NATüRLICHE KILLERzELLEN & IMMuNTHERAPIE - Dr. Kübler GmbH

Natürliche
Killerzellen
&
Immuntherapie
Ulrich Kübler

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Adoptiver transfer von Nk-Zellen bei der Immuntherapie
des Krebses als alternative zur chemotherapie
Der adoptive Zelltransfer wurde in den 80er-Jahren
erstmals von Stephen A. Rosenberg, chirurgischer
und molekular-biologischer Chef der Chirurgischen
Abteilung des National Cancer Institutes entwickelt
(1).
Ihm war eine scheinbare Spontanheilung bei Krebs
aufgefallen und er hatte festgestellt, dass
infektionsbedingt die Cytokinspiegel bei diesen
Patienten in einer bestimmten Phase hoch waren.
Bei dieser Gelegenheit entdeckte er das Interleukin-
2, welches später von Cetus genetisch rekombinant
hergestellt wurde, was dann zum Siegeszug der
Cytokine beitrug. Er entwickelte die Apherese für
die apheretische Gewinnung von NK-Zellen. Dabei
übersah er jedoch, dass bei der Apherese von NK-
Zellen gleichzeitig kontaminierende Tumorzellen
angereichert werden und somit auch mitkultiviert
werden.
Eine Nk-Zelle beim Angriff auf eine Ovarial-Tumorstammzelle mit freundlicher Genehmigung von Dr. U. Kübler
Im Jahr 1992 entwickelte die Dr. Kübler GmbH ein
Verfahren, welches es ermöglicht, diese
kontaminierenden Tumorzellen von den NK-Zellen
zu trennen.
Voraussetzung für eine erfolgreiche NK-Therapie ist
die Eliminierung kontaminierender
Tumorstammzellen im Apherisat, welches die
Ausgangszellen der NK-Zellen enthält. Ihre
vermehrte Rückgabe in den Kreislauf löst
ansonsten die zusätzliche iatrogene
Metastasierung aus (2).
Die apheretische Gewinnung der
Vorläuferzellen, deren Ausreifung in Zellkultur
durch Zusatz von Interleukin-2 nennt man
immunadoptive Therapie. Sie gewährt ein
längeres metastasenfreies Überleben, als es mit
einer Chemotherapie möglich wäre.
Kombinierte Immuntherapie
Die konventionellen Krebstherapien sind für die
meisten Patienten schmerzhaft und schwächen sie
und ihr Immunsystem so stark, dass ein normaler
Alltag nicht mehr möglich ist. Nur allzu oft sind
diese Therapien wenig erfolgreich und verlängern
die Lebensspanne kurzzeitig.
Ziel einer modernen erfolgreichen Krebstherapie
sollte es sein, neben einer Verbesserung der
Heilungschancen, die Lebensqualität der Patienten
zu erhalten.
Dies ist mit Hilfe der Natürlichen Killerzellen
möglich.
Diese Art von Therapie hat den Vorteil, dass man
die körpereigenen Kräfte mobilisiert.
Nebenreaktionen treten nie auf, gegen
körpereigene Zellen wehrt der Körper sich nicht.
Eine Resistenzentstehung gegenüber eingesetzten
Medikamenten, wie sie bei Chemotherapien sehr
oft beobachtet wird, ist nicht möglich.
Sowohl die dendritischen als auch die LAK-Zellen
stammen von den Blutstammzellen ab und sind
entscheidend für die Funktionsfähigkeit des
menschlichen Immunsystems.
1. Adoptive cell transfer a clinical path to effective immunotherapy – Rosenberg et al, Nature Rev Cancer. 2008 April; 8(4): 299-308
2. Thirukkumaran, CM, Biological urging of breast cancer cell lines, Bone Marrow Transplantation (2005) 35, 1055-64

Gewonnen werden die Zellen aus dem
patienteneigenen Blut mittels einer Leukozyten-
Apherese. Durch Purging wird sichergestellt, daß
keine Tumorzellen mit kultiviert werden.
