Program)None of the ingredients is listed.· TLV (Threshold Limit Value established by ACGIH)26628-22-8 sodium azide A4· Product related hazard information:The product has been classified and marked in accordance with regulations on hazardous materials.· Hazard symbols:Xn Harmful· Hazard-determining components of labeling:sodium azide· Risk phrases:22 Harmful if swallowed.(Contd. on page 6)USA

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 6/6Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/2006Product name: Extraction Reagent(Directigen EZ Flu A & B Test Kit)· Safety phrases:2 Keep out of the reach of children.13 Keep away from food, drink and animal feedingstuffs.36 Wear suitable protective clothing.46 If swallowed, seek medical advice immediately and show this container or label.(Contd. of page 5)16Other information:To the best of our knowledge, the information contained herein is accurate. However, neitherBecton,Dickinson and Company or any of its subsidiaries assumes any liabilities whatsoever for theaccuracy or completeness of the information contained herein. Final determination of suitability of anymaterial is the sole responsibility of the user. All materials may present unknown hazards and should beused with caution. Although certain hazards are described herein, we can not guarantee that these arethe only hazards that exist.· Department issuing MSDS: Safety and Environment Department· Contact: Technical Service RepresentativeUSA

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 1/6Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/20061 Identification of substance:· Product name: Control Flu A+/B-(Directigen EZ Flu A & B Test Kit)· Catalog number: 256050· Manufacturer/Supplier:BD Diagnostic Systems7 Loveton CircleSparks, MD 21152Telephone: (410) 771-0100 or (800) 638-8663· Information department: Technical Services· Emergency information:In case of a chemical emergency, spill, fire, exposure, or accident contact BD Diagnostic Systems at(410)771-0100 or (800)638-8663, or ChemTrec at (800)424-9300.2 Composition/Data on components:· Chemical characterization:· CAS No. Description:Not applicable· Chemical characterization· Description: Mixture consisting of the following components.· Dangerous components:26628-22-8 sodium azide 0.1%3 Hazards identification· Hazard description:Xn Harmful· Information pertaining to particular dangers for man and environmentR 22 Harmful if swallowed.· Classification systemThe classification was made according to the latest editions of international substances lists, andexpanded upon from company and literature data.· NFPA ratings (scale 0-4)2 0 0Health = 2Fire = 0Reactivity = 04 First aid measures· General informationSymptoms of poisoning may even occur after several hours; therefore provide medical observation for atleast 48 hours after the accident.(Contd. on page 2)USA

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 2/6Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/2006Product name: Control Flu A+/B-(Directigen EZ Flu A & B Test Kit)(Contd. of page 1)· After inhalation Supply fresh air; consult doctor in case of complaints.· After skin contact Immediately wash with water and soap and rinse thoroughly.· After eye contact Rinse opened eye for 15 minutes under running water. Then consult a doctor.· After swallowing Immediately call a doctor.· Information for doctor Show this product label or this MSDS.5 Fire fighting measures· Suitable extinguishing agentsCO2, ABC multipurpose dry chemical or water spray. Fight larger fires with water spray or alcoholresistant foam.· Special hazards caused by the material, its products of combustion or resulting gases:Nitrogen oxides (NOx)· Protective equipment: No special measures required.6 Accidental release measures· Person-related safety precautions: Not required.· Measures for environmental protection: Wipe up with damp sponge or mop.· Measures for cleaning/collecting: No special measures required.· Additional information:See Section 7 for information on safe handling.See Section 8 for information on personal protection equipment.See Section 13 for disposal information.7 Handling and storage· Handling· Information for safe handling: Ensure good ventilation/exhaustion at the workplace.· Information about protection against explosions and fires: No special measures required.· Storage· Requirements to be met by storerooms and receptacles: 2 - 30 C· Information about storage in one common storage facility:Do not store together with oxidizing and acidic materials as well as heavy-metal compounds.· Further information about storage conditions: None.8 Exposure controls and personal protection· Additional information about design of technical systems: No further data; see item 7.· Components with limit values that require monitoring at the workplace:26628-22-8 sodium azideREL Short-term value: C 0.3** mg/m³, C 0.1* ppm*as HN3 vapor; **as NaN3TLV Short-term value: C 0.29** mg/m³, C 0.11* ppm*as HN3 vapor; **as NaN3(Contd. on page 3)USA

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 3/6Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/2006Product name: Control Flu A+/B-(Directigen EZ Flu A & B Test Kit)· Additional information: The lists that were valid during the creation were used as basis.· Personal Protective Equipment· General protective and hygienic measuresKeep away from foodstuffs, beverages and feed.Wash hands before breaks and at the end of work.· Breathing equipment:In case of brief exposure, use a chemical fume hood or a NIOSH/MSHA-approved respirator.· Protection of hands:(Contd. of page 2)Chemical resistant gloves (i.e. nitrile, or equivalent).· Eye protection: Safety glasses· Body protection: Protective work clothing (lab coat).9 Physical and chemical properties:· General InformationForm:Color:Odor:LiquidClearCharacteristic· Change in conditionMelting point/Melting range: Not determinedBoiling point/Boiling range: Not determined· Flash point: Not applicable· Danger of explosion: Forms very sensitive explosive metallic compounds.· Density: Not determined· Solubility in / Miscibility withWater:Soluble10Stability and reactivity· Thermal decomposition / conditions to be avoided:No decomposition if used according to specifications.· Materials to be avoided:Incompatible materials: acidic material and metalsIncompatible material: strong oxidizers.· Dangerous products of decomposition: No dangerous decomposition products known.(Contd. on page 4)USA

