EHEC-Direkt-Medium 4,5 ml - Heipha Dr.Müller GmbH
EHEC-Direkt-Medium 4,5 ml - Heipha Dr.Müller GmbH
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<strong>EHEC</strong>-<strong>Direkt</strong>-<strong>Medium</strong> 4,5 <strong>ml</strong><br />
1460180020/1460180100 (heipha 1055r)<br />
Anwendung<br />
Durch seinen Gehalt an Mitomycin C (50 ng/<strong>ml</strong>)<br />
wird mit einer Anreicherung in <strong>EHEC</strong>-<strong>Direkt</strong>-<br />
<strong>Medium</strong> sowohl die notwendige Anreicherung von<br />
<strong>EHEC</strong>-Bakterien aus Stuhlproben erzielt als auch<br />
gleichzeitig eine Stimulation der Toxinbildung zum<br />
direkten Shigatoxin-Nachweis mittels ELISA bewirkt.<br />
Auch schwache Shigatoxinproduzenten<br />
können somit sicher erfaßt werden.<br />
<strong>EHEC</strong>-<strong>Direkt</strong>-<strong>Medium</strong> ist neben Glasröhrchen à<br />
4,5 <strong>ml</strong> (Art.-Nr. 1460180020/1460180100 (heipha<br />
1055r)) auch in zentrifugierbaren Kunststoffröhrchen<br />
à 4 <strong>ml</strong> (<strong>EHEC</strong>-<strong>Direkt</strong>-<strong>Medium</strong> 4 <strong>ml</strong>, Plastik;<br />
Art.-Nr. 1460100020/1460100100 (heipha<br />
1055rp)) erhältlich.<br />
Zusammensetzung pro l<br />
Spezialpepton 20,0 g<br />
NaCl 5,0 g<br />
Kaliumphosphat 2,7 g<br />
Novobiocin 10 mg<br />
Cefsulodin 6 mg<br />
Wachstumsfaktoren 10 <strong>ml</strong><br />
Mitomycin C 50 µg<br />
pH 7,4 � 0,2<br />
Qualitätskontrolle<br />
Escherichia coli<br />
EDL 933<br />
(Serovar O157:H7, Stx 1 und 2)<br />
Escherichia coli<br />
E32511<br />
(Serovar O157:H - , Stx 1 und 2)<br />
Escherichia coli<br />
ATCC 25922<br />
Staphylococcus aureus<br />
ATCC 6538p<br />
Pseudomonas aeruginosa<br />
ATCC 9027<br />
Die Bouillon ist klar und gelblich gefärbt.<br />
Beschreibung<br />
Das verwendete Pepton enthält, neben einer<br />
hochwertigen Nährstoffbasis, L-Norepinephrin in<br />
einer Konzentration, wie sie auch im Intestinum<br />
vorkommt. Bakterienwachstum und Shigatoxinbildung<br />
von <strong>EHEC</strong> werden so wirkungsvoll angeregt.<br />
Ebenfalls wachstumsfördernd wirkt der Zusatz<br />
eines selektiven Siderophors für E. coli.<br />
Die Antibiotika Novobiocin und Cefsulodin hemmen<br />
die grampositive und einen Teil der gramnegativen<br />
Begleitflora. Mitomycin C stimuliert effektiv<br />
die Shigatoxin-Produktion.<br />
Kulturbedingungen<br />
Stuhlmaterial von einem „dünnen Tupfer“, z. B.<br />
WZ-100 von em-te, wird in einem Röhrchen<br />
<strong>EHEC</strong>-<strong>Direkt</strong>-<strong>Medium</strong> für 18 - 20 Stunden bei<br />
37 °C unter kontinuierlichem kräftigem Schütteln<br />
zur Verbesserung des Sauerstoffeintrages inkubiert.<br />
Im Anschluß an eine Zentrifugation wird der<br />
Shigatoxin-ELISA direkt aus dem Überstand ausgeführt.<br />
gutes Wachstum, deutliche Trübung<br />
ca. 200 lebende Bakterien in ca. 0,20 g Stuhl („dünner Tupfer“) ergeben<br />
entsprechend o. g. Kulturbedingungen ein signifikant positives Signal im<br />
Shigatoxin-ELISA<br />
gutes Wachstum, deutliche Trübung<br />
ca. 200 lebende Bakterien in ca. 0,20 g Stuhl („dünner Tupfer“) ergeben<br />
entsprechend o. g. Kulturbedingungen ein signifikant positives Signal im<br />
Shigatoxin-ELISA<br />
gutes Wachstum, deutliche Trübung<br />
negativ im Shigatoxin-ELISA<br />
kein Wachstum, keine Trübung<br />
kein Wachstum, keine Trübung<br />
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1460180020/1460180100-1-0101
Weiterführende Identifizierung<br />
Das Sediment der <strong>EHEC</strong>-<strong>Direkt</strong>-<strong>Medium</strong>-Kultur<br />
kann bei positivem ELISA zur Bestätigung und<br />
Isolierung von <strong>EHEC</strong>-Bakterien auf Enterohämolysin-Agar<br />
mit Antibiotika (Art.-Nr. 1461000020<br />
(heipha 1054e)), auf ein chromogenes E. coli<br />
O157-Nährmedium (z.B. BCM-Agar, heipha Art.-<br />
Nr. 112e oder in geteilter Schale mit Enterohämolysin-Blutagar<br />
als <strong>EHEC</strong>-Agar Art.-Nr.<br />
1460090020 (heipha 105112e)) oder auf die Celluloseacetat-Membran<br />
eines Immunoblots (z.B.<br />
Shigatoxin (Stx)-Kolonie-Immunoblot, SIFIN Art.-<br />
Nr. TS2110) ausgestrichen werden. Der verbleibende<br />
„dünne Tupfer“ Bakterienmaterial ist danach<br />
in einem üblichen Transportsystem, z.B. auf<br />
Basis eines Stuart-Transportmediums, für mindestens<br />
Wochen 2 haltbar und versandfähig.<br />
Ein direkter Einatz des <strong>EHEC</strong>-Sedimentes als<br />
Template für die Shigatoxin-PCR ist ebenfalls<br />
möglich.<br />
Literatur<br />
Reissbrodt, R. (1998): Enterohaemorrhagic E.<br />
coli: Isolation and identification. Biotest Bulletin 6:<br />
65-74.<br />
Fruth, A. et al. (2000): Zur Verbesserung der gegenwärtigen<br />
bakteriologischen Diagnostik von<br />
enterohämorrhagischen Escherichia coli (<strong>EHEC</strong>) -<br />
Stufenplan für klinische und epidemiologische<br />
Zwecke. Bundesgesundheitsbl., 43: 310-317.<br />
Epidemiologisches Bulletin 34/2000: Enterohämorrhagische<br />
Escherichia- coli- Infektionen<br />
(<strong>EHEC</strong>). 272-278.<br />
heipha <strong>Dr</strong>. <strong>Müller</strong> <strong>GmbH</strong> Tel. +49 (0) 62 21 -7 59 01 -0<br />
Lilienthalstraße 16 Fax +49 (0) 62 21 -7 59 01 -9 90<br />
D-69214 Eppelheim e-mail info@heipha.de<br />
www.heipha.com<br />
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