Das histon-ähnliche Protein aus Thermotoga maritima, TmHU, als ...
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152 Anhang<br />
7 ANHANG<br />
7.1 Plasmidkarten<br />
7.1.1 pGEM-T-Vektor (Fa. Promega)<br />
Abbildung 7-1: Plasmidkarte des pGEM-T-Vektors<br />
7.1.2 pUC19-Vektor (Fa. New England BioLabs)<br />
Abbildung 7-2: Plasmidkarte des pUC19-Vektors<br />
Abbildung 7-3: Multiple cloning site von pUC19
Anhang 153<br />
7.1.3 pET-11a-Vektor (Fa. Novagen, Inc.)<br />
Abbildung 7-4: Plasmidkarte des pET-11a-Vektors<br />
Abbildung 7-5: Multiple cloning site von pET-11a-d
154 Anhang<br />
7.1.4 pET-17b-Vektor (Fa. Novagen, Inc.)<br />
Abbildung 7-6: Plasmidkarte des pET-17b-Vektors<br />
Abbildung 7-7: Multiple cloning site von pET-17b<br />
7.1.5 pEGFP-C3-Vektor (Fa. BD Biosciences, Clontech)<br />
Abbildung 7-8: Plasmidkarte des pEGFP-C3-Vektors
Anhang 155<br />
Abbildung 7-9: Multiple cloning site von pEGFP-C3<br />
7.1.6 pd2EGFP-N1-Vektor (Fa. BD Biosciences, Clontech)<br />
Abbildung 7-10: Plasmidkarte des pd2-EGFP-N1-Vektors<br />
Abbildung 7-11: Multiple cloning site von d2EGFP-N1
156 Anhang<br />
7.2 Abkürzungen<br />
7-AAD 7-Amino-Aktinomycin D<br />
Ak Antikörper<br />
APS Ammoniumperoxodisulfat<br />
Bcl-2 B-cell lymphoma 2<br />
bp base pairs<br />
BSA Bovines Serum-Albumin<br />
CMV Cytomegalovirus<br />
Cys Cystein<br />
CytD Cytochalasin D<br />
Da Dalton<br />
DAPI 4',6-Diamidino-2-phenylindol<br />
DIG Digoxygenin<br />
DNA Desoxyribonukleinsäure<br />
ds double stranded<br />
EcoHU HU-<strong>Protein</strong> <strong>aus</strong> E. coli<br />
E. coli Escherichia coli<br />
EDTA Ethylendiamintetraacetat<br />
EGFP Enhanced Green Fluorescent<br />
<strong>Protein</strong><br />
Fa. Firma<br />
FACS Fluorescence-activated-cell<br />
sorting<br />
FBS Foetal Bovine Serum<br />
FITC Fluoresceinisothiocyanat<br />
FPLC Fast Performance Liquid<br />
Chromatography<br />
HPLC High Performance Liquid<br />
Chromatography<br />
HRP Horseradish Peroxidase<br />
IPTG Isopropyl-beta-Dthiogalactopyranosid<br />
kB Kilobasenpaare<br />
KLSM Konfokale Laser-Scanning-<br />
Mikroskopie<br />
LAL Limulus-Amoebozyten-Lysat<br />
LDH Lactat-Dehydrogenase<br />
MTT 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-<br />
2,5-Diphenyltetrazoliumbromid<br />
nt Nukleotide<br />
OD Optische Dichte<br />
PAGE Polyacrylamidgelektrophorese<br />
PCR Polymerase Chain Reaction<br />
PEG Polyethylenglycol<br />
PET Plasmid for Expression by T7<br />
RNA Polymerase<br />
PLL Poly(L-Lysin)<br />
PNA Peptid-Nukleinsäure<br />
RNA Ribonukleinsäure<br />
RNAi RNA-Interferenz<br />
rpm Revolutions per minute<br />
RT Raumtemperatur<br />
sc small cytoplasmic<br />
SDS Sodiumdodecylsulfat<br />
siRNA Small Interfering Ribonucleic<br />
Acid<br />
ss single stranded<br />
TCEP Tris(2-carboxyethyl)phosphin-Hydrochlorid<br />
TEMED N,N,N',N'-<br />
Tetramethylethylendiamin<br />
TMB Tetramethylbenzidin<br />
TNF Tumor Necrosis Factor<br />
ÜN über Nacht<br />
UTP Uridintriphosphat<br />
Vt<br />
Säulenvolumen<br />
X-Gal 5-Bromo-4-chloro-3-indolylβ-D-galactopyranosid<br />
Anglizismen wurden in dieser Arbeit nur dann benutzt, wenn sie feste Bestandteile des<br />
Sprachgebrauchs in der heutigen Biochemie sind. Diese Wörter sind kursiv gedruckt.
