2Diss_Jaskulsky_Mathis.pdf

48
5.4 Laborwerte
5.4.1 TNF-α:
Die Konzentrationen von TNF-α zum Zeitpunkt t = 0 min zeigt keinerlei signifikante
Unterschiede zwischen den vier Gruppen. Vergleicht man jedoch die Konzentrationen zum
Zeitpunkt t = 165 min miteinander, ergeben sich signifikante Unterschiede (Abb. 25):
Abb. 25 TNF alpha t = 0 und t = 165 min, Mittelwerte + Standardabweichungen, LPS =
Endotoxinämie 5 mg/kgKG LPS i.v., DHEA = 28 mg/kgKG Dehydroepiandrosteron i.m

49
5.4.2 Interferon-γ
Wie aus Abb. 26 zu ersehen ist, war die Konzentration der Interferon-γ Konzentration zum
Beginn des Versuchs unterhalb der Nachweisgrenze. Zum Zeitpunkt t = 165 min
unterschieden sich folgende Gruppen voneinander: Kontrolle vs. DHEA+LPS mit p

50
5.4.3 Interleukin-1 α
Bei der Konzentration von Interleukin-1α zeigen sich signifikante Unterschiede folgender
Gruppen zum Zeitpunkt t = 165 min: Kontrolle vs. LPS, Kontrolle vs. DHEA+LPS, DHEA
vs. LPS, DHEA+LPS vs. LPS, jeweils mit p

51
5.4.4 Granulocyte macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF)
Die GM-CSF Konzentration unterscheidet sich signifikant zum Zeitpunkt t = 165 min
zwischen der Kontrollgruppe und der DHEA+LPS-Gruppe (p

52
5.4.5 Interleukin-4
Zum Zeitpunkt t = 0 gab es in der Konzentration des Interleukin-4 zwischen den Gruppen
keinerlei Unterschiede. Jedoch zum Zeitpunkt t = 165 unterschieden sich die Kontrollgruppe
gegen die LPS-Gruppe (p

53
5.4.6 Laktat
Die Bestimmung des Laktats aus dem arteriellen Blut zeigt, dass die LPS-Gruppe bei der
zweiten Blutentnahme t = 165 min gegenüber allen anderen 3 Gruppen einen signifikant
höheren Laktatwert aufweist, jeweils ist p

54
6 Diskussion
6.1 Temperatur
Während des Experimentes kam es, auch unter Berücksichtigung der Temperaturregulierung
durch die Wärmematte, in den verschiedenen Gruppen zu signifikant unterschiedlichen
Temperaturverläufen: Sowohl die beiden nicht endotoxämischen Gruppen als auch die
Kombinationsgruppe aus DHEA+LPS unterschieden sich zum Zeitpunkt t = 165 min in
signifikantem Ausmaß von der LPS-Gruppe. Dies zeigt zum einen, dass der Temperaturanstieg
durch das verabreichte Endotoxin verursacht wurde, zum anderen aber auch deutlich,
dass DHEA in diesem Versuchsablauf in der Lage war, diesen Temperaturanstieg zu
verhindern. Barckhausen et al. 4 veröffentlichten eine Arbeit, in der ebenfalls ein Effekt der
DHEA-Behandlung auf die Temperatur der dort untersuchten Mäuse beobachtet wurde. Bei
diesen Experimenten wurde jedoch ein verminderter Temperaturabfall im Rahmen einer CLP
Sepsis (Cecal ligation and puncture) beobachtet.
6.2 Herzfrequenz
Die Herzfrequenz zeigt in den verschiedenen Gruppen variable Verläufe, die sich durch die
LPS-Gabe erklären lassen. Wie in der Arbeit von Hsu et al. 34 beschrieben wird, kommt es
durch LPS-Gabe zu einem Herzfrequenzanstieg. Gleiches konnte auch in dieser Arbeit
nachgewiesen werden. DHEA-Therapie konnte keine Senkung der Herzfrequenz gegenüber
der LPS-Gruppe herbeiführen. Der Anstieg der Herzfrequenz bei Endotoxämie ist eine
Reflextachykardie, die durch eine sympathoadrenerge Gegenregulation auf Grund des
gesunkenen MAP`s zustande kommt. Hierdurch versucht der Organismus einem sinkenden
Herzminutenvolumen, ausgelöst durch einen sinkenden MAP, entgegenzuwirken. Die
Kontrolltiere, welche ausschließlich DHEA erhielten, zeigten einen Trend zur Reduktion der
Tachykardie.
6.3 Mittlerer Arterieller Blutdruck
Wie im vorherigen Abschnitt erläutert wurde, kam es bei den Experimenten dieser Arbeit zu
teils starken Absenkungen des mittleren arteriellen Blutdrucks (MAP) sowie zu einer dadurch
ausgelösten Reflextachykardie. Bereits in verschiedenen Arbeiten konnte aufgezeigt werden,
dass eine Endotoxämie zu einem signifikanten Abfall des MAP führt 6,17,42,43,54,66 .
Auch in dieser Arbeit wurden zwischen der Kontrollgruppe und der LPS-Gruppe
signifikante Unterschiede festgestellt: Wie aus Abb. 11 ersichtlich ist fällt der Blutdruck der

55
Kontrollgruppe signifikant geringer als der der LPS-Gruppe. Panayiotou et al. 54 untersuchten
einen möglichen Zusammenhang einer LPS-Applikation bei Mäusen mit einer Plasma-NO-
Konzentrationserhöhung. Auch wenn die klassischen Mediatoren des Sepsisgeschehens
Zytokine sind, gibt es eine Vielzahl von Protein- und Lipidmediatoren, die zusätzlich
freigesetzt werden. Solche sekundären Mediatoren oder Effektoren sind unmittelbar für die
funktionellen und strukturellen Schäden verantwortlich. Hierzu zählt Stickstoffmonoxid
(NO). Zudem fand Mailman heraus, dass abdominelle vagale Afferenzen an der frühen LPSinduzierten
Hypotension beteiligt sind 37 . Beides könnte für die auch in dieser Arbeit
gefundenen hypotensiven Werte verantwortlich sein. Wie verändert die Applikation von
DHEA sowohl ohne als auch in Kombination mit einer LPS-Gabe den mittleren arteriellen
Blutdruck? Pavlovic et al. 56 postulierten eine potentielle vasodilatierende Wirkung von DHEA
in Rattenarterien. Verantwortlich hierfür ist eine Aktivierung der endothelialen Nitrit-Oxid-
Synthase (eNOS) nach Bindung des DHEA an einen Steroid spezifischen, G-Protein
gekoppelten Rezeptor.
Eine solche vasodilatierende Wirkung konnte während der Experimente dieser Arbeit
nicht beobachtet werden. Der MAP-Abfall in der DHEA+LPS-Gruppe erfolgt ähnlich schnell
und drastisch wie in der LPS-Gruppe, jedoch erholten sich die Tiere schneller von dieser
Kreis-laufdepression (keine statistische Signifikanz). Die Tiere der DHEA-Gruppe wiesen
über den beobachteten Zeitraum den stabilsten Blutdruckverlauf auf. Dies ist möglicherweise
auf eine DHEA-induzierte Katecholaminfreisetzung (Noradrenalin und Dopamin) zurückzuführen,
welche durch Charalampopoulos und Kollegen postuliert wurde 16 .
6.4 Leukozytenadhärenz
Dass Endotoxin zu einer Zunahme der Anzahl adhärenter Leukozyten führt, ist hinlänglich
bekannt und wurde durch zahlreiche Arbeiten belegt 7-9,59+60 . Auch in dieser Arbeit konnte eine
Abnahme der temporär mit dem Endothel interagierenden Leukozyten gefunden werden.
Dieses Ergebnis zeigte sich sowohl in Venolen 1. Grades als auch in Venolen 3. Grades.
Lediglich in den Venolen 1. Grades konnte ein erhöhter Rolling-flow der DHEA-Kontroll-
Gruppe gegenüber der Kontrollgruppe beobachtet werden. Eine Zunahme der Anzahl der
temporär mit dem Endothel interagierenden Leukozyten durch DHEA in Kombination mit
LPS konnte nicht gezeigt werden. Ayhan et al. 3 sowie Barkhausen et al. 5 konnten zeigen, dass
DHEA zu einer Reduktion der Adhäsionsfaktoren und somit zu einer Reduktion der Leukozytenrekrutierung
führt. Verantwortlich hierfür ist eine verminderte Expression von
Adhäsionsmolekülen auf den Leukozyten durch DHEA (u.a. E-Selektin, CD-11b, CD-18,

