HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING

HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING 

Ref. 4353 


Ref. 4355 

2005/04

HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING - 2005/04 

UTILISATION 

Les kits HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING et HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING sont destinés à la détection qualitative, à l’identification et à la 

confirmation des immunoglobulines oligoclonales mises en évidence sur les profils électrophorétiques du liquide céphalorachidien humain (LCR ou 

CSF, cerebrospinal fluid). La technique utilisée est l’isoélectrofocalisation sur gel d’agarose dans le système semi-automatique HYDRASYS, 

complétée par une immunofixation à l’aide d’un antisérum anti-Ig G couplé à la peroxydase. L’utilisation de cet antisérum permet d’augmenter la 

sensibilité de détection des bandes oligoclonales Ig G du LCR sans concentration préalable. 

L'objectif est de mettre en évidence un profil oligoclonal spécifique des immunoglobulines G du LCR, issues d’une synthèse intrathécale, par 

comparaison après immunofixation, des profils du sérum et du liquide céphalorachidien du même patient. 

Les kits HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING et HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING sont recommandés lors de la suspicion de certaines maladies du 

système nerveux central (SNC) telles que la sclérose en plaques. La détection de bandes oligoclonales et d’un processus inflammatoire (synthèse 

intrathécale d’immunoglobulines) peut être une aide précieuse au diagnostic. 

À usage in vitro exclusivement. 

PRINCIPE DU TEST 

De nombreux dysfonctionnements du système nerveux central sont associés à une augmentation de la concentration protéique du LCR. Celle-ci peut 

être due à une perméabilité accrue de la barrière hémato-méningée, ou à une synthèse d’immunoglobulines, particulièrement des Ig G à l’intérieur du 

système nerveux central. Dans ce dernier cas, une telle synthèse intrathécale d’Ig G est souvent associée à une restriction d’hétérogénéité qui se 

manifeste par une répartition oligoclonale détectée dans la zone gamma des migrations électrophorétiques à haute résolution. Des bandes ne 

correspondant pas à des immunoglobulines peuvent également être détectées dans la zone des gammaglobulines, mais elles n’ont pas la même 

signification diagnostique. L’immunofixation est une technique idéale car elle permet de confirmer le caractère immunoglobulinique des bandes 

oligoclonales, d’identifier les immunoglobulines impliquées et de fournir la spécificité diagnostique nécessaire du test. 

La répartition oligoclonale des Ig G ayant une signification diagnostique en routine, le test SEBIA est particulièrement recommandé pour la détection 

de ces bandes oligoclonales d’Ig G à l’aide d’un antisérum spécifique anti-Ig G. 

La présence d’Ig G intrathécales suggère une maladie inflammatoire du système nerveux central, causé par exemple par une sclérose en plaques. 

Bien que la répartition oligoclonale ne soit pas spécifique de cette maladie, sa présence est largement utilisée comme complément d’information 

important pour le diagnostic et sa mise en évidence est considérée comme un test essentiel dans le consensus, défini en 1994 par le " Comité de 

l’Action Européenne Concertée sur la Sclérose en Plaques ". C’est un test de confirmation chez les patients ayant des épisodes cliniques de sclérose 

en plaques et un test suggestif chez les patients n’ayant que quelques épisodes de sclérose ou des symptômes cliniques non concluants. 

Les critères de sélection proposés par le Comité pour la détection des bandes oligoclonales Ig G dans le CSF sont les suivants : 

1. La technique la plus sensible et la plus résolutive pour la détection des Ig G oligoclonales est l’isoélectrofocalisation, 

2. Les Ig G oligoclonales doivent être détectées à l’aide d’un antisérum spécifique, 

3. Pour confirmer la synthèse intrathécale des Ig G, le sérum et le LCR du patient doivent être analysés en parallèle pour distinguer les différences 

de profil de distribution des Ig G, 

4. Pour aider à l’interprétation, les concentrations en Ig G du sérum et du LCR doivent être identiques. 

5. La concentration du LCR doit, si possible, être évitée. 

La technique HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING répond parfaitement à ces critères. 

L’analyse est effectuée en 2 étapes : 

- isoélectrofocalisation sur gel d’agarose pour séparer les protéines du LCR et du sérum, 

- immunofixation avec un antisérum anti-Ig G marqué à la peroxydase pour détecter les bandes oligoclonales d’Ig G et pour démontrer la différence 

ou la similitude de distribution des Ig G dans le LCR et le sérum. 

Une immunofixation standard qui emploie des anticorps non marqués nécessite une concentration en Ig G égale à environ 500 mg/L, alors que les 

Ig G du LCR sont généralement comprises entre 10 et 50 mg/L. Il est nécessaire de prélever un volume total, d’environ 2 à 5 mL pour obtenir une 

concentration suffisante. 

Comparée à l’immunofixation standard, la sensibilité de détection de la technique HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING est augmentée d’environ 

100 fois par l’utilisation d’anticorps marqués à une enzyme. Ainsi, avec une concentration en Ig G supérieure ou égale à seulement 10 mg/L, les Ig G 

et leur distribution peuvent être détectées et discernées sans aucune concentration de l’échantillon de LCR 

Le système semi-automatique HYDRASYS réalise toutes les étapes nécessaires pour obtenir des gels prêts pour l’interprétation. 

Chaque gel d'agarose contenu dans le kit HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING est composé de 6 pistes et permet donc une analyse comparée des 

Ig G de 3 couples LCR / sérum. 

Chaque gel d'agarose contenu dans le kit HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING est composé de 18 pistes et permet donc une analyse comparée des 

Ig G de 9 couples LCR / sérum. 

Cette technique simple et rapide donne une image claire et très facilement interprétable. 

- 1 - 

NOTICE D’UTILISATION SEBIA - Français


RÉACTIFS FOURNIS DANS LES KITS HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ET HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING 

COMPOSANTS RÉF. N° 4353 RÉF. N° 4355 Gels d’agarose (prêts à l’emploi) 10 gels 10 gels Solution d’éthylène glycol (prête à l’emploi) 1 fl. de 3 mL 1 fl. de 3 mL Solution anodique (prête à l’emploi) 1 fl. de 50 mL 1 fl. de 50 mL Solution cathodique (prête à l’emploi) 1 fl. de 50 mL 1 fl. de 50 mL Mèches (à imprégner) 10 sachets de 2 10 sachets de 2 Diluant échantillon CSF (prêt à l’emploi) 1 fl. de 85 mL 1 fl. de 85 mL Diluant antisérum CSF ISOFOCUSING (prêt à l’emploi) 1 fl. de 3,75 mL 1 fl. de 3,75 mL Réhydratant CSF (prêt à l’emploi) 2 fl. de 70 mL 2 fl. de 70 mL Solvant TTF3 (prêt à l’emploi) 2 fl. de 20 mL 2 fl. de 20 mL TTF3 (solution concentrée) 2 fl. de 0,5 mL 2 fl. de 0,5 mL Applicateurs (prêts à l’emploi) 1 boîte de 10 (6 dents) 1 boîte de 10 (18 dents) Barquettes de tamponnage (prêtes à l’emploi) 1 sachet de 2 1 sachet de 2 Barrettes antisérum (prêtes à l’emploi) 1 boîte de 10 1 boîte de 10 Papiers-filtres fins 1 sachet de 10 1 sachet de 10 Papiers-filtres épais 3 sachets de 10 3 sachets de 10 

| Caches plastique | 1 sachet de 10 | 1 sachet de 10 | 

POUR DES RÉSULTATS OPTIMUMS 

Les éléments d’un même kit doivent être utilisés ensemble et selon les instructions de la notice. 

LIRE ATTENTIVEMENT LA NOTICE D’UTILISATION. 

1. GELS D’AGAROSE 

Préparation 

Les gels d’agarose sont prêts à l’emploi. Chaque gel contient : agarose, 10 g/L ; ampholytes ; composants sans danger aux concentrations utilisées, 

nécessaires pour des performances optimales. 

Utilisation 

Support pour l’isoélectrofocalisation et l’immunofixation des protéines. 

Conservation, stabilité et signes de détérioration 

Les gels doivent être conservés au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Ils sont stables jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur le sachet du 

gel. Les gels doivent être conservés horizontalement dans leur sachet de protection (la flèche sur le devant du kit doit être pointée vers le haut). 

NE PAS CONGELER. Ne pas stocker les gels à proximité d’une fenêtre ou d’une source de chaleur et éviter toute variation brutale de température. 

Éliminer le gel dans les cas suivants : 

(I) apparition de cristaux, de précipité en surface du gel ou texture du gel très molle (indiquant que le gel a gelé) ; 

(II) apparition de bactéries ou de moisissures ; 

(III) présence anormale de liquide dans la boîte du gel (indiquant une exsudation du gel liée à de mauvaises conditions de conservation). 

2. SOLUTION D’ÉTHYLÈNE GLYCOL 

Préparation 

La solution d’éthylène glycol est prête à l’emploi. 

ATTENTION : Nocif en cas d’ingestion ! 

Utilisation 

Pour assurer un contact parfait entre le gel et le plateau de migration régulé en température, pendant la migration électrophorétique. 


La solution d’éthylène glycol peut être conservée à température ambiante ou au réfrigérateur. Elle est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur 

le kit ou sur l’étiquette du flacon. 

3. SOLUTION ANODIQUE ET SOLUTION CATHODIQUE 

Préparation 

Les solutions anodique (solution acide) et cathodique (solution basique) sont prêtes à l’emploi. Elles contiennent chacune des composants sans 

danger aux concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. 

NOTE : La solution anodique est colorée en rouge pour éviter toute erreur lors de l’utilisation et pour identifier la mèche anodique. 

ATTENTION : La solution cathodique contient de la soude caustique. Irritant pour les yeux et la peau. En cas de contact avec les yeux, laver 

immédiatement et abondamment avec de l’eau et consulter un spécialiste. 

Utilisation 

Pour la préparation des mèches anodiques et cathodiques pour l’isoélectrofocalisation. 

IMPORTANT : Après prélèvement de la solution cathodique, refermer immédiatement et hermétiquement le flacon afin d’éviter une carbonatation de 

la solution. 


Les solutions anodique et cathodique peuvent être conservées à température ambiante (entre 15 et 30 °C) ou au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Elles 

sont stables jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette des flacons de solution. Il ne doit pas y avoir de précipité. 

- 2 -

4. MÈCHES (À IMPRÉGNER) 


Préparation 

Préparer une mèche anodique et une mèche cathodique 5 minutes avant leur utilisation : 

Placer la barquette grise destinée à la mèche anodique et la barquette bleue destinée à la mèche cathodique à plat sur la paillasse. 

Déposer 5 mL de solution anodique rouge dans la barquette grise et 5 mL de solution cathodique incolore dans la barquette bleue. 

Sortir deux mèches de leur emballage en les manipulant par les languettes plastiques et les disposer dans chaque barquette. 

Imprégner les mèches en pressant plusieurs fois à l’aide de l’embout de la pipette. 

Les mèches imprégnées doivent être utilisées extemporanément. 

IMPORTANT : Les mèches doivent être imprégnées au moment de leur utilisation afin d’éviter la carbonatation de la solution cathodique. 

Utilisation 

Les mèches en éponge imprégnées des solutions anodique et cathodique assurent le contact entre le gel et les électrodes et imposent les pH 

extrêmes du gradient pendant l’isoélectrofocalisation. 


Les mèches humides mais non imprégnées peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur. 

Elles doivent être conservées horizontalement dans leur sachet de protection (la flèche sur le devant du kit doit être pointée vers le haut). 

Elles sont stables jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur le sachet des mèches. NE PAS CONGELER. 

Éliminer les mèches si le sachet est ouvert ou si les mèches sont sèches. 

5. DILUANT ÉCHANTILLON CSF 

Préparation 

Le diluant échantillon CSF est prêt à l’emploi. Il contient : solution saline ; albumine bovine ; azoture de sodium ; composants sans danger aux 

concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. 

Utilisation 

Pour la dilution des échantillons. 


Le diluant échantillon CSF doit être conservé au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur 

l’étiquette du flacon de diluant. Il ne doit pas y avoir de précipité. 

6. DILUANT ANTISÉRUM CSF ISOFOCUSING 

Préparation 

Le diluant antisérum CSF est prêt à l’emploi. Il contient : composants sans danger aux concentrations utilisées, nécessaires pour des performances 

optimales. 

Utilisation 

Pour la dilution de l’antisérum marqué à la peroxydase, au moment de son utilisation. 


Le diluant antisérum peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur 

l’étiquette du flacon de diluant antisérum. Il ne doit pas y avoir de précipité. 

NOTE : Au cours du temps, un léger jaunissement du diluant antisérum peut être observé sans que cela n’affecte la qualité du test. 

7. RÉHYDRATANT CSF 

Préparation 

Le réhydratant CSF est prêt à l’emploi. Il contient : composants sans danger aux concentrations utilisées, nécessaires pour des performances 

optimales. 

Utilisation 

Pour la réhydratation du gel avant la révélation peroxydasique. 


Le réhydratant peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur 

l’étiquette du flacon. Il ne doit pas y avoir de précipité. 

8. SOLVANT TTF3 

Préparation 

Le solvant TTF3 est prêt à l’emploi. Il contient : composants sans danger aux concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. 

Utilisation 

Pour la préparation de la solution de révélation peroxydasique, comme décrit dans le paragraphe 9. 


Le solvant TTF3 peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur 

l’étiquette du flacon. Il ne doit pas y avoir de précipité. 

9. TTF3 

Préparation 

Préparer la solution de révélation extemporanément en mélangeant dans l’ordre suivant : 4 mL de solvant TTF3, 100 µL de TTF3, 4 µL d’eau oxygénée 

(H 2 

O 2 

) à 110 volumes (30 %). 

ATTENTION : La solution TTF3 contient de la diméthylformamide. Nocif par inhalation ! En cas de ventilation insuffisante, porter un appareil 

respiratoire approprié. Ne pas avaler ! En cas d’ingestion, consulter immédiatement un médecin ! Nocif par contact avec la peau. Porter un 

vêtement de protection approprié. Irritant pour les yeux. En cas de contact avec les yeux ou avec la peau, se laver immédiatement et 

abondamment avec de l’eau et consulter un spécialiste ! Éviter l’exposition, se procurer des instructions spéciales avant l’utilisation. Peut 

provoquer le cancer. En cas de malaise, consulter un médecin (si possible, lui montrer l’étiquette). 

- 3 -


Utilisation 

Pour la révélation peroxydasique, à l’aide de l’antisérum marqué, des immunoglobulines séparées par isofocalisation. 


Le TTF3 peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette 

du flacon de TTF3. Il ne doit pas y avoir de précipité. 

10. APPLICATEURS 

Utilisation 

Applicateurs prédécoupés, à usage unique pour le dépôt des échantillons. 

Conservation 

Les applicateurs doivent être conservés dans un endroit sec à température ambiante ou au réfrigérateur. 

11. BARQUETTES DE TAMPONNAGE 

Utilisation 

Barquettes colorées réutilisables pour la préparation des mèches anodiques et cathodiques. 

La barquette grise est destinée à la mèche anodique et la barquette bleue est destinée à la mèche cathodique. 

Rincer les barquettes avec de l’eau distillée ou déminéralisée après chaque utilisation et les sécher. 

Conservation 

Après chaque utilisation, les barquettes doivent être conservées propres, à plat et à température ambiante. 

12. BARRETTES ANTISÉRUM 

Utilisation 

Barrettes colorées, à usage unique, pour le dépôt de l’antisérum marqué pour l’immunofixation réalisée avec le masque dynamique. 

ATTENTION : Manipuler avec précaution les barrettes contenant de l’antisérum. 

13. PAPIERS-FILTRES FINS 

Utilisation 

Feuilles de papier-filtre, à usage unique pour l’absorption de l’excès de liquide à la surface du gel avant l’application des échantillons. 

Conservation 

Les papiers-filtres fins doivent être conservés dans un endroit sec à température ambiante ou au réfrigérateur. 

14. PAPIERS-FILTRES ÉPAIS 

Utilisation 

Feuilles de papier-filtre, à usage unique pour l’absorption des protéines non précipitées du gel après les étapes d’immunofixation et de réhydratation 

et l’élimination de l’excès de révélateur après révélation peroxydasique. 

Conservation 

Les papiers-filtres épais doivent être conservés dans un endroit sec à température ambiante ou au réfrigérateur. 

15. CACHES PLASTIQUE 

Utilisation 

Feuilles de plastique, à usage unique, pour la protection du gel lors de la migration électrophorétique. 

ÉQUIPEMENT ET ACCESSOIRES NÉCESSAIRES 

1. Système HYDRASYS SEBIA, référence N° 1211 avec OPTION FOCUSING HYDRASYS, SEBIA, référence N° 1235. 

Ou 

2. Système HYDRASYS FOCUSING SEBIA, référence N° 1212. 

3. Micropipetteur, manuel ou automatique, tel que HYDRAPLUS SEBIA, référence N° 1216 ou HYDRAPLUS 2 SEBIA, référence N° 1217, pour le 

chargement des applicateurs ou des barrettes antisérum. 

4. Chambre humide, référence N° 1270, fournie avec le système HYDRASYS. 

5. Barre métallique pour la fixation du masque SEBIA, fournie avec le système HYDRASYS. 

6. Masque dynamique, SEBIA, référence N° 1255. 

7. Kit accessoires HYDRASYS CSF ISOFOCUSING SEBIA, référence N° 1258, contenant les masques R3 et ENZ 4 mL et le demi-réducteur de 

course. 

8. Bidons plastiques fournis avec le système HYDRASYS. 

9. Pipettes de 2 µL, 20 µL, 100 µL, 200 µL et 5 mL. 

RÉACTIFS NÉCESSAIRES NON FOURNIS 

1. ANTISÉRUM ANTI-Ig G - PER 

Préparation 

Le flacon d’antisérum (SEBIA, référence n° 4743 : 1 flacon de 0,60 mL) contient des immunoglobulines totales de mammifère anti-Ig G humaines 

conjuguées à la peroxydase. Le réactif a une couleur spécifique pour éviter toute erreur lors de l’utilisation. La couleur est rappelée sur l’étiquette du 

flacon. 

Préparer la solution d’antisérum extemporanément en mélangeant : 

Pour HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING : 25 µL d’antisérum anti-Ig G - PER et 175 µL de diluant antisérum. 

Pour HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING : 40 µL d’antisérum anti-Ig G - PER et 300 µL de diluant antisérum. 

Utilisation 

Pour l’immunoprécipitation des Ig G séparées par isoélectrofocalisation. 

- 4 -



L’antisérum doit être conservé au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur l’étiquette du flacon d’antisérum. 

Éliminer l’antisérum s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne. 

NOTE : Les antisérums peuvent être d’origines animales différentes. Il est donc impératif de ne pas mélanger deux flacons différents d’antisérums, y 

compris de la même spécificité, et de TOUJOURS changer l’embout de la pipette lors d’un changement de flacon. 

Durant le transport, l’antisérum peut rester à température ambiante (entre 15 et 30 °C) pendant 15 jours sans que cela n’affecte la qualité du test. 

2. EAU OXYGÉNÉE : H 2 

O 2 

, 110 volumes (30 %). 

L’eau oxygénée doit être conservée à l’abri de la lumière et au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Lors de chaque prélèvement, utiliser une pipette 

parfaitement propre afin d’éviter toute contamination de la solution. 

3. DÉCOLORANT 

Préparation 

Chaque flacon de décolorant concentré (SEBIA, référence n° 4540 : 10 flacons de 100 mL chacun) doit être dilué au 1/1 000 avec de l’eau distillée 

ou déminéralisée, il permet d'obtenir 100 litres de solution décolorante. Prélever par quantité de 5 mL et compléter à 5 litres avec de l’eau distillée ou 

déminéralisée. 

Après dilution, la solution décolorante contient : acide citrique, 0,5 g/L. 

Utilisation 

Pour le lavage du gel après révélation enzymatique et séchage. 

Pour le rinçage de la cuve de coloration de l’HYDRASYS. 

Pour neutraliser l’acidité du décolorant, mettre dans le flacon de vidange vide, 15 mL de soude à 50 % (solution du commerce). 


Le décolorant concentré peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou 

sur l’étiquette du flacon de décolorant. Le décolorant dilué est stable pendant 1 semaine à température ambiante, en flacon fermé. 

Éliminer le décolorant dilué s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne. 

Ne pas ajouter d’azoture de sodium. 

En cas de conservation prolongée (au delà d’une semaine) de la solution diluée, ajouter 50 µL/L de ProClin 300 pour prévenir toute prolifération 

microbienne. 

Le décolorant dilué contenant du ProClin est stable en flacon fermé à température ambiante ou au réfrigérateur jusqu’à la date d’expiration indiquée 

sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de décolorant. 

4. SOLUTION DE LAVAGE HYDRASYS 

Préparation 

Chaque flacon de solution de lavage HYDRASYS concentrée (SEBIA, référence N° 4541 : 10 flacons de 80 mL chacun) doit être complété à 5 litres 

avec de l’eau distillée ou déminéralisée. 

Après dilution, la solution de lavage contient : tampon alcalin, pH 8,8 ± 0,3 ; azoture de sodium. 

ATTENTION : La solution de lavage concentrée contient 0,625 % d'azoture de sodium. Ne pas avaler ! En cas d’ingestion, consulter 

immédiatement un médecin ! L'azoture de sodium peut former des complexes explosifs ou toxiques en cas de contact avec des acides, du 

plomb ou du cuivre. Au moment de l’élimination des solutions, laver abondamment avec une grande quantité d’eau. 

Utilisation 

Pour le lavage périodique de la cuve de coloration de l’HYDRASYS : par exemple, pour une utilisation journalière, effectuer un lavage hebdomadaire 

de la cuve de coloration. 

Voir la notice de la solution de lavage pour les instructions d’utilisation. 


Les solutions de lavage concentrée et diluée peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés. Elles sont stables 

jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de solution de lavage. 

Éliminer la solution de lavage diluée s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne. 

ÉCHANTILLONS À ANALYSER 

Prélèvement et conservation des échantillons 

L’analyse se fait sur sérum et liquide céphalorachidien (CSF) prélevés au même moment. Les échantillons de sérums et de liquides céphalorachidiens 

doivent être prélevés selon la procédure utilisée pour tout test de laboratoire d’analyses cliniques. Les échantillons peuvent être conservés une 

semaine au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Pour des conservations prolongées, congeler les échantillons ; les échantillons congelés sont stables au 

minimum 1 mois. 

Préparation des échantillons 

• Doser les immunoglobulines G dans le LCR et le sérum à l’aide de techniques appropriées. 

• La concentration en immunoglobulines G des couples LCR/sérum doit être identique. 

L’ajustement dépend de la concentration initiale en immunoglobulines du LCR, utiliser le Diluant échantillon pour toutes les dilutions : 

1er cas : La concentration en immunoglobulines G du LCR est supérieure à 20 mg/L. 

Diluer le LCR et le sérum dans le diluant échantillon pour obtenir une concentration en immunoglobulines G de 20 mg/L. 

2e cas : La concentration en immunoglobulines G du LCR est comprise entre 10 et 20 mg/L. 

Diluer uniquement le sérum dans le diluant échantillon pour obtenir une concentration en immunoglobulines G identique à celle du LCR. 

3e cas : La concentration en immunoglobulines G du LCR est inférieure à 10 mg/L. 

Concentrer le LCR, au moyen d’un dispositif approprié, pour obtenir une concentration en immunoglobulines G comprise entre 10 et 20 mg/L. 

Diluer le sérum dans le diluant échantillon pour obtenir une concentration en immunoglobulines G identique à celle du LCR. 

- 5 -


Calcul de la dilution à appliquer (uniquement pour les échantillons dont la concentration en Ig G est supérieure à 20 mg/L) : 

Pour le LCR : 

Soit une concentration en immunoglobulines G de A mg/L. 

Prélever 20 µL de CSF et mélanger avec (A - 20) µL de diluant échantillon. 

Pour le sérum : 

Soit une concentration en immunoglobulines G de B mg/L. 

Effectuer une première dilution du sérum au 1/10 en ajoutant 10 µL de sérum à 90 µL de diluant. 

Prélever ensuite 2 µL de sérum prédilué qui seront ajoutés à (B/100 - 2) µL de diluant. 

Quand la concentration en immunoglobulines G est inconnue : 

Utiliser le LCR pur et diluer le sérum 300 à 400 fois. 

NOTE: Une erreur lors de l’ajustement des concentrations en Ig G des échantillons de LCR et de sérum peut affecter l’interprétation des résultats – 

voir le paragraphe “INTERPRÉTATION”. 

TECHNIQUE 

Le système HYDRASYS est un instrument multiparamétrique semi-automatique qui assure le traitement des HYDRAGEL selon les étapes suivantes : 

prémigration, application des échantillons, migration électrophorétique par isoélectrofocalisation, incubation avec l’antisérum marqué, révélation, 

pompage et séchage final. 

Les étapes manuelles sont les suivantes : préparation des échantillons et des gels, dépôt des réactifs et lancement des séquences automatiques. 

LIRE ATTENTIVEMENT LE MANUEL D’INSTRUCTIONS D’HYDRASYS. 

IMPORTANT : Régler au préalable la position du masque pour obtenir une parfaite correspondance entre les profils électrophorétiques du gel et les 

pistes de révélation du masque. 

I. PRÉPARATION DE LA MIGRATION 

1. Mettre HYDRASYS sous tension. 

2. Sélectionner le mode " Haute tension 1000 V" requis pour l’isoélectrofocalisation, en appuyant sur le bouton poussoir afficheur vert, ce dernier 

devient alors rouge. 

NOTE : L’affichage du bouton poussoir fournit des informations pendant la migration. En effet, par pressions successives lors de la migration, 

ce bouton indique soit les valeurs de volt heures accumulés (Vh) et d’intensités de courant (mA), soit les valeurs de tension (V) et de puissance 

(W). 

Quand HYDRASYS est en mode haute tension, l’écran de l’HYDRASYS indique les intensités de courant réelles mais les autres valeurs 

(tension, volt heures et puissance) sont divisées par 10. 

3. Poser un applicateur 6 dents pour HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ou un applicateur 18 dents pour HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING, 

à plat sur la paillasse, numérotations (puits) vers le haut. 

