波仕季刊ProNews 2007-Q3 - 波仕特生物科技股份有限公司

波 仕 ㈵ 季 刊 ProNews 2007-Q3本 季 新 品 介 紹 ~㈲ 效 期 限 6/1 ~ 9/301. 創 世 紀 的 改 革 , GC Cloning Kit 將 改 變 你 對 傳 統 TA Cloning 的 迷 思 , 詳 細 內容 請 參 考 第 2-3 頁2. 改 良 的 勝 任 細 胞 , 更 佳 適 合 Toxic Gene 的 表 現 , 詳 細 內 容 請 參 考 第 4 頁3. 改 良 的 DNase, 可 以 完 全 將 ssDNA 或 dsDNA 分 解 成 mononucleotide, 詳 細內 容 請 參 考 第 5 頁4. Amresco 蛋 白 質 染 色 試 劑 、 蛋 白 質 定 量 試 劑 、 蛋 白 質 標 準 試 劑 介 紹 , 詳細 內 容 請 參 考 第 6-10 頁5. Protech Custom Service - 全 基 因 合 成 服 務 及 客 製 服 務 項 目 , 詳 細 內 容 請參 考 第 11-12 頁波 仕 ㈵ 生 物 科 技 股 份 ㈲ 限 公 司 Protech Technology Enterprise Co., Ltd台 北 02-2655-7677 竹 南 03-768-0138 新 竹 03-575-3468台 ㆗ 04-2262-4883 高 雄 07-389-4822 花 蓮 03-846-3953服 務 專 線 北 部 0800-231-530 ㆗ 部 0800-555-650 南 部 0800-268-266tech@bio-protech.com.tw ; service@bio-protech.com.twhttp://www.bio-protech.com.tw2007.06.01-V001

操 作 更 加 快 速●只 ㈲ 數 分 鐘 即 可 以 完 成 ( 類 似 TOPO 的 操 作 時 間 , 但 優 於 傳 統 TA cloning)。A.B.Fig 4: GC cloning vs. TOPO TACloning. A) Total CFUs per ligation.Each vector was ligated to achloramphenicol-resistant expressioncassette directly from a PCR reactionusing manufacturers’ protocols. Allreactions were transformed intoLucigen’s E. cloni 10G electrocompetentcells, then grown on plates containingkanamycin, IPTG and XGAL.Blue and white CFUs were counteddirectly.B) Correct inserts per ligation.White colonies from the kanamycinplates were patched onto chloramphenicolplates to determine thenumber of clones with the expectedCmR inserts. The GC Cloning vectorspSMARTGC HK and pGC BLUE gave8X and 3X more CmR clones, respectively,than the pCRII TOPO TA vector.Fig 5: A Thermus species polA gene was amplified and cloned into either the pSMART GC or pcrIITOPO TA vector. All GC clones contained the expected product. However, deletions and emptyclones were common in the TOPO TA vector.Fig 3. Schematic diagram of the GC Cloning process.In order to achieve < 1% empty vector background,the GC Cloning vectors are supplied dephosphorylated.A 10 minute kinase reaction using thesupplied reagents is sufficient to phosphorylate theprimers, which are then added directly to the PCRreaction. Upon completion of the amplification reaction,PCR fragments are directly ligated to thepSMARTGC or pGC Blue vector in a 30 minute reactionand transformed into E. cloni 10G competent cellsusing standard methods.訂 購 ㈾ 料 :產 品 ㈴ 稱 Cells Provided W/Kit 包 裝 Cat. No.With 10G ELITE Electrocompetent Cells 10 reactions /20 reactions 40731-1 / 40731-2GC Cloning & Amplification Kit(pSMART GC HK)GC Cloning & Amplification Kit(pSMART GC LK)GC Cloning & Amplification Kit(pGC Blue)With 10G SUPREME Electrocompetent Cells 10 reactions / 20 reactions 40732-1 / 40732-2With 10G Chemically Electrocompetent Cells 10 reactions / 20 reactions 40733-1 / 40733-2With 10G ELITE Electrocompetent Cells 10 reactions / 20 reactions 40736-1 / 40736-2With 10G SUPREME Electrocompetent Cells 10 reactions / 20 reactions 40737-1 / 40737-2With 10G Chemically Electrocompetent Cells 10 reactions / 20 reactions 40738-1 / 40738-2With 10G ELITE Electrocompetent Cells 10 reactions / 20 reactions 40742-1 / 40742-2With 10G SUPREME Electrocompetent Cells 10 reactions / 20 reactions 40741-1 / 40741-2With 10G Chemically Electrocompetent Cells 10 reactions / 20 reactions 40743-1 / 40743-21, 1 頁 3

