CK – NAC

CK – NAC
DETERMINAZIONE UV CINETICA SEC. LE RACCOMANDAZIONI DGKC / IFCC / S.C.E. SU SIERO E PLASMA
For in vitro diagnostic use only
Kit: 20 x 3 mL Cod. 90009940
5 x 20 mL
Cod. 90009950
SIGNIFICATO DIAGNOSTICO
La creatin- chinasi svolge un ruolo fondamentale nel metabolismo
muscolare fornendo ATP durante la contrazione. La concentrazione
di CK nel siero è variabile a seconda del sesso, dell’età, massa
muscolare, attività fisica e razza.
Elevati valori di CK si riscontrano in malattie legate al muscolo
scheletrico (distrofia muscolare, ipertermia maligna, trauma,
polimiosite), al SNC (malattia cerebrovascolare acuta, ischemia
cerebrale) e alla tiroide (ipotiroidismo).
PRINCIPIO
La creatinfosfochinasi (CK, CPK, ATP: creatina fosfotransferasi,
E.C.2.7. 3.2) catalizza la reazione reversibile di idrolisi della creatina
fosfato in creatina ed ATP. L' ATP, in presenza di esochinasi (HK)
e D-glucosio, diventa ADP e D-glucosio-6-fosfato, che a sua volta
riduce l' NADP in NADPH e D-gluconato-6-fosfato in presenza di
glucosio-6P deidrogenasi (G6PDH). L'incremento di assorbanza a
340 nm nell'unità di tempo, dovuto alla formazione del NADPH,
permette di calcolare l'attività della CK totale nel campione.
La N-acetil-cisteina nel reagente permette una attivazione ottimale
della CK.
REAGENTI
Composizione del kit: Cod. 90009940 Cod. 90009950
*REAGENTE 1 (liquido) 1 x 65 mL 2 x 50 mL
*REAGENTE 2 (liofilo) 20 x 3 mL 5 x 18 mL
*REAGENTE 3 (polvere) 3 x 4 mL
Imidazolo acetato buffer 0.1 mol/L
EDTA 2 mmol/L Magnesio acetato 10 mmol/L
AMP 5 mmol/L ADP 2 mmol/L
NADP 2 mmol/L Ap5A 10 mmol/L
D-glucosio 20 mmol/L HK ≥ 2000 U/L
G6PDH ≥ 1500 U/L NAC 20 mmol/L
Creatina fosfato 30 mmol/L
STABILITA': i reagenti, a 2-8°C, sono stabili fino alla data di
scadenza riportata sul kit se non contaminati durante l’uso.
REAGENTI AUSILIARI PER LA CALIBRAZIONE E PER
IL CONTROLLO QUALITA’ (Non forniti con il kit)
Si suggerisce caldamente di verificare l’esattezza del fattore
utilizzato
mediante Calibrazione preventiva. Va assolutamente utilizzato il
fattore che viene originato da queste prove in sostituzione del fattore
teorico inserito in metodica.
Per garantire l’ adeguata Calibrazione, si suggerisce di usare il
seguente kit:
- CALIBRATORE Cod. 90010000
Per garantire l’adeguata prestazione del test, si suggeriscono i
seguenti kit:
- SERUM N Cod. 90009980
- SERUM P Cod. 90009990
PREPARAZIONE DEL REAGENTE DI LAVORO
PREPARAZIONE DEL SUBSTRATO:
*KIT 5 x 20 mL (Cod. 90009950)
Aggiungere ad un vial di *Reagente 2 18 mL di *Reagente 1.
Mescolare gentilmente sino a dissoluzione.
Aggiungere ad un vial di *Reagente 3 4 mL di acqua distillata.
Mescolare gentilmente sino a dissoluzione.
STABILITA’: i Substrati ricostituiti sono stabili 5 gg a 2-8°C, se
non contaminati durante l’uso.
PREPARAZIONE DEL MONOREAGENTE:
*KIT 20 x 3 mL (Cod. 90009940)
Aggiungere ad un vial di *Reagente 2 3 mL di *Reagente 1.
Mescolare gentilmente sino a dissoluzione.
*KIT 5 x 20 mL (Cod. 90009950)
Aggiungere ad un vial di *Reagente 2 ricostituito 2 mL di
*Reagente 3 ricostituito.
Mescolare gentilmente sino a miscelazione.
Portare i reagenti alla temperatura di lavoro prima dell’uso.
Chiudere immediatamente dopo l’impiego.
I prodotti vanno manipolati in modo adeguato, tale da evitare
ogni contaminazione.
L’uso non competente ci solleverà da ogni responsabilità.
STABILITA’: 5 gg a 2-8°C ed al buio.
CAMPIONI
• Siero, plasma fresco e non emolizzato.