4. Déposer 10 µL d’échantillon dans chaque puits de l’applicateur (Fig. 1). Le chargement de l'applicateur ne doit pas excéder 2 minutes. 

L’exemple suivant présente l’analyse de 3 couples LCR / sérum sur HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING et de 9 couples LCR / sérum sur 

HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING à l’aide de l’antisérum anti-Ig G - PER. 

| HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING | HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING | 

| LCR | SÉRUM | LCR | SÉRUM | 

PUITS DE DÉPÔT N° PUITS DE DÉPÔT N° PATIENT N° (applicateur 6 dents) | (applicateur 18 dents) | 

1 1 2 1 2 2 3 4 3 4 3 5 6 5 6 4 - - 7 8 5 - - 9 10 6 - - 11 12 7 - - 13 14 8 - - 15 16 | 9 | - | - | 17 | 18 | 

- Placer immédiatement l’applicateur verticalement dans la chambre humide, dents vers le haut, en le manipulant par la protection plastique. 

Voir la notice de la chambre humide pour les instructions d’utilisation. 

Avant d’effectuer l’application des échantillons sur le gel, une étape de prémigration jusqu’à 75 Vh accumulés doit être réalisée 

selon les indications suivantes : 

5. Ouvrir le capot du module de migration et relever les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes. 

ATTENTION : Ne pas fermer le capot de l’appareil si les chariots sont relevés ! 

6. Sélectionner le programme de migration "3/9 CSF FOCUSING" dans le menu. 

7. Les mèches anodique et cathodique sont imprégnées des solutions correspondantes (voir le paragraphe No. 4 du chapitre REACTIFS 

FOURNIS), les sortir de leurs barquettes en les manipulant par les languettes plastiques. 

8. Fixer les mèches sur le chariot porte-électrodes à l'aide des languettes perforées (Fig. 2) : 

- Quand le chariot est relevé, la mèche anodique rouge est placée sur l’électrode inférieure (anode) du chariot et la mèche cathodique non 

colorée est placée sur l’électrode supérieure (cathode). 

- La face de la mèche fixée sur la languette vient en contact avec l'électrode. 

9. Sortir le gel de son emballage. 

10. Essuyer le dos du gel (support plastique) avec un papier ouaté sec. 

- 6 -


11. Éliminer l’excès de liquide en surface du gel avec un papier-filtre fin, pendant 3 secondes. 

12. Déposer 150 µL de solution d’éthylène glycol pour HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ou 300 µL pour HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING, 

sous forme d’une ligne, sur le plateau de migration dans le tiers inférieur du cadre sérigraphié. 

13. Placer le gel (face gel orientée vers le haut) sur le plateau contre la barrette, à l'intérieur du cadre sérigraphié (Fig. 3). 

Donner une forme concave au gel (Fig. 3) et le dérouler sur le plateau jusqu'au contact de la solution d’éthylène glycol qui doit se répartir sur 

toute la largeur du gel. Relever légèrement le gel pour éliminer les bulles d'air éventuellement piégées, puis dérouler totalement le gel au 

contact du plateau. La solution d’éthylène glycol doit s’étaler sous toute la surface du film. 

14. Mettre en place un cache plastique sur le gel : 

- Prendre un cache plastique. 

- Aligner la partie basse du cache plastique avec les deux marques latérales situées à 1,5 cm du bord cathodique, imprimées sur le support 

plastique du gel (bas du gel) (Fig. 4). 

- Appliquer le cache plastique sur le gel en le déroulant et en évitant d’emprisonner des bulles d’air entre le gel et le cache plastique. 

- Éliminer les bulles d'air éventuellement piégées en relevant sans attendre le cache plastique par l’extrémité la plus proche de ces bulles 

jusqu’à ce qu’elles soient dégagées et en le réappliquant doucement. 

- Éviter de déplacer le gel sur le plateau de migration pendant cette opération. 

ATTENTION : Le cache plastique ne doit pas être positionné en dessous des 2 marques latérales imprimées sur le support plastique 

du gel. 

15. Abaisser l'ensemble des chariots jusqu'en butée. Dans cette position, les mèches tamponnées ne touchent pas le gel. NE PAS FORCER LA 

DESCENTE DES CHARIOTS. 

16. Fermer le capot du module de migration. 

17. Démarrer immédiatement la séquence en appuyant sur "START" (flèche verte à gauche du clavier). 

IMPORTANT : Ne rien placer à proximité immédiate de la grille de ventilation (à droite de l'appareil). 

PRÉMIGRATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Descente du chariot porte-électrodes pour amener les mèches imprégnées au contact du gel. 

• Migration à 1000 V maximum, à 20 °C, température contrôlée par effet Peltier jusqu’à 75 Vh accumulés. 

• Déconnexion des électrodes par remontée du chariot porte-électrodes. 

• Un signal sonore (bip) retentit et la sécurité du capot se débloque. Ce signal sonore persiste jusqu'à l'intervention de l'opérateur. À l'écran, s'affiche 

le message clignotant : "POS : 1". 

NOTE : Pendant toutes les séquences de migration, le capot du module de migration reste verrouillé. 

18. Ouvrir le capot du module de migration. 

19. Sortir l’applicateur de la chambre humide en le manipulant par la protection plastique. 

- Éliminer la protection des dents. 

- Placer l’applicateur en position n° 1 sur le porte-applicateurs. 

IMPORTANT : Les numérotations de l’applicateur sont toujours dirigées vers l'opérateur (Fig. 5). 



MIGRATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Descente des chariots porte-électrodes et porte-applicateurs pour amener les mèches imprégnées et l'applicateur au contact du gel. 

• Remontée du chariot porte-applicateurs. 

• Migration à 1000 V maximum, à 20 °C, température contrôlée par effet Peltier jusqu’à 700 Vh accumulés (pendant environ 45 minutes). 

• Déconnexion des électrodes par remontée du chariot porte-électrodes. 

• Un signal sonore (bip) retentit et la sécurité du capot se débloque. Ce signal sonore persiste jusqu'à l'intervention de l'opérateur. À l'écran, s'affiche 

le message clignotant : " AS" pour déposer l’antisérum marqué. 

NOTE : Pendant toutes les séquences de migration, le capot du module de migration reste verrouillé. 

II. PRÉPARATION DE L’IMMUNOFIXATION 

Les différents éléments du masque dynamique (barrette antisérum, support barrette, guide et demi-réducteur de course) sont présentés sur la figure 6. 

Pendant la migration, préparer le masque dynamique en procédant comme suit : 

1. Poser le guide du masque dynamique à plat sur la paillasse. 

2. Placer le demi-réducteur de course spécifique à la technique HYDRAGEL CSF ISOFOCUSING au plus haut sur le guide du masque 

dynamique. 

3. Positionner une barrette antisérum sur le support barrette (Fig. 7) : 

- Placer les bossages de la barrette, inclinée à 45°, contre les ressorts du support barrette. 

- En prenant appui contre ces ressorts, faire pivoter la barrette pour la fixer dans les encoches du support barrette. 

ATTENTION : Vérifier que la barrette soit fixée correctement sur le support barrette : les ergots situés aux extrémités de la barrette 

doivent être bien enclenchés dans les deux encoches du support barrette. 

4. Placer l’ensemble barrette – support barrette sur le guide du masque dynamique (Fig. 8) équipé du demi-réducteur de course. 

Pour HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING, déposer l’antisérum anti-Ig G - PER, sur la barrette antisérum, à raison de 20 µL par puits, dans les 

puits 4 à 12. 

Pour HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING, déposer l’antisérum anti-Ig G - PER, sur la barrette antisérum, à raison de 20 µL par puits dans 

tous les puits. 

Lors du prélèvement des réactifs, ne pas piéger de bulles d'air dans l'embout de la pipette. 

5. Pour déposer les réactifs (Fig. 9) : 

- tenir la pipette inclinée, 

- en appliquant légèrement l’embout sur le bord de l’orifice, déposer la goutte de réactif dans le puits, sans toucher le fond du puits. 

- 7 -

III. IMMUNOFIXATION 


1. Ouvrir le capot du module de migration (le message cesse de clignoter). 

2. Retirer l’applicateur et le jeter. 

3. Relever les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes, retirer les mèches par les languettes et les jeter. 

4. Retirer les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes. 

5. Nettoyer les électrodes avec un papier ouaté humide. 

6. Laisser le gel en place dans le module de migration. 

7. Avant de déposer l’antisérum anti-Ig G – PER à l’aide du masque dynamique, retirer le cache plastique par un coin et le jeter. 

ATTENTION : Ne pas déplacer le gel sur le plateau de l’HYDRASYS pendant cette opération. 

8. Mettre en place le masque dynamique et répartir l’antisérum en procédant comme suit (Fig. 10) : 

- Fixer la tige destinée à l'accrochage du masque dynamique, à l'aide des plots de fixation. (Une fois mise en place, cette tige peut être laissée 

sur l'HYDRASYS). 

- Placer les encoches du masque dans les repères de la tige en tenant le masque par la poignée. 

- Faire pivoter le masque pour l'appliquer sur le plateau de l’HYDRASYS. 

- Caler le support-barrette sur le guide au plus bas, dirigé vers l’opérateur. Tout en maintenant l’ensemble du support-barrette par la poignée 

située à droite, exercer une pression sur le point d’appui central, pour amener la barrette en contact avec le gel. Relacher cette pression, 

l’antisérum s’étale alors d’un bout à l’autre de la barrette (Fig. 11). 

- Immédiatement, à l’aide de la poignée située à droite, répartir l’antisérum en effectuant un double aller-retour du masque dynamique audessus 

du gel d’un mouvement lent et régulier (environ 5 secondes par passage) (Fig. 12). 

- Pendant cette opération, le masque ne doit être tenu que par la poignée sans toucher au guide. 

9. Laisser le masque dynamique sur le gel en position basse. 



À l'écran, s'affiche le message : "[INCUBATION]". 

IMMUNOFIXATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Incubation à 20 °C, température contrôlée par effet Peltier, pendant 10 minutes. 

• Un signal sonore (bip) retentit et la sécurité du capot du module de migration se débloque. 

À l'écran, s'affiche le message : " PAP.". 

NOTE : Pendant la séquence d'incubation, le capot du module de migration reste verrouillé. 

IV. POMPAGE DU GEL 


2. Retirer l’ensemble guide – masque dynamique : 

- tenir le guide par la poignée ; 

- faire pivoter le guide autour de la tige et le décrocher ; 

- décrocher la barrette du support barrette et la jeter. 

ATTENTION : Manipuler avec précaution la barrette ayant contenu de l’antisérum. 

3. Appliquer une feuille de papier-filtre épais sur le gel (face la plus lisse du papier-filtre épais contre le gel) : 

- incliner la feuille de papier-filtre épais d'environ 45° et aligner le bord inférieur de la feuille de papier-filtre sur la barrette de positionnement 

du gel ; 

- faire pivoter la feuille de papier-filtre et l'appliquer sur le gel. 

ATTENTION : Bien appuyer sur toute la surface de la feuille de papier-filtre pour assurer un contact parfait entre le gel et le papier. 


5. Démarrer la séquence en appuyant sur "START" (flèche verte à gauche du clavier). 

POMPAGE DU GEL - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Pompage à 20 °C, température contrôlée par effet Peltier, pendant 3 minutes. 

À l'écran, s'affiche le message : "[POMPAGE]". 

• Un signal sonore (bip) retentit. 

À l'écran, s'affiche le message clignotant : "❊ PAP. + REHYD 1", pour éliminer le papier-filtre et déposer la solution de réhydratation. 

V. RÉHYDRATATION DU GEL 


2. Retirer le papier-filtre en laissant le film en place. 

3. Mettre en place le masque R3 pour HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ou le masque ENZ 4 mL pour HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING 

(Fig. 13). 

4. Déposer 4,5 mL de réhydratant pour HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ou 7 mL pour HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING (Fig. 14). 

Le liquide recouvre la totalité de la surface sous le masque centrée sur le puits de remplissage. 

5. Lors du prélèvement du réhydratant, ne pas piéger de bulles d'air dans l'embout de la pipette. Pour déposer le réhydratant : 

- tenir la pipette verticalement et appliquer légèrement l'embout au fond de l'orifice ; 

- injecter très progressivement le réhydratant. 


7. Démarrer la séquence en appuyant sur "START" (flèche verte à gauche du clavier) (le message cesse de clignoter). 

RÉHYDRATATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 



À l'écran, s'affiche le message clignotant : "❊ REHYD 1 + PAP.", pour éliminer la solution de réhydratant et poser un papier-filtre épais. 

- 8 -

VI. ÉLIMINATION DU RÉHYDRATANT 


2. Éliminer le réhydratant : 

3. Tenir la pipette verticalement et appliquer légèrement l'embout de la pipette au fond de l'orifice (Fig. 14) ; 

4. Aspirer très progressivement le réhydratant. 

5. Retirer le masque : 

- tenir le masque par la poignée ; 

- faire pivoter le masque autour de la tige et le décrocher. 

- La zone du gel recouverte par le liquide est réhydratée. 


VII.POMPAGE DU GEL 

1. Appliquer une feuille de papier-filtre épais sur le gel, procéder comme décrit au § IV (face la plus lisse du papier-filtre épais contre le gel). 

2. Appuyer sur toute la surface de la feuille de papier-filtre pour assurer un contact parfait entre le gel et le papier. 



POMPAGE - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 


• Un signal sonore (bip) retentit. À l'écran, s'affiche le message clignotant : "❊ PAP. + REHYD 2", pour éliminer le papier-filtre puis déposer la 

solution de réhydratant. 

VIII. RÉHYDRATATION DU GEL 



3. Mettre en place le masque R3 pour HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ou le masque ENZ 4 mL pour HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING 

(Fig. 13). 

4. Déposer 4,5 mL de réhydratant pour HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ou 7 mL pour HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING (Fig. 14). Le liquide 

recouvre la totalité de la surface sous le masque centrée sur le puits de remplissage. 

5. Lors du prélèvement du réhydratant, ne pas piéger de bulles d'air dans l'embout de la pipette. Pour déposer le réhydratant, procéder comme 

décrit au § V. 



RÉHYDRATATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 


• Un signal sonore (bip) retentit. À l'écran, s'affiche le message clignotant : "❊ REHYD 2 + TTF3", pour éliminer le réhydratant et déposer la 

solution de révélation. 

IX. ÉLIMINATION DU RÉHYDRATANT 


2. Éliminer le réhydratant comme décrit au § VI. 

3. Laisser le masque en place. 

X. RÉVÉLATION 

1. Déposer 3 mL de solution de révélation TTF3 préparée extemporanément pour HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ou 3,5 mL pour 

HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING. La solution de révélation recouvre la totalité de la surface sous le masque. 

2. Lors du prélèvement de la solution de révélation, ne pas piéger de bulles d'air dans l'embout de la pipette. Pour déposer la solution de 

révélation, procéder comme décrit au § V. 



RÉVÉLATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 


• Un signal sonore (bip) retentit. À l'écran, s'affiche le message clignotant : "❊ TTF3 + PAP.", pour éliminer la solution de révélation et poser un 

papier-filtre épais. 

XI. ÉLIMINATION DU RÉACTIF 


2. Éliminer le réactif comme décrit au § VI. 

3. Retirer le masque : 

- tenir le masque par la poignée ; 

- faire pivoter le masque autour de la tige et le décrocher. 

XII.POMPAGE DU GEL 

1. Appliquer une feuille de papier-filtre épais sur le gel, procéder comme décrit au § IV (face la plus lisse du papier-filtre épais contre le gel). 

2. Appuyer sur toute la surface de la feuille de papier-filtre pour assurer un contact parfait entre le gel et le papier. 



5. Laver le masque sous l'eau courante avec une petite brosse souple (type brosse à dent). Pour l'utilisation suivante, le masque doit être 

parfaitement sec. Pour éliminer les gouttes d'eau pouvant être piégées dans le puits, tapoter le masque sur un papier ouaté et l'essuyer. 

NOTE : Le masque R3 ou ENZ 4 mL peut être nettoyé sur sa face fonctionnelle à l’aide d’un papier ouaté imprégné d’alcool après l’étape de 

révélation au TTF3. 

- 9 -


POMPAGE - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 



À l'écran, s'affiche le message clignotant : "❊ PAP.", pour éliminer le papier-filtre. 

XIII. SÉCHAGE DU GEL 



3. Fermer le capot de l'HYDRASYS. 

4. Démarrer la séquence en appuyant sur "START" (flèche verte à gauche du clavier). À l'écran, s'affiche le message : "[SECHAGE]". 

SÉCHAGE - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Séchage à 50 °C, température contrôlée par effet Peltier, pendant 3 minutes. 


• Ouvrir le capot. 

• Récupérer le film sec. 

NOTES : 

- Après ouverture du capot, la température du plateau baisse jusqu’à 20 °C (en moins de 5 minutes). Une nouvelle séquence de migration 

peut alors être lancée. 

- Remettre les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes. 

- Nettoyer le plateau avec un papier ouaté humide. 

XIV. LAVAGE DU GEL 

1. Placer le film sur le porte-film, face gel vers l'opérateur, en procédant comme suit (Fig. 15) : 

- ouvrir le porte-film ; 

- le poser à plat sur la paillasse ; 

- positionner le gel dans les gorges des colonnettes ; 

- refermer le porte-film ; 

- s'assurer que le film soit bien enfoncé dans les gorges des deux colonnettes. 

2. Introduire le porte-film dans le module de traitement / coloration du gel. 

IMPORTANT : Avant de lancer un cycle de lavage, s'assurer que : 

- le flacon de décolorant contienne 400 mL de solution de décolorant ; 

- le flacon de vidange soit vide. 

3. Pour le branchement des canaux réactifs : Se référer aux instructions affichées sur l’écran de l’appareil (sélectionner la touche : VISU 

CANAUX). 

IMPORTANT : Ne pas oublier d’obturer les canaux non utilisés. 

4. Sélectionner le programme de lavage "LAV. ISOENZ/GEL" dans le menu et démarrer la séquence en appuyant sur "START" (flèche verte à 

droite du clavier). 

Pendant toutes les séquences de lavage et séchage, le système reste verrouillé. 

Après refroidissement de la cuve, un signal sonore (bip) retentit et le système se débloque (la ventilation se maintient jusqu’à la récupération 

du porte-film). 

5. Sortir le porte-film du compartiment ; ouvrir le porte-film et retirer le gel sec. Si nécessaire, nettoyer et sécher le dos du gel (support plastique) 

avec un papier ouaté humide. 

INTERPRÉTATION 

Le principe d'interprétation est simple : Il s’agit de comparer le profil des immunoglobulines du LCR et du sérum. 

La synthèse intrathécale dans le système nerveux central (CNS), est détectée par la présence de bandes Ig G sur le profil électrophorétique du LCR, 

non détectées sur celui du sérum du même patient. Le sérum présente toujours des bandes qui peuvent être plus ou moins visibles, et en positions 

différentes ou identiques à celles observées sur le LCR (Fig. 16). 

En théorie, une bande unique supplémentaire dans le LCR, absente à la même position dans le sérum correspondant, permet de suspecter une 

synthèse intrathécale. En pratique, deux ou plusieurs bandes supplémentaires dans le LCR sont interprétées comme une indication suffisante en 

faveur du diagnostic d’une sclérose en plaques. Ces recommandations peuvent évoluer en fonction des résultats collectés. Il est à noter que le nombre 

de bandes observées dans un profil oligoclonal ne corrèle pas obligatoirement avec la sévérité ou le pronostic de la sclérose en plaques. Pour ces 

différentes raisons, le nombre de bandes ne doit pas être pris en compte afin d’éviter toute fausse interprétation. 

Pour permettre une interprétation comparative correcte, il est donc indispensable : 

• d'analyser des liquides biologiques du patient (LCR et sérum) prélevés au même moment, en dehors de tout traitement pouvant modifier le taux 

d'immunoglobulines, 

• de doser précisément les immunoglobulines du LCR et du sérum afin d’analyser des quantités identiques sur le gel. 

Si la concentration en immunoglobulines n’est pas connue, le sérum doit être dilué entre 300 et 400 fois, et le LCR doit être analysé pur. Dans ce cas, 

la différence de concentration en Ig G peut conduire à de fausses interprétations. 

La détection d'une synthèse intrathécale d'immunoglobulines par immunofixation sensibilisée est plus spécifique et plus sensible que celle indiquée 

par les différents calculs de rapport ou d’index réalisés à partir des dosages d’Ig G, de l’albumine et d’autres protéines du LCR et du sérum. 

La confirmation d'une synthèse intrathécale d'immunoglobulines est une information importante pour suspecter une pathologie inflammatoire du 

système nerveux central. 

Un profil oligoclonal ou toute autre indication de synthèse intrathécale peuvent être retrouvés dans différentes pathologies cérébrales, telles que : 

• 95 % des scléroses en plaques, 

• 100 % des neurosyphilis non traitées, 

• 100 % des leuco-encéphalites subaiguës sclérosantes. 

- 10 -


En conclusion, une synthèse intrathécale peut être détectée lors de nombreuses maladies du SNC, associées généralement à une inflammation, telles 

que, infections, neuropathies périphériques, néoplasmes, accidents vasculaires cérébraux, etc. 

Le diagnostic ne doit en aucun cas être basé uniquement sur les résultats de l’immunofixation. Ces résultats doivent être inclus dans un ensemble 

d’informations cliniques et historiques du patient, complétées par des examens biochimiques, microbiologiques et cytologiques. 

Interférences et limites 

L’utilisation d’antisérum autre que celui recommandé pour l’utilisation des kits HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING peut affecter la qualité des 

résultats. 

Compte-tenu des principes analytiques des techniques actuelles aucune garantie ne peut être donnée quant à la détection totale de toutes les 

composantes monoclonales. 

Assistance technique 

Contacter le Service Technique SEBIA en cas de test défectueux. 

Les fiches de données de sécurité des différents réactifs du kit ainsi que les informations relatives à l’élimination des déchets sont disponibles auprès 

du Service Technique SEBIA. 

PERFORMANCES 

Reproductibilité intra-gel (répétabilité) 

Les échantillons de LCR et de sérum de quatre patients ont été analysés sur 2 lots différents de gels HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING à raison de 

9 analyses du même couple LCR / sérum sur chaque gel (2 couples présentant une synthèse intrathécale et deux couples sans synthèse intrathécale). 

Reproductibilité intra-lot et inter-lots 

Huit couples LCR / sérum ont été analysés sur 10 gels HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING d’un même lot et sur 2 gels d’un lot différent (6 couples 

présentant une synthèse intrathécale et deux couples sans synthèse intrathécale). 

Résultats : 

Les résultats obtenus sur HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING par analyse qualitative indiquent une très bonne répétabilité et reproductibilité du kit 

HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING pour tous les aspects testés à l'aide de l’antisérum marqué dirigé contre des immunoglobulines de type G. 

En répétabilité et en reproductibilité, chaque échantillon analysé donne les mêmes résultats sur les 2 lots de gels testés et les profils obtenus sont 

caractéristiques pour chacun des échantillons analysés. 

Exactitude - Détection et identification de bandes oligoclonales 

L’analyse de 108 échantillons différents de patients présentant différentes maladies du système nerveux central, par électrophorèse sur gel 

HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING à l'aide de l'antisérum anti-Ig G et sur un autre système en gel d’agarose disponible dans le commerce montre 

une parfaite corrélation entre les deux systèmes d’analyse, avec une sensibilité de 100 % et une spécificité de 84,6 % par rapport à cette dernière 

technique, calculées selon la méthode recommandée (Wendling, 1986). 

Sensibilité 

La sensibilité de la technique HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING est telle que la limite de détection d’une paraprotéine G, à la concentration initiale 

de 20 mg/l, est de l’ordre de 0,31 mg/l. 

BIBLIOGRAPHIE 

(1) Ali S, Sun T, Narukar L. Oligoclonal banding in cerebrospinal fluids of Lyme disease patients. Am J Clin Pathol, 1993, 100 : 335. 

(2) Anderson M, Alvarez-Cermeno J, Bernardi G et al. Cerebrospinal fluid in the diagnosis of multiple sclerosis : a consensus report. Journal of 

Neurology, Neurosurgery and Psychiatry, 1994, 57 : 897-902. 

(3) Blennow K, Fredman P, Wallin A, Gottfries CG, Frey H, Skoog I, Svennerholm L. Formulas for the quantitation of intrathecal Ig G production. Their 

validity in the presence of blood-brain barrier damage and their utility in multiple sclerosis. J Neurol Sci, 1994, 121 : 90-96. 

(4) Caudie C, Vergne A, Saint-Marc T, Touraine F, Livrozer JM, Confraveux C, Quincy CL, Touraine JL. Profil biologique du LCR chez 48 patients 

infectés par le virus de l’immunodéficience humaine (VIH). Retrovirus, 1990, 5 : 34-42. 

(5) Caudie C, Allauzen O, Bancel J, Later R. Apport de la focalisation isoélectrique des immunoglobulines G du liquide céphalorachidien dans le bilan 

biologique précoce de la sclérose en plaques. Ann Biol Clin, 2000, 58 : 187-193. 

(6) Christenson RH, Russell ME, Gubar KT, Silverman LM, Ebers GC. Oligoclonal banding in cerebrospinal fluid assessed by electrophoresis on 

agarose after centrifugal sample concentration through a microconcentrator membrane. Clin Chem, 1985 , 31 : 1734-1736. 

(7) Davenport RD, Keren DF. Oligoclonal bands in cerebrospinal fluids : significance of corresponding bands in serum for diagnosis of multiple 

sclerosis. Clin Chem, 1988 , 34 : 764-765. 

(8) Ford HC. Abnormalities of serum and plasma components in patients with multiple sclerosis. Clin Chem, 1985, 18 : 3-13. 

(9) Gerson B, Cohen SR, Gerson IM, Guest GH. Myelin basic protein, oligoclonal bands and Ig G in cerebrospinal fluid as indicators of multiple 

sclerosis. Clin Chem, 1981, 27 : 1974-1977. 

(10) Guessain A, Caudie C, Gout O et al. Intrathecal synthesis of antibodies to human T lymphotropic Virus Type I and the presence of Ig G oligoclonal 

bands in the cerebrospinal fluid of patients with endemic tropical spastic paraparesis. J Inf Dis, 1988, 157, 6 : 1226-1234. 

