Newsletter - IVD GmbH

I V D G MBH
T H E M E N I N
D I E S E R
A U S G A B E :
Editorial
Bakteriologie
Ein neues
Gesicht in der
IVD GmbH
Multiplex-PCR
Salmonella
IVD Newsletter
A U S G A B E 3
Editorial
Langsam neigt sich der Supersommer 2013 seinem Ende zu
und der Herbst hält seinen Einzug, verbunden mit einem
neuen Newsletter ihrer IVD GmbH.
O K T O B E R 2 0 1 3
Die bakteriologische Abteilung der IVD GmbH ist
mittlerweile etabliert, und die Leiterin, Frau Dr. Karen
Dohmann, stellt ihnen in diesem Newsletter exklusiv die
Grundzüge der bakteriologischen Untersuchung verschiedener Probenmaterialien
beim Schwein zusammen.
Da sich unsere Pathologin, Frau Dr. Renate Frase zur Zeit noch in Elternzeit befindet,
stellen wir Ihnen in diesem Newsletter Ihre kompetente Vertretung vor:
Herrn Dr. Marius Kunze, der Ihnen nachfolgend einen interessanten Fallbericht aus
der Praxis erläutert.
Wir wünschen Ihnen viel Spaß beim Lesen, und wie immer gilt:
Haben Sie Fragen, Wünsche oder Sorgen bezüglich der Diagnostik,
sprechen Sie mit uns. Wir finden eine Lösung!
Ihr IVD-Team
Bakteriologische Untersuchung bei verschiedenen
Krankheits-Komplexen beim Schwein
Die Aussagekraft des Ergebnisses einer bakteriologischen Untersuchung ist stark
abhängig von der Auswahl und der Qualität des Probenmaterials. Hierfür ist es
wichtig, dass das Material so gewählt und verschickt wird, dass evtl. vorhandene
symptom-relevante Erreger auch während des Versandes noch vermehrungsfähig
bleiben.
Um dies zu gewährleisten sollten folgende Punkte beachtet werden:
Dr. Karen Dohmann
Fachtierärztin für
Mikrobiologie
Leiterin der
Bakteriologie
1. Organstücke sollten so frisch wie möglich entnommen werden, da eine
einsetzende Autolyse die bakteriologische Untersuchung verfälschen kann. Ferner
sollten die Organe auf dem schnellsten Wege zur kulturellen Anzucht gelangen, da
ansonsten der kulturelle Nachweis einiger sensibler Erreger (wie z. B. A.
pleuropneumoniae oder H. parasuis) nicht mehr möglich ist.
2. Falls sich für die Entnahme von Tupferproben entschieden wird, sollten auf jeden
Fall Mediumtupfer und keine Trockentupfer verwendet werden,
da viele bakterielle Erreger während des Versandes auf einem
Tupfer ohne Medium absterben.

S E I T E 2
Fortsetzung: Bakteriologische Untersuchung verschiedener Probenmaterialien beim Schwein
Auswahl des Probenmaterials in Abhängigkeit vom klinischen Bild
Für die Qualität der Proben spielt die richtige Lokalisation der Entnahme
eine wichtige Rolle. (s. Tab.1)
Tab. 1 : Geeignetes Probenmaterial zum Nachweis bakterieller Infektionserreger
„Die Qualität der
Erkrankung Probenmaterial bakterielle Erreger Bemerkung
Proben und die
Lokalisation der
Entnahme sind
ergebnisrelevant“
Rhinitis Nasentupfer P. multocida
B. bronchiseptica
Bronchitis/
Pneumoniae
Serositis
Arthritis
Bronchus-/ Lungentupfer;
Lunge; steril gewonnene
BALF
seröser Sammeltupfer;
Organe mit fibrinösen
Auflagerungen
Gelenkknorpel/-kapsel;
Tupfer von
Gelenkknorpel/-kapsel
A. pleuropneumoniae
H. parasuis
Sc. suis
P. multocida
B. bronchiseptica
Mykoplasmen
Trueperella pyogenes
H. parasuis
Sc. suis
Mykoplasmen
Salmonellen
H. parasuis
Sc. suis
Trueperella pyogenes
Mykoplasmen
Staphylokokken
nicht geeignet für einen
relevanten
Nachweis von
A. pleuropneumoniae
H. parasuis
ehemals Arcanobacterium
pyogenes
ungeeignetes
Material: Synovia
„Nur Medientupfer
und keine
Trockentupfer für
den kulturellen
Nachweis
verwenden“
Meningitis ZNS-Tupfer H. parasuis
Sc. suis
E. coli
Salmonellen
Staphylokokken
Sepsis
Enteritits/
Enterotoxämie
Niere;
Milz
Kot, Kottupfer;
Dünndarm;
Colon
E. coli
Sc. suis
E. rhusiopathiae
E. coli
Cl. perfringens
Salmonellen
Brachyspiren
Dermatitis Haut, Hautgeschabsel St. aureus
St. hyicus
Zu den verschiedenen Probenmaterialien sind folgende Punkte zu beachten:
1. Nasentupfer: Ein Problem bei der bakteriologischen Untersuchung von Nasentupfern
ist der meist hochgradige Keimgehalt von unspezifischen Erregern aus der Umgebung der
beprobten Tiere, so dass der Nachweis der spezifischen Keimflora erschwert wird.