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 4/6Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/2006Product name: Control Flu A+/B-(Directigen EZ Flu A & B Test Kit)(Contd. of page 3)· Additional information:Sodium azide is present in this product. Contact with acidic solutions and metal compounds over timemay form potentially explosive metal azides. Should any of this material be introduced into a sanitarysewer system, flush with copious amounts of water.Sodium azide is present in this product. Contact with acidic solutions and metal compounds over timemay form potentially explosive metal azides. Should any of this material be introduced into a sanitarysewer system, flush with copious amounts of water.11Toxicological information· Acute toxicity:· LD/LC50 values that are relevant for classification:26628-22-8 sodium azideOral LD50 27 mg/kg (rat)· Primary irritant effect:· on the skin: No irritating effect.· on the eye: No irritating effect.· Sensitization: No sensitizing effects known.· Additional toxicological information:HarmfulThe product shows the following dangers according to internally approved calculation methods forpreparations:12Ecological information:· Ecotoxical effects:· Other information:The ecological effects have not been thoroughly investigated, but currently none have been identified.· General notes: Water hazard class 1 (Self-assessment): slightly hazardous for water.13Disposal considerations· Product:· RecommendationSmaller quantities can be disposed of with solid waste.Dispose of material in accordance with federal (40 CFR 261.3), state and local requirements.This product is not considered a RCRA hazardous waste.· Uncleaned packagings:· Recommendation: Disposal must be made according to state and federal regulations.· Recommended cleansing agent: Water, if necessary with cleansing agents.USA(Contd. on page 5)

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 5/6Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/2006Product name: Control Flu A+/B-(Directigen EZ Flu A & B Test Kit)(Contd. of page 4)14Transport information· DOT regulations:· Hazard class: -· Land transport ADR/RID (cross-border)· ADR/RID class: -· Maritime transport IMDG:· IMDG Class: -· Marine pollutant: No· Air transport ICAO-TI and IATA-DGR:· ICAO/IATA Class: -15Regulations· SARA Section 355 (extremely hazardous substances)26628-22-8 sodium azide· SARA Section 313 (specific toxic chemical listings)26628-22-8 sodium azide· TSCA (Toxic Substances Control Act)26628-22-8 sodium azide· California Proposition 65 - Chemicals known to cause cancerNone of the ingredients is listed.· California Proposition 65 - Chemicals known to cause reproductive toxicity for females:None of the ingredients is listed.· California Proposition 65 - Chemicals known to cause reproductive toxicity for males:None of the ingredients is listed.· California Proposition 65 - Chemicals known to cause developmental toxicity:None of the ingredients is listed.· Carcinogenicity categories· IARC (International Agency for Research on Cancer)None of the ingredients is listed.· NTP (National Toxicology Program)None of the ingredients is listed.· TLV (Threshold Limit Value established by ACGIH)26628-22-8 sodium azide A4· Product related hazard information:The product has been classified and marked in accordance with regulations on hazardous materials.· Hazard symbols:Xn Harmful· Hazard-determining components of labeling:sodium azide(Contd. on page 6)USA

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 6/6Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/2006Product name: Control Flu A+/B-(Directigen EZ Flu A & B Test Kit)· Risk phrases:22 Harmful if swallowed.· Safety phrases:2 Keep out of the reach of children.13 Keep away from food, drink and animal feedingstuffs.36 Wear suitable protective clothing.46 If swallowed, seek medical advice immediately and show this container or label.(Contd. of page 5)16Other information:To the best of our knowledge, the information contained herein is accurate. However, neitherBecton,Dickinson and Company or any of its subsidiaries assumes any liabilities whatsoever for theaccuracy or completeness of the information contained herein. Final determination of suitability of anymaterial is the sole responsibility of the user. All materials may present unknown hazards and should beused with caution. Although certain hazards are described herein, we can not guarantee that these arethe only hazards that exist.· Department issuing MSDS: Safety and Environment Department· Contact: Technical Service RepresentativeUSA

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 1/6Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/20061 Identification of substance:· Product name: Control Flu A-/B+(Directigen EZ Flu A & B Test Kit)· Catalog number: 256050· Manufacturer/Supplier:BD Diagnostic Systems7 Loveton CircleSparks, MD 21152Telephone: (410) 771-0100 or (800) 638-8663· Information department: Technical Services· Emergency information:In case of a chemical emergency, spill, fire, exposure, or accident contact BD Diagnostic Systems at(410)771-0100 or (800)638-8663, or ChemTrec at (800)424-9300.2 Composition/Data on components:· Chemical characterization:· CAS No. Description:Not applicable· Chemical characterization· Description: Mixture consisting of the following components.· Dangerous components:26628-22-8 sodium azide 0.1%3 Hazards identification· Hazard description:Xn Harmful· Information pertaining to particular dangers for man and environmentR 22 Harmful if swallowed.· Classification systemThe classification was made according to the latest editions of international substances lists, andexpanded upon from company and literature data.· NFPA ratings (scale 0-4)2 0 0Health = 2Fire = 0Reactivity = 04 First aid measures· General informationSymptoms of poisoning may even occur after several hours; therefore provide medical observation for atleast 48 hours after the accident.(Contd. on page 2)USA

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 2/6Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/2006Product name: Control Flu A-/B+(Directigen EZ Flu A & B Test Kit)(Contd. of page 1)· After inhalation Supply fresh air; consult doctor in case of complaints.· After skin contact Immediately wash with water and soap and rinse thoroughly.· After eye contact Rinse opened eye for 15 minutes under running water. Then consult a doctor.· After swallowing Immediately call a doctor.· Information for doctor Show this product label or this MSDS.5 Fire fighting measures· Suitable extinguishing agentsCO2, ABC multipurpose dry chemical or water spray. Fight larger fires with water spray or alcoholresistant foam.· Special hazards caused by the material, its products of combustion or resulting gases:Nitrogen oxides (NOx)· Protective equipment: No special measures required.6 Accidental release measures· Person-related safety precautions: Not required.· Measures for environmental protection: Wipe up with damp sponge or mop.· Measures for cleaning/collecting: No special measures required.· Additional information:See Section 7 for information on safe handling.See Section 8 for information on personal protection equipment.See Section 13 for disposal information.7 Handling and storage· Handling· Information for safe handling: Ensure good ventilation/exhaustion at the workplace.· Information about protection against explosions and fires: No special measures required.· Storage· Requirements to be met by storerooms and receptacles: 2 - 30 C· Information about storage in one common storage facility:Do not store together with oxidizing and acidic materials as well as heavy-metal compounds.· Further information about storage conditions: Store in cool, dry conditions in well sealed containers.8 Exposure controls and personal protection· Additional information about design of technical systems: No further data; see item 7.· Components with limit values that require monitoring at the workplace:26628-22-8 sodium azideREL Short-term value: C 0.3** mg/m³, C 0.1* ppm*as HN3 vapor; **as NaN3TLV Short-term value: C 0.29** mg/m³, C 0.11* ppm*as HN3 vapor; **as NaN3(Contd. on page 3)USA

