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EFEITO DA CIANAMIDA HIDROGENADA E BENZILAMINOPURINA NA
PROLIFERAÇÃO in vitro DE BROTOS DE MORANGUEIRO
(Fragaria × ananassa Duch.) CV. PRINCESA ISABEL (* )
RESUMO
115
MOACIR PASQUAL (** )
ADRIANO BORTOLOTTI DA SILVA (*** )
ANNA LYGIA DE REZENDE MACIEL (*** )
ANDRÉ BARRETTO PEREIRA (**** )
JOÃO MAURÍCIO CAVALCANTE-ALVES (***** )
O presente trabalho foi realizado com objetivo de avaliar os efeitos de BAP (benzilaminopurina) e cianamida
hidrogenada sobre a proliferação in vitro de brotos de morangueiro (Fragaria × ananassa ), cv. Princesa Isabel. Brotos com
aproximadamente 1 cm e já estabelecidos in vitro, foram inoculados em meio de cultura MS com sacarose 30 gL-1 , pH
ajustado para 5,7 e solidificado com ágar 7 gL-1 e suplementado de BAP (0; 0,5; 1; 2; 4 mgL-1 ) e cianamida hidrogenada (0;
2,5; 5; 10 mgL-1 ) em todas as combinações possíveis. Após a autoclavagem, o meio foi colocado em tubos de ensaio (150 x
25 mm), inoculado com explantes levados para sala de crescimento a 260C, fotoperíodo de 16 horas e intensidade luminosa
de 16 μM.m-2 .s-1 . Os resultados permitiram concluir que o uso de cianamida hidrogenada, nas concentrações e condições
em que foi testada, é prejudicial à proliferação de brotos de morangueiro, cv. Princesa Isabel. Para a proliferação de brotos
de morangueiro é dispensável o uso de BAP .
DESCRITORES: Morangueiro, Fragaria × ananassa , micropropagação.
SUMMARY
Effects of Hydrogen Cyanamide and Benzylaminopurine on in vitro Proliferation of Strawberry (Fragaria ×
ananassa) Shoots CV Princesa Isabel
The objective of this work was to study the effects of hydrogen cyanamide and benzylaminopurine (BAP) on in
vitro proliferation of strawberry shoots cv. Princesa Isabel. Explants (1 cm long) were inoculated on MS medium, supplemented
by sucrose 30 gL -1 , pH 5,7 and agar 7 gL -1 in all possible combinations of BAP (0.0; 0.5; 1.0; 2.0 and 4.0 mgL -1 ) and
hydrogen cyanamide (0.0; 2.5; 5.0 e 10.0 mgL -1 ). After inoculation, the 150 x 25 mm tubes with medium were allocated to
chambers at 26 0 C, photoperiod fitted to 16/8 hours light/dark and 16 μM.m -2 .s -1 light intensity. The hydrogen cyanamide is
not recommended for in vitro strawberry shoot proliferation nor is the use of BAP necessary for the same proposal.
KEY WORDS: Strawberry, Fragaria × ananassa , micropropagation
1. INTRODUÇÃO
O morangueiro (Fragaria × ananassa Duch.)
é uma herbácea membro da família Rosaceae, o qual
tem sido valorizado por suas características de sabor,
fragrância e por suas qualidades nutricionais (Wilhelm
e Sagen, 1974) além de ser cultivado em qualquer parte
do mundo. A produção mundial foi de 2.670.908 ton
em 1998 , com produtividade média de 13.251 Kg/ha
(Agricultural, 1998). Os maiores produtores mundiais
são os EUA e Espanha, respondendo por quase 40%
da produção mundial. O Brasil produz em torno de 40
mil ton/ano, sendo os principais produtores os Estados
de São Paulo, Minas Gerais e Rio Grande do Sul. Em
Goias e Santa Catarina, a cultura vem crescendo e é
uma excelente opção de renda para os agricultores
locais (Groppo et al., 1997; Ronque, 1998).
