BProbeTec ET Legionella pneumophila (LP) Amplified DNA ... - BD

More documents

Recommendations

Info

Program 5: Dette program aspirerer 100 µL; dispenserer 100 µL, og blander 50 µL tre gange Pipettorens display skal vise som følger: Fill 100 µL – SII Dispense 100 µL – SII Mix 50 µL – SIII Zero (nul) (blinker skiftevis) C Pladelayout: Pladelayoutrapporten genereres fra BD ProbeTec ET instrumentet efter analysetype, præparatidentifikation, kontrollotnumre, og kitlotnumre logges ind i systemet Pladelayoutrapporten viser det fysiske layout af præparater og kontroller for hver plade, der skal testes Denne orientering bruges til både primermikrobrøndpladen og amplifikationsmikrobrøndpladen For LP analysen er primermikrobrøndene fuldkommen grå mikrobrøndstrimler Amplifikationsmikrobrøndene er gråstribede mikrobrøndstrimler D Bearbejdning af præparater fra de nedre luftveje: Procedurerelaterede bemærkninger: • Gennemse QIAGEN QIAamp DNA fæces minikit håndbogen for vigtige procedurerelaterede bemærkninger og forholdsregler inden De starter • Fyld et vandbad med destilleret vand og opvarm til 70 °C (± 5 °C) inden De starter på bearbejdning af præparater • Brug sprit-resistente penne til at mærke beholdere og glas • Skift pipettespidser mellem alle væskeoverførsler Det anbefales at bruge spidser med aerosolbarriere • Lad BD ProbeTec ET luftvejspræparat- og mediefortynder (CF/LP/MP) opnå stuetemperatur og bland forsigtigt ved at vende den op og ned inden brug • Afmål den nødvendige mængde BD ProbeTec ET luftvejspræparat- og mediefortynder (CF/LP/MP) ned i en ren beholder Den nødvendige mængde bestemmes ved at bruge 0,4 mL for hvert præparat og tilsætte yderligere 1 - 2 mL, så det er let at pipettere Undgå kontaminering af fortynderen - Hæld ikke tiloversbleven fortynder tilbage i flasken 1 Klargør QIAGEN reagenser (se "Klargøring af reagenser" i QIAamp DNA fæces minikit håndbogen) 2 Lad præparaterne nå stuetemperatur 3 Mærk et 2 mL glas med trykhætte for hvert præparat, der skal testes Følgende trin skal udføres i et biologisk sikkerhedsskab (BSC): 4 Udsæt præparaterne for impulsslyngning i 5 - 15 s for at blande grundigt 5 Pipettér 350 µL af præparatet i det mærkede glas BEMÆRK: Det kan være vanskeligt at pipettere nøjagtige prøver fra ekspektoratpræparater Hvis dette er tilfældet, bruges gradueringerne på glassets side som en hjælp til at sikre, at det korrekte volumen tilføres i glasset Alternativt bruges et glas, hvori der er blevet dispenseret 350 µL vand som en vejledning 6 SKIFT HANDSKER efter tilsætning af præparater 7 Pipettér 150 µL QIAGEN ASL buffer i hvert prøveglas 8 Pipettér 25 µL QIAGEN proteinase K i hvert prøveglas 9 Pipettér 500 µL QIAGEN ASL buffer i hvert prøveglas 10 Sæt hætte på hvert glas og foretag impulsslyngning i 5 s Anbring glassene i et vandbadstativ med et låg, der kan skrues på Følgende trin kan udføres uden for et biologisk sikkerhedsskab (BSC): 11 Inkubér glassene i det 70 °C (± 5 °C) vandbad i 15 min 12 Efter 15 min tages glassene op af vandbadet, og de centrifugeres (16 000 x g) i ca 5 s 13 Tag glassene ud af centrifugen Åbn hvert glas og tilsæt 500 µL af 96 - 100 % ethanol 14 Sæt igen hætte på hvert glas og udsæt det for impulsslyngning i 5 s 15 Centrifugér præparaterne (16 000 x g) i ca 5 s 16 Mærk en QIAGEN udskillelseskolonne og et opsamlingsglas