Η ανάγκη χρήσης Ï€ÏÏŒÏ„Ï Ï€Ï‰Î½ μικροβιακών ÏƒÏ ÏƒÏ„Î·Î¼Î¬Ï„Ï‰Î½ στη μελέτη ...

Ο ΜΕΤΑΣΧΗΜΑΤΙΣΜΟΣ ΝΗΜΑΤΟΕΙΔΩΝ (Α. nidulans)
Μεθοδολογία όμοια αλλά και με σημαντικές διαφορές του μετασχηματισμού ζυμών
Επιλογή μετασχηματισμένων: γενετική (λειτουργική) συμπλήρωση μεταλλαγής.
Βασική προϋπόθεση: Στέλεχος μεταλλαγμένο στο γονίδιο επιλογής Χ - και πλασμίδιο με
φυσιολογικό γονίδιο επιλογής Χ + . Σπανιότερα χρησιμοποιούνται και γονίδια
ανθεκτικότητας σε αντιβιοτικά όπως η ολιγομυκίνη, φλυομυκίνη, υγρομυκίνη.
Διάκριση υπολειπόμενων και κυρίαρχων γενετικών στοιχείων επιλογής
μετασχηματισμένων στελεχών
Mετασχηματισμός
πρωτoπλαστ
πλαστών)σεσε ισοοσμωτικό περιβάλλον. Το κυτταρικό
τοίχωμα καταστρέφεται με ενζυμική πέψη (μέσω
λυτικών ενζύμων).
Οι πρωτόπλαστες, που μπορεί να προέρχονται από μυκήλιο (πολυπύρηνοι) ή
κονιδιοσπόρια (1-2 πυρήνες),
απομονώνονται από το μείγμα, προστίθεται DNA
(πλασμίδιο) και PEG. Η σύντηξη πρωτόπλαστων οδηγεί σε «είσοδο» του DNA.
Αναγέννηση πρωτόπλαστων – μετασχηματισμένων πυρήνων
Χαμηλής – Μέσης απόδοσης : 10-10
4 t/μg g DNA. Εξαρτημένη από το πλασμίδιο.
Πλασμίδια ενσωμάτωσης: : 10-1000
1000 τ/μg
Πλασμίδια αυτόνομης αντιγραφής: : 100.000 τ/μg
Αλλες μέθοδοι: Ηλεκτροδιάτριση, Βιολιστικός βομβαρδισμός. Οχι ιδιαίτερα
αποδοτικότεροι των κλασσικών μεθόδων.