Textbausteine Arbeitsanleitung - IBL international

Arbeitsanleitung
cGMP RIA
Radioimmunoassay zur quantitativen in-vitro-Bestimmung
von cGMP in humanem Plasma und Urin. Der Test kann außerdem für
Forschungszwecke in anderem biologischen Material
eingesetzt werden.
RE29071
RE29075
100 500
2-8°C
I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H
Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0)40-53 28 91-0 IBL@IBL-International.com
D-22335 Hamburg, Germany Fax: +49 (0)40-53 28 91-11 www.IBL-International.com

(RE29071/RE29075)
DEUTSCH
1. ZWECKBESTIMMUNG
Radioimmunoassay zur quantitativen in-vitro-Bestimmung von cGMP in humanem Plasma und Urin. Der
Test kann außerdem für Forschungszwecke in anderem biologischen Material eingesetzt werden.
2. KLINISCHE BEDEUTUNG
Das zyklische Guanosin-Monophosphat (cGMP) spielt ähnlich dem cAMP eine Rolle in der hormonellen
Regulation von biologischen Prozessen (1, 2). In verschiedenen Systemen zeigten cGMP und cAMP ein
antagonistisches Verhalten (3). cGMP fungiert als Mediator bei Steroidhormon-induzierten Wachstums- und
Differentiationsprozessen (4, 5, 6).
Mit größtem Interesse wird derzeit die Funktion des cGMPs als "second messenger" des atrialen
natriuretischen Peptides (ANP) verfolgt. Die potente diuretische, natriuretische und vasorelaxierende
Wirkung des ANP konnte 1981 von de Bold nachgewiesen werden (7). Außerdem beeinflusst ANP in
einigen speziellen Fällen die Produktion der Steroide positiv oder negativ (8, 9, 10, 11).
Durch ANP wird eine membrangebundene Form der Guanylatzyklase aktiviert. Das aus der Zelle
geschleuste cGMP kann, wie ANP selbst, in Körperflüssigkeiten, wie Plasma oder Urin bestimmt werden.
Jede Erhöhung der ANP-Plasmaspiegel ist von einer Erhöhung der cGMP-Plasmaspiegel und einer
vermehrten Ausscheidung von cGMP im Urin gefolgt. (12). Der cGMP-Anstieg ist eine spezifische Antwort
auf die ANP-Stimulation. Dies wurde durch die Beobachtung bestätigt, dass in der Ratte monoklonale
Antikörper gegen ANP die ANP-stimulierte Erhöhung der cGMP-Konzentration in Plasma und Urin hemmen
(13).
Bei ANP-Bolusinjektionen steigen die cGMP-Spiegel nur dann an, wenn der ANP-Bolus auch von einer
Natriurese gefolgt ist (12). Damit scheint cGMP auch ein guter biologischer Marker für die Adaption des
Körperhaushaltes an das ANP-System zu sein. Schließlich bietet die Bestimmung von cGMP in Urin die
Möglichkeit, Aussagen über ANP zu treffen, wenn Blutabnahmen schwierig bzw. unmöglich sind, wie dies
bei Neu- oder Frühgeborenen der Fall ist. Eine frühe Diagnostizierung von Herzinsuffizienzen ist somit
denkbar.
3. TESTPRINZIP
Die Methode basiert auf dem von Steiner et al. beschriebenen Radioimmunoassay für zyklische Nukleotide
(14). Die hohe Spezifität, Empfindlichkeit (5 fmol/Röhrchen) sowie die geringe Störanfälligkeit des Tests
erlauben die direkte Bestimmung von cGMP in Plasma- und Urinproben. Die sonst übliche, zeitraubende
und aufwendige Extraktion und die anschließende Acetylierung der Proben sind nicht erforderlich. In der
Forschung ist der Test auch bestens geeignet für die Bestimmung von cGMP im Guanylatzyklaseassay in
Gegenwart hoher Konzentrationen an GTP und verschiedener GTP-Derivate.
