 BBL Taxo TB Niacin Test Reagents - BD

BBL Taxo TB Niacin Test Reagents
(TB reagensi za testiranje nijacina)
Pogledajte objašnjenja simbola na kraju uputstva.
NAMENA
L000171
2004/06
Srpski
BBL Taxo TB Niacin Test Strips (BBL Taxo TB trake za testiranje nijacina) su papirne trake koje sadrže reagense za otkrivanje
proizvodnje nijacina kod mikobakterija.
BBL Taxo TB Niacin Test Control (BBL Taxo TB kontrola testiranja nijacina) se koristi kao pozitivna kontrola pri testiranju nijacina.
REZIME I OBJAŠNJENJE
Konno1 je najpre osmislio standardni test nijacina, koji su modifikovali Runyon i dr. 2 Nijacin koji organizam stvara reaguje sa
cijanogen bromidom i primarnim ili sekundarnim aminom (obično anilinom).
Kilburn i Kubica3 su dodatno modifikovali test nijacina, pomoću jedne trake natopljene reagensima. Zakiseljeni kalijumtiocijanat
izmešan sa hloraminom T oslobađa cijanogen hlorid, koji reaguje u prisustvu nijacina i stvara žutu boju. Ako nema
nijacina, ne pojavljuje se nikakva boja.
BBl Taxo Niacin Test Strips su izmenjene po uzoru na traku za testiranje nijacina koju su koristili Kilburn i Kubica. Kilburn i
Kubica3 i Morse i dr. 4 su uvideli da je test sa trakom jednako osetljiv i specifičan kao i klasični test.
PRINCIPI PROCEDURE
Sve mikobakterije stvaraju nikotinsku kiselinu ili nijacin, koji ima presudnu ulogu u oksido-redukcijskim reakcijama. Zbog
blokiranog metaboličkog prolaza, vrsta M. tuberculosis i neki izolati M. simiae i M. chelonae proizvode najveće količine nijacina.
Taj nijacin se nagomilava na podlozi sa kulturom na kojoj organizmi rastu i može se odatle ekstrahovati.
REAGENSI
BBL Taxo TB Niacin Test Strips nijacina su apsorpcione papirne trake natopljene kalijum tiocijanatom, hloraminom T, limunovom
kiselinom i natrijum aminosalicilatom. BBL Taxo TB Niacin Test Control papirni diskovi su natopljeni nikotinamidom; kada se
koriste u skladu sa uputstvima, ovi diskovi stvaraju žuti rastvor koji je ekvivalentan količini od približno 5 μg nijacina.
Upozorenja i mere opreza:
Za in vitro dijagnostičku upotrebu.
Pri testiranju proizvodnje nijacina treba koristiti samo kulture koje su stare 3 do 4 nedelje i koje sadrže najmanje 50 do 100
kolonija. Manji broj kolonija može da dovede do sumnjivih ili negativnih rezultata.
Pri izvođenju ovog testa treba se pridržavati uobičajenih mera opreza za rukovanje vrstom M. tuberculosis.
Zatvorene epruvete se moraju obraditi u autoklavu posle obavljenog testa, a pre bacanja.
Uputstva za čuvanje: Čuvajte BBL Taxo TB Niacin Test reagense na temperaturi od 2 do 8 °C. Rok trajanja važi za proizvod koji se
čuva u svom originalnom kontejneru prema uputstvima.
Kvarenje proizvoda: Ne koristite proizvod ako ne zadovoljava specifikacije identiteta i funkcija.
PRIKUPLJANJE I PRIPREMA UZORAKA
Prikupljajte uzorke u sterilnim kontejnerima ili pomoću sterilnih tupfera i odmah ih prenesite u laboratoriju u skladu sa
preporučenim uputstvima. 5-7
Obrađujte svaki uzorak na odgovarajući način. 5-7
Ekstrakt kulture Mycobacterium se koristi u testu i priprema pomoću sledećih metoda. NAPOMENA: Iako je za kulture koje se
gaje na podlogama na bazi jajeta prijavljeno da daju najkonzistentnije rezultate, zadovoljavajući rezultati se postižu i sa
Middlebrook and Cohn agarom kome je dodata asparaginska kiselina od 0,1%. 8
Kultura na podlogama od jaja
1. Na Lowenstein-Jensen, Petragnani ili nekoj drugoj podlozi sa koagulisanim jajetom koristite kulturu staru 3 do 4 nedelje sa
najmanje 50 do 100 kolonija.
2. Da biste pripremili ekstrakt kulture Mycobacterium, dodajte kulturi 1,5 mL sterilne destilovane ili dejonizovane vode ili
slanog rastvora. Pomoću pipete, nežno odstranite površinski rast. Zabodite sterilnu pipetu od 1 mL u podlogu kroz rast kako
biste omogućili ekstrakciju nijacina. Ne koristite kontaminirane kulture čije su pločice „poplavele ili izbeljene“.
3. Nakrivite epruvetu tako da površina podloge bude u horizontalnom položaju i prekrivena tečnošću. Neka ostane u ovom
položaju 20 do 30 minuta.
