You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
Nespecifické složky buněčné<br />
imunity<br />
M.Průcha
Nespecifická imunita<br />
Vzájemná provázanost nespecifické –<br />
přirozené a adaptivní – specifické<br />
imunity<br />
Lymfatické orgány a tkáně<br />
Imunokompetentní <strong>buňky</strong>
Nespecifická imunita buněčná<br />
Fagocytující <strong>buňky</strong> (PMN a<br />
monocyty/makrofágy<br />
<strong>NK</strong> <strong>buňky</strong> – Natural Killers<br />
Uplatnění – virové, parazitární a<br />
plísňové infekce, protinádorová imunita<br />
Transplantace – odvržení štěpu<br />
hostitelem
Fagocytující <strong>buňky</strong>
Fagocytující <strong>buňky</strong><br />
Schopnost fagocytózy<br />
Komplexní proces<br />
Chemotaxe, rozpoznání, pohlcení,<br />
zpracování, usmrcení a produkce látek s<br />
dalším působením
„Technické“ vybavení fagocytů<br />
Adhezivní molekuly<br />
Receptory<br />
Enzymatický systém<br />
Cytoplasmatická granula s<br />
enzymatickou aktivitou<br />
Proteolytické enzymy
Fagocytóza a zánět<br />
Fagocytóza jako součást komplexního<br />
procesu – zánětu<br />
Zánět – primárně kompenzační<br />
fyziologický mechanismus<br />
Uvolnění kyslíkových radikálů a enzymů<br />
z granulí<br />
Poškozování okolních tkání
Fagocytóza a zánět<br />
Produkce zánětlivých mediátorů –<br />
produktů metabolismu kys.<br />
arachidonové<br />
Prostaglandiny, leukotrieny,<br />
tromboxany<br />
Stimulace a regulace rozsahu a intenzity<br />
zánětu
CpG motiv<br />
DNA<br />
TLR9<br />
Bakteriální<br />
lipopeptidy<br />
TLR2<br />
TLR4<br />
LPS<br />
Jádro<br />
LBP + CD14<br />
MYD88<br />
IRAK<br />
TLR6<br />
TRAF6<br />
NIK<br />
IKK<br />
1kB<br />
NFkB<br />
Bakteriální<br />
peptidoglykany<br />
TLR2<br />
Glykoproteiny<br />
parazitů<br />
Receptory<br />
pro komplement<br />
MHC II IL-1, IL-12, TNF<br />
B7, CD40 IL-6
Monocyto-makrofágový<br />
systém<br />
Monocyty a tkáňové makrofágy,<br />
dendritické <strong>buňky</strong><br />
Diferenciace monocytů na tkáňové<br />
makrofágy a dendritické <strong>buňky</strong><br />
Tkáňová specificita makrofágů –<br />
Langerhansovy bb- kůže, Kupfferovy<br />
<strong>buňky</strong> v játrech, plíce – alveolární<br />
makrofágy, oligodendroglie
Monocyto-makrofágový<br />
systém<br />
Funkce – zpracování a předkládání<br />
antigenů lymfocytům<br />
Nezbytný předpoklad k vyvolání<br />
specifické imunitní odpovědi<br />
Aktivace monocytů – produkce cytokinů<br />
(aktivace specifických složek imunity a<br />
zprostředkování celkové reakce<br />
organismu – IL-1, IL-6, TNF
Polymorfonukleáry<br />
Poločas rozpadu 12 hodin, množství 3-<br />
8x10 9 /L<br />
Fagocytují – neutrofily a eosinofily<br />
Neutrofily – zastoupení v periferní krvi –<br />
40-60%, eo cca 3%<br />
Reakce na insult – vyplavování buněk<br />
Poškození vlastní tkáně
<strong>NK</strong> <strong>buňky</strong><br />
Přirození zabíječi<br />
CD 16/56, 5-20% lymfoidních buněk<br />
Hrubá granula v cytoplasmě<br />
Protinádorová imunita, protivirová<br />
imunita<br />