Bei dem IBL-Radioimmunoassay für cGMP werden in einem Teströhrchen die Probe bzw. der Standard mit
125 I-markiertem cGMP und vorpräzipitiertem Antikörper (Immunkomplex aus erstem und zweitem Antikörper)
über Nacht inkubiert. In dieser Gleichgewichtsreaktion konkurrieren das unmarkierte cGMP
(Standard/Probe) und der radioaktive cGMP Tracer um die Bindung an dem spezifischen Antikörper. Die
Inkubation wird beendet durch das Zumischen einer kopräzipitierenden Lösung (Trennreagenz) und
nachfolgender Zentrifugation. Es bildet sich ein sehr fester Niederschlag. Nach quantitativem Dekantieren
des gut ablaufenden Überstandes (freie Aktivität) wird in dem Niederschlag die gebundene Aktivität in einem
Gammacounter bestimmt. Die Menge an gebundener Aktivität ist ein Maß für den cGMP-Gehalt der Probe,
der an einer (simultan erstellten) Standardkurve abgelesen wird.
4. WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN
1. Nur zum In-vitro-Gebrauch. Nur für den Gebrauch durch Fachpersonal.
2. Vor der Testdurchführung sollte die Arbeitsanleitung vollständig und sorgfältig gelesen werden und
verstanden worden sein. Die gültige Version aus dem Kit verwenden.
3. Im Falle einer erheblichen Beschädigung der Testpackung ist IBL bzw. der jeweilige Lieferant innerhalb
einer Woche nach Empfang der Ware schriftlich zu benachrichtigen. Beschädigte Komponenten dürfen
nicht zur Testdurchführung verwendet werden, sondern sollten solange aufbewahrt werden, bis der
Transportschaden endgültig geregelt ist.
4. Chargen-Nummer und Verfallsdatum beachten. Es dürfen keine Reagenzien aus unterschiedlichen
Chargen in einem Test verwendet werden. Verfallene Reagenzien dürfen nicht verwendet werden.
5. Gute Laborpraxis und Sicherheitsrichtlinien beachten. Je nach Bedarf sollten Laborkittel, Einmal-
Latexhandschuhe und Schutzbrillen getragen werden.
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(RE29071/RE29075)
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6. Reagenzien dieses Kits, die Gefahrstoffe enthalten, können Reizungen der Augen und der Haut
hervorrufen. Siehe Angaben in KOMPONENTEN DES KITS und auf den Etiketten.
Sicherheitsdatenblätter für dieses Produkt sind auf der IBL-Homepage zum Download verfügbar oder
auf Anfrage direkt von IBL erhältlich.
7. Chemikalien und vorbereitete oder gebrauchte Reagenzien sind unter Beachtung der jeweiligen
nationalen Bestimmungen als Gefahrstoffabfall zu entsorgen.
8. Für den Umgang mit radioaktiven Stoffen gelten die Vorschriften der Strahlenschutzverordnung.
Radioaktive Reagenzien dürfen nur an Personen abgegeben werden, die im Besitz einer gültigen
Umgangsgenehmigung sind.
9. Radioaktives Material sollte nur in besonders gekennzeichneten, regelmäßig überwachten Bereichen
des Labors, die nur befugtem Personal zugänglich sind, gehandhabt werden. Einmal-Geschirr und -
Abdeckmaterial verwenden. Die übliche Schutzausrüstung ist zu tragen (Laborkittel, Einmal-
Handschuhe und Dosimeter). Verschüttete Tropfen sofort aufnehmen und kontaminierten Bereich mit
einem Dekontaminierungsmittel reinigen. Jegliches kontaminierte Material ist als radioaktiver Abfall zu
behandeln.
10. Einige Reagenzien enthalten Natriumazid (NaN 3 ) als Konservierungsmittel. Bei Kontakt mit den Augen
oder der Haut gründlich mit Wasser abspülen. NaN 3 kann mit Blei und Kupfer explosive Azide bilden.
Bei Entsorgung über das Abwasser gut spülen, um Azidanreicherung zu vermeiden.
5. LAGERUNG UND HALTBARKEIT
Der Kit wird bei Umgebungstemperatur angeliefert und sollte bei 2-8°C gelagert werden. Vor Hitze und
direkter Sonneneinstrahlung schützen. Hinweise zur Lagerung und Haltbarkeit der Proben und vorbereiteten
Reagenzien sind den entsprechenden Kapiteln zu entnehmen.