1

4. Pažljivo uklonite oko 0,6 mL ekstrakta pomoću sterilne kapilarne pipete sa zadebljanjem i prenesite ih na dno test epruvete
dimenzija 13 x 75 mm. Zatvorite epruvetu.
Kulture na pločicama sa BBL Middlebrook and Cohn 7H10 agarom i asparaginskom kiselinom:
1. Koristite kulturu staru 3 do 4 nedelje sa najmanje 50 do 100 kolonija.
2. Da biste pripremili ekstrakt kulture Mycobacterium, dodajte kulturi 1,5 mL sterilne destilovane ili dejonizovane vode ili
slanog rastvora. Pomoću pipete, nežno odstranite površinski rast. Zabodite sterilnu pipetu od 1 mL u podlogu kroz rast kako
biste omogućili ekstrakciju nijacina.
3. Neka tečnost ostane u dodiru sa podlogom na kojoj je kultura 20 do 30 minuta. Stavite u kos položaj tako da tečnost prelije
kolonije.
4. Uklonite 0,6 mL tečnog ekstrakta iz kulture pomoću sterilne kapilarne pipete i stavite ih u označenu, čistu test epruvetu
dimenzija 13 x 75 mm. Zatvorite epruvetu.
PROCEDURA
Obezbeđeni materijal: BBL Taxo TB Niacin Test Strips i/ili BBL Taxo TB Niacin Test Control.
Materijal koji je potreban, ali nije obezbeđen: Sterilna destilovana ili dejonizovana voda ili fiziološki rastvor (0,85% NaCl),
sterilna kapilarna pipeta, sterilna pipeta od 1 mL, test epruvete dimenzija 13 x 75 mm, zatvarači za test epruvete, pinceta,
podloge sa kulturama i organizmi za kontrolu kvaliteta.
Procedura testa:
Pozitivnu kontrolu pomoću BBL Taxo TB Niacin Test Control treba vršiti sa svakom serijom testova, a ona se priprema na sledeći
način:
1. Stavite 0,6 mL sterilne destilovane ili dejonizovane vode ili slanog rastvora u test epruvetu dimenzija 13 x 75 mm.
2. Dodajte jedan BBL Taxo TB Niacin Control disk, zatvorite i blago protresite tri puta u roku od 15 minuta. Neka epruveta
ostane na sobnoj temperaturi.
Negativna kontrola se priprema dodavanjem 0,6 mL istog razblaživača u test epruvetu dimenzija 13 x 75 mm umesto ekstrakta.
1. Obrađujte kulturu u kojoj se testira prisustvo nijacina kako je navedeno u odeljku „Prikupljanje i priprema uzoraka“ i stavite
0,6 mL ekstrakta u test epruvetu dimenzija 13 x 75 mm kako stoji u uputstvu.
2. Neka vam pri ruci bude odgovarajuća negativna kontrola u test epruveti dimenzija 13 x 75 mm i pozitivnu kontrolu koja je
pripremljena prema gore navedenim uputstvima.
3. Pomoću pincete zagrejane na plamenu, ubacite po jednu traku BBL Taxo TB Niacin Test Strip sa strelicom na dole u svaku
epruvetu (pozitivna kontrola, negativna kontrola i test kultura) i odmah zatvorite.
4. Blago protresite epruvete kako biste izmešali tečnost sa reagensom na dnu trake, ali ih ne naginjite. Ponovo ih tako blago
protresite nakon 5 do 10 minuta.
5. Nakon 12 do 15, ali ne više od 30 minuta, uporedite boju ekstrakata.
6. Nakon završetka testa obradite ranije zatvorene epruvete u autoklavu.
Korisnička kontrola kvaliteta:
Specifikacije identiteta -
TB Niacin Test Strips – Bele papirne trake koje mogu malo da promene boju zbog stavljanja rastvora na trake. Papirne trake
približnih dimenzija 64 x 6 mm sa crnim strelicama.
TB Niacin Test Control – beli, okrugli papirni diskovi od 6 mm na kojima je sa obe strane štampano „N“ iznad „C“.
Reakcija kulture – Uradite test prema gore navedenoj proceduri sa kulturama za pozitivnu i negativnu kontrolu koje su
navedene. TB Niacin Test Control treba da pokaže odgovarajuću pozitivnu reakciju kada se testira pomoću trake TB Niacin Test
Strip.
Organizam ATCC Proizvodnja nijacina
Mycobacterium tuberculosis H37Ra 25177 +
Mycobacterium intracellulare 13950 –
+ žuta boja u ekstraktu
– nema boje u ekstraktu
Ono što je potrebno za kontrolu kvaliteta mora se obavljati u skladu sa važećim lokalnim, državnim i/ili saveznim propisima ili
potrebama akreditacije i standardnim procedurama za kontrolu kvaliteta vaše laboratorije. Preporučuje se da korisnik pogleda
relevantna NCCLS uputstva i CLIA propise ako želi da vidi odgovarajuće procedure za kontrolu kvaliteta.