Die gewonnenen Leukozyten werden in
entsprechenden Nährmedien kultiviert. Durch die
Zugabe unterschiedlicher Wachstumsfaktoren
kommt es zur Ausdifferenzierung und Reifung der
Zellen. Im Falle der LAK-Zellen handelt es sich
dabei um IL2, im Falle der dendritischen Zellen
um GC-MSF und IL4.
Wie durchflußzytometrische Studien zeigen, sind
die dendritischen Zellen unter diesen
Bedingungen nach einer Woche vollständig
ausgereift. Die LAK-Zellen benötigen zur
optimalen Entwicklung drei Wochen.
Es wurde gezeigt, dass es wichtig ist, beide
Zelltypen dem Patienten in ausreichenden Mengen
zuzuführen. Eine alleinige LAK-Therapie führt
ebensowenig wie eine alleinige Therapie mit
dendritischen Zellen zu dem gewünschten Erfolg,
wie frühere Studien zeigen.
Es ist sogar davon auszugehen, daß die Erfolge der
einseitigen LAK-Therapie darauf zurückzuführen
sind, dass die entsprechenden Kulturen einen
geringen Anteil dendritischer Zellen enthielten.
Dieser Anteil ist jedoch sehr patientenspezifisch,
wie Studien belegen.
Daher ist es notwendig, neben den LAK-Zellen
auch dendritische Zellen anzureichern.
Aus der Blutbahn isolierte dendritische Zellen.
Metastasierende Zellverbände eines Lungenkarzinoms, lebend aus der Blutbahn isoliert, von NK-Zellen umgeben
Die gleichzeitige Gabe von Hitzeschockprotein
Vaccinen (HSP) während einer LAK/dendritischen
Zelltherapie, steigert die Heilungschance erheblich.
Am Anfang einer erfolgversprechenden Behandlung
steht jedoch eine umfangreiche Diagnostik, um eine
möglichst optimale Therapieform für jeden
einzelnen Patienten zu finden.
Dies kann jedoch nur geschehen, wenn
• zum einen der Krebs so früh wie möglich
erkannt wird und
• zum anderen die Art bzw. Arten des oder der
genetischen Defekte, die zur Transformation der
Zellen führen, herausgefunden werden können.
Beide Punkte werden mit der diagnostischen
Apherese (Deutsches Bundespatent 42 28 389,
Europäisches Patent 0.584.715, US Patent
5,529,903, Japanisches Patent 211352) erfüllt. Zum
einen kann man damit zirkulierende Tumorzellen
aus dem Blut nachweisen, was eine optimale
Früherkennung gewährleistet, zum anderen läßt sich
damit die Art des genetischen Defektes einer
transformierten Zelle bestimmen.
Die apheretisch gewonnenen Zellen werden durch
einen Dichtegradienten in verschiedene Phasen
getrennt. Danach werden die relevanten Zellen
mehrfach gewaschen, bis der gewünschte
Reinheitsgrad erreicht ist. Anschließend können auf
Protein-Ebene die transformierten Zellen
nachgewiesen werden.
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Dies geschieht mit Hilfe von membranständigen
Antigenen, die nur von Tumorzellen aufgrund ihres
genetischen Defektes expremiert bzw.
überexpremiert und mittels monoklonaler
Antikörper „detektiert“ werden können. Eine
anschließende Farbreaktion macht die
„detektierten“, transformierten Zellen sichtbar.
Bei den verwendeten Antiköpern handelt es sich um
Antiköper für:
c-myc p53m
EGFR c-erb/B2
cd-44v6 VEFG
MDR / Y-Box-1 Survivin
ck-RAS AKT/mTOR
c-Met Urokinase
OCT-3/4 Östrogen-Rezeptor-beta
Indolamindeoxygenase
Man kann mit Hilfe der Fluoreszenz in situ
Hybridisierung (FISH) auch direkt auf Gen-Ebene
Zelldefekte diagnostizieren. Als Beispiel sei hier
wiederum die Amplifikation (Mehrfachkopierung) des
HER2-Gens genannt.