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 3/6Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/2006Product name: Control Flu A-/B+(Directigen EZ Flu A & B Test Kit)· Additional information: The lists that were valid during the creation were used as basis.· Personal Protective Equipment· General protective and hygienic measuresKeep away from foodstuffs, beverages and feed.Wash hands before breaks and at the end of work.· Breathing equipment:In case of brief exposure, use a chemical fume hood or a NIOSH/MSHA-approved respirator.· Protection of hands:(Contd. of page 2)Chemical resistant gloves (i.e. nitrile, or equivalent).· Eye protection: Safety glasses· Body protection: Protective work clothing (lab coat).9 Physical and chemical properties:· General InformationForm:Color:Odor:LiquidClearCharacteristic· Change in conditionMelting point/Melting range: Not determinedBoiling point/Boiling range: Not determined· Flash point: Not applicable· Danger of explosion: Forms very sensitive explosive metallic compounds.· Density: Not determined· Solubility in / Miscibility withWater:Soluble10Stability and reactivity· Dangerous products of decomposition: Nitrogen oxides (NOx)· Additional information:Sodium azide is present in this product. Contact with acidic solutions and metal compounds over timemay form potentially explosive metal azides. Should any of this material be introduced into a sanitarysewer system, flush with copious amounts of water.USA(Contd. on page 4)

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 4/6Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/2006Product name: Control Flu A-/B+(Directigen EZ Flu A & B Test Kit)(Contd. of page 3)11Toxicological information· Acute toxicity:· LD/LC50 values that are relevant for classification:26628-22-8 sodium azideOral LD50 27 mg/kg (rat)· Primary irritant effect:· on the skin: No irritating effect.· on the eye: No irritating effect.· Sensitization: No sensitizing effects known.· Additional toxicological information:HarmfulThe product shows the following dangers according to internally approved calculation methods forpreparations:12Ecological information:· Ecotoxical effects:· Other information:The ecological effects have not been thoroughly investigated, but currently none have been identified.· General notes: Water hazard class 1 (Self-assessment): slightly hazardous for water.13Disposal considerations· Product:· RecommendationSmaller quantities can be disposed of with solid waste.Dispose of material in accordance with federal (40 CFR 261.3), state and local requirements.This product is not considered a RCRA hazardous waste.· Uncleaned packagings:· Recommendation: Disposal must be made according to state and federal regulations.· Recommended cleansing agent: Water, if necessary with cleansing agents.14Transport information· DOT regulations:· Hazard class: -· Land transport ADR/RID (cross-border)· ADR/RID class: -· Maritime transport IMDG:· IMDG Class: -· Marine pollutant: No(Contd. on page 5)USA

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 5/6Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/2006Product name: Control Flu A-/B+(Directigen EZ Flu A & B Test Kit)· Air transport ICAO-TI and IATA-DGR:· ICAO/IATA Class: -(Contd. of page 4)15Regulations· SARA Section 355 (extremely hazardous substances)26628-22-8 sodium azide· SARA Section 313 (specific toxic chemical listings)26628-22-8 sodium azide· TSCA (Toxic Substances Control Act)26628-22-8 sodium azide· California Proposition 65 - Chemicals known to cause cancerNone of the ingredients is listed.· California Proposition 65 - Chemicals known to cause reproductive toxicity for females:None of the ingredients is listed.· California Proposition 65 - Chemicals known to cause reproductive toxicity for males:None of the ingredients is listed.· California Proposition 65 - Chemicals known to cause developmental toxicity:None of the ingredients is listed.· Carcinogenicity categories· IARC (International Agency for Research on Cancer)None of the ingredients is listed.· NTP (National Toxicology Program)None of the ingredients is listed.· TLV (Threshold Limit Value established by ACGIH)26628-22-8 sodium azide A4· Product related hazard information:The product has been classified and marked in accordance with regulations on hazardous materials.· Hazard symbols:Xn Harmful· Hazard-determining components of labeling:sodium azide· Risk phrases:22 Harmful if swallowed.· Safety phrases:2 Keep out of the reach of children.13 Keep away from food, drink and animal feedingstuffs.36 Wear suitable protective clothing.(Contd. on page 6)USA

DRMaterial Safety Data Sheetacc. to ISO/DIS 11014Page 6/6Printing date 03/23/2006 Reviewed on 03/23/2006Product name: Control Flu A-/B+(Directigen EZ Flu A & B Test Kit)46 If swallowed, seek medical advice immediately and show this container or label.(Contd. of page 5)16Other information:To the best of our knowledge, the information contained herein is accurate. However, neitherBecton,Dickinson and Company or any of its subsidiaries assumes any liabilities whatsoever for theaccuracy or completeness of the information contained herein. Final determination of suitability of anymaterial is the sole responsibility of the user. All materials may present unknown hazards and should beused with caution. Although certain hazards are described herein, we can not guarantee that these arethe only hazards that exist.· Department issuing MSDS: Safety and Environment Department· Contact: Technical Service RepresentativeUSA

Annexe CLignes directrices de l’Organisation mondiale de la santésur le transport d’échantillons de maladie infectieuse

WHO/EMC/97.3Guidelines for the safe transport of infectious substancesand diagnostic specimensWorld Health OrganizationEmerging and other Communicable Diseases,Surveillance and ControlThis document has been downloaded from the WHO/EMC Web site. Theoriginal cover pages and lists of participants are not included. Seehttp://www.who.int/emc for more information.