Dentre os patógenos que afetam o
morangueiro incluem-se fungos, nematóides, vírus e
micoplasmas. Essa herbácea é resistente à doenças
bacterianas, exceto à mancha angular, causada por
Xanthomonas fragarie, que pode ocorrer em condições
de chuvas prolongadas (Jungnickel, 1988; Kennedy e
King, 1962). Além disso, diversas viroses como a do
encrespamento, da clorose marginal e do mosqueado
* Aceito para publicação em:Apoio financeiro FAPEMIG.
** Eng. Agr. Dr., Prof. Titular, Dep. de Agric., Universidade Federal de Lavras (UFLA),C. P. l 37, CEP 37200-000, Lavras, MG, e-mail: mpasqual@ufla.br.
bolsista CNPq.
( *** Eng. Agr., mestrando/UFLA
( **** Eng. Agr. MS, Pesquisador CEPLAC, doutorando/UFLA, bolsista FAPEMIG
( ***** Eng. Agr. Dr., bolsista recem-doutor da FAPEMIG na UFLA
R. Un. Alfenas, Alfenas, 4:115-119, 1998

116 M. PASQUAL et. al.
atualmente reduzem o vigor das plantas e produção
dos frutos, sendo transmitidas por mudas infectadas
(Dias, 1999). O morangueiro exige por parte do
produtor um nível tecnológico avançado no que diz
respeito ao controle de doenças. A erradicação dessas
doenças, no campo de multiplicação, é dificultada
devido ao fato de sintomas característicos só se
manifestarem após a indução floral, o que leva a
hipótese de que essa infecção se inicia na forma latente
(Boxus, 1980).
As técnicas de cultura de tecidos têm se
tornado a única alternativa efetiva para se obterem
plantas livres de vírus, bactérias, micoplasmas e
fungos. A obtenção de material pré-básico em
programas de certificação de mudas dos EUA, França
e Suiça vem sendo feita através de micropropagação.
Desse modo, a micropropagação a partir da cultura
de meristemas tem sido amplamente utilizada para
obtenção de plantas matrizes sadias (Roudeillac, 1999;
Fachinello, 1999).
Na multiplicação in vitro é freqüente a
utilização do meio MS (Murashige e Skoog, 1962) e
de componentes orgânicos. O balanço hormonal do
meio é constituído de 1 mgL -1 AIB, 1 mgL -1 BAP e
0,1 mgL -1 GA 3 , sendo usado na maioria dos
laboratórios que estão micropropagando plantas
(Damiano, 1980; Navatel et al., 1989; Scott e Zanzi,
1981). A proliferação é obtida através de brotações
adventícias.
A partir da publicação de Sansavini e Gherardi
(1980), demonstrando preocupação com relação a
problemas resultantes do uso de reguladores de
crescimento durante a proliferação in vitro, houve
tendência de reduzir o nível hormonal do meio de
cultura, por recomendação de Boxus (1986).
Na França, o uso de 0,5 mgL -1 de BAP e 0,5
mgL -1 de AIB é indicado por Navatel et al. (1989),
enquanto Marcotrigiano et al. (1984) determinaram
que BAP 0,3 mgL -1 foi tão efetivo quanto 1 e 4 mgL -
1 para a proliferação de brotos. O enraizamento de
brotos de morangueiro é usualmente obtido pela
omissão de BAP no mesmo meio de proliferação,
embora brotos enraízem bem em meio sem reguladores
de crescimento (Martinelli, 1992).
A cianamida hidrogenada (H 2 CN 2 ) tem sido
utilizada para estimular e uniformizar a brotação e
floração, bem como para aumentar a produtividade
da videira (Mielle, 1991), do quiwi (Laiiav et al., 1989;
Linsley-Noakes, 1989; Paulin e McHattie, 1989;
Schuck, 1992), da pereira (Francisconi et al., 1992) e
do pessegueiro (Marondin et al., 1991; Matos e
Ducroquet, 1992). Miele e Dallagnol (1994), usando
cianamida hidrogenada em plantas de videira, cv.
Trebiano, não identificaram efeito significativo no
primeiro ano. No segundo ano houve efeito
R. Un. Alfenas, Alfenas, 4:115-119, 1998
significativo sobre a percentagem de gemas brotadas
e produtividade. Esses dados foram obtidos com
pulverização desta substância no campo.
