BProbeTec ET Legionella pneumophila (LP) Amplified DNA ... - BD

BProbeTec ET Legionella pneumophila 

(LP) Amplified DNA Assay 

U 

8010960 

2006/04 

Dansk 

USA patent nr 5,270,184; 5,547,861; 5,648,211; 5,712,124; 5,744,311; 5,846,726; 5,851,767; 5,866,336; 5,919,630; 

5,928,869; 5,958,700; 6,054,279; 6,090,552; 6,117,635; 6,251,609; 6,316,200; 6,656,680; 6,743,582 

Se symbolglossaret i slutningen af indlægssedlen 

TILSIGTET BRUG 

BD ProbeTec ET Legionella pneumophila (LP) Amplified DNA Assay (BD ProbeTec ET Legionella pneumophila (LP) 

forstærkede DNA-analyse) til brug med BD ProbeTec ET systemet anvender amplifikation ved hjælp af strengforskydning 

(Strand Displacement Amplification, SDA) teknologi til den direkte, kvalitative påvisning af Legionella pneumophila DNA 

(serogrupper 1 - 14) på ekspektoratpræparater fra patienter, hvor der er klinisk mistanke om pneumoni Analysen er 

beregnet som en hjælp ved sandsynlig diagnosticering af legionærsygdom forbundet med dyrknings- og andre metoder 

RESUMÉ OG FORKLARING 

Legionærsygdom kan erhverves ved inhalation af aerosoler indeholdende Legionella eller ved mikroaspiration af 

kontamineret vand I undersøgelser fra Europa og Nordamerika er det rapporteret, at Legionella har forårsaget 2 - 15 % 

af tilfælde af samfundserhvervet pneumoni (community-acquired pneumonia, CAP), som kræver hospitalisering 

Farlighedsraten for patienter med legionellosis er 5 - 30 %, hos ældre og patienter med nedsat immunforsvar er 

der større risiko for død1 Der er identificeret fyrre forskellige Legionella arter, hvoraf halvdelen er forbundet med 

menneskelig sygdom Legionella pneumophila forårsager 90 % af diagnosticerede tilfælde af legionellosis Selvom 

fjorten serogrupper af L pneumophila er kendte, forårsages 80 % af L pneumophila infektioner af serogruppe 12 Vigtigheden af at stille diagnosen pneumoni og dens ætiologi forstærkes af den stigende bekymring over et 

overforbrug af antibiotika Diagnostiske testresultater for L pneumophila bør hurtigt være tilgængelige for 

klinikeren, fordi det er vist, at dødeligheden stiger, hvis indgivelse af relevant behandling forsinkes Traditionelle 

dyrkningsmetoder kræver mindst to dage til at dyrke Legionella organismer fra positive spytpræparater og i alt syv 

til ti dage at afslutte et negativ resultat Som et supplement til dyrkning findes enzym-immunanalysekits i handelen 

til påvisning af antigen fra L pneumophila serogruppe 1 i urinpræparater3 Imidlertid er diagnostiske tests for 

Legionella infektioner, som giver hurtige resultater med god sensitivitet og specificitet, begrænsede 

PROCEDURENS PRINCIPPER 

BD ProbeTec ET Legionella pneumophila (LP) forstærket DNA-analyse er baseret på den samtidige amplifikation og 

påvisning af fokus-DNA ved hjælp af amplifikationsprimere og en fluorescensmærket detektorprobe SDAreagenserne 

tørres i to separate engangsmikrobrønde Den bearbejdede prøve tilsættes primermikrobrønden, som 

indeholder amplifikationsprimere, fluorescensmærket detektorprobe og andre reagenser, som er nødvendige for 

amplifikation Primere amplificerer et 68-base-par område i L pneumophila makrofag infektivitetspotentia (mip) 

(Macrophage Infectivity Potentiator, MIP) genet, som er konserveret på tværs af alle serogrupper i arten Efter 

inkubation overføres reaktionsblandingen til amplifikationsmikrobrønden, som indeholder to enzymer (en DNA 

polymerase og en restriktionsendonuklease), som er nødvendig for SDA Amplifikationsmikrobrøndene forsegles for at 

forhindre kontaminering, og de inkuberes derefter i en varmekontrolleret fluorescensaflæser, som overvåger hver 

reaktion for dannelsen af forstærkede produkter Hver reaktion sam-forstærker og påviser en intern 

amplifikationskontrol (Internal Amplification Control, IAC), hvis formål er at verificere, at de rigtige forhold eksisterer 

til amplifikation og at reducere muligheden for rapportering af et falsk negativt resultat på grund af tilstedeværelse 

af analysehæmmere Tilstedeværelsen eller fraværet af L pneumophila DNA bestemmes ved at beregne PAT scores 

(Passes After Threshold) for prøven baseret på forudbestemte tærskelværdier Instrumentet rapporterer automatisk 

resultaterne som positive, negative eller inkonklusive 

REAGENSER OG MATERIALER 

Hver BD ProbeTec ET Legionella pneumophila (LP) forstærket DNA-analyse reagenspakke indeholder: 

Legionella pneumophila (LP) primermikrobrønde, (1x24) 

6 oligonukleotider ≥ 7,5pmol, dNTP'er ≥ 15,2nmol, 2 detektorprober ≥ 22,5pmol, 

Syntetisk oligonukleotid ≥ 1500 kopier 

Legionella pneumophila (LP) amplifikationsmikrobrønde, (1x24) 

Restriktionsenzym: ≥ 33 enheder, DNA polymerase ≥ 14 enheder 

10 Primerlåg, 16 amplifikationsforseglere (1/2), 8 engangsposer 

BD ProbeTec ET luftvejspræparat- og mediefortynder og kontrolkit) (CF*/LP/MP**): 

Indhold: Luftvejspræparat- og mediediluent: Bicin, kaliumphosphat, kaliumhydroxid, DMSO og Proclin; 

10 (CF/LP/MP) positive kontroller: ≥ 1050 ng laksesædvæske-DNA, ≥ 47,3 µg Tris, ≥ 9,0 µg EDTA, ≥ 3600 kopier CF 

plasmid, ≥ 4800 kopier LP plasmid, ≥ 5400 kopier MP plasmid; 10 (CF/LP/MP) negative kontroller: ≥ 1050 ng 

laksesædvæske-DNA, ≥ 47,3 µg Tris, ≥ 9,0 µg EDTA; 100 2-mL glas med trykhætte 

* Refererer til BD ProbeTec ET Chlamydiaceae familien (CF) amplificeret DNA-analyse 

** Refererer til BD ProbeTec ET Mycoplasma pneumoniae (MP) amplificeret DNA-analyse 

Instrumenter, udstyr og materialer: BD ProbeTec ET instrument og instrumentplade, BD ProbeTec ET Lysing 

Heater (lyseringsvarmeapparat), BD ProbeTec ET Priming and Warming Heater (primer- og opvarmerapparat), 

BD ProbeTec ET Pipettor (pipettor), platform og strømforsyning, 2 mL prøveglasstativ, BD ProbeTec ET Accessories 

Kit (tilbehørssæt), BD ProbeTec ET Pipette Tips (pipettespidser)

Nødvendige materialer, der ikke er vedlagt: Klasse II biologisk sikkerhedsskab (biological safety cabinet, BSC), 

vortexmixer, -20 °C og/eller -70 °C (eller koldere) en ikke-selvafrimende fryser, mikrocentrifuge, der kan klare 16 000 x g, 

vandbade, digitalt termometer, vandbadstativ med låg, der kan skrues på, andre hensigtsmæssige prøveglasstativer, 

QIAGEN QIAamp DNA fæces minikits, 96 - 100 % ethanol, BBL CultureSwab EZ podepinde, BD ProbeTec ET 2 mL 

Sample Tubes and Caps (prøveglas og hætter), engangshandsker, sprit-resistente penne, mikropipetter i stand til at 

overføre volumener på 25 - 1000 µL, aerosol-resistente pipettespidser, destilleret vand, L pneumophila ATCC 33152 

(Philadelphia-1), oksealbumin (Fraktion V) 0,2 % (vægt/vol) i 0,85 % (vægt/vol) saltvand, 1 % (vol/vol) natriumhypochlorit 

med Alconox* 

* Opløs 7,5 g Alconox med 1 L af en 1 % (vol/vol) natriumhypochloritopløsning og bland Klargør frisk blanding dagligt 

Krav til opbevaring og håndtering: BD ProbeTec ET LP reagenspakker kan opbevares ved 2 - 33 °C De uåbnede 

reagenspakker må ikke anvendes efter udløbsdatoen Så snart en pose er åbnet, er mikrobrøndene stabile i 12 uger, 

hvis de genlukkes korrekt, eller indtil udløbsdatoen, alt efter hvad der kommer først Må ikke fryses 

BD ProbeTec ET luftvejspræparat- og mediefortynder og kontrolkit (CF/LP/MP) kan opbevares ved 2 - 33 °C Reagenserne 

må ikke anvendes efter udløbsdatoen Må ikke fryses 

Advarsler og forholdsregler 

Til in vitro diagnostik 

1 Patogene mikroorganismer, herunder hepatitisvira og humant immundefekt virus, kan forekomme i kliniske 

prøver "Standardforholdsregler" 4-7 og institutionelle retningslinier skal overholdes ved håndtering af alle 

emner, der er kontamineret med blod og andre legemsvæsker 

2 Håndtering og bearbejdning af præparater fra de nedre luftveje inden 70 °C inkubationstrinet bør udføres i et 

Klasse II biologisk sikkerhedsskab (BSC) 

