Diagnostyka nicieni - Instytut Ochrony Roślin - Poznań

12 Diagnostyka nicieni – pasożytów roślin objętych regulacjami prawnymi
• przyłączania starterów w 57°C przez 1 min,
• elongacji w 72°C przez 1 min.
– końcowej elongacji w 72°C przez 10 min.
Długość produktu dla wszystkich nicieni z rodzaju Meloidogyne powinna wynieść
ok. 380 nt.
UWAGA:
w każdej analizie powinny być nastawione trzy reakcje kontrolne
– pozytywna (zawierająca pewny materiał genetyczny pochodzący z gatunku, któ-
rego obecność próbujemy stwierdzić, np. DNA z M. hapla przy identyfikacji M.
hapla)
– negatywna (zawierająca DNA izolowany z innego gatunku)
– kontrola odczynnikowa (czyli próba zawierająca wszystkie odczynniki użyte do
w/w analiz, bez DNA).
Próby b i c powinny dać wynik negatywny.
3.2.3. Analiza wyników
Rozdział elektroforetyczny. Wyniki reakcji PCR sprawdza się poprzez rozdzie-
lenie produktów amplifikacji w 2% żelu agarozowym. Przykładowy wynik uzyskany
w amplifikacji nicieni M. hapla, M . chitwoodi, M. fallax przedstawia ryc. 1.
Ryc. 1. Rozdział elektroforetyczny produktów amplifikacji PCR nicieni metodą opisaną przez Berry i wsp.
(2008): 1) M. hapla, 2) M. chitwoodi, 3) M. fallax, K– – próba odczynnikowa, M – marker masy
cząsteczkowej.