10Testo Matuojamipara-pavadinimasmetrai4. Vibrio fischerišvytėjimąslopinančiovandensmėginių poveikionustatymasLST EN ISO11348(ISO: 11348:1998)Vibrio fischerimetodo variantai:1.Metodas naudojantką tik išaugintasbakterijasISO 11348-1:1998);2.Dehidratuotųbakterijų metodasISO 11348-2:1998);3. Sublimuotųbakterijų metodasISO 11348-3:1998)Principas.Bioliuminescencijosinhibicija(sumažėjimas),matuojamapo 5, 15, 30min., įvertinant, korekcinįfaktorių f ktnusakantį savaiminįbioliuminescencijosgesimą;Tegalimaspraskiedimolaipsnis, apsprendžiantismažesnę, nei20 % inhibiciją.Praskiedimolaipsnisapsprendžiamažesnę, nei20 % inhibiciją.Didesnėms inhibicijos reikšmėms praskiedimo efektasturi būti statistiškai analizuotasTestuojamųjunginiųkiekis arkoncentracijosMetodinis reikalavimas:švytėjimo inhibicijamėginiuyra išreiškiamakaip tamPalyginamosios standartinėstoksinėsmedžiagos(RST)****ma nuo 20 iki80 %: 1)Cr 6 +tikri praskiedimai,kurie aps-bichromatoprendžianuo 18,7 mg/l;(kaip kalio20 iki 50 % 2) Zn 2+ (kaipšviesos sumažėjimą(EC 20 <strong>ir</strong>heptahidrato)cinko sulfatoEC 50 ).PriimtinosarrekomenduojamosrūšysNeribojami. Palyginamos Vibrio fischeriVandenyje ios toksinėst<strong>ir</strong>pūs mišiniai, medžia gos,turintys toksiniųPTM, reko-(NRRL B-11177).teršalų, menduojamosnuotekos, ekstraktai,šiame biotestepav<strong>ir</strong>-šiaus vandenys,yra trys, <strong>ir</strong>testavimassedimentų šiuo metoduporų vanduo galioja, jei:testuojami šiuo1) 30 min. in-metodu.kubacijos metuesant šiomsPTM koncentracijomsbioliuminescencija inhibuoja-2,2 mg/l;3) 3,5-dichlorofenolo3,4mg/l.TestuojamųindividųargrupiųkiekisNėra nustatytas;ypačliofilizuotųpreparatų;apsprendžiamas bioliuminescencijos intensyvumuKokybėskriterijai<strong>ir</strong>kontrolėKiti metodo galiojimokriterijai (p<strong>ir</strong>masduotas su PTMapibūdinimu):Augimo <strong>ir</strong>matavimo aplinka: šviesa,temperatūra(° C), etc.Išankstiniolaikymo sąlygos, maitinimas,kt.2. Dydis f kt, t.y. korekcinisfaktorius 30min. laikotarpiu turiišsilaikyti tarp 0.6 –1,8.3. Lygiagrečių mata-dinant jų tūrio> nei 5 %. bakterijųvimų rezultatai neturisk<strong>ir</strong>tis daugiau, ne-turi būti palai-suspensijoje.Bandymo metu adaptacijaigu 3 %. Tai galioja koma + 15 o Ctiek kontroliniams, ± 1 o Ctiek <strong>ir</strong> t<strong>ir</strong>iamiesiems temperatūra.mėginiams, kurie Interferencija:nustato LID (Žemiausio neefektyvauspraskiedimo) dydį, arEC 20 /EC 50 dydžiams,atitinkamai.Kokybės (precizijos)duomenys pateiktipagal 1993 metaisatliktus 16 laboratorijųžiedinio testavimorezultatusNaudojama 2% NaCl t<strong>ir</strong>palųkoncentracija.Mėginių pH,je<strong>ir</strong>eikia, turi būtipatikslintas iki7,0 ±0,2, nedi-Bioliuminescencija<strong>ir</strong>eikalingas O 2> 0,5 mg/ml,tad mėginiai sužema O 2 koncentracijaardideliu BDS 7 ,gali in-hibuotibioliuminescenciją.Urėja, peptonas<strong>ir</strong> mielių ekstraktas≥ 100 mg/lgali inhibuoti bioliuminescenci jąnuo teršalų nepriklausomu būdu.Mėginių <strong>ir</strong>kontroliųskaičius;mėginiųparuošimasLiofilizuotos T<strong>ir</strong>iamiejibakterijos mėginiailaikomos – 18analizeio C - 20 o C. saugomi +2-+ 5 o C neTuri būti ilgiau, neisk<strong>ir</strong>ta 15 min. 48 val. Jeiiki bandymoprad žiosreikiasaugoti 2savaites - -20 o C.Jei mėginiųpH yra tarp6 <strong>ir</strong> 8,5, taijokio pHtikslinimonereikia.Jei testuojamogėlo pav<strong>ir</strong>šiniovandens, ar nuotekų tūrismėginyjeyra didelisosmoliariškumas palaikomas,pridedantNaCl iki 2%.Mėginių<strong>ir</strong> kontroliųtūriaiBioliuminescencijosmatavimui,inkubacijai-1 ml.Bakterijųkamieninio t<strong>ir</strong>paloįnešama1/100mėginiotūrio(10 µl)Testotrukmė<strong>ir</strong> matavimųkiekis*Matavimaigalibūti atliekamikaspo 5, 15,30 min.* ATTC – American Type Culture Collection (USA), CCAP - Culture Centre of Algae and Protozoa (UK), SAG - Collection of algal culture (Gottingen, Germany); ** Method for evaluation of
acteria contamination/infection should be used: ISO 4833; *** - Species sensitivity for potassium dichromate in an inter-laboratory test among 16 laboratories, as reported by ISO 8692 test. – “Waterquality – Fresh water algal growth inhibition test with Scenedesmus subspicatus and Selenastrum capricornutum reports” is: 1) cell growth as biomass (N of cells/ml) EC50, i.e. EbC50 = 0,53 mg/l(0,20 – 0,75); 2) cell growth as growth rate EC50, i.e. ErC50 = 0,84 mg/l (0,60 – 1,03); **** RST - Reference Standard Toxicant. ES/EK – Europos Sąjungos / Europos Komisijos, (EU/EC –European Union/European Commission)11Mikrobranduoliai,OECD Stnd. 474Chromosomų pažaidos(Aneugeniniai/klastogeniniai efektai)OECD Stnd 475? 479?GenotoksiškumasBiodegradacijaBioakumuliacija pagalLAND 45-2001 (C13) arba> OECD 305 A,B,C,D,EIlgalaikiai ekotoksiškumo tyrimai (nuo 96 val. iki 3 sav.)Adsorbcija, log Po/w <strong>ir</strong>kt. (OECD 106, 107)MikrobiotestaiAugalaiDafnijosŽuvysChroninis Heterocyprisincogruensm<strong>ir</strong>tingumo / augimoslopinimo testas a –Ostracodtoxkit F TMDaphnia magnareprodukcijosbandymas OECDTG211 (1998)Žuvų ankstyvosevystymosi stadijosetoksiškumotestas, OECD 210Biologiniskoncentravimas- bandymas sužuvimis (OECDTG 305)Genotoksiškumo testas (iki 30dienų) su tradeskante (Tradescantia)OECD Guide 227 (2003)[a) Sunkiųjų metalų identifikavimas–(morfologiniai pokyčiai); b) radioaktyviųjųmedžiagų nustatymas] b .2) Plūdena (Lemna sp.)OECD Guideline 221 (2002)Pav. <strong>12.</strong>3. Ekotoksinio poveikio įvertinimas ilgalaikiais standartiniais ISO/LST testaisa – sedimentų/d<strong>ir</strong>vožemio tyrimasb – sunkiųjų metalų, radioaktyvių medžiagų identifikavimuiIntegralus toksiškumo organizmams rodiklisPastaba: Ši schema siūloma tikslesniam nuotekų, filtratų, cheminių medžiagų toksiškumo įvertinimui, tačiau ne medžiagos cheminės klasės nustatymuiLAND 45-2001 “Cheminių medžiagų <strong>ir</strong> preparatų ekotoksiškumo tyrimo <strong>metodai</strong>” 2002.01.03. Įsak. Nr. 4. (Valst. Žinios 2004 Nr. 80)