(11) Souverijn JHM, Serrée HMP, Peet R, Grenzebach Smit W, Bruyn GW. Intrathecal immunoglobulin synthesis : Comparison of various formulae 

with the " gold standard " of isolelectric focusing. J Neurol Sci, 1991, 102 : 11-16. 

(12) Kabat EA, Landow H, Moore DH. An electrophoretic study of the protein components in cerebrospinal fluid and their relationship to the serum 

proteins. J Clin Invest, 1942, 21 : 571-577. 

(13) Keren DF, “High Resolution Electrophoresis and Immunofixation Techniques and Interpretation”, Butterworth-Heinemann, Woburn, MA, USA, 

1994, 397 pp. 

(14) Keshgegian AA, Coblentz J, Lisak RP. Oligoclonal immunoglobulins in cerebrospinal fluid in multiple sclerosis. Clin Chem, 1980 , 26 : 1340-1345. 

(15) Mac Lean BN, Luxton RW, Thompson EJ. A study of immunoglobulin G in the cerebrospinal fluid of 1007 patients with suspected neurological 

disease using isoelectric focusing and the Log Ig G-index. Brain, 1990, 113 : 1269-1289. 

(16) Olsson JE, Link H. Immunoglobulin abnormalities in multiple sclerosis. Arch Neurol, 1973, 28 : 392-399. 

- 11 -


(17) Onraed B, Faucompré JL, Vélia P, Guttierez J, Marchetti P, Hennache B. Diagnostic de la sclérose en plaques et intérêt de l’isoélectrofocalisation 

en gel d’agarose. Immunoanal Biol Spec, 1999, 14 : 251-255. 

(18) Papadopoulos NM, Costello R, Kay AD, Cutler NR, Rapoport SL. Combined immunochemical and electrophoretic determinations of proteins in 

paired serum and cerebrospinal fluid samples. Clin Chem, 1984 ; 30 : 1814-1816. 

(19) Reiber. Liquor diagnostik. Diagnose and Labor, 1987, 37 : 63-72. 

(20) Sharief MK, Thompson EJ. Intrathecal immunoglobulins M synthesis in multiple sclerosis. Relationship with clinical and cerebrospinal fluid 

parameters. Brain, 1991, 114 : 181-195. 

(21) Sindic CJM, Monteyne P, Laterre EC. The intrathecal synthesis of virus-specific oligoclonal IgG in multiple sclerosis. Journal of Neuroimmunology, 

1994, 54 : 75-80. 

(22) Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : Justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité. 

Impact-Internat, 1986 ; Sept : 93-97. 

(23) Winfield JB, Shaw M, Silverman LM, Eisenberg RA, Wilson HA, Koffler D. Intrathecal Ig G synthesis and blood-brain barrier impairment in patients 

with systemic lupus erythematosus and central nervous system dysfunction. Am J Med, 1983, 74 : 837-844. 

- 12 -


INTENDED USE 

The HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING and HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING kits are designed for the qualitative detection and identification of 

" oligoclonal " bands in the electrophoretic patterns of cerebrospinal fluid (CSF) and confirmation of their immunoglobulin character. The procedure 

includes isoelectrofocusing on agarose gel, performed on the semi-automatic HYDRASYS system, followed by immunofixation with anti-Ig G 

antiserum. The use of enzyme labeled anti-Ig G antiserum permits to detect only the "true" Ig G oligoclonal banding at increased sensitivity of detection 

so that the analysis can be generally performed on unconcentrated CSF. The Ig G immunofixation patterns of CSF and serum from the same patient 

are then visually compared. This allows detection of oligoclonal banding that represents intrathecal synthesis of immunoglobulins. 

The HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING and HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING kits are indicated when certain diseases of the central nervous 

system (CNS), such as multiple sclerosis, are suspected and the detection of oligoclonal banding and inflammatory processes (intrathecal synthesis 

of immunoglobulins) can aid to the diagnosis. 

For In Vitro Diagnostic Use. 

PRINCIPLE OF THE TEST 

Many disorders of the central nervous system are associated with increased concentration of CSF proteins either due to increased permeability of 

blood-CSF barrier or to synthesis of immunoglobulins, primarily Ig G, within the central nervous system (CNS). In the latter case, such intrathecal 

synthesis of immunoglobulins (Ig’s) is often associated with restricted heterogeneity which manifests itself as "oligoclonal banding" seen in the gamma 

zone of high resolution electrophoretic migration patterns. The bands that are not Ig’s can also be present in the gamma globulin zone but do not have 

the same diagnostic significance. Immunofixation is a choice detection technique since it can prove the Ig character of the oligoclonal bands, identify 

the Ig involved and provide the necessary test specificity. Since only Ig G oligoclonal banding has a routine diagnostic significance the SEBIA test is 

primarily concerned with the detection of Ig G oligoclonal bands using specific anti-Ig G antiserum. 

Presence of intrathecal Ig G suggests inflammatory disease of the CNS, such as caused by multiple sclerosis (MS). Although oligoclonal banding is 

neither diagnostic nor specific for MS, it is widely used as supportive information and considered an essential test by the 1994 consensus of the 

“Committee of the European Concerted Action for Multiple Sclerosis”. It is confirmatory in patients with clinical MS episodes and suggestive in patients 

with only few episodes or inconclusive clinical symptoms. 

Among others, the Committee set criteria for detection of Ig G oligoclonal banding in the CSF : 

1. the most resolutive and sensitive technique for the detection of oligoclonal banding is isoelectric focusing, 

2. the oligoclonal Ig G must be detected by specific antiserum, 

3. to confirm intrathecal Ig G synthesis, patient serum and CSF must be analyzed in parallel to demonstrate differences in Ig G distribution, 

4. as an aid to interpretation, Ig G concentration in the CSF-serum sample pair should be adjusted to the same level, 

5. concentrating CSF should be avoided. 

The HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING test meets all the above criteria. 

The assay is carried out in two stages: 

• Isoelectrofocusing on agarose gel to fractionate the proteins in the CSF and serum samples. 

• Immunofixation with enzyme (peroxidase) labelled anti-Ig G antiserum to detect Ig G oligoclonal bands and to demonstrate the difference, or lack 

of, in the distribution of Ig G in the CSF and serum. 

Compared to standard immunofixation, about a 100 times increase in the sensitivity of detection is achieved with the HYDRAGEL 3 & 9 CSF 

ISOFOCUSING kits that use enzyme labelled antibodies. Then, with Ig G concentration at or above of only of 1 mg/dL, the Ig G can be detected and 

its distribution discerned without concentrating the CSF sample. 

The semi-automated HYDRASYS system performs all the steps needed to obtain gels ready for interpretation. 

Each agarose gel in the HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING contains 6 tracks and is intended to run three CSF – serum sample pairs. 

Each agarose gel in the HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING contains 18 tracks and is intended to run nine CSF – serum sample pairs. 

REAGENTS AND MATERIALS SUPPLIED IN THE HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING AND HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING KITS 

ITEMS PN 4353 PN 4355 Agarose Gels (ready to use) 10 gels 10 gels Ethylene glycol solution (ready to use) 1 vial, 3 mL 1 vial, 3 mL Anodic solution (ready to use) 1 vial, 50 mL 1 vial, 50 mL Cathodic solution (ready to use) 1 vial, 50 mL 1 vial, 50 mL Strips 10 packs de 2 10 packs de 2 Sample Diluent CSF (ready to use) 1 vial, 85 mL 1 vial, 85 mL Antiserum Diluent CSF ISOFOCUSING (ready to use) 1 vial, 3.75 mL 1 vial, 3.75 mL Rehydrating Solution CSF (ready to use) 2 vials, 70 mL 2 vials, 70 mL TTF3 Solvent (ready to use) 2 vials, 20 mL 2 vials, 20 mL TTF3 (stock solution) 2 vials, 0.5 mL 2 vials, 0.5 mL Applicators (ready to use) 1 pack of 10 (6 teeth) 1 pack of 10 (18 teeth) Buffer containers (ready to use) 1 pack of 2 1 pack of 2 Antiserum segments (ready to use) 1 pack of 10 1 pack of 10 Filter Papers – Thin 1 pack of 10 1 pack of 10 Filter Papers – Thick 3 packs of 10 each 3 packs of 10 each 

| Plastic masks | 1 pack of 10 each | 1 pack of 10 each | 

FOR OPTIMAL RESULTS 

Only reagents from the same kit must be always used together and according to the package insert instructions. 

PLEASE READ THE PACKAGE INSERT CAREFULLY. 

- 13 - 

SEBIA INSTRUCTIONS - English


1. AGAROSE GELS 

Preparation 

Agarose gels are ready to use. Each gel contains: agarose, 1 g/dL ; ampholytes ; additives, nonhazardous at concentrations used, necessary for 

optimum performance. 

Use 

Support medium for protein isoelectrofocusing and immunofixation. 

Storage, stability and signs of deterioration 

Store the gels horizontally in the original protective packaging and refrigerated (2 to 8 °C). They are stable until the expiration date indicated on the 

kit package and the gel package labels. (The arrow on the front of the kit box must be pointing upwards). 

Avoid storage close to a window or to a heat source. Avoid important variation of temperature during storage. 

DO NOT FREEZE. 

Discard when: 

(i) crystals or precipitate form on the gel surface or the gel texture becomes very soft (all these result from freezing the gel), 

(ii) bacterial or mold growth is indicated, 

(iii) abnormal liquid quantity is present in the gel box (as a result of buffer exudation from the gel due to improper storage conditions). 

2. ETHYLENE GLYCOL SOLUTION 

Preparation 

The ethylene glycol solution is ready to use. 

WARNING: Harmful if swallowed. 

Use 

To provide effective contact between the gel plastic backing and the temperature control plate of the migration module during the electrophoretic 

migration. 


Store the ethylene glycol solution at room temperature or refrigerated. It is stable until the expiration date indicated on the kit package or ethylene 

glycol solution vial label. 

3. ANODIC AND CATHODIC SOLUTIONS 

Preparation 

The anodic solution (acid solution) and cathodic solution (basic solution) are ready to use. They both contain additives, nonhazardous at 

concentrations used, necessary for optimum performance. 

NOTE : The anodic solution is colored red as an aid in monitoring its application and for an easy identification of the preapared anodic strip. 

WARNING: The cathodic solution contains sodium hydroxide. Irritating to eyes and skin. In case of contact with eyes, rinse immediately 

with plenty of water and seek medical advice. 

Use 

As electrolytes for preparing anodic and cathodic strips for isoelectrofocusing. 

IMPORTANT : After each use, close immediately and tightly the cathodic solution vial to avoid carbonation of this solution. 


The anodic and acidic solutions can be stored at room temperature or refrigerated and are stable until the expiration date indicated on the kit package 

or solutions vial labels. Solutions must be free of precipitate. 

4. STRIPS 

Preparation 

Saturate two sponge strips respectively with anodic and cathodic solutions 5 minutes before use : 

Place the grey container for anodic strip and the blue container for the cathodic strip on a flat surface. 

Dispense 5 mL of red anodic solution in the grey container and 5 mL of uncolored cathodic solution in the blue container. 

Open the pack of sponges, handle the strips by the plastic ends and place them in each container. 

Soak them evenly by pressing several times with the tip of the corresponding pipettes. 

Use the saturated strips without any delay. 

IMPORTANT : Saturate strips just before use to avoid carbonation of the cathodic solution. 

Use 

The strips soaked respectively with anodic and cathodic electrolyte solutions ensure contact between the gel and electrodes and determine the pH 

range during focalisation. 


Moist sponges in the original protective packaging can be stored at room temperature or refrigerated. They must be stored horizontally (the arrow on 

the front of the kit box must be pointing upwards). They are stable until the expiration date indicated on the kit package or strips package label. 

DO NOT FREEZE. 

Discard strips if the package is opened and the strips dry out. 

5. SAMPLE DILUENT CSF 

Preparation 

Sample diluent is ready to use. It contains saline solution supplemented with bovine serum albumin, sodium azide and additives nonhazardous at 

concentrations used, necessary for optimum performance. 

Use 

For CSF and serum sample dilution. 


Store the sample diluent refrigerated (2 to 8 °C). It is stable until the expiration date indicated on the kit package or diluent vial label. Diluent must be 

free of precipitate. 

- 14 -


6. ANTISERUM DILUENT CSF ISOFOCUSING 

Preparation 

Antiserum diluent is ready to use. It contains additives nonhazardous at concentrations used, necessary for optimum performance. 

Use 

For diluting antiserum just before use. 


The antiserum diluent can be stored at room temperature or refrigerated. It is stable until the expiration date indicated on the kit package or antiserum 

diluent vial label. Antiserum diluent must be free of precipitate. 

NOTE: During storage, the antiserum diluent may turn yellow without any adverse effects on its performance. 

7. CSF REHYDRATING SOLUTION 

Preparation 

The rehydrating solution is ready to use. It contains components, nonhazardous at concentrations used, necessary for optimum performance. 

Use 

For rehydrating the agarose gel before the peroxidase-based visualization step. 


The rehydrating solution can be stored at room temperature or refrigerated and is stable until the expiration date indicated on the kit package or 

rehydrating solution vial label. Rehydrating solution must be free of precipitate. 

8. TTF3 SOLVENT 

Preparation 

The TTF3 solvent is ready to use. It contains components, nonhazardous at concentrations used, necessary for optimum performance. 

Use 

For the preparation of TTF3 visualization solution as described in No. 9. 


The TTF3 solvent can be stored at room temperature or refrigerated and is stable until the expiration date indicated on the kit package or TTF3 solvent 

vial label. TTF3 solvent must be free of precipitate. 

9. TTF3 

Preparation 

Just before use, prepare the working developing solution. Add the reagents in the following order: 4 mL of TTF3 solvent, 100 µL of TTF3 and 4 µL 

hydrogen peroxide (H 2 

O 2 

) 30 %. 

WARNING: TTF3 contains dimethylformamide. Harmful by inhalation ! In case of insufficient ventilation, wear suitable respiratory 

equipment. Do not ingest ! If ingested, consult physician immediately ! Harmful in contact with skin. Wear suitable protective clothing. 

Irritating to the eyes. After contact with eyes or skin, rinse immediately with plenty of water and seek medical advice. Avoid exposure, obtain 

special instruction before use. May cause cancer. If you feel unwell, seek medical advice immediately (show label where possible). 

Use 

For visualization of the immunoglobulins separated by isofocusing via the peroxydase-labelled antiserum. 


Store the stock TTF3 at room temperature or refrigerated. It is stable until the expiration date indicated on the kit package or vial label. TTF3 solution 

must be free of precipitation. 

10. APPLICATORS 

Use 

Precut, single use applicators for sample application onto gel. 


Store the applicators in a dry place at room temperature or refrigerated. 

11. BUFFER CONTAINERS 

Use 

Reusable colored containers for preparation of the anodic and cathodic strips. 

The grey container is intended for the anodic strip and the blue container is intended for the cathodic strip. 

After each use, wash the two containers with distilled or deionized water and dry them. 


Store the clean buffer containers on a flat surface at room temperature. 

12. ANTISERUM SEGMENTS 

Use 

Single use, colored segments for antiserum application onto the gel for immunofixation with the dynamic mask. 

WARNING : Segments loaded with antiserum have to be handled with care. 

13. THIN FILTER PAPERS 

Use 

Precut, single use, thin absorbent paper pads for blotting excessive moisture off the gel surface before sample application. 

Storage 

Store the thin filter papers in a dry place at room temperature or refrigerated. 

- 15 -

14. THICK FILTER PAPERS 


Use 

Single use, thick absorbent paper pads for blotting unprecipitated proteins off the gel after immunofixation and rehydration steps. 

Storage 

Store the thick filter papers in a dry place at room temperature or refrigerated. 

15. PLASTIC MASKS 

Use 

Plastic sheets, for single use, to shield the gel during the electrophoretic migration. 

EQUIPMENT AND ACCESSORIES REQUIRED 

1. HYDRASYS System SEBIA, PN 1211 with OPTION FOCUSING HYDRASYS SEBIA, PN 1235. 

or 

2. HYDRASYS FOCUSING System SEBIA, PN 1212. 

3. Micropipettor, either manual or automated, such as HYDRAPLUS SEBIA, PN 1216 or HYDRAPLUS 2 SEBIA, PN 1217, for an alternative way of 

loading the sample applicators or antisera segments. 

4. Wet Storage Chamber, PN 1270, supplied with HYDRASYS. 

5. Template Guide Bar SEBIA supplied with HYDRASYS. 

6. Dynamic mask, SEBIA, PN 1255. 

7. Accessory Kit for HYDRASYS CSF ISOFOCUSING SEBIA, PN 1258. It contains : the reagent application masks R3, ENZ 4 mL and the half length 

reducing device. 

8. Container Kit supplied with HYDRASYS. 

9. Pipettes: 2 µL, 20 µL, 100 µL, 200 µL and 5 mL (or graduated pipettes/pipettors : 0-100 µL, 100-500 µL and 1-10 mL). 

REAGENTS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 

1. ANTISERUM ANTI-Ig G - PER 

The antiserum vial (SEBIA PN 4743: 1 vial, 0.60 mL) contains a stock solution of a mammalian anti-human immunoglobulin antiserum with specificity 

for Ig G, conjugated to peroxidase. For an easy identification and as an aid in monitoring its application, the antiserum is colored with a non-hazardous 

dye that matches the color of the vial label. 

Prepare working solution just before use : 

For HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING : 25 µL anti–Ig G - PER and 175 µL antiserum diluent. 

For HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING : 40 µL anti–Ig G - PER and 300 µL antiserum diluent. 

Mix well. 

Use 

For immunofixation and visualization of the isoelectrofocused Ig G’s. 


Store the antiserum refrigerated (2 to 8 °C). It is stable until the expiration date indicated on the antiserum vial label. 

Discard antiserum if any change in appearance, e.g., cloudiness due to microbial contamination is observed. 

NOTE: Antisera may originate from different animal species. Don’t mix two different antisera vials, even with the same specificity, and ALWAYS change 

the tip of the pipette when changing antiserum vials. 

During transportation, the antiserum may be kept without refrigeration (15 to 30 °C) for 15 days without any adverse effects on performance. 

2. HYDROGEN PEROXIDE: H 2 

O 2 

, 30 % (110 Vol.) 

Hydrogen peroxide must be stored in dark bottle and refrigerated (2 to 8 °C). When dispensing, always use clean pipette to avoid contamination of 

the bottle content. 

3. DESTAINING SOLUTION 

Preparation 

Each vial of stock Destaining Solution (SEBIA, PN 4540, 10 vials 100 mL each) to be diluted up to 100 liters with distilled or deionized water. It is 

convenient to dilute only 5 mL of the stock solution to 5 liters, the volume of the destaining solution container. After dilution, the working destaining 

solution contains: citric acid, 50 mg/dL. 

Use 

For washing the gel after enzymatic visualization and drying and for rinsing of the HYDRASYS staining compartment. 

To neutralize the acidity of the destaining solution for disposal, pour 15 mL of a 50 % solution of sodium hydroxide, into the empty waste container. 


Store the stock destaining solution at room temperature or refrigerated. It is stable until the expiration date indicated on the kit package or destaining 

solution vial labels. 

Working destaining solution is stable for one week at room temperature in a closed bottle. 

To prevent microbial proliferation in the diluted destaining solution to be stored more than one week, add 5 µL/dL of ProClin 300. 

Working destaining solution added with ProClin is stable in a closed bottle at room temperature or refrigerated until the expiration date indicated on 

the kit package or destaining solution vial labels. 

Do not add any sodium azide. 

Discard working destaining solution if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination. 

- 16 -


4. HYDRASYS WASH SOLUTION 

Preparation 

Each vial of the stock HYDRASYS Wash Solution (SEBIA, PN 4541, 10 vials, 80 mL each) to be diluted up to 5 liters with distilled or deionized water. 

After dilution, the working wash solution contains: alkaline buffer pH 8.8 ± 0.3 ; sodium azide. 

WARNING: The stock wash solution contains 0.625 % sodium azide. Do not ingest ! If ingested, consult physician immediately ! Sodium 

azide may lead to formation of explosive or toxic compounds when in contact with acids, lead or copper. Always flush with a large quantity 

of water when disposing. 

Use 

The HYDRASYS wash solution is designed for cleaning of the HYDRASYS staining compartment. Use periodically, e.g., if the instrument is used daily, 

wash the staining compartment weekly. 

See the package insert for directions to use. 


Store the stock and working wash solutions in closed containers at room temperature or refrigerated. They are stable until the expiration date indicated 

on the wash solution vial label. 

Discard working wash solution if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination. 

SAMPLES FOR ANALYSIS 

Sample collection and storage 

Serum and CSF from the same patient must be collected at the same time according to conventional procedures used in clinical laboratory testing. It 

is recommended to carry out analyses on fresh sera and CSF. The samples may be stored for up to one week refrigerated (2 to 8 °C). For longer 

storage periods, freeze the samples. Frozen serum and CSF are stable at least for one month. 

Sample preparation 

• Measure the CSF and serum Ig G concentrations using appropriate procedures. 

• The concentration of Ig G in the corresponding CSF and serum samples should be adjusted to the same level. 

The adjustment depends on the original CSF’s Ig concentration; use Sample Diluent for all dilutions: 

1st case: the concentration of Ig G is over 2 mg/dL. 

Dilute CSF and serum with the sample diluent to obtain Ig G concentration of 2 mg/dL. 

2nd case: the CSF concentration of Ig G is between 1 and 2 mg/dL. 

Use neat CSF. Dilute serum to obtain the same Ig G concentration as is in the CSF sample. 

3rd case: The CSF concentration of Ig G is below 1 mg/dL. 

Concentrate CSF with any appropriate device to obtain Ig G concentration between 1 and 2 mg/dL. Dilute serum to the same Ig G concentration as 

is in the concentrated CSF sample. 

Example of dilutions (only for samples with Ig G concentration over 2.0 mg/dL) : 

For CSF: 

A = Ig G concentration in mg/dL. 

Collect 20 µL CSF and mix well with 10(A - 2) µL of sample diluent. 

For serum: 

B = Ig G concentration in mg/dL. 

- Dilute serum 10 times with sample diluent, e.g., 10 µL serum and 90 µL sample diluent. 

- Collect y µL diluted serum and add y [(B/20) - 1] µL sample diluent (for suggested value of y = 2 µL, add [(B/10) - 2] µL of sample diluent). 

When the Ig G concentration is unknown 

Use neat CSF and dilute serum 300 – 400 times. 

NOTE: Failure to adjust CSF and serum samples to the same Ig G concentration may negatively affect interpretation of the patterns – see 

“INTERPRETATION”. 

PROCEDURE 

The HYDRASYS system is a semi-automated multi-parameter instrument. The automated steps include processing of HYDRAGEL agarose gels in 

the following sequence: pre-migration, sample application, isoelectric focusing migration, incubation with enzyme-labelled antiserum, incubation with 

enzyme substrate, stopping the enzymatic reaction, blotting and final drying of the gel. The manual steps include handling samples and gels, 

application of reagents and setting up the instrument for operation. 

READ CAREFULLY HYDRASYS INSTRUCTION MANUAL. 

IMPORTANT : Verify the dynamic mask has been properly positioned for perfect alignment between electrophoretic profiles and wells of the mask. 

I. MIGRATION SET UP 

1. Switch on HYDRASYS instrument. 

2. In order to obtain the high voltage required for the isoelectrofocusing, press the green high voltage switch to high voltage mode ; then, the 

switch becomes red. 

NOTE: The high voltage switch displays migration information. During migration, it shows volt.hours (Vh) and current (mA) values. When 

pressed during migration, it shows the voltage (V) and power (W) values. If pressed again, the display returns to Vh and mA values. 

When the HYDRASYS is in the high voltage mode, the display window shows the real current value and 1/10 of other values such as voltage, 

volt.hours and power. 

3. Place one applicator 6 teeth for HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING or one applicator 18 teeth for HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING, on a 

flat surface with the well numbers in the right-side-up position. 

4. Apply 10 µL sample in each well of the applicator (Fig. 1). Load the applicator within 2 minutes. 

- 17 -


The following example shows analysis of three CSF-serum pairs on one HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING gel and nine CSF-serum pairs 

on one HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING gel. 


| CSF | SERUM | CSF | SERUM | 

WELL No. WELL No. PATIENT No. (applicator 6 teeth) | (applicator 18 teeth) | 

1 1 2 1 2 2 3 4 3 4 3 5 6 5 6 4 - - 7 8 5 - - 9 10 6 - - 11 12 7 - - 13 14 8 - - 15 16 | 9 | - | - | 17 | 18 | 

- Place immediately the applicator into the wet storage chamber with the teeth up (handle it by the plastic tooth protection frame). 

See wet chamber package insert for further details. 

Before sample application onto the gel surface, a pre-migration step until 75 Vh have accumulated must be carried out, according 

to the following instructions : 

5. Open the lid of the migration module and raise the electrode and applicator carriers. 

WARNING: Never close the lid while the carriers are raised ! 

6. Select "3/9 CSF FOCUSING" migration program from the instrument menu (left side of the keyboard). 

7. Prepare electrode strips with cathodic and anodic solutions: see No. 4 under REAGENTS AND MATERIALS SUPPLIED. Remove strips from 

the anodic and cathodic containers ; handle them by the plastic ends. 

8. On the raised carrier, engage the punched ends of the strip's plastic backing to the pins on the electrode carrier, the strip's plastic backing 

must face the carrier (Fig. 2). The red anodic strip is at the bottom (anode), the uncolored cathodic strip is at the top (cathode). 

9. Unpack the HYDRAGEL agarose gel plate. 

10. Place its plastic side down on a tissue or filter paper to remove water droplets. 

11. Roll one thin filter paper onto the gel surface and leave it there for 3 seconds to absorb the excess of liquid. 

12. Streak 150 µL ethylene glycol (EG) for HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING or 300 µL for HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING across the lower 

third of the frame printed on the Temperature Control Plate of the migration module. 

13. Place the gel plate (the gel side up) with its edge against the stop at the bottom of the printed frame (Fig. 3). 

Bend the gel and ease it slowly down onto the EG streak. Ensure that no air bubbles are trapped, EG is spread underneath the entire gel plate 

and the gel is lined up with the printed frame. 

