Skyrius 12. Ekotoksikologija: analizės metodai, duomenų tipai ir ...

10Testo Matuojamipara-pavadinimasmetrai4. Vibrio fischerišvytėjimąslopinančiovandensmėginių poveikionustatymasLST EN ISO11348(ISO: 11348:1998)Vibrio fischerimetodo variantai:1.Metodas naudojantką tik išaugintasbakterijasISO 11348-1:1998);2.Dehidratuotųbakterijų metodasISO 11348-2:1998);3. Sublimuotųbakterijų metodasISO 11348-3:1998)Principas.Bioliuminescencijosinhibicija(sumažėjimas),matuojamapo 5, 15, 30min., įvertinant, korekcinįfaktorių f ktnusakantį savaiminįbioliuminescencijosgesimą;Tegalimaspraskiedimolaipsnis, apsprendžiantismažesnę, nei20 % inhibiciją.Praskiedimolaipsnisapsprendžiamažesnę, nei20 % inhibiciją.Didesnėms inhibicijos reikšmėms praskiedimo efektasturi būti statistiškai analizuotasTestuojamųjunginiųkiekis arkoncentracijosMetodinis reikalavimas:švytėjimo inhibicijamėginiuyra išreiškiamakaip tamPalyginamosios standartinėstoksinėsmedžiagos(RST)****ma nuo 20 iki80 %: 1)Cr 6 +tikri praskiedimai,kurie aps-bichromatoprendžianuo 18,7 mg/l;(kaip kalio20 iki 50 % 2) Zn 2+ (kaipšviesos sumažėjimą(EC 20 irheptahidrato)cinko sulfatoEC 50 ).PriimtinosarrekomenduojamosrūšysNeribojami. Palyginamos Vibrio fischeriVandenyje ios toksinėstirpūs mišiniai, medžia gos,turintys toksiniųPTM, reko-(NRRL B-11177).teršalų, menduojamosnuotekos, ekstraktai,šiame biotestepavir-šiaus vandenys,yra trys, irtestavimassedimentų šiuo metoduporų vanduo galioja, jei:testuojami šiuo1) 30 min. in-metodu.kubacijos metuesant šiomsPTM koncentracijomsbioliuminescencija inhibuoja-2,2 mg/l;3) 3,5-dichlorofenolo3,4mg/l.TestuojamųindividųargrupiųkiekisNėra nustatytas;ypačliofilizuotųpreparatų;apsprendžiamas bioliuminescencijos intensyvumuKokybėskriterijaiirkontrolėKiti metodo galiojimokriterijai (pirmasduotas su PTMapibūdinimu):Augimo irmatavimo aplinka: šviesa,temperatūra(° C), etc.Išankstiniolaikymo sąlygos, maitinimas,kt.2. Dydis f kt, t.y. korekcinisfaktorius 30min. laikotarpiu turiišsilaikyti tarp 0.6 –1,8.3. Lygiagrečių mata-dinant jų tūrio> nei 5 %. bakterijųvimų rezultatai neturiskirtis daugiau, ne-turi būti palai-suspensijoje.Bandymo metu adaptacijaigu 3 %. Tai galioja koma + 15 o Ctiek kontroliniams, ± 1 o Ctiek ir tiriamiesiems temperatūra.mėginiams, kurie Interferencija:nustato LID (Žemiausio neefektyvauspraskiedimo) dydį, arEC 20 /EC 50 dydžiams,atitinkamai.Kokybės (precizijos)duomenys pateiktipagal 1993 metaisatliktus 16 laboratorijųžiedinio testavimorezultatusNaudojama 2% NaCl tirpalųkoncentracija.Mėginių pH,jeireikia, turi būtipatikslintas iki7,0 ±0,2, nedi-Bioliuminescencijaireikalingas O 2> 0,5 mg/ml,tad mėginiai sužema O 2 koncentracijaardideliu BDS 7 ,gali in-hibuotibioliuminescenciją.Urėja, peptonasir mielių ekstraktas≥ 100 mg/lgali inhibuoti bioliuminescenci jąnuo teršalų nepriklausomu būdu.Mėginių irkontroliųskaičius;mėginiųparuošimasLiofilizuotos Tiriamiejibakterijos mėginiailaikomos – 18analizeio C - 20 o C. saugomi +2-+ 5 o C neTuri būti ilgiau, neiskirta 15 min. 48 val. Jeiiki bandymoprad žiosreikiasaugoti 2savaites - -20 o C.Jei mėginiųpH yra tarp6 ir 8,5, taijokio pHtikslinimonereikia.Jei testuojamogėlo paviršiniovandens, ar nuotekų tūrismėginyjeyra didelisosmoliariškumas palaikomas,pridedantNaCl iki 2%.Mėginiųir kontroliųtūriaiBioliuminescencijosmatavimui,inkubacijai-1 ml.Bakterijųkamieninio tirpaloįnešama1/100mėginiotūrio(10 µl)Testotrukmėir matavimųkiekis*Matavimaigalibūti atliekamikaspo 5, 15,30 min.* ATTC – American Type Culture Collection (USA), CCAP - Culture Centre of Algae and Protozoa (UK), SAG - Collection of algal culture (Gottingen, Germany); ** Method for evaluation of