Prise en charge diagnostique anatomopathologique en pathologie neurochirurgicale

Prise en charge diagnostiqueanatomopathologique enpathologie neurochirurgicaleDiagnostic neuropathologique : méthodes d’études, tumorothèquePr. Michel PEOC’HService d’Anatomie det Cytologie PathologiquesCHU de Saint Etienne

• Standards :Bases du diagnostic anatomo-pathologique• Technique :- identification d’un dprélèvement représentatif de la lésionl- fixation et inclusion en paraffine• Classification et grading histopronostique (OMS2000)• Options :• Autres techniques (IHC, biologie moléculaire, cytogénétique, tique, ME,tumorothèqueque)• Utilisation d’autres dclassifications (en complément ment de l’OMS) l• Recommandations :• Techniques : statut 1p19q (oligodendrogliomes(oligodendrogliomes)• Confrontations anatomo-cliniques avant tout traitement• Relecture des lames

Prise en charge des prélèvements :1. En amont• Le formulaire de demande d’examend• Renseignements anatomocliniques : état civil du patient,symptômes et date du début ddes symptômes, topographie de la lésion, lclichés s neuroradiologiques (résultats).• Renseignements concernant le préleveur : service, nom duchirurgien, téléphone. t• Date et heure du prélèvement.• Type de prélèvement et nature de l’examen ldemandé (ex :biopsie extemporanée).e).• Autres documents éventuels (fiche derecensement, consentement…)

Prise en charge des prélèvements :1. En amont• L’acheminement des prélèvements :• Conditions stériles• Le plus rapidement possible• Température ambiante• Si fragment tissulaire, en atmosphèrehumide (compresses imbibées de sérum sphysiologique)

Prise en charge des prélèvements :2. Dans le service d’ACPd• La réception rdu prélèvement :• Vérification de l’adladéquation entre le formulaire dedemande d’examen det le prélèvement• Orientation du prélèvement pour prise en chargeadaptée• Prise en charge d’une dpièce opératoire ou d’une dbiopsie cérébrale c:• Conditionnement• Cas particulier de la biopsie extemporanée

Conditionnement des prélèvements :pièce opératoire ou biopsie cérébralec• Dépend de la taille et de l’aspect lmacroscopique• Standard :• Options :• Prélèvement représentatif de la lésionl• Fixation formol 10 % ou AFA• Réalisation d’appositionsd• Fixation en glutaraldéhylepour ME• Congélation en azote pour tumorothèque• Prélèvement stérile pour la cytogénétiquetique

L’examen extemporané• Indications :• Uniquement si le résultat rpeut modifier la conduitechirurgicale• Biopsie stéréotaxique, autres• Techniques :• Appositions• Smears• Coupes en congélation• Résultats

L’examen extemporané• Définition• Matériel nécessairen• Cryostat, microscope• Réalisation• Coupe• Congélationavantage: architecture de la lésionlinconvénients: nients: consommation de matériel, contamination, artéfacts decongélation• Interprétationtation

Techniques de « base »• Histologique conventionnelle• Fixation et inclusion en paraffine• Coupes de 4µm4• Colorations classiques (HES, HE)• Colorations spéciales• Réticuline, PAS, bleu alcian…• Immunohistochimie• A visée e diagnostique• A visée e pronostique

Histologie• Pour faire un diagnostic, il faut un prélèvement debonne qualité et une bonne technique• Tout est important : conditions de prélèvement,acheminement du prélèvement, fixateur et duréede la fixation, bonne imprégnation de la paraffine,coupes de bonne qualité, , déparaffinage,dcoloration…

Immunohistochimie• Principe• Technique• Prélèvements fixés, congelés• Anticorps monoclonaux et polyclonaux• Immunopéroxydasele plus souvent• Démasquage antigéniquenique• Importance de la standardisation

Après étalement, déparaffinage et séchage des coupes, l'anticorpsprimaire est déposé directement sur le tissu et reconnaît, s'il existe, lerécepteur antigénique recherché.L'examen immuno-histochimique (IHC) consiste à révéler sur coupehistologique, par réaction antigène-anticorps, la présence de récepteursantigéniques cellulaires intranucléaires, membranaires ou cytoplasmiques.Le schéma technique est le suivant :1 - Antigène2 - Anticorps 13 - Anticorps 24 - ComplexeAvidine-biotinepéroxydase

IHCEGFRGFAPP53

• Standard :Le compte-renduanatomopathologique• Classification de l’OMS l2000, type et grade• Si impossible (après s avis d’expert) dtumeur inclassable• Autres classifications• Immunohistochimie à visée e pronostique• Rédaction :• Renseignements communiqués, Macroscopie, BE éventuelle• Éléments clés s permettant le diagnostic (type et grade),résultats des IHC

Place de la microscopie électronique• Technique longue, coûteuse nécessitant nexpertise technique et médicalem• En partie supplantée e par l’IHCl• Indications restreintes :• A visée e diagnostique : tumeurs de l’enfant l+++• A visée e recherche : caractéristiques ristiques ultra-structuralesd’une nouvelle tumeur