Usare eparina o EDTA come anticoagulante.
PROCEDURA ANALITICA
• Wavelength: 340 nm (334-365 nm)
• Cammino ottico: 1 cm
• Lettura: contro aria o acqua distillata
• Temperatura: 37°C (30°C)
• Metodo: cinetico
• Linearità: fino a 1032 U/L a 37°C
• Campione/Reagente: 1/25
Portare i reagenti alla temperatura di lavoro prima dell’uso.
Pipettare in una provetta o in una cuvetta etichettata:
Reagente di lavoro 1000 µl
Campione 40 µl
Mescolare gentilmente ed incubare a 37 (30)°C per 3 minuti.
Leggere l’assorbanza iniziale contro aria o acqua distillata e ripetere
la lettura dopo 1, 2 e 3 minuti esatti. Calcolare la media delle letture
di assorbanza/minuto (ΔA/min).
CALCOLO
Sostituire il valore di ΔA/min calcolato nella seguente formula:
ΔA/min x 4127 = attività CK totale in U/L
VALORI DI RIFERIMENTO
37°C 30°C 25°C
UOMINI (U/L) 25 - 175 15 - 105 10 - 70
DONNE (U/L) 25 - 150 15 - 90 10 - 60
Si raccomanda che ogni laboratorio stabilisca i propri valori normali
di riferimento per l’area geografica in cui si trova.
CARATTERISTICHE METROLOGICHE
Le caratteristiche del Reagente CPK-NAC sono determinate
utilizzando uno spettrofotometro o analizzatori tipici di laboratorio. I
dati pur rappresentando le caratteristiche del prodotto, potrebbero
risultare differenti da questi nei singoli laboratori e/o per differenti
analizzatori
Linearità: La CPK-NAC, viene determinata tra 8 - 1031 U/L.
Per un’ attività ≥ 1031 U/L diluire il campione 1:10
con sol. fisiologica, ripetere la determinazione e
moltiplicare il risultato x 10.
Limite di rilevazione: La minima quantità determinabile è 8 U/L.
Precisione nella serie (Within-run Precision):
Media (U/L) ± 2s CV %
Umano 1 154,25 ± 2,74 0,89
Umano 2 432,5 ± 6,17 0,71
Precisione tra le serie (Run-to-run (Day-to-day) Precision):
Media (U/L) ± 2s CV %
Umano 1 150,75± 7,53 2,50
Umano 2 433,22 ± 6,31 0,73
Accuratezza: con materiali di controlli commerciali
Attesa (U/L) Trovata (U/L)
Normale 160 (130 – 190) 155 - 163 - 165
Patologico 475 (388 – 562) 470 - 478 - 487

Interferenze: vedi Bibliografia punto 2.
Correlazione: un gruppo di 20 sieri è stato testato con questa
procedura e usando un reagente simile
commercialmente disponibile.
Il confronto ha dato i seguenti risultati:
Regressione lineare Y = 0,9965X + 0,042
Coefficiente di correlazione r = 0,9962n = 20
NOTE
1. Una variazione proporzionale dei volumi di reazione non modifica
il risultato.
2. Si suggerisce di NON miscelare tra loro reagenti provenienti da
diversi lotti di produzione.
3. Per un’attività ≥ 1031 U/L ripetere la determinazione sul campione
diluito 1:10 con sol. fisiologica e moltiplicare il risultato x10.
4. ATTENZIONE!
Le applicazioni su analizzatori / strumenti di routine possono essere
totalmente diverse da quanto sviluppato come determinazione
manuale, ma anche tra loro, per i diversi analizzatori.
5. Elevata attenzione deve essere data alle sostanze interferenti:
alcuni farmaci ed altre sostanze potrebbero influenzare i livelli od il
dosaggio della CPK-NAC (vedi Bibliografia 2).
6. Il Reagente deve essere impiegato SOLO per l’uso indicato, da
personale esperto ed addestrato, nelle dovute condizioni di
Laboratorio.
7. La diagnosi clinica non può essere fatta correttamente usando il
risultato di un solo test, ma deve essere fatta integrando
criticamente diversi tests di Laboratorio con differenti dati clinici.
BIBLIOGRAFIA
1. Textbook of Clinical Chemistry, Ed. by N.W. Tietz,
W.B. Saunders Co., Philadelphia (1999).
2. Young D.S., Effect of drugs on Clinical Lab. Test,
5 th Ed. AACC Press (2000).
3. Committee on Enzymes of the Scand. Soc. for Clin. Chem.;
Scand. J. Clin. Lab. Inv. 36, 711 (1976) and idem 39, 1(1979).
4. DGKC, J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 15, 255 (1977).
Ver. 2007/10