BVT MAM COLOR N5 kasutusjuhend

285 avenue de Rome F83500 La Seyne sur Mer FranceTel:+33 (0)494.10 58 94. Fax:+33 (0)494.10 58 90e-mail: bvt@bvt.frSPEED® Mam Color(patent No 98/04421)Identifitseerimine ja antibiootikumitundlikkuse testimine_____________________________________________________________________Ainult in vitro kasutamiseksS PEED® MAM COLOR TÄHTSUSSpeed® Mam Colorit kasutatakse otse piimaproovis, see võimaldab veterinaaril tuvastada 24 tunni jooksul bakterinakkustmääral, mis on võrdne tavaliselt aktsepteeritud spetsialiseeritud laboratooriumi piiridega (3) (10 2 UFC/ml) või suurem.Tuvastamine hõlmab järgmisi protseduure :→ Identifitseerimine:Nakkuslike mikroorganismide identifitseerimine võimaldab planeerida ravistrateegiat, mis on kohandatud vastavaltepidemioloogilisele olukorrale veisekasvatuses: määratleda globaalne nakkuse vastu võitlemise plaan koos kasutatavatepreventiivsete meetmete, laktatsiooni või kinnisperioodil (1,2).→ Antibiootikumitundlikkuse testimine :Speed® Mam Colori meetod on kasutatav otse piimaproovist; kasutatakse kultuurisöödet, mis on lähedane looduslikeletingimustele, milles nakkus areneb (2,4). Vastupidiselt standardsele tundlikkuse testimisele laboris võtab Speed® MamColor seega arvesse sünergistlikke või antagonistlikke toimeid bakterite vahel ning samuti inokulaadi toimet (tegelikuproovis esineva bakterite kontsentratsiooni toime).Mikroorganismi(de) resistentsus või tundlikkus saadakse tõepoolest tingimustes, mis on võrreldavad nakatumisegaloomulikes tingimustes ning aitavad saavutada terapeutilist edu.SPEED® MAM C OLOR MEETODI PÕHIMÕTEIgasugune bakterite kasv vastab bakterite määrale, mis on suurem (või võrdne) 10 2 UFC/ml ja saadakse pärast 18...24 tundikestnud inkubeerimist BVTuve inkubaatoris (48 tundi nõrgestatud bakterite puhul).→ Mikroorganismide identifitseerimineIdentifitseerimissüvendid sisaldavad valiksöödet. Iga süvend vastab ühele bakterile ja spetsiifilisele värvuse muutusele.→ Antibiootikumitundlikkuse määramineAntibiootikum on efektiivne, kui värv ei muutu (punane).Antibiootikum ei ole efektiivne, kui värv muutub punasest kollaseks.Värvi muutumine punasest kollaseks vastab bakterite kasvule selles süvendis.PROOVI VÕTMINEOn oluline, et piimaproov võetakse enne igasugust ravi. Proov tuleb võtta aseptilistes tingimustes.Piimaproovi peab hoidma 48 tundi temperatuuril 4...8 °C, mis on vajalik aeg selleks, et hinnata esimese töötlemiseefektiivsust ja vajadust läbi viia test. Sellisel juhul kasutatakse seda proovi testi tegemiseks.Tulemuste kvaliteet põhineb proovi võtmisel.TESTIMISEESKIRI(vaadake testimisprotseduuri)Iga testi jaoks vajate:• 1 Speed® Mam Color plaati • viaali “Supp Staph”• 1 plaadilugemisstatiivi• parafiinõliviaali• 1 uut plastpipetti• 1 Speed® Mam kultuurisöödet; kui see muutub pooltahkeks, siis võtkesee külmkapist välja ja laske toatemperatuuril soojeneda 10 minutit BVTuve inkubaatoril.ENNE TESTIMIST INKUBEERIGE PIIMA 1 … 2 TUNDI BVT TUVE INKUBAATORIL