14. Position a plastic mask on the gel : 

- Take one plastic mask. 

- Align the lower side of the plastic mask with the two lateral marks printed at 1.5 cm from the bottom of the plastic gel support (cathodic side) 

(Fig. 4). 

- Roll the mask onto the gel surface. Avoid trapping air bubbles between the gel and the mask. 

- When air bubbles are trapped, remove without delay the mask from one side to eliminate the bubble and roll it again slowly on the gel. 

- Avoid moving the gel on the migration plate during this manipulation. 

WARNING : The plastic mask must not be placed under the two lateral marks printed on the plastic gel support. 

15. Lower both carriers down. In this position, the buffered strips do not touch the gel. DO NOT FORCE THE CARRIERS ALL THE WAY DOWN. 

16. Close the lid of the migration module. 

17. Start the procedure immediately by pressing the green arrow "START" key on the left side of the keyboard. 

IMPORTANT: Make sure that the ventilation air inlet on the right side of the instrument is not blocked. 

PRE-MIGRATION - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• The electrode carriers is lowered so that buffered strips contact the gel surface. 

• Migration is carried out at 20 °C controlled by Peltier effect, until 75 Vh have accumulated ; the voltage gradually raises to its maximum value 

(1000 V), required for the procedure. 

• The electrode carrier rises to disconnect the electrodes. 

• A beep sounds and the cover unlocks. This signal remains until the operator intervenes. The following flashing message is displayed on the screen: 

"POS : 1" signalling to place immediately the applicator on the carrier. 

NOTE: The migration module lid remains closed during all migration steps. 

18. Open the lid of the migration module. 

19. Remove the applicator from the wet chamber. Handle it by the protection frame. 

- Snap off the applicator teeth's protection frame. 

- Place the applicator into position No. 1 on the carrier. 

IMPORTANT: The numbers printed on the applicator must face the operator (Fig. 5). 


21. Start the procedure immediately by pressing the green arrow "START" key on the left side of the keyboard. 

- 18 -


MIGRATION - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• The two carriers are lowered so that buffered strips and applicator contact the gel surface. 

• Sample applicator carrier rises up. 

• Migration is carried out for about 45 minutes at 20 °C controlled by Peltier effect, until 700 Vh have accumulated ; the voltage gradually raises to its 

maximum value (1000 V), required for the procedure. 

• The electrode carrier rises to disconnect the electrodes. 

• A beep sounds and the cover unlocks. This signal remains until the operator intervenes. The following flashing message is displayed on the screen: 

“ AS” signalling to apply antisera. 

NOTE: The migration module lid remains closed during all migration steps. 

II. IMMUNOFIXATION SET UP 

During the migration, assemble the dynamic mask which contains an antiserum segment, a segment holder, a dynamic mask guide and a length-half 

reducing device (Fig. 6). 

1. Place the dynamic mask guide on a flat surface. 

2. For HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING, position a length-half reducing device on the far end of dynamic mask guide. 

3. Set up an antiserum segment on the segment holder (Fig. 7) : 

- Tilt the antiserum segment at a 45° angle and position it against the plastic springs of the segment holder. 

- Pull the segment and pivot it until it snaps into the notches of the segment holder. 

WARNING : Be sure the segment is correctly positioned on the holder : the pins at the ends of the segment must be locked into the 

notches of the holder. 

4. Set up the holder with the segment on the dynamic mask guide with length-half reducing device already in place (Fig. 8). 

Apply reagents as follows: 

For HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING, apply 20 µL/well of antiserum anti-Ig G - PER in wells 4 to 12. 

For HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING, apply 20 µL/well of antiserum anti-Ig G - PER in each of the 15 wells. 

Aspirate reagents avoiding any air bubbles in the pipette tip. 

5. Apply the reagents (Fig. 9) : 

- Hold pipette at an angle and rest its tip lightly at the side of the well, without touching the bottom of the well. 

- Inject the volume of reagent into the well. 

III. IMMUNOFIXATION 

1. After the migration, open the lid (the message stops flashing). 

2. Remove the sample applicator and discard. 

3. Raise both carriers, remove the buffered strips by their plastic ends and discard. 

4. Remove both carriers. 

5. Clean the electrodes by wiping them carefully with a soft wet tissue. 

6. Leave the gel in place in the migration module and remove the plastic mask by a corner and discard. 

WARNING : Don’t move the gel on the printed frame during this step. 

7. Set up the dynamic mask for antiserum application onto the gel as follows (Fig. 10): 

- Position the mask guide on the anchoring clip (the guide may stay in the migration module all the time). 

- Hold the dynamic mask by the tab and position it into the guide with the notches aligned with the marks. 

- Lower the dynamic mask onto the plate of HYDRASYS. 

- Make sure the segment holder is at the lowest point on the mask guide, facing the operator. 

- Hold the segment holder by the handle situated on its right and press on the central pressure point such that the antiserum segment contacts 

the gel. 

- Release the pressure; then, reagent will spread under the entire segment (Fig. 11). 

- Immediately, using the segment holder handle, move the segment slowly but steadily up and down the entire length of the gel to apply the 

reagent. Repeat this step twice ; application should take approximately 5 seconds for each passage (Fig. 12). 

- During this step, hold the mask only by the segment holder handle. Avoid touching the guide. 

8. Leave the dynamic mask in the HYDRASYS chamber with the antiserum segment at the lowest point on the mask guide. 


10. Start immediately the incubation procedure by pressing the green arrow "START" key on the left side of the keyboard. 

The following message is displayed on the screen: "[INCUBATION]". 

IMMUNOFIXATION - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• Incubation at 20 °C controlled by Peltier effect, for 10 minutes. 

• An audible beep signals that the migration module lid unlocks. The following message is displayed on the screen: “ PAP.”. 

NOTE: The migration module lid remains locked during incubation. 

IV. GEL BLOTTING 


2. Remove the dynamic mask assembly : 

- Remove the segment holder using its handle. 

- Remove the antiserum segment from the holder and discard. 

WARNING : Segment with antiserum have to be handled with care. 

3. Apply a thick filter paper, the smooth side down, on the gel : 

- Slope the filter paper at about 45 °. Align the lower side of the filter paper with the edge of the gel. 

- Lower the filter paper onto the gel. 

WARNING : Press firmly on the whole surface of the filter paper to ensure perfect adherence on the gel. 


5. Start the blotting sequence by pressing the "START" key (green arrow on the left side of the keyboard). 

- 19 -


BLOTTING - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• Blotting at 20 °C controlled by Peltier effect, for 3 minutes. 

The following message is displayed on the screen: "[BLOTTING]". 

• A beep sounds. The following flashing message is displayed on the screen: "❊ PAP. + REHYD 1" signalling to remove the filter paper to apply 

the first rehydrating solution. 

V. GEL REHYDRATION 


2. Remove the filter paper and leave the gel in place on the plate of the migration module. 

3. Set up the reagent application mask R3 for HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING or mask ENZ 4 mL for HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING 

(Fig. 13). 

4. Take rehydrating solution for HYDRAGEL CSF FOCUSING without trapping any air bubbles in the pipette tip. 

5. Apply 4.5 mL for HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING or 7 mL for HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING of the solution through the template hole 

(Fig 14). Ensure the solution is evenly spread in the rectangular space under the template. 

- Hold the pipette vertically. 

- Lightly press the tip of the pipette into the hole of the template. 

- Carefully and progressively inject the solution under the template without introducing air bubbles. 



GEL REHYDRATION - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 


• A beep sounds. The following flashing message is displayed on the screen: " ❊ REHYD 1 + PAP." signalling to remove the first rehydrating 

solution by repipetting the excess of liquid to apply a thick filter paper. 

VI. REHYDRATING SOLUTION ELIMINATION 


2. Remove the rehydrating solution. 

3. Hold the pipette vertically and lightly press the tip of the pipette into the well (Fig. 14). 

4. Carefully and progressively withdraw the reagent. 

5. Grasp the reagent application template by the flap, lift it and remove it. The gel area must be rehydrated. 

VII.GEL BLOTTING 

1. Apply one thick filter paper on the rehydrated area of the gel as described in § IV (the smooth side down, on the gel). 

2. Press on the whole surface of the filter paper to ensure perfect adherence to the gel. 





• A beep sounds. The following flashing message is displayed on the screen: "❊ PAP. + REHYD 2" signalling to remove the filter paper to apply 

the second rehydrating solution. 

VIII. GEL REHYDRATION 


2. Remove the filter paper and leave the gel in place on the plate of the migration module. 

3. Set up the reagent application mask R3 for HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING or mask ENZ 4 mL for HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING 

(Fig. 13). 

4. Take rehydrating solution for HYDRAGEL CSF FOCUSING without trapping any air bubbles in the pipette tip. Apply 4.5 mL for HYDRAGEL 

3 CSF ISOFOCUSING or 7 mL for HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING of the solution through the template hole (Fig 14). Ensure the solution 

is evenly spread in the rectangular space under the template. 

5. Hold the pipette vertically. 

6. Lightly press the tip of the pipette into the hole of the template. 

7. Carefully and progressively inject the solution under the template without introducing air bubbles. 



GEL REHYDRATION - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 


• After incubation time, a beep sounds, the following flashing message is displayed on the screen: " ❊ REHYD 2 + TTF3" signalling to remove the 

rehydrating solution to apply the visualization solution. 

IX. REHYDRATING SOLUTION ELIMINATION 


2. Remove the rehydrating solution as previously described in § VI. 

3. Leave the template in place. 

X. VISUALIZATION 

1. Deliver TTF3 visualization solution prepared just before use into the space underneath the template : 3 mL for HYDRAGEL 3 CSF 

ISOFOCUSING or 3.5 mL for HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING. Follow the same precautions as previously described. 

2. Take TTF3 visualization solution without trapping any air bubbles in the pipette tip. 

Ensure that solution under the template is uniformly spread in the rectangular surface centered on the hole of the template. 



- 20 -


INCUBATION - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 


• A beep sounds. The following flashing message is displayed on the screen: "❊ TTF3 / PAP." signalling to remove visualization solution to apply 

one thick filter paper. 

XI. VISUALIZATION SOLUTION REMOVAL 


2. Remove the visualization solution as previously described in § VI. 

3. Grasp the reagent application template by the flap, lift it and remove it. 

XII.BLOTTING OF THE GEL 

1. Apply one thick filter paper on the developed area of the gel, as described in § IV (the smooth side down, on the gel). 

2. Press on the whole surface of the filter paper to ensure perfect adherence to the gel. 



5. Rinse the template with distilled water and dry it thoroughly with soft absorbent paper. Prior to re-use, ensure the template is completely dry ; 

remove droplets from the wells by tapping it on soft paper. 

NOTE: Alcohol may be used to clean application templates R3 or ENZ 4 mL after visualization step with TTF3. 



• A beep sounds. The following flashing message is displayed on the screen: "❊ PAP." signalling to remove the filter paper. 

XIII. DRYING OF THE GEL 


2. Remove the filter paper and leave the gel in place. 

3. Close the cover of HYDRASYS. 

4. Start the drying step by pressing the "START" key (green arrow on the left side of the keyboard). The following message is displayed on the 

screen: "[DRYING]" 

DRYING - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• Drying of the gel at 50 °C, for 3 minutes. 

• A beep sounds signalling to open the cover. 

• Open the cover. 

• Remove the dried gel. 

NOTE : The temperature of the plate decreases to 20 °C in less than 5 minutes. 

- When 20 °C is reached, a new migration run can be started. 

- Position the sample applicator and electrode carriers in place. 

- Wipe the temperature control plate with a soft wet tissue. 

XIV. WASH AND FINAL PROCESSING OF THE GEL 

After drying, the gel is washed in staining compartment using the "WASH ISOENZ/GEL" program. If the chamber has been previously used to stain 

protein gel, clean the chamber with the "WASH CHAMBER" program. 

1. Open the gel holder. Lay it flat and position the gel (with gel side facing up) into the grooves of the two rods and close the holder. Make sure 

that the film is correctly positioned inside the holder (Fig. 15). 

2. Place the gel holder into the gel processing / staining module. 

IMPORTANT: Before starting the gel processing / staining program, check the following : 

- the destaining solution container contains at least 400 mL of destaining solution ; 

- the waste container is empty. 

3. For reagent line connection: Refer to the information displayed on the screen of the instrument (select key: REAGENT LINES). 

IMPORTANT: Do not forget to block up the unused lines. 

4. Select "WASH ISOENZ/GEL" washing program from the instrument menu and start the run by pressing the "START" key (green arrow on the 

right side of the keyboard). 

During washing and drying steps, the compartment remains locked. 

After cooling step, an audible beep signals that the compartment unlocks (the ventilation is maintained until the gel holder is removed). 

5. Remove the gel holder from the compartment ; open the clips and remove the dried gel. If needed, clean the backside (the plastic support 

side) of the dry film with a wet tissue paper. The gel is ready for evaluation. 

INTERPRETATION 

The intrathecal synthesis, within the central nervous system (CNS), is indicated by the presence of Ig G bands in the immunofixation pattern of CSF 

that are not in the serum pattern from the same patient (Fig. 16). Very faint bands are always present in serum that may or may not be at the same 

migration level as those observed in the CSF. Such bands should be disregarded for the pattern interpretation. They represent heterogeneity of the 

serum Ig G’s and could be seen only with high resolution and high sensitivity techniques. In theory, a single Ig G band in CSF that is absent in serum 

is indicative yet chancy sign of intrathecal synthesis. In practice, two or more bands are taken as dependable indication of it. Two or more bands also 

serve as supportive evidence of multiple sclerosis although four or more Ig G oligoclonal bands generally present. Therefore, some recommend four 

bands as supportive of MS although this may change as more data is being collected. It should be noted that the number of bands in the oligoclonal 

patterns does not correlate with the severity and prognosis in confirmed MS cases. For these reasons, the number of bands should not be reported 

to avoid misinterpretations of the number. 

- 21 -


To assure correct comparative interpretation, it is imperative to observe the following : 

• The CSF and serum samples must be collected at the same time, from the same patient. Any treatment which might alter the concentration of 

immunoglobulins must be avoided. 

• The concentrations of CSF and serum Ig G must be determined accurately so that after adjustment equal quantities of Ig G in CSF and serum are 

applied to the gel. 

• If the Ig G concentration is unknown, serum should be run at 300 – 400 x dilution and the CSF neat. Then the inequality of Ig G concentrations must 

be considered for its possible adverse effects on the pattern interpretation. 

The detection of intrathecal Ig synthesis by sensitive immunofixation is more specific and more sensitive indicator than the information given by the 

various ratios calculated from the total concentrations of CSF and serum immunoglobulins, albumin and other proteins. 

Confirmation of intrathecal Ig synthesis is important information to suspect inflammatory disease of the CNS. The oligoclonal profile or other indication 

of the intrathecal synthesis of Ig G an be found in different diseases of the central nervous system, such as: 

• 95 % of multiple sclerosis, 

• 100 % of untreated neurosyphilis, 

• 100 % of subacute scleroting leucoencephalitis. 

Uncommonly, the indication of intrathecal synthesis of Ig G can be found in many diseases of the CNS, usually associated with inflammation, such as 

infections, peripheral neuropathies, neoplasms, cerebrovascular accidents, etc. 

The diagnosis must not be based solely on the immunofixation findings. These findings must be considered together with the clinical observations and 

history, and complemented by biochemical, microbiological and cytology testing. 

Interference and Limitations 

See SAMPLES FOR ANALYSIS. 

The use of antiserum other than that designed for the HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING procedures with the dynamic mask may affect the 

results. 

Due to the resolution and sensitivity limits of electrophoresis, it is possible that some oligoclonal components may not be detected with this method. 

Troubleshooting 

Call Technical Service of the supplier when the test fails to perform while the instruction for the preparation and storage of materials, and for the 

procedure were carefully followed. 

Kit reagent Safety Data Sheets and information on waste product elimination are also available from the Technical Service of the supplier. 

PERFORMANCE DATA 

Reproducibility 

Within gel reproducibility 

CSF and serum samples from four patients were each applied in all 18 tracks of HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING gels from two lots (two pairs with 

intrathecal synthesis and two pairs without intrathecal synthesis). 

Gel-to-gel and lot-to-lot reproducibility 

Eight CSF – serum pairs were applied on each of the ten gels HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING from the same lot and on two gels from another lot 

(six pairs with intrathecal synthesis and two pairs without intrathecal synthesis). 

Results: 

Upon visual examination, in all reproducibility studies the presence/absence of oligoclonal banding was correctly detected in each sample and on all 

gels with anti-Ig G – PER antiserum, there were no false positives/negatives and no differences were observed among the repeats. 

Accuracy - Detection and Identification of oligoclonal banding 

CSF and serum samples from patients with various diseases of the central nervous system (n = 108) were analyzed using the standard HYDRAGEL 

9 CSF ISOFOCUSING kit, materials and procedure in parallel with a commercially available immunofixation electrophoresis system intended for the 

detection of Ig G oligoclonal banding. The electrophoregrams were evaluated visually for the presence of Ig G oligoclonal banding. 

There was a general agreement in the detection of oligoclonal banding between the two tests. The few differences observed were due to a greater 

resolution of the HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING procedure. The results were consistent with clinical diagnosis, indication of intrathecal synthesis 

and blood-brain barrier damage. 

Sensitivity 

The sensitivity of the HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING procedure has been determined by serial dilution of a monoclonal Ig G protein, 2 mg/dL. 

The detection limit of a Ig G monoclonal band was determined 0.031 mg/dL 

BIBLIOGRAPHY 












- 22 -














1994, 397 pp. 













1994, 54 : 75-80. 



- 23 -


BESTIMMUNGSGEMÄßER GEBRAUCH 

Die Kits HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING und HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING dienen der qualitativen Detektion und Identifizierung 

"oligoklonaler" Banden innerhalb des elektrophoretischen Musters der Cerebrospinalflüssigkeit (CSF) und zur Bestätigung des Immunglobulin- 

Charakters. Das Verfahren beinhaltet die isoelektrische Fokussierung im Agarosegel, durchgeführt auf dem halbautomatischen System HYDRASYS, 

gefolgt von einer Immunfixation mit Anti-Ig G-Antiserum. Durch den Gebrauch von Enzym markiertem Anti-Ig G Antiserum werden bei einer erhöhten 

Sensitivität nur die "echten“ oligoklonalen Banden detektiert. Die Sensitivität der Methode ermöglicht die Analyse von CSF ohne vorhergehende 

Konzentrierung. Die Ig G-Immunfixationsmuster von CSF und Serum desselben Patienten können auf diese Weise visuell miteinander verglichen 

werden. 

Die HYDRAGEL 3 CSF ISOFUCUSING und HYDRAGEL 9 CSF ISOFUCUSING Kits werden bei Verdacht auf verschiedene Erkrankungen des 

Zentralen Nervensystems (z.B. Multiple Sklerose) empfohlen. Der Nachweis von oligoklonalen Banden und entzündlichen Prozessen (intrathekale 

Synthese von Immunglobulinen) kann bei der Diagnose behilflich sein. 

In-vitro Diagnostikum. 

TESTPRINZIP 

Viele Störungen des zentralen Nervensystems gehen einher mit einer ansteigenden Konzentration der CSF-Proteine; entweder auf Grund 

ansteigender Permeabilität der Blut-Liquor-Schranke oder auf Grund einer Immunglobulinsynthese, hauptsächlich Ig G, innerhalb des zentralen 

Nervensystems. In diesem Fall gehen derartige intrathekale Synthesen von Immunglobulinen häufig mit einer vergrößerten Heterogenität einher, die 

sich in Form oligoklonaler Banden manifestiert, die in der Gammazone der hochauflösenden elektrophoretischen Migrationsmuster beobachtet werden 

können. Andere Banden, die keine Immunglobuline repräsentieren, können ebenfalls im Gammaglobulin-Bereich enthalten sein, weisen jedoch nicht 

die gleiche diagnostische Signifikanz auf. Die Immunfixation ist das Verfahren der Wahl, den Ig-Charakter der oligoklonalen Banden festzustellen, den 

Ig-Gehalt zu identifizieren und die notwendige Testspezifizität zu bieten. Seitdem nur noch dem oligoklonalen Bandenmuster durch Ig G eine 

Signifikanz in der Routine-Diagnostik zugeschrieben wird, benutzt man den Test zur Detektion von oligoklonalen Ig G Banden unter Verwendung eines 

spezifischen Anti-Ig G Antiserums. 

Das Vorhandensein intrathekaler Ig G-Synthese weist auf Entzündungskrankheiten des zentralen Nervensystems hin, beispielsweise verursacht durch 

Multiple Sklerose (MS). Obwohl ein oligoklonales Bandenmuster weder diagnostisch noch spezifisch für MS ist, wird es weit verbreitet als 

unterstützende Information eingesetzt und wurde 1994 vom „Committee of the European Concerted Action for Multiple Sclerosis” als essenzieller Test 

bezeichnet. Es ist bestätigend bei Patienten mit klinischen MS-Episoden und suggestiv bei Patienten mit nur wenigen Episoden oder unzureichenden 

klinischen Symptomen. 

Das Komitee hat unter anderem die folgenden Kriterien zum Nachweis von oligoklonalen Ig G Banden vorgeschlagen: 

1. die empfindlichste Methode zur Trennung von oligoklonalen Immunglobulinen ist die isoelektrische Fokussierung, 

2. der Nachweis der oligoklonalen Ig G Banden sollte vorzugsweise durch ein spezifisches Antiserum erfolgen, 

3. um eine intrathekale Ig G Synthese zu bestätigen, müssen parallele Untersuchung von Serum und CSF erfolgen, 

4. die Ig G-Konzentration von Serum und CSF sollten identisch sein, 

5. die Konzentrierung von CSF sollte vermieden werden. 

Der HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING Test erfüllt alle Kriterien. 

Der Test wird in zwei Schritten durchgeführt: 

- Isoelektrische Fokussierung im Agarosegel zur Fraktionierung der Proteine in den CSF- und Serumproben. 

- Immunfixation mit Enzym-markiertem Anti-Ig G-Antiserum (Peroxidase) zur Detektion von oligoklonalen Ig G Banden, und damit zur Demonstration 

eines Unterschiedes bzw. dem Fehlen eines solchen in der Verteilung von Ig G in CSF und Serum. 

Eine Standard-Immunfixation unter Verwendung nicht markierter Antiseren benötigt eine Ig G-Konzentration von ca. 500 mg/l. Da die Ig G- 

Konzentration im CSF normalerweise zwischen 10 und 50 mg/l liegt, sind 2 bis 3 ml CSF erforderlich, um eine ausreichende Konzentration zu erhalten. 

Verglichen mit der Standard-Immunfixation, wird bei den Kits HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING, die mit Enzym markierten Antikörpern arbeiten, 

eine Steigerung der Sensitivität bei der Detektion um ca. das 100-fache beobachtet. Mit einer IgG-Konzentration von nur 10 mg/l oder etwas darüber, 

kann das Ig G detektiert und seine Verteilung festgestellt werden, ohne die CSF-Probe konzentrieren zu müssen. 

Das halbautomatische System HYDRASYS führt alle notwendigen Schritte durch, um die Gele zur Interpretation aufzubereiten. 

Jedes Agarosegel des HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING enthält 6 Spuren und ist für drei Serum-/CSF-paare ausgelegt. 

Jedes Agarosegel des HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING enthält 18 Spuren und ist für neun Serum-/CSF-paare ausgelegt. 

IN DEN KITS HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING UND HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING ENTHALTENE REAGENZIEN UND MATERIALIEN 

BEZEICHNUNG BESTELL-NR. 4353 BESTELL-NR. 4355 Agarosegele (gebrauchsfertig) 10 Gele 10 Gele Ethylenglykol (gebrauchsfertig) 1 Fläschchen, 3 mL 1 Fläschchen, 3 mL Anodische Lösung (gebrauchsfertig) 1 Fläschchen, 50 ml 1 Fläschchen, 50 ml Kathodische Lösung (gebrauchsfertig) 1 Fläschchen, 50 ml 1 Fläschchen, 50 ml Pufferstreifen 10 Packungen a 2 10 Packungen a 2 CSF-Probenverdünnungsmittel (gebrauchsfertig) 1 Fläschchen, 85 ml 1 Fläschchen, 85 ml CSF ISOFOCUSING-Antiserumverdünnungsmittel (gebrauchsfertig) 1 Fläschchen, 3,75 ml 1 Fläschchen, 3,75 ml CSF-Rehydrierlösung (gebrauchsfertig) 2 Fläschchen, 70 ml 2 Fläschchen, 70 ml TTF3-Lösungsmittel (gebrauchsfertig) 2 Fläschchen, 20 ml 2 Fläschchen, 20 ml TTF3 (konzentrierte Lösung) 2 Fläschchen, 0,5 ml 2 Fläschchen, 0,5 ml Applikatoren (gebrauchsfertig) 1 Packung a 10 (6 Zähne) 1 Packung a 10 (18 Zähne) Pufferbehälter (gebrauchsfertig) 1 Packung a 2 1 Packung a 2 Antisera-Segmente (gebrauchsfertig) 1 Packung a 10 1 Packung a 10 Filterpapier, dünn 1 Pakete a 10 1 Pakete a 10 Filterpapier, dick 3 Pakete a 10 3 Pakete a 10 

| Kunststofffolie | 1 Packung a 10 | 1 Packung a 10 | 

- 24 - 

SEBIA ARBEITSANLEITUNG - Deutsch


FÜR OPTIMALE ERGEBNISSE 

Grundsätzlich müssen Reagenzien desselben Kits zusammen verwendet werden und sind gemäß der Packungsbeilage zu behandeln. 

BITTE LESEN SIE DIE PACKUNGSBEILAGE AUFMERKSAM. 

1. AGAROSEGELE 

Vorbereitung 

Agarosegele sind gebrauchsfertig. Jedes Gel enthält folgende Bestandteile: Agarose, 10 g/l ; Ampholyte ; Additiva zur Optimierung der Leistung, 

unschädlich in den verwendeten Konzentrationen. 

Gebrauch 

Hilfsmedium für die isoelektrische Fokussierung und die Immunfixation von Proteinen. 