56
CD-44), aber auch die Expression von ICAM-1 und VCAM-1 als interzelluläre bzw.
vaskuläre Adhäsionsmoleküle werden durch DHEA reduziert. Angenommen wird, dass
DHEA durch eine Dephosphorilierung über eine Proteinphosphatase mehrere zelluläre
Signaltrans-duktionen inhibiert. Zu diesen gehören unter anderem die Phosphoinositol-3-
Kinase, die Mitogen-aktivierte Proteinkinase (MAPK) und die Glycogen-Synthase-Kinase 3,5 .
Diese Effekte konnten in dieser Arbeit bei den Venolen 3. Grades aufgezeigt werden,
hier war die Anzahl adhärenter Leukozyten sowohl in der DHEA-Kontroll-Gruppe als auch in
der DHEA-LPS-Kombinationsgruppe signifikant reduziert. Ähnliche Trends zeigen sich in
den Venolen 1. Grades, jedoch ohne Signifikanz.
6.5 Funktionelle Kapillardichte
Dem Gastrointestinaltrakt und vor allem dem Darm mit seiner Mukosa kommt in der
Pathogenese der Sepsis eine herausragende Rolle zu 8-10,37,50,62,65,73 . Die intestinale funktionelle
Kapillardichte ist von besonderer Bedeutung für den Verlauf der Sepsis. Im Rahmen einer
Endotoxämie kommt es zur Abnahme der funktionellen Kapillardichte 9+10 . Hierfür sind
mehrere Gründe verantwortlich:
1. Durch das Kapillarleck kommt es zur Plasmaextravasation und somit zu einem
Gewebeödem mit sich daraus ergebendem Druck auf die Kapillaren.
2. Im septischen Schock kommt es zu einer Redistribution von Blut in vital wichtige
Organe und somit zu einer Hypoperfusion der intestinalen Kapillaren.
3. Im Rahmen einer disseminierten intravasalen Gerinnung (DIC) kann die funktionelle
Kapillardichte reduziert werden.
4. Durch eine vermehrte Leukozytenadhärenz kommt es zur Minderperfusion.
5. Eine verminderte Verformbarkeit der Erythrozyten erschwert die Kapillarperfusion.
Die Auswirkung verschiedenster Medikamente auf die durch Endotoxin
beeinträchtigte Mikrozirkulation ist seit langem Bestandteil mehrerer Studien 26,27,62,65 .
Unter anderem beschäftigte sich Birnbaum in einer seiner Arbeiten mit der Wirkung von
Dopexamin auf den intestinal mikrovaskulären Blutfluss in einem Sepsismodell, in einer
anderen Arbeit mit den Effekten des Koagulationsfaktors XIII auf die funktionelle
Kapillardichte bei experimenteller Endotoxämie 9,10 . Kuebler et al. 37 beschäftigten sich, und
das ist für diese Arbeit auf Grund der Stoffwechselnähe zu dem hier untersuchten DHEA
besonders interessant, mit der Rolle von Estradiol auf die Perfusion des Splanchnikusgebietes

57
bei Sepsis. Ayhan et al. 3 stellten fest, dass DHEA im Endotoxämiemodell die Leukozytenaktivität
reduziert, die Geschwindigkeit der Erythrozyten erhöht und die Kapillarperfusion
verbessert.
Die Ergebnisse dieser Arbeit zeigen, dass DHEA die funktionelle Kapillardichte
verbessert. Sowohl in der Lamina muskularis longitudinalis als auch in der Lamina
muskularis circularis weist die DHEA+LPS-Gruppe signifikant weniger dysfunktionelle und
nonfunktionelle Kapillaren auf, als die Endotoxämiegruppe. Zudem zeigt sich durch DHEA
eine signifikante Reduktion der dysfunktionellen Kapillaren der Lamina mucosae. Dieser
Effekt kann durch die Reduktion der Anzahl adhärenter Leukozyten erklärt werden, welche
durch eine verminderte Expression von Adhäsionsmolekülen auf den Leukozyten zustande
kommt (Kapitel 6.4). Eine mögliche mikrozirkulatorische Vasodilatation, welche durch
Pavlovic et al. 56 nachgewiesen wurde und durch eine Aktivierung der endothelialen Nitrit-
Oxid-Synthase (eNOS) nach Bindung des DHEA an einen Steroid spezifischen, G-Protein
gekoppelten Rezeptor erklärbar ist, kann zu einer verbesserten Perfusion geführt haben.
Möglicherweise hat DHEA auch antiödematöse Eigenschaften und vermag somit ebenfalls
die funktionelle Kapillardichte zu verbessern.
6.6 Zytokine
Im Falle einer Sepsis werden Zytokine als Mediatoren des entzündlichen Geschehens
freigesetzt 21,26,34,42,57,64,72,79 . Im Rahmen unserer Arbeit beschäftigten wir uns mit TNF-α,
Interferon-γ, Interleukin-1 α, GM-CSF sowie Interleukin-4. Hier zeigt sich ein heterogenes
Bild der Zytokinkonzentrationen. Unsere Ergebnisse sind größtenteils kongruent mit denen
der existierenden Literatur und stimmen in der Vorstellung überein, dass es zu einer DHEAabhängigen
Restoration der Immunantwort bei Sepsis kommt:
TNF-α:
Der Tumornekrosefaktor-α gilt als früher Mediator der Sepsis und ist bei experimenteller
Endotoxinämie bereits nach wenigen Minuten nachweisbar. Hierdurch ist TNF-α ein idealer
Indikator für die Sepsisinduktion.
Gebildet wird er durch Monozyten, Makrophagen, T-Zellen, Neutrophile
Granulozyten sowie NK-Zellen. Seine Produktion wird durch die Anwesenheit von IL-2,
Interferon-γ und GM-CSF unterstützt, durch Interleukin-6, TGF-ß sowie PGE 2 jedoch
inhibiert 39 . Die Zellbindung geschieht über spezielle Rezeptoren, welche eine Aktivierung