© World Health OrganizationThis document is not a formal publication of the World Health Organization(WHO), and all rights are reserved by the Organization. The document may,however, be freely reviewed, abstracted, reproduced and translated, in part orin whole, but not for sale nor for use in conjunction with commercial purposes.The views expressed in documents by named authors are solely theresponsibility of those authors. The mention of specific companies or specificmanufacturers' products does no imply that they are endorsed orrecommended by the World Health Organization in preference to others of asimilar nature that are not mentioned.

Table of ContentsIntroduction .................................................................................................... 1Definitions ...................................................................................................... 2Infectious Substances..................................................................................... 2Diagnostic Specimens .................................................................................... 2Packaging, Labelling and Documentation for Transport ........................ 3Basic Triple Packaging System .................................................................... 3Requirements for Infectious Substances .................................................... 5Requirements for Diagnostic Specimens.................................................... 9Requirements for Air Mail ......................................................................... 10Refrigerants ................................................................................................... 10Local Surface Transport .............................................................................. 11Transport Planning ..................................................................................... 12i

WHO/EMC/97.3Safe Transport of Infectious SubstancesIntroductionThese guidelines are applicable to the transport of infectious substances anddiagnostic specimens both nationally and internationally. They provideinformation for identifying and classifying the material to be transported andfor its safe packaging and transport. The guidelines stress the importance ofdeveloping a working relationship between the groups involved – the sender,the carrier and the receiver – in order to provide for the safe and expeditioustransport of this material.Postal, airline and other transport industry personnel hold concerns about thepossibility of their becoming infected as the result of exposure to infectiousmicroorganisms that may escape from broken, leaking or improperly packagedmaterial. The packaging of infectious materials for transport must thereforeaddress these concerns and be designed to minimise the potential for damageduring transport. In addition, the packaging will serve to ensure the integrity ofthe materials and timely processing of specimens.There are no recorded cases of illness attributable to the release of specimensduring transport, although there are reported incidents of damage to the outerpackaging of properly packaged materials. The shipment of unmarked andunidentified infectious materials, improperly packaged, obviously increases theoverall potential for exposure to all persons.The international regulations for the transport of infectious materials by anymode of transport are based upon the Recommendations of the United NationsCommittee of Experts on the Transport of Dangerous Goods (UN). The UniversalPostal Union (UPU) reflects these recommendations in its regulations,particularly for packaging. The International Civil Aviation Organization (ICAO)and the International Air Transport Association (IATA) have also incorporatedthe UN Recommendations in their respective regulations, as have otherinternational transport organizations. The World Health Organization servesin an advisory capacity to these bodies. This document provides practicalguidance to facilitate compliance with current international regulations. If, at afuture date, any modification is made in the section of the UN Recommendationson the Transport of Dangerous Goods dealing with infectious substances anddiagnostic specimens, these guidelines will be updated accordingly.1

WHO/EMC/97.3Safe Transport of Infectious SubstancesDefinitionsFor the purpose of describing transport safety measures the terms “infectioussubstances” and “infectious materials” are considered synonymous. The term“infectious substances” will be used in this document.Infectious substancesAn infectious substance is defined as a substance containing a viablemicroorganism, such as a bacterium, virus, rickettsia, parasite or fungus, that isknown or reasonably believed to cause disease in humans or animals*.With respect to packaging and transport situations, infectious substances include:1. all cultures containing or suspected of containing an agent which may causeinfection;2. human or animal samples that contain such an agent in quantities sufficientto cause infection, should an exposure to them occur due to a transportmishap;3. sample(s) from a patient with a serious disease of unknown cause;4. other specimens not included above and designated as infectious by aqualified person, e.g. a physician, scientist, nurse, etc.* This definition is taken from the current UN Recommendations on theTransport of Dangerous Goods. Prions are not included in this definitionalthough they are considered to be infectious agents.Diagnostic specimensA diagnostic specimen is defined as any human or animal material including,but not limited to, excreta, blood and its components, tissue and tissue fluidscollected for the purposes of diagnosis, but excluding live infected animals.Diagnostic specimens resulting from medical practice and research are considered anegligible threat to the public health.2

WHO/EMC/97.3Safe Transport of Infectious SubstancesDiagnostic specimens obtained from patients with suspected infectious diseasesmay contain limited quantities of an infectious agent. There are very few agentswhich may be the source of an infection as a result of a transport mishap. Ifexposure to the specimen due to transport mishap could result in an infection, thediagnostic specimen must be packaged, labelled and transported as an infectioussubstance. Diagnostic specimens collected during an investigation of an outbreakof a serious disease of unknown cause must be handled as infectious substances.Packaging, Labelling andDocumentation for TransportBecause of the distinction of risks between infectious substances and diagnosticspecimens, there are variations to the packaging, labelling and documentationrequirements. The packaging requirements are determined by the UN and arecontained in ICAO and IATA regulations in the form of Packaging Instructions(PI) 602 and 650. The requirements are subject to change and upgrade by theseorganisations. The current packaging requirements are described below. UNapprovedpackaging systems are available commercially.Basic triple packaging systemThe system consists of three layers as follows.1. Primary receptacle. A labelled primary watertight, leak-proof receptaclecontaining the specimen. The receptacle is wrapped in enough absorbentmaterial to absorb all fluid in case of breakage.2. Secondary receptacle. A second durable, watertight, leak-proof receptacleto enclose and protect the primary receptacle(s). Several wrapped primaryreceptacles may be placed in one secondary receptacle. Sufficient additionalabsorbent material must be used to cushion multiple primary receptacles.3. Outer shipping package. The secondary receptacle is placed in an outershipping package which protects it and its contents from outside influencessuch as physical damage and water while in transit.Specimen data forms, letters and other types of information that identify ordescribe the specimen and also identify the shipper and receiver should be tapedto the outside of the secondary receptacle.3

WHO/EMC/97.3Safe Transport of Infectious SubstancesFigure 1Triple packaging system4