2

REZULTATI
Na pozitivan test nijacina ukazuje pojavljivanje žute boje u ekstraktu test kulture i pozitivnoj kontroli, kao i odsustvo boje u
negativnoj kontroli.
OGRANIČENJA PROCEDURE
Iako jako pozitivan test nijacina kod nehromogenih mikobakterija u velikoj meri ukazuje na M. tuberculosis, on se smatra samo
preliminarnom identifikacijom ovog organizma. Potpuna i konačna identifikacija bakterije M. tuberculosis i drugih klinički
značajnih mikobakterija se zasniva na rezultatima dobijenim iz baterije informacija, koja obuhvata biohemijske testove, šeme
osetljivosti na lekove i morfološke karakteristike. Ako vam trebaju informacije o ovim testovima, pogledajte odgovarajuće
tekstove. 5-7,9
FUNKCIONALNE KARAKTERISTIKE
Pre puštanja u prodaju, sve serije BBL Taxo TB traka za testiranje nijacina se testiraju kako bi se utvrdile specifikacije određenih
proizvoda. Razblaženi rastvori nikotinske kiseline (nijacina) u dejonizovanoj vodi od 100, 20, 10, 8, 6, 4 i 2 μg/mL pripremaju se u
epruvetama. Svakom razblaženom rastvoru se dodaje TB Test Strip sa strelicom okrenutom na dole. Epruvete se blago protresu i
ostavljaju da odstoje 5 do 10 minuta, a zatim se opet blago protresu. Boja ekstrakta se prvi put poredi sa referentnom
kontrolom nakon 12 do 15 minuta i još jednom nakon 20 do 25 minuta.
Pored toga, ekstrakti sledećih kultura se pripremaju pomoću sterilnog slanog rastvora: Mycobacterium tuberculosis H37Ra
(ATCC 25177), M. tuberculosis (ATCC 27294 i 25618), M. avium (ATCC 25291) i M. intracellulare (ATCC 13950). Uzorci serije TB
traka za testiranje nijacina se stavljaju u ekstrakt kulture pri čemu je strelica na traci okrenuta na dole. Epruvete sa ekstraktom
kulture se blago protresu i ostavljaju da odstoje 5 do 10 minuta, a zatim se opet blago protresu. Boja ekstrakta se gleda nakon
12 do 15 minuta i još jednom nakon 20 do 25 minuta. Pozitivna reakcija (žuta boja u tečnosti) se prati kod svih ekstrakata
kulture bakterije M. tuberculosis. Kod bakterija M. intracellulare ili M. avium se ne prati nikakva promena boje u tečnosti
(negativna reakcija).
Sve serije TB Niacin Test Control diskova se takođe testiraju kako bi se utvrdilo da li zadovoljavaju specifikacije određenih
proizvoda. Uzorci serije se stavljaju u epruvete koje sadrže obrađenu vodu. Epruvete se blago protresu i ostavljaju da odstoje
15 minuta kako bi se omogućila ekstrakcija nijacina iz diskova. TB Niacin Test Strip se dodaje svakoj epruveti i epruvete se
zatvaraju. Epruvete se blago protresaju 3 puta u narednih 15 minuta.
DOSTUPNOST
Kat. br. Opis
231741 BBL Taxo TB Niacin Test Strips, jedna bočica, (25 traka po bočici).
231735 BBL Taxo TB Niacin Test Control, 50 diskova po kaseti za ručno nanošenje.
REFERENCE
1. Konno, K. 1956. New chemical method to differentiate human-type tubercle bacilli from other mycobacteria. Science, 124:
985.
2. Runyon, E.H., M. J. Selin, and H.W. Harris. 1959. Distinguishing mycobacteria by the niacin test: a modified procedure. Am.
Rev. Tuberc. 79: 663-665.
3. Kilburn, J. O., and G. P. Kubica. 1968. Reagent-impregnated paper strips for detection of niacin. Am. J. Clin. Pathol.
50: 530-532.
4. Morse, W.C., et al. 1968. Laboratory Report #317. Mycobacteriology methods. U.S. Army Medical Research and Nutrition
Laboratory, Fitzsimons General Hospital, Denver.
5. Nolte, F. S., and B. Metchock. 1995. Mycobacterium, p. 400-437. In P. R. Murray, E. J. Baron, M. A. Pfaller, F. C. Tenover, and
R. H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
6. Baron, E.J., L. R. Peterson, and S. M. Finegold. 1994. Bailey & Scott.s diagnostic microbiology, 9th ed. Mosby-Year Book, Inc.
St. Louis.
7. Master, R. N. 1994. Mycobacteriology, p. 3.0.1.-3.16.4. In H. D. Isenberg (ed.), Clinical microbiology procedures handbook,
vol. 1. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
8. Kilburn, J. O., K. D. Stottmeier, and G. P. Kubica. 1968. Aspartic acid as a precursor for niacin synthesis by tubercle bacilli
grown on 7H10 agar medium. Am. J. Clin. Pathol. 50: 582-586.
9. Kent, P. T., and G. P. Kubica. 1985. Public health mycobacteriology: a guide for the level III laboratory. USDHHS. Centers for
Disease Control, Atlanta.
3