Nasentupfer eignen sich nicht zum Nachweis spezifischer Lungenerreger.
2. Lungenproben: Sie sollten sowohl makroskopisch verändertes als auch belüftetes
unverändertes Gewebe enthalten.
Sehr wichtig für die Mykoplasmendiagnostik ist das Vorhandensein eines
Bronchusquerschnittes innerhalb des beprobten Bereiches.

Fortsetzung: Bakteriologische Untersuchung verschiedener Probenmaterialien beim Schwein
S E I T E 3
Des Weiteren ist für den kulturellen Nachweis von H. parasuis und A. pleuropneumoniae zu
beachten, dass das Probenmaterial innerhalb kürzester Zeit nach der Entnahme angelegt
wird, da ansonsten aufgrund des Absterbens der Erreger ein falsch negatives Kulturergebnis
entstehen kann.
Ferner kann für einen erfolgreichen Nachweis von H. parasuis eine Beprobung von mehreren
verschiedenen Lokalisationen (z. B. fibrinöse Veränderungen, Lunge, Gelenk oder ZNS)
sinnvoll sein.
3. Gelenkproben: Da die Arthritiserreger gewebsassoziiert vorliegen, eignet sich Synovia
nicht zum Erregernachweis. Diese ist in der Regel steril. Daher sollten Tupferproben von der
Gelenkkapsel oder Knorpeloberfläche genommen werden.
4. Sepsis: Bei Probenmaterial, das erst post mortem gewonnen wurde, kann es im Falle eines
E. coli-Nachweises Probleme bei der Interpretation der Relevanz des Erregers geben, da es
sich auch um eine sekundäre Besiedelung aufgrund der beginnenden Autolyse handeln kann.
5. Darmproben: Sie sollten bevorzugt aus dem hinteren Bereich des Dünndarms, am Besten
im Bereich des Ileums entnommen und nicht geöffnet werden. Zum kulturellen Nachweis
von Brachyspiren empfiehlt sich die Entnahme von Probenmaterial im Colonbereich.
6. Hautgeschabsel: Sie sollten nicht oberflächlich, sondern vielmehr aus tieferen
Hautschichten gewonnen werden.
Generell ist zu beachten , dass eine antibiotische Vorbehandlung der beprobten Tiere einen
kulturellen Erregernachweis erschweren oder sogar unmöglich machen kann.
Die IVD GmbH bietet auch bakteriologische Untersuchungen einschließlich der Resistenzprüfung
der isolierten Erregern beim Schwein an. Die entsprechenden Erreger und das zur
Untersuchung geeignete Probenmaterial sind Tabelle 1 zu entnehmen.
Durch die ebenfalls in der IVD durchgeführte Sektion von Tierkörpern ist eine unmittelbare
Bearbeitung des frisch gewonnenen Probenmaterials möglich. Dies schafft optimale
Voraussetzungen für den kulturellen Nachweis verschiedener bakterieller Infektionserreger.