WHO/EMC/97.3Safe Transport of Infectious SubstancesRequirements for infectious substancesThe basic triple packaging system is used with the following additionalspecifications and labelling and documentation requirements.Infectious substances may only be transported in packaging which meets theUN class 6.2 specifications and packaging instruction (PI)602. This ensures thatstrict performance tests which include a nine metre drop test and a puncturetest have been met. The outer shipping package must bear the UN PackagingSpecification Marking (Figure 2). UN-approved packaging supplier listings maybe obtained from carriers or from the appropriate national ministry ordepartment, e.g. the Ministry of Transport, etc.Figure 2Packaging Specification Markingexample: 4H”/Class 6.2/94GB/2470The packaging marking consists of:( the United Nations packaging symbol( type of packing( the text “Class 6.2”( the last two digits of the year of manufacture of thepackaging( State authority( manufacturer’s code.5

WHO/EMC/97.3Safe Transport of Infectious SubstancesHand carriage of infectious substances is strictly prohibited by international aircarriers, as is the use of diplomatic pouches for that purpose.The maximum net quantity of infectious substances which can be contained inan outer shipping package is 50 mL or 50g if transport is by passenger aircraft.Otherwise, the limit per package is 4L-4Kg for transport by cargo aircraft orother carriers. Primary receptacles exceeding 50 mL in combination packingmust be oriented so the closures are upward, and labels (arrows) indicating the“UP” direction must be placed on two opposite sides of the package. Thepassenger aircraft quantify limits do not apply to blood or blood products forwhich there is no reason to believe they contain infectious substances, when inreceptacles of not more than 500 mL each and with a total volume of not morethan 4L in the outer package.Figure 3Hazard labels for dangerous goodsFor all dangerous goods to be shipped by airfreight, specific hazard label(s)must be affixed to the outside of each package. The following hazards labels areof importance for culture collections or other institutions shipping biologicalsubstances.Hazard labels for infectious substances and forgenetically modified microorganisms which meetthe IATA definition of an infectious substance:Name:Minimum dimensions:For small packages:Infectious Substance100 x 100 mm50 x 50 mm (black andwhite)6

WHO/EMC/97.3Safe Transport of Infectious SubstancesHazard label for noninfectious genetically modifiedmicroorganisms and for carbon dioxide, solid (dry ice):Name:Minimum dimensions:For small packages:Miscellaneous100 x 100 mm50 x 50 mm (black andwhite)Hazard label for liquid nitrogen:Name:Minimum dimensions:For small packages:Non-flammable gas100 x 100 mm50 x 50 mm(green and white)Packages containing liquid cultures of infectious organisms and geneticallymodified microorganisms must be packed so that the closure(s) of the innerpackaging(s) are upward; the upright position of the packaging must be indicatedby two “Package Orientation” labels (black or red arrows). The labels must beaffixed on opposite sides of the packaging. A label “THIS SIDE UP” or “THISEND UP” may also be displayed on the top cover of the package:Name:Minimum dimensions:Package Orientation74 x 105 mm(black or red and white)For small packages of infectious substancesdimensions may be halved.In case shipments include only freeze-dried cultures the quantity should begiven in g or mg. not in ml. The “PACKAGE ORIENTATION” labels should beaffixed to avoid any delay.7

WHO/EMC/97.3Safe Transport of Infectious SubstancesLabelling of the outer package for shipment of infectious substances must includethe elements listed hereafter.1. The International Infectious Substance Label.2. An address label with the following information:• the receiver’s (consignee) name, address and telephone number• the shipper’s (consignor) name, address and telephone number• the UN shipping name (Infectious Substances Affecting Humans orAnimals as the case may be) followed by the scientific name of thesubstance• the UN Number (Humans – UN2814, Animals UN2900)• temperature storage requirements (optional).If the outer package is further packed in an overpack (with dry ice for instance)both outerpack and overpack must carry the above information, and theoverpack must have a label stating “INNER PACKAGES COMPLY WITHPRESCRIBED SPECIFICATIONS”.3. Required shipping documents – these are obtained from the carrier and arefixed to the outer package:• the shipper’s Declaration of Dangerous Goods (Figure 4 is one example)• a packing list/proforma invoice which includes the receiver’s address,the number of packages, detail of contents, weight, value (note: state thatthere is “no commercial value” as the items are supplied free of charge)• An airwaybill if shipping by air.4. An import and/or export permit and/or declaration if required.5. If the outer package contains primary receptacles exceeding 50 mL incombination at least two “Orientation Labels” (arrows) must be placed onopposite sides of the package showing correct orientation of the package.8

WHO/EMC/97.3Safe Transport of Infectious SubstancesRequirements for diagnostic specimensThe basic triple packaging system is used with the following specifications andlabelling requirements.Diagnostic specimens may be transported in packaging which meets thepackaging instruction (PI)650. The UN specification marking is not required.Primary receptacles may contain up to 500 mL each, the total volume in theouter package not to exceed 4L.Labelling of the outer package for the shipment of diagnostic specimens mustinclude the following.1. An address label with the following information:• the receiver’s (consignee) name, address and telephone number• the shipper’s (consignor) name, address and telephone number• the statement “Diagnostic Specimen, Not Restricted, Packed inCompliance with Packing Instruction 650”.2. Required shipping documents – these are obtained from the carrier and arefixed to the outer package:• a packing list/proforma invoice which includes the receiver’s address,the number of packages, detail of contents, weight, value (note: state thatthere is “no commercial value” as the items are supplied free of charge)• an airwaybill if shipping by air.3. An import and/or export permit and/or declaration (if required).Note: The infectious substance label and the shipper’s declaration of dangerousgoods are not required for diagnostic specimens.9