6. PROBENGEWINNUNG UND -AUFBEWAHRUNG
Plasma (EDTA)
Die üblichen Vorsichtsmaßnahmen bei der Blutabnahme sind einzuhalten. Die chemische Integrität der
Blutproben muss vom Zeitpunkt der Blutabnahme bis zur Testdurchführung erhalten bleiben. Keine
hämolytischen, ikterischen oder lipämischen Proben verwenden. Getrübte Proben sollten vor der
Testdurchführung zentrifugiert werden, um Partikel zu entfernen.
Lagerung:
-20°C (aliquotiert)
Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen.
Haltbarkeit:
6 mon
Wiederholtes Auftauen und Einfrieren vermeiden.
Urin
Spontanurin oder 24 h-Sammelurin können verwendet werden. Das Gesamtvolumen über 24 h sollte in
einer Flasche unter Vorlage von 10 - 15 mL 6 N HCl als Konservierungsmittel gesammelt und gemischt
werden. Gesamtvolumen bestimmen zur späteren Auswertung des Tests.
Proben vor Gebrauch mischen und zentrifugieren.
Zur Konservierung der Proben 0.1 % NaN 3 oder 1 mL/100mL 5-10 M HCl zugeben.
Lagerung: 2-8°C -20°C (aliquotiert)
Haltbarkeit: 48 h 6 mon
Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen.
Wiederholtes Auftauen und Einfrieren vermeiden.
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(RE29071/RE29075)
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7. KOMPONENTEN DES KITS
RE29071 RE29075 Symbol Komponente
1 x 11 mL 5 x 11 mL TRACER LYO
1 x 22 mL 1 x 110 mL ANTISERUM
1 x
6 x 1 mL
1 x
2 x 0.2 mL
1 x
6 x 1 mL
1 x
2 x 0.2 mL
CAL A-F LYO
CONTROL 1+2 LYO
1 x 11 mL 1 x 55 mL SEPREAG CONC
1 x 50 mL 1 x 250 mL ASSAYBUF
1 x 2 mL 1 x 2 mL NSB
cGMP 125 I-Tracer, lyophilisiert
Aktivität: RE29071: < 150 kBq (4 µCi); RE29075: < 750 kBq
(20 µCi). Enthält: 0.1 % NaN 3 .
cGMP Antiserum
Gebrauchsfertig. Enthält: cGMP Antiserum (Kaninchen), Anti-
Kaninchen Antiserum (Ziege), 0.1 % NaN 3 .
Standard A-F, lyophilisiert
Enthält: 0.1 % NaN 3 . Genaue Konzentrationen siehe
Fläschchenetiketten oder QC Zertifikat.
Kontrolle 1+2, lyophilisiert
Enthält: 0.1 % NaN 3 . Konzentrationen / Akzeptanzbereiche siehe
QC-Zertifikat.
Trennreagenz, Konzentrat (10x).
Enthält: 0.9 % NaN 3 .
Assaypuffer
Gebrauchsfertig. Enthält: Phosphatpuffer pH 7.0, 0.1 % NaN 3 .
NSB Lösung
Gebrauchsfertig. Enthält: 0.1 % NaN 3 .
8. ZUSÄTZLICHES MATERIAL (NICHT IM KIT ENTHALTEN)
1. Pipetten (Multipette Eppendorf oder vergleichbare Produkte, < 3% VK). Volumina: 20; 100; 200; 1000 µL
2. NaCl Lösung, 0.9 %
3. Vortex-Mischer
4. Zentrifuge (vorzugsweise mit Kühlung); 2000 x g
5. Gammacounter
6. Bidest. oder deionisiertes Wasser
7. Papiertücher, Pipettenspitzen, Stoppuhr
9. HINWEISE ZUR TESTDURCHFÜHRUNG
1. Fehler bei der Handhabung der Proben oder Abweichungen von der beschriebenen Testdurchführung
können die Ergebnisse verfälschen. Die angegebenen Pipettiervolumina, Inkubationszeiten,
Temperaturen und Vorbereitungsschritte sind unbedingt gemäß Arbeitsanleitung einzuhalten. Nur
kalibrierte Pipetten und Geräte verwenden.