3 Under 70 °C inkubationstrinet bruges en vandbadstativ med et låg, der kan skrues på, til at sørge for ekstra 

inddæmning af potentielt biologisk farlige præparater fra de nedre luftveje 

4 BD ProbeTec ET luftvejspræparat- og mediefortynder og kontrolkit indeholder dimethylsulfoxid (DMSO) 

DMSO er skadelig ved indånding, ved hudkontakt eller ved indtagelse Undgå kontakt med hud og øjne og bær 

altid handsker ved håndtering Kommer stof i øjnene, skylles straks grundigt med vand og læge kontaktes 

Kommer stoffet på huden, vaskes straks med store mængder vand 

5 Se QIAamp DNA fæces minikit håndbogen for sikkerhedsoplysninger om QIAGEN reagenser, der anvendes i 

denne procedure QIAGEN reagenser må ikke bortskaffes i blegeopløsninger QIAGEN reagenser må ikke 

udsættes for blegeopløsninger 

6 Der har været rapporter, der antyder, at QIAGEN DNA ekstraktionskits ikke er egnet til Legionella PCR 

(Polymerase Chain Reaction, polymerasekædereaktion), på grund af muligheden for, at reagenserne bliver 

forurenet med Legionella DNA8,9 Selvom sandsynligheden for dette er ringe, og andre Legionella arter ud over 

L pneumophila blev identificeret i disse undersøgelser, bør brugeren verificere funktionen af hvert nyt lot af 

QIAGEN reagenser inden brug med patientpræparater 

7 Selv om specielle arbejdsområder ikke kræves, fordi BD ProbeTec ET designet nedsætter muligheden for 

kontaminering med forstærket DNA-fragment i testmiljøet, er andre forholdsregler til kontrol af 

kontaminering nødvendige, især for at undgå kontaminering af præparater under bearbejdning 

8 Reagensposer indeholdende ubrugte primermikrobrønde og amplifikationsmikrobrønde SKAL lukkes 

omhyggeligt igen efter åbning Bekræft, at der findes et tørremiddel, inden reagensposerne lukkes 

9 Pladen indeholdende amplifikationsmikrobrønde SKAL være korrekt lukket med amplifikationsforsegleren, 

inden pladen flyttes fra BD ProbeTec ET primer- og opvarmerapparat til BD ProbeTec ET instrumentet 

Forsegling sikrer en lukket reaktion til amplifikation og påvisning og er nødvendig for at undgå kontaminering 

med amplifikationsprodukter af instrumentet og arbejdsområdet Forseglingsmaterialet må ikke på noget 

tidspunkt fjernes fra mikrobrønde 

10 Primermikrobrønde med residualvæske (efter overførsel af væske fra primermikrobrønde til amplifikationsmikrobrønde) 

udgør en kilde til kontaminering af fokus Forsegl omhyggeligt primermikrobrønde med en pladeforsegler inden 

bortskaffelse 

11 For at forhindre kontaminering af arbejdsmiljøet med amplifikationsprodukter bruges engangsposerne, der 

følger med reagenspakkerne, til at kassere testede amplifikationsmikrobrønde Sørg for, at poserne er korrekt 

lukket inden bortskaffelse 

12 SKIFT HANDSKER ved specificerede trin under bearbejdning af prøver og analyseproceduren for at undgå 

krydskontaminering af præparater Hvis handsker får kontakt med præparater, skiftes handskerne straks for at 

undgå at kontaminere andre præparater 

13 I tilfælde af, at arbejdsområdet eller udstyret kontamineres med prøver eller kontroller, rengøres det 

kontaminerede område grundigt med 1 % (vol/vol) natriumhypochlorit med Alconox, og der skylles grundigt 

med vand Lad overfladen tørre fuldstændigt, inden De fortsætter med yderligere testning Inden eventuel 

QIAGEN prøvebearbejdningsreagenser tørres op, aftørres de pågældende områder med vand inden den 1 % 

(vol/vol) natriumhypochlorit opløsning med Alconox bruges 

14 Brug kun BD ProbeTec ET pipettor og BD ProbeTec ET pipettespidser til overførsel af bearbejdede prøver til 

primermikrobrønde og overførsel af prøver fra primermikrobrøndene til amplifikationsmikrobrøndene 

15 Anvend fastlagt laboratoriepraksis ved bortskaffelse af brugte pipettespidser, prøveglas, primermikrobrønde 

og andre engangsartikler Bortskaf engangsartikler omhyggeligt Forsegl og kassér affaldsbeholdere, når de er 

¾ fyldte eller dagligt (alt efter hvad der kommer først) 

16 Mikrobrønde, kontroller eller bearbejdningsreagenser fra kits med forskellige lotnumre må ikke ombyttes eller 

blandes 

17 Kontakt Teknisk service i tilfælde af en usædvanlig situation, som for eksempel, hvis der spildes ned i BD ProbeTec 

ET instrumentet, eller kontaminering med DNA, som ikke kan fjernes ved hjælp af rengøring 

OPSAMLING OG TRANSPORT AF PRØVE 

1 Prøveopsamling 

Præparater skal opsamles som anbefalet i Clinical Microbiology Procedures Handbook10 (håndbogen om 

kliniske mikrobiologiprocedurer) eller Deres laboratoriemanual 

2

2 Prøveopbevaring og -transport 

• Reagenser kan opbevares/transporteres ved 18 - 33 °C i højst 6 h 

• Reagenser kan opbevares i køleskab ved 2 - 8 °C i højst 3 dage 

• Præparater kan opbevares ved eller under -20 °C i højst 14 uger 

TESTPROCEDURE 

Der henvises til brugermanualen til BD ProbeTec ET systemet for specifikke instruktioner i betjening og vedligeholdelse 

af komponenterne i systemet 

A Klargøring af instrument: 

1 Der skal være tændt for strømmen til instrumentet, og det skal have tid til at varme op, inden analysen påbegyndes 

a Primer- og opvarmerapparatet kræver ca 90 min til opvarmning og stabilisering 

Indstillingspunktet for primerkomponenten i primer- og opvarmerapparatet er 72,5 °C 

Indstillingspunktet for opvarmerkomponenten i primer- og opvarmerapparatet er 54 °C 

b BD ProbeTec ET instrumentet er softwarestyret og kræver ca 30 min til opvarmning 

2 Varmeapparatets temperaturer skal kontrolleres inden analysen påbegyndes Notér temperaturerne på BD ProbeTec 

ET systemets vedligeholdelsesjournal 

a Primer- og opvarmerapparat 

Termometret i primervarmerapparatet skal vise mellem 72 - 73 °C 

Termometret i opvarmerapparatet skal vise mellem 53,5 - 54,5 °C 

3 Kontrollér temperaturen, der vises på BD ProbeTec ET skærmbilledet Termometret skal vise mellem 47,5 - 55,0 °C 

Notér temperaturerne på BD ProbeTec ET systemets vedligeholdelsesjournal 

B Pipettor: 

Der henvises til brugermanualen til BD ProbeTec ET systemet for en detaljeret forklaring på tastaturfunktionerne i 

BD ProbeTec ET Pipettoren Desuden skal BD ProbeTec ET pipettoren rengøres efter hver brug Der henvises til 

repræsentanten fra Teknisk service for vejledning om korrekt rengøring og vedligeholdelse af BD ProbeTec ET pipettoren 

Følgende programmer er påkrævet til udførelse af BD ProbeTec ET LP analyser Program 1 overfører væske fra de 

bearbejdede prøver til LP primermikrobrøndene Program 5 overfører væske fra LP primermikrobrøndene til LP 

amplifikationsmikrobrøndene Programmér pipettoren som følger: 

Program 1: 

1 TÆND for pipettoren Pipettoren vil bippe en gang, blinke "ZERO," (nul), blinke softwareversionsnummer og 

bippe en gang til 

2 Tryk på den blå "Prog" (Program) tast Tryk på "Vol" (Volumen) tasten, indtil "1" vises for at vælge Program 1 

Tryk på "Enter" 

3 Tryk på "Prog" (Program) tasten for at gå i programmeringsmodus Mens De trykker på "Prog" (Program) 

tasten, trykker De samtidigt på specialfunktionstasten med en pipettespids eller enden af en papirclips 

4 Tryk på "Fill" (Fyld) Tryk på pil-op-tasten, indtil der står 200 Tryk på "Enter" 

5 Tryk på "Disp" (Dispensér) Tryk på pil-op-tasten, indtil der står 150 Tryk på "Enter" 

6 Tryk på "Enter" endnu en gang for at gemme programmet og afslutte De skulle høre et "bip," der angiver, at 

programmeringen er færdig 

7 Bekræft programmet ved at trykke på udløseren for at gå frem gennem hvert punkt Efterhånden som De går 

gennem hvert punkt, indstiller De hastigheden på aspiration/dispensér med "Vol" (Volumen) tasten 

Hastighedsindikatoren fremkommer ved hvert punkt Brug "Vol" (Volumen) tasten til at justere 

hastighedsindikatoren til at vise 2 firkanter for "Fill" (Fyld) og "Disp" (Dispensér) punkterne 

Program 5 

1 Tryk på "Prog" (Program) tasten Tryk på "Vol" (Volumen) tasten, indtil "5" vises for at vælge Program 5 Tryk 

på "Enter" 