WHO/EMC/97.3Safe Transport of Infectious SubstancesRequirements for Air MailInfectious substances and diagnostic specimens may be shipped by registeredair mail. The basic triple packaging system is used with the same requirementsas for other means of conveyance.The address label must display the word “LETTRE” and the green CustomsDeclaration Label for Postal Mail is required for international mailing. Diagnosticspecimens are to be identified with the violet UPU “PERISHABLE BIOLOGICALSUBSTANCES” label. Infectious substances are to be identified with theInternational Infectious Substance label (see Figure 3). Infectious substances mustalso be accompanied with a shipper’s Declaration of Dangerous Goods form(see Figure 4 at the end of the document).Because of local/international restrictions, prior contact should be made withthe local post office to ascertain whether the packaged material will be acceptedby the postal service.RefrigerantsIce or dry ice when used in a shipment must be placed outside the secondaryreceptacle. If wet ice is used it should be in a leak-proof container and the outerpackage must also be leak-proof.The secondary receptacle must be secured within the outer package to preventdamage after the refrigerant has melted or dissipated. Dry ice must not be placedinside the primary or secondary receptacle because of the risk of explosions. Anoverpack (a specially designed insulated outer package) may be used to containdry ice. The outer package must permit the release of carbon dioxide gas if dryice is used. UN Packing Instruction 904 must be observed.If dry ice is used for infections substances, the details must appear on theshipper’s Declaration for Dangerous Goods. In particular, the outer most packingmust carry the “MISCELLANEOUS” hazard label for dry ice (see Figure 3).If liquid nitrogen is used as a refrigerant, special arrangements must be madein advance with the carrier. Primary receptacles must be capable of withstandingextremely low temperatures and appropriate packaging requirement of thecarrier must be observed. In particular, the outer most packing must carry the“NON-FLAMMABLE GAS” label for liquid nitrogen (see Figure 3).10

WHO/EMC/97.3Safe Transport of Infectious SubstancesLocal Surface TransportExamples include transport of specimens from a doctor’s office/surgery to alaboratory, from a hospital to a diagnostic laboratory or from one laboratory toanother. Such courier services may be operated by a hospital, a laboratory, ahealth service or other approved agency or organisation.The principle of safe transport by this means is the same as for air or internationaltransport – the material should not have any possibility of escaping from thepackage under normal conditions of transport.The following practices should be observed:1. specimen containers should be watertight and leak-proof;2. if the specimen container is a tube, it must be tightly capped and placed in arack to maintain it in an upright position;3. specimen containers and racks should be placed in robust, leak-proof plasticor metal transport boxes with secure, tight fitting covers;4. the transport box should be secured in the transport vehicle;5. each transport box should be labelled appropriately consistent with itscontents;6. specimen data forms and identification data should accompany eachtransport box;7. a spill kit containing absorbent material, a chlorine disinfectant, a leak-proofwaste disposal container and heavy duty reusable gloves should be kept inthe transport vehicle.Note: The practices 1 – 7 described above are not intended to supersede localor national requirements.11

WHO/EMC/97.3Safe Transport of Infectious SubstancesTransport PlanningIt is the responsibility of the sender to ensure the correct designation, packaging,labelling and documentation of all infectious substances and diagnosticspecimens.The efficient transport and transfer of infectious materials requires goodcoordination between the sender, the carrier and the receiver (receivinglaboratory), to ensure that the material is transported safely and arrives on timeand in good condition. Such coordination depends upon well-establishedcommunication and a partner relationship between the three parties.All have specific responsibilities to carry out in the transport effort.The sender1. makes advance arrangements with the receiver of the specimens includinginvestigating the need for an import permit;2. makes advance arrangements with the carrier to ensure:• that the shipment will be accepted for appropriate transport• that the shipment (direct transport if possible) is undertaken by the mostdirect routing, avoiding arrival at weekends;3. prepares necessary documentation including permits, dispatch and shippingdocuments;4. notifies the receiver of transportation arrangements once these have beenmade, well in advance of expected arrival time.The carrier1. provides the sender with the necessary shipping documents and instructionsfor their completion;12

WHO/EMC/97.3Safe Transport of Infectious Substances2. provides advice to the sender about correct packaging;3. assists the sender in arranging the most direct routing and then confirms therouting;4. maintains and archives the documentation for shipment and transport;5. monitors required holding conditions of the shipment while in transit;6. notifies the sender of any anticipated (or actual) delays in transit.The receiver1. obtains the necessary authorisation(s) from national authorities for theimportation of the material;2. provides the sender with the required import permit(s), letter(s) ofauthorisation, or other document(s) required by the national authorities;3. arranges for the most timely and efficient collection on arrival;4. immediately acknowledges receipt to the sender.Shipments should not be dispatched until:• advance arrangements have been made between the sender, carrier andreceiver• the receiver has confirmed with the national authorities that the materialmay be legally imported• the receiver has confirmed that there will be no delay incurred in thedelivery of the package to its destination.Detailed information on response and emergency safety measures in transportassociatedaccidents can be found in Laboratory Biosafety Manual, Second edition(1993). Geneva: World Health Organization: (pp. 52 – 54).13

WHO/EMC/97.3Safe Transport of Infectious SubstancesFigure 4A. Standard shipment of infectious substances14

WHO/EMC/97.3Safe Transport of Infectious SubstancesFigure 4B. Shipment of infectious substances using dry ice15

Annexe DCertificat d’achèvementGabarit à la page suivante

USAIDProgramme de la grippeaviaireCe certificat d’achèvementest remis par la présente à[INSCRIRE LE NOM]pour certifier qu’il/elle a suiviavec succès ce programme de formationAtelier de formation sur la préventionde la grippe aviaire mené par USAIDRemis le : [INSCRIRE LA DATE]________________________________________________[Signature, poste, date]Version préliminaire du 13 décembre 2006

Annexe EFormulaires d’évaluationÉvaluation de la formation parles participants – PRÉFORMATIONÉvaluation de la formation parles participants – IMMÉDIATEMENTAPRÈS LA FORMATIONÉvaluation de la formationpar les participants – APRÈS LAFORMATION (2-6 MOIS)Évaluation de la formationpar les formateurs – APRÈS LAFORMATIONTraining Evaluation for Trainers– POST-TRAINING