for hvert præparat 17 Overfør 700 µL af præparatet i den korrekt mærkede QIAGEN udskillelseskolonne 18 Centrifugér glassene (16 000 x g) i 1 min 19 Overfør kolonnerne til de nye QIAamp opsamlingsglas Bortskaf glassene med filtratet 20 Overfør forsigtigt 700 µL mere af præparatet i den korrekte kolonne 21 Centrifugér glassene (16 000 x g) i 1 min 22 Overfør kolonnerne til rene QIAamp opsamlingsglas Bortskaf glassene med filtratet 23 Åbn QIAamp kolonnerne og tilsæt 500 µL QIAGEN AW1 vaskebuffer til hver 24 Centrifugér glassene (16 000 x g) i 1 min 25 Overfør kolonnerne til de nye QIAamp opsamlingsglas Bortskaf glassene med filtratet 26 Åbn QIAamp kolonnerne og tilsæt 500 µL QIAGEN AW2 vaskebuffer til hver 27 Centrifugér glassene (16 000 x g) i 3 min 28 Overfør kolonnerne til endelige, mærkede QIAamp opsamlingsglas Bortskaf glassene med filtratet BEMÆRK: Opsamlingsglasset skal være mærket på dette tidspunkt BEMÆRK: Vær omhyggelig med at sørge for, at der ikke hænger væske fast i bunden af kolonnen Overførsel af residualvask i opsamlingsglasset kan påvirke resultaterne 29 Åbn kolonnerne og tilsæt 225 µL QIAGEN AE elueringsbuffer til hver 30 Inkubér ved stuetemperatur i 1 min 31 Centrifugér glassene (16 000 x g) i 1 min 32 Bortskaf kolonnerne 4
33 Mærk et 2 mL glas med skruehætte for hvert præparat 34 Overfør 400 µL luftvejspræparat- og mediefortynder (CF/LP/MP) til hvert glas med skruehætte BEMÆRK: Fyld et vandbad med destilleret vand og bring badet i kog til brug ved trin 38 35 Overfør 200 µL eluat til det korrekt mærkede glas indeholdende 400 µL luftvejspræparat- og mediefortynder (CF/LP/MP) 36 Sæt hætte på glasset og udsæt det for impulsslyngning i 5 s 37 Præparér kontrollerne Se Præparering af kontroller fra de nedre luftveje (Afsnit E) 38 Overfør præparater og kontroller til et vandbadstativ 39 Anbring vandbadstativet i det kogende vandbad i 5 min 40 Når de 5 min er gået, tages vandbadstativet op og glassene får lov at afkøle ved stuetemperatur i mindst 15 min ADVARSEL: Vær forsigtig med at undgå forbrændinger fra det kogende vand, vandbadstativet eller flader af vandbadet, der kan være meget varme 41 Efter afkøling centrifugeres (16 000 x g) i ca 5 s BEMÆRK: Efter kogning af prøver: a De kan opbevares ved 18 - 33 °C i op til 6 h og kan testes uden at koges igen b De kan opbevares op til 3 dage ved 2 - 8 °C Prøver skal slynges og koges igen inden testning c De kan opbevares i op til 14 uger ved ≤ -20 ºC Prøver skal optøs ved stuetemperatur, slynges og koges igen inden testning 42 Præparaterne er klar til Testningsprocedure for BD ProbeTec ET LP analysen (Afsnit F) E Præparering af kontroller fra de nedre luftveje: 1 For hver kørsel (plade), der skal testes, klargøres et negativt kontrolglas (CF/LP/MP) og et positivt kontrolglas (CF/LP/MP) Hvis en plade indeholder mere end et reagenspakke-lotnummer, skal kontroller testes med hvert lot 2 Vend forsigtigt QIAGEN buffer AE og luftvejspræparat- og mediefortynder op og ned inden brug 3 Tag hætten af det negative kontrolglas (CF/LP/MP) 4 Med en ny pipettespids for hvert kontrolglas tilsættes 200 µL QIAGEN buffer AE 5 Med en ny pipettespids for hvert kontrolglas tilsættes 400 µL luftvejspræparat- og mediefortynder 6 Sæt hætten godt fast på glasset 7 Tag hætten af det positive kontrolglas (CF/LP/MP) 8 Med en ny pipettespids