Insulin ELISA - IBL international

Insulin ELISA (RE53171)
DEUTSCH
1. EINLEITUNG
1.1. Zweckbestimmung
Der IBL Insulin ELISA ist ein Einzymimmunoassay zur quantitativen In-vitro-Bestimmung von Insulin in
Serum und Plasma.
1.2. Zusammenfassung und Erklärung
Das Hormon Insulin ist hauptverantwortlich für die Kontrolle des Glukosestoffwechsels. Es wird als Vorläufer
Proinsulin in den β-Zellen der Langerhans’schen Inselzellen synthetisiert und weiter umgewandelt in C-
Peptid und Insulin. Beide werden in equimolaren Mengen in die Portalzirkulation abgesondert. Das fertige
Insulinmolekül umfasst zwei Polypeptidketten, die A-Kette und die B-Kette (dementsprechend 21 und 30
Aminosäuren). Die beiden Ketten sind miteinander durch zwei intermolekulare Disulfidbrücken verbunden.
Die A-Kette enthält zudem selbst eine Disulfidbrücke.
Die Insulinausschüttung wird hauptsächlich durch die Glukosekonzentration im Plasma kontrolliert, wobei
das Hormon Insulin für eine Reihe wichtiger Stoffwechselvorgänge verantwortlich ist. Seine Hauptfunktion
besteht in der Kontrolle der Glukoseaufnahme und -verwendung aus dem peripheren Gewebe durch die
Glucosetransporter. Diesen sowie weiteren hypoglykämischen Aktivitäten, wie z.B. der Hemmung der
hepatischen Gluconeogenese und Glycogenolyse wird von den hyperglykämischen Hormonen,
einschließlich Glucagon, Epinefrin (Adrenalin), Wachstumshormon und Cortisol entgegengewirkt.
Die Insulinspiegel sind stark reduziert bei insulin-abhängigem Diabetes mellitus (IDDM) und anderen
Erkrankungen wie z.B. Hypophyseninsuffizienz. Bei nicht-insulin-abhängigem Diabetes mellitus (NIDDM),
Adipositas, Insulinom und einigen endokrinen Dysfunktionen wie dem Cushing’s Syndrom und Akromegalie
sind die Insulinspiegel erhöht.
2. TESTPRINZIP
Die Wells der Mikrotiterplatten sind mit einem monoklonalen Antikörper beschichtet, der gegen eine
definierte Antikörper-Bindungsstelle des Insulin-Moleküls gerichtet ist.
Die Proben werden in die beschichteten Wells gegeben und mit einem Enzym-Konjugat inkubiert. Das
Konjugat enthält einen anti-Insulin-Antikörper, der mit Biotin konjugiert ist. Das nicht gebundene Konjugat
wird durch Waschen der Wells entfernt.
In einer zweiten Inkubation bindet ein Streptavidin-Peroxidase-Enzymkomplex an den biotinylierten anti-
Insulin-Antikörper. Nach einem weiteren Waschschritt wird die Substratlösung zugegeben und die
Farbentwicklung nach einer definierten Zeit gestoppt. Die Intensität der gebildeten Farbe ist proportional der
Insulin-Konzentration in der Probe. Die Extinktion wird bei 450 nm mit einem Mikrotiterplattenleser
gemessen.
3. VORSICHTSMAßNAHMEN
1. Dieser Kit ist nur zum in vitro diagnostischen Gebrauch geeignet.
2. Alle Bestandteile dieses Testkits, die humanes Serum oder Plasma enthalten, wurden mit FDAgeprüften
Methoden auf HIV I/II, HbsAg und HCV getestet und als negativ bestätigt. Jedoch sollten alle
Bestandteile im Umgang und bei der Entsorgung wie mögliche Gefahrenstoffe betrachtet werden.
3. Nur die gültige, im Testkit enthaltene, Arbeitsanleitung verwenden.
4. Das Mikrotiterplate enthält abbrechbare Streifen. Ungenutzte Wells müssen bei 2-8 °C im
verschlossenen Folienbeutel gelagert und im mit gelieferten Rahmen verwendet werden.
5. Das Pipettieren von Proben und Reagenzien muss so schnell wie möglich und in derselben Folge für
jeden Schritt durchgeführt werden.
6. Verwenden Sie Reservoire nur für einzelne Reagenzien. Dies gilt besonders für die Substratsreservoire.
Es kann sein, dass ein Reservoir welches zuvor für die konjugierte Lösung verwendet wurde, und nun
zur Abgabe einer Substratslösung verwendet wird, die, Lösung färbt. Keine Reagenzien zurück in die
Fläschchen geben, da es sonst zu einer kontamination der Reagenzien kommen kann.
7. Mischen Sie den Inhalt der Wells gründlich, um gute Testergebnisse sicherzustellen. Die Mikrowells
nicht wiederverwenden.
8. Die Wells während des Tests nicht austrocknen lassen; die Reagenzien sofort nach dem waschen
zugeben.
9. Die Reagenzien vor Testbeginn auf Raumtemperatur (21-26°C) bringen. Die Temperatur beeinflusst die
Messung des Absorptionsvermögens im Assay. Die Werte der Patientenproben werden dadurch jedoch
nicht beeinflusst.
Vers. 7.0-1 2011/06 1 / 8