HPLC-Versuch: Stabilität von Omeprazol - 5. und 8. Semester

HPLC-Versuch: Stabilität von Omeprazol
Vorbesprechung:
Allgemeine Grundlagen HPLC (Aufbau, Zweck der Bestandteile, mobile Phase, Theorie)
Omeprazol (Struktur, Umlagerung im Sauren, Arzneimittel mit Omeprazol in technologischer
Hinsicht, Pharmakologie)
Sie sollten auch alle Begriffe in der folgenden Anleitung verstehen und sowohl wissen,
worum es bei dem Versuch geht, als auch, was Sie zu tun haben. (Also bitte rechtzeitig vorher
gründlich lesen!)
Empfohlene Literatur: Rücker, Mutschler, Steinhilber, …
• Gerhard Rücker, Michael Neugebauer, und Günter Georg Willems: Instrumentelle
pharmazeutische Analytik: Lehrbuch zu spektroskopischen, chromatographischen,
elektrochemischen und thermischen Analysenmethoden, September 2007 oder Januar
2001
• Ernst Mutschler, Gerd Geisslinger, Heyo K. Kroemer, und Monika Schäfer-Korting:
Arzneimittelwirkungen, Januar 2001 oder Mutschler, Gerd Geisslinger, Heyo K.
Kroemer, und Peter Ruth: Arzneimittelwirkungen, April 2008
• Dieter Steinhilber, Manfred Schubert-Zsilavecz, und Hermann J. Roth: Medizinische
Chemie: Targets und Arzneistoffe, Mai 2005
Versuchsaufbau:
Die Anlage darf nur von Assistenten bedient werden!!!
Die Probenvorbereitung erfolgt in Zweier oder Dreier-Gruppen. Nehmen Sie sich für den
entsprechenden Praktikumstag nichts anderes im Labor vor; es ist wichtig, dass die
Probenvorbereitung spätestens 1 Stunde vor Ende des Praktikumstages abgeschlossen ist,
damit die Anlage am folgenden Tag für die nächste Gruppe frei ist.
Es geht bei diesem Versuch darum, die Stabilität von Omeprazol gegen Säure mittels HPLC
zu untersuchen. Dazu wird Omeprazol in Salzsäure gelöst und zu bestimmten Zeitpunkten mit

Natronlauge neutralisiert. Mit der HPLC-Messung können Sie den Abbau des Omeprazols
und die Entstehung der Abbauprodukte beobachten.
Damit nicht alle Gruppen genau die gleichen Ergebnisse erhalten, wird der Versuch in zwei
Varianten durchgeführt, einmal mit konzentrierter Säure (und Lauge), einmal mit verdünnter.
1. Vergewissern Sie sich, dass das Abfallgefäß leer ist und noch ausreichend Fließmittel
zur Verfügung steht. Es sollten noch 500 mL Phosphatpuffer und je 300 mL Methanol,
Acetonitril und HPLC-Wasser vorhanden sein. Ist diese Menge unterschritten, holen
Sie es bitte im Assistentenzimmer, bzw. stellen Sie neuen Puffer her. Es handelt sich
um 0,05 M Phosphatpuffer pH 7,0. Sie brauchen Kaliumdihydrogenphosphat,
(M r = 136 g/mol) HPLC-Wasser (Assistentenzimmer) und KOH zur Einstellung des
pH-Wertes. (Die Einwaage sollten Sie selbst berechnen können.)
2. Sie erhalten 5 10 mL-Messkolben, die jeweils etwa 1 mg Omeprazol enthalten (die
genaue Einwaage ist darauf vermerkt).
a. Einen davon füllen Sie mit einer 1:1-Mischung aus Wasser und Methanol auf.
Daraus wird die Kalibriergerade erstellt. Dazu entnehmen Sie 5 mL aus der
Stammlösung und überführen Sie diese in einen weiteren (leeren) 10 mL-
Messkolben. Füllen Sie mit der Wasser-Methanol-Mischung auf 10 mL auf.
(Schütteln nicht vergessen!) Aus dieser Lösung werden wieder 5 mL
entnommen. Der Vorgang wird solange wiederholt, bis Sie 4 Lösungen für die
Kalibriergerade haben (also 3 Verdünnungsschritte).
b. In die anderen 4 Messkolben werden je 2,5 mL 0,1 M HCl gegeben (bzw.
0,001 M HCl in der zweiten Variante). Stoppen Sie die Zeit! Nach 5 Minuten
wird die erste Reaktion angehalten, indem Sie 2,5 mL 0,1 M NaOH (bzw.
0,001 M NaOH) zugeben. In den anderen Messkolben stoppen Sie die
Reaktion nach 15, 30 und 90 Minuten, jeweils wieder durch Zugabe von
NaOH. Jeder Messkolben wird direkt nach dem Stoppen mit Puffer auf 10 mL
aufgefüllt.
3. Überführen Sie von jeder der 8 Lösungen etwa 500 µL in 8 HPLC-Vials. Das Vial ist
dann etwa zur Hälfte gefüllt. Die Vials werden in das zum Gerät gehörige Rack
einsortiert. Die Methode ist so programmiert, dass die Plätze 1-4 von den Proben für
die Kalibriergerade besetzt sein müssen, und zwar mit abnehmender Konzentration.
Die Plätze 5-8 sollen die 4 Proben in aufsteigender Reaktionszeit enthalten.
1. Wenn Sie mit der Probenvorbereitung fertig sind, melden Sie sich im
Assistentenzimmer. Der HPLC-Lauf kann dann gestartet werden (vom Assistenten!).