Regulace zánětlivé odpovědi<br />
Perforiny
<strong>NK</strong> <strong>buňky</strong><br />
Cytotoxická aktivita <strong>NK</strong> buněk<br />
Membránové interakce – receptory <strong>NK</strong> a<br />
terčových buněk<br />
Solubilní faktory uvolňované z<br />
cytoplasmatických granulí<br />
Aktivita je zesilována působením<br />
cytokinů (IL-2)
Mastocyty<br />
Reakce na velice různorodé podněty –<br />
fyzikální, chemické<br />
Lokalizace převážně v podslizniční tkáni<br />
Interakce membránových receptorů<br />
Aktivace pomocí IgE protilátek, toxiny<br />
baktérií, LPS, C systém
Mastocyty<br />
Uvolňování prozánětlivých cytokinů –<br />
TNF<br />
Granula obsahují serotonin, histamin,<br />
kininy<br />
Po aktivaci produkce metabolitů kys.<br />
arachidonové – leukotrieny,<br />
prostaglandiny
Bazofilní leukocyty<br />
Cirkulace v krevním řečišti<br />
Obdobné vlastnosti mastocytům a<br />
stejné mechanismy aktivace<br />
Efektorové <strong>buňky</strong> časné fáze alergické<br />
reakce I. typu<br />
Exprese receptoru pro Fc fragment IgE
Erytrocyty<br />
Hlavní fyziologická úloha – doprava O 2<br />
Nemá buněčné jádro, není schopen syntézy<br />
DNA, RNA,proteinů, lipidů<br />
Vstupní brána virových a parazitárních<br />
patogenů<br />
Vysoký počet převyšuje počet buněk<br />
imunokompetetních<br />
Velmi pestrý repertoiar povrchových molekul
Erytrocyty - funkce<br />
Vychytávání komplexů antigen-protilátka +<br />
Neutralizace chemokinů, zpomalení pohybu<br />
leukocytů v kapilárách, zvyšování jejich<br />
adheze na endotel +<br />
Povrchové molekuly jsou receptory pro<br />
infekční agens -<br />
Umožňujíukrýváníinfekčních agens před<br />
výkonnými složkami imunity -<br />
Hemoglobin je zdrojem Fe pro bakterie -
Trombocyty<br />
Nejmenší krevní element<br />
Diferenciace z megakaryocytů<br />
Množství – 150-320x10 9 /L<br />
Zapojení do procesů homeostázy, ,<br />
zánětlivé reakce<br />
Vyzrávání prostřednictvím cytokinů
Trombocyty<br />
Vnitřní výbava – aktin a myosin<br />
Dva druhy sekrečních granulí<br />
Sekreční – produkce ADP a Ca<br />
Alfa granula – von Willebrandův faktor<br />
Funkce – krevní hemostáza, zánět<br />
Obrovské množství membránových<br />
molekul s adhézními vlastnostmi
Trombocyty – funkce<br />
Homeostáza<br />
Adherence na poškozenou cévní stěnu<br />
Tvorba trombů<br />
Adheze a agregace (receptory pro<br />
kolagen)<br />
Zánět – terminální fáze zánětu –<br />
uvolňování biologicky aktivních látek<br />
Aktivace buněčné složky zánětu
Fibroblasty<br />
Patří mezi nejpočetnější buněčné<br />
elementy<br />
Vysoce aktivní <strong>buňky</strong><br />
Produkce proteolytických<br />
metaloproteináz a jejich inhibitorů<br />
Úloha v regulaci zánětlivé odpovědi<br />
TGFβ – stimuluje aktivitu fibroblastů<br />
Modulace proliferace a produkce<br />
mezibuněčné hmoty
Fibroblasty – proteinázy a<br />
jejich inhibitory<br />
Serinové proteinázy (neutrofilní<br />
elastáza, proteináza3, katepsin,<br />
tryptáza<br />
Inhibitoři serinovýchproteináz–alfa1<br />