2 Tryk på og hold "Prog" (Program) tasten for at gå i programmeringsmodus Mens De trykker på "Prog" 

(Program) tasten, trykker De samtidigt på specialfunktionstasten med en pipettespids eller enden af en 

papirclips 

3 Tryk på "Fill" (Fyld) Tryk på pil-op-tasten, indtil der står 100 Tryk på "Enter" 

4 Tryk på "Disp" (Dispensér) Tryk på pil-op-tasten, indtil der står 100 Tryk på "Enter" 

5 Tryk på "Mix" (Bland) Tryk på pil-op-tasten, indtil der står 50 Tryk på "Enter" 

6 Tryk på "Enter" endnu en gang for at gemme programmet og afslutte De skulle høre et "bip", der angiver, at 

programmeringen er færdig 

7 Bekræft programmet ved at trykke på udløseren for at gå frem gennem hvert punkt Efterhånden som De går 

gennem hvert punkt, indstiller De hastigheden på aspiration/dispensér/bland med "Vol" (Volumen) tasten 

Hastighedsindikatoren fremkommer ved hvert punkt Brug "Vol" (Volumen) tasten til at justere 

hastighedsindikatoren til at vise 2 firkanter for funktionerne aspiration og dispensér Brug "Vol" (Volumen) 

tasten til at justere hastigheden for blandingen, så den viser 3 firkanter 

Programgennemgang 

Programmerne skal gennemgås, inden proceduren påbegyndes Sæt pipettoren til TÆNDT for at gennemgå 

programmet Tryk på den blå "Prog" (Program) tast Tryk på "Vol" (Volumen) tasten, indtil det rette 

programnummer (1 eller 5) vises Tryk på "Enter" tasten Brug pipetteringsudløseren for at gå frem punkt for punkt 

gennem programmet 

Program 1: Dette program aspirerer 200 µL; dispenserer 150 µL i LP mikrobrønden Pipettorens display skal vise 

som følger: 

Fill 200 µL – SII 

Dispense 150 µL – SII 

3

Program 5: Dette program aspirerer 100 µL; dispenserer 100 µL, og blander 50 µL tre gange Pipettorens display 

skal vise som følger: 

Fill 100 µL – SII 

Dispense 100 µL – SII 

Mix 50 µL – SIII 

Zero (nul) (blinker skiftevis) 

C Pladelayout: 

Pladelayoutrapporten genereres fra BD ProbeTec ET instrumentet efter analysetype, præparatidentifikation, 

kontrollotnumre, og kitlotnumre logges ind i systemet Pladelayoutrapporten viser det fysiske layout af præparater 

og kontroller for hver plade, der skal testes Denne orientering bruges til både primermikrobrøndpladen og 

amplifikationsmikrobrøndpladen For LP analysen er primermikrobrøndene fuldkommen grå mikrobrøndstrimler 

Amplifikationsmikrobrøndene er gråstribede mikrobrøndstrimler 

D Bearbejdning af præparater fra de nedre luftveje: 

Procedurerelaterede bemærkninger: 

• Gennemse QIAGEN QIAamp DNA fæces minikit håndbogen for vigtige procedurerelaterede bemærkninger og 

forholdsregler inden De starter 

• Fyld et vandbad med destilleret vand og opvarm til 70 °C (± 5 °C) inden De starter på bearbejdning af præparater 

• Brug sprit-resistente penne til at mærke beholdere og glas 

• Skift pipettespidser mellem alle væskeoverførsler Det anbefales at bruge spidser med aerosolbarriere 

• Lad BD ProbeTec ET luftvejspræparat- og mediefortynder (CF/LP/MP) opnå stuetemperatur og bland forsigtigt 

ved at vende den op og ned inden brug 

• Afmål den nødvendige mængde BD ProbeTec ET luftvejspræparat- og mediefortynder (CF/LP/MP) ned i en ren 

beholder Den nødvendige mængde bestemmes ved at bruge 0,4 mL for hvert præparat og tilsætte yderligere 

1 - 2 mL, så det er let at pipettere Undgå kontaminering af fortynderen - Hæld ikke tiloversbleven 

fortynder tilbage i flasken 

1 Klargør QIAGEN reagenser (se "Klargøring af reagenser" i QIAamp DNA fæces minikit håndbogen) 

2 Lad præparaterne nå stuetemperatur 

3 Mærk et 2 mL glas med trykhætte for hvert præparat, der skal testes 

Følgende trin skal udføres i et biologisk sikkerhedsskab (BSC): 

4 Udsæt præparaterne for impulsslyngning i 5 - 15 s for at blande grundigt 

5 Pipettér 350 µL af præparatet i det mærkede glas 

BEMÆRK: Det kan være vanskeligt at pipettere nøjagtige prøver fra ekspektoratpræparater Hvis dette er tilfældet, 

bruges gradueringerne på glassets side som en hjælp til at sikre, at det korrekte volumen tilføres i glasset 

Alternativt bruges et glas, hvori der er blevet dispenseret 350 µL vand som en vejledning 

6 SKIFT HANDSKER efter tilsætning af præparater 

7 Pipettér 150 µL QIAGEN ASL buffer i hvert prøveglas 

8 Pipettér 25 µL QIAGEN proteinase K i hvert prøveglas 

9 Pipettér 500 µL QIAGEN ASL buffer i hvert prøveglas 

10 Sæt hætte på hvert glas og foretag impulsslyngning i 5 s Anbring glassene i et vandbadstativ med et låg, der 

kan skrues på 

Følgende trin kan udføres uden for et biologisk sikkerhedsskab (BSC): 

11 Inkubér glassene i det 70 °C (± 5 °C) vandbad i 15 min 

12 Efter 15 min tages glassene op af vandbadet, og de centrifugeres (16 000 x g) i ca 5 s 

13 Tag glassene ud af centrifugen Åbn hvert glas og tilsæt 500 µL af 96 - 100 % ethanol 

14 Sæt igen hætte på hvert glas og udsæt det for impulsslyngning i 5 s 

15 Centrifugér præparaterne (16 000 x g) i ca 5 s 

16 Mærk en QIAGEN udskillelseskolonne og et opsamlingsglas for hvert præparat 

17 Overfør 700 µL af præparatet i den korrekt mærkede QIAGEN udskillelseskolonne 

18 Centrifugér glassene (16 000 x g) i 1 min 

19 Overfør kolonnerne til de nye QIAamp opsamlingsglas Bortskaf glassene med filtratet 

20 Overfør forsigtigt 700 µL mere af præparatet i den korrekte kolonne 


22 Overfør kolonnerne til rene QIAamp opsamlingsglas Bortskaf glassene med filtratet 

23 Åbn QIAamp kolonnerne og tilsæt 500 µL QIAGEN AW1 vaskebuffer til hver 


25 Overfør kolonnerne til de nye QIAamp opsamlingsglas Bortskaf glassene med filtratet 

26 Åbn QIAamp kolonnerne og tilsæt 500 µL QIAGEN AW2 vaskebuffer til hver 


28 Overfør kolonnerne til endelige, mærkede QIAamp opsamlingsglas Bortskaf glassene med filtratet 

BEMÆRK: Opsamlingsglasset skal være mærket på dette tidspunkt 

BEMÆRK: Vær omhyggelig med at sørge for, at der ikke hænger væske fast i bunden af kolonnen Overførsel af 

residualvask i opsamlingsglasset kan påvirke resultaterne 

29 Åbn kolonnerne og tilsæt 225 µL QIAGEN AE elueringsbuffer til hver 

30 Inkubér ved stuetemperatur i 1 min 


32 Bortskaf kolonnerne 

4

33 Mærk et 2 mL glas med skruehætte for hvert præparat 

34 Overfør 400 µL luftvejspræparat- og mediefortynder (CF/LP/MP) til hvert glas med skruehætte 

BEMÆRK: Fyld et vandbad med destilleret vand og bring badet i kog til brug ved trin 38 

35 Overfør 200 µL eluat til det korrekt mærkede glas indeholdende 400 µL luftvejspræparat- og mediefortynder 

(CF/LP/MP) 

36 Sæt hætte på glasset og udsæt det for impulsslyngning i 5 s 

37 Præparér kontrollerne Se Præparering af kontroller fra de nedre luftveje (Afsnit E) 

38 Overfør præparater og kontroller til et vandbadstativ 

39 Anbring vandbadstativet i det kogende vandbad i 5 min 

40 Når de 5 min er gået, tages vandbadstativet op og glassene får lov at afkøle ved stuetemperatur i mindst 15 min 

ADVARSEL: Vær forsigtig med at undgå forbrændinger fra det kogende vand, vandbadstativet eller flader af 

vandbadet, der kan være meget varme 

41 Efter afkøling centrifugeres (16 000 x g) i ca 5 s 

BEMÆRK: Efter kogning af prøver: 

a De kan opbevares ved 18 - 33 °C i op til 6 h og kan testes uden at koges igen 

b De kan opbevares op til 3 dage ved 2 - 8 °C Prøver skal slynges og koges igen inden testning 

c De kan opbevares i op til 14 uger ved ≤ -20 ºC Prøver skal optøs ved stuetemperatur, slynges og koges igen 

inden testning 

42 Præparaterne er klar til Testningsprocedure for BD ProbeTec ET LP analysen (Afsnit F) 

E Præparering af kontroller fra de nedre luftveje: 

