BProbeTec ET Legionella pneumophila (LP) Amplified DNA ... - BD

Program 5: Dette program aspirerer 100 µL; dispenserer 100 µL, og blander 50 µL tre gange Pipettorens display
skal vise som følger:
Fill 100 µL – SII
Dispense 100 µL – SII
Mix 50 µL – SIII
Zero (nul) (blinker skiftevis)
C Pladelayout:
Pladelayoutrapporten genereres fra BD ProbeTec ET instrumentet efter analysetype, præparatidentifikation,
kontrollotnumre, og kitlotnumre logges ind i systemet Pladelayoutrapporten viser det fysiske layout af præparater
og kontroller for hver plade, der skal testes Denne orientering bruges til både primermikrobrøndpladen og
amplifikationsmikrobrøndpladen For LP analysen er primermikrobrøndene fuldkommen grå mikrobrøndstrimler
Amplifikationsmikrobrøndene er gråstribede mikrobrøndstrimler
D Bearbejdning af præparater fra de nedre luftveje:
Procedurerelaterede bemærkninger:
• Gennemse QIAGEN QIAamp DNA fæces minikit håndbogen for vigtige procedurerelaterede bemærkninger og
forholdsregler inden De starter
• Fyld et vandbad med destilleret vand og opvarm til 70 °C (± 5 °C) inden De starter på bearbejdning af præparater
• Brug sprit-resistente penne til at mærke beholdere og glas
• Skift pipettespidser mellem alle væskeoverførsler Det anbefales at bruge spidser med aerosolbarriere
• Lad BD ProbeTec ET luftvejspræparat- og mediefortynder (CF/LP/MP) opnå stuetemperatur og bland forsigtigt
ved at vende den op og ned inden brug
• Afmål den nødvendige mængde BD ProbeTec ET luftvejspræparat- og mediefortynder (CF/LP/MP) ned i en ren
beholder Den nødvendige mængde bestemmes ved at bruge 0,4 mL for hvert præparat og tilsætte yderligere
1 - 2 mL, så det er let at pipettere Undgå kontaminering af fortynderen - Hæld ikke tiloversbleven
fortynder tilbage i flasken
1 Klargør QIAGEN reagenser (se "Klargøring af reagenser" i QIAamp DNA fæces minikit håndbogen)
2 Lad præparaterne nå stuetemperatur
3 Mærk et 2 mL glas med trykhætte for hvert præparat, der skal testes
Følgende trin skal udføres i et biologisk sikkerhedsskab (BSC):
4 Udsæt præparaterne for impulsslyngning i 5 - 15 s for at blande grundigt
5 Pipettér 350 µL af præparatet i det mærkede glas
BEMÆRK: Det kan være vanskeligt at pipettere nøjagtige prøver fra ekspektoratpræparater Hvis dette er tilfældet,
bruges gradueringerne på glassets side som en hjælp til at sikre, at det korrekte volumen tilføres i glasset
Alternativt bruges et glas, hvori der er blevet dispenseret 350 µL vand som en vejledning
6 SKIFT HANDSKER efter tilsætning af præparater
7 Pipettér 150 µL QIAGEN ASL buffer i hvert prøveglas
8 Pipettér 25 µL QIAGEN proteinase K i hvert prøveglas
9 Pipettér 500 µL QIAGEN ASL buffer i hvert prøveglas
10 Sæt hætte på hvert glas og foretag impulsslyngning i 5 s Anbring glassene i et vandbadstativ med et låg, der
kan skrues på
Følgende trin kan udføres uden for et biologisk sikkerhedsskab (BSC):
11 Inkubér glassene i det 70 °C (± 5 °C) vandbad i 15 min
12 Efter 15 min tages glassene op af vandbadet, og de centrifugeres (16 000 x g) i ca 5 s
13 Tag glassene ud af centrifugen Åbn hvert glas og tilsæt 500 µL af 96 - 100 % ethanol
14 Sæt igen hætte på hvert glas og udsæt det for impulsslyngning i 5 s
15 Centrifugér præparaterne (16 000 x g) i ca 5 s
16 Mærk en QIAGEN udskillelseskolonne og et opsamlingsglas for hvert præparat
17 Overfør 700 µL af præparatet i den korrekt mærkede QIAGEN udskillelseskolonne
18 Centrifugér glassene (16 000 x g) i 1 min
19 Overfør kolonnerne til de nye QIAamp opsamlingsglas Bortskaf glassene med filtratet
20 Overfør forsigtigt 700 µL mere af præparatet i den korrekte kolonne
21 Centrifugér glassene (16 000 x g) i 1 min
22 Overfør kolonnerne til rene QIAamp opsamlingsglas Bortskaf glassene med filtratet
23 Åbn QIAamp kolonnerne og tilsæt 500 µL QIAGEN AW1 vaskebuffer til hver
24 Centrifugér glassene (16 000 x g) i 1 min
25 Overfør kolonnerne til de nye QIAamp opsamlingsglas Bortskaf glassene med filtratet
26 Åbn QIAamp kolonnerne og tilsæt 500 µL QIAGEN AW2 vaskebuffer til hver
27 Centrifugér glassene (16 000 x g) i 3 min
28 Overfør kolonnerne til endelige, mærkede QIAamp opsamlingsglas Bortskaf glassene med filtratet
BEMÆRK: Opsamlingsglasset skal være mærket på dette tidspunkt
BEMÆRK: Vær omhyggelig med at sørge for, at der ikke hænger væske fast i bunden af kolonnen Overførsel af
residualvask i opsamlingsglasset kan påvirke resultaterne
29 Åbn kolonnerne og tilsæt 225 µL QIAGEN AE elueringsbuffer til hver
30 Inkubér ved stuetemperatur i 1 min
31 Centrifugér glassene (16 000 x g) i 1 min
32 Bortskaf kolonnerne
4