58
von nukleären Faktoren (NF-κB, Transkriptionsfaktoren) sowie eine Expression von
Adhäsionsmolekülen bewirken. Diese führen u.a. zur vermehrten Leukozytenadhärenz sowie
zur Verstärkung der Zytokin-Expression. Neutrophile und Makrophagen/Monozyten steigern
nach TNF-α-Stimulation die Phagozytose, die Produktion von Sauerstoffradikalen,
degranulieren und setzen Enzyme frei 23 .
Die Ergebnisse unserer Arbeit zeigen einen Konzentrationsanstieg von TNF-α bei
experimenteller Endotoxinämie. Dieser ist unbestritten und durch diverse Arbeiten belegt 4,33 .
Die signifikant höhere Konzentration der unbehandelten LPS-Gruppe ist als eindeutiger Beleg
für die Sepsisinduktion zu werten. Den in den nicht-septischen Gruppen gesehenen Konzentrationsanstieg
führen wir auf das operationsbedingte Trauma sowie den Stress der
Versuchstiere zurück 74 .
Unsere Arbeit zeigt einen Konzentrationsrückgang von TNF-α bei DHEA-
Behandlung. Hildebrand und Kollegen 33 konnten aufzeigen, dass DHEA, in einem Model mit
polymikrobieller Sepsis durch CLP, in der Lage ist die Konzentrationen von TNF-α zu
senken. Die speziellen Rezeptoren Tumor-Nekrose-Faktor-Rezeptor-I und -II (TNF-RI und
TNF-RII) scheinen hierfür verantwortlich zu sein. Jedoch konnte gezeigt werden, dass es
ebenfalls in genmanipulierten TNF-Rezeptor Knockout-Mäusen zu einer Konzentrationsreduktion
des TNF-α nach DHEA-Behandlung kam. Dies führt zu der Annahme, dass die
DHEA-Wirkung durch weitere noch zu untersuchende Interaktionen geschieht.
Barkhausen und Kollegen 4 konnten nachweisen, dass DHEA-Behandlung bei
bestehender Endotoxinämie die mRNA-Expression des TNF-α reduziert. Also scheint ein
weiterer Effekt der DHEA-Therapie in der transkriptionellen Modifikation der TNF-α
Expression zu liegen.
Weitere klinische Studien sind notwendig um den genauen molekularbiologischen
Mechanismus der DHEA-Wirkung auf die TNF-α-Konzentration bei experimenteller Endotoxinämie
herausfinden zu können.
Interferon-γ
Das Glykoprotein Interferon-γ wird durch natural killer-Cells (NK) und natural killer T
(NKT)-Cells sowie von CD4 und CD8 zytotoxischen T-Lymphozyten (Effektorzellen, Th-1)
nach Antigenkontakt produziert. Die Wirkung ist eine immunstimulierende durch Aktivierung
der Makrophagen sowie durch Bildung reaktiver Sauerstoffradikale 68 . Interferon-γ fördert die
LPS-induzierte NF-κB-Aktivierung und wirkt als Induktor der iNOS 32 , somit trägt es
entscheidend zur Letalität bei Endotoxinämie bei.

59
In unseren LPS-freien Gruppen zeigte sich über den gesamten Versuchsablauf kein
Konzentrationsanstieg der IFN-γ Konzentration. Hingegen führte die Applikation von 5
mg/kg LPS zu einer signifikanten Konzentrationszunahme des IFN-γ.
Die Gabe des DHEA hatte auf diese Konzentration keinen Einfluss. Im Falle des IFNγ
existieren in der Literatur keine Angaben zu molekularen Mechanismen und der genauen
Wirkung. So zeigt sich in der Literatur ein uneinheitliches Bild: Choi 19 konnte zeigen, dass
DHEA dosisabhängig zu einer Konzentrationssenkung des IFN-γ führt. Chang 15 hingegen
wies einen Konzentrationsanstieg bei DHEA-Exposition nach; hier wurden jedoch nicht
verschiedene, sondern lediglich eine Dosis von 200 mg/kg/d DHEA appliziert. Eine
Konzentrationsreduktion proinflammatorischer Zytokine durch DHEAS über eine Inhibierung
des inflammatorischen Transkriptionsfaktors NF-κB ist nachgewiesen 1 , genauso eine
Reduktion des IFN-γ-Plasmaspiegels durch eine Inhibierung dieses Transkriptionsfaktors 41 .
Vermutlich senkt DHEA über diesen Mechanismus die Produktion des IFN-γ, welches
unter Berücksichtigung der weiteren Ergebnisse unserer Arbeit (Konzentrationssenkung
anderer proinflammatorischer Zytokine) bei möglicherweise höherer DHEA-Dosis eine
Konsequenz darstellen könnte. Der genaue molekulare Mechanismus verbleibt unklar, es
bedarf weiterer experimenteller Studien um diesen bei experimenteller Endotoxinämie zu
untersuchen.
Interleukin-1α
Interleukin-1α existiert zunächst als ProIL-1α intrazellulär und wird nach Zellschädigung
durch extrazelluläre Proteasen zum Interleukin-1α gespalten. Über eine vermehrte Prostaglandinsynthese
wird Fieber induziert, zudem ist IL-1α an der Chemotaxis von Leukozyten
beteiligt und induziert Adhäsionsmoleküle.
In den LPS-freien Gruppen unseres Experimentes konnte kein relevanter Anstieg der
IL-1〈-Konzentrationen zum Zeitpunkt der zweiten Bestimmung registriert werden. Die endotoxinämischen
Tiere wiesen zu diesem Zeitpunkt hingegen signifikant erhöhte Serumspiegel
auf. Die Gabe des DHEA führte zu einem signifikanten Konzentrationsabfall des IL-1〈 im
Vergleich zur Endotoxinämie-Gruppe.
Mehrere Studien zeigen, dass das Vorhandensein einer Endotoxinämie zu einer
Elevation der Interleukin-1α Genexpression führt 51 . Weitere Studien untersuchen die molekulare
Wirkung des Interleukin-1α 25,70 : Unter anderem wirkt dieses Zytokin über eine Interaktion
mit dem Toll-like-Rezeptor 2 (TLR-2), zudem ist eine Konzentrationserhöhung des
Adhäsionsmoleküls ICAM-1 durch Interleukin-1α beschrieben, welches im Rahmen einer

60
Endotoxinämie (Kapitel 6.4) zu einer Reduktion der mikrovaskulären Perfusion führen kann.
DHEA-Therapie führt bei experimenteller Endotoxinämie zu einer signifikanten
Reduktion der Interleukin 1-α-Konzentration im Vergleich zur LPS-Gruppe. Vergleichende
Studien, die den molekularen Mechanismus der DHEA-Wirkung auf die IL-1〈−Konzentration
beschreiben, existieren in der Literatur nicht. Möglicherweise können für diesen Effekt die im
Zusammenhang mit dem IFN-γ gefundenen Mechanismen herangezogen werden.
GM-CSF:
Der Granulocyte macrophage colony-stimulating factor ist ein weiteres proinflammatorisches
Zytokin und beeinflusst das Wachstum und die Differenzierung hämatopoetischer Vorläuferzellen.
Es ist ein von T-Zellen, Makrophagen, Fibroblasten, Endothelzellen und vom
Knochenmarkstroma produziertes Polypeptid.
Zum Beginn unserer Arbeit stellten wir in allen Gruppen niedrige GM-CSF-
Konzentrationen fest. Zum Ende des Versuchs war die Konzentration in den Endotoxinämie-
Gruppen signifikant gesteigert. Die mit DHEA-behandelte Endotoxinämiegruppe weist die
höchste Konzentration an GM-CSF zum Versuchsende auf.
Eine Korrelation zwischen GM-CSF und dem Toll-like-Rezeptor 4 (TLR-4) ist
beschrieben: Bozinovski et al. 12 wiesen nach, dass eine Neutralisation des GM-CSF über den
Antikörper 22E9 zu einer Reduzierung der physiologischen Toll-like-Rezeptor 4-Expression
führt. DHEA hingegen erhöht die mRNA-Expression der TLR-2 und 4 23 und so möglicherweise
die Konzentration des GM-CSF. Das Vorhandensein einer Endotoxinämie scheint für
diese Erhöhung Voraussetzung zu sein: die mit DHEA-behandelte Kontrollgruppe weist keine
signifikante Konzentrationserhöhung zur Kontrollgruppe auf. Auch bezüglich des proinflammtorischen
Zytokins GM-CSF sollten weitere Studien den genauen molekularen
Mechanismus klären.
IL-4:
Das Interleukin-4 ist ein antiinflammatorisches Zytokin, welches von Mastzellen, basophilen
Granulozyten sowie Th2-Zellen gebildet wird. Seine wesentliche Aufgabe besteht in der
Ausdifferenzierung von naiven Th0-Zellen zu Th2-Zellen, des weiteren fördert es die
Proliferation von T-Zellen, B-Zellen sowie Mastzellen. Eine Wirkung des Interleukin-4
geschieht über eine Hemmung von Th1-Zellen, da diese über eine Interferon-γ Erhöhung
Makrophagen aktivieren können.
Caetano et al. 13 konnten zeigen, dass eine Endotoxinämie durch Trypanosoma cruzi zu