2. Sobald mit der Testdurchführung begonnen wird, sollten alle Arbeitsschritte ohne Unterbrechung
durchgeführt werden. Es ist sicherzustellen, dass alle benötigten Reagenzien, Geräte und Hilfsmittel zur
rechten Zeit zur Verfügung stehen. Alle Reagenzien und Proben müssen auf Raumtemperatur (18-25°C)
gebracht und vor Gebrauch vorsichtig ohne Schaumbildung gemischt werden.
3. Kontaminationen der Reagenzien, Pipetten und Wells/Röhrchen sind zu vermeiden. Neue Einmal-
Pipettenspitzen für jede zu pipettierende Komponente und jede Probe verwenden. Die Deckel der
Fläschchen nicht vertauschen. Nicht benötigte Fläschchen immer verschlossen halten. Wells/Röhrchen
oder Reagenzien dürfen nicht wiederverwendet werden.
4. Es wird empfohlen, Doppelbestimmungen durchzuführen, um eventuelle Pipettierfehler zu erkennen.
5. Alle Röhrchen sollten eindeutig beschriftet werden.
6. Die Erdbeschleunigung einer Zentrifuge (g) entspricht nicht der Umdrehungszahl (U/min), sondern muss
in Abhängigkeit vom Rotordurchmesser der verwendeten Zentrifuge berechnet werden.
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10. TESTVORBEREITUNGEN
10.1. Vorbereitung lyophilisierter oder konzentrierter Komponenten
Verd. /
rekonst.
1 mL
Komponente mit Diluent
SEPREAG
CONC
9 mL
bidest.
Wasser
TRACER LYO 11 mL ASSAYBUF
CAL A-F LYO
CONTROL 1+2
LYO
1.0 mL
0.2 mL
bidest.
Wasser
bidest.
Wasser
1:10
Bemerkungen
Am ersten Tag
herstellen.
Ohne Schaumbildung
mischen.
Trübe Lösung.
Verschließen und
vorsichtig mischen.
10 min stehen lassen.
Ohne Schaumbildung
mischen.
Lagerung
2-8°C
-20°C
(aliquotiert)
-20°C
(aliquotiert)
-20°C
(aliquotiert)
1 w
bis
Verfallda
tum
2 mon
2 mon
Wiederholtes Auftauen und Einfrieren vermeiden.
10.2. Probenverdünnung
Probe
Plasma
Urin
immer
NaCl Lösung
0.9 %
1:50
Bemerkungen
Keine trüben Proben
verwenden. Proben vor dem
Verdünnen zentrifugieren.
z.B. 20 µL + 1 mL
Gründlich mischen.
Proben mit Konzentrationen über dem höchsten Standard müssen weiter verdünnt werden.
Lagerung
-20°C
(aliquotiert)
Verhältnis
Haltbarkeit
zu
Verhältnis
mit
verdünnen
Die Proben werden direkt gemessen.
Haltbarkeit
6 mon
11. TESTDURCHFÜHRUNG
11.1. Erster Tag
1. Je 100 µL von jedem Standard in die entsprechenden Röhrchen pipettieren.
2. Je 20 µL von jeder Plasmaprobe, verdünnten Urinprobe und Kontrolle in die entsprechenden
Röhrchen pipettieren.
3. Je 100 µL Assaypuffer in die NSB-Röhrchen und B 0 -Röhrchen sowie in die Röhrchen der Plasmaund
Urinproben und Kontrollen pipettieren. Keinen Assaypuffer in die Röhrchen der Standards
pipettieren.
4. NSB Solution vor Gebrauch mischen. 200 µL NSB-Lösung in die NSB-Röhrchen pipettieren.
5. Je 100 µL vorbereiteten 125 I-Tracer in jedes Röhrchen pipettieren. Zwei Röhrchen für die
Totalaktivität (T) vorsehen.
6. Antiserum vor Gebrauch mischen. Je 200 µL Antiserum in jedes Röhrchen pipettieren. (Ausser T,
ausser NSB.)