Anhang 157<br />
7.3 Lebenslauf<br />
Zur Person<br />
Name: Claudia Immisch<br />
Geburtsdatum: 09.06.1976<br />
Geburtsort: Cottbus<br />
Schulbildung<br />
09.1993 – 06.1996 Hochschulreife<br />
Hochschulstudium<br />
1. Gesamtschule, Cottbus<br />
10.1996 – 09.2001 Studium der Biochemie (Diplom) an der Martin-Luther-Universität<br />
Halle-Wittenberg<br />
10.2000 - 05.2001 Diplomarbeit am Institut für Anatomie und Zellbiologie der Martin-<br />
Luther-Universität Halle-Wittenberg unter der Leitung von Prof. Dr.<br />
Dr. Bernd Fischer und Dr. Anne Navarrete Santos<br />
Thema der Diplomarbeit: „Untersuchung der differentiellen Genexpression<br />
bei PCB-exponierten Kaninchenembryonen“<br />
09.2001 Abschluss: Diplom-Biochemikerin<br />
10.2001 – 06.2005 Wissenschaftliche Mitarbeiterin in der Abteilung „Therapeutika“ der<br />
Firma ACGT ProGenomics in Halle<br />
10.2001 – 01.2006 Promotion im Fach Biochemie am Institut für Biotechnologie der Martin-Luther-Universität<br />
HalleWittenberg und in der ACGT ProGenomics<br />
AG unter der Leitung von Prof. Dr. Rainer Rudolph, Dr. Gerald Böhm<br />
und Dr. Alexander Navarrete Santos<br />
Halle (Saale), 07.02.2006<br />
Claudia Immisch<br />
Thema der Dissertation: „Synthese und Analytik von <strong>TmHU</strong>, dem<br />
Histon-<strong>ähnliche</strong>n <strong>Protein</strong> <strong>aus</strong> <strong>Thermotoga</strong> <strong>maritima</strong>, und dessen Einsatz<br />
<strong>als</strong> proteinogenes Gentransfersystem“
158 Anhang<br />
7.4 Tagungsbeiträge und Publikationen<br />
Vorträge:<br />
02/2002 35. Jahrestagung Physiologie und Pathologie der Fortpflanzung und 27. Veteri-<br />
när-Humanmedizinische Gemeinschaftstagung, Leipzig, Vortrag mit dem Titel:<br />
„Expressional changes in metabolising enzymes after exposure of rabbit blastocysts<br />
to polychlorinated biphenyls (PCB)“<br />
Poster:<br />
09/2002 Gemeinsame Herbsttagung der Gesellschaft für Biochemie und Molekularbiologie<br />
und der Deutschen Gesellschaft für Experimentelle und Klinische Pharmakologie<br />
und Toxikologie, Halle, Poster mit dem Titel: „Binding of RNA to the <strong>histon</strong>e-like<br />
protein <strong>TmHU</strong>“<br />
05/2004 3. Biotechnologie-Tag an der Universität Leipzig, Poster mit dem Titel: „The<br />
<strong>histon</strong>e-like protein <strong>TmHU</strong> from <strong>Thermotoga</strong> <strong>maritima</strong>: Recombinant production<br />
and application as transport vehicle for siRNA“<br />
Publikation:<br />
M. Salomo, K. Kroy, K. Kegler, C. Gutsche, M. Struhalla, J. Reinmuth, W. Skokow, C. Immisch,<br />
U. Hahn and F. Kremer. Cooperative binding of <strong>TmHU</strong> to single ds-DNA as observed<br />
by optical tweezers. J Mol Biol. 2006 Jun 9;359(3):769-76. Epub 2006 Apr 19.