Baseline-ZERO DNaseBaseline-ZERO DNase 可 以 ㈲ 效 的 將 dsDNA 或 ssDNA 分 解 成 mononucleotides, ㆒ 般bovine pancreatic DNase I 只 能 將 DNA 分 解 成 小 分 子 的 DNA oligonucleotides, 因 此 容 易 。造 成 RT-PCR 反 應 時 產 生 非 專 ㆒ 性 片 段 ( 或 是 導 致 背 景 值 很 高 )。後 續 應 用 :●●●●Removal of genomic DNA from RNA prior to RT-PCR1 (Figure 1) or preparation of targetRNA or cDNA for microarray analysisElimination of the DNA template following in vitro RNA synthesis with T7, T3 or SP6Phage RNA PolymerasesRemoval of ssDNA and dsDNA from viral RNAElimination of genomic DNA from RNA for microinjection and transfection experimentsBaseline-ZERO DNase is provided with a 10X reaction buffer and a 10X stop solution. Heat at 65°C for10 minutes in the stop buffer to inactivate the enzyme activity before reverse transcription.●●10X Baseline-ZERO DNase Reaction Buffer: 100 mM Tris HCl (pH 7.5), 25 mM MgCl2 and 5 mMCaCl2.10X Baseline-ZERO DNase Stop Solution: 30 mM EDTA.訂 購 ㈾ 料 :DB0711K (1 U/ul) 1,000 MBUDB0715K (1 U/ul) 5,000 MBUFig 1. CT values from real-time PCR of HeLa RNA preparations treatedwith various DNases. The lower the CT value, the greater the amount ofresidual DNA not digested by the indicated DNase. Thus, Baseline-ZERODNase removed all detectable DNA from the RNA sample. The TaqManprobe assay amplified a 268 bp fragment of beta actin. Samples wererun in duplicate.Fig 2. Demonstration of the useof Baseline-ZERO DNase toremove small oligonucleotidesduring DNase treatment. Lane1, kilobase ladder; Lanes 2-5,160 ng of EcoR I-digestedplasmid DNA incubated for 15minutes at 37° C as follows:Lane 2, untreated; Lane 3, incubatedwith DNase I: Lane 4,with supplier A's hyper-activeDNase; Lane 5, with Baseline-ZERO DNase. Only Baseline-ZERO DNase removes thesmall residual oligos at the bottomof the gel.1, 1 頁 5