C-erb/B2 Genamplifikation
Somit ist zu sagen, dass eine erfolgreiche
Krebstherapie nur auf der Grundlage einer
umfangreichen und genauen Diagnostik, die sowohl
auf Protein als auch Gen Ebene stattfindet, durchgeführt
werden kann.
Die anschließende Therapie sollte dann möglichst
patientenspezifisch und schonend sein, was die
Kombinierte Immuntherapie gewährleistet.
Während man in Deutschland mit Hilfe der
Millionen des Steuerzahlers immuntherapeutische
Netzwerke aufbauen möchte, in denen gezeigt
werden soll, dass aktivierte autologe Killerzellen,
3. Die Saat des Bösen Der Spiegel Heft 24 vom 29.09.2007.
4. Über den Stoffwechsel der Carcinomzelle, Warburg Otto, 10. Sept. 1924
beispielsweise die myeloische Leukämie in Schach
halten können, hat man dies bei der Privatmedizin
seit den 90er-Jahren in der täglichen, klinischen
Routine.
Dabei sollte berücksichtigt werden, dass die
Metastasierung der eigentliche signifikante Prozeß
ist, der das klinische Management von Krebs
bestimmen sollte.
Das Einwandern der Tumorzelle in das umgebende
Gewebe und in den Kreislauf wird nicht zur
Kenntnis genommen, weder diagnostisch, noch
therapeutisch. Solange dies der Fall ist, wird die
Mortalität an Krebs nicht sinken.
Spätestens beim ersten Eindringen nicht mehr
regelbarer Stammzellen in den Kreislauf müssen
targetspezifische Maßnahmen gegen die epitheliale
mesenchymale Transition, die die Ursache dieses
Phänomens ist, ergriffen werden. Wenn die Balance
zwischen EMT und MET, die Folge einer
Überexpression von c-Met verloren gegangen ist,
tauchen immer mehr nicht regelbare Tumor-
Stammzellen im Kreislauf auf und die Saat des
Bösen beginnt aufzugehen(3).
Die polarisierte epitheliale Zelle ist unbeweglich
und hört auf Stopsignale. Entpolarisiert wird sie
beweglich und tritt ihre tödliche Reise als
mesenchymale Zelle durch den Kreislauf an. Dieser
Prozeß ist archaisch fixiert, wird durch Biopsien
gefördert und findet seinen metabolischen
Ausdruck in der Warburg’schen Gärung. Die
Feststellung dieses Phänomens führte 1932 zur
Verleihung des Nobelpreises an Otto Warburg (4).
Das Phänomen der Gärung ist bis heute nicht zur
Gänze verstanden, da wahrscheinlich
mitochondriale Phänomene im Sinne der Störung
der Atmungskette eine Rolle spielen, beispielsweise
führt eine Mutation des p53 nicht nur zum
Apoptoseverlust, sondern auch zum
Syntheseverlust, der für die Atmungskette so
wichtigen Cytochromoxidase innerhalb der
Mitochondrien.
Diätetische Maßnahmen haben in diesem

Zusammenhang nur einen Grenznutzen, als
alleinige Maßnahmen sind sie nicht geeignet aus
Krebs eine beherrschbare Erkrankung zu machen
oder die Balance zwischen EMT und MET wieder
herzustellen. Dies kann man nur, indem man die
Tumorstammzelle mit den Perforinen der NK-Zelle
angreift und diese zur Apoptose zwingt.
Dabei ist sicherzustellen, dass die Apherisate, aus
denen die NK-Zellen hergestellt werden, selbst
tumorstammzellfrei gemacht werden, was sie a
priori nicht sind.