7. Alle Röhrchen vortexen. 20-24 h bei 2-8°C inkubieren.
11.2. Zweiter Tag
1. Je 1 mL vorbereitetes kaltes Trennreagenz in jedes Röhrchen pipettieren. (Ausser T.) Vortexen.
2. Alle Röhrchen für 15 min bei 2000-3000 x g zentrifugieren. Der Gebrauch einer Kühlzentrifuge wird
empfohlen.
3. Röhrchen vorsichtig dekantieren. (Ausser T.) Auf Zellstoff über-Kopf trocknen lassen. Restflüssigkeit
gründlich entfernen.
4. Die Röhrchen in einem Gammacounter für 1 min messen.
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12. QUALITÄTSKONTROLLE
Die Testergebnisse sind nur gültig, wenn der Test gemäß der vorliegenden Arbeitsanleitung abgearbeitet
wurde. Ferner muss der Anwender die GLP- Regeln (Good Laboratory Practice) und andere einschlägige
Normen und Gesetze beachten. Alle Kit-Kontrollen müssen innerhalb der Akzeptanzbereiche, die auf den
Etiketten und dem QC-Zertifikat angegeben sind, gefunden werden. Wenn die Kriterien nicht erfüllt sind,
sind die Ergebnisse ungültig und der Test sollte wiederholt werden. Jedes Labor sollte darüber hinaus
eigene bekannte Proben als weitere Kontrollen mitführen. Es wird empfohlen, an den einschlägigen
Ringversuchen teilzunehmen.
Bei Abweichungen sind die folgenden Fehlermöglichkeiten zu überprüfen: Haltbarkeit der (vorbereiteten)
Reagenzien, Lagerungsbedingungen, Pipetten, Geräte und Hilfsmittel, Inkubationsbedingungen und
Waschmethoden.
13. TESTAUSWERTUNG
B/B 0 % für jeden Standard, jede Kontrolle und Probe wie folgt berechnen:
CPM (Standard / Probe) CPM ( NSB)
B/B 0 % =
x100
CPM ( Bo)
CPM ( NSB)
CPM ( Bo)
CPM ( NSB)
CPM ( NSB)
B 0 /T und NSB/T berechnen: B 0 /T% =
x100 NSB/T =
x 100
CPM (Totalakt.( T ))
CPM (Totalakt.( T ))
Die Standardkonzentrationen sind in fmol/100µL angegeben. Die endgültige Konzentration wird wie folgt
berechnet:
Konz.( fmol /100L)
Standard (pmol/mL) =
100
Die erhaltenen %B/B 0 der Standards (y-Achse, linear) gegen deren Konzentration (x-Achse, logarithmisch)
auftragen, entweder auf semi-logarithmischem Papier oder durch ein entsprechendes Computerprogramm.
Bei Verwendung eines Computerprogramms werden die Cubic-Spline-Methode, 4-Parameter-Analyse (linlog)
oder Logit-Log-Berechnung empfohlen.
Zur Berechnung der Standardkurve sollten alle Werte der Standards verwendet werden (bei Doppelwerten
kann ein offensichtlicher Ausreißerwert eliminiert und stattdessen der plausiblere Einzelwert verwendet
werden).
Die Konzentrationen der Proben können direkt von der Standardkurve abgelesen werden.
Die Menge an cGMP in den Proben und Kontrollen wird in 20 µL bestimmt, die Menge in den Standards
dagegen in 100 µL. Daher müssen die Ergebnisse der Proben und Kontrollen mit dem Faktor 5 multipliziert
werden.
Im Falle von verdünnten Proben müssen die Werte mit dem entsprechenden Verdünnungsfaktor multipliziert
werden.
Wegen der Verdünnung der Urinproben müssen die erhaltenen Urinwerte mit dem Faktor 50 multipliziert
werden.
Proben, die oberhalb des höchsten Standards gemessen werden, müssen wie in TESTVORBEREITUNGEN
beschrieben verdünnt und erneut analysiert werden.
Typische Standardkurve
(Beispiel. Nicht zur Testauswertung verwenden!)
