Ⅴ.ビブリオ属の検査法

3.ビブリオ属の検査法
1)使用培地
① 増菌培地:アルカリペプトン水(栄研)
(食塩ポリミキシンブイヨン)(栄研、ニッスイ)
② 分離培地:TCBS 寒天(栄研、ニッスイ、極東等)
クロモアガービブリオ(関東化学)
③ 生化学的性状確認培地:
* TSI 寒天、LIM 培地、VP 半流動培地、普通寒天斜面培地は、1%NaCl 加
* 耐塩性試験培地(0,6,8,10%NaCl 加 Tryptone water)
2)検査法
① コレラ菌
【便】 【食品、水等】
直接培養 増菌培養
TCBS ｱﾙｶﾘﾍﾟﾌﾟﾄﾝ水
37℃、 37℃、8-15h
一夜 分離培養
TCBS
37℃、一夜
疑わしいコロニーためし凝集(O1,O139)
(+) (-)
確認培養 コレラ菌陰性
TSI,LIM (他のﾋﾞﾌﾞﾘｵの可能性)
VP,NA
耐塩性試験(O,6,8,10%)
37℃、一夜
性状確認(表5)、血清型別(表1)
毒素試験(衛研で実施)
V.4
① 検体の処理(増菌培養)
【便】検体量:0.5~1g、増菌培地:10ml
【食品】検体量:10~25g(状況により)
増菌培地:90~225ml
【河川水、海水等】検体量:~2000ml
A;遠心分離法
検体を 8,000rpm で 30 分程度遠心分
離した沈査を試料とする。
B;ﾌｨﾙﾀｰ濾過法
検体を吸引濾過(ﾎﾟｱｰｻｲｽﾞ 0.22-0.45
μm)し、濾紙を試料とする。
* A または B の試料を増菌培地 10~
100ml に入れ増菌培養する。
C;2倍濃厚法
検体に2倍濃度に調整した増菌培地
を等量加え、増菌培養する。
②分離培養:増菌培養液1ｴｰｾﾞ画線培養
③ 疑わしいｺﾛﾆｰためし凝集、性状試験
* TCBS 上のコレラ菌様黄色ｺﾛﾆｰを
感作ﾗﾃｯｸｽ a、ｺﾚﾗ菌診断用血清、
O139 抗血清でｽﾗｲﾄﾞ凝集試験。
* 凝集(+):ｺﾚﾗ菌陽性の疑い。生化学
的性状、CT 産生試験を行い決定する。
* 凝集(-):ｺﾚﾗ菌陰性。必要に応じ、
生化学的性状を調べ菌種を特定。
④ 毒素産生試験
* RPLA 法、PCR 法で行う。(衛研で行う)