61
einer Konzentrationserhöhung des Interleukin-4 führt. Gleiches ist in den Ergebnissen unserer
Arbeit zu finden. Die Endotoxinämie-Gruppe weist zum Versuchsende die höchste IL-4-
Konzentration auf. Dies ist dadurch zu erklären, dass während der systeischen Inflammation
neben einer exzessiven Produktion und Freisetzung proinflammatorischer Zytokine auch
antiinflammatorische Reaktionskaskaden mit deren Freisetzung von statten gehen 23 .
Unsere Arbeit zeigt, dass DHEA zu einer signifikanten Konzentrationsreduktion des
IL-4 nach 165 Minuten führt. DHEA scheint die T-helfer-Lymphozyten Balance der sich
gegenseitig supprimierenden Zelllinien Th-1 und Th-2 zu modulieren 80 . Bezüglich des
Interleukin-4 gibt es in der Literatur keine vergleichbaren Studien, die eine Klärung des
molekularen Mechanismus bieten.
6.7 Laktat
In Skelettmuskel, Haut, Darmmukosa, Erythrozyten, Nieren und Gehirn werden zusammen
etwa 0,7–1,3 mmol Laktat pro Stunde gebildet. Erhöhte Laktatspiegel werden häufig bei
Endotoxinämie und Sepsis gemessen. Hierbei wird eine Hyperlaktatämie (2-5 mmol/l) von
einer Laktatazidose (>5mmol/l) unterschieden 39 . Bei Darmischämie, Schock, aber auch bei
Endotoxingabe können erhöhte Laktatwerte gemessen werden. Die Laktatdehydrogenase
oxidiert Laktat zu Pyruvat und reduziert gleichzeitig NAD + zu NADH/H + .
Auch wenn umstritten ist, ob die Elimination von Laktat bei Sepsis und MODS einen
Benefit für die Genesung des Patienten erbringt, so gibt es dennoch Therapiekonzepte, bei
denen NaHCO3 bei sehr niedrigen arteriellen pH Werten gegeben wird 58 .
Ausschließlich die Tiere, die isoliert LPS erhielten wiesen zu diesem Zeitpunkt einen
signifikant erhöhten Laktatspiegel, eine Hyperlaktatämie mit ca. 3 mmol/l, auf. Damit sind
unsere Ergebnisse der Endotoxinämiegruppe kongruent mit denen der Versuchsreihe von
Lehmann 39 , der bei Applikation von 5 mg/kg LPS nach 4 Stunden eine Hyperlaktatämie von
3,5 mmol/l nachweisen konnte. Endotoxin selbst ist durch Stimulation der Glukose-
Transporter-Protein-Synthese in der Lage die Glykolyse zu stimulieren und durch eine
Hemmung der Pyruvatdehydrogenase die Laktatproduktion zu verstärken 14,20 .
Beachtlich ist, dass es DHEA im Rahmen dieser Arbeit vermag den arteriellen
Laktatspiegel zum Zeitpunkt der zweiten Blutentnahme, also t = 165 min, signifikant
gegenüber der LPS-Gruppe zu senken. Arango et al. 2 wiesen in ihrem Versuch bei einem
Ischämie-Reperfusions-Modell eine erniedrigte Konzentration des Enzyms Laktatdehydrogenase
bei DHEA-Behandlung nach. Des weiteren erkannten sie eine schützende

62
Funktion für die Membranintegrität-, -stabilität und -funktion, vermutlich ein antioxidativer
Effekt. Die Entstehung und der Abbau von Laktat sind intrazelluläre Prozesse, welche bei
Zellschädigung im Blut messbar werden.
Übertragen auf die Darmmukosa würden die hier festgestellten niedrigeren Laktatwerte
in der DHEA-behandelten Endotoxinämie Gruppe einen Zellschutz durch das DHEA
vermuten lassen.
6.8 Methodenkritik
6.8.1 Versuchsmodell
In der Literatur werden im wesentlichen zwei Modelle benutzt, um pathophysiologische
Veränderungen wie bei klinischer Sepsis erzielen zu können 39 : Dazu gehören Modelle mit
vitalen Infektionseregern, entweder von außen in den Organismus eingebracht oder innerhalb
des Organismusses freigesetzt. Gegensätzlich hierzu existieren diverse Modelle mit der
Verabreichung von Endotoxin (Lipopolysaccharid) gram-negativer-Bakterien. Modelle mit
vitalen Infektionserregern kann man in vier Gruppen einteilen:
1. Versuche mit Weichteilinfektionen als Sepsis-Fokus
2. Implantation von Faeces oder lebenden Erregern in die freie Bauchhöhle, Simulation
des klinischen Bildes einer Peritonitis
3. Parenterale Applikation lebender Mikroorganismen, am häufigsten Escherichia coli
4. CASP-Methode (Colon ascendens Stent-Peritonitis) oder CLP (cecal ligation an
puncture)
Im Rahmen dieser Arbeit wurden 5 mg/kgKG LPS gegeben. Die Auswirkungen der
Endotoxinämie sind abhängig von der Dosierung des gegebenen LPS`. Eine Dosiserhöhung
könnte deutlichere pathologische Werte hervorbringen und eventuell weitere Effekte der
DHEA-Therapie signifikant werden lassen. Von weiterer Bedeutung ist, ob die
Endotoxingabe bolusartig oder kontinuierlich erfolgt. Eine adäquate Volumentherapie hat in
allen zu vergleichenden Gruppen zu erfolgen. Unter diesen Voraussetzungen liegt in der
Vergleich-barkeit ein möglicher Vorteil der experimentellen Endotoxämie durch LPS. Ein
weiterer Vorteil der LPS-Gabe ist, dass diese Methode zeitlich besser planbar ist als die
CASP-Methode, bei der zwischen Chirurgie und Mikroskopie viele Stunden liegen müssen,