1 For hver kørsel (plade), der skal testes, klargøres et negativt kontrolglas (CF/LP/MP) og et positivt kontrolglas 

(CF/LP/MP) Hvis en plade indeholder mere end et reagenspakke-lotnummer, skal kontroller testes med hvert lot 

2 Vend forsigtigt QIAGEN buffer AE og luftvejspræparat- og mediefortynder op og ned inden brug 

3 Tag hætten af det negative kontrolglas (CF/LP/MP) 

4 Med en ny pipettespids for hvert kontrolglas tilsættes 200 µL QIAGEN buffer AE 

5 Med en ny pipettespids for hvert kontrolglas tilsættes 400 µL luftvejspræparat- og mediefortynder 

6 Sæt hætten godt fast på glasset 

7 Tag hætten af det positive kontrolglas (CF/LP/MP) 

8 Med en ny pipettespids for hvert kontrolglas tilsættes 200 µL QIAGEN buffer AE 

9 Med en ny pipettespids for hvert kontrolglas tilsættes 400 µL luftvejspræparat- og mediefortynder 

10 Sæt hætten godt fast på glasset 

11 Slyng kontrolglassene 5 s 

12 Kontrollerne er klar til at blive kogt Se Bearbejdning af præparater fra de nedre luftveje (Afsnit D) 

F Testningsprocedure for BD ProbeTec ET LP analysen: 

BEMÆRK: Inden udførelse af testningsproceduren arrangeres de bearbejdede præparater og kontroller i et stativ, 

der kan håndtere 2 mL prøveglas, som fx BD ProbeTec ET 2 mL prøveglasstativet, som er kompatibelt med 

BD ProbeTec ET pipettoren 

1 Fjern og bortskaf hætterne fra de afkølede præparater og kontroller 

2 SKIFT HANDSKER, inden De fortsætter for at undgå kontaminering 

3 Klargør primermikrobrøndpladen ved hjælp af pladelayoutrapporten - se Pladelayout (Afsnit C) 

4 Forsegl mikrobrøndposerne igen som følger: 

a Anbring posen på en plan flade Hold den åbne ende fladt med den ene hånd 

b Med påføring af tryk køres fingeren hen over ydersiden af forseglingen fra den ene kant af posen til den anden 

c Se efter for at sikre, at posen er forseglet 

5 Vælg Program 1 på BD ProbeTec ET pipettoren 

6 Saml pipettespidserne op Udvid BD ProbeTec ET pipettoren ved at trække afstandsknappen helt ud 

BEMÆRK: Sørg for, at spidserne er sat forsvarligt på pipettoren, så lækage undgås 

7 Aspirér 200 µL fra den første kolonne af prøver 

8 Pres forsigtigt pipettoren sammen, lad pipettespidser berøre siderne af brøndene og dispensér 150 µL i den 

tilsvarende kolonne af primermikrobrønde (1 A - H) 

BEMÆRK: Pipettoren må ikke presses sammen over prøver eller mikrobrønde, da dette kan give kontaminering 

Pludselige bevægelser kan give dråber eller aerosoler 

9 Kassér spidserne Tryk ned på pipetteringsudløseren for at nulstille pipettoren 

BEMÆRK: Kassér spidserne forsigtigt for at undgå små dråber eller aerosoler, som kan kontaminere 

arbejdsområdet 

10 Saml nye spidser op, udvid pipettoren og aspirér 200 µL fra den anden kolonne af prøver 

11 Pres forsigtigt pipettoren sammen, lad pipettespidser berøre siderne af brøndene og dispensér 150 µL i den 

tilsvarende kolonne af primermikrobrønde (2 A - H) 

12 Kassér spidserne 

13 Fortsæt med at overføre de resterende prøver til kørslen 

14 Dæk primermikrobrøndpladen med primerlåget og lad pladen inkubere ved stuetemperatur i mindst 20 min 

(Kan inkubere op til 6 h) BEMÆRK: Sæt nye hætter på de bearbejdede prøver SKIFT HANDSKER 

15 Når inkubationen af primeren er færdig, klargøres amplifikationsmikrobrøndpladen Konfigurér 

amplifikationsmikrobrønden i en plade, der matcher pladelayoutrapporten (samme som primerpladen) Forsegl 

mikrobrøndposerne igen som beskrevet i punkt 4 

16 Tag låget af primermikrobrøndpladen og overfør pladen til primervarmeapparatet Anbring STRAKS 

amplifikationsbrøndpladen i opvarmerapparatet for at forvarme 

17 Indstil uret til 10 min (BEMÆRK: Dette punkt er vigtigt for tiden) 

5

18 Ved afslutningen af de 10 min (± 1 min) inkubation vælges Program 5 på pipettoren 

19 Saml pipettespidser op og overfør 100 µL fra kolonne 1 i primermikrobrøndenpladen til kolonne 1 i 

amplifikationsmikrobrøndpladen Lad pipettespidserne berøre siderne af brøndene og dispensér væsken Lad 

efter dispenseringen pipettoren blande væsken i brøndene automatisk Løft forsigtigt pipettoren væk fra 

pladen Undgå berøring af andre brønde 

20 Kassér spidserne Saml nye spidser op og fortsæt med at overføre reaktionsblandingen fra 

primermikrobrøndene til amplifikationsmikrobrøndene, kolonne efter kolonne, idet der bruges nye spidser for 

hver kolonne 

21 Når den sidste kolonne er blevet overført, fjernes bagbeklædningen fra en amplifikationsforsegler (En 

amplifikationsforsegler (1/2) vil dække op til 6 kolonner Hvis pladen overstiger 6 kolonner, SKAL et helt 

forseglerark bruges) Hold forsegleren i kanterne og læg den over mikrobrøndene Brug retningslinierne på 

opvarmerapparatet for at hjælpe Dem med at lægge forsegleren over Tryk nedad på forsegleren for at sikre, 

at alle mikrobrønde er fuldstændig forseglet 

22 Ved BD ProbeTec ET brugerkontaktfladen flyttes bæreren ud og døren åbnes og pladelåget løftes Overfør 

STRAKS (inden for 30 s) den forseglede amplifikationsmikrobrøndplade til BD ProbeTec ET instrumentet og 

start kørslen (Der henvises til brugermanualen til BD ProbeTec ET systemet for detaljerede instruktioner) 

23 Når kørslen er startet, fortsættes med følgende del af rengøringsproceduren: 

a Forsegl primermikrobrøndene med amplifikationsforsegleren og fjern pladen fra primer- og 

opvarmerapparatet ADVARSEL: Temperaturen er over 70 °C Brug den varmebestandige handske til at 

fjerne pladen 

b Lad pladen afkøle på bordet i 5 min 

c Fjern de forseglede primermikrobrønde fra pladen ved at holde fat i begge sider af forsegleren og løfte 

brøndene lige op som en enhed Anbring de forseglede mikrobrønde i en engangspose og forsegl 

d Rengør metalpladen: 

Skyl pladen med 1 % (vol/vol) natriumhypochlorit - Alconox opløsning 

Skyl pladen med vand 

Vikl pladen ind i et rent papirhåndklæde og lad den tørre, inden den tages i brug igen 

24 Når kørslen er færdig, vil der genereres en udskrift af testresultaterne 

25 Flyt pladebæreren ud af platformen, åbn døren og fjern pladen Luk døren og sæt pladeplatformen tilbage ind 

i instrumentet 

26 Fjern de forseglede amplifikationsmikrobrønde fra pladen FORSIGTIG: Forseglingsmaterialet må ikke fjernes 

fra mikrobrøndene De forseglede mikrobrønde kan let fjernes som en enhed ved at holde fat i top og bund af 

forsegleren og løfte lige op og ud af pladen Anbring de forseglede mikrobrønde i engangsposen Forsegl posen 

27 Rengør metalpladen: 

Skyl pladen med 1 % (vol/vol) natriumhypochlorit - Alconox opløsning 

Skyl pladen med vand 

Vikl pladen ind i et rent papirhåndklæde og lad den tørre, inden den tages i brug igen 

28 Ved dagens sidste kørsel udføres følgende rengøringsprocedurer: 

a Gennemvæd papirhåndklæder eller gazestykker med 1 % (vol/vol) natriumhypochlorit med Alconox 

opløsning og påfør det på bordflader og på de udvendige flader af primer- og opvarmerapparatet, 2 mL 

prøveglasstativet, vandbade, centrifuge og BD ProbeTec ET instrumentet Lad opløsningen sidde på 

overfladerne i 2 - 3 min Gennemvæd papirhåndklæder eller gazestykker med vand og aftør 

rengøringsopløsningen Skift håndklæder eller gaze hyppigt, når der påføres rengøringsopløsning og 

skylles med vand Fugt papirhåndklæder eller gazestykker med 1 % (vol/vol) natriumhypochlorit med 

Alconox og aftør pipettorens håndtag (KUN HÅNDTAGET) Efter 2 - 3 min aftørres håndtaget med 

papirhåndklæder eller gazestykker fugtet med vand 

b Læg vandbadstativet og plader i blød i 1 % (vol/vol) natriumhypochlorit med Alconox i 1 - 2 min Skyl 

grundigt med vand og lad det lufttørre 

c Genoplad pipettoren 

d Bortskaf den forseglede engangspose og biofareposen i overensstemmelse med fastlagte procedurer for 

bortskaffelse af kontamineret affaldsmateriale 

29 Udfør de følgende procedurer mindst én gang om ugen: 

a Bortskaf vandet i vandbadene 

b Rengør vandbadene med 1 % (vol/vol) natriumhypochlorit med Alconox Skyl grundigt med vand og lad 

dem lufttørre 

c Fyld op med destilleret vand 

Kvalitetskontrol 

Krav til kvalitetskontrol skal udføres i overensstemmelse med gældende lokale og/eller nationale regulativer eller 

akkrediteringskrav samt laboratoriets standardkvalitetskontrolprocedurer Det anbefales at læse de relevante CLSI 