for hvert kontrolglas tilsættes 200 µL QIAGEN buffer AE 9 Med en ny pipettespids for hvert kontrolglas tilsættes 400 µL luftvejspræparat- og mediefortynder 10 Sæt hætten godt fast på glasset 11 Slyng kontrolglassene 5 s 12 Kontrollerne er klar til at blive kogt Se Bearbejdning af præparater fra de nedre luftveje (Afsnit D) F Testningsprocedure for BD ProbeTec ET LP analysen: BEMÆRK: Inden udførelse af testningsproceduren arrangeres de bearbejdede præparater og kontroller i et stativ, der kan håndtere 2 mL prøveglas, som fx BD ProbeTec ET 2 mL prøveglasstativet, som er kompatibelt med BD ProbeTec ET pipettoren 1 Fjern og bortskaf hætterne fra de afkølede præparater og kontroller 2 SKIFT HANDSKER, inden De fortsætter for at undgå kontaminering 3 Klargør primermikrobrøndpladen ved hjælp af pladelayoutrapporten - se Pladelayout (Afsnit C) 4 Forsegl mikrobrøndposerne igen som følger: a Anbring posen på en plan flade Hold den åbne ende fladt med den ene hånd b Med påføring af tryk køres fingeren hen over ydersiden af forseglingen fra den ene kant af posen til den anden c Se efter for at sikre, at posen er forseglet 5 Vælg Program 1 på BD ProbeTec ET pipettoren 6 Saml pipettespidserne op Udvid BD ProbeTec ET pipettoren ved at trække afstandsknappen helt ud BEMÆRK: Sørg for, at spidserne er sat forsvarligt på pipettoren, så lækage undgås 7 Aspirér 200 µL fra den første kolonne af prøver 8 Pres forsigtigt pipettoren sammen, lad pipettespidser berøre siderne af brøndene og dispensér 150 µL i den tilsvarende kolonne af primermikrobrønde (1 A - H) BEMÆRK: Pipettoren må ikke presses sammen over prøver eller mikrobrønde, da dette kan give kontaminering Pludselige bevægelser kan give dråber eller aerosoler 9 Kassér spidserne Tryk ned på pipetteringsudløseren for at nulstille pipettoren BEMÆRK: Kassér spidserne forsigtigt for at undgå små dråber eller aerosoler, som kan kontaminere arbejdsområdet 10 Saml nye spidser op, udvid pipettoren og aspirér 200 µL fra den anden kolonne af prøver 11 Pres forsigtigt pipettoren sammen, lad pipettespidser berøre siderne af brøndene og dispensér 150 µL i den tilsvarende kolonne af primermikrobrønde (2 A - H) 12 Kassér spidserne 13 Fortsæt med at overføre de resterende prøver til kørslen 14 Dæk primermikrobrøndpladen med primerlåget og lad pladen inkubere ved stuetemperatur i mindst 20 min (Kan inkubere op til 6 h) BEMÆRK: Sæt nye hætter på de bearbejdede prøver SKIFT HANDSKER 15 Når inkubationen af primeren er færdig, klargøres amplifikationsmikrobrøndpladen Konfigurér amplifikationsmikrobrønden i en plade, der matcher pladelayoutrapporten (samme som primerpladen) Forsegl mikrobrøndposerne igen som beskrevet i punkt 4 16 Tag låget af primermikrobrøndpladen og overfør pladen til primervarmeapparatet Anbring STRAKS amplifikationsbrøndpladen i opvarmerapparatet for at forvarme 17 Indstil uret til 10 min (BEMÆRK: Dette punkt er vigtigt for tiden) 5
Page 1 and 2: BProbeTec ET Legionella pneumophila
Page 3: 2 Prøveopbevaring og -transport
Page 7 and 8: Præparatbearbejdningskontroller Pr
Page 9 and 10: Hyppighed 60 50 40 30 20 10 0 Figur
Page 11 and 12: BEMÆRK: PCR metoden anvendt til at
Page 13 and 14: 6 US Department of Health and Human

BProbeTec ET Legionella pneumophila (LP) Amplified DNA ... - BD

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?