AT, alfa2 makroglobulni<br />
Cysteinové proteinázy – katepsiny<br />
B,H,C,L,S,K<br />
Inhibitoři cysteinových proteináz -<br />
cystatiny
Fibroblasty – proteinázy a jejich<br />
inhibitory<br />
Matrixové metaloproteinázy –<br />
kolagenázy, gelatinázy, matrixin,<br />
membránové MMP<br />
Tkáňové inhibitory matrixových<br />
metaloproteináz<br />
Kaspázy 1-12 (klíčové složky apoptózy)<br />
Úloha v obranném zánětu<br />
Úloha v poškozujícím zánětu –<br />
autoimunitní onem – RA, RS
Cytotoxicita <strong>NK</strong> buněk<br />
Metodologická náročnost<br />
Stanovení pomocí radioaktivně<br />
značeného chromu<br />
Neradioaktivní metody – kolorimetrické<br />
a mikroskopické nebo cytometrické<br />
metody
<strong>NK</strong> <strong>buňky</strong> – cytotoxický test<br />
Cytotoxický test založený na uvolňování 51 Cr<br />
Indukce <strong>NK</strong> buněk – IL-2<br />
Příprava vhodné cílové <strong>buňky</strong> – buňka<br />
infikovaná nebo nádorově změněná<br />
Cílové <strong>buňky</strong> jsou kultivovány s Cr, který<br />
vstoupí do <strong>buňky</strong><br />
Konstantní množství cílových buněk je pak<br />
inkubováno s populací efektorových buněk- <strong>NK</strong><br />
Po 6 hodinách jsou odebrány vzorky a<br />
stanovena aktivita gama záření
<strong>NK</strong> <strong>buňky</strong> – cytotoxický test<br />
Musí být laboratoř schválená pro<br />
skladování a práci s radioaktivními<br />
látkami<br />
Vysoké nároky na pracnost, sterilitu<br />
prostor
<strong>NK</strong> <strong>buňky</strong> cytotoxický test<br />
Klinické aplikace<br />
Defekty v systému perforin/granzym B<br />
Herpetické infekce – EBV<br />
Použití nesrážlivé krve a separované<br />
periferní mononukleární <strong>buňky</strong><br />
Výzkum – protiinfekční a protinádorová<br />
imunita
Bazofilní leukocyty<br />
Cirkulace v krevním řečišti<br />
Obdobné vlastnosti mastocytům a<br />
stejné mechanismy aktivace<br />
Efektorové <strong>buňky</strong> časné fáze alergické<br />
reakce I. typu<br />
Exprese receptoru pro Fc fragment IgE
Bazofily – funkční testy<br />
Přecitlivělost na hmyzí jedy, potraviny,<br />
antibiotika<br />
Při přemostění 2 sousedních molekul IgE<br />
alergenem dochází k aktivaci bazofilů<br />
Exprese povrchového receptoru CD63 na<br />
buněčné membráně<br />
Průtoková cytometrie – BAT – basophil<br />
activation test<br />
CAST – analýza mediátorů uvolněných<br />
procesem degranulace
Bazofily funkční test<br />
Princip – inkubace plné krve pacienta se<br />
susp. Alergenem, pozit. a negat. ko (anti<br />
IgE)<br />
Po inkubaci a lýze erytrocytů je měření<br />
provedeno pomocí průtokového<br />
cytometru nebo se stanoví koncentrace<br />
uvolněných mediátorů<br />
Dobrá klinická vypovídavost<br />
Rozhodování o dalším průběhu SIT
Eosinofily<br />
ECP – eosinofilní kationický protein<br />
Granulární protein eosinofilů<br />
Marker aktivace eosinofilů<br />
Korelace se stupněm zánětu<br />
ECP je toxický pro parazity, zpomaluje<br />
krevní srážlivost<br />
Metoda stanovení – chemiluminiscence
Change language