fosfatasi alcalina (alp)

FOSFATASI ALCALINA (ALP)
DETERMINAZIONE CINETICA SEC. LE RACCOMANDAZIONI S.C.E. SU SIERO O PLASMA
For in vitro diagnostic use only
Kit: 20 x 3 mL Cod. 90009830
5 x 20 mL Cod. 90009840
SIGNIFICATO DIAGNOSTICO
La fosfatasi alcalina, presente in quasi tutti i tessuti dell’organismo, è
situata nelle membrane cellulari in particolare a livello del fegato,
placenta, tubuli renali, osteoblasti, epitelio intestinale. Concentrazioni
elevate di ALP nel siero si associano a malattie ossee in cui si
osserva un aumento dell’attività osteoblastica (morbo di Paget,
iperparatiroidismo primario e secondario, tumori ossei, rachitismo e
fratture), ma anche in pazienti con alterazioni epatobiliari (ittero
ostruttivo, epatite, cancro del fegato, epatotossicità causata da
farmaci). Una certa variabilità dei livelli di ALP è legata
all’accrescimento delle ossa e alla gravidanza.
PRINCIPIO
La fosfatasi alcalina (ALP) catalizza l’idrolisi, in ambiente alcalino, del
p-nitrofenilfosfato in p-nitrofenolo e fosfato. Considerando
l’incremento di assorbanza nell’ unità di tempo a 405 nm, è possibile
calcolare l’attività della ALP nel campione.
REAGENTI
Composizione del kit: Cod. 90009830 Cod. 90009840
*REAGENTE 1 (liquido) 1 x 65 mL 2 x 50 mL
DEA buffer 1 mol/L
Magnesio cloruro 0.5 mmol/L
*REAGENTE 2 (polvere) 20 x 3 mL 5 x 20 mL
p-nitrofenilfosfato 0.01 mol/L
STABILITA’: se conservati a 2-8°C, i reagenti sono stabili fino alla
data di scadenza mostrata sulla confezione, se non contaminati
durante l’impiego.
REAGENTI AUSILIARI PER LA CALIBRAZIONE E PER
IL CONTROLLO QUALITA’ (Non forniti con il kit)
Si suggerisce caldamente di verificare l’esattezza del fattore utilizzato
mediante Calibrazione preventiva. Va assolutamente utilizzato il
fattore che viene originato da queste prove in sostituzione del fattore
teorico inserito in metodica.
Per garantire l’ adeguata Calibrazione, si suggerisce di usare il
seguente kit:
- CALIBRATORE Cod. 90010000
Per garantire l’adeguata prestazione del test, si suggeriscono i
seguenti kit:
- SERUM N Cod. 90009980
- SERUM P Cod. 90009990
PREPARAZIONE DEL REAGENTE DI LAVORO
*KIT 20 x 3 mL (Cod. 90009830)
Aggiungere ad un vial di *Reagente 2 3 mL di *Reagente 1.
Miscelare gentilmente sino a dissoluzione.
*KIT 5 x 20 mL (Cod. 90009840)
Aggiungere ad un vial di *Reagente 2 20 mL di *Reagente 1.
Miscelare gentilmente sino a dissoluzione.
Portare i reagenti alla temperatura di lavoro prima dell’uso.
Chiudere immediatamente dopo l’impiego.
I prodotti vanno manipolati in modo adeguato, tale da evitare
ogni contaminazione. L’uso non competente ci solleverà da
ogni responsabilità.
STABILITA’: 5 gg a 2-8°C ed al buio.
CAMPIONI
• Siero, plasma non emolizzato.
Usare eparina come anticoagulante.
STABILITA’: il campione può essere conservato per circa
1 settimana a 2-8°C.
PROCEDURA ANALITICA
• Wavelength: 405 nm (400-420 nm)
• Cammino ottico: 1 cm
• Lettura: contro aria o acqua distillata
• Temperatura: 37°C
• Metodo: cinetico
• Reazione: 3 minuti
• Linearità: fino a 825 U/L a 37°C
• Campione/Reagente: 1/60
Portare i reagenti alla temperatura di lavoro prima dell’uso.
Pipettare in una provetta o in una cuvetta etichettata:
Reag. di lavoro 3000 μl
Campione 50 μl
Mescolare gentilmente ed incubare a 37°C per 1 minuto.