63
um eine Peritonitis erzeugen zu können. Jedoch unterliegt auch das Endotoxin-Modell Einschränkungen:
Bei LPS-Gabe wird lediglich ein Bakterienbestandteil appliziert und kein
vollwertiges Bakterium, wobei hingegen im Rahmen des CASP-Modells die körpereigenen
Bakterien des Versuchstieres zur Induktion der Sepsis dienen.
Bei der CASP (Colon ascendens Stent-Peritonitis) oder CLP (cecal ligation and puncture)
wird nach einer medianen Laparotomie ein Stent zwischen Darmlumen und Bauchhöhle
gelegt und somit eine Peritonitis induziert. Dies mag einerseits das realistischere der beiden
Verfahren sein und ähnelt somit stark dem klinischen Verlauf, da die Verletzung des Darmes
eine entscheidende Rolle bei der Peritonitis spielt. Andererseits ist dieses Verfahren vom
Operateur und dessen Fähigkeiten abhängig. Ein weiterer Nachteil stellt die schlechte
Quantifizierbarkeit der genauen Dosis und Art sepsisauslösender Mikroorganismen dar.
6.8.2 Applikationsweg und Dosierungen
Die Applikation des hier verwendeten DHEA geschah in einer Dosierung von 28 mg/kgKG.
Gelöst wurde das DHEA, welches in Pulverform vorlag, in 1 ml Flüssigkeit, bestehend aus
0,7 ml Ethanol (da DHEA in NaCl ausfällt) und 0,3 ml NaCl, die Gabe erfolgte als
Pretreatment intramuskulär, wobei die Tiere jeweils 0,1 ml in die Hinterläufe injiziert
bekamen.
Unter anderem Molinari et al. 48 konnten nachweisen, dass eine intravenöse
Applikation von DHEA unmittelbare gefäßmodulierende Effekte aufweist. Daher entschieden
wir uns in dieser Arbeit für die Gabe eines intramuskulären Depots, welches eine
gleichmäßigere Freigabe des DHEA bewirkt und so vermag diese unmittelbaren Gefäßeffekte
zu reduzieren. Jedoch könnte die gewählte Zeitspanne von 165 min für eine intramuskuläre
Gabe relativ kurz sein, um eine maximale Freisetzung des DHEA und somit eine maximale
systemische Wirkung zu erzielen.
Auch Ethanol hat unmittelbare Eigenwirkungen: So führt es zur Vasodilatation von
(Haut-) Gefäßen und kann somit zu einer Hypotension führen. In den 0,2 ml waren absolut
0,14 g Ethanol enthalten. Auf das Gewicht einer Ratte (ca. 200 g) bezogen wären das
demnach 0,7 g/kg und somit 49 g Ethanol auf einen 70 kg schweren Menschen über einen
Zeitraum von 165 Minuten. Bei einem Ethanolabbau von ca. 1g/10kgKG/h würde ein 70 kg
schwerer Mensch in etwa 7 Stunden benötigen, um die applizierte Ethanoldosis abzubauen.
Auch wenn die Ethanoldosis in allen vier Gruppen identisch war, so ist zu vermuten, dass das
Ethanol eine Eigenwirkung hatte. Weitere DHEA-Experimente mit und ohne Ethanol sollten

64
folgen, um diese Eigenwirkung untersuchen zu können.
6.8.3 Zeitablauf
Der Versuchsablauf bei dieser Arbeit betrug 165 Minuten. Zu diskutieren sind die wichtigen
Zeitpunkte im Rahmen dieser 165 Minuten:
Die initiale Präparation (Intubation, Laparotomie) dauerte ca. 20 Minuten. Dieses
Zeitfenster ist stark vom chirurgischen Geschick und der Erfahrung des Operateurs abhängig.
Bereits die erste Blutentnahme erfolgte nach einem großen chirurgischen Trauma, welches
einen Einfluss auf die gemessenen Parameter gehabt haben könnte. Die sich anschließende 90
minütige Ruhephase war in allen vier Gruppen gleich und bietet ein standardisiertes
Zeitfenster vor der Intravitalmikroskopie. Auch diese Ruhephase kann zeitlich variiert werden
(z.B. verlängert) um die immunologischen und zellulären Akutfolgen des chirurgischen
Traumas zu reduzieren.

65
7 Zusammenfassung:
Sepsis und der septische Schock sind trotz aller Fortschritte in der Intensivmedizin Haupttodesursachen
auf nichtkardiologischen Intensivstationen in westlichen Ländern. Daher wird
wissenschaftlich intensiv nach Möglichkeiten geforscht, um diese Letalität zu senken. In
diesem Kontext wurden die Experimente zu dieser Arbeit durchgeführt.
Diese Arbeit beschäftigt sich mit der Auswirkung von DHEA auf die intestinale Leukozytenaktivierung
und Kapillarperfusion, die Zytokinfreisetzung sowie auf klinische Parameter von
Ratten mit experimenteller Endotoxinämie 39 .
Zu diesem Zweck wurden vier Gruppen gebildet (n = 40, 10 Tiere pro Gruppe): eine
Kontrollgruppe, eine DHEA-Gruppe, eine LPS-Gruppe und eine DHEA+LPS-Gruppe. Das
DHEA wurde als Pretreatment 2,5 Stunden vor der Intravitalmikroskopie i.m. verabreicht.
Beobachtet wurde die Auswirkung der verabreichten Substanzen auf die Leukozytenadhäsion
in Venolen 1. und 3. Grades und die Perfusion der longitudinalen und zirkulären Darmgefäße
sowie die Perfusion der Mukosazotten. Zudem erfolgte zu den Zeitpunkten t = 0 min und t =
165 min eine Bestimmung der Zytokine TNF-α, Interferon-γ, Interleukin-1 α, GM-CSF
(Granolocyte macrophage colony-stimulating factor), Interleukin-4 sowie eine Bestimmung
des Laktatwertes. Während des gesamten Versuchsablaufs erfolgte eine Dokumentation der
Vitalparameter. Die DHEA-Dosis von 28 mg/kgKG wurde intramuskulär appliziert. Das
Endotoxin (LPS von E.coli) wurde in einer Dosierung von 5 mg/kgKG intravenös verabreicht.
Die Auswertung der Ergebnisse hat gezeigt, dass die Temperatur der DHEA+LPS-
Gruppe sowie der DHEA-Gruppe zum Zeitpunkt t = 165 min (definierter Endpunkt)
signifikant niedriger war, als die der LPS-Gruppe.
Im Rahmen einer Endotoxinämie kommt es durch eine Freisetzung von Adhäsionsmolekülen
zur Interaktion von Leukozyten mit dem Endothel und somit zur Adhärenz. Dieses
Ergebnis zeigte sich sowohl in Venolen 1. Grades als auch in Venolen 3. Grades. Die
Leukozytenadhärenz war in beiden Endotoxingruppen, in Venolen 1. Grades und in Venolen
3. Grades, zur Kontrollgruppe signifikant erhöht. Die DHEA+LPS-Gruppe weist signifikant
weniger adhärente Leukozyten in Venolen 3. Grades auf, als die LPS-Gruppe. Ähnliche
Trends zeigen sich in den Venolen 1. Grades.
Dem Gastrointestinaltrakt und vor allem dem Darm mit seiner Mukosa kommt in der
Pathogenese der Sepsis eine herausragende Rolle zu. Im Rahmen einer Endotoxinämie kommt
es zur Abnahme der funktionellen Kapillardichte. Die Ergebnisse dieser Arbeit zeigen, dass
DHEA die funktionelle Kapillardichte verbessert. Sowohl in der Lamina muskularis
longitudinalis als auch in der Lamina muskularis circularis weist die DHEA+LPS-Gruppe

66
signifikant weniger dysfunktionelle und nonfunktionelle Kapillaren auf, als die Endotoxinämiegruppe.
Zudem zeigt sich durch DHEA eine signifikante Reduktion der
dysfunktionellen Kapillaren der Lamina mucosae.
Die DHEA-Therapie ist bei experimenteller Endotoxinämie in der Lage, zu einer
signifikanten Reduktion der Interleukin 1-α-Konzentration im Vergleich zur LPS-Gruppe zu
führen. Ein ähnlicher Trend zeigt sich bei TNF-α.
Eine weitere signifikante Reduzierung zeigt sich bei der Konzentration des Laktats
zum Zeitpunkt der zweiten arteriellen Blutentnahme: DHEA reduziert die Laktatkonzentration
auch in der DHEA+LPS-Kombinationsgruppe. Weitere experimentelle und klinische Studien
sind notwendig, um die Bedeutung des DHEA in der Sepsis aufzuklären.