Standard cGMP Mittelwert B/T (%) B/B 0 (%)
(pmol/mL) cpm
T 34389
NSB 333 0.97
B 0 10380 29.2 100.0
A 0.06 10204 98.3
B 0.2 9309 89.1
C 0.6 7836 74.7
D 1.8 5679 53.2
E 5.4 3575 32.3
F 15.5 1954 16.1
B/B 0 (%)
100
80
60
40
20
0
0.1 1 10 100
cGMP (pmol/mL)
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14. NORMWERTE
Therapeutische Konsequenzen sollten nicht allein aufgrund der mit diesem Test ermittelten Werte getroffen
werden, sondern nur unter Berücksichtigung aller klinischen Beobachtungen und weiterer diagnostischer
Mittel.
Augenscheinlich gesunde Spender zeigten die folgenden Normwerte:
Urin
Plasma
µmol/g Kreatinin
pmol/mL
cGMP 0.54 0.26 4.7 1.2
n 70 25
Jedes Labor sollte unter Berücksichtigung
regionaler Gegebenheiten eigene
Normalwertbereiche erstellen.
15. GRENZEN DES VERFAHRENS
Die korrekte Durchführung der Probengewinnung ist entscheidend für die Testergebnisse. Näheres siehe
PROBENGEWINNUNG UND -AUFBEWAHRUNG.
Angaben zu Kreuzreaktivitäten sind im Kapitel TESTCHARAKTERISTIKA zu finden.
Azid und Thimerosal in Konzentrationen > 0.1 % stören im Assay und führen evtl. zu falschen Ergebnissen.
Die folgenden Blutbestandteile haben bis zu der angegebenen Konzentration keinen signifikanten Einfluss
auf die Testergebnisse (+/- 20 %):
Hämoglobin
4 g/L
Bilirubin
0.5 g/L
Triglyceride
30 g/L
16. TESTCHARAKTERISTIKA
Analytische Spezifität
(Kreuzreaktivität)
Mit den typischen Substanzen wurden keine Kreuzreaktivitäten gefunden.
Analytische Sensitivität
(Nachweisgrenze)
0.05 pmol/mL Mittleres Signal (Nullstandard) - 2SD
Präzision Bereich VK (%)
Intra-Assay
Plasma 5.3-61.5 pmol/mL 4-9
Urin 0.43-1.5 nmol/mL 4-12
Inter-Assay
Plasma 4.9-59.5 pmol/mL 10-14
Urin 0.44-1.4 nmol/mL 6-11
Bereich
Höchste
Verdünnungsstufe
Bereich (%)
Linearität
Plasma 4.8-22.5 pmol/mL 8 82-139
Urin 0.43-0.7 nmol/mL 8 83-111
Keine direkte Linearität. Serielle Verdünnung führt zu niedrigeren Werten.
Kein High Dose Hook Effekt erkennbar.
Mittelwert (%) Bereich (%)
Wiederfindung
Plasma 103 83-124 % Wiederfindung nach Spiken
Urin 106 88-128
Methodenvergleich Plasma Y= 1.26x-1.5402 r = 0.96 ; n = 74
versus Biotrak RIA;
Amersham
Urin Y= 1.57x – 0.0432 r = 0.97 ; n = 34
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17. LITERATUR ÜBER DAS PRODUKT
1. Goldberg ND, Dietz SB, O'Toole AG., Cyclic guanosine 3',5'-monophosphate in mammalian tissues and
urine. J Biol Chem. 1969 Aug 25;244(16):4458-66.
2. Hardman JG, Davis JW, Sutherland EW Effects of Some Hormonal and Other Factors on the Excretion
of Guanosine 3’, 5’-Monophosphate and Adenosine 3’, 5’-Monophosphate in Rat Urine. J Biol Chem.
1969 Dez 10;244(23):6354-62
3. Goldberg ND, Haddox MK, Nicol SE, Glass DB, Sanford CH, Kuehl FA Jr, Estensen R., Biologic
regulation through opposing influences of cyclic GMP and cyclic AMP: the Yin Yang hypothesis. Adv
Cyclic Nucleotide Res. 1975;5:307-30. Review.