Lagerung, Stabilität und Anzeichen von Verfall 

Lagern Sie die Gele waagerecht in der Originalverpackung im Kühlschrank bei 2 bis 8 °C. Sie sind bis zum auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum 

der Kit- und Gelverpackung stabil. (Der Pfeil auf der Vorderseite der Kitverpackung muss nach oben zeigen.) 

Vermeiden Sie die Lagerung in Fensternähe und in der Nähe einer Wärmequelle. Vermeiden Sie starke Temperaturschwankungen am Lagerort. 

NICHT EINFRIEREN. 

Entsorgen Sie die Gele, wenn: 

(i) sich Kristalle oder Niederschläge auf der Oberfläche des Gels gebildet haben oder das Gel sehr weich ist (deutet darauf hin, dass das Gel gefroren 

war), 

(ii) Bakterien oder Schimmel erkennbar sind, 

(iii) sich abnormal viel Flüssigkeit in der Gel-Box gebildet hat (tritt in Folge falscher Lagerung auf, wenn sich Puffer vom Gel abgesondert hat). 

2. ETHYLENGLYKOL LÖSUNG 

Vorbereitung 

Ethylenglykol ist gebrauchsfertig. 

Warnung: Gesundheitsschädlich beim Verschlucken. 

Gebrauch 

Zum Sicherstellen eines effektiven Kontakts zwischen der Plastikfolie des Gels und der Peltier-Platte des Migrationsmoduls während der 

Elektrophorese. 


Lagern Sie das Ethylenglykol bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank. Es ist bis zum auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum der Kitverpackung 

oder dem Ethylenglykol Fläschchen haltbar. 

3. ANODISCHE UND KATHODISCHE LÖSUNGEN 

Vorbereitung 

Die anodische (sauer) und die kathodische (basisch) Lösung sind gebrauchsfertig. Beide Lösungen enthalten Additiva (unschädlich in den 

verwendeten Konzentrationen), die für eine optimale Leistung nötig sind. 

HINWEIS: Zur leichteren Identifizierung des anodischen Pufferstreifens und als Hilfe bei der Überwachung der Applikation ist die anodische Lösung 

rot gefärbt. 

WARNUNG: Die kathodische Lösung enthält Natriumhydroxid. Reizend für Augen und Haut. Bei Kontakt mit den Augen, sofort mit viel 

Wasser ausspülen und medizinische Hilfe anfordern. 

Gebrauch 

Zur Pufferung der anodischen und kathodischen Pufferstreifen für die isoelektrische Fokussierung. 

WICHTIG : Nach jedem Gebrauch das Gefäß mit der kathodischen Lösung sofort fest verschließen, um die Bildung von Karbonat zu verhindern. 


Die anodische und die kathodische Lösung können bei Zimmertemperatur oder im Kühlschrank aufbewahrt werden; sie sind bis zum auf dem Etikett 

angegebenen Verfallsdatum auf der Kit- und Gefäßverpackung stabil. Die Lösungen müssen frei von Niederschlägen sein. 

4. PUFFERSTREIFEN 

Vorbereitung 

Tränken Sie 5 Minuten vor Gebrauch zwei saugfähige Pufferstreifen mit anodischer bzw. kathodischer Lösung. 

Stellen Sie den grauen Behälter für den anodischen Pufferstreifen und den blauen Behälter für den kathodischen Pufferstreifen auf eine flache 

Oberfläche. 

Geben Sie 5 ml der roten anodischen Lösung in den grauen Behälter und 5 ml der ungefärbten kathodischen Lösung in den blauen Behälter. 

Öffnen Sie die Packung mit den ungepufferten Schwämmen, fassen Sie die Pufferstreifen am Plastikende an und setzen Sie sie in die jeweiligen 

Behälter. 

Drücken Sie die Pufferstreifen mit der der jeweiligen Pipettenspitze einige Male zusammen, damit sie gleichmäßig getränkt sind. 

Verwenden Sie die getränkten Streifen ohne Zeitverzögerung. 

WICHTIG: Tränken Sie die Streifen erst kurz vor ihrer Verwendung, damit jede Karbonatbildung in der kathodischen Flüssigkeit vermieden wird. 

Gebrauch 

Die mit anodischer bzw. kathodischer Lösung getränkten Pufferstreifen sorgen für den Kontakt zwischen dem Gel und den Elektroden und bestimmen 

den pH-Bereich während der Fokussierung. 


Feuchte, aber nicht mit Elektrolyten voll gesogene Schwämme können bei Zimmertemperatur oder im Kühlschrank aufbewahrt werden. Sie müssen 

waagerecht in der Originalverpackung gelagert werden (der Pfeil auf der Verpackungsschachtel muss nach oben zeigen). Sie sind bis zum auf dem 

Etikett angegebenen Verfallsdatum auf der Kit- oder Pufferstreifenverpackung stabil. 

NICHT EINFRIEREN. 

Entsorgen Sie die Streifen, wenn die Verpackung geöffnet ist und die Streifen ausgetrocknet sind. 

- 25 -

5. CSF-PROBENVERDÜNNUNGSMITTEL 


Vorbereitung 

Probenverdünnungsmittel ist gebrauchsfertig. Die Lösung enthält: Kochsalz unter Zusatz von Serumalbumin vom Rind, Natriumazid und Additiva zur 

Optimierung der Leistung, in den verwendeten Konzentrationen ungefährlich. 

Gebrauch 

Zur Verdünnung von Liquor- und Serumproben. 


Probenverdünnungsmittel bei 2 bis 8 °C gekühlt lagern. Die Stabilität ist bis zum Verfallsdatum, das auf der Verpackung oder auf dem Etikett des 

Fläschchens angegeben ist, garantiert. Verdünnungsmittel darf kein Präzipitat aufweisen. 

6. CSF ISOFOCUSING-ANTISERUM-VERDÜNNUNGSMITTEL 

Vorbereitung 

Antiserum-Verdünnungsmittel ist gebrauchsfertig. Die Lösung enthält: Additiva zur Optimierung der Leistung, in den verwendeten Konzentrationen 

ungefährlich. 

Gebrauch 

Zur Verdünnung von Antiseren unmittelbar vor der Anwendung. 


Das Antiserum-Verdünnungsmittel kann bei Zimmertemperatur oder im Kühlschrank gelagert werden. Die Stabilität ist bis zum Verfallsdatum, das auf 

der Verpackung oder dem Fläschchenetikett angegeben ist, garantiert. Antiserum-Verdünnungsmittel darf kein Präzipitat aufweisen. 

HINWEIS: Während der Lagerung kann es zu einer Gelbfärbung des Antiserum-Verdünnungsmittels kommen; dies hat keine Auswirkungen auf seine 

Eigenschaften. 

7. CSF-REHYDRIERLÖSUNG 

Vorbereitung 

Die Rehydrierlösung ist gebrauchsfertig. Sie enthält eine wässrige Lösung, pH 6,0, und Additiva zur Optimierung der Leistung, in den verwendeten 

Konzentrationen ungefährlich. 

Gebrauch 

Zur Rehydrierung von Agarosegelen vor der Färbung. 


Rehydrierlösung bei Zimmertemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren; Die Stabilität ist bis zum Verfallsdatum, das auf der Verpackung oder auf 

dem Fläschchenetikett angegeben ist, garantiert. Die Rehydrierlösung darf kein Präzipitat aufweisen. 

8. TTF3-LÖSUNGSMITTEL 

Vorbereitung 

Das Lösungsmittel TTF3 ist gebrauchsfertig. Es enthält Additiva zur Optimierung der Leistung, in den verwendeten Konzentrationen ungefährlich. 

Gebrauch 

Zur Herstellung der Färbelösung TTF3, siehe Punkt 9. 


Die TTF3-Lösung kann bei Zimmertemperatur oder im Kühlschrank aufbewahrt werden; sie ist bis zum angegebenen Verfallsdatum auf der Kit- 

Packung und dem Fläschchenetikett des Lösungsmittels stabil. Die TTF3-Lösung darf kein Präzipitat enthalten. 

9. TTF3 

Vorbereitung 

Gebrauchsfertige Färbelösung erst kurz vor der Verwendung ansetzen. Die folgenden Reagenzien in dieser Reihenfolge zugeben: 4 ml TTF3- 

Lösungsmittel; 100 µl TTF3 und 4 µl Wasserstoff-Peroxyd (H 2 

O 2 

) 30 %. 

WARNHINWEIS: TTF3 enthält Dimethylformamid. Gesundheitsschädlich beim Einatmen ! Bei unzureichender Belüftung Atemschutz tragen! 

Nicht einnehmen! Nach versehentlicher Einnahme unverzüglich einen Arzt aufsuchen! Schädlich bei Hautkontakt. Geeignete 

Schutzkleidung tragen. Reizt die Augen. Nach Kontakt mit Augen oder Haut, sofort mit viel Wasser spülen und medizinische Hilfe anfordern. 

Die oben beschriebenen Gefahrensituationen vermeiden; vor der Benutzung die speziellen Anweisungen beachten! Kann Krebs erzeugen! 

Bei Unwohlsein umgehend medizinische Hilfe anfordern (wenn möglich, das Etikett vorzeigen)! 

Gebrauch 

Zur Färbung immunfixierter Immunglobuline. 

Anwendung 

Zur Färbung immunfixierter Immunglobuline, separiert durch Isofokussierung. 


TTF3 bei Zimmertemperatur oder im Kühlschrank lagern. Die Stabilität ist bis zum Verfallsdatum, angegeben auf der Verpackung oder dem 

Fläschchenetikett, garantiert. TTF3 darf kein Präzipitat enthalten. 

10. APPLIKATOREN 

Gebrauch 

Einmal-Applikatoren mit Schutzrahmen zum Auftragen von Probe auf das Gel. 

Lagerung 

Applikatoren, vor Feuchtigkeit geschützt, bei Zimmertemperatur oder im Kühlschrank lagern. 

- 26 -

11. PUFFERBEHÄLTER 


Anwendung 

Wieder verwendbare, farbige Behälter zum Tränken der anodischen und kathodischen Pufferstreifen. 

Der graue Behälter ist für die anodischen Pufferstreifen bestimmt, der blaue Behälter für die kathodischen Pufferstreifen. 

Die beiden Behälter nach jedem Gebrauch mit deionisiertem oder destilliertem Wasser auswaschen und anschließend trocknen. 


Lagern Sie die sauberen Behälter bei Zimmertemperatur. 

12. ANTISERA-SEGMENTE 

Gebrauch 

Farbige Einmalsegmente zum Auftragen von Antiseren auf das Gel für die Immunfixation. 

WARNHINWEIS: Segmente mit Antiseren vorsichtig handhaben. 

13. FILTERPAPIER - DÜNN 

Gebrauch 

Dünnes Filterpapier zum Einmalgebrauch für das Abblotten (Aufnehmen) überschüssiger Feuchtigkeit von der Gel-Oberfläche vor dem Probenauftrag. 

Lagerung 

dünnes Filterpapier vor Feuchtigkeit geschützt bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. 

14. FILTERPAPIER - DICK 

Gebrauch 

Dickes Filterpapier zum Einmalgebrauch für das Abblotten (Aufnehmen) nicht-ausgefällter Proteine von der Gel-Oberfläche nach der Immunfixation 

und der Rehydrierung. 

Lagerung 

dickes Filterpapier vor Feuchtigkeit geschützt bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. 

15. KUNSTSTOFFFOLIE 

Gebrauch 

Kunststofffolie zum Einmalgebrauch, um das Gel während der elektrophoretischen Migration zu schützen. 

ERFORDERLICHE GERÄTE UND ZUBEHÖR (NICHT IM LIEFERUMFANG ENTHALTEN) 

1. HYDRASYS SEBIA, PN 1210 oder PN 1211 mit OPTION FOCUSING HYDRASYS SEBIA, PN 1235. 

oder 

2. HYDRASYS FOCUSING SEBIA, PN 1212. 

3. Mikropipette, manuell oder automatisch (z.B. HYDRAPLUS SEBIA, PN 1216 oder HYDRAPLUS 2 SEBIA, PN 1217), zur Beladung der 

Probenapplikatoren und Antisera-Segmente. 

4. Feuchte Kammer, Bestell-Nr. 1270, im Lieferumfang des HYDRASYS Systems enthalten. 

5. Reduzierelement für Dynamische Maske, mit HYDRASYS. 

6. Dynamische Maske, SEBIA, PN 1255. 

7. Zubehör-Kit für HYDRASYS ISOFOCUSING SEBIA, PN 1258. 

8. Behälter-Kit, zusammen mit HYDRASYS. 

9. Pipetten: 2 µl, 20 µl, 100 µl, 200 µl und 5 ml. 

BENÖTIGTE REAGENZIEN (NICHT IM LIEFERUMFANG ENTHALTEN) 


Das Antiserumgefäß (SEBIA PN 4743: 1 Gefäß, 0,60 ml) enthält eine konzentrierte Lösung von aus Säugetieren gewonnenem Anti-Human- 

Immunoglobulin-Serum mit einer Spezifizität für Ig G, konjugiert zu Peroxidase. Zur einfachen Identifizierung und Beobachtung sind die 

Immunglobuline mit einem ungefährlichen Farbstoff angefärbt; die Farbe des Gefäßetiketts entspricht dieser Färbung. 

Bereiten Sie die gebrauchsfertige Lösung erst kurz vor der Verwendung vor; mischen Sie wie folgt: 

Für HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING : 25 µl Anti-Ig G - PER und 175 µl Antiserum-Diluent. 

Für HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING : 40 µl Anti-Ig G - PER und 300 µl Antiserum-Diluent. 

Gut durchmischen. 

Anwendung 

Zur Immunfixation und Visualisierung von isoelektrofokussierten Proteinen. 


Antiserum gekühlt lagern (bei 2 bis 8 °C). Die Stabilität ist bis zum Verfallsdatum, angegeben auf dem Etikett des Antiserumgefäßes, garantiert. 

Entsorgen Sie das Antiserum, sobald sie eine Änderung im Erscheinungsbild feststellen; z.B. Ausflockungen auf Grund von mikrobieller 

Verunreinigung. 

HINWEIS: Antiseren können von verschiedenen Tierarten stammen. Mischen Sie nie den Inhalt zweier Antiserenfläschchen, auch nicht bei gleicher 

Spezifizität. Tauschen Sie die Pipettenspitzen bei Anbruch eines neuen Antiserumfläschchens IMMER aus. 

Während des Transports können Antiseren ohne Qualitätseinbußen 15 Tage lang ohne Kühlung (bei 15 bis 30 °C) gelagert werden. 

2. HYDROGEN-PEROXYD: H 2 

O 2 

, 30 % (Vol.). 

- 27 -


3. ENTFÄRBELÖSUNG 

Vorbereitung 

Gefäße mit konzentrierter Entfärbelösung (SEBIA, PN 4540, 10 Gefäße, jedes mit 100 ml), zur Verdünnung auf maximal 100 Liter mit destilliertem 

oder entionisiertem Wasser. Praktischerweise verdünnt man 5 ml Konzentrat auf 5 Liter, dem Volumen des Behälters für die Entfärbelösung. Nach der 

Verdünnung enthält die dann gebrauchsfertige Lösung: Zitronensäure, 500 mg/l. 

Anwendung 

Zum Waschen des Gels nach der enzymatischen Färbung und Trocknung, sowie zum Spülen der HYDRASYS-Färbekammer. 

Um die Säure in der Entfärbelösung zwecks Entsorgung zu neutralisieren, geben Sie 15 ml einer 50%-igen Natriumhydroxid-Lösung in den leeren 

Abfallbehälter. 


Lagern Sie die konzentrierte Entfärbelösung bei Zimmertemperatur oder im Kühlschrank. Die Stabilität des Konzentrats ist bis zum Verfallsdatum, 

angegeben auf der Verpackung oder dem Etikett auf dem Gefäß, gewährleistet. 

Die gebrauchsfertige Entfärbelösung kann eine Woche lang in einem verschlossenen Gefäß bei Zimmertemperatur aufbewahrt werden. Geben Sie 

kein Natriumazid zu. 

Entsorgen Sie die gebrauchsfertige Lösung, wenn sich das Aussehen verändert; z.B. Trübung auf Grund mikrobieller Kontaminierung. 

Zur Vermeidung mikrobieller Entwicklung in der verdünnten Entfärbelösung bei einer Kühlschrank-Lagerung von länger als einer Woche geben Sie 

50 µl/l ProClin 300 zu. 

Die mit ProClin versetzte, gebrauchsfertige Entfärbelösung ist in der verschlossenen Flasche bei Zimmertemperatur oder gekühlt bis zum 

Verfallsdatum stabil, das auf der Verpackung oder auf den Gefäßetiketten angegeben ist. 

4. HYDRASYS WASCHLÖSUNG 

Vorbereitung 

Gefäße mit konzentrierter HYDRASYS-Waschlösung (SEBIA, PN 4541, 10 Gefäße, jedes mit 80 ml), zur Verdünnung auf maximal 5 Liter mit 

destilliertem oder entionisiertem Wasser. Nach der Verdünnung enthält die dann gebrauchsfertige Lösung: alkalischen Puffer pH 8,8 ± 0,3 ; 

Natriumazid. 

WARNUNG: Die konzentrierte Waschlösung enthält 0,625 % Natriumazid. Nicht einnehmen ! Nach versehentlicher Einnahme unverzüglich 

einen Arzt aufsuchen ! Natriumazid kann in Verbindung mit Säure, Blei oder Kupfer zu explosiven oder giftigen Verbindungen führen. Beim 

Entsorgen mit viel Wasser nachspülen. 

Anwendung 

Die HYDRASYS-Waschlösung dient der Reinigung der HYDRASYS-Färbekammer. Nach Bedarf anwenden, z.B., bei täglichem Gebrauch des 

Gerätes, wöchentlich. 

Packungsbeilage für Benutzungsanweisungen beachten. 


Lagern Sie die konzentrierte sowie die gebrauchsfertige Lösung in geschlossenen Gefäßen bei Zimmertemperatur oder im Kühlschrank. Die Stabilität 

des Konzentrats ist bis zum Verfallsdatum, angegeben auf dem Etikett des Gefäßes, gewährleistet. 

Entsorgen Sie die gebrauchsfertige Lösung, wenn sich das Aussehen verändert; z.B. Trübung auf Grund mikrobieller Kontaminierung. 

PROBEN FÜR DIE ANALYSE 

Probennahme und Lagerung 

Serum und CSF müssen dem Patienten zur gleichen Zeit entnommen werden, entsprechend den herkömmlichen Verfahren, wie sie in klinischen 

Laboren üblich sind. Für die Analyse werden frisches Serum und CSF empfohlen. Proben können maximal eine Woche im Kühlschrank (2 bis 8 °C) 

aufbewahrt werden. Um sie länger zu lagern, frieren Sie die Proben ein. Gefrorenes Serum und CSF sind mindestens einen Monat lang haltbar. 

Probenvorbereitung 

• Messen Sie die Ig G-Konzentrationen von CSF und Serum mit Hilfe der entsprechenden Verfahren. 

• Die Konzentration von Ig G in den zugehörigen CSF- und Serumproben muss immer auf demselben Level justiert sein. 

Die Justage hängt von der originalen Ig-Konzentration des CSF ab; verwenden Sie Proben-Diluent für alle Verdünnungen: 

Fall 1: die Konzentration von Ig G liegt über 20 mg/l. 

Verdünnen Sie CSF und Serum mit dem Proben-Diluent, um die Ig G-Konzentration auf 20 mg/l zu verringern. 

Fall 2: die CSF-Konzentration von Ig G liegt zwischen 10 und 20 mg/l. 

Verwenden Sie unverdünntes CSF. Verdünnen Sie das Serum, um dieselbe Ig G-Konzentration wie in der CSF-Probe zu erhalten. 

Fall 3: Die CSF-Konzentration von Ig G liegt unter 10 mg/l. 

Konzentrieren Sie das CSF mit einer entsprechenden Methode, um eine Ig G-Konzentration zwischen 10 und 20 mg/l zu erhalten. Verdünnen Sie das 

Serum auf dieselbe Ig G-Konzentration wie in der CSF-Probe. 

Verdünnungsbeispiele (nur für Proben mit Ig G-Konzentrationen über 20 mg/l) : 

Für CSF : 

A = Ig G-Konzentration in mg/l. 

Mischen Sie 20 µl CSF mit (A - 20) µL Proben-Diluent gut durch. 

Für Serum : 

B = Ig G-Konzentration in mg/l. 

- Verdünnen Sie das Serum 10-fach mit Proben-Diluent, z.B. 10 µl Serum und 90 µl Proben-Diluent. 

- Nehmen Sie 2 µl verdünntes Serum und geben Sie (B/100) - 2 µl Proben-Diluent hinzu. 

Bei unbekannter Ig G-Konzentration 

Verwenden Sie unverdünntes CSF und verdünnen Sie das Serum 300 – 400 Fach. 

HINWEIS: Ein Fehler beim Einstellen gleicher Ig G Quantitäten in CSF und Serum kann die Interpretation negativ beeiflußen – siehe auch 

"Interpretation“. 

- 28 -


VERFAHREN 

Das System HYDRASYS ist ein halbautomatischer Elektrophorese Prozessor. Die Bearbeitung der HYDRAGEL Agarosegele erfolgt in der 

Reihenfolge: Vormigration, Probenapplikation, Migration mittels isoelektrischer Fokussierung, Inkubation mit enzymmarkiertem Antiserum, Inkubation 

mit Enzym-Substrat, Unterbrechen der enzymatischen Reaktion, Aufnehmen überschüssiger Flüssigkeit und abschließendes Trocknen des Gels. Die 

manuellen Arbeitsschritte beinhalten die Handhabung von Proben und Gelen, die Applikation der Reagenzien und das Setup des Gerätes zur 

Bearbeitung. 

LESEN SIE DAS BEDIENUNGSHANDBUCH FÜR HYDRASYS AUFMERKSAM. 

WICHTIG: Achten Sie darauf, daß die Justage der Dynamische Maske mit der Ausrichtung der Gele übereinstimmt. 

I. SET-UP DER MIGRATION 

1. HYDRASYS einschalten. 

2. Drücken Sie den Hochspannungsschalter, um die zur Isoelektrofokussierung notwendige Hochspannung zu erhalten, der Schalter verändert 

beim Umschalten seine Farbe von grün nach rot. 

HINWEIS: Das Display der Hochvolt Schalter zeigt während der Migration die Voltstunden (Vh) und die Stromstärke (mA) an. Wird der 

Schalter während der Migration gedrückt, wechselt die Anzeige zu Spannung (V) und Leistung (W). 

Im Betrieb mit dem Hochvolt Netzteil, zeigt das HYDRASYS Display die Stromstärke (mA) korrekt an, alle anderen Werte werden nur zu 1/10 

ihres Wertes angezeigt. 

3. Legen Sie einen Applikator mit 6 Zähnen für HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING oder einen Applikator mit 18 Zähnen für HYDRAGEL 9 CSF 

ISOFOCUSING auf eine flache Oberfläche; die Nummern der Vertiefungen müssen nach oben zeigen. 

4. Pipettieren Sie 10 µl Probe in jede Vertiefung des Applikators (Abbildung 1). Den Applikator innerhalb von 2 Minuten beladen. 

Das folgende Beispiel zeigt eine Analyse von drei CSF–/Serumpaaren auf einem HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING-Gel und neun 

CSF–/Serumpaaren auf einem HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING-Gel mit dem Antiserum Anti-Ig G – PER. 



VERTIEFUNG Nr. VERTIEFUNG Nr. PATIENT Nr. (Applikator 6 Zähne) | (Applikator 18 Zähne) | 

1 1 2 1 2 2 3 4 3 4 3 5 6 5 6 4 - - 7 8 5 - - 9 10 6 - - 11 12 7 - - 13 14 8 - - 15 16 | 9 | - | - | 17 | 18 | 

- Den Applikator am Schutzrahmen für die Zähne anfassen und mit den Zähnen nach oben in die feuchte Kammer legen. 

Detaillierte Informationen hierzu finden sich in der Packungsbeilage zur feuchten Kammer. 

5. Abdeckung des Migrationsmoduls öffnen und den Elektroden-/Applikator-Halter nach oben klappen. 

WARNHINWEIS: Niemals die Abdeckung schließen, wenn die Elektroden-/Applikator-Halter hoch gestellt sind! 

6. Im Gerätemenü (links von der Tastatur) das Migrations-Programm "3/9 CSF FOCUSING" wählen. 

7. Pufferstreifen an den Kunststoffenden aus der Verpackung nehmen und in den beiden Schalen mit je 5 ml der Elektrodenpuffer tränken. Die 

Pufferstreifen an den Kunststoffenden aus den Schalen nehmen. 

8. Die Pufferstreifen mit den Kunststoffenden an die Stifte des Elektroden-Halters hängen; die Plastikfolie muß zum Halter zeigen (Abbildung 2). 

Den Pufferstreifen mit dem roten Anodenpuffer auf die untere Elektrode (Anode) hängen, den Pufferstreifen mit dem farblosen Kathodenpuffer 

auf die obere Elektrode (Kathode) hängen. 

9. Das HYDRAGEL Agarosegel aus der Verpackung nehmen. 

10. Das Gel mit der Kunststoffunterseite vorsichtig auf ein Papiertuch legen um überschüssige Feuchtigkeit zu entfernen. 

11. Ein dünnes Filterpapier vorsichtig und gleichmäßig auf die Gel-Oberfläche legen, um überschüssige Flüssigkeit für ca. 3 sek aufzusaugen. 

Das Filterpapier dann wieder entfernen. 

12. 150 µl Ethylenglycoll für HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING oder 300 µL für HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING in einer Linie auf das untere 

Drittel der Migrationsplatte pipettieren. 

13. Das Gel (mit der Gel-Seite nach oben) an die untere Kante des aufgedruckten Rahmens anlegen. Das Gel biegen und auf dem Ethylenglycoll 

abrollen. Darauf achten, daß keine Luftblasen eingeschlossen werden, daß das Ethylenglycoll unter dem gesamten Gel verteilt ist und das 

Gel innerhalb der Markierung auf dem bedruckten Rahmen aufliegt. 