Enne testimistTestimine toimub pärast piimaproovi võtmistLisage 3 tilka mitteinokuleeritud Sensi-Vet Colori söödet esimesse süvendisse ILSama pipetiga lisage 3 tilka piimaSensi-Vet Colori söötmele.Jätta piim 1…2tunniks BVTuvele1Sensi-Vetplaadiettevalmistamine2ProoviettevalmistamineMitteinokuleeritud Speed® Mam söödePiimaproovETAPP A3Speed® Mam plaadi inokuleerimineETAPP BLisage 3 tilka inokuleeritud Speed® Mam söödet igasse süvendissePEALE IP-süvendi.ETAPP CLisage 3 tilka Supp Staphi ainult Supp Staphi süvendisse.Etapp D Kleepige kleepuv etikett plaadile tagasi. Kirjutage looma nimi ja kuupäev.Asetage Speed® Mam plaat selle plaadilugemisstatiivile. Inkubeerige BVTuve inkubaatoril.Lisage 2 tilka parafiinõli igasse süvendisse PEALE E.coli ja PSEUDOsüvendite.4LugemineTundlikkuse testimine: 18…24 tundiIdentifitseerimine: 28…48 tundiMycoplasma: 1 nädal

1. ETAPP: PLAADI ETTEVALMISTAMINE• Kleepuv etikett tuleb hoolikalt kleepida statiivile, et seda hiljem uuesti lugeda.• Esimesse inkubatsioonipiiri (I) süvendisse lisage uue plastpipetiga 3 tilka mitteinokuleeritud Speed® Mamkultuurisöödet.2. ETAPP: PROOVI ETTEVALMISTAMINE• Homogeenige piim, pöörates katseklaasi aeglaselt mitu korda üles-alla.• Sama pipetiga kandke 3 tilka piima Speed® Mam kultuurisöötmele.• Homogeenige inokuleeritud Speed® Mam kultuurisöödet, pöörates seda aeglaselt mitu korda üles-alla.3. ETAPP: PLAADI INOKULEERIMINE• a) Sensi-Veti sööde: sama pipetiga lisage 3 tilka inokuleeritud söödet (2. etapp) igasse süvendisse PEALEinkubatsioonipiiri (IP) süvendi.• b) Supp Staphi viaal (roheline etikett): lisage sama pipetiga 3 tilka Supp Staphi AINULT STAPH-i süvendisse.• c) Parafiinõli: lisage 2 tilka parafiinõli igasse süvendisse PEALE E.COLI ja PSEUDO süvendite.• d) Kleepige kleepuvad etiketid tagasi plaadile, kirjutage looma nimi ja kuupäev, asetage Sensi-Veti plaatplaadilugemisstatiivile ning inkubeerige BVTuve inkubaatoril.4. ETAPP: LUGEMINE• Lugege pärast 24-tunnist inkubeerimist. Kui tulemus on negatiivne, oodake veel 24 tundi, et tulemust kinnitada.• Mycoplasma süvendit lugege pärast 7...10-päevast inkubeerimist.TULEMUSTE INTERPRETEERIMINE(vaadake värvuste selgitamse lehte)PÕHIMÕTE : 2 sõltumatut testi • antibiootikumitundlikkuse testimine• mikroorganismi(de) identifitseerimine TUNDLIKKUSE TESTIMINE• IL süvend : - Värv muutub punasest kollaseks- Näitab lugemisaega- Vajab inkubeerimist BVTuve inkubaatoril 18 … 24 tundi• süvend: - Negatiivne kontroll- Värvimuutust ei ole, jääb alati punaseks- Lugeda võrdlussüvendit• süvend: - Värvus muutub mikroorganismide kasvamise tõttu ( nakkus) punasest kollaseks.• Antibiootikumidega süvendid- Punane värvus muutub kollaseks = mikroorganismide kasvamine = resistentsed mikroorganismid = antibiootikum ei oleefektiivne.- Punane värvus süvendis ei muutu = mikroorganismide kasv puudub = tundlikud mikroorganismid = efektiivneantibiootikum.• ErijuhtumidKui süvendis ja/või IL-i süvendis ei toimu mingit värvuse muutust 24 tunni jooksul, inkubeerige plaati veel 24 tundi,et kinnitada negatiivset tulemust. IDENTIFITSEERIMINEJälgige värvuse muutust identifitseerimissüvendites (vaadake identifitseerimiseks värvuste selgituse lehte).• Iga identifitseerimissüvend vastab spetsiifilisele mikroorganismile.• Identifitseerimine toimub vastavalt värvuse muutusele vastavas süvendis.• Vastupidiselt plaadi osale, kus määrati tundlikkust, mille puhul IL-süvendi lugemine põhineb värvuse muutusel,saadakse identifitseerimine pärast 18…48-tunnist inkubeerimist BVTuve inkubaatoril. See ei sõltu mitte ainultmikroorganismide kontsentratsioonist, vaid ka iga identifitseerimissüvendi spetsiifilisusest.• Erijuhtumid :