67
8 Literaturverzeichnis
1. Altman R, Motton DD, Kota RS, Rutledge JC; Inhibition of vascular inflammation by
dehydroepiandrosterone sulfate in human aortic endothelial cells: roles of PPARalpha
and NF-kappaB; Vascul Pharmacol 2008; 48:76-84
2. Arango M, Parola S, Brignardello E, Mauro A, Tamagno E, Manti R, Danni O,
Boccuzzi G; Dehydroepiandrosterone prevents oxidative injury induced by transient
ischemia/reperfusion in the brain of diabetic rats; Diabetes 2000; 49:1924-31
3. Ayhan S, Tugay C, Norton S, Areano B, Siemonow M; Dehydroepiandrosterone
protects the microcirculation of muscle flaps from ischemia-reperfusion injury by
reducing the expression of adhesion molecules; Plast Reconstr Surg 2003; 111:2286-
94
4. Barkhausen T, Hildebrand F, Krettek C, van Griensven M; DHEA-dependent and
organ-specific regulation of TNF-alpha mRNA expression in a murine polymicrobial
sepsis and trauma model; Crit Care Med 2009; 13:R114
5. Barkhausen T, Westphal BM, Pütz C, Krettel C, v. Griensven M; Dehydroepiandrosterone
administration modulates endothelial and neutrophil adhesion
molecule expression in vitro; Crit Care Med 2006; 10:R109
6. Bermejo A, Zarzuelo A, Duarte J; In vivo vascular effects of genistein on a rat model
of septic shock induced by lipopolysaccharide; J Cardiovasc Pharmacol; 2003;
42:329-38
7. Birnbaum J, Lehmann Ch, Klotz E, Hein OV, Blume A, Jubin F, Polze N, Luther D,
Spies CD; Effects of N-acetylcysteine and tirilazad mesylate on intestinal functional
capillary density, leukocyte adherence, mesenteric plasma extravasation andcytokine
levels in experimental endotoxemia in rats; Clin Hemorheol Microcirc 2008; 39:99-
111
8. Birnbaum J, Klotz E, Spies CD, Hein OV, Mallin K, Kawka R, Ziemer S, Lehmann C;
The combinations C1 esterase inhibitor with coagulation factor XIII and N-
acetylcysteine with tirilazad mesylate reduce the leukocyte adherence in an
experimental endotoxemia in rats; Cin Hemorheol Microcirc 2008; 40:167-76
9. Birnbaum J, Klotz E, Spies CD, Lorenz B, Stuebs P, Hein OV, Gründling M, Pavlovic
D, Usischenko T, Wendt M, Kox WJ, Lehmann C; Effects of dopexamine on the
intestinal microvascular blood flow and leukocyte activation in a sepsis model in rats;
Crit Care Med 2006; 10:R117
10. Birnbaum J, Hein OV, Lührs C, Rückbeil O, Spies C, Ziemer S, Gründling M,

68
Usischenko T, Meissner K, Pavlovic D, Kox WJ, Lehmann C; Effects of coagulation
factor XIII on intestinal functional capillary density, leukocyte adherence and
mesenteric plasma extravasation in experimental endotoxemia; Crit Care Med 2006;
10:R29
11. Bone RC; Sir Isaak Newton, sepsis, SIRS, and CARS, Crit Care Med 1996; 24:1125-
1128
12. Bozinovski S, Jones J, Beavitt SJ, Cook AD, Hamilton JA, Anderson GP; Innate
immune responses to LPS in mouse lung are suppressed an reversed by neutralization
of GM-CSF via repression of TLR-4; Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 2004;
286:L877-85
13. Caetano LC, Brazao V, Filipin Mdel V, Santello FH, Toldo MP, Caldeira JC, do Prado
JC Jr.; Corticosterone evaluation in Wistar rats infected with the Y strain of
Trypanosoma cruzi during the chronic phase; Exp Parasitol 2011; 127:31-5
14. Cain SM, Curtis SE; Systemic and regional oxygen uptake and lactate flux in
endotoxic dogs resuscitated with dextran and dopexamine or dextran alone; Circ
Shock 1992; 38:173-181
15. Chang DM, Chu SJ, Chen HC, Kuo SY, Lai JH; Dehydroepiandrosterone suppresses
Interleukin 10 synthesis in women with systemic lupus erythematosus; Ann Rheum
Dis 2004; 63:1623-1626
16. Charalampopoulos I, Dermitzaki E, Vardouli L, Tsatsanis C, Stournaras C, Margioris
AN, Gravanis A; Dehydroepiandrosterone sulfate and allopregnanolone directly
stmulate catecholamine production via induction of thyrosine hydroxylase and
secretion by affecting actin polimerization; Endocrinology 2005; 146:3309-18
17. Chiao CW, Lee SS, Wu CC, Su MJ; Thaliporphine increases survival rate and
attenuates multiple organ injury in LPS-induced endotoxämia; Naunyn Schmiedebergs
Arch Pharmacol 2005; 371:34-43
18. Chieveley-Williams S, Hamilton-Davis C; The role of the gut in major surgical
postoperative morbidity; Int Anesthesiol Clin 1999; 37:81-110
19. Choi IS, Cui Y, Koh YA, Lee HC, Cho YB, Won YH; Effects of dehydroepiandrosterone
on Th2 cytokine production in peripheral blood mononuclear cells
from asthmatics; Korean J Intern Med 2008; 23:176–181
20. Curtis SE, and Cain SM; Regional and systemic oxygen delivery/uptake relations and
lactate flux in hyperdynamic, endotoxin-treated dogs; Am Rev Respir Dis 1992;
145:348-354