Évaluation de la formation (par les participants)PreformationType de formation (cochez tout ce qui s’applique):Trousse EPITrousse de décontaminationTrousse d’échantillon pour laboDate de la formation: _______Lieu: __________________Numéro pigé au hasard (dans un bol): _____Formation et expérience antérieures1 Profession _________________________________2 Avez-vous déjà utilisé l’EPI?___Non___Oui => Dans quel(s) contexte(s)? ________________________________________________________________________________________________Sur une échelle de 1 à 5, dans quelle mesure êtes-vous confiant d’utiliser l’EPI?Pas du tout confiant 1 2 3 4 5 Très confiant3 Avez-vous déjà enseigné à d’autres comment utiliser l’EPI?___Non___Oui => Combien de séances de formation avez-vous menées? _____À quand remonte la dernière fois où vous avez mené une séance deformation? _____

4 Avez-vous déjà utilisé de l’équipement de décontamination?___Non___Oui => Dans quel(s) contexte(s)? _______________________________________________________________________________________________Sur une échelle de 1 à 5, dans quelle mesure êtes-vous confiant d’utiliserl’équipement de décontamination?Pas du tout confiant 1 2 3 4 5 Très confiant5 Avez-vous déjà enseigné à d’autres comment utiliserl’équipement de décontamination?___Non___Oui => Combien de séances de formation avez-vous menées? _____À quand remonte la dernière fois où vous avez mené une séance deformation? _____6 Avez-vous déjà pris des échantillons de laboratoire?___Non___Oui => Dans quel(s) contexte(s)? ________________________________________Sur une échelle de 1 à 5, dans quelle mesure êtes-vous confiant de prélever deséchantillons?Pas du tout confiant 1 2 3 4 5 Très confiant7 Avez-vous déjà enseigné à d’autres comment prélever des échantillons?___Non___Oui => Combien de séances de formation avez-vous menées? _____

À quand remonte la dernière fois où vous avez mené une séance deformation? _____8 Langue – compétenceComprendre l’anglais parléDifficile 1 2 3 4 5 Sans problèmeS’exprimer en anglaisDifficile 1 2 3 4 5 Sans problèmeLire l’anglaisDifficile 1 2 3 4 5 Sans problèmeAttentes1 Quelles sont vos attentes par rapport à cette formation?_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________2 Comment appliquerez-vous ce que vous aurez appris durant cette formation?_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________3 Y a-t-il des sujets que vous souhaiteriez voir aborder durant cette formation ?_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Évaluation de la formation (par les participants)Immédiatement aprés la formationType de formation (cochez tout ce qui s’applique):Trousse EPITrousse de décontaminationTrousse d’échantillon pour laboDate de la formation: _______Lieu: __________________Numéro choisi: ____1 Cette formation a-t-elle répondu à vos attentes?Pas du tout 1 2 3 4 5 EntièrementCommentaires (qu’est-ce qui était particulièrement bon ou mauvais?): ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________2 Évaluez la qualité de la formation :Inacceptable 1 2 3 4 5 ExcellentCommentaires (qu’est-ce qui était particulièrement bon ou mauvais?): ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________3 Évaluez les exercices et le travail en groupe:Inacceptable 1 2 3 4 5 ExcellentCommentaires (qu’est-ce qui était particulièrement bon ou mauvais?): ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

4 Quelles activités avez-vous préférées?______________________________________________________________________________________________________________________________________________________5 La formation était ____ donnée en anglais sans interprète.____ donnée dans une autre langue.Y avait-il un(e) interprète ? ____ OuiLangue : __________________ Non6 Avez-vous compris tout ce que le formateur disait?___ Oui____ NonCommentaires: ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________7 Sur une échelle de 1 à 5, dans quelle mesure êtes-vous confiant d’utiliser correctementl’EPI?Pas du tout confiant 1 2 3 4 5 Très confiant8 Sur une échelle de 1 à 5, dans quelle mesure êtes-vous confiant d’enseigner auxautres comment utiliser correctement l’EPI?Pas du tout confiant 1 2 3 4 5 Très confiant9 Sur une échelle de 1 à 5, dans quelle mesure êtes-vous confiant d’utiliser correctementl’équipement de décontamination?Pas du tout confiant 1 2 3 4 5 Très confiant10 Sur une échelle de 1 à 5, dans quelle mesure êtes-vous confiant d’enseigner auxautres comment utiliser correctement l’équipement de décontamination?Pas du tout confiant 1 2 3 4 5 Très confiant

11 Sur une échelle de 1 à 5, dans quelle mesure êtes-vous confiant de prélever deséchantillons?Pas du tout confiant 1 2 3 4 5 Très confiant12 Sur une échelle de 1 à 5, dans quelle mesure êtes-vous confiant d’enseigner auxautres comment prélever des échantillons?Pas du tout confiant 1 2 3 4 5 Très confiantSi vous avez encerclé 1, 2 ou 3 pour quelconque question, veuillez expliquer pourquoi:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________13 Comment pourrions-nous améliorer le contenu et/ou la façon de mener cetteformation?__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________14 La documentation remise durant cette formation était-elle:a Pertinente à votre travail? Oui Nonb Éducative? Oui Nonc Facile à comprendre? Oui Non15 Utiliserez-vous cette documentation durant l’exécution de vos tâches? ____Oui ____ NonDans l’affirmative, comment prévoyez-vous utiliser cette documentation? Si non,pourquoi pas?________________________________________________________________________________________________________________________________________________

16 Autres commentaires:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________MERCI!

Évaluation de la formation (par les participants)Aprés la formation ( 2 à 6 mois)Type de formation (cochez tout ce qui s’applique): ___ Trousse EPITrousse de décontaminationTrousse d’échantillon pour laboDate de la formation: _______Lieu: __________________Questionnaire rempli le (date): ___________Depuis la formation, avez-vous eu l’occasion de:____ Utiliser quelconque trousse? (Veuillez remplir les sections Confiance et Utilisation des trousses.)____ Enseigné à quelqu’un comment utiliser l’une de ces trousses? (Veuillez remplir les sectionsConfiance et Formation.)Niveau de confiance1 Sur une échelle de 1 à 5, dans quelle mesure êtes-vous confiant d’utiliser correctement l’EPI?Pas du tout confiant 1 2 3 4 5 Très confiant2 Sur une échelle de 1 à 5, dans quelle mesure êtes-vous confiant d’enseigner aux autres commentutiliser correctement l’EPI?Pas du tout confiant 1 2 3 4 5 Très confiant3 Sur une échelle de 1 à 5, dans quelle mesure êtes-vous confiant d’utiliser correctement l’équipementde décontamination?Pas du tout confiant 1 2 3 4 5 Très confiant4 Sur une échelle de 1 à 5, dans quelle mesure êtes-vous confiant d’enseigner aux autres commentutiliser correctement l’équipement de décontamination?Pas du tout confiant 1 2 3 4 5 Très confiant