Wenn man archaische Medizin betreibt, sodass
50 % der Fälle, bei denen Krebs diagnostiziert wird,
bereits sichtbare Metastasen haben, so darf es nicht
wundern, dass dann jede Therapie nicht mehr
kurativ ist, sondern nur noch lebensverlängernd.
Auch wenn die Krankheit noch nicht metastasiert
hat, ist die Versorgung heutzutage so rabiat, dass sie
durch diagnostische und chirurgische Maßnahmen
zur systemischen Erkrankung gemacht wird.
Es ist längst erwiesen, dass bioptische und
chirurgische Maßnahmen Tumorstammzellen in
großer Zahl in die Blut- und Lymphbahn freisetzen
und damit den molekularen Käfig öffnen und aus
einer lokalen eine systemische Erkrankung machen
(5,6,7,8,9).
Längst erlauben Verfahren wie die Sono-Histologie,
die diagnostische Apherese sowie die Kryotherapie,
die biopsiefreie Diagnostik von Krebs, die
Vorverlegung des diagnostischen Zeitpunktes.
Dennoch wird am archaischen Biopsieren und
Operieren festgehalten.
In vielen Fällen kommt es aber selbst darauf nicht
mehr an, denn nach Prof. Otmar Wiestler, dem
derzeitigen Chef des DKFZ sind 50 % aller
Krebsfälle zum Zeitpunkt der Diagnostik mit
bildgebenden Verfahren metastatisch. Es kann
dann ohnehin nur noch palliativ gehandelt werden
und es gilt dann, was Hölzl in „Giftkuren ohne
Nutzen“ sagt:
Verzichtet man auf Chemo- und
Strahlentherapie lebt der Patient im
Durchschnitt noch 4 Jahre. Verzichtet man
nicht darauf, ist er im Durchschnitt in 18
Monaten tot, führt man eine kombinierte
Immuntherapie durch, so kann er noch 8-13
Jahre leben (10).
Der adoptive Transfer von NK-Zellen anstelle
fragwürdiger Chemotherapien wäre auch wesentlich
kostengünstiger (11).
Dutzende neuer Krebsmittel drängen auf den
Markt. Die Verheißung ist gewaltig, der Nutzen
jedoch fraglich – nur die Hersteller profitieren. Jetzt
wehren sich die Ärzte, denn die astronomischen
Preise dieser Präparate gefährden das
Gesundheitssystem.
Mit noch so vielen monoklonalen Antikörpern
oder extrem teuren Kinase-Inhibitoren können Sie
die evolutionär bedingte Fähigkeit der
Tumorstammzelle, die die eigentliche Ursache der
Krebserkrankung ist, nicht eliminieren.
Diese Zelle besitzt aufgrund der Expression der
Indolamindeoxygenase die Fähigkeit den
körpereigenen NK-Zellen den
Aminosäurebrennstoff, den sie zu ihrer Funktion
benötigen, zu entziehen.
Die Expression dieses Enzyms findet statt nach
epithelio mesenchymaler Transition der regelbaren
Stammzelle in eine nicht regelbare (12).
Malignes Melanom, Zellen aus der Blutbahn mit dem genannten Verfahren isoliert noch bevor Fernmetastasen
sichtbar wurden, also in der Frühphase der Metastasierung
5. Baum M.: Lancet (1996); 347(8996): 260. Does surgery disseminate or accelerate cancer?
6. Hu Xc., Chow LWC. Oncology (2000) 59(3): 217-222. Fine needle aspiration may shed breast: displaced cancer cells into peripheral bloods as
dertermined by RT-PCR
7. Hansen J., Rotenberg I.: Eur. J. cancer Prev. (2006)96, 471-473: Caution with microbiopsies of the breast: displaced cancer cells and ballistics
8. Demichelli R, Retsky MW et al.: Nature Clinical Practice Oncology (2007)4(12), 600-710. Tumor dormancy and surgery driven interruption of
dormancy in breast cancer: Learning from failures
9. Retsky M., Demichelli R. et al.: Lancet (2001) 357(9261): 1048 Wounding from biopsy and breast cancer progression
10. Giftkur ohne Nutzen, der Spiegel 41/2004- 04. Oktober 2004 Jörg Blech (Name geändert)
11. Blech, Elger, Grill, Hackenbroch “Schlicht obszön”, DER SPIEGEL 20/2010
12. Was bedeuten Tumorstammzellen bei Krebs, Der Privat Arzt Ausgabe 2 Mai 2010 Dr. U. Kübler
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Warum lassen sich soviele Patienten dennoch
chemotherapieren?