Com a tendência de se utilizarem novas
substâncias para a otimização da multiplicação in
vitro, a cianamida hidrogenada pode se tornar uma
alternativa para a produção de mudas de morangueiro,
possibilitando a aquisição de mudas de boa qualidade
fitossanitária pelos produtores de morango a um custo
mais baixo.
O presente trabalho foi realizado com o
objetivo de avaliar os efeitos do BAP e da cianamida
hidrogenada sobre a proliferação in vitro de brotos de
morangueiro cv. Princesa Isabel.
2. MATERIAL E MÉTODOS
Este trabalho foi desenvolvido no Laboratório
de Cultura de Tecidos do Departamento de Agricultura
da Universidade Federal de Lavras (UFLA), em
Lavras, MG, com morangueiro (Fragaria ×
ananassa), cv. Princesa Isabel.
O meio de cultura utilizado nos ensaios foi o
MS, acrescido de 7 gL -1 de ágar e 30 gL -1 de sacarose,
sendo o pH ajustado para 5,7. Os explantes, obtidos
de material já mantido in vitro, constituídos de
brotações com 1 cm de comprimento, foram
cuidadosamente inoculados nos tubos de ensaio com
dimensões de 150 x 25 mm, contendo 10 ml de meio
de cultura, de acordo com os tratamentos. Após a
autoclavagem por 20 minutos à temperatura de 121 0
C. Os ensaios foram mantidos em sala de crescimento
com temperatura de aproximadamente 26 0 C,
fotoperíodo de 16 horas e intensidade luminosa de
16 μM.m -2 .s -1 . Testaram-se cinco concentrações de
BAP e quatro de cianamida hidrogenada num fatorial
simples 5 x 4, com quatro repetições, cada qual com
três tubos.
As concentrações utilizadas de BAP em
mgL -1 foram as seguintes: 0; 0,5; 1; 2; 4 e as de
cianamida hidrogenada foram: 0; 2,5; 5; 10 mgL -1 . As
avaliações foram realizadas 60 dias após a instalação
do experimento, por meio do número total de brotos,
tamanho de brotos, peso da matéria seca de brotos e
presença de raízes.
3. RESULTADOS E DISCUSSÃO
A análise de variância para os parâmetros
avaliados, com os respectivos níveis de significância,
podem ser observados na Tabela 1. A variável número
de brotos foi significativamente afetada apenas pelas
concentrações de BAP. Não houve efeito significativo

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117
de cianamida hidrogenada nem da interação entre os fatores testados.
Tabela 1. Análise de variância para número total de brotos, tamanho de brotos, peso da matéria seca de
brotos e presença de raiz em brotos de morangueiro obtidos in vitro nas diferentes concentrações
(mgL -1 ) de cianamida hidrogenada e BAP. Lavras, UFLA, 1999.
Causa de
variação
BAP
Cianamida
BAP x Cian.
Resíduo
CV (%)
GL
4
3
12
60
Número total
de brotos
150,964**
2,988
48,478
29,124
42,31
Tamanho
dos brotos
155,507**
7,759
31,125**
9,714
53,32
* e ** Significativo a 5 e 1% de probabilidade, respectivamente.
Na Figura 1 é apresentado número de brotos
por explante em diferentes concentrações de BAP.
Observa-se que com o aumento dos níveis de BAP,
houve redução do número de brotos. Este resultado
discorda em parte da citação de vários autores, a
exemplo de Damiano (1980), Scott e Zanzi (1981) e
Natavel et al. (1989), segundo os quais, para a
proliferação de brotos de morangueiro o meio de
cultura deve ser acrescido de BAP 1,0 mgL -1 , AIB 1
mgL -1 e GA 3 0,1 mgL -1 . Por outro lado, esses resultados
estão de acordo com registros de Marcotrigiano et al.
(1984), que obtiveram multiplicação de brotos com
baixa concentração de BAP (0,3 mgL -1 ).
Número de brotações
20
15
10
5
0
0 1 2 3 4 5
BAP (mg/L)
Figura 1. Número de brotos de morangueiro
obtidos por explante em diferentes
concentrações de BAP. Lavras, UFLA, 1999.