E.coli: värvuse muutus esineb 2 süvendis: ENTEROBACTERIAE ja E.coli (E.coli on enterobakter). E.coli süvendis võiblõpuks tekkida sinakasroheline värvus Pseudomonase tõttu. Sellisel juhul mõjutab see kogu süvendit ja mitte ainultpindmist kihti (nagu E.coli puhul).Mycoplasma: lugeda pärast 7...10-päevast inkubeerimist. Igasugune värvuse muutus, mis esineb 24 tunni jooksul, ei oletingitud Mycoplasmast, kuid on kindlasti tingitud Staphylococcuse suurest kontsentratsioonist.Listeria, Streptococcus: Kui värvus muutub samaaegselt Listeria ja Streptococcuse süvendis, peab identifitseeriminetoimuna vastavalt laboratooriumi kinnitusele.Väga harvadel juhtudel võib Streptococcus muuta värvust Listeria süvendis. . ÜLDISED MÄRKUSED• Mycoplasma ja PseudomonasTundlikkuse profiili ei saa määrata nende mikroorganismide kasvamise alusel.Mycoplasma: raviks kasutada makroliite (TÜLOSIIN).Pseudomonas: raviks kasutada KOLISTIINI või uue põlvkonna kinoloone.• Piiratud juhul: mittetäielik tulemus- Tundlikkuse profiili on võimalik saada ilma identifitseerimiseta ja kahepoolselt, sest need tulemused vastavad plaadikahele erinevale osale.- Täieliku tulemuse saamiseks peate testima uuesti, kasutades järgmist spetsiaalset meetodit.Võtke uue pipetiga süvendist, kus on näha kasvamist, läbi parafiinikihi 1 tilk, lisage see uuele Speed Mamkultuurisöötmele ja järgige testimiseeskirja. Alustage 1. etapist.S OOVITUSED• Stabiilsus/kõlblikkusaegAlates valmistamiskuupäevast 14 kuud temperatuuril 4...8 °C.Kõlblikkusaja lõpukuupäev on kirjutatud igale viaalile ja karbile.• Muud soovitusedÄrge segage reagente erineva numbriga partiidest.pakend• 5 Speed® Mam Color plaati• 5 Speed® Mam kultuursöödet• 1 roheline "Supp Staph" viaal• 2 plaadilugemisstatiivi,• 5 ühekordselt kasutatavat pipetti• 1 parafiinõli viaal• 1 plakat, 1 visuaalne testimiseeskiri• 1 värviline tulemuste interpreteerimise leht• 5 tulemustelehte farmerileKASUTATUD KIRJANDUS(1) FABRE.JM, MORVAN.H, LEBREUX.B, HOUFFSCHMITT.PH et BERTHELOT.X"Estimation de la fréquence des différents germes responsables de mammites en France. Partie 1 : mammites cliniques".Bulletin des GTV, Sept 97, 3-B-552, 17-23(2) GUILLON.V "Traitement des mammites : connaître la cause est gage d'efficacité" La Dépêche vétérinaire, 1er Nov1997, n°521, 14-15(3) "Le diagnostic bactériologique des mammites" Congrès de Buiatrie, Paris 19-20 Nov 1991. INRA. SGTV.(4) SANDHOLM.M, KAARTINEN.L and PYORALAS "Bovine mastitis-Why does antibiotic therapy not always work ?An overview" J.Vet. Pharmacal Therap, 1990, 13, 248-260.

Speed® Mam ColorVISUAALSE INTERPRETEERIMISE TABELANTIBIOOTIKUMITUNDLIKKUSE TESTIMINEMIKROORGANISMID PUUDUVADLISTERIA värvus muutub tumedaksMYCOPLASMA (lugeda 7 … 10 päeval)punane sadeENTEROBACTERIES värvus muutub kollaseksSTREPTOCOCCUS pinna värvus muutubsiniseksSTAPHYLOCOCCUS värvus muutub kollaseks(Lugeda 48 – 72h)PSEUDOMONAS värvus muutub siniseksESCHERICHIA COLI pinna värvus muutubsiniseksMYCOPLASMA ja PSEUDOMONAS puhul ei esine mingit kasvu Sensi-Veti plaadi tundlikkuse määramise osas.Näidis :STREPTOCOCCUS jaSTAPHYLOCOCCUSESCHERICHIA COLI jaSTREPTOCOCCUSErijuhtudel vaadake komplektis olevat dokumendatsiooni.