Für viele Krebspatienten ist sie so etwas wie der
letzte Strohhalm. Oft werden sie auch nicht über
die untoxischen Alternativen aufgeklärt, auch nicht
über die Tatsache, dass die meisten Cytostatika
deshalb als toxische Placebos bezeichnet werden
müssen, da sie nicht als Medikamente zugelassen
sind, sondern über lediglich eine fiktive Zulassung
als experimentelle Therapeutika verfügen.
Nicht nur Prof. Hölzl vom Uniklinikum
Großhadern bewies epidemiologisch das Versagen
der Chemotherapien. Zu einer absoluten Blamage
für die Chemotherapie kam es auch nach
Auswertung der Daten von über 100.000
Krebspatienten in den USA und Australien: die
Erfolgschancen liegen dort gerade einmal bei 2-3 %.
Die meisten Patienten hätten also durch Verzicht
auf eine Chemotherapie bessere Überlebenschancen.
Eine Chemotherapie ist lediglich in Form einer
Chemo-Embolisation zu verantworten (13).
All dies ließe sich vermeiden, würde man die
Indikationsstellung und die Verlaufskontrolle einer
Therapie nicht allein an der Bildgebung und an
lichtmikroskopisch ausgewertetem bioptischen
Material festmachen, sondern an der Zahl und der
molekularen Charakteristik der Tumorzelle.
Die Gründe für die Verordnung von
Chemotherapien können sowohl vom Arzt, als auch
vom Patienten ausgehen. Exemplarisch hat dies Dr.
rer. nat. Susanne Pedersen in ihrem Artikel
„Sinnlose Chemotherapien“ dargestellt (14). Mit
ihrer Genehmigung zitieren wir die Gründe, die
vom Patienten ausgehen, die zu Chemotherapien
führen:
• Glaube an die Wirksamkeit aufgrund der
Medien und Aufklärungsbroschüren
• Glaube an die Wirksamkeit aufgrund der
weiten Verbreitung
• Reparatur-Werkstatt-Mentalität gegenüber der
Medizin
• Mißinterpretation des Tumor-Rückgangs bzw.
der Remission
• Beeinflussung des Schicksals durch
Leidensbereitschaft
• Alles soll versucht werden
• Wahrscheinlichkeiten für einen Therapieerfolg
werden falsch eingesetzt
• Glücksspielargument: wenn es überhaupt
jemanden gibt, der von der Chemotherapie
profitiert, könnte ich das ja sein
• Letzter therapeutischer „Strohhalm“
Stammzellen eines Schildrüsenkarzinomes
Während Chemotherapien von Prof. Hölzl als
Giftkuren ohne Nutzen bezeichnet wurden und er
bereits 2005 nachgewiesen hat, dass bei einem
metastasierten Mamma-Karzinom keine
Lebensverlängerung (15) seit 20 Jahren mit diesen
Giftkuren erzeugt wird, bezeichnet man die
Immuntherapie noch immer nur als
Hoffnungsträger im Kampf gegen Krebs (16,17).