Efeitos similares foram registrados para
tamanho de brotos, porém neste parâmetro houve
significância para interação entre BAP e cianamida
hidrogenada (Figura 2). Observa-se que na ausência
desta substância com o aumento das concentrações de
BAP, houve um correspondente decréscimo no
tamanho dos brotos, de forma linear. Comportamento
semelhante foi observado para cianamida hidrogenada
na concentração de 10 mgL -1 . Já o uso de 5 mgL -1
desta substância demonstrou resposta quadrática,
evidenciando redução no tamanho dos brotos com
elevação de BAP até 2,5 mgL -1 , a partir daí observouse
tendência no aumento do tamanho dos brotos.
Tamanho das
brotações (cm)
QM
Peso da matéria
seca dos brotos
0,0023*
0,0011
0,0029**
0,0006
37,28
15
10
5
0
Presença
de raízes
6223,74**
83,35
4605,89**
631,95
43,09
0 1 2 3 4 5
BAP (mg/L)
CH (0 mg/L) CH (5 mg/L) CH (1 0 mg/L)
Figura 2. Tamanho de brotos (cm) de morangueiro
obtidos com diferentes concentrações de BAP
(mg/L) e cianamida hidrogenada (CH). Lavras,
UFLA, 1999.
Havia a expectativa de que a cianamida
hidrogenada apresentasse efeitos positivos sobre a
proliferação de brotos de morangueiro in vitro,
considerando seu efeito em várias espécies, a exemplo
de videira (Mielle, 1994), quiwi (Schuck, 1992),
pereira (Francisconi et al., 1992) e pessegueiro (Matos
e Ducroquet, 1992), estimulando e uniformizando a
brotação de plantas no campo.
Há que se considerar o fato de que Miele e
Dall’agnol (1994) só identificaram efeito significativo
no segundo ano de aplicação. No primeiro ano não
houve respostas, levando a supor que problemas
ambientais, especialmente luz e temperatura,
interferiram na resposta de brotos à aplicação de
cianamida hidrogenada. Novos testes deverão ser
efetuados, combinando concentrações de BAP e
condições ambientais, na tentativa de identificar as
causas desses resultados.
Para peso da matéria seca (Figura 3) registrouse
tendência de elevação até a concentração de
2,5 mgL -1 de BAP, havendo a partir deste nível, ligeiro
decréscimo. Esta observação é válida para cianamida
hidrogenada 2,5 e 10 mgL -1 . Para 5 mgL -1 o resultado
foi totalmente contraditório, evidenciando redução do
R. Un. Alfenas, Alfenas, 4:115-119, 1998

118 M. PASQUAL et. al.
peso da matéria seca até 2,5 mgL -1 de BAP e, nas
doses mais elevadas, aumento. Estes dados, por si só,
não são conclusivos, sugerindo a necessidade da
instalação de outros experimentos que possam
confirmar os resultados obtidos.
Peso (g) da
matéria seca das
brotações
0,15
0,1
0,05
0
0 1 2 3 4 5
BAP (mg/L)
CH (2,5 mg/L) CH (5 mg/L) CH (1 0 mg/L)
Figura 3. Peso da matéria seca (g) de brotos de
morango com diferentes concentrações de BAP
(mg/L) e cianamida hidrogenada (CH). Lavras,
UFLA, 1999.
A porcentagem de enraizamento (Figura 4)
diminuiu tanto para cianamida hidrogenada a 5 como
a 10 mgL-1 , à medida que as dosagens de BAP foram
elevadas. Esses resultados seguem a linha de
pensamento exposta por Martinelli (1992) de que o
enraizamento de brotos de morangueiro pode ocorrer
na ausência de reguladores de crescimento.
Presença de
raízes (%)
130
80
30
-20
0 1 2 3 4 5
BAP (mg/L)
CH (5 mg/L) CH (1 0 mg/L)
Figura 4. Presença de raízes (%) em brotos de
morangueiro com diferentes concentrações de
BAP (mg/L) e cianamida hidrogenada (CH).
Lavras, UFLA, 1999.
4. CONCLUSÕES
A cianamida hidrogenada, nas concentrações
e condições em que foi testada, mostrou-se prejudicial
a proliferação de brotos de morangueiro cv. Princesa
Isabel. Da mesma forma, o uso de BAP é dispensável.
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