蛋 白 質 染 色 相 關 產 品Blue BANDit TM Protein Stain●●●用 途 : Coomassie based stain只 需 用 ㈬ 進 行 destain.敏 感 度 高 , 可 偵 測 到 20 ng 的 蛋 白 量●●●操 作 簡 便 快 速1L 約 可 以 進 行 50 片 mini-gels 的 染 色Cat# K217-1LDeionizedWaterBlue BANDitSolutionDeionizedWater 1. Rinse gel with dioized water for15 mins after electrophoresis4. Visualize the gel2. Incubate gel in BlueBANDit Solution for 1 hr3. Destain gel in dionizedwater for 30 minsFig A. Blue BABDit Staining ProtocolSilver-BULLit TM Staining Kit●用 途 : 蛋 白 質 銀 染 試 劑● 高 敏 感 性 , 低 背 景 值 ( 可 偵 測 到 5 ng 的 蛋 白 量 )●●●試 劑 皆 為 溶 液 狀 態 , 操 作 簡 便1L 約 可 以 進 行 50 片 mini-gels 的 染 色Cat# M227-1L-KitFig B. Mid/Low Range Protein Molecular Weight Markers (J450, 14.4-97.4KDa) were separated on a 10% polyacrylamide gel and stained with AM-RESCO’s Silver BULLit Staining Kit and a competitor’s Silver Stain.ZiP TM Reversible Protein Detection Kit●用 途 : 蛋 白 質 鋅 染 試 劑● 高 敏 感 性 , 低 背 景 值 ( 可 偵 測 到 10 ng 的 蛋 白 量 )●●●●Destain 只 需 要 5 分 鐘可 以 應 用 於 2D, Mass, Protein Sequencing 等 實 驗Kit 約 可 以 進 行 25-50 片 mini-gels 的 染 色Cat# M227-1L-KitFig C. 5ul of AMRESCO wide range marker was loaded intoeach lane of a 10% NEXT GEL and stained with the ZiPReversible Protein Detection Kit.頁 6 波 仕 ㈵ 季 刊 ProNews 2007-Q3

蛋 白 質 定 量 相 關 產 品Bradford ReagentBradford Reagent 即 利 用 Coomassie Brilliant Blue G-250 呈 色 的 原 理 ,Coomassie Brilliant Blue G-250(CBG) ㈲ 點 像 指 示 劑 , 會 在 不 同 的 酸 鹼 度 ㆘ 變 色 ; 在 酸 性 ㆘ 是 茶 色 , 在 ㆗ 性 ㆘ 為 藍 色 。 當 CBG 接到 蛋 白 質 ㆖ 去 的 時 候 , 因 為 蛋 白 質 會提 供 CBG 較 為 ㆗ 性 的 環 境 , 因 此 會 變Amresco Bradford Reagent Compared with Bio-Rxx成 藍 色 。 當 樣 本 ㆗ 的 蛋 白 質 越 多 , 吸0.5到 蛋 白 質 ㆖ 的 CBG 也 多 藍 色 也 會 增強 , 因 此 藍 色 的 呈 色 強 度 是 與 樣 本 ㆗的 蛋 白 質 量 成 正 比 。OD595nm0.40.30.20.1y = 0.092x + 0.034R 2 = 0.9824y = 0.0865x - 0.0085R 2 = 0.9999Bio-RxxAmresco線 性 (Bio-Rxx)線 性 (Amresco)●●蛋 白 質 偵 測 範 圍 1-100 ug偵 測 波 長 : 595 nm00.5 1 1.5 2BSA mg/ml●訂 購 ㈾ 訊 : E530-1LBiuret Protein Assay ReagentBiuret 試 劑 乃 鹼 性 硫 酸 銅 溶 液 , 銅 離 子 在 鹼 性 溶 液 ㆗, 會 與 蛋 白 質 ㆖ 的 peptide bonds 生 成 藍 色 或 紫色 的 複 合 物 (NH2CONHCONH2), 由 於 biuret 是 在 鹼 性 環 境 ㆗ 和 硫 酸 銅 發 生 呈 色 反 應 之 最 小 單 位 ,故 稱 此 反 應 為 biuret 試 驗 。●●●蛋 白 質 偵 測 範 圍 1-10 mg/ml偵 測 波 長 : 550 nm訂 購 ㈾ 訊 : M262-500ml1, 1 頁 7