14. Legen Sie eine Kunststoffolie auf das Gel, plazieren Sie die Folie zwischen den beiden Markierungen des Gels (1,5 cm von der unteren Kante, 

sieh. Fig. 4) und rollen Sie die Folie vorsichtig über das Gel ab. Vermeiden sie Luftblasen zwischen der Folie und dem Gel. Sollten sich 

Luftblasen zwischen Folie und Gel befinden, heben Sie die Folie auf einer Seite an und rollen Sie erneut über das Gel ab. 

15. Beide Halter nach unten klappen. In dieser Position berühren die Pufferstreifen das Gel nicht. DIE HALTER AUF KEINEN FALL MIT GEWALT 

BIS GANZ NACH UNTEN DRÜCKEN. 

16. Schließen Sie den Deckel der Migrationseinheit. 

17. Starten Sie die Vormigration direkt mit dem grünen "START“ Knopf. 

WICHTIG: Darauf achten, daß die Lüftungsschlitze, rechts am Gerät, nicht blockiert sind. 

- 29 -


VORMIGRATION – BESCHREIBUNG DES AUTOMATISCHEN ABLAUFS 

• Der Elektrodenhalter werden abgesenkt, so daß die Pufferstreifen und der Applikator die Oberfläche des Gels berühren. 

• Die Vormigration erfolgt bei 20 °C bis 75 Vh erreicht sind; die Spannung steigt während dabei bis zu 1000 V an. 

• Der Elektrodenhalter wird angehoben und unterbricht dabei den Kontakt der Elektroden. 

• Ein Akustiksignal ertönt und die Abdeckung kann wieder geöffnet werden. Das Signal ertönt so lange, bis der Bediener eingreift. Auf dem Bildschirm 

erscheint folgende Meldung: "POS : 1"; dies signalisiert, daß der Applikator auf Position 1 eingehangen werden kann. 

HINWEIS: Die Abdeckung der Migrationeinheit bleibt während der Migration verschlossen. 

18. Öffnen sie den Deckel der Migrationseinheit. 

19. Entnehmen sie denApplikator aus der feuchten Kammer, entfernen Sie den Schutzbügle des Applikators und hängen Sie den Applikator auf 

Position 1 des Applikatorhalters ein. 

WICHTIG: Die auf dem Applikator aufgeprägten Nummern müssen zum Bediener zeigen. 

20. Schließen Sie den Deckel der Migrationseinheit. 

21. Starten Sie die Migration direkt mit dem grünen "START“ Knopf. 

MIGRATION – BESCHREIBUNG DES AUTOMATISCHEN ABLAUFS 

• Die beiden Halter werden abgesenkt, so daß die Pufferstreifen und der Applikator die Oberfläche des Gels berühren. 

• Der Applikatorhalter wird angehoben. 

• Die Migration erfolgt bei ca. 1000 V, bis 700 Vh erreicht sind; die Temperatur während der Migration wird durch ein Peltier-Element reguliert 

• Der Elektrodenhalter wird angehoben und unterbricht dabei den Kontakt der Elektroden. 

• Ein Akustiksignal ertönt und die Abdeckung kann wieder geöffnet werden. Das Signal ertönt so lange, bis der Bediener eingreift. Auf dem Bildschirm 

blinkt folgende Meldung: " AS "; dies signalisiert, dass Antiserum aufgetragen werden kann. 

HINWEIS: Die Abdeckung des Migrationsmoduls bleibt während der Migration verschlossen. 

II. SET-UP DER IMMUNFIXATION 

Die dynamische Maske enthält ein Antisera-Segment, einen Segment-Halter, eine Führung für die Maske und ein Reduzierelement (Abbildung 6). 

Während der Migration die dynamische Maske wie folgt zusammensetzen: 

1. Die Führung der dynamischen Maske auf eine ebene Fläche legen. 

2. Das Reduzierelement auf die Führung der dynamischen Maske legen. 

3. Ein Antisera-Segment auf den Segmenthalter stecken (Abbildung 7). 

- Das Antiseren-Segment in einem Winkel von 45° ausrichten und an den Plastikfedern des Segmenthalters positionieren. 

- Die beiden Elemente auseinander ziehen und das Segment drehen, um es in der Einkerbung des Segmenthalters zu fixieren. 

WARNHINWEIS: Darauf achten, dass das Segment korrekt im Halter steckt; die Stifte an den Segmentenden müssen in den 

Einkerbungen des Halters eingerastet sein. 

4. Den Halter mit dem Segment auf die dynamische Maske mit dem Reduzierelement setzen (Abbildung 8). 

Geben Sie die Reagenzien wie folgt auftragen: 

Für HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING, geben Sie 20 µl/Vertiefung des Antiserums Anti-Ig G - PER in die Vertiefungen 4 bis 12. 

Für HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING, geben Sie 20 µl/Vertiefung des Antiserums Anti-Ig G - PER in alle Vertiefungen. 

Vermeiden Sie beim Aufnehmen der Reagenzien Luftblasen in der Pipettenspitze. 

5. Geben Sie die Reagenzien hinzu (Abbildung 9). 

- Die Pipette schräg halten und die Spitze ganz leicht seitlich an der Vertiefung halten, ohne den Boden zu berühren. 

- Das Reagenz in die Vertiefung injizieren. 

III. IMMUNFIXATION 

1. Nach der Migration die Abdeckung öffnen (die Meldung hört auf zu blinken). 

2. Den Applikator herausnehmen und entsorgen. 

3. Beide Halter anheben, die Pufferstreifen an den Plastikenden herausnehmen und entsorgen. 

4. Beide Halter entfernen. 

5. Die Elektroden vorsichtig mit einem weichen, feuchten Papiertuch abwischen. 

6. Die Kunststofffolie von der Geloberseite entfernen. Das Gel verbleibt im Migrationsmodul. 

WICHTIG: Die Lage des Gels auf der Migrationsplatte darf nicht verändert werden. 

7. Um das Reagenz aufzutragen, die dynamische Maske wie folgt aufsetzen (Abbildung 10): 

- Maskenführung auf die Metallstange setzen (die Metallstange kann ständig im Migrationsmodul verbleiben). 

- Die dynamische Maske am Griff halten und in die Führung einsetzen; die Einkerbungen müssen sich an den Markierungen befinden. 

- Die dynamische Maske auf die Platte des HYDRASYS absenken. 

- Den Segmenthalter an den tiefsten Punkt der Maskenführung platzieren, mit Ausrichtung zum Bediener. 

- Den Segmenthalter an seinem Griff (rechts) halten und auf den zentralen Druckpunkt drücken, bis das Antiseren-Segment das Gel berührt 

und das Antiserum in Kontakt mit dem Gel kommt. Beim Lösen des Drucks verteilt sich das Antiserum unter dem Antiseren-Segment 

(Abbildung 11). 

- Sofort den Segmenthalter am rechten Griff langsam und stetig zweimal auf und ab bewegen, um das Antiserum aufzutragen. Der Antiseren 

Auftrag sollte etwa 5 Sekunden pro Durchgang betragen (Abbildung 12). 

- Während dieses Schrittes die Schablone nur am Griff des Segmenthalters halten. Ein Berühren der Führung vermeiden. 

8. Lassen Sie das Antisera-Segment am niedrigsten Punkt der Maskenführung in der HYDRASYS-Kammer stecken. 

9. Schließen Sie den Deckel des Migrationsmoduls. 

10. Starten Sie die Inkubation sofort durch Druck auf die Taste mit dem grünen Pfeil "START", links auf der Tastatur. Der Bildschirm zeigt folgende 

Meldung: "[INKUBATION]". 

IMMUNFIXATION – BESCHREIBUNG DES AUTOMATISCHEN ABLAUFS 

• 10-minütige Inkubation bei 20 °C, gesteuert durch den Peltier-Effekt. 

• Ein Akustiksignal zeigt an, dass die Abdeckung des Migrationsmoduls nicht mehr verriegelt ist. Der Bildschirm zeigt folgende Meldung: " PAP." ; 

dies signalisiert, dass das Filter-Papier zum Abblotten des Gels aufgelegt werden kann. 

HINWEIS: Die Abdeckung des Migrationsmoduls bleibt während der Inkubation verriegelt. 

- 30 -


IV. ABBLOTTEN DES GELS 

1. Abdeckung des Migrationsmoduls öffnen. 

2. Die Dynamische Maske vorsichtig entnehmen. 

WARNHINWEIS: Segment mit Antiseren vorsichtig handhaben. 

3. Ein dickes Filterpapier auf das Gel legen. 

- Das Papier im 45°-Winkel halten. 

- Die untere Papierseite zunächst an den Ecken auf das Gel legen. 

- Das Papier jetzt vollständig auf das Gel legen. 

- Das Filterpapier fest auf der kompletten Gel-Fläche andrücken. 

WARNHINWEIS: Die gesamte Oberfläche des Filterpapiers andrücken, sodass ein perfektes Anliegen sichergestellt ist. 

4. Die Abdeckung des Migrationsmoduls schließen. 

5. Das Abblotten sofort durch Druck auf die Taste mit dem grünen Pfeil "START", links auf der Tastatur, starten. 

ABBLOTTEN – BESCHREIBUNG DES AUTOMATISCHEN ABLAUFS 

• 3-minütiges Abblotten bei 20 °C, temperaturreguliert durch den Peltier-Effekt. Der Bildschirm zeigt folgende Meldung: "[BLOTTEN]". 

• Ein Akustiksignal ertönt. Auf dem Bildschirm blinkt folgende Meldung: "❊PAP. + REHYD 1" weist an, das Filterpapier zu entfernen und die 

Rehydrierlösung aufzutragen. 

V. REHYDRIEREN DES GELS 

1. Die Abdeckung des Migrationsmoduls öffnen. 

2. Das Gel verbleibt auf der Platte des Migrationsmoduls. 

3. Reagenz-Applikationsschablone R3 für HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING oder ENZ 4 ml für HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING auflegen 


4. 4,5 ml Rehydrierlösung für HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING oder 7 ml für HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING in die Öffnung der Schablone 

geben (Abbildung 14). Pipette senkrecht halten. Die Pipettenspitze leicht in die Schablonenöffnung drücken. Die Lösung vorsichtig unter die 

Schablone pipettieren; es dürfen keine Luftblasen entstehen. Darauf achten, dass die Lösung unter der Schablone gleichmäßig in der 

rechteckigen Fläche in der Mitte der Schablonenöffnung verteilt ist. 


6. Die Inkubation sofort durch Druck auf die Taste mit dem grünen Pfeil "START", links auf der Tastatur, starten. 

REHYDRIERUNG DES GELS – BESCHREIBUNG DES AUTOMATISCHEN ABLAUFS 

• 5-minütige Inkubation bei 20 °C, temperaturreguliert durch den Peltier-Effekt. 

• Ein Akustiksignal ertönt. Auf dem Bildschirm blinkt folgende Meldung: "❊ REHYD 1 + PAP." weist an, die Rehydrierlösung zu entfernen und ein 

dickes Filterpapier aufzulegen. 

VI. ENTFERNEN DER REHYDRIERUNGSLÖSUNG 


2. Die Rehydrierlösung wie folgt entfernen: 

3. Die Pipette senkrecht halten und die Pipettenspitze leicht in die Vertiefung drücken (Abbildung 14). 

4. Das Reagenz vorsichtig und gleichmäßig in die Pipette aufnehmen. 

5. Die Reagenz-Applikationsschablone an der Lasche anfassen, hochheben und entfernen. 

VII.ABBLOTTEN DES GELS 

1. Ein dickes Filterpapier auf das Gel legen. 

2. Das Papier im 45°-Winkel halten. 

3. Die untere Papierseite zunächst an den Ecken auf das Gel legen. 

4. Das Papier jetzt vollständig auf das Gel legen. Das Filterpapier fest auf der kompletten Gel-Fläche andrücken. 




• 3-minütiges Abblotten bei 20 °C, temperaturreguliert durch ein Peltier-Element. 

• Ein Akustiksignal ertönt. Auf dem Bildschirm blinkt folgende Meldung: "❊ PAP. + REHYD 2" weist an, das Filterpapier zu entfernen und die 

Rehydrierlösung aufzutragen. 

VIII. REHYDRIEREN DES GELS 


2. Das Gel verbleibt auf der Platte des Migrationsmoduls. 

3. Reagenz-Applikationsschablone R3 für HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING oder ENZ 4 ml für HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING auflegen 


4. 4,5 ml Rehydrierlösung für HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING oder 7 ml für HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING in die Öffnung der Schablone 

geben (Abbildung 14). Pipette senkrecht halten. 

5. Die Pipettenspitze leicht in die Schablonenöffnung drücken. 

6. Die Lösung vorsichtig unter die Schablone pipettieren; es dürfen keine Luftblasen entstehen. 

7. Darauf achten, dass die Lösung unter der Schablone gleichmäßig in der rechteckigen Fläche in der Mitte der Schablonenöffnung verteilt ist. 



REHYDRIERUNG DES GELS – BESCHREIBUNG DES AUTOMATISCHEN ABLAUFS 

• 5-minütige Inkubation bei 20 °C, temperaturreguliert durch ein Peltier-Element. 

• Ein Akustiksignal ertönt. Auf dem Bildschirm blinkt folgende Meldung: "❊ REHYD 2 + TTF3" weist an, die Rehydrierlösung zu entfernen und die 

Färbelösung aufzutragen. 

- 31 -


IX. ENTFERNEN DER REHYDRIERUNGSLÖSUNG 


2. Die Rehydrierlösung wie folgt entfernen: 

3. Die Pipette senkrecht halten und die Pipettenspitze leicht in die Vertiefung drücken (Abbildung 13) und das Reagenz vorsichtig und 

gleichmäßig in die Pipette aufnehmen. 

4. Die Reagenz-Applikationsschablone auf dem Gel belassen. 

X. FÄRBUNG 

1. 3 ml TTF3-Färbelösung (erst kurz vor der Verwendung ansetzen) für HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING oder 3,5 ml für HYDRAGEL 9 CSF 

ISOFOCUSING in die Schablone pipettieren. 

2. Darauf achten, dass die Lösung unter der Schablone gleichmäßig verteilt ist. 

3. Abdeckung des Migrationsmoduls schließen. 


INKUBATION – BESCHREIBUNG DES AUTOMATISCHEN ABLAUFS 

• 15-minütige Inkubation bei 30 °C, gesteuert durch den Peltier-Effekt. 

• Ein Akustiksignal ertönt. Auf dem Bildschirm blinkt folgende Meldung: "❊TTF3 / PAP." weist an, die Färbelösung zu entfernen und ein dickes 

Filterpapier aufzulegen. 

XI. ENTFERNEN DER FÄRBELÖSUNG 


2. Die Färbelösung entfernen, wie in § XI beschrieben. 

3. Die Schablone mit der Reagenz-Applikation an der Lasche anfassen, hochheben und entfernen. 

XII.ABBLOTTEN DES GELS 

1. Ein dickes Filterpapier auf das gefärbte Gel legen, wie in § VII beschrieben. 

2. Das Filterpapier vollständig auf der kompletten Gel-Fläche andrücken. 

3. Abdeckung des Migrationsmoduls schließen. 


5. Die Schablone mit destilliertem Wasser oder Alkohol abspülen und sorgfältig mit weichem, saugfähigen Papier trocknen. Vor der erneuten 

Verwendung prüfen, ob die Schablone völlig trocken ist; ggf. Tröpfchen aus den Vertiefungen mit weichem Papier entfernen. 

HINWEIS: Nach der Färbung mit TTF3 können die Schablonen R2 oder ENZ 4 ml auch mit Alkohol gereinigt werden. 


• 3-minütiges Abblotten bei 30 °C, temperaturreguliert durch den Peltier-Effekt. 

• Ein Akustiksignal ertönt. Auf dem Bildschirm blinkt folgende Meldung: "❊ PAP." weist an, das Filterpapier zu entfernen. 

XIII. TROCKNEN DES GELS 


2. Das Filterpapier entfernen; das Gel verbleibt an seinem Platz. 

3. Abdeckung des HYDRASYS schließen. 

4. Starten Sie das Trocknen sofort durch Druck auf die Taste mit dem grünen Pfeil "START", links auf der Tastatur. Der Bildschirm zeigt folgende 

Meldung: "[TROCKNEN]". 

TROCKNEN – BESCHREIBUNG DES AUTOMATISCHEN ABLAUFS 

• 3-minütiges Trocknen des Gels bei 50 °C. 

• Ein Akustiksignal zeigt an, dass die Abdeckung geöffnet werden kann. 

• Öffnen der Abdeckung. 

• Das getrocknete Gel entfernen und in die Färbekammer überführen. 

HINWEIS: Die Temperatur der Platte sinkt in weniger als 5 Minuten auf 20 °C ab. 

- Sind die 20 °C erreicht, kann eine neue Migration gestartet werden. 

- Probenapplikator und die Elektrodenträger einsetzen. 

- Migrationsplatte mit einem weichen feuchten Tuch abwischen. 

XIV. WASCHEN DES GELS UND ABSCHLUSSARBEITEN 

Nach dem Trocknen wird das Gel in der Färbekammer gewaschen, wobei das Programm "WASC. ISOENZ/GEL“ verwendet wird. Wurde die Kammer 

vorher zum Färben von Proteingelen benutzt, reinigen Sie die Kammer mit Hilfe des Programms ”TANKREINIGUNG”. 

1. Abdeckung der Migrationseinheit öffnen und das getrocknete Gel entnehmen. Gel-Halter öffnen. Das Gel mit der Gel-Seite nach oben in den 

Gel-Halter einlegen und den Gel-Halter schließen. Darauf achten, dass das Gel richtig eingesetzt ist (Abbildung 15). 

2. Gel-Halter in das Färbe-Modul einsetzen. 

WICHTIG : Vor dem Färben prüfen, ob der Entfärbebehälter mindestens 400 ml Entfärbelösung enthält, der Abfallbehälter leer ist. 

3. Wählen Sie das Waschprogramm "WASC. ISOENZ/GEL" aus dem Gerätemenü. "START" drücken (grüner Pfeil rechts auf der Tastatur). 

HINWEIS: Während der Schritte Waschen und Trocknen bleibt die Kammer verriegelt. 

Nach dem Kühlschritt ertönt ein Akustiksignal und zeigt an, dass die Kammer entriegelt ist (die Lüftung bleibt so lange angeschaltet, bis der 

Gel-Halter entfernt ist). 

4. Den Gel-Halter aus der Kammer nehmen und das getrocknete Gel entnehmen. Bei Bedarf die Rückseite des getrockneten Films (Seite mit 

Plastikschutz) mit einem feuchten Papiertuch reinigen. Das Gel kann nun ausgewertet werden. 

- 32 -


INTERPRETATION 

Die intrathekale Ig G Synthese innerhalb des zentralen Nervensystems wird durch Banden in der CSF-Spur ohne korrespondiere Banden in der 

Serum-Spur desselben Patienten angezeigt (Abbildung 16). 

Schmale Banden in der Serum-Spur die andere Migrationsmuster zeigen als Banden der CSF-Spur, sollten nicht zur Interpretation des Bandenmusters 

herangezogen werden. 

Theoretisch könnte bereits eine zusätzliche Bande in der CSF-Spur auf eine intrathekale Synthese hinweisen. Um falsch-positive Befunde 

auszuschließen, sollten mindestens zwei Banden für die Diagnose einer intrathekalen Diagnose vorhanden sein. Beim Krankheitsbild der multiplen 

Sklerose (MS) sind meist vier oder mehr zusätzliche IgG Banden in der CSF-Spur präsent. Die Diagnose einer MS sollte jedoch auch bei vorliegen 

eines entsprechenden Bandenmusters durch weitere klinische Daten bestätigt werden. 

Es wird darauf hingewiesen, dass die Anzahl der oligoklonalen Banden in keinem Zusammenhang mit der Schwere oder Prognose einer MS steht, 

weshalb die Anzahl der Banden nicht im Patientenreport erwähnt werden sollte. 

Um eine korrekte, vergleichbare Interpretation zu gewährleisten, ist es zwingend notwendig, die folgenden Punkte zu beachten: 

• CSF und Serumproben müssen zur gleichen Zeit vom selben Patienten abgenommen worden sein. Alles, was die Konzentration der 

Immunglobuline in den Proben verändern könnte, ist zu vermeiden. 

• Die Konzentrationen von CSF und Serum-Immunglobulinen müssen exakt bestimmt werden, so, dass nach dem Einstellen gleiche Quantitäten in 

CSF und Serum von Ig auf das Gel appliziert werden können. 

Die Detektion der intrathekalen Ig-Synthese durch sensitive Immunfixation ist ein spezifischerer und sensitiverer Indikator als die unterschiedlichen 

Verhältnisse, die aus den Gesamtkonzentrationen von CSF und Serum-Immunglobulinen sowie anderen Proteinen errechnet werden. 

Die Bestätigung der intrathekalen Ig-Synthese ist eine wichtige Information hinsichtlich Entzündungskrankheiten des zentralen Nervensystems. Das 

oligoklonale Profil oder eine andere Indikation der intrathekalen Synthese von Ig G kann bei unterschiedlichen Krankheiten des zentralen 

Nervensystems beobachtet werden, z.B.: 

• 95 % bei multipler Sklerose 

• 100 % bei unbehandelter Neurosyphilis 

• 100 % bei subakuter sklerotischer Leukoenzephalitis. 

Darüber hinaus kann die Indikation der intrathekalen Synthese von Ig G bei vielen Erkrankungen des zentralen Nervensystems festgestellt werden, 

wie zum Beispiel Infektionen, peripheren Neuropathien, Neoplasie, cerebrovasculären Verletzungen, etc. 

Die Diagnose darf sich nicht allein auf die Ergebnisse der Immunfixation stützen. Deren Ergebnisse sind gemeinsam mit der klinischen Beobachtung 

und Anamnese zu berücksichtigen und durch biochemische und mikrobiologische Tests zu ergänzen. 

Interferenzen und Beschränkungen 

Siehe PROBEN FÜR DIE ANALYSE. 

Wird ein anderes Antiserum als das speziell für die Verfahren HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING mit dynamischer Maske entwickelte verwendet, 

kann dies die Ergebnisse beeinflussen. 

Auf Grund des Auflösungsvermögens und der Sensitivitätsgrenzen bei der Elektrophorese können manche monoklonale Komponenten mit dieser 

Methode nicht detektiert werden. 

Fehlerbehandlung 

Informieren Sie den Technischen Service des Lieferanten, wenn der Test trotz strikter Befolgung der Anweisungen zur Vorbereitung, Lagerung und 

Verfahren der Materialien keine gültigen Ergebnisse erzielt. 

Die Sicherheitsdatenblätter der Reagenz-Kits und die Informationen zur Abfallbeseitigung sind beim Technischen Service des Lieferanten erhältlich. 

LEISTUNGSDATEN 

Reproduzierbarkeit 

Reproduzierbarkeit im Gel 

CSF und Serumproben von vier Patienten wurden in alle 18 Spuren der HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING-Gele aus zwei Chargen appliziert (zwei 

Paare mit intrathekaler Synthese und zwei Paare ohne intrathekale Synthese. 

Reproduzierbarkeit bei Gel-zu-Gel und Charge-zu-Charge 

Acht CSF/Serumpaare wurden auf jedes der 10 Gele von HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING aus derselben Charge und auf zwei Gele aus einer 

anderen Charge appliziert (sechs Paare mit intrathekaler Synthese und zwei Paare ohne intrathekale Synthese). 

Ergebnisse: 

Bei der visuellen Prüfung in allen Reproduzierbarkeitsstudien wurden die oligoklonalen Banden in jeder Probe korrekt identifiziert; bei allen Gelen mit 

dem Antiserum Anti-Ig G – PER wurden keine falsch positiven/negativen Ergebnisse festgestellt und auch bei den Wiederholungen wurden keine 

Unterschiede beobachtet. 

Richtigkeit – Detektion und Identifikation oligoklonaler Bandenbildung 

CSF und Serumproben von Patienten mit verschiedenen Erkrankungen des zentralen Nervensystems (n = 108) wurden unter Verwendung des Kits 

HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING und einem weiteren kommerziell verfügbaren Elektrophorese-System zur Immunfixation analysiert. Die 

Elektropherogramme wurden visuell auf das Vorhandensein oligoklonaler Ig-Banden (SEBIA Test) oder Bandenbildung in der Gamma-Zone 

untersucht. 

Es gab eine generelle Übereinstimmung bei der Detektion der oligoklonalen Bandenbildung zwischen den beiden Tests. Die wenigen beobachteten 

Unterschiede ließen sich auf die größere Sensitivität des Verfahrens HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING zurückführen und/oder auf dessen Fähigkeit, 

die tatsächliche Bandenbildung oligoklonaler IgG's zu detektieren. Die Ergebnisse stimmten mit den klinischen Diagnosen, der Indikation intrathekaler 

Synthesen und der Zerstörung der Blut-Hirn-Schranke überein. 

- 33 -


Sensitivität 

Die Sensitivität des Verfahrens HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING wurde durch die Verdünnung eines Ig G-Paraproteins, 20 mg/l determiniert und 

ist wie folgt: Die Detektionsgrenze einer monoklonalen Bande des Ig G Typs liegt bei 0,31 mg/l. 

LITERATUR 
























1994, 397 pp. 













1994, 54 : 75-80. 



- 34 -


TOEPASSING 

De HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING en HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING kits zijn ontwikkeld voor de kwalitatieve detectie en identificatie van 

"oligoclonale" banden in de elektroforetische patronen van cerebrospinale vloeistof (CSF) en de bevestiging van hun immunoglobuline eigenschappen. 

De procedure houdt in isoelectrofocusing op agarose gel, uitgevoerd door middel van het semi-automatische HYDRASYS systeem, gevolgd door 

immunofixatie met anti-Ig G antiserum. Het gebruik van enzymen gelabeld met anti-Ig G antiserum maakt het mogelijk alleen de "ware" Ig G 

oligoclonale banden te detecteren bij verhoogde gevoeligheid van de detectie zodat de analyse algemeen toegepast kan worden op niet 

geconcentreerde CSF. De Ig G immunofixatie patronen van CSF en serum van dezelfde patiënt worden vervolgens visueel vergeleken. Dit maakt 

detectie van oligoclonale banden mogelijk die intrathecale synthese van immunoglobulinen aantoont. 

De HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING en HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING kits worden geïndiceerd in geval dat de activiteit van bepaalde ziekten 

aan het central zenuwstelsel (CNS), zoals multiple sclerosis, wordt verwacht en de detectie van oligoclonale banden en ontstekingsprocessen 

(intrathecale synthese van immunoglobulinen) kan behulpzaam zijn bij het stellen van de diagnose. 

Voor In Vitro Diagnostisch gebruik. 

HET PRINCIPE VAN DE TEST 

Veel afwijkingen in het centrale zenuwstelsel zijn direct verbonden met een verhoogde concentratie van de CSF proteïnen ofwel als gevolg van de 

verhoogde permeabiliteit van de bloed-CSF barrière ofwel door de synthese van immunoglobulinen, voornamelijk Ig G, in het centrale zenuwstelsel 

(CNS). In het laatste geval, zoals de intrathecale synthese van immunoglobulinen (Ig’s) is dit veelal verbonden met beperkte heterogeniteit welke 

zichtbaar wordt als de "oligoclonale banden" die gezien worden in de gammazone in de hoge resolutie elektroforetische migratiepatronen. De banden 

die geen Ig’s aanduiden kunnen ook aanwezig zijn in de zonen van de gamma globuline, maar deze hebben niet dezelfde diagnostische betekenis. 

Immunofixatie is een prima detectietechniek omdat het ook de Ig eigenschappen van de oligoclonale banden kan bewijzen, de betrokken Ig kan 

identificeren en de vereiste specificiteit van de tests kan leveren. Aangezien alleen Ig G oligoclonale banden een routinematige diagnostische 

betekenis hebben richt de test van SEBIA zich vooral op de detectie van de Ig G oligoclonale banden gebruikmakend van het specifieke anti-Ig G 

antiserum. 

De aanwezigheid van intrathecale Ig G zou kunnen wijzen op een ontstekingsziekte in het CNS, zoals veroorzaakt door multiple sclerosis (MS). 

Hoewel oligoclonale banden noch diagnostisch noch specifiek zijn voor MS, wordt dit fenomeen algemeen gebruikt als ondersteunende informatie en 

wordt deze test als essentieel beschouwd door de consensus van 1994 van de “Committee of the European Concerted Action for Multiple Sclerosis”. 

Het is bevestigend bij patiënten met klinische MS episoden en indicatief bij patiënten met slechts enkele episoden of niet doorslag gevend bij klinische 

symptomen. 

Het was onder andere dit ‘Committee’ dat criteria vast stelde voor de detectie van Ig G oligoclonale banden in het CSF: 

1. de meest verhelderende en gevoelige techniek voor de detectie van oligoclonale banden is de techniek van het isoelektrische focussen, 

2. de oligoclonale Ig G moet vastgesteld worden door een specifiek antiserum, 

3. ter bevestiging van de intrathecale Ig G synthese, moet serum van de patiënt en CSF geanalyseerd worden in een parallelle procedure om zo de 

verschillen te demonstreren met betrekking tot de Ig G distributie, 

4. als ondersteuning bij de interpretatie moet de Ig G concentratie in het CSF-serummonsterpaar afgesteld worden op hetzelfde niveau, 

5. concentratie van CSF moet vermeden worden. 

De HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING test voldoet aan al de hierboven gestelde vereisten. 

De analyse wordt in twee fasen uitgevoerd: 

• Isoelektrofocusing op agarose gel om de proteïnen uit de CSF en de serummonsters in fracties te verdelen. 

• Immunofixatie met enzym (peroxidase) gelabeld anti-Ig G antiserum om Ig G oligoclonale banden te detecteren en om de verschillen te 

demonstreren, of het ontbreken daarvan, waar het de distributie van Ig G in het CSF en het serum betreft. 

In vergelijking met de standaard immunofixatie, wordt een toename van de gevoeligheid van de detectie met een factor 100 bereikt met de 

HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING kits die gebruikmaken van met enzymen gelabelde antilichamen. Hierdoor kan met behulp van een Ig G 

concentratie van, of net boven, slechts 10 mg/l, de Ig G worden vastgesteld en de distributie ervan worden bepaald zonder het CSF-monster te 

concentreren. 

Het semi-automatische HYDRASYS systeem is geschikt voor alle fasen die nodig zijn voor het verkrijgen van gels die gereed zijn voor interpretatie. 

Elke agarose gel in de HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING kit bevat 6 tracks en is geschikt voor 3 cycli CSF – serummonsterparen. 

Elke agarose gel in de HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING kit bevat 18 tracks en is geschikt voor 9 cycli CSF – serummonsterparen. 

DE HYDRAGEL CSF ISOFOCUSING KIT BEVATTEN DE VOLGENDE REAGENTIA EN ANDERE MATERIALEN 

BESTANDDELEN PRODUKTNR. 4353 PRODUKTNR. 4355 Agarose-gels (klaar voor gebruik) 10 gels 10 gels Ethyleenglycol oplossing (klaar voor gebruik) 1 flesje, 3 ml 1 flesje, 3 ml Anodische oplossing (klaar voor gebruik) 1 flesje, 50 ml 1 flesje, 50 ml Kathodische oplossing (klaar voor gebruik) 1 flesje, 50 ml 1 flesje, 50 ml Strips 10 pakjes van 2 10 pakjes van 2 Monsterverdunner CSF (klaar voor gebruik) 1 flesje, 85 ml 1 flesje, 85 ml Antiserumverdunner CSF ISOFOCUSING (klaar voor gebruik) 1 flesje, 3.75 ml 1 flesje, 3.75 ml Rehydraterende oplossing CSF (klaar voor gebruik) 2 flesjes, 70 ml 2 flesjes, 70 ml TTF3 oplosmiddel (klaar voor gebruik) 2 flesjes, 20 ml 2 flesjes, 20 ml TTF3 (standaard oplossing) 2 flesjes, 0.5 ml 2 flesjes, 0.5 ml Applicatoren (klaar voor gebruik) 1 pakje van 10 (6 tanden) 1 pakje van 10 (18 tanden) Buffercontainers (klaar voor gebruik) 1 pakje van 2 1 pakje van 2 Antiserumsegmenten (klaar voor gebruik) 1 pakje van 10 1 pakje van 10 Filtreerpapier – dun 1 pakje van 10 1 pakje van 10 Filtreerpapier – dik 3 pakjes van 10 elk 3 pakjes van 10 elk 

| Plastic maskers | 1 pack of 10 | 1 pack of 10 | 

- 35 - 

SEBIA INSTRUCTIEBLAD - Nederlands


VOOR OPTIMALE RESULTATEN 

Uitsluitend reagentia uit dezelfde kit moet worden gebruikt in overeenstemming met de aanwijzingen als aangegeven in de bijsluiter in het pakket. 

WIJ ADVISEREN U OM DE BIJSLUITER BIJ DE KIT NAUWKEURIG TE LEZEN. 

1. AGAROSE-GELS 

Voorbereiding 

De Agarosegels zijn klaar voor gebruik. 

Iedere gel bevat: agarose, 10,0 g/l ; amfolyten ; toevoegingen - in de gebruikte concentraties niet schadelijk, maar noodzakelijk voor een optimale 

werking. 

Gebruik 

Hulpmedium voor de iso-elektrofocusing en immunofixatie van proteïnen. 

Opslag, stabiliteit en tekenen van verval 

De gels moeten horizontaal worden opgeslagen in de originele beschermende verpakking, gekoeld (2 tot 8 °C). (De pijl op de voorzijde van de 

verpakking moet naar boven wijzen). 

Vermijd opslag in de nabijheid van een raam of een warmtebron. Vermijd aanzienlijke schommelingen in temperatuur tijdens de opslag. NIET 

INVRIEZEN. De gels zijn stabiel tot de houdbaarheidsdatum die op de verpakking, of op de verpakkingslabel van de gel, staat aangegeven. 

Verwijder de gel wanneer: 

(I) zich kristallen of neerslag op het oppervlak van de gel vormen, of wanneer de textuur van de oppervlakte van de gel erg zacht wordt (dit geeft aan 

dat de gel bevroren is geweest) ; 

(II) er bacteriële of schimmelgroei wordt waargenomen ; 

(III) er een abnormale hoeveelheid vloeistof in de gelbox aanwezig is (wijst erop dat afscheiding van buffer uit de gel heeft plaatsgevonden tijdens 

onjuiste opslagomstandigheden). 

2. ETHYLEENGLYCOLOPLOSSING 

Bereiding 

De ethyleenglycoloplossing is gebruiksklaar. 

WAARSCHUWING: Inname is schadelijk. 

Gebruik 

Wordt gebruikt om effectief contact te realiseren tussen de plastic achterzijde van de gel en de plaatvoor de temperatuurcontrole van de 

migratiemodule tijdens de elektroforetische migratie. 

Opslag, stabiliteit en teken van verval 

De ethyleenglycoloplossing wordt bij kamertemperatuur of gekoeld bewaard. De oplossing is stabiel tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven 

op de verpakking van de kit of op het etiket op het flesje met ethyleenglycoloplossing. 

3. ANODISCHE EN KATODISCHE OPLOSSINGEN 

Bereiding 

De anodische oplossing (zure oplossing) en de kathodische oplossing (basische oplossing) zijn beiden gebruiksklaar. Zij bevatten beiden ook 

additieven in de gebruikte concentraties niet schadelijk, maar noodzakelijk voor een optimale werking. 

OPMERKING: De anodische oplossing is rood gekleurd omdat dit praktisch is bij het gebruik en ook omdat het identificatie van de geprepareerde 

anodische strip vergemakkelijkt. 

WAARSCHUWING: De kathodische oplossing bevat natriumhydroxide. Irriterend voor ogen en huid. In geval van contact met de ogen wordt 

aangeraden om direct te spoelen met veel water en medisch advies te vragen. 

Gebruik 

Als elektrolyten bij de aanmaak van de anodische en kathodische strips voor de isoelectrofocussing. 

BELANGRIJK: Na gebruik wordt de kathodische oplossing direct in een stevig afgesloten container of fles bewaard om carbonatatie van deze 

oplossing te vermijden. 


De anodische en zure oplossingen kunnen bij kamertemperatuur of gekoeld worden bewaard en zijn stabiel tot de vervaldatum zoals aangegeven op 

de verpakking van de kit of op de label van de flesjes met oplossing. De oplossingen moet vrij zijn van enige neerslag. 

4. STRIPS 

Bereiding 

Verzadig twee sponsstrips respectievelijk met anodische en kathodische oplossingen, ongeveer 5 minuten voorafgaand aan het gebruik. 

Plaats de grijze container voor de anodische strip en de blauwe container voor de kathodische strip op een plat oppervlak. 

Houdt 5 ml van de rode anodische oplossing in de grijze container en 5 ml van de ongekleurde kathodische oplossing in de blauwe container. 

Open het pak met sponsstrips. Neem de strips bij de plastic uiteinden vast en plaats deze in elk van de containers. 

Zorg er voor dat de strips gelijkmatig doordrenkt raken door regelmatig licht te drukken met de tip van de corresponderende pipetten. 

Gebruik de verzadigde strips direct, zonder vertraging. 

BELANGRIJK: Verzadig de strips kort voor gebruik om carbonatatie van de kathodische oplossing te voorkomen. 

Gebruik 

De strips respectievelijk doorweekt met anodische en kathodische elektrolytenoplossingen zorgen voor het contact tussen de gel en de elektroden en 

bepalen het pH-bereik tijdens het focussing-proces. 


De vochtige sponsen kunnen in de originele beschermende verpakking bij kamertemperatuur of gekoeld bewaard worden. Zij moeten horizontaal 

bewaard worden (zie pijl op de voorzijde van de doos in de kit, deze pijl moet omhoog wijzen). Zij zijn stabiel tot de vervaldatum zoals aangegeven 

op de verpakking van de kit of op de label op de verpakking van de sponsen. 

BEVRIES DE STRIPS NIET. 

Ruim de strips op als de verpakking geopend of beschadigd was en de strips verdroogd zijn. 

- 36 -


5. MONSTERVERDUNNER CSF 

Bereiding 

De monsterverdunner is gebruiksklaar. Deze bevat een zoutoplossing aangevuld met het bovine (rund) serum albumine, natriumazide en in de 

gebruikte concentraties niet schadelijk, maar noodzakelijk voor een optimale werking. 

Gebruik 

Voor de verdunning van CSF en serummonsters. 


Bewaar de monsterverdunner gekoeld (2 tot 8 °C). De verdunner is stabiel tot de vervaldatum zoals aangegeven op de verpakking van de kit of op 

de label van de flesjes met verdunner. De verdunner moet vrij zijn van enige neerslag. 

6. ANTISERUMVERDUNNER CSF ISOFOCUSING 

Bereiding 

De antiserumverdunner is gebruiksklaar. Deze bevat additieven in de gebruikte concentraties niet schadelijk, maar noodzakelijk voor een optimale 

werking. 

Gebruik 

Voor de verdunning van antiserummonsters net voor gebruik. 


Bewaar de antiserumverdunner gekoeld (2 tot 8 °C). De verdunner is stabiel tot de vervaldatum zoals aangegeven op de verpakking van de kit of op 

de label van de flesjes met verdunner. De verdunner moet vrij zijn van enige neerslag. 

OPMERKING: Tijdens opslag kan de antiserumverdunner geel kleuren. Dit heeft geen enkel negatief effect op de werking. 

7. CSF REHYDRATERENDE OPLOSSING 

Bereiding 

De rehydraterende oplossing is gebruiksklaar. Deze bevat additieven in de gebruikte concentraties niet schadelijk, maar noodzakelijk voor een 

optimale werking. 

Gebruik 

Voor het rehydrateren van de agarose gel voorafgaand aan de visualisatiefase op peroxidase basis. 


De rehydraterende oplossing kan bij kamertemperatuur of gekoeld worden bewaard en zijn stabiel tot de vervaldatum zoals aangegeven op de 

verpakking van de kit of op de label van de flesjes met oplossing. De rehydraterende oplossing moet vrij zijn van enige neerslag. 

8. TTF3 OPLOSMIDDEL 

Bereiding 

Het TTF3 oplosmiddel is gebruiksklaar. Het bevat componenten die, in de gebruikte concentraties niet schadelijk zijn, maar noodzakelijk zijn voor een 

optimale werking. 

Gebruik 

Voor de bereiding van TTF3 visualisatieoplossing zoals beschreven onder nr. 9. 


Het TTF3 oplosmiddel kan bij kamertemperatuur of gekoeld worden bewaard en zijn stabiel tot de vervaldatum zoals aangegeven op de verpakking 

van de kit of op de label van de flesjes met TTF3 oplosmiddel. Het TTF3 oplosmiddel moet vrij zijn van enige neerslag. 

9. TTF3 

Bereiding 

Maak de werkende oplossing net voor gebruik aan en voeg de reagentia in de hieronder gegeven volgorde toe: 4 ml TTF3 oplosmiddel, 100 µL TTF3 

en 4 µL waterstofperoxide (H 2 

O 2 

) 30 %. 

WAARSCHUWING: TTF3 bevat dimethylformamide. Deze stof is schadelijk bij inademing! Als er onvoldoende ventilatie mogelijk is dan moet 

u geschikte ademhalingsapparatuur gebruiken. Niet innemen. Bij inname direct een arts waarschuwen. Deze stof is schadelijk voor de huid. 

Draag daarom geschikte beschermende kleding. De stof irriteert de ogen. Na contact met ogen of huid moet u direct met veel water spoelen 

en medisch advies vragen. Vermijd blootstelling aan deze stof en vraag speciale instructies alvorens met deze stof te gaan werken. De stof 

is carcinogeen en kan kanker veroorzaken. Zodra u zich niet goed voelt moet u direct medisch advies vragen (laat, waar mogelijk, de label 

van het flesje zien). 

Gebruik 

Bij de visualisatie van de gesepareerde immunoglobulinen in de isofocusing-procedure via het met peroxydase gelabelde antiserum. 


Het TTF3 oplosmiddel kan bij kamertemperatuur of gekoeld worden bewaard en zijn stabiel tot de vervaldatum zoals aangegeven op de verpakking 

van de kit of op de label van de flesjes met TTF3 oplosmiddel. Het TTF3 oplosmiddel moet vrij zijn van enige neerslag. 

10. MONSTER-MALPLAATJES 

Gebruik 

Voorgesneden monstermalplaatjes, voor het aanbrengen van het monster op de gel. 


De monstermalplaatjes kunnen bij kamertemperatuur of gekoeld worden bewaard in een droge ruimte. 

11. BUFFERCONTAINERS 

Gebruik 

Deze gekleurde containers voor hergebruik zijn voor de aanmaak van de anodische en kathodische strips. 

De grijze container is bedoeld voor de anodische strip en de blauwe container is bedoeld voor de kathodische strip. 

Na elk gebruik worden de beide containers gespoeld met gedestilleerd of geïoniseerd water en grondig gedroogd. 


De schone buffercontainers worden op een plat oppervlak bewaard bij kamertemperatuur. 

- 37 -


12. ANTISERUMSEGMENTEN 

Gebruik 

Deze gekleurde segmenten voor eenmalig gebruik dienen voor de antiserum applicatie op de gel bij de immunofixatie met gebruik van het dynamische 

masker. 

WAARSCHUWING: De segmenten die geladen zijn met antiserum moeten voorzichtig behandeld worden. 

13. FILTERPAPIER - DUN 

Gebruik 

Absorberende strips, voor eenmalig gebruik, voor het absorberen van overtollige vloeistof van het oppervlak van de gel net voor het aanbrengen van 

het monster. 

Opslag 

Bewaar de dunne velletjes filterpapier op een droge plaats bij kamertemperatuur of in de koeling. 

14. FILTERPAPIER - DIK 

Gebruik 

Velletjes filterpapier, voor eenmalig gebruik, voor het opdeppen van overtollige blokkeeroplossing van het oppervlak van de gel vóór het drogen. 

Opslag 

Bewaar de dikke velletjes filterpapier op een droge plaats bij kamertemperatuur of in de koeling. 

15. PLASTIC MASKERS 

Gebruik 

Deze plastic sheets, voor eenmalig gebruik, dienen om de gel tijdens de elektroforetische migratie af te schermen. 

BENODIGDE UITRUSTING EN ACCESSOIRES 

1. HYDRASYS Systeem SEBIA, PN 1211 met daarbij de optie FOCUSING HYDRASYS SEBIA, PN 1235. 

of 

2. HYDRASYS FOCUSING Systeem SEBIA, PN 1212. 

3. Micropipet, ofwel manueel of geautomatiseerd, zoals de HYDRAPLUS SEBIA, PN 1216 of HYDRAPLUS 2 SEBIA, PN 1217, geschikt voor een 

alternatieve mogelijkheid om de monsterapplicatoren of antisera segmenten te laden. 

4. Natte Opslagkamer, PN 1270, geleverd met HYDRASYS. 

5. Stang voor geleiding van de mal SEBIA geleverd bij de HYDRASYS. 

6. Dynamisch masker, SEBIA, PN 1255. 

7. Accessoire Kit voor HYDRASYS CSF ISOFOCUSING SEBIA, PN 1258. Deze kit bevat: de maskers voor de applicatie van het reagens, nml. R3, 

ENZ 4 ml en het mechanisme om de lengte tot de helft te reduceren. 

8. Container Kit geleverd bij de HYDRASYS. 

9. Pipetten: 2 µL, 20 µL, 100 µL, 200 µL en 5 mL (of maatpipetten / pipetapparaat: 0-100 µL, 100-500 µL en 1-10 ml). 

BENODIGDE, NIET BIJGELEVERDE REAGENTIA 


Het antiserumflesje (SEBIA PN 4743: 1 flesje, 0.60 ml) bevat een standaard oplossing van een van zoogdieren afkomstig anti-menselijk 

immunoglobuline antiserum met als specificiteit voor Ig G, geconjugeerde peroxidase. Ter vereenvoudiging van de identificatie en als steun bij het 

registreren van zijn applicatie, is het antiserum gekleurd met een ongevaarlijke kleurstof, in overeenstemming met de kleur op de label van het flesje. 

Maak de werkzame oplossing kort voor gebruik aan: 

In geval van HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING: 25 µL anti–Ig G - PER en 175 µL antiserumverdunner. 

In geval van HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING: 40 µL anti–Ig G - PER en 300 µL antiserumverdunner. 

Meng zorgvuldig. 

Gebruik 

Bij de immunofixatie en de visualisatie van de Ig G’s bij isoelektrofocussing. 


Bewaar het antiserum gekoeld (2 tot 8 °C). Het is stabiel tot de vervaldatum zoals aangegeven op de label van het flesje met antiserum. 

Ruim het antiserum op als er enige uiterlijke verandering optreedt, bijv. troebeling als gevolg van microbiologische activiteit. 

OPMERKING: Antisera kunnen van diverse dierlijke soorten afkomstig zijn. Meng nooit twee verschillende flesjes met antisera, zelfs niet als deze 

dezelfde specificiteit hebben, en verwissel de tip van de pipet ALTIJD bij het wisselen van antiserumflesjes. 

Gedurende transport kan het antiserum gedurende 15 dagen zonder koeling bij een temperatuur van 15 tot 30 °C bewaard blijven zonder dat dit 

nadelige gevolgen heeft op de werking. 

2. WATERSTOFPEROXIDE: H 2 

O 2 

, 30 % (110 Vol.). 

Waterstofperoxide moet in een donkere fles en gekoeld (2 tot 8 °C) worden opgeslagen. Tijdens het opbrengen steeds de pipet reinigen om 

verontreiniging van de inhoud van de fles te vermijden. 

3. ONTKLEURINGSOPLOSSING 

Voorbereiding 

Elk flesje van het ontkleuringconcentraat (SEBIA, PN 4540, 10 flesjes, 100 ml elk) wordt verdund tot 100 liter met gedestilleerd of gedeïoniseerd water. 

Het is praktisch een verdunning van een klein deel van het concentraat aan te maken, bijvoorbeeld 5 ml concentraat te verdunnen tot 5 liter. Na 

verdunning bevat de ontkleuringoplossing citroenzuur, 0,5 g/l. 

- 38 -


Gebruik 

Voor het ontkleuren van gels, d.w.z. het verwijderen van overtollige en achtergrondkleurstof van de gels, na enzymatische visualisatie en het drogen 

en spoelen van het HYDRASYS kleuringcompartiment. 

Om de zuurgraad van de ontkleuringoplossing te neutraliseren voor afvoer wordt 15 ml van een 50 % oplossing van natriumhydroxide in de lege 

afvalcontainer gebracht. 


De geconcentreerde ontkleuringoplossing is stabiel bij kamertemperatuur of gekoeld tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de verpakking 

of de labels op de flesjes met ontkleuringoplossing. De werkzame ontkleuringoplossing is, in een afgesloten fles en bij kamertemperatuur, gedurende 

1 week stabiel. 

Verwijder de verdunde ontkleuringoplossing zodra er uiterlijke veranderingen optreden, bijvoorbeeld als hij troebel wordt als gevolg van besmetting 

met microben. Om verspreiding van microben in de ontkleuringoplossing te voorkomen tijdens opslag gedurende een periode langer dan een week 

wordt 5 µl/l ProClin 300 toegevoegd. 

De werkzame ontkleuringoplossing met ProClin is, in een gesloten fles bij kamertemperatuur of gekoeld, stabiel tot de houdbaarheidsdatum als 

aangegeven op de verpakking van de kit of op de label op het flesje met ontkleuringoplossing. 

4. HYDRASYS SPOELSOLUTIE 

Voorbereiding 

Ieder flesje geconcentreerde HYDRASYS Spoelsolutie (SEBIA, prod. nr. 4541, 10 flesjes, 80 ml elk) wordt verdund tot 5 liter met gedestilleerd of 

gedeïoniseerd water. 

Na verdunning bevat de spoelsolutie: alkalische buffer, pH 8,8 ± 0,3 ; natriumazide. 

WAARSCHUWING: De geconcentreerde spoelsolutie bevat 0,625 % natriumazide. Niet voor inwendig gebruik! Bij abusievelijke inname dient 

onmiddellijk een arts gewaarschuwd te worden! Natriumazide kan explosieve of giftige verbindingen aangaan met zuren, lood of koper. Na 

gebruik altijd spoelen met ruime hoeveelheden water. 

Gebruik 

Voor het spoelen van het HYDRASYS Kleuringcompartiment. Gebruik deze oplossing periodiek, d.w.z. als het instrument dagelijks gebruikt wordt, 

spoel het kleuringcompartiment dan wekelijks. 

Voor verdere instructies met betrekking tot het gebruik wordt u verwezen naar de bijsluiter in de verpakking. 


De geconcentreerde oplossing en de verdunde oplossing in gesloten flessen bewaren bij kamertemperatuur of gekoeld. De oplossingen blijven stabiel 

tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de flesjes met spoelsolutie. Ruim de spoelsolutie op zodra hij van uiterlijk verandert, bijvoorbeeld 

als hij troebel wordt als gevolg van besmetting met microben. 

MONSTER VOOR ANALYSE 

Het verzamelen en het opslaan van monsters 

Het serum en CSF van dezelfde patiënt moet tegelijkertijd verzameld worden volgens de conventionele procedures zoals deze gebruikelijk zijn in 

klinische laboratoria. Het wordt aangeraden om de analyses op verse sera en CSF uit te voeren. De monsters kunnen gedurende een week gekoeld 

(2 tot 8 °C) bewaard worden. In geval van langere perioden van opslag is bevriezing van de monsters mogelijk. Bevroren serum en CSF zijn ten minste 

een maand stabiel. 

Bereiding van het monster 

• Meet de CSF en serum Ig G concentraties met behulp van e geijkte procedures. 

• De concentratie van Ig G in de corresponderende CSF en serummonsters zou op hetzelfde niveau afgesteld moeten worden. 

De afstelling hangt af van de Ig concentratie van de oorspronkelijke CSF’s; gebruik de ‘Monsterverdunner’ monsterverdunner voor alle verdunningen. 

1ste casus: De concentratie van Ig G is hoger dan 20 mg/l. 

Verdun CSF en serum met de monsterverdunner om zo een Ig G concentratie te verkrijgen van of 20 mg/l. 

2e casus: De CSF concentratie van Ig G ligt tussen 10 en 20 mg/l. 

Gebruik zuivere CSF. Verdun serum om dezelfde Ig G concentratie te verkrijgen als in het CSF-monster. 

3e casus: De CSF concentratie van Ig G is lager dan 10 mg/l. 

