Versuche
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5<br />
1. Anreicherungsstrategie erklären;<br />
2. graphische Darstellung des pH-Wertes (und ev. der Trübung der Kultur in Abhängigkeit von<br />
der Inkubationszeit;<br />
3. Beschreibung der Zellmorphologie;<br />
1.3. ACTINOMYCETEN<br />
Material: fein gesiebte Gartenerde, Komposterde<br />
Medien: Jensen Agar: Soja Nährboden:<br />
Glucose 2 g Pepton aus<br />
Caseinpepton 0.2 g Sojamehl 20 g<br />
KH 2 PO 4 0.5 g Mannit 20 g<br />
MgSO 4 x 7 H 2 O 0.2 g Agar 18 g<br />
Spurenelementlsg. 5 ml Leitungswasser ad 1 l<br />
Agar 15 g<br />
H 2 O ad 1 l pH 6.8, autoklavieren<br />
pH 6.5 - 6.8, autoklavieren<br />
Nach dem Abkühlen auf ca.50°C<br />
Nystatin (= "Moronal", Fungistaticum) zugeben (300 E/ml) und sofort Platten gießen.<br />
Spurenelementlösung: 5 g möglichst stark mineralisierte Erde in 100 ml H 2 O kochen;<br />
zentrifugieren (5 min, 10 rpm); filtrieren; autoklavieren<br />
Ziel: Isolierung aerober Streptomyceten. Da Streptomyceten keine Einzelzellen bilden, werden<br />
Reinkulturen durch Vereinzelung und Auskeimen von Sporen angelegt.<br />
Durchführung:<br />
1. 10 g Probenmaterial in 100 ml Leitungswasser aufschwemmen; in Erlenmeyerkolben ca. 45 min<br />
schütteln; ein Teil der Suspension 1:10 mit H 2 O verdünnen.<br />
2. Je 2 Tropfen der unverdünnten und der 1:10 verdünnten Suspensionen mit je 10 ml Phenollösung (1<br />
g Phenol / 140 ml H 2 O) vermischen; 15 min stehen lassen.<br />
3. Je 2 Tropfen der phenolbehandelten Suspensionen in 2 Petrischalen geben; je 20 ml geschmolzenen<br />
und auf 47°C abgekühlten Jensen Agar (mit Nystatin) zugeben; gut vermischen durch<br />
kreisende Bewegungen der Petrischalen (Das Benetzen von Schalenrand und Schalendeckel mit<br />
Agar ist zu vermeiden!); bei 28°C inkubieren;<br />
4. Etwa zwischen dem 7. und dem 15. Tag nach Ausplattierung Sporen aus dem Luftmycel von<br />
mindestens 4 möglichst unterschiedlich aussehenden Kolonien vorsichtig mit der sterilen<br />
Impföse abtupfen; in Sektoren von Soja-Nährbodenplatten ausstreichen; bei Raumtemperatur<br />
inkubieren.<br />
Auswertung:<br />
1. Anreicherungsstrategie erklären;<br />
2. Entwicklung und Aussehen der Kolonien und des Mycels während der Inkubationszeit in<br />
Abständen von 2 bis 3 Tagen beobachten und dokumentieren.
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