Leggere l’assorbanza iniziale contro aria o acqua dist. e ripetere la
lettura dopo 1, 2 e 3 minuti esatti.
Calcolare la media delle letture di assorbanza/minuto (ΔA/min).
CALCOLO
Sostituire il valore di ΔA/min calcolato nella seguente formula:
ΔA/min x 3300 = attività ALP in U/L a 405 nm
VALORI DI RIFERIMENTO
ETA’
UOMINI (U/L) DONNE (U/L)
neonati
150-600
150-600
0.5-9
250-950
250-950
10-11
250-730
250-950
12-13
275-875
200-730
14-15
170-970
170-460
16-18
125-720
75-270
> 18 50-250 50-250
Si raccomanda che ogni laboratorio stabilisca i propri valori normali
di riferimento per l’area geografica in cui si trova.
CARATTERISTICHE METROLOGICHE
Le caratteristiche del Reagente ALP sono determinate utilizzando
uno spettrofotometro o analizzatori tipici di laboratorio. I dati pur
rappresentando le caratteristiche del prodotto, potrebbero risultare
differenti da questi nei singoli laboratori e/o per differenti
analizzatori
Linearità: La ALP viene determinata tra 6,6 - 825 U/L.
Per un’ attività ≥ 825 U/L, diluire il campione 1:10
con fisiologica, ripetere la determinazione e
moltiplicare il risultato x 10.
Limite di rilevazione: La minima quantità determinabile è 6,6 U/L.
Precisione nella serie (Within-run Precision):
Media (U/L) ± 2s CV %
Umano 1 188,2 ± 4,05 1,08
Umano 2 445,27 ± 7,80 0,88
Precisione tra le serie (Run-to-run (Day-to-day) Precision):
Media (U/L) ± 2s CV %
Umano 1 188,83 ± 4,96 1,19
Umano 2 446,08 ± 8,22 0,92
Accuratezza: con materiali di controlli commerciali
Attesa (U/L) Trovata (U/L)
Normale 171 (141 – 201) 169 – 170 – 178
Patologico 493 (403 – 583) 490 – 497 – 506

Interferenze: vedi Bibliografia punto 2.
Correlazione: Un gruppo di 20 sieri è stato testato con questa
procedura e usando un reagente
commercialmente disponibile.
Il confronto ha dato i seguenti risultati:
Regressione lineare Y = 0,9985X – 0,6131
r = 0,9980 n = 20
NOTE
1. Una variazione proporzionale dei volumi di reazione non modifica il
risultato.
2. Si suggerisce di NON miscelare tra loro Reagenti provenienti da
diversi Lotti di Produzione.
3. Per un’ attività ≥ 825 U/L, ripetere la determinazione sul campione
diluito 1:10 con sol. fisiologica e moltiplicare il risultato x10.
4. Tensioattivi presenti sui contenitori in vetro possono inibire l’attività
enzimatica.
5. Con la strumentazione automatica è possibile lavorare con
Reag. di lavoro 1000 μl
Campione 10 μl
impiegando un fattore = 5430 (anzichè 3300).
6. ATTENZIONE!
Le applicazioni su Analizzatori / Strumenti di routine possono essere
totalmente diverse da quanto sviluppato come determinazione
manuale, ma anche tra loro, per i diversi Analizzatori.
7. Elevata attenzione deve essere data alle sostanze interferenti:
alcuni farmaci ed altre sostanze potrebbero influenzare i livelli od il
dosaggio della ALP (vedi Bibliografia 2).
8. Il Reagente deve essere impiegato SOLO per l’uso indicato, da
personale esperto ed addestrato, nelle dovute condizioni di
Laboratorio.
9. La diagnosi clinica non può essere fatta correttamente usando il
risultato di un solo test, ma deve essere fatta integrando criticamente
diversi tests di Laboratorio con differenti dati clinici.
BIBLIOGRAFIA
1. Textbook of Clinical Chemistry, Ed. by N.W. Tietz,
W.B. Saunders Co., Philadelphia (1999).
2. Young D.S., Effect of drugs on Clinical Lab. Test, 5th Ed. AACC
Press (2000).
3. Talken H., Schubert G.E., Klin. Wochenschr. 43, 174 (1965).
Ver. 2007/10