Western/EIA Detection 相 關 產 品For Western Blotting 冷 光 偵 測 部 分 ~VisiGlo TM HRP1:1,000VisiGlo PLUS TM HRP1:10,000Fig A. Non-reduced IgG was transferred to the blotsat 25 ng, 12.5 ng, 6.25 ng, 3.125 ng, 1.56 ng, 0.78ng. Conjugates were diluted to concentrations of1:1,000, 1:10,000 and 1:100,000 as indicated.Membranes were exposed to film for 2 minutes.1:1,0001:10,000 1:100,000CDP-Star® VisiGlo AP VisiGlo PLUS APFig B. A comparison of low-end sensitivity using VisiGlo Plus AP substrate and CDP-Satr Chemiluminescent substrate on PVDFmembranes. Five-fold serial dilutions od Mouse IgG (2 ng-3.2 pg) were seperated by SDS-PAGE and transferred to the membrane.Protein was detected using a 1:1000 dilution of biotin-labeled goat anti-mouse IgG, a 1:10000 dilution of AP-labeledstreptavidin and each respective substrate. CDP-Star was mixed with Nitro-Block-II Luminescence Enhancer before applying itto the nitrocellulose blot. Film was exposed for 10 mins.VisiGlo HRP VisiGlo PLUS HRP VisiGlo AP VisiGlo PLUS AP產 品 編 號 N218 N219 N216 N217適 用 酵 素包 裝Horseradish Peroxidase(HRP)Substrate A : 120 mlSubstrate B : 120 mlHorseradish Peroxidase(HRP)Substrate A : 40 mlSubstrate B : 80 mlAlkaline Phosphatase(AP)Alkaline Phosphatase(AP)100 ml 100 ml偵 測 範 圍 pg fg pg fg操 作 溶 液 Mix 2 components Mix 2 components Ready-to-use Ready-to-use穩 定 度 > 1 year at 4 °C > 1 year at 4 °C 2 years at 4 °C 2 years at 4 °C建 議 使 用 的 Membrane NC and PVDF NC and PVDF NC and PVDF NC and PVDF偵 測 方 式 Film Film/Chemiluminescent Film Film/Chemiluminescent頁 8 波 仕 ㈵ 季 刊 ProNews 2007-Q3

Western/EIA Detection 相 關 產 品For Western Blotting 呈 色 偵 測 部 分 ~BCIP/NBT BCIP/INT DAB DAB產 品 編 號 E116 E692 E733 E885適 用 酵 素Alkaline Phosphatase(AP)Alkaline Phosphatase(AP)Horseradish Peroxidase(HRP)Horseradish Peroxidase(HRP)包 裝 100 ml 100 ml 50 Tablets200 ml100 Tablets (20 Tablets)呈 現 顏 色 Blue-Purple Brick Red Brown Brown操 作 溶 液 Ready-To-use Ready-To-use 使 用 前 需 加 入 10ml ddH2O備 註適 用 於 In SituStainingEach Tablets contain5 mg of DAB使 用 前 需 加 入 10ml ddH2OEach Tablets contain5 mg of DABFor EIA 呈 色 偵 測 部 分 ~p-NPP p-NPP TMB TMB Plus產 品 編 號 0405 0617 J644 K830適 用 酵 素Alkaline Phosphatase(AP)Alkaline Phosphatase(AP)Horseradish Peroxidase(HRP)Horseradish Peroxidase(HRP)包 裝 100 Tablets 100 Tablets 100 ml 100 ml偵 測 波 長 405 nm 405 nm 450 nm 450 nm呈 現 顏 色 Yellow Yellow Blue (Yellow) Blue (Yellow)備 註Each Tablets contain5 mg of p-NPPEach Tablets contain30 mg of p-NPPOffers faster signal,enhanced sensitivityand the lowest possiblebackground1, 1 頁 9

