ColiBox - et kombineret koncept til filtrering og ... - Naturstyrelsen

More documents

Recommendations

Info

Kinetik 20 ColiBox For at finde den optimale substratkoncentration for FIB:Lite, blev reaktionshastigheden undersøgt for forskellige substratkoncentrationer i intervallet 50-‐400 µM. Figur 10.4 viser eksempler på sammenhængen mellem koncentration af fluorescerende substrater og reaktionshastigheden (RFU/time) for vandprøver med fækal forurening. Figur 10.4. Sammenhængen mellem tre substratkoncentrationer (S1, S2, S3) og reaktionshastighed for vandprøver med fækale bakterier. Den optrukne linie (”model”) viser tilnærmet Michaelis-‐ Menten kinetik.
21 ColiBox På baggrund af data i Figur 10.4 blev der beregnet tilnærmede halvmætningskonstanter (Km(app)) for de forskellige substrater ved brug af tilnærmet Michaelis-‐Menten kinetik. De beregnede halvmætningskonstanter lå i området 53 -‐ 144 µm (Tabel 10.1). Den maksimale reaktionshastighed fås således ved brug af substratkoncentrationer >100 µM hvilket blev implementeret i de efterfølgende forsøg. Tabel 10.1. Beregnede halvmætningskonstanter (Km(app)) og maksimale hastigheder (Vmax) for substrater i FIB:Lite. S1 S2 S3 Km(app.) [µM] 144 88 53 Vmax [RFU/time] 2,65·∙10 5 Inkubationstemperatur 3,89·∙10 4 5,23·∙10 4 Temperaturen kan have stor indflydelse på hastigheden af enzymkatalyserede reaktioner i bakterier. For at finde den optimale inkubationstemperatur for FIB:Lite blev der foretaget forsøg, hvor parallelle vandprøver med fækal forurening blev filtreret og inkuberet med FIB:Lite reagenser ved inkubationstemperaturer mellem 16 og 37 C (Figur 10.5). Forsøgene viste den største aktivitet (hastighed) for FIB:Lite reaktionerne ved temperaturer omkring 31 °C (Figur 10.5). Efterfølgende blev der lavet opfølgende forsøg, hvor et mindre temperaturinterval omkring 31 °C blev undersøgt (Figur 10.6). I disse forsøg sås der ikke nogen større forskel i reaktionshastighed i intervallet mellem 28 og 32 °C og det blev efterfølgende besluttet at bruge 30 °C som generel inkubationstemperatur. Figur 10.5. Effekt af inkubationstemperatur på reaktionshastighed i FIB:Lite .
Page 1 and 2: ColiBox -‐ et kombineret koncep
Page 3 and 4: 1. Indhold 3 ColiBox 2. Forord.....
Page 5 and 6: 3. Sammenfatning 5 ColiBox I dette
Page 7 and 8: 4. Summary 7 ColiBox In this projec
Page 9 and 10: 5. Indledning ”The reliable suppl
Page 11 and 12: 6. Formål 11 ColiBox ColiBox proje
Page 13 and 14: 8. Fluorescerende enzymsubstrater 1
Page 15 and 16: Figur 9.2. Prøvetagning fra boring
Page 17 and 18: 17 ColiBox Parallelle målinger af
Page 19: 10.1 Optimering af FIB:Lite 19 Coli
Page 23 and 24: 10.2 Validering af FIB:Lite 23 Coli
Page 25 and 26: Tabel 10.2. Positive og negative re
Page 27 and 28: 27 ColiBox signal og baggrund 2 for
Page 29 and 30: Figur 10.12. Filtreringsenhed med h
Page 31 and 32: Figur 10.15. ColiBox inkubationsbok
Page 33 and 34: Generel fremgangsmåde for FIB-
Page 35 and 36: Generel fremgangsmåde for MST:Lite
Page 37 and 38: Figur 12.5. Oversigt over vandbehan
Page 39 and 40: 39 ColiBox drikkevand med og uden t
Page 41 and 42: 41 ColiBox I den forbindelse kunne
Page 43 and 44: 15. Kilder 43 ColiBox BEK nr. 1024.

ColiBox - et kombineret koncept til filtrering og ... - Naturstyrelsen

You also want an ePaper? Increase the reach of your titles

Delete template?

Save as template?