4. Vesely DL., Testosterone and its precursors and metabolites enhance guanylate cyclase activity. Proc
Natl Acad Sci U S A. 1979 Jul;76(7):3491-4.
5. Flandroy L, Galand P., Oestrogen-induced increase in uterine cGMP content: a true hormonal action?
Mol Cell Endocrinol. 1979 Mar;13(3):281-90.
6. Niemela AO, Tuohimaa PJ., Avidin induction by dibutyryl cyclic guanosine 3',5'-monophosphate in chick
oviduct organ culture. Biochem Biophys Res Commun. 1982 Aug;107(3):795-802.
7. de Bold AJ, Borenstein HB, Veress AT, Sonnenberg H., A rapid and potent natriuretic response to
intravenous injection of atrial myocardial extract in rats. Life Sci. 1981 Jan 5;28(1):89-94.
8. Kudo T, Baird A., Inhibition of aldosterone production in the adrenal glomerulosa by atrial natriuretic
factor. Nature. 1984 Dec 20-1985 Jan 2;312(5996):756-7.
9. Kurtz A, Della Bruna R, Pfeilschifter J, Taugner R, Bauer C., Atrial natriuretic peptide inhibits renin
release from juxtaglomerular cells by a cGMP-mediated process. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986
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10. Pandey KN, Kovacs WJ, Inagami T., The inhibition of progesterone secretion and the regulation of cyclic
nucleotides by atrial natriuretic factor in gonadotropin responsive murine Leydig tumor cells. Biochem
Biophys Res Commun. 1985 Dec 17;133(2):800-6.
11. Mukhopadhyay AK, Schumacher M, Leidenberger FA., Steroidogenic effect of atrial natriuretic factor in
isolated mouse Leydig cells is mediated by cyclic GMP. Biochem J. 1986 Oct 15; 239(2):463-7.
12. Gerzer R, Heim JM, Schutte B, Weil J., Cellular mechanisms of action of atrial natriuretic factor. Klin
Wochenschr. 1987;65 Suppl 8:109-14.
13. Stasch JP, Hirth C, Kazda S, Wohlfeil S., The elevation of cyclic GMP as a response to acute
hypervolemia is blocked by a monoclonal antibody directed against atrial natriuretic peptides. Eur J
Pharmacol. 1986 Sep 23;129(1-2):165-8.
14. Steiner AL, Pagliara AS, Chase LR, Kipnis DM, Radioimmunoassay for Cyclic Nucleotides. II.
ADENOSINE 3',5'-MONOPHOSPHATE AND GUANOSINE 3',5'-MONOPHOSPHATE IN MAMMALIAN
TISSUES AND BODY FLUIDS J. Biol. Chem., Feb 1972; 247: 1114 - 1120.
15. Gerzer R, Witzgall H, Tremblay J, Gutkowska J, Hamet P., Rapid increase in plasma and urinary cyclic
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16. Kaminsky NI, Broadus AE, Hardman JG, Jones DJ Jr, Ball JH, Sutherland EW, Liddle GW., Effects of
parathyroid hormone on plasma and urinary adenosine 3',5'-monophosphate in man. J Clin Invest. 1970
Dec;49(12):2387-95.
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Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύµβολα
REF
LOT
Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N.–Cat.: / Αριθµός-Κατ.:
Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθµός -Παραγωγή:
Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: /
Χρησιµοποιείται από:
No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: /
Αριθµός εξετάσεων:
CONC Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συµπύκνωµα
LYO
IVD
Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασµένο
In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In
Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In
Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ∆ιάγνωση.
Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos
para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης.
Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. /
Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni
prima dell’uso. / ∆ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση.
Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. /
Garder à l’abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la
luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να
φυλάσσεται µακριά από θερµότητα και άµεση επαφή µε το φως του ηλίου.
Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση
στους:
Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός:
Caution! / Vorsicht! / Attention! / ¡Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή!
Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED.
Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben.
Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit.
Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS.
Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS.
Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT.
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and results. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These
cases invalidate any claim for replacement. Regardless, in the event of any claim, the manufacturer’s liability is not to exceed the value of the test kit.
Any damage caused to the kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer
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