(tidligere NCCLS)-retningslinjer og CLIA-regulativer mht passende kvalitetskontrolprocedurer 

Luftvejspræparat- og mediefortynder og kontroller leveres sammen i Luftvejspræparat- og mediefortynder og 

kontrolkit (CF/LP/MP) En positiv og en negativ kontrol skal inkluderes for hver analysekørsel på en plade og for hvert 

nyt reagenskit-lotnummer Kontroller kan placeres tilfældigt Den positive kontrol overvåger for væsentlige 

reagensfejl Den negative kontrol overvåger for reagens- og/eller miljømæssig kontaminering Den positive og 

negative kontrol skal teste som henholdsvis positiv og negativ for at rapportere prøveresultater Hvis kontrollerne ikke 

præsterer som forventet, betragtes analysekørslen som ugyldig og instrumentet vil ikke rapportere patientresultater 

Hvis kørselskontrollerne ikke giver de forventede resultater, gentages hele kørslen med et nyt sæt kontroller, nye 

mikrobrønde og de bearbejdede præparater Hvis der resterer utilstrækkelig bearbejdet præparat for en gentagen 

test, genbearbejdes en anden afmåling af det primære præparat Hvis de gentagede kontroller ikke giver de 

forventede resultater, kontaktes Teknisk service (se "Tolkning af testresultater") 

En intern amplifikationskontrol (IAC) tørres i primermikrobrønden IAC indeholder nukleinsyrefokus, som forstærkes 

ved tilstedeværelsen af prøvematricen IAC er designet for at bekræfte gyldigheden af amplifikationsreaktionen og 

for at identificere potentiel hæmning fra det bearbejdede præparat 

6

Præparatbearbejdningskontroller 

Præparatbearbejdningskontroller kan testes i overensstemmelse med kravene fra relevante akkrediteringsorganisationer 

En positiv kontrol bør teste hele analysesystemet Til dette formål kan kendte positive præparater tjene som kontroller 

ved at blive bearbejdet og testet sammen med ukendte præparater Præparater, der bruges som bearbejdningskontroller, 

kan lagres, bearbejdes og testes i henhold til produktindlægssedlen Præparatbearbejdningskontroller, som simulerer 

præparater fra de nedre luftveje, kan også klargøres som beskrevet nedenfor: 

1 Tag et hætteglas med frysetørret L pneumophila ATCC 33152 (Philadelphia-1) ud, som har været opbevaret ved 

-20 °C eller derunder 

2 Rehydrér det med 1 mL 0,85 % (vægt/vol) saltvandsopløsning indeholdende 0,2 % (vægt/vol) oksealbumin 

(Fraktion V) 

3 Fortynd rehydreret L pneumophila stamme til 1:100000 i 0,85 % (vægt/vol) saltvand indeholdende 0,2 % 

oksealbumin (Fraktion V) 

4 Pipettér 350 µL fortyndet L pneumophila i et glas med trykhætte 

5 Bearbejd som beskrevet i Bearbejdning af præparater fra de nedre luftveje (Afsnit D) 

Overvågning af tilstedeværelsen af kontaminering med DNA 

Mindst en gang om måneden bør følgende testprocedurer udføres for at overvåge arbejdsområdet og udstyrsflader 

for tilstedeværelse af kontaminering med DNA Overvågning af miljøet er væsentligt for at påvise kontaminering, 

inden der opstår et problem 

1 For hvert område*, der skal testes, bruges en BBL CultureSwab EZ podepind 

2 Mærk et 2 mL glas med skruelåg for hvert område, der skal testes Pipettér 600 µL luftvejspræparat- og 

mediefortynder i hvert glas og tilsæt 300 µL QIAGEN buffer AE eller molekylært, destilleret vand Slyng i 5 s for 

at blande 

3 Dyp den første podepind i fortynderen, som blev klargjort i trin 2, og aftør det første område med en bred, 

fejende bevægelse 

4 Hvirvl podepinden rundt i fortynderen, tryk af mod glassets side Sæt hætte på glasset og slyng det i 5 s 

Bortskaf podepinden 

5 Gentag proceduren for hvert område, som skal testes 

6 Anbring glassene i et vandbadstativ og opvarm dem i kogende vandbad i 5 min Tag stativet op af det kogende 

vandbad og lad prøverne afkøle i 15 min ved stuetemperatur, inden der fortsættes 

7 Efter afkøling centrifugeres (16 000 x g) i ca 5 s 

8 Mens glassene varmes op, bruges rene håndklæder vædet med vand til at fjerne rester af bufferblandingen fra 

de testede overflader 

9 Når prøverne er afkølet, fortsættes med Testningsprocedure for BD ProbeTec ET LP analysen (Afsnit F) 

*Anbefalede områder, der skal testes, omfatter: Overflader på vandbadstativet, mikrocentrifugen, primer- og 

opvarmerapparatet, sorte mikrobrøndplader, pipettorhåndtaget, instrumentets taster, instrumentets tastatur, de 

tørre overflader på vandbadene, overfladerne på prøvestativerne og arbejdsbordene, herunder områder hvor 

prøver bearbejdes 

Hvis et område giver et positivt resultat, rengøres området med frisk 1 % (vol/vol) natriumhypochlorit med Alconox 

Sørg for, at hele området er vædet med rengøringsopløsningen og lad rengøringsopløsningen få lov at blive på 

fladen i mindst 2 min, eller indtil tørhed opnås Fjern overskydende rengøringsopløsning med et rent håndklæde, 

hvis det er nødvendigt Aftør området med et rent håndklæde vædet med vand og lad fladen tørre Test området 

igen Gentag, indtil der foreligger negative resultater Hvis der bliver ved med at være kontaminering, kontaktes 

Teknisk service for yderligere information 

TOLKNING AF TESTRESULTATER 

Tilstedeværelsen eller fraværet af L pneumophila DNA bestemmes ved at beregne PAT scores (Passes After Threshold) 

for prøven baseret på forudbestemte tærskelværdier PAT scoren er en metrik, der anvendes til at vurdere 

signalstørrelsen som et resultat af reaktionen Ved denne metrik indikerer store tal, at tærsklen blev nået i de tidlige 

faser af amplifikation, mens små tal betyder, at tærsklen blev nået senere i reaktionsforløbet PAT scorens størrelse 

antyder ikke niveauet af L pneumophila DNA i præparatet 

Hvis analysekontrolresultater ikke er som forventet, skal patientresultaterne ikke rapporteres Se afsnittet 

Kvalitetskontrol for forventede kontrolværdier Rapporterede resultater bestemmes som følger: 

7

PAT Score 

LP fokus IAC fokus Resultat Tolkning Rapport 

> 0 > eller = 0 Positiv L pneumophila DNA påvist 

ved SDA 

= 0 > 0 Negativ L pneumophila DNA ikke 

påvist ved SDA 

a Gentag BD ProbeTec ET LP analysen fra det bearbejdede prøveglas Hvis der ikke er tilstrækkelig volumen tilbage fra 

den bearbejdede prøve, gentages fra det oprindelige præparat Hvis resultatet fra gentagelsen er positivt eller negativ, 

tolkes som beskrevet ovenfor Hvis resultatet gentager som inkonklusivt, bør der anmodes om et nyt præparat 

Bestemmelse af LP og IAC tærskel: 

Tærskelværdierne for L pneumophila fokus-DNA og IAC blev initialt fastlagt ved hjælp af Receiver Operator 

Characteristic kurveanalyse af data opnået fra positive og negative kontroller Disse tærskelværdier blev verificeret 

i kliniske undersøgelser og med retrospektive L pneumophila-positive og -negative præparater fra de nedre 

luftveje Tærskelværdierne blev dernæst valideret i yderligere kliniske undersøgelser 

PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER 

1 BD ProbeTec ET LP analysen er kun specifik for L pneumophila serogrupperne 1-14 Andre L pneumophila 

serogrupper er ikke blevet testet 

2 BD ProbeTec ET LP analysen påviser ikke infektioner forårsaget af andre Legionella arter 

3 Funktionsdata for BD ProbeTec ET LP analysen er kun blevet fastlagt med ekspektoratpræparater Ydelse med 

andre præparattyper er ikke blevet bestemt 

4 BD ProbeTec ET LP analysen er kun evalueret med patienter på 13 år og ældre 

5 Som det er tilfældet med mange diagnostiske tests, bør resultater fra BD ProbeTec ET LP analysen tolkes 

sammen med andre laboratorie- og kliniske data, som er til rådighed for lægen 

6 Et negativt testresultat udelukker ikke muligheden for infektion, fordi testresultater kan være påvirket af ukorrekt 

opsamling af præparatet, teknisk fejl, sammenblanding af præparater, samtidig antibiotikabehandling eller 

tilstedeværelsen af en mængde L pneumophila DNA i præparatet, som ligger under testens analytiske sensitivitet 