Die verwendete Säule ist eine LiChroCART® 125-4 von Merck mit einer LiChrospher
100RP18-Füllung (5 µm). Als mobile Phase wird eine Mischung aus Phosphatpuffer
pH 7,0 (0,05 M), Methanol und Acetonitril im Verhältnis 5:3:2 verwendet. (Die
Mischung braucht nicht hergestellt zu werden, die Anlage besitzt einen
Gradientenmischer.) Mit diesem Gemisch wird zunächst die Anlage gepurgt und dann
30 Minuten bei einer Flussrate von 1 mL/min die Säule äquilibriert. Die Trennung
erfolgt dann mit einer Flussrate von 1,2 mL/min. Die Detektion erfolgt bei einer
Wellenlänge von 280 nm. Der Lauf für die Proben der Kalibriergeraden dauert
6 Minuten, der für die Proben 40 Minuten. Sie sehen also, dass es durchaus
entscheidend ist, dass Sie die Proben richtig in das Rack einsortieren.
2. Da die Trennung aller Proben einige Stunden dauert, kann die Auswertung erst am
nächsten Praktikumstag erfolgen. Bringen Sie sich einen USB-Stick mit. Sie erhalten
die Chromatogramme mit den Wertetabellen in Form von PDF-Dateien. Die
Auswertung soll mit Excel erfolgen. Zunächst erstellen Sie eine Kalibriergerade für
die verschiedenen Omeprazol-Konzentrationen (mit Gleichung und
Korrelationskoeffizient). Anhand der Kalibriergerade können Sie die Abnahme der
Omeprazol-Konzentration in den Proben verfolgen. Stellen Sie auch diese Abnahme in
einer geeigneten graphischen Form dar
3. Die Abgabe der Auswertung hat spätestens am zweiten Praktikumstag nach der
Probenvorbereitung zu erfolgen. Legen Sie den Ausdruck ihrer Auswertung in Ihr
Analysenheft und vermerken Sie auch die Analyse darin. Die Auswertung sollten Sie
sicherheitshalber an diesem Tag auch in elektronischer Form auf dem USB-Stick
dabeihaben. Rechnen Sie damit, dass Sie uns zeigen müssen, wie Sie die Excel-
Diagramme erstellt haben. Übernehmen Sie also nicht einfach irgendwelche Dateien
von anderen Gruppen ohne sich erklären zu lassen, wie die Auswertung funktioniert.