ME :Astrocytome:GFAPendopinocytose

ME :Astrocytome:Cytosquelettegliofilaments : 7-11 nmprotéine GFA

Place de la biologie moléculaire• Ne pas raisonner en technique mais enmoyen « optimum » (simple, reproductibleet le moins coûteux) pour mettre enévidence une altération moléculaire d’intdintérêtdiagnostic ou pronostic• statut 1p19q• Autres : altérations de p53, amplification ouhyperexpression de REGF, statut deMGMT…

Mise en évidence des altérationsmoléculaires au cours de l’oncogloncogénèseARN messagerProtéines• Anomalie des gènes g(mutatations(mutatations,translocations, délétions) d• Cytogénétique tique standard : FISH sur noyauxinterphasiques• Southern-blot, PCR• Anomalies des ARNm• RT-PCR• Analyse du transcriptome• Anomalies des protéines• Immunohistochimie• Analyse biochimique• Spectrométrie trie de masse (SELDI-TOF)

•cellule soucheperte Ch 10amplificationEGFR• ••••perte Ch 1p perte Ch19qmutation TP 53• •• •astrocytomede bas grademutation RB• •• • ••perte Ch 1p•• •••astrocytomeanaplasiqueoligodendrogliome••••••perte Ch 10amplificationEGFRglioblastomeglioblastome de novo d'après Hoang-Xuan et al . Rev Neurol 1995 ; 151 : 608-18

FISH/appoappo/congelDel 1pDel 19q

CRB / tumorothèque• CRB, « centres de ressources spécialiscialisés s qui acquièrent, valident,étudient et distribuent des collections documentéeses » (définitiontirée e du groupe de travail de l’OCDE lsur les biotechnologies,initié à Tokyo en 1999)• C’est une infrastructure régionale, rvoire nationale qui fourni descollections publiques, patrimoniales et finalisées (mise àdisposition sous réserve rde disposition légales ldont il convientd’organiser la gestion et le développement)d• Le CRB coordonne la vie d’éd’échantillons biologiques depuisl’accord du patient jusqu'à leur utilisation dans un projet derecherche garantissant également le respect des bonnes pratiquespour une double mission de soins et de recherche.

Un CRB pour quoi faire?• pour répondre rà l’accroissement des demandes deschercheurs académiques ou industriels dans le cadre deprojets de recherche scientifiques ambitieux,• au service de techniques modernes issues de la génomique get de la protéomiqueomique nécessitant des échantillons de qualité• en conservant et en mettant à disposition des produits etinformations biologiques fiables, validés s et préciscisémentidentifiés

Pour construire une tumorothèque:• Un système d’information d(catalogue) donnant une visionrapide, simple et à jour des échantillons disponibles pourles projets de recherche en oncologie• Des collections de haute valeur ajoutées et deséchantillons homogènes et de qualité, , basés s sur unsystème d’Assurance dQualité en accord avec la loi de laBioéthique et respectant les droits des malades• Des plateaux techniques pour valoriser les échantillons• Un Accès s aux annotations fiables et documentées es de ceséchantillons (cliniques, histologiques, biologiques)

Tumorothèquesques…en en pratique• Chaîne d’acteursd• Annotation• Procédures• Établir, conserver (conditions), gérer g(informatique), partenariat, financement….• Diagnostique, recherche et conservationpatrimoniale

TDM…IRM!Glioblastome « probable »….AP

Métastase cérébralecbrale…chercher le primitif• Histologie : Carcinome ? Mélanome M?différenciation ?- Structure glandulaire- Sécrétion- Kératinisation- PigmentsIMMUNOHISTOCHIMIE

Glandulaire : ADK pulmonaire

ImmunohistochimieAE1AE3TTF1CK7

Glandulaire: ADK gastrique

ImmunohistochimieCK20CK7TTF1

Glandulaire: ADK thyroïde

ImmunohistochimieCK7ThyroglobulineTTF1

Épidermoïde

Mélanome

ImmunohistochimieNKIC3PS100HMB45

ImmunohistochimieAE1AE3GFAP

ImmunohistochimieImmunohistochimieCK7CK7CK20CK20TTF1TTF1THYROTHYROPS100PS100PositifPositifnégatifgatifnégatifgatifnégatifgatifPositifPositifpositifpositifpositifpositifnégatifgatifHMB45HMB45POUMONPOUMONnégatifgatifPositifPositifnégatifgatifNégatifgatifGASTRIQUEGASTRIQUEPositifPositifnégatifgatifnégatifgatifNégatifgatifTHYROIDETHYROIDEnégatifgatifpositifpositifPositifPositifNégatifgatifMELANOMEMELANOMEnégatifgatifnégatifgatifnégatifgatifPositifPositif

Prélèvement d’un dhématome hcérébral chomme ; 22 ansAnaPath

Prélèvement d’un dhématome hcérébral chomme ; 22 ans

Ependymome IHCCD99NCamVimMiB1

Diagnostic neuropathologique :méthodes d’études, tumorothèque…• Quantité du prélèvement• Qualité du prélèvement• « Conditionnement »: appo, congel, , fixation• Collaboration…..