7 BD ProbeTec ET LP analysen kan ikke bruges til at vurdere terapeutisk succes eller fiasko, da nukleinsyrer fra 

L pneumophila kan persistere efter behandling med antibiotika 

8 BD ProbeTec ET LP analysen er ikke blevet evalueret med miljøprøver (fx drikkevand eller 

9 

vandkvalitetstestning) 

Optimal ydelse af denne analyse kræver adækvat præparatopsamling og -håndtering 

10 Brug af BD ProbeTec ET LP analysen begrænses til personale, som er blevet uddannet i analyseproceduren og 

BD ProbeTec ET systemet 

11 BD ProbeTec ET LP analysen giver kvalitative resultater Der kan ikke bestemmes en sammenhæng mellem 

størrelsen af PAT scoren og mængden af L pneumophila DNA i en prøve 

FORVENTEDE RESULTATER 

A Prævalens 

Hastigheden af positiviteten, der kan observeres i L pneumophila testning, vil variere afhængigt af 

prøvetagningsmetoden, patientens alder, tilstedeværelse af underliggende risikofaktorer, geografisk beliggenhed, 

og vigtigst af alt, den lokale sygdomsprævalens, herunder mulige udbrudssituationer 

B Fordeling af PAT score hyppighed 

Der blev opsamlet i alt 83 retrospektive ekspektoratpræparater fra fire kliniske steder i USA, Europa og Canada og 

testet med BD ProbeTec ET LP analysen En fordeling af hyppigheden af LP PAT scores sammenlignet med dyrkning 

vises i Figur 1 

8 

Positiv for organismer 

tilhørende L pneumophila 

serogrupperne 1-14, antydende 

aktuel infektion Yderligere 

testning nødvendig for at 

identificere serogrupperne, hvis 

dette er påkrævet af 

epidemiologiske årsager 

Formodet negativ for 

L pneumophila serogrupperne 

1 - 14 i et præparat fra de 

nedre luftveje, antydende 

ingen nylig eller aktuel 

infektion Infektion pga 

Legionella kan ikke 

udelukkes, fordi: 1) 

serogrupper ud over 1 - 14 og 

andre Legionella arter kan 

forårsage sygdom og, 2) 

niveauet af tilstedeværende 

DNA kan være under 

påvisningsgrænsen for testen 

= 0 = 0 Inkonklusiv Amplifikationskontrol 

inhiberet Yderligere 

testning nødvendig for 

tolkning af resultat a

Hyppighed 

60 

50 

40 

30 

20 

10 

0 

Figur 1: Fordeling af hyppighed af LP PAT score sammenlignet med dyrkning 

52 

Dyrkningsresultat 0 1 – 19 20 – 39 40 – 60 I alt 

Negativ 

Positiv 

2 

(-) (+) 

0 

0 

4 

2 

4 

0 1 - 19 20 - 39 40 - 60 

LP PAT score 

52 0 4 4 

2 0 2 19 

I alt 54 0 6 23 83 

C Kontroller 

Under den kliniske evaluering blev kontrolfejl iagttaget i en ud af 46 kørsler for BD ProbeTec ET LP analysen (dvs 

en kørsel havde en procedurerelateret fejl) LP PAT scores for de resterende 45 kørsler er sammenfattet i Tabel 1 

Tabel 1: Fordeling af LP PAT score for kontroller fra luftvejsprøver og medier 

Kontrol N Område 5 percentil Middel Median 95 percentil 

LP Negativ 45 0 – 0 0 0 0 0 

LP Positiv 45 29,4 – 50,7 40,1 46,7 47,6 49,7 

FUNKTIONSDATA 

Prospektiv undersøgelse 

BD ProbeTec ET LP analysen blev evalueret prospektivt ved syv kliniske centre i USA og Canada i 2002 - 2003 sæsonen 

for luftvejslidelser Et ekspektoratpræparat og en urinprøve blev opsamlet fra hver patient Ekspektoratpræparaterne 

blev testet ved hjælp af BD ProbeTec ET LP analysen, Legionella dyrkning og en Direkte Fluorescens Antistof (Direct 

Fluorescent Antibody, DFA) analyse Urinprøverne blev testet ved hjælp af en kommercielt tilgængelig L pneumophila 

urin antigen analyse 

I alt 118 patienter opfyldte kriterierne for inklusion i undersøgelsen (dvs radiologisk tegn på pneumoni, patienter 

på ≥ 13 år, på antibiotika ≤ 14 dage, valide præparattyper opsamlet, relevante referencemetoder udført osv) Af de 118 

patienter var der 114 valide resultater med BD ProbeTec ET LP analysen Resultater for ekspektoratpræparaterne 

blev sammenlignet med resultatet fra ekspektoratdyrkningen for at give et estimat af funktionsdata Et præparat blev 

betragtet som positivt, hvis dyrkningsresultatet var positivt Et resultat blev betragtet som negativt, hvis 

dyrkningsresultatet var negativt 

Alle initialt inkonklusive resultater skulle gentages med det bearbejdede præparat eller med det oprindelige 

præparat (hvis der ikke var tilstrækkeligt bearbejdet præparat til rådighed) Præparater, som gav et initialt og et 

gentaget (dvs endeligt) inkonklusivt resultat, blev ikke inkluderet i funktionsdataene Et præparat, som gav et 

initialt inkonklusivt resultat og ved gentagelse gav et positivt eller negativt resultat, blev inkluderet i 

funktionsdataene Et præparat, som gav et initialt inkonklusivt resultat, og som ikke kunne gentages på grund af 

en utilstrækkelig præparatmængde, gav fortsat et "initialt inkonklusivt" resultat og blev ikke inkluderet i 

funktionsdataene 

BD ProbeTec ET LP analysens resultater for ekspektoratpræparaterne sammenlignet med resultater fra dyrkning er 

sammenfattet i Tabel 2 

9 

19 

60 

23 

Dyrkning - 

Dyrkning +

Tabel 2: BD ProbeTec ET LP analyse - Prospektive resultater fra ekspektoratpræparater sammenlignet 

med dyrkning 

Sted 

Sensitivitet (95 % 

konfidensinterval) 

100% (17/17) 

1 IR 

0/0 

(80,5% – 100%) 

100% (2/2) 

2 IR 

0/0 

(15,8% – 100%) 

100% (31/31) 

3 IR 

0/0 

(88,8% – 100%) 

100% (33/33) 

6 IR 

2/0 

(89,4% – 100%) 

a Af de 114 dyrknings-negative præparater var alle negative over for direkte fluorescens antigen (Direct Fluorescent 

Antibody, DFA) Syvogfirs af de 114 patienter blev desuden testet med en urin antigen analyse og fundet at være 

negative 

b Ét præparat gav negativt resultat ved gentagelse og blev inkluderet i specificitetsberegningenMængden af ét 

præparat var ikke tilstrækkelig til at testen kunne gentages 

c To præparater var fortsat inkonklusive ved gentaget testning Mængden af ét præparat var ikke tilstrækkelig til at 

testen kunne gentages 

IR = Ikke relevant 

Retrospektiv undersøgelse 

BD ProbeTec ET LP analysen blev også evalueret med 83 retrospektive ekspektoratpræparater fra kliniske steder i 

USA, Europa og Canada De retrospektive præparater blev opbevaret i frossen tilstand i op til seks år, med 

størstedelen af præparaterne (65,1 %; 54/83) opbevaret i under to år 

Hvert sted registrerede det oprindelige dyrkningsresultat for hvert retrospektivt præparat Hvert sted testede 

ekspektoratpræparaterne i BD ProbeTec ET LP analysen og sammenlignede resultaterne med dyrkningsresultatet 

Et præparat blev betragtet som positivt, hvis dyrkningsresultatet var positivt Et præparat blev betragtet som 

negativt, hvis dyrkningsresultatet var negativt BD ProbeTec ET LP analyseresultater fra de retrospektive 

ekspektoratpræparater sammenlignet med dyrkningsresultater er sammenfattet i Tabel 3 

Tabel 3: BD ProbeTec ET LP-analyse - Retrospektive resultater fra ekspektoratpræparater 

sammenlignet med dyrkning 

Dyrkning Procent overensstemmelse estimater (95 % konfidensinterval) 

Sted LP Resultat Positiv Negativ I alt Positiv Negativ Samlet 

6 Positiv 1 0 1 

Negativ 0 0 0 

b 

100% (31/31) 

7 IR 

3/2 

(88,8% – 100%) 

c 

100% (114/114) 

Samlet IR 

a 

5/2 

(96,8% – 100%) 

I alt 1 0 1 

8 Positiv 16 5 21 

Negativ 1 24 25 

I alt 17 29 46 


Negativ 0 22 22 

I alt 1 25 26 


Negativ 1 6 7 

I alt 4 6 10 

Samlet Positiv 21 8a 29 

Negativ 2b 52 54 

I alt 23 c 60 83 

sammenlignet med dyrkning 

Specificitet (95 % 

konfidensinterval) 

100% (1/1) 

(2,5% – 100%) 

94,1% (16/17) 

(71,3% – 99,9%) 

100% (1/1) 

(2,5% – 100%) 

75% (3/4) 

(19,4% – 99,4%) 

91,3% (21/23) 

(72% – 98,9%) 

InkonklusivInitial/ 

Endelig 

a Otte præparater var dyrknings-negative, BD ProbeTec ET LP analyse-positive Samtlige otte præparater var positive 

i en urin antigen analyse PCR testning blev udført på seks af de otte præparater; alle seks præparater var positive 

med PCR 

b To præparater var dyrknings-positive, BD ProbeTec ET LP analyse-negative Begge præparater var negative i en 

urin antigen analyse PCR testning blev udført på begge præparater; et præparat var positivt med PCR 

c De 23 dyrknings-positive præparater blev fordelt blandt de følgende serogrupper: 47,8 % (11/23) serogruppe 1; 