13. Circulating tumour stem cells as predictors for the target specific diagnostic and efficiency of chemo-embolization in combination with immune
adoptive cell transfer, U. Kübler, E. Stähler
14. Sinnlose Chemotherapie? Ergebnisse der Epidemiologen sollten Berücksichtigung finden, COMED das Fachmagazin für Complementär-Medizin,
Dr. rer. Nat. Susanne Pedersen
15. Schlesinger, Raab, Hölzl et al – Metastasiertes Mamma-Karzinom: keine Lebensverlängerung seit 20 Jahren – Deutsches Ärzteblatt 2005; 102(40): A2706
16. Deutsches Ärzteblatt 27.11.2009 Immuntherapie gegen Krebs Präzise Strategien rücken näher
17. Mit Immunzellen heilen Julius Maximillians-Universität Würzburg 21-Set.2009

Insofern ist die Chemotherapie eine moderne
Form des rituellen Menschenopfers. In diesem
Zusammenhang muß auch der Wunsch des
Patienten nach Wendung seines Schicksals
durch eigene Aktivität gesehen werden.
Zusammenfassung:
Bei der Natürlichen Killerzelle
handelt es sich um einen großen Kampf-
Lymphozyten mit der Lizenz, entartete Tumorzellen
zu töten.
Wie tötet er die Tumorzelle?
• indem er diese zunächst erst einmal als solche
erkennt und von einer gesunden Zelle
unterscheidet,
• indem er die Tumorzelle perforiert und dann in
diese Tumorzelle zellauflösende Eiweisse
injiziert, mit denen er die Tumorzelle zwingt,
sich in ihre Bestandteile aufzulösen.
Natürliche Killerzellen vermögen zwischen Eigen-
und Fremdpeptiden an der Oberfläche von Zellen
zu unterscheiden: im Falle des Überwiegens von
Fremdpeptiden töten sie diese Zellen mit Hilfe
von Perforinen, die zur Durchlöcherung der Zellen
führen und mit Hilfe von Granzymen, die
Proteasen darstellen, die zur Auflösung von
Tumorzellen führen, indem Sie auf mitochondrialer
Ebene durch Cytochrom C-Freisetzung deren
Selbstzerstörung (Apoptose) induzieren.
Die ruhende NK-Zelle zeigt auf ihrer Oberfläche
die Rezeptoren CD 335 (Nkp46) und CD337 (NK
p30).
Die aktivierte NK-Zelle, die zur Zell-Auflösung
fähig ist, zeigt auf ihrer Oberfläche CD 336 (NK
p44) und die Perforine.
Dendritische Zellen werden durch die bei der
Auflösung von Tumorzellen freigesetzten Peptide
zur Reifung induziert und tragen dann zur Tumor-
Antigen- Erkennung bei.
Die dendritischen Zellen sind die universellen
Zellen der Natur für Antigenerkennung. Im
ausgereiften Zustand kooperieren sie mit anderen
Lymphozyten z.B. den LAK-Zellen und versetzen
diese in die Lage, Fremdzellen z.B. Tumorzellen zu
erkennen. Anschließend werden diese Fremdzellen
von den Killerzellen abgetötet.
Bei einem immungeschwächten Patienten, so auch
bei einem Tumorerkrankten, sind diese Zellen
unterrepräsentiert und ihre Immunkompetenz
herabgesetzt.
Somit kann die Natürliche Killerzelle das, was
Chemotherapeutika nie können werden.
Abbildungen Titel:
Foto 1:
Zellen eines Braunen Riesenzelltumors. Sie bilden Ausstülpungen und
Microvilli aus, was sie zum Teil stachelig aussehen lässt.
Foto 2:
Metastasierende Zellverbände eines Lungenkarzinoms, lebend aus der
Blutbahn isoliert, von NK-Zellen umgeben
Foto 3:
Aus dem Blute eines Patienten mit malignem Melano isolierte Zellen
Foto 4:
Nk-Zellen, Tumorstammzellen angreifend
Abbildungen letzte Seite:
Foto 1:
Aufbewahrung der Zellen unter sterilen Bedingungen
Foto 2:
Zell-Zentrifuge
Foto 3 und 4:
Floureszenzmikroskopische Auswertung von Zellen
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