Die IVD GmbH bietet folgende weiterführende Typisierungen von bakteriellen Infektionserregern
an:
E. coli: Genotypisierungen von Isolaten mittels Multiplex-PCR zum Nachweis diverser
virulenzassoziierter Faktorgene (Fimbrien, Adhäsine, Toxine)
Cl. perfringens: Bestimmung von Typ A-E (Schwein, Rind, Schaf, Ziege) mittels PCR
sowie Nachweis der α- und β2-Toxinbildung mittels Immunoblot
Sc. suis: Bestimmung des Kapseltyps (1,2,7 oder 9) und diverser Gene von
virulenzassoziierten Faktoren mittels PCR
St. hyicus: Nachweis der exfoliativen Toxingene A-D sowie des Exotoxins shetA mittels
PCR
St. aureus: Identifizierung von MRSA-Isolaten über den Nachweis des mecA-Gens
mittels PCR sowie phänotypisch über den Nachweis des PBP2-Proteins mittels
Agglutination.
Die kulturelle Untersuchung auf Brachyspiren sowie die Resistenzprüfung hierzu wird von
der IVD GmbH zur Zeit noch nicht durchgeführt.

S E I T E 4
Ein neues Gesicht in der IVD GmbH
Seit März 2013 verstärkt Dr. Marius Kunze die Abteilung Pathologie.
Dr. Kunze hat in Budapest und Berlin Veterinärmedizin studiert und nach seiner
Approbation am Institut für Pathologie des Deutschen Primatenzentrums in
Göttingen bei Prof. Dr. Kaup promoviert. In seiner Dissertation beschäftigte er sich
mit dem Auftreten pathologischer Lungenveränderungen bei Primaten und konnte
wichtige Erkenntnisse auf diesem auch für den Schweinebereich interessanten
Gebiet erlangen.
Im Rahmen seiner Ausbildung zum Fachtierarzt und zur Erweiterung seiner
Sektionskenntnisse bei Haus- und landwirtschaftlichen Nutztieren absolvierte Dr.
Kunze ein Praktikum am Institut für Pathologie an der Tierärztlichen Hochschule
Hannover. Nach Abschluss seiner Promotion und bis zum Beginn bei der IVD GmbH
arbeitete Dr. Kunze als Pathologe in der Praxis für Histopathologie von Prof. Kaup.
Dr. Marius Kunze
Pathologe
Fallbericht: Fokaler Lungenabszess - Auf der Suche nach dem Erreger
Vor Kurzem wurde ein ca. 40 kg schweres Mastschwein zur Sektion angeliefert. Der
Landwirt beklagte vermehrt respiratorische Symptome und schlechtes Wachstum
bei Masttieren ab 20 kg Körpergewicht. Bei unserer routinemäßigen Adspektion
wies das Tier ein gestörtes Allgemeinbefinden auf und schien leicht apathisch. Die
Narkose erfolgte i. m. mit Ursotamin®/Stresnil® und die darauffolgende Euthanasie
i.v. mit Release®. Hauptbefunde stellten sich im Bereich der Lunge dar, wobei der
rechte Hauptlappen eine fokale Nekrose zeigte. Die ca. 4 x 4 x 3 cm große Läsion
blieb vom umliegenden Lungengewebe gut abgegrenzt und war teilweise bindegewebig
abgekapselt mit zentraler Nekrose.
„Eine zielgerichtete
Beprobung während
der Sektion bietet die
Möglichkeit für eine
schnelle und
wirtschaftlich
sinnvolle
Diagnostik.“
Ätiologisch sind für derartige Veränderungen insbesondere bakterielle Infektionserreger
in Betracht zu ziehen. Besonderes Augenmerk sollte auf Actinobacillus
pleuropneumoniae (App) und Trueperella pyogenes (ehemals Arcanobacterium
pyogenes) gelegt werden.
Für eine exakte Diagnosestellung wurden histologische, mikrobiologische und
molekularbiologische Untersuchungen eingeleitet. Eine zielgerichtete Beprobung
während der Sektion mit direkten Folgeuntersuchungen bietet die Möglichkeit für
eine schnelle und wirtschaftlich sinnvolle Diagnostik.