17,4 % (4/23) serogruppe 3; 13,0 % (3/23) serogruppe 4; 4,3 % (1/23) serogruppe 5; 4,3 % (1/23) serogruppe 6 og 

13 % (3/23) serogruppe information ikke tilgængelig 

IR = Ikke relevant 

10 

IR 

82,8% (24/29) 

(64,2% – 94,2%) 

88% (22/25) 

(68,8% – 97,5%) 

100% (6/6) 

(541% – 100%) 

86,7% (52/60) 

(75,4% – 94,1%) 

100% (1/1) 

(2,5% – 100%) 

87% (40/46) 

(73,7% – 95,1%) 

885% (23/26) 

(69,8% – 97,6%) 

90% (9/10) 

(55,5% – 99,7%) 

88% (73/83) 

(79% – 94,1%)

BEMÆRK: PCR metoden anvendt til at teste diskordant dyrkning og BD ProbeTec ET LP analyseresultater var ikke 

en metode, der er godkendt af FDA 

Analytiske undersøgelser 

BD ProbeTec ET LP analysens amplifikationsreaktionsvolumen er 100 µL bearbejdet prøve 

Analytisk sensitivitet 

Den analytiske sensitivitet af BD ProbeTec ET LP analysen på tværs af 14 forskellige serogrupper af L pneumophila 

blev bestemt ved at fortynde bakterielle suspensioner til niveauer på 0, 150, 300 og 450 kolonidannende enheder 

(CFU) pr reaktion Prøver blev bearbejdet og analyseret tredobbelt Baseret på 100 % positivitet var den analytiske 

sensitivitet for serogruppe 2 - 10 og 12 150 CFU/reaktion; den faktiske påvisningsgrænse (Limit of Detection, LOD) 

kan dog være under det laveste testede niveau Baseret på 100 % positivitet var den analytiske sensitivitet for 

serogruppe 1 og 11 300 CFU/reaktion; serogruppe 13 var 450 CFU/reaktion; og serogruppe 14 var 700 CFU/reaktion 

Den analytiske sensitivitet af BD ProbeTec ET LP analysen ved tilstedeværelse af en lavere matrix af præparater fra 

de nedre luftveje blev bestemt ved at spike en makrofag-inficeret stamme af L pneumophila serogruppe 1 i spyt ved 

niveauer på 0, 150, 300 og 450 CFU pr reaktion Præparaterne blev bearbejdet og analyseret tredobbelt Baseret på 

100 % positivitet var den analytiske sensitivitet for spikede præparater fra de nedre luftveje 150 CFU/reaktion; den 

faktiske LOD kan dog være under det laveste testede niveau 

Analytisk specificitet 

I alt blev 79 mikroorganismer (69 bakterier, en gærsvamp og ni vira) evalueret ved hjælp af BD ProbeTec ET LP 

analysen Bakterieisolater blev testet ved koncentrationer, der gik fra 1 x 106 CFU/mL til 1 x 108 CFU/mL Vira blev 

testet ved en koncentration på 1 x 106 virale partikler/mL Coccidioides immitis blev præpareret som en 

myceliumsuspension svarende til en McFarland standard på 5 Ingen af de testede mikroorganismer frembragte et 

positivt resultat eller hæmmede IAC (Tabel 4) 

Tabel 4: BD ProbeTec ET LP analyse - Analytisk specificitet 

Acinetobacter 

calcoaceticus 

Actinomyces israelii 

Adenovirus-5 

Aeromonas hydrophila 

Blastomyces dermatitidis 

Bordetella 

bronchiseptica 

Bordetella parapertussis 

Bordetella pertussis 

Branhamella catarrhalis 

Candida albicans 

Chlamydia trachomatis, 

serogruppe L2 

Chlamydophila 

pneumoniae, AR-39 

Citrobacter freundii 

Coccidioides immitis 

Corynebacterium 

diphtheriae 

Corynebacterium 

jeikeium 

Cryptococcus 

neoformans 

Cytomegalovirus 

Eikenella corrodens 

Enterobacter aerogenes 

Enterobacter cloacae 

Enterococcus faecalis 

Enterococcus faecium 

Enterovirus (Echovirus) 

Escherichia coli 

Fusobacterium 

nucleatum 

Haemophilus influenzae 

Haemophilus 

parainfluenzae 

Herpesvirus-1 

Histoplasma capsulatum 

Influenzavirus A 

Influenzavirus B 

Kingella kingae 

Klebsiella pneumoniae 

subsp ozaenae type 4 

Klebsiella pneumoniae 

subsp pneumoniae 

Lactobacillus acidophilus 

Legionella anisa 

Legionella bozemanii 

Legionella cherrii 

Legionella 

cincinnatiensis 

Legionella dumoffii 

Legionella erytha 

INTERFERERENDE STOFFER 

Potentielle, interfererende stoffer, som kan mødes i præparater fra de nedre luftveje, blev testet med BD ProbeTec 

ET LP analysen ved fravær af fokus eller ved tilstedeværelse af 750 CFU/reaktion af L pneumophila Ved fravær af 

fokus frembragte ingen af de testede stoffer et positivt resultat eller hæmmede IAC ved de koncentrationer, der er 

angivet i Tabel 5 Når fokus var i tilstedeværelse af stoffer ved de koncentrationer, der er angivet i Tabel 5, 

frembragte alle testede prøver et positivt resultat 

11 

Legionella fairfieldensis 

Legionella feeleii 

Legionella gormanii 

Legionella hackeliae 

Legionella jordanis 

Legionella longbeachae 

Legionella maceachernii 

Legionella oakridgensis 

Legionella sainthelensi 

Legionella spiritensis 

Legionella worsleiensis 

Moraxella osloensis 

Mycobacterium 

tuberculosis 

Mycoplasma 

pneumoniae 

Neisseria gonorrhoeae 

Neisseria meningitidis 

Neisseria mucosa 

Parainfluenza type 1 

Peptostreptococcus 

anaerobius 

Porphyromonas 

asaccharolytica 

Prevotella oralis 

Pseudomonas 

aeruginosa 

Respiratorisk 

syncytialvirus, lang 

stamme 

Rhinovirus 

Salmonella choleraesuis 

serotype Enteritidis 

Salmonella choleraesuis 

serotype Typhi 

Serratia marcescens 

Staphylococcus aureus, 

protein A-producerende 

Staphylococcus aureus, 

non-protein Aproducerende 

Staphylococcus 

epidermidis 

Stenotrophomonas 

maltophilia 

Streptococcus gruppe B 

Streptococcus mutans 

Streptococcus 

pneumoniae 

Streptococcus pyogenes 

Tatlockia (Legionella) 

micdadei 

Veillonella parvula

Tabel 5: BD ProbeTec ET LP analyse - Stoffer screenet for interferens 

Præparater fra nedre luftveje 

Testede stoffer Koncentration 

Fuldblod (heparin) 2,65% 

Lidokain 2 % 0,21% 

Spyt induktionopløsning (3 % NaCl) 0,32% 

Azithromycin 0,42 µg/mL 

Penicillin G 17 µg/mL 

Tetracyclin 2,3 µg/mL 

Doxycyclin 26,5 µg/mL 

Ciprofloxacin 4,88 µg/mL 

Mycoplasma pneumoniae 5 x 106 cells/mL 

Chlamydophila pneumoniae 1,06 x 107 EBs/mL 

Mycoplasma pneumoniae og Chlamydophila 

pneumoniae 

Hhv 1,06 x 107 celler/mL og 1,06 x 107 EB'er/mL 

Reproducerbarhed 

Reproducerbarheden hos BD ProbeTec ET LP analysen blev vurderet ved tre laboratorier ved at teste et panel 

bestående af 24 prøver, der blev spiket i PBS/BSA Panelet omfattede 12 prøver, der var negative for L pneumophila; 

tre lave (300 CFU/reaktion) og tre høje (500 CFU/reaktion) positive prøver af L pneumophila; og tre lave (hhv 30 

elementærlegemer (Elementary Bodies, EB)/reaktion, 300 CFU/reaktion, 900 celler/reaktion) og tre høje (hhv 50 

EB/reaktion, 500 CFU/reaktion, 1500 celler/reaktion) positive prøver hver indeholdende Chlamydophila pneumoniae 

(CP), L pneumophila (LP), og Mycoplasma pneumoniae (MP) En operatør pr sted testede panelerne en gang om 

dagen i tre dage Resultaterne er sammenfattet i Tabel 6 

Tabel 6: Reproducerbarhedsestimater efter prøveniveau af præparater fra de nedre luftveje 

Mellem dagInden 

for stedet Mellem stedet 

Panelmedlem N % korrekt Middel PAT SD % CV SD % CV 

LP-HIGH 27 100,0% 47,2 0,94 2,00 1,42 3,02 

LP-LOW 27 100,0% 44,8 0,44 0,98 2,06 4,59 

CP/LP/MP-HIGH 27 100,0% 46,2 1,13 2,45 1,79 3,88 

CP/LP/MP-LOW 26 

a En prøve ekskluderet fra analysen på grund af en procedurerelateret fejl 

BESTILLING 

De følgende BD ProbeTec ET produkter er disponible: 