5 Sur une échelle de 1 à 5, dans quelle mesure êtes-vous confiant de prélever deséchantillons?Pas du tout confiant 1 2 3 4 5 Très confiant6 Sur une échelle de 1 à 5, dans quelle mesure êtes-vous confiant d’enseigner auxautres comment prélever des échantillons ?Pas du tout confiant 1 2 3 4 5 Très confiantUtilisation des trousses (si vous n’avez utilisé aucune de ces trousses, passez à la sectionFormation):1 Depuis votre formation, combien de trousses avez-vous utilisées?___ Trousse EPI => Combien? ____________ Trousse de décontamination => Combien? _________Trousse d’échantillon de labo => Combien? _________2 Dans quel(s) contexte(s) avez-vous utilisé ces trousses?____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________3 Avez-vous éprouvé des difficultés à les utiliser? ____ Oui ____ NonDans l’affirmative, veuillez préciser. ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________4. Avez-vous utilisé les brochures que vous avez reçues lors de la formation?___ Sur l’EPI ? => Lesquelles? ___________________________________________________________________________________________________________________

___ Sur la décontamination? => Lesquelles?_________________________________________________________________________________________________________________ Sur la prise d’échantillons? => Lesquelles?______________________________________________________________________________________________________________4 Suite à votre expérience, quelles modifications (s’il y a lieu) recommanderiez-vouspour améliorer la formation?__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________Formation1 Depuis votre formation, pour quelle(s) trousse(s) avez-vous mené une formation?___ Trousse EPI => À combien de personnes avez-vous enseigné? ____________ Trousse de décontamination => À combien de personnes avez-vous enseigné?____________ Trousse d’échantillon de labo => À combien de personnes avez-vous enseigné?_________2 Veuillez énumérer les séances de formation que vous avez menées:Date Lieu Type de formation Nombre de participants Type de participant

3 Durant ces séances, avez-vous utilisé le Guide de formation que l’on vous a remislors de votre formation?___ Oui ____ Non => pourquoi pas? ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________Si non, quelle documentation avez-vous utilisée? _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________4 Le guide était:a Tout à inutile 1 2 3 4 5 Très utileb Confus 1 2 3 4 5 Facile à comprendreCommentaires: ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________5. Durant vos séances de formation, quels exercices étaient efficaces? Pourquoi?____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________6. Durant vos séances de formation, quels exercices étaient inefficaces? Pourquoi?____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________7. Veuillez décrire les modifications ou les améliorations que vous apporteriez auxexercices.________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

8. Durant vos séances de formation, avez-vous utilisé les brochures que vous avezvousreçues lors de votre formation?___Non ___Oui => Lesquelles avez-vous utilisées? _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________9. Veuillez décrire les modifications ou les améliorations que vous apporteriez auxbrochures (pouvez-vous nous en faire parvenir une copie?) __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________10. Suite à votre expérience, quelles modifications (s’il y a lieu) apporteriez-vous à laformation que vous avez suivie? __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________MERCI!

Évaluation de la formation (par les formateurs)Aprés la formationType de formation (cochez tout ce qui s’applique):Trousse EPITrousse de décontaminationTrousse d’échantillon pour laboDate de la formation: _______Lieu: __________________Formation et expérience1 Profession __________________________2 Avez-vous déjà participé à ce type de formation (sur l’utilisation des accessoires)?___ Non ___ Oui => où et quand? _________________________________________________________________________________________________________________________________________________Formation1 Nombre de participants: _______2 Type de participants: ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________3 Le nombre de participants invités était-il adéquat? La présence d’autres groupes était-ellenécessaire?____________________________________________________________________________________________________________________________________4. La formation était ____ donnée en anglais.____ donnée dans une autre langue.Langue: ______________

Y avait-il un(e) interprète? ____ Oui ____ NonÉvaluez la compétence de l’interprète:Médiocre 1 2 3 4 5 ExcellentCommentaire: ______________________________________________________________________________________________________________________________5 Le guide était:a Tout à inutile 1 2 3 4 5 Très utileb Confus 1 2 3 4 5 Facile à comprendreCommentaires: ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________6 Durant vos séances de formation, quels exercices étaient efficaces? Pourquoi?____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________7 Durant vos séances de formation, quels exercices étaient inefficaces? Pourquoi?____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________8 Veuillez décrire les modifications ou les améliorations que vous apporteriez auxexercices.________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

9 Durant vos séances de formation, avez-vous utilisé les brochures?___Non ___Oui => Lesquelles avez-vous utilisées? _____________________________________________________________________________________________10 Veuillez décrire les modifications ou les améliorations que vous apporteriez auxbrochures (pouvez-vous nous en faire parvenir une copie?) __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________11 Suite à votre expérience, quelles modifications suggérez-vous pour améliorer laformation?________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________12 Élimineriez-vous quelconque aspect du guide de formation?________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________13 Avez-vous d’autres commentaires?________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

14 Y a-t-il d’autres sujets qui devraient être abordés durant cette formation?________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________15 Avez-vous d’autres suggestions?________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________MERCI!

Annexe FFormulaire d’inscriptionSample Registration FormFirst Name, Surname Title Organization Address Work Tel. Mobile Tel. Fax No. Email Address

Prepared by the Academy for Educational Development (AED) and DevelopmentAlternatives, Inc. (DAI) for the USAID Avian Influenza Program.