Fortsetzung: Fallbericht: Fokaler Lungenabszess - Auf der Suche nach dem Erreger
S E I T E 5
So ließ sich z. B. bereits am Folgetag aus der fokalen Läsion App in Reinkultur anzüchten. Mittels
PCR wurde der Erreger als App Serotyp 2 diagnostiziert. Histologisch konnten die beschriebenen
pathomorphologischen Läsionen dem isolierten Erreger zugeordnet werden und es ließ
sich eine Aussage machen, ob eine Koinfektion mit anderen Infektionserregern vorliegt.
„In der Immunhistochemie
können
Läsionen und
Infektionserreger
Bild links: fibrinös-nekrotisierende Pleuropneumonie, Alveolen gefüllt mit Entzündungszellen und Pleura infiltriert
mit Entzündungszellen (H.E.-Färbung 40x Vergrößerung); Bild rechts: gesunde Lunge mit dünner Pleura (P) und
freien Alveolen (A) (H.E.-Färbung 40x Vergrößerung);
zusammen
nachgewiesen
werden .“
Bild links: multifokale Entzündungsherde mit charakteristischen App-Läsionen (H.E.-Färbung 40x Vergrößerung);
inlet: charakteristische, spindelförmige, neutrophile Granulozyten (oat-shaped cells) Bild rechts: immunhistochemischer
Nachweis von App-spezifischem-Antigen an derselben Lokalisation (H.E.-Färbung 40x Vergrößerung);
Fazit: Nicht nur bei klassisch großflächig, hämorrhagisch-nekrotisierenden Pneumonien der
Hauptlappen, sondern auch wie in diesem Fall, bei fokalen, abgegrenzten Lungenentzündungen
muss differentialdiagnostisch App berücksichtigt werden.
Neuausrichtung der Multiplex-PCR Salmonella
Die Multiplex-PCR Salmonella wurde neu aufgestellt: Neben dem Nachweis der in Salmonellen
positiven Betrieben vorherrschenden Serovar Typhimurium wurde die Serovar
Derby neu aufgenommen, die laut efsa-Bericht (European Food Safety Authority) ebenfalls
in Deutschland stark vertreten ist. Nicht mehr im Programm ist dafür die Serovar Enteritidis,
für die wir in der Vergangenheit in den Betrieben unseres Einzugsbereichs keinen
Nachweis führen konnten. Neben den Serovaren mit zoonotischem Potential, aber nicht
selten klinisch völlig inapparentem Erscheinungsbild, weist die neue PCR auch die
schweinadaptierte Serovar Choleraesuis nach, die nicht selten perakute, septikämische
Krankheitsverläufe auslösen kann. Diese Serovar ist in Westeuropa nicht verbreitet, die
Gefahr einer Einschleppung aus Osteuropa besteht aufgrund des allgemeinen Tierverkehrs
dennoch, so dass sie differentialdiagnostisch berücksichtigt werden sollte.
Dr. Jan Böhmer
Leiter der
Molekularbiologie

Ihre wissenschaftlichen Ansprechpartner für besondere Fragestellungen:
Allgemeine Diagnostik
Bakteriologie
S E I T E 6
Dr. med. vet. Sebastian Fischer
Fachtierarzt für Mikrobiologie
Leiter der Serologie
0511-220029-22
fischer@ivd-gmbh.de
PCR und Sequenzierung
Dr. med. vet. Karen Dohmann
Fachtierärztin für Mikrobiologie
Leiterin der Bakteriologie
0511-220029-45
dohmann@ivd-gmbh.de
Pathologie
Dr. med. vet. Jan Böhmer
Leiter der Molekularbiologie / F&E
0511-220029-11
boehmer@ivd-gmbh.de
Dr. med. vet. Marius Kunze
Pathologe
0511-220029-13
kunze@ivd-gmbh.de
IVD Gesellschaft für Innovative Veterinärdiagnostik mbH
Heisterbergallee 12, 30453 Hannover
Telefon: 0511-22 00 29 0
Fax: 0511-22 00 29 99
Internet: http://www.ivd-gmbh.de
E-Mail: service@ivd-gmbh.de
Geschäftsführende Gesellschafter:
Dr. Katrin Strutzberg-Minder, Dr. Matthias Homuth, Jens-Peter Minder
Sitz der Gesellschaft: Hannover
Eingetragen beim Amstgericht Hannover: HRB 56590
Umsatzsteueridentifikationsnummer: DE191460506