69
21. Danenberg HD, Ben-Yehuda A, Zakay-Rones Z, Gross DJ, Friedman G; Dehydroepiandrosterone
treatment is not beneficial to the immune response to influenza in
elderly subjects; J Clin Endocrinol Metab 1997; 82:2911-4
22. Dellinger RP, Carlet JM, Masur H; Surviving sepsis Campaign guidelines for
management of severe sepsis and septic shock; Crit Care Med 2008; 34:783-5
23. Dinarello CA; Proinflammatory and anti-inflammatory cytokines as mediators in the
pathogenesis of septic shock. Chest 1997; 112:321-29
24. Engel C, Brunkhorst FM, Bone HG, Brunkhorst R, Gerlach H, Grond S, Gruendling
M, Huhle G, Jaschinski U, John S, Mayer K, Oppert M, Olthoff D, Quintel M,
Ragaller M, Rossaint R, Stuber F, Weiler N, Welte T, Bogatsch H, Hartog C,
Loeffler M, and Reinhart K; Epidemiology of sepsis in Germany: results from a
national prospective multicenter study; Intensive Care Med 2007; 33:606-618
25. Essani NA, Fisher MA, Farhood A, Manning AM, Smith CW, Jaeschke H; Cytokineinduced
upregulation of hepatic intercellular adhesion molecule-1 messenger RNA
expression and its role in the pathophysiology of murine endotoxine shock and acute
liver failure; Hepatology 1995; 21:1632-9
26. Foitzik T, Kruschewski M, Kroesen AJ, Hotz HG, Eibl G, Buhr HJ; Does glutamine
reduce bacterial translocation? A study in two animal models with impaires gut
barrier; Int J Colorectal Dis 1999; 14:143-9
27. Frey L, Kesel K; Significance of perfusion of the gastrointestinal tract in shock;
Anaesthesist 2000; 49:446-50
28. Galdo M, Gregonis J, Fiore CS, Compagnone NA; Dehydroepiandrosterone
biosythesis, role and mechanism of action in the developing neural tube; Front
Endocrinol 2012; 3:16
29. Genazzani AR, Pluchino N; DHEA therapy in postmenopausal women: the need to
move forward beyond the lack of evidence; Climacteric 2010; 13:314-316
30. Hahner S, Allolio B; Deydroepiandrosterone to enhance physical performance: myth
and reality; Endocrinol Merab Clin North Am 2010; 39:127-139
31. Hazeldine J, Arlt W, Lord JM; Dehydroepiandrosterone as a regulator of immune cell
function; Steroid Biochem Mol Biol 2010; 120:127-136
32. Held TK, Weihua X, Yuan L, Kalvakolanu DV, and Cross AS; Gamma interferon
augments macrophage activation by lipopolysaccharide by two distinct mechanisms,
at the signal transduction level and via an autocrine mechanism involving tumor
necrosis factor alpha and interleukin-1; Infect Immun 1999; 67: 206-212

70
33. Hildebrand F, Pape HC, Harwood P, Wittwer T, Krettek C, van Griensven M; Are
alterations of lymphocyte subpopulations in polymicrobial sepsis and DHEA treatment
mediated by the tumor necrosis factor (TNF)-α receptor (TNF-RI)? A study in TNF-RI
(TNF-RI -/- ) knock-out rodents; Clin Exp Immunol 2004; 138:221-229
34. Hsu BG, Yang FL, Lee RP, Peng TC, Chen HI; Effects of post-treatment with lowdose
propofol on inflammatory responses to lipopolysaccharide-induced schock in
concious rats; Clin Exp Pharmacol Physiol 2005; 32:24-9
35. Idkowiak J, Lavery GG, Dhir V; Premature adrenarche – novel lessons from early
onset androgen excess; Eur J Endocrinol 2011; 165:189-207
36. Kretz FJ, Schäffer J; Anästhesie, Intensivmedizin, Notfallmedizin, Schmerztherapie;
5. Auflage; Springer Medizin Verlag Heidelberg; 2008:365
37. Kuebler JF, Jarrar D, Toth B, Bland KI, Rue L, Wang P, Chaudry IH; Estradiol
admission improves splanchnic perfusion following trauma-hemorrhage and sepsis;
Arch Surg 2002; 137:74-9
38. Lazaridis I, Charalampopoulos I, Alexaki VI; Neurosteroid Dehydroepiandrosterone
interacts with Nerve Growth Factor (NFG) receptors, preventing neuronal apoptosis;
PloS Biol 2011; 9(4):e1001051, Abstract
39. Lehmann C; Tierexperimentelle Untersuchungen zur intestinalen Mikrozirkulation bei
Endotoxinämie; Habilitationsschrift zu Erlangung der Lehrfähigkeit für das Fach
Anästhesiologie; Berlin: Medizinische Fakultät Charité der Humboldt-Universität zu
Berlin; 2000
40. Liu, Dillon; Dehydrowpiandrosterone activates endothelial cell nitric-oxide synthase
by a specific plasma membrane receptor coupled to alpha i2,3; J Biol Chem; 2002;
277:211379-88
41. Liu SF, and Malik AB; NF-kappa B activation as a pathological mechanism of septic
shock and inflammation. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 2006; 290:622-645
42. Lo YC, Tsai PL, Huang YB, Shen KP, Tsai YH, Wu YC, Lai YH, Chen IJ; San-
Huang-Xie-Xin-Tang reduces lipopolysaccharides-induced hypotension and
inflammatory mediators; J Ethnopharmacol 2005; 96:99-106
43. Lo YC, Wang CC, Shen KP, Wu BN, Yu KL, Chen IJ; Urgosedin inhibits
hypotension, hypoglycämia, and proinflammatory mediators induced by
lipopolysaccharide; J Cardiovasc Pharmacol 2004; 44:363-71
44. Löffler G; Zellen und Organ – das endokrine System; In: Löffler Basiswissen
Biochemie mit Pathobiochemie; 6. Auflage; Springerverlag Heidelberg; 2005:495-498

71
45. Macphee IAM, Turner DR, Oliveira DBG; The role of endogenous steroid hormones
in the generation of T helper 2-mediated autoimmunitiy in mercuric chloridetreated
Brown-Norway rats; Immunology 2000; 99:141-146
46. Mailman D., A role for abdominal vagal afferents in lipopolysaccharide-induced
hypotension, Shock 2002; 18:177-81
47. Mathias D.; Praxis für Laboratoriumsmedizin A-Z, Laborärztliche Arbeitsgemeinschaft
für Diagnostik und Rationalisierung (LADR), 2005:331
48. Molinari C, Battaglia A, Grossini E, Mary DA, Vassanelli C, Vacca G; The effect of
dehydroepiandrosterone on regional blood flow in prepubertal anaesthetized pigs; J
Physiol 2004; 557:307-19
49. Moriguchi S, Yamamoto Y, Ikuno T; Sigma-1 receptor stimulation by dehydroepiandrosterone
ameliorates cognitive impairment through activation of CaM kinase
II, protein kinase C and extracellular signal-regulated kinase in olfactory bulbectomized
mice; Neurochem 2011; 117:879-91
50. Nadler EP, Ford HR; Regulation of bacterial translocation by nitric oxide; Pediatr
Surg Int 2000; 16:165-8
51. Nieto JE, MacDonald MH, Braim AE, Aleman M; Effect of lipopilysaccharide
infusion on gene expression of inflammatory cytokines in normal horses in vivo;
Equine Vet J 2009; 41:717-9
52. Oberbeck R, Kobbe P; Dehydroepiandrosterone (DHEA): a steroid with multiple
effects. Is there any possible option in th treatment of critical illness?; Curr Med Chem
2010; 17:1039-1047
53. O´Boyle CJ, Mac Fie J, Mitchell CJ, Johnstone D, Sagar PM, Sedman PC;
Microbiology of bacterial translocation in humans; Gut 1998; 42:29-35
54. Papanyiotou CM, Baliga R, Stdwill R, Taylor V, Singer M, Hobbs AJ; Resistance to
endotoxic shock in mice lacking natriuretic peptide receptor-A; J Pharmacol 2010;
160:2045-54
55. Pavlovic D., Friehling H., Lauer KS., Bac VH. et al.; Thermostatic tissue platform for
intrvital microscopy “the hanging drop model”, J Microsc.; 2006; 224:203-10
56. Pavlovic D, Maskow J, Usischenko T,Wendt M; Dehydroepiandrosterone induces
relaxation of human and rat bronchial smooth muscle and rat aorta; Eur Resp J, 2003;
Vol. 22 Suppl-45:105s
57. Reddy RC, Narala VR, Keshamouni VG, Milam JE, Newstead MW, Standiford TJ;
Sepsis-induced inhibition of neutrophil chemotaxis is mediated by activation of