Kat nr Beskrivelse 

440728 BD ProbeTec ET Legionella pneumophila (LP) Amplified DNA Assay 

440731 BD ProbeTec ET Respiratory and Media Diluent and Control Kit 

440457 BD ProbeTec ET Accessories Kit (10 primerlåg, 16 amplifikationsforseglere ½ og 8 engangsposer) 

440458 BD ProbeTec ET Pipette Tips 6 x 120 

440661 BD ProbeTec ET 2 mL Sample Tubes and Caps, 200 af hver 

440679 BD ProbeTec ET 2 mL Caps, 100 

440477 BD ProbeTec ET Instrument, uden for USA 

440478 BD ProbeTec ET Instrument, USA og Canada 

440479 BD ProbeTec ET Priming and Warming Heater, 220V 

440480 BD ProbeTec ET Priming and Warming Heater, 120V 

440487 BD ProbeTec ET Pipettor 

440502 

LITTERATUR 

BD ProbeTec ET Lysing Rack 

1 Cloud JL, Carroll KC, Pixton P, Erall M, Hillyard DR (2000) Detection of Legionella species in respiratory 

specimens using PCR with sequencing confirmation J Clin Micro 38:1709-1712 

2 Stout, JE, Yu, VL 2000 Legionellosis N Engl J Med 337: 682-687 

3 Bartlett, JG, Dowell, SF, Mandell, LA, File, TM, Musher, DM, Fine, MJ 2000 Guidelines from the Infectious 

Diseases Society of America - Practice guidelines for the management of community-acquired pneumonia in 

adults ClinInfect Dis 31:347-82 

4 National Committee for Clinical Laboratory Standards 2001 Approved Guideline M29-A2 Protection of 

laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed NCCLS, Wayne, Pa 

5 Garner JS 1996 Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, US Department of Health and 

Human Services, Centers for Disease Control and Prevention Guideline for isolation precautions in hospitals 

Infect Control Hospital Epidemiol 17: 53-80 

a 100,0% 43,0 0,00 0,00 2,59 6,01 

Negativ 108 100,0% 0,0 – – – – 

IAC med LP-negative prøver 108 100,0% 47,8 0,43 0,91 0,34 0,70 

12

6 US Department of Health and Human Services 1999 Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, 

HHS Publication (CDC), 4th ed US Government Printing Office, Washington, DC 

7 Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of 

workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the 

meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC) Official Journal L262, 17/10/2000, p 0021-0045 

8 Van der Zee, A, Peeters, M, de Jong, C, Verbakel, H, 2002 QIAGEN DNA extraction kits for sample preparation 

for Legionella PCR are not suitable for diagnostic purposes J Clin Microbiol 40 (3): 1126 

9 Evans, GE et al 2003 Contamination of QIAGEN DNA extraction kits with Legionella DNA J Clin Microbiol 

41 (7): 3452-3453 

10 Isenberg, HD (ed) 1992 Clinical Microbiology Procedures Handbook Vol 1 American Society for Microbiology, 

Washington, DC 

m 

e 

r 

A 

I 

0 Consult 

i 

Manufacturer / Výrobce / Producent / Fabrikant / Tootja / Valmistaja / Fabricant / Hersteller / 

ÊáôáóêåõáóôÞò / Gyártó / Ditta produttrice / Gamintojas / Producent / Fabricante / Výrobca / Tillverkare 

Use by / Spotøebujte do / Anvendes før / Houdbaar tot / Kasutada enne / Viimeinkäyttöpäivä / A utiliser 

avant / Verwendbar bis / Çìåñïìçßá ëÞîçò / Felhasználhatóság dátuma / Usare entro / Naudokite iki / 

Brukes før / Stosowaæ do / Utilizar em / Použite do / Usar antes de / Använd före / 

YYYY-MM-DD / YYYY-MM (MM = end of month) / 

RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = konec mìsíce) 

ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutning af måned) / 

JJJJ-MM-DD / JJJJ-MM (MM = einde maand) 

AAAA-KK-PP / AAAA-KK (KK = kuu lõpp) 

VVVV-KK-PP / VVVV-KK (kuukauden loppuun mennessä) 

AAAA-MM-JJ / AAAA-MM (MM = fin du mois) / 

JJJJ-MM-TT / JJJJ-MM (MM = Monatsende) / 

ÅÅÅÅ-ÌÌ-ÇÇ / ÅÅÅÅ-ÌÌ (ÌÌ = ôÝëïò ôïõ ìÞvá) / 

ÉÉÉÉ-HH-NN / ÉÉÉÉ-HH (HH = hónap utolsó napja) 

AAAA-MM-GG / AAAA-MM (MM = fine mese) / 

MMMM-MM-DD / MMMM-MM (MM = mënesio pabaiga) 

ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutten av måneden) 

RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec miesi¹ca) 

AAAA-MM-DD / AAAA-MM (MM = fim do mês) / 

RRRR-MM-DD / RRRR-MM (MM = koniec mesiaca) 

aaaa-mm-dd / aaaa-mm (mm = fin del mes) / 

ÅÅÅÅ-MM-DD / ÅÅÅÅ-MM (MM = slutet på månaden) 

Catalog number / Katalogové èíslo / Katalognummer / Catalogusnummer / Kataloogi number / Tuotenumero / 

Numéro catalogue / Bestellnummer / Áñéèìüò êáôáëüãïõ / Katalógusszám / Numero di catalogo / Katalogo 

numeris / Numer katalogowy / Número do catálogo / Katalógové èíslo / Número de catálogo 

Authorized Representative in the European Community / Autorizovaný zástupce pro Evropskou unii / 

Autoriseret repræsentant i EU / Erkend vertegenwoordiger in de Europese Unie / Volitatud esindaja 

Euroopa Nõukogus / Valtuutettu edustaja Euroopan yhteisössä / Représentant agréé pour la CEE / 

Autorisierte EG-Vertretung / ÅîïõóéïäïôçìÝíïò áíôéðñüóùðïò óôçí ÅõñùðáúêÞ Êïéíüôçôá / Hivatalos 

képviselet az Európai Unióban / Rappresentante autorizzato nella Comunità europea / Ágaliotasis atstovas 

Europos Bendrijoje / Autorisert representant i EU / Autoryzowane przedstawicielstwo w Unii Europejskiej / 

Representante autorizado na União Europeia / Autorizovaný zástupca v Európskom spoloèenstve / 

Representante autorizado en la Comunidad Europea / Auktoriserad representant i EU 

In Vitro Diagnostic Medical Device / Lékaøské zaøízení urèené pro diagnostiku in vitro / In vitro 

diagnostisk medicinsk anordning / Medisch hulpmiddel voor in vitro diagnose / In vitro diagnostika 

meditsiiniaparatuur / Lääkinnällinen in vitro -diagnostiikkalaite / Dispositif médical de diagnostic in 

vitro / Medizinisches In-vitro-Diagnostikum / In vitro äéáãíùóôéêÞ éáôñéêÞ óõóêåõÞ / In vitro 

diagnosztikai orvosi eszköz / Dispositivo medico diagnostico in vitro / In vitro diagnostikos prietaisas / 

In vitro diagnostisk medisinsk utstyr / Urz¹dzenie medyczne do diagnostyki in vitro / Dispositivo médico 

para diagnóstico in vitro / Medicínska pomôcka na diagnostiku in vitro / Dispositivo médico de 

diagnóstico in vitro / Medicinsk anordning för in vitro-diagnostik 

Temperature limitation / Teplotní omezení / Temperaturbegrænsning / Temperatuurlimiet / 

Temperatuuri piirang / Lämpötilarajoitus / Température limite / Zulässiger Temperaturenbereich / ¼ñéï 

èåñìïêñáóßáò / Hõmérsékleti határ / Temperatura limite / Laikymo temperatûra / 

Temperaturbegrensning / Ograniczenie temperatury / Limitação da temperatura / Ohranièenie teploty / 

Limitación de temperatura / Temperaturbegränsning 

Instructions for Use / Prostudujte pokyny k použití / Læs brugsanvisningen / Raadpleeg 

gebruiksaanwijzing / Lugeda kasutusjuhendit / Tarkista käyttöohjeista / Consulter la notice d’emploi / 

Gebrauchsanweisung beachten / Óõìâïõëåõôåßôå ôéò ïäçãßåò ÷ñÞóçò / Olvassa el a használati utasítást / 

Consultare le istruzioni per l'uso / Skaitykite naudojimo instrukcijas / Se i bruksanvisningen / Zobacz 

instrukcja u¿ytkowania / Consulte as instruções de utilização / Pozri Pokyny na používanie / Consultar 

las instrucciones de uso / Se bruksanvisningen 

13

m 

A 

Becton, Dickinson and Company 

7 Loveton Circle 

Sparks, Maryland 21152 USA 

800-638-8663 

BENEX Limited 

Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate 

Shannon, County Clare, Ireland 

Tel: 353-61-47-29-20 

Fax: 353-61-47-25-46 

B 

Alconox is a trademark of Alconox, Inc 

ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection 

QIAamp is a trademark of QIAGEN Inc 

CultureSwab is a trademark of Difco Laboratories, subsidiary of Becton, Dickinson and Company 

BD, BD Logo, BBL and ProbeTec are trademarks of Becton, Dickinson and Company © 2006 BD

BProbeTec ET Legionella pneumophila (LP) Amplified DNA ... - BD

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?