Agarose 相 關 產 品Agarose SFR ( Super Fine Resolution )●●●●●超 高 解 析 度 , 可 分 離 20 bp㉃2 kb 之 DNA 片 段適 用 於 AFLP ( Amplified Fragment Length Polymorphisms ) , STR ( Short TandemRepeats )適 用 TAE/TBE buffer4% Agarose SFR 可 以 分 離 50-500 bpCat# J234Agarose 3:1 HRB ( High Resolution Blend )●●●●●可 分 離 50 bp㉃2 kb 之 DNA 片 段非 常 低 之 背 景 值 與 模 糊 的 現 象適 用 TBE buffer1% Agarose 3:1 HRB 可 以 分 離 500-2000 bpCat# E776Agarose II ( Low Melting )●●●可 分 離 100 bp ㉃20 kb 之 DNA 片 段常 用 於 回 收 核 酸 產 物 , 也 可 用 於 許 多 in-gel 處 理 , 如 酵 素 截 切 等適 用 TAE/TBE buffer● 融 化 溫 度 : 62-68 °C● Cat# 0815頁 10 波 仕 ㈵ 季 刊 ProNews 2007-Q3

Protech Custom ServiceProtech Custom Service - Site direct mutagenesis( 定 點 突 變 )●●●●●●在 30 bp 區 間 內 可 依 客 戶 需 求 進 行 1-5 個 nucleotide 的 定 點 突 變Vector 長 度 < 7.5 kb 皆 可 進 行客 戶 需 提 供 DNA 序 列 及 Vector(>50 ng/ul,10~20 ul)DNA sequence 僅 限 於 突 變 點 前 後 約 200~300 bp 區 間 內 , 並 與 原 始 DNA 序列 進 行 比 對工 作 時 間 約 2-4 週最 後 提 供 :plasmid DNA ( 約 2 ug)、DNA sequence data、DNA alignment dataProtech Custom Service - PCR product cloning●●●●PCR product < 3 kb客 戶 提 供 50~100 ul PCR product 由 本 公 司 進 行 純 化客 戶 可 取 回 plate㉂ 行 篩 選 , 或 由 本 公 司 隨 機 挑 選 colony 進 行 DNA sequence(DNA sequence 及 primer order 需 另 外 收 費 )工 作 時 間 約 1-2 週 , 視 sample 數 量 而 定1, 1 頁 11

Protech Custom Service -Protech Custom Service - 全 基 因 合 成 服 務快 速 獲 得 您 需 要 的 基 因您 需 要 的 基 因 序 列 是 在 基 因 庫 ㆗ 釣 不 到 , 而 需 要 用 合 成 的 方 式 才 能 獲 得嗎 ? 您 現 在 再 也 不 需 要 ㉂ 己 合 成 長 鏈 引 子 來 拼 接 基 因 了 。 浪 費 時 間 及 ㈮錢 , 卻 又 不 得 不 到 預 期 的 效 果 。 現 在 提 供 你 更 佳 快 速 獲 得 您 需 要 的 基 因 方法 , 波 仕 ㈵ 在 此 提 供 高 品 質 、 高 效 率 的 基 因 合 成 服 務 。交 貨 方 式 :1. 將 基 因 接 合 在 pUC57 載 體 ㆖, 提 供 約 4 ug 的 載 體 DNA2. 提 供 基 因 的 定 序 報 告3. 交 貨 期 約 14 個 工 作 ㆝ (< 2000 bp)定 價 : 當 基 因 長 度 > 160 bp , 每 個 鹼 基 對 75 元 ; 當 基 因 長 度 < 160 bp , 每條 基 因 12000 元波 仕 ㈵ 生 物 科 技 股 份 ㈲ 限 公 司 Protech Technology Enterprise Co., Ltd台 北 02-2655-7677 竹 南 03-768-0138 新 竹 03-575-3468台 ㆗ 04-2262-4883 高 雄 07-389-4822 花 蓮 03-846-3953服 務 專 線 北 部 0800-231-530 ㆗ 部 0800-555-650 南 部 0800-268-266tech@bio-protech.com.tw ; service@bio-protech.com.twhttp://www.bio-protech.com.tw2007.06.01-V001