Anhang 159<br />
7.5 Danksagung<br />
Die vorliegende Arbeit wurde von Oktober 2001 bis Januar 2006 in der ACGT ProGenomics<br />
AG in der Abteilung Therapeutika und am der Martin-Luther-Universität Halle-Wittenberg<br />
unter der Betreuung von Dr. Gerald Böhm und Prof. Dr. Rainer Rudolph angefertigt.<br />
Dr. Gerald Böhm danke ich für die Überlassung des interessanten Themas und die Möglichkeit<br />
die Arbeit in der ACGT ProGenomics AG unter hervorragenden Arbeitsbedingungen anzufertigen.<br />
Prof. Dr. Rainer Rudolph danke ich für die Betreuung der Arbeit im Rahmen des Doktorandenseminars<br />
am Institut für Biotechnologie, sowie für zahlreiche Diskussionen und Denkanstöße.<br />
Ich danke ebenfalls für die Bereitwilligkeit das Gutachten für diese Arbeit zu erstellen.<br />
Dr. Alexander Navarrete Santos danke ich besonders herzlich für Betreuung des praktischen<br />
Teils meiner Arbeit im Labor, für die Einweisung in die FACS-Analytik und die vielen Ideen,<br />
wenn es mal wieder „hakte“. Seine immer währende gute Laune hat viel Sonne in den grauen<br />
Laboralltag gebracht. Ich danke ihm auch für die Geduld beim Korrekturlesen meiner Arbeit.<br />
Prof. Dr. Ralf Wagner danke ich für die Bereitschaft das Gutachten für diese Arbeit zu übernehmen<br />
und PD Dr. Helge Taubert für das Korrekturlesen meiner Arbeit.<br />
Dr. Thomas Lauber von der ACGT ProGenomics AG danke ich für die Unterstützung bei der<br />
Durchführung der biochemisch-physikochemischen Charakterisierung von <strong>TmHU</strong> und die Einführung<br />
in verschiedene analytische Methoden.<br />
Dr. Lothar Trieschmann von der ACGT danke ich für die Bereitstellung der Zelllinie MCF-7-<br />
EGFP und Prof. Dr. Armin Buschauer und PD Dr. Günther Bernhard <strong>aus</strong> dem Institut für<br />
Pharmazie der Universität Regensburg für die Bereitstellung der Zelllinien U-373-MG und U-<br />
373-MG-EGFP.<br />
PD Dr. Hauke Lilie danke ich für die Durchführung der analytischen Ultrazentrifugation und<br />
sein offenes Ohr für die vielen Fragen, die ich ihm gestellt habe. Mit seinem immensen Wissen<br />
hat er mir sehr geholfen.<br />
Meinem „HiWi“ Benjamin Schmiedel danke ich für sein sehr gewissenhaftes Arbeiten im Labor.<br />
Ohne ihn wäre ich ein manches Mal nicht so schnell vorangekommen.<br />
Nicht zu vergessen ist natürlich die angenehme Arbeitsatmosphäre in den Räumen der ACGT.<br />
Besonders die gemeinsamen Kaffeep<strong>aus</strong>en in unserer Teeküche habe ich immer sehr genossen.<br />
In diesem Sinne ein herzliches Dankeschön an alle Kollegen und Kolleginnen der ACGT.<br />
Dank gebührt auch den Menschen <strong>aus</strong> meinem privaten Umfeld, die mich immer wieder aufgebaut<br />
und ein manches Mal meine geistige Stabilität bewahrt haben. Ich weiß das sehr zu<br />
schätzen.<br />
Ganz <strong>aus</strong>drücklich möchte ich meinen Eltern für ihre jahrzehntelange, uneingeschränkte Un-<br />
terstützung und Hilfe in allen Lebenslagen danken.
160 Anhang<br />
7.6 Selbstständigkeitserklärung<br />
Hiermit erkläre ich an Eides statt, dass ich mich bisher mit dieser Arbeit weder an der Mar-<br />
tin-Luther-Universität Halle-Wittenberg, noch an einer anderen Einrichtung um die Erlan-<br />
gung eines akademischen Grades beworben habe. Ich versichere weiterhin, dass die vorlie-<br />
gende Arbeit selbstständig und nur unter Benutzung der angegeben Quellen und Hilfsmittel<br />
erstellt wurde. Den benutzten Werken wörtlich oder inhaltlich entnommene Stellen sind <strong>als</strong><br />
solche gekennzeichnet.<br />
Halle (Saale), 07.02.2006<br />
Claudia Immisch
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