Fungicid fra reker - Nordic Innovation

Måling af chitosan efter fixering i træ
Ved undersøgelse af chitosans binding til træ og andre
materialer vil det være en stor fordel, hvis mængden af
chitosan i f. eks. udvaskningsvand kan måles. Dette vil
betyde, at det ikke vil være nødvendigt at benytte den langsomme
og relativt dyre (arbejdskrævende) metode som et
biologisk assay er. I dette tilfælde skal træ imprægneres
med chitosan, og herefter eventuelt fixeres og udvaskes.
Hvis der kan findes en metode til måling af koncentration af
chitosan i opløsning vil vi kunne måle koncentrationen i
udvaskningsvandet. Alternativet til disse målinger er, at
træklodserne udsættes for vækst af trænedbrydende
svampe, så effekten af imprægnering kan ses direkte på
svampenes nedbrydning af træet. Denne sidste metode til
undersøgelse af fixering er selvsagt langsommelig, idet der
må regnes med en inkubering på svamp i 16 uger før vi
kender effekten af imprægnering, fixering og udvaskning.
Der findes imidlertid ingen metoder til analyse af chitosan
koncentration i opløsning, hvorfor en sådan metode måtte
udvikles.
Det vides, at nogle farvestoffer, eksempelvis Erytrosin B,
kan farve chitin, den fuldt acetylerede type af chitosan.
Chitin er imidlertid uopløselig i vand. Den primære ide i
udviklingen at dette assay var, at tilsætte farve (Erytrosin B)
til opløsninger af chitosan (ved pH-værdier under 5, hvor
chitosan er fuldt opløseligt) i en række kendte
koncentrationer, bundfælde chitosanen ved at hæve pH til 9,
hvor chitosan er uopløseligt. Ved tilstedeværelse af farve i
denne proces er forventningen, at der bindes farve til
chitosan, når denne bringes på uopløselig form. Herved kan
der fjernes en farvemængde, der er proportional med den
mængde chitosan der udfældes. Hermed kan chitosankoncentrationen
i en opløsning kvantificeres ved at måle
ændring i farveintensitet efter at pH er hævet og
chitosan/farvekomplex er bundfældet ved nedspinning.
Vi kan altså måle absorbansen på supernatanten, og
derudfra fremstille en standardkurve ud fra en række kendte
koncentrationer af chitosan. Jo mere farve supernatanten
indeholder, jo mindre farve vil være bundet til chitosan, dvs.
jo mindre chitosan vil den givne væske have indeholdt. Når
man så har en væske med en ukendt koncentration af
chitosan, kan man måle absorbansen af denne, og derefter
aflæse koncentrationen af chitosan på standardkurven.
Metode
Chitosantype TD 018, TMD 029 og TM 615 i
koncentrationerne
10 g/L; 1 g/L; 0,5 g/L; 0,1 g/L; 0,05 g/L; 0,02 g/L;
O,1 M eddikesyre, pH 5
Erytrosin B, 90 mg/l.
Trisbuffer 0,1 M ved pH 7, pH 8 og pH 9
15