72
peroxisome proliferator-activated receptor-gamma; Blood 2008; 112:4250-8
58. Reinhart K, Brunkhorst FM, Bone HG, Bardutzky J, Dempfle CE, Forst H, Gastmeier
P, Gerlach H, Gründling M, John S, Kern W, Kreymann G, Krüger W, Kujath P,
Marggraf G, Martin J, Mayer K, Meier-Hellmann A, Oppert M, Putensen C, Quintel
M, Ragaller M, Rossaint R, Seifert H, Spies C, Stüber F, Weiler N, Weimann A,
Werdan K, Welte T; Prevention, diagnosis, treatment, and follow-up care of sepsis.
First revision of the S2k Guidelines of the German Sepsis Society (DSG) and the
German Interdisciplinary Association for Intensive and Emergency Care Medicine
(DIVI); Anästhesist 2010; 59:347-70
59. Richter J, Zhou J, Pavlovic D, Scheibe R, Bac VH, Blumenthal J, Hung O, Murphy
MF, Whynot S, Lehmann C; Vancomycine and to lesser extent tobramycin have
vasomodulatory effects in experimental endotoxemia in the rat; Clin Hemorheol
Microcirc 2010; 46:37-49
60. Rivera CA, Gaskin L, Singer G, Houghton J, Allman M; Western diet enhances
hepatic inflammation in mice exposed to cecal ligation an puncture; BMC Physiol
2010; 10:20
61. Schmidt W, Schweppenhäuser W, Secchi A, Gebhard MM, Martin E, Schmidt H;
Influence of epinephrine and norepinephrine on intestinal villous blood flow during
endotoxemia. Crit Care Med 1999; 14:99-105
62. Schmidt W, Tinelli M, Secchi A, Gebhard M, Martin E, Schmidt H; Influence of
amrinone on intestinal villus blood flow during endotoxemia; Crit Care Med 2000;
15:97-102
63. Schmidt W, Tinelli M, Secchi A, Gebhard M, Martin E, Schmidt H; Milrinone
improves intestinal villus blood flow during endotoxemia; Can J Anaesth 2000;
47:673-9
64. Schmidt M, Kreuz M, Löffler G, Schölmerich J, Straub RH; Conversion of
dehydroepiandrosterone to downstream steroid hormones in macrophages; J
Endocrinol 2000; 164:161-9
65. Schmidt W, Tinelli M, Secchi A, Gebhard M, Martin E, Schmidt H; Enoximone
maintains intestinal villus blood flow during endotoxemia; Int J Surg Investig 2001;
2:359-67
66. Shen KP, Lo YC, Yang RC, Liu HW, Chen IJ, Wu BN; Antioxidant eugenosedin-A
protects against lipopolysaccharide-induced hypotension, hyperglycaemia and
cytokine immunoreactivity in rats and mice; J Pharm Pharmacol 2005; 57:117-25

73
67. Shufelt C, Bretsky P, Almeida CM; DHEA-S levels and cardiovascular disease
mortality in postmenopausal women: results from the National Institutes of Health-
National Heart, Lung, and Blood institutes (NHLNI)-sponsored Womens`s ischemia
Evaluation; J Clin Endocrinol Metab 2010; 95:4985-92
68. Schoenborn JR, Wilson CB; Regulation of interferon-gamma during innate and a-
daptive immune responses; Immunol 2007; 96:41-101
69. Schuster HP, Werdan K, Müller-Werdan U; Systematik der Therapie bei Sepsis und
Multiorgandysfunktionssyndrom (MODS); In Sepsis und MODS; 4. Auflage; Springer
Medizin Verlag Heidelberg, Berlin, New York; 2005:1-7
70. Sebastiani G, Blais V, Sancho V, Vogel SN, Stevenson MM, Gros P, Lapointe JM,
Rivest S, Malo D; Host immune response to Salmonella enterica serovar
Typhimurium infection in mice derived from wild strains; Infect Immun 2002;
70:1997-2009
71. Sorwell KG, Urbanski HF; Dehydroepiandrosterone and age-related cognitive decline.
Age 2010; 32:61-7
72. Straub RH, Konecna L, Hrach S, Rothe G, Kreutz M, Schölmerich J, Falk W, Lang B;
Serum dehydroepiandrosterone (DHEA) and DHEA sulfate are negatively correlated
with serum interleukin-6 (IL-6) and DHEA inhibits IL-6 secretion from mononuclear
cells in man in vitro: possible link between endocrinosenescence and immunosenescence;
J Clin Endocrinol Metab 1998; 83:2012-7
73. Swank GM, Deitch EA; Role of the gut in multiple organ failure: bacterial
translocation and permeability changes; World J Surg 1996; 20:411-7
74. von Bethmann AN, Brasch F, Nusing R, Vogt K, Volk HD, Muller KM, Wendel A,
Uhlig S; Hyperventilation induces release of cytokines from perfused mouse lung; Am
J Respir Crit Care Med 1998; 157:263-272
75. Weigand MA, Bardenheuer HJ, Böttiger BW; Clinical management of patients with
sepsis; Anästhesist 2003; 52:3-22
76. Werdan K, Schuster HP, Müller-Werdan U; Abriß der Pathophysiologie als Grundlage
der Therapie; In: Sepsis und MODS, 4. Auflage; Springer Medizin Verlag Heidelberg,
Berlin, New York 2005:25-30
77. Werdan K, Schuster HP, Müller-Werdan U; Abriß der Pathophysiologie als Grundlage
der Therapie; In: Werdan Sepsis und MODS; 4. Auflage; Springer Medizin
Verlag Heidelberg 2005:26-28
78. Werdan K, Schuster HP, Müller-Werdan U; Abriß und Pathophysiologie als

74
Grundlage der Therapie; In:Sepsis und MODS; 4. Auflage; Springer Medizin Verlag
Heidelberg, Berlin, New York; 2005:44-46
79. Wolkersdörfer GW, Lohmann T, Marx C, Schröder S, Pfeiffer R, Stahl HD, Scherbaum
WA, Chrousos GP, Bornstein SR; Lymphocytes stimulate dehydroepiandrosterone
production through direct cellular contact with adrenal zona reticularis cells:
a novel mechanism of immune-endocrine interaction; J Clin Endocrinol Metab 1999;
84:4220-7
80. Yoshida S, Aihara K, Azuma H; Dehydroepiandrosterone sulfate is inversely
associated with sex-dependent diverse carotid atherosclerosis regardless of endothelial
function; Atherosclerosis 2010; 212:310-315

75
9 Eidesstattliche Erklärung
Hiermit erkläre ich, dass ich die vorliegende Dissertation selbständig verfasst und keine
anderen als die angegebenen Hilfsmittel benutzt habe.
Die Dissertation ist bisher keiner anderen Fakultät, keiner anderen wissenschaftlichen
Einrichtung vorgelegt worden.
Ich erkläre, dass ich bisher kein Promotionsverfahren erfolglos beendet habe und dass eine
Aberkennung eines bereits erworbenen Doktorgrades nicht vorliegt.
Datum
Unterschrift