Concentreer CSF met een geschikt apparaat om een Ig G concentratie te verkrijgen tussen 10 en 20 mg/l. Verdun serum om dezelfde Ig G 

concentratie te verkrijgen als in het CSF-monster. 

Voorbeelden van verdunningen (alleen voor monsters met een Ig G concentratie hoger dan 20 mg/l): 

Voor CSF: 

A = Ig G concentratie in mg/l. 

Verzamel 20 µL CSF en meng stevig met 10(A - 2) µL van de monsterverdunner. 

Voor serum: 

B = Ig G concentratie in mg/l. 

- Verdun serum 10 maal met de monsterverdunner, bijv,10 µL serum en 90 µL monsterverdunner. 

- Verzamel y µL verdund serum en voeg y[(B/20) - 1] µL monsterverdunner toe (voor de voorgestelde waarde van y = 2 µL, voeg [(B/10) – 2] µL 

monsterverdunner toe). 

Als de Ig G concentratie onbekend is 

Gebruik zuiver CSF en verdun serum 300 – 400 maal. 

OPMERKING: Als het niet lukt om de CSF en serummonsters af te stemmen op een gelijke Ig G concentratie dan kan dit een negatief effect hebben 

op de interpretatie van de patronen – zie “INTERPRETATIE” 

- 39 -


PROCEDURE 

Het HYDRASYS-systeem is een halfautomatisch multiparameterinstrument waarmee HYDRAGEL in de volgende stappen wordt behandeld: 

premigratie, monsters aanbrengen, elektroforetische migratie door middel van iso-elektrische focussing, incubatie met gemerkt antiserum, pompen en 

als laatste drogen. 

De volgende handmatige stappen moeten worden uitgevoerd: monsters en gels voorbereiden, reagensen laten bezinken en automatische sequenties 

starten. 

LEES DE HYDRASYS-INSTRUCTIEHANDLEIDING AANDACHTIG DOOR. 

BELANGRIJK: Stel vooraf de positie van het masker in om een perfecte overeenkomst te krijgen tussen de elektroforetische profielen van de gel en 

de indicatiestrook van het masker. 

I. DE MIGRATIE VOORBEREIDEN 

1. Zet HYDRASYS onder spanning. 

2. Selecteer de modus " 1000 V hoogspanning", die vereist is voor iso-elektrische focussing, door op de drukknop met het groene lampje te 

drukken. Het lampje wordt dan rood. 

OPMERKING: De drukknop geeft informatie tijdens de migratie. Door tijdens de migratie herhaaldelijk op de knop te drukken zorg u ervoor 

dat de volgende waarden worden weergegeven: geaccumuleerde volt-uren (Vh) en stroomsterkte, of spanning (V) en vermogen (W). 

Terwijl HYDRASYS onder hoogspanning staat, worden op het HYDRASYS-scherm de werkelijke stroomsterktes weergegeven, maar worden 

de andere waarden (spanning, volt- uren en vermogen) gedeeld door 10 weergegeven. 

3. Plaats een zespens applicator voor HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING of een achttienpens applicator voor HYDRAGEL 9 CSF 

ISOFOCUSING met de nummeringen (putjes) aan de bovenkant horizontaal op de gaten. 

4. Vul alle putjes van de applicator met 10 µL monster (Fig. 1). Het vullen van de applicator mag niet langer dan 2 minuten duren. 

Hieronder wordt een voorbeeld gegeven van de analyse van 3 LCR/serum-koppels in HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING en van 

9 LCR/serum-koppels in HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING met behulp van het antiserum anti-Ig G - PER. 



PUT NR. PUT NR. PATIËNT NR. (applicator 6 tanden) | (applicator 18 tanden) | 

1 1 2 1 2 2 3 4 3 4 3 5 6 5 6 4 - - 7 8 5 - - 9 10 6 - - 11 12 7 - - 13 14 8 - - 15 16 | 9 | - | - | 17 | 18 | 

- Pak direct de plastic bescherming van de applicator beet en plaats de applicator met de pennen omhoog verticaal in de vochtige kamer. 

Zie de handleiding van de vochtige kamer voor gebruiksinstructies. 

Voordat u monsters op de gel aanbrengt, moet u een premigratiestap tot 75 geaccumuleerde Vh volgens de volgende instructies 

uitvoeren: 

5. Open de kap van de migratiemodule en breng de applicatordrager en de elektrodedrager omhoog. 

LET OP: Sluit de kap van het apparaat niet terwijl de dragers omhoog staan! 

6. Selecteer het migratieprogramma "3/9 CSF FOCUSING" in het menu. 

7. De anode- en kathodestaven zijn geïmpregneerd met bijbehorende oplossingen (zie paragraaf 4 van het hoofdstuk GELEVERDE 

REAGENSEN). Trek ze aan de plastic lipjes uit het bakje. 

8. Bevestig de staven aan de elektrodedrager met behulp van de geperforeerde lipjes (Fig. 2): 

- Wanneer de drager omhoog staat, moet de rode anodestaaf op de onderste elektrode (anode) van de elektrodedrager worden aangebracht 

en de niet-gekleurde staaf op de bovenste elektrode (kathode). 

- De voorkant van de staaf die op het lipje bevestigd wordt, moet in contact komen met de elektrode. 

9. Haal de gel uit de verpakking. 

10. Veeg de achterkant van de gel (plastic steun) schoon met droog wattenpapier. 

11. Verwijder overtollige vloeistof in 3 seconden met fijn filterpapier van het oppervlak van de gel. 

12. Giet 150 µL ethyleenglycoloplossing bij HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING of 300 µL bij HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING in de vorm van 

een streep op het migratieplateau in het onderste derde deel van het zeefdrukframe. 

13. Plaats de gel (met de gelzijde aan de bovenkant) tegen de lat op het plateau in het zeefdrukframe (Fig. 3). 

Geef de gel een holle vorm (Fig. 3) en rol deze over het plateau uit totdat deze in contact komt met de ethyleenglycoloplossing, die zich over 

de volle breedte van de gel moet verspreiden. Licht de gel een stukje op om eventuele opgesloten luchtbellen te laten ontsnappen en rol de 

gel daarna volledig over het plateau uit. De ethyleenglycoloplossing moet zich over het volledige oppervlak van de film verspreiden. 

14. Breng een plastic afdekking op de gel aan: 

- Pak een plastic afdekking. 

- Lijn het onderste deel van de plastic afdekking uit met de twee zijmerktekens op 1,5 cm van de kathoderand, die zijn gedrukt op de plastic 

steun van de gel (onderkant van de gel) (Fig. 4). 

- Breng de plastic afdekking op de gel aan door deze uit te rollen. Voorkom hierbij dat er luchtbellen gevangen raken tussen de gel en de 

plastic afdekking. 

- 40 -


- Laat eventuele opgesloten luchtbellen ontsnappen door direct de plastic afdekking omhoog te halen aan het uiteinde waar de bellen zich 

het dichtstbij bevinden en breng de afdekking daarna weer voorzichtig aan. 

- Voorkom dat de gel tijdens deze handelingen op het plateau verschuift. 

LET OP: De plastic afdekking mag niet boven de twee op de plastic steun gedrukte zijmerktekens worden geplaatst. 

15. Breng de dragers omlaag tot aan de aanslag. In deze positie komen de getamponneerde staven niet in contact met de gel. FORCEER DE 

DRAGERS NIET OMLAAG. 

16. Sluit de kap van de migratiemodule. 

17. Start direct de sequentie door op "START" (groene pijl links op het toetsenbord) te drukken. 

BELANGRIJK: Plaats niets in de directe omgeving van het ventilatierooster (aan de rechterkant van het apparaat). 

PREMIGRATIE - BESCHRIJVING VAN DE AUTOMATISCHE SEQUENTIES 

• De elektrodedrager wordt omlaag gebracht om de geïmpregneerde staven in contact met de gel te brengen. 

• Migratie vindt plaats met maximaal 1000 V, bij 20 °C, temperatuurregeling door Peltier-effect tot 75 geaccumuleerde Vh. 

• De elektroden worden losgemaakt door de elektrodedrager omhoog te brengen. 

• Er klinkt een piepsignaal en de kapbeveiliging wordt ontgrendeld. Het piepsignaal blijft klinken totdat de operator ingrijpt. Op het scherm verschijnt 

knipperend het bericht "POS : 1". 

OPMERKING: Gedurende alle migratiesequenties blijft de kap van de migratiemodule vergrendeld. 

18. Open de kap van de migratiemodule. 

19. Pak de applicator aan de plastic bescherming beet en haal deze uit de vochtige kamer. 

- Verwijder de pennenbescherming. 

- Plaats de applicator in positie nr. 1 op de applicatordrager. 

BELANGRIJK: De nummeringen van de applicator moeten altijd naar de operator toe gericht zijn (Fig. 5). 

20. Sluit de kap van de migratiemodule. 

21. Start direct de sequentie door op "START" (groene pijl links op het toetsenbord) te drukken. 

MIGRATIE - BESCHRIJVING VAN DE AUTOMATISCHE SEQUENTIES 

• De elektrodedrager en de applicatordrager worden omlaaggebracht om de geïmpregneerde staven in contact met de gel te brengen. 

• De applicatordrager wordt weer omhooggebracht. 

• Migratie vindt plaats met maximaal 1000 V, bij 20 °C, temperatuurregeling door Peltier-effect tot 700 geaccumuleerde Vh (gedurende vijfenveertig 

minuten). 

• De elektroden worden losgemaakt door de elektrodedrager omhoog te brengen. 

• Er klinkt een piepsignaal en de kapbeveiliging wordt ontgrendeld. Het piepsignaal blijft klinken totdat de operator ingrijpt. Op het scherm verschijnt 

knipperend het bericht " AS" om aan te geven dat het gemerkte antiserum moet bezinken. 

OPMERKING: Gedurende alle migratiesequenties blijft de kap van de migratiemodule vergrendeld. 

II. IMMUNOFIXATIE – HET OPZETTEN 

Gedurende de migratie assembleert u het dynamische masker dat een segment met antiserum bevat als ook een segmenthouder, een geleider voor 

het dynamische masker en een mechanisme om de lengte tot de helft te reduceren (Fig. 6). 

1. Plaats de geleider voor het dynamische masker op een plat oppervlak. 

2. In geval van HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING, positioneert u het mechanisme om de lengte tot de helft te reduceren aan het uiterste 

eind van de geleider voor het dynamische masker. 

3. Breng het segment met antiserum aan op de segmenthouder (Fig. 7): 

- Breng het antiserumsegment onder een hoek van 45° en positioneer het tegen de plastic veren van de segmenthouder. 

- Trek het segment in en draai het tot dat het in de inkepingen in de segmenthouder schiet. 

WAARSCHUWING: Zorg er voor dat het segment op de juiste wijze met de pinnen op de houder is gepositioneerd: de pinnen aan 

de einden van het segment moeten in de inkepingen van de houder steken. 

4. Positioneer de houder met het segment op de geleider van het dynamische masker waarbij het mechanisme om de lengte tot de helft te 

reduceren al in positie is (Fig. 8). 

Breng het reagens alsvolgt aan: 

In geval van HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING, brengt u 20 µL/put aan antiserum anti-Ig G - PER in de putten 4 tot 12. 

In geval van HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING, brengt u 20 µL/put aan antiserum anti-Ig G - PER in elk van de 15 putten. 

Zuig reagens op zonder dat er luchtbelletjes in de tip van de pipet komen. 

5. Breng het reagens aan (Fig. 9): 

- Houdt de pipet onder een hoek en laat de tip licht rusten tegen de rand van het putje zonder de bodem van het putje te raken. 

- Injecteer het gewenste volume reagens in de put. 

III. IMMUNOFIXATIE 

1. Na de migratie opent u het deksel (het flitsen van het bericht stopt). 

2. Verwijder de applicator van het monster en ruim deze op. 

3. Breng de beide dragers omhoog, verwijder de gebufferde strips aan de plastic uiteinden en ruim deze op. 

4. Verwijder de beide dragers. 

5. Vervolgens maakt u de elektroden voorzichtig schoon met een vocht zacht tissue. 

6. U laat de gel in positie in de migratiemodule en u verwijdert het plastic masker aan een hoek en ruimt dit op. 

WAARSCHUWING: Tijdens deze fase mag u de gel niet over het geprinte frame bewegen. 

7. Breng nu het dynamische masker voor de applicatie van het antiserum als volgt op de gel aan (Fig. 10): 

- Positioneer de geleider voor het masker om de bevestigingsclip (de geleider kan gedurende de gehele procedure in de migratiemodule 

blijven). 

- Houd het dynamische masker bij een tab en positioneer het in de geleider met de inkepingen in lijn met de markeringen. 

- Breng nu het dynamische masker op de plaat dan de HYDRASYS. 

- 41 -


- Zorg er voor dat de segmenthouder zich aan het laagste punt van de geleider voor het masker bevindt zodat de persoon die het apparaat 

bedient het kan zien. 

- Houdt de segmenthouder nu bij de handgreep die u vindt aan de rechterzijde en druk vervolgens op het centrale drukpunt zodat het 

antiserumsegment in contact komt met de gel. 

- Verminder de druk; nu zal het reagens zich onder het gehele segment verspreiden (Fig. 11). 

- Beweeg het segment nu onmiddellijk, gebruikmakend van de handgreep aan de houder. Doe dit langzaam maar zeker, omhoog en omlaag 

over e gehele lengte van de gel om het reagens aan te brengen. Herhaal deze fase tweemaal; elke volledige passage van de applicatie zou 

ongeveer 5 seconden moeten duren (Fig. 12). 

- Gedurende deze fase houdt u het masker uitsluitend vast bij de handgreep van de segmenthouder. Zorg er voor dat u de geleider niet 

aanraakt. 

8. Hierna laat u het dynamische masker in de HYDRASYS-kamer met het antiserum segment ter hoogte van het laagste punt van de geleider 

voor het masker. 

9. Sluit nu het deksel van de migratiemodule. 

10. Begin hierna onmiddellijk met de incubatieprocedure door op de "START" toets met de groene pijl te drukken die u vindt aan de linkerzijde 

van uw toetsenbord. Het volgende bericht wordt nu afgebeeld op het scherm: "[INCUBATION]". 

IMMUNOFIXATIE – BESCHRIJVING VAN DE GEAUTOMATISEERDE FASEN 

• Incubatie bij 20 °C, gecontroleerd door het Peltier effect en uitgevoerd gedurende 10 minuten. 

• Een hoorbare toon geeft aan dat het deksel van de migratiemodule geopend wordt. Het volgende bericht verschijnt op het scherm: “ PAP.”. 

OPMERKING: Het deksel van de migratiemodule blijft gedurende de incubatie gesloten. 

IV. HET DROGEN VAN DE GEL 

1. Open het deksel van de migratiemodule. 

2. Verwijder de constructie van het dynamische masker: 

- Neem de segmenthouder weg aan zijn handgreep. 

- Verwijder het segment met antiserum van de houder en ruim dit op. 

WAARSCHUWING: Het segment met het antiserum moet zorgvuldig gehanteerd worden. 

3. Breng nu druk filtreerpapier aan op de gel, met de gladde zijde naar beneden: 

- Zorg er voor dat het filtreerpapier een hoek van ongeveer 45° heeft. Breng de onderzijde van het filtreerpapier in lijn met de rand van de 

gel. 

- Breng het filtreerpapier naar benden op de gel. 

BELANGRIJK: Druk flink op het gehele oppervlak van het filtreerpapier zodat het perfect aan de gel kleeft. 


5. Start de drogingsprocedure door op de "START" toets met de groene pijl aan de linkerzijde van het toetsenbord te drukken). 

DROGING – BESCHRIJVING VAN DE GEAUTOMATISEERDE FASEN 

• Droging bij 20 °C, gecontroleerd door het Peltier effect en uitgevoerd gedurende 3 minuten. Het volgende bericht verschijnt op het scherm: 

"[BLOTTING]". 

• Er klinkt een pieptoon. Het volgende bericht verschijnt knipperend op het scherm: "❊ PAP. + REHYD 1" waarmee wordt aangegeven dat het 

filtreerpapier verwijderd moet worden en dat de eerste oplossing voor rehydratering aangebracht moet worden. 

V. REHYDRATERING VAN DE GEL 


2. Verwijder het filtreerpapier en laat de gel in positie op de plaat in de migratiemodule. 

3. Positioneer het masker R3 voor de applicatie van het reagens in geval van HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING of masker ENZ 4 ml in geval 

van HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING (Fig. 13). 

4. Neem enige oplossing voor rehydratering voor HYDRAGEL CSF FOCUSING in de tip van de pipet zonder luchtbelletjes te vangen. Breng 

4.5 ml van de oplossing aan in geval van HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING of 7 ml in geval van HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING via het 

gat in de mal (Fig. 14). Zorg er voor dat de oplossing gelijkmatig verdeeld wordt over de rechthoekige ruimte onder de mal. 

- Houdt de pipet in de verticale positie. 

- Druk de tip van de pipet lichtjes in het gat in de mal. 

- Breng de vloeistof voorzichtig en gelijkmatig aan onder de mal zonder dat er luchtbelletjes ontstaan. 

5. Hierna sluit u het deksel van de migratiemodule. 

6. Start de incubatieprocedure onmiddellijk door op de "START" toets met de groene pijl te drukken, aan de linkerzijde van het toetsenbord. 

REHYDRATATIE VAN DE GEL – BESCHRIJVING VAN DE GEAUTOMATISEERDE FASEN 


• Er klinkt een pieptoon. Het volgende bericht verschijnt knipperend op het scherm: "❊ REHYD 1 + PAP." waarmee wordt aangegeven dat de 

eerste rehydraterende oplossing verwijderd moet worden door middel van pipetteren en door het gebruik van dik filtreerpapier. 

VI. ELIMINATIE VAN DE REHYDRATERENDE OPLOSSING 


2. Verwijder de rehydraterende oplossing. 

3. Houdt de pipet in verticale positie en druk de tip van de pipet lichtjes in de put (Fig. 14). 

4. Neem het reagens voorzichtig en gelijkmatig weg. 

5. Neem de mal voor de applicatie van het reagens bij de flap, til deze op en verwijder de mal en ruim deze op. Het oppervlak van de gel moet 

nu gerehydrateerd worden. 

VII.DROGING VAN DE GEL 

1. Breng een vel dik filtreerpapier aan op het gerehydrateerde oppervlak van de gel zoals beschreven in § IV. 

2. Druk het gehele oppervlak van het filtreerpapier aan om er voor te zorgen dat deze perfect aan de gel kleeft. 

3. Sluit het deksel van de migratiemodule. 

4. Start de drogingsprocedure door middel van het indrukken van de "START" toets (groene pijl aan de linkerzijde van het toetsenbord). 

- 42 -



• Droging bij 20 °C, gecontroleerd door het Peltier effect en uitgevoerd gedurende 3 minuten. 

• Er klinkt een pieptoon. Het volgende bericht verschijnt knipperend op het scherm: "❊ PAP. + REHYD 2" waarmee wordt aangegeven dat de 

tweede dosis rehydraterende oplossing aangebracht kan worden. 

VIII. REHYDRATATIE VAN DE GEL 


2. Verwijder het filtreerpapier en laat de gel in positie op de plaat in de migratiemodule. 

3. Positioneer het masker R3 voor de applicatie van het reagens in geval van HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING of masker ENZ 4 ml in geval 

van HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING (Fig. 13). 

4. Neem enige oplossing voor rehydratering voor HYDRAGEL CSF FOCUSING in de tip van de pipet zonder luchtbelletjes te vangen. Breng 

4.5 ml van de oplossing aan in geval van HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING of 7 ml in geval van HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING via het 

gat in de mal (Fig. 14). Zorg er voor dat de oplossing gelijkmatig verdeeld wordt over de rechthoekige ruimte onder de mal. 

5. Houdt de pipet in de verticale positie. 

6. Druk de tip van de pipet lichtjes in het gat in de mal. 

7. Breng de vloeistof voorzichtig en gelijkmatig aan onder de mal zonder dat er luchtbelletjes ontstaan. 

8. Hierna sluit u het deksel van de migratiemodule. 

9. Start de incubatieprocedure onmiddellijk door op de "START" toets met de groene pijl te drukken, aan de linkerzijde van het toetsenbord. 

REHYDRATATIE VAN DE GEL – BESCHRIJVING VAN DE GEAUTOMATISEERDE FASEN 


• Er klinkt een pieptoon. Het volgende bericht verschijnt knipperend op het scherm: "❊ REHYD 2 + TTF3" waarmee wordt aangegeven dat de 

eerste rehydraterende oplossing verwijderd moet worden door middel van pipetteren en door het gebruik van dik filtreerpapier. 

IX. ELIMINATIE VAN DE REHYDRATERENDE OPLOSSING 


2. Verwijder de rehydraterende oplossing zoals eerder beschreven in § VI. 

3. Laat de mal in positie. 

X. VISUALISATIE 

1. Breng de TTF3 visualisatieoplossing welke u bereidde net voor het gebruik, in de ruimte onder de mal: 3 ml in geval van HYDRAGEL 3 CSF 

ISOFOCUSING of 3.5 ml in geval van HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING. Volg dezelfde voorzorgsmaatregelen als eerder beschreven. 

2. Neem de TTF3 visualisatieoplossing op in de tip van een pipet zonder luchtbelletjes te vangen. 

Zorg er voor dat de oplossing gelijkmatig wordt verdeeld onder de mal over het gehele rechthoekige oppervlak gecentreerd rond het gat in de 

mal. 


4. Begin hierna onmiddellijk met de incubatieprocedure door op de "START" toets met de groene pijl te drukken die u vindt aan de linkerzijde 

van uw toetsenbord. 

INCUBATION - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 


• Er klinkt een pieptoon. Het volgende bericht verschijnt knipperend op het scherm: "❊ TTF3 + PAP." waarmee wordt aangegeven dat de 

visualisatieoplossing verwijderd moet worden door middel van het gebruik van een vel dik filtreerpapier. 

XI. VERWIJDERING VAN DE VISUALISATIEOPLOSSING 


2. Verwijder de visualisatieoplossing volgens de procedure als eerder beschreven in § VI. 

3. Neem de mal voor de applicatie van het reagens bij de flap, til deze op en verwijder de mal en ruim deze op. 

XII.DROGING VAN DE GEL 

1. Breng een vel dik filtreerpapier aan op het gerehydrateerde oppervlak van de gel zoals beschreven in § IV. 

2. Druk het gehele oppervlak van het filtreerpapier aan om er voor te zorgen dat deze perfect aan de gel kleeft. 

3. Sluit het deksel van de migratiemodule. 

4. Start de drogingsprocedure door middel van het indrukken van de "START" toets (groene pijl aan de linkerzijde van het toetsenbord). 

5. Spoel de mal met gedestilleerd water en droog deze degelijk met zacht absorberend papier. Zorg er voor dat voor hergebruik de mal volledig 

droog is; verwijder druppeltjes uit de putten door met zacht papier te deppen. 

OPMERKING: Alcohol kan ook gebruikt worden op de applicatiemallen R3 of ENZ 4 ml te reinigen na de visualisatiefase met TTF3. 


• Droging bij 30 °C, gecontroleerd door het Peltier effect en uitgevoerd gedurende 3 minuten. 

• Er klinkt een pieptoon. Het volgende bericht verschijnt knipperend op het scherm: "❊ PAP." waarmee wordt aangegeven dat het filtreerpapier 

verwijderd moet worden. 

XIII. DROGING VAN DE GEL 


2. Verwijder het filtreerpapier en laat de gel in positie. 

3. Sluit het deksel van de HYDRASYS. 

4. Start de drogingsprocedure door middel van het indrukken van de "START" toets (groene pijl aan de linkerzijde van het toetsenbord). Het 

volgende bericht verschijnt op het scherm: "[DRYING]". 

- 43 -


DROGEN – BESCHRIJVING VAN DE GEAUTOMATISEERDE FASEN 

• Het drogen van de gel bij 50 °C, gedurende 3 minuten. 

• Er klinkt een pieptoon waarmee wordt aangegeven dat het deksel geopend kan worden. 

• Open het deksel. 

• Verwijder de gedroogde gel. 

OPMERKING: De temperatuur van de plaat daalt tot 20 °C in minder dan 5 minuten. 

- Zodra de 20 °C is bereikt kan een nieuwe migratieprocedure gestart worden. 

- Positioneer het monster op de applicator en breng de elektrodedragers in positie. 

- Veeg de controleplaat voor de temperatuur schoon met een zachte vochtige doek. 

XIV. HET SPOELEN EN AFRONDENDE BEWERKING VAN DE GEL 

Na het drogen wordt de gel gespoeld in het kleuringcompartiment waarbij het “WASH ISOENZ/GEL” programma wordt toegepast. Als de kamer 

voordien werd gebruikt om de proteïne gel te kleuren, dan moet de kamer eerst grondig schoongemaakt worden met behulp van het ”WASH 

CHAMBER” programma. 

1. Open de gelhouder. Leg deze plat en positioneer de gel (met de gelzijde omhoog) in de beide groeven in de beide stangen en sluit de houder. 

Zorg er voor dat de film correct is gepositioneerd in de houder (Fig. 15). 

2. Plaats de gelhouder in de gelverwerking / kleuringmodule. 

BELANGRIJK: Alvorens het gelverwerking / kleuringprogramma te starten moet u het volgende controleren: 

- De container met ontkleuringoplossing bevat ten minste 400 ml ontkleuringoplossing ; 

- De afvalcontainer is leg. 

3. Voor de verbinding met de reagenslijn: U wordt verwezen naar de informatie die wordt afgebeeld op het scherm van het apparaat (selecteer 

de toets: "REAGENT LINES"). 

BELANGRIJK: Vergeet niet om de niet gebruikte lijnen te blokkeren. 

4. Selecteer het spoelprogramma "WASH ISOENZ/GEL" in het menu van het instrument en start de procedure door de "START" toets in te 

drukken (groene pijl aan de rechterzijde van het toetsenbord). 

OPMERKING: Tijdens de spoelen droogfasen blijft het compartiment gesloten. 

Na de koelingsfase klinkt er een hoorbaar piepsignaal wat aangeeft dan het compartiment ontsloten kan worden (de ventilatie wordt in gang 

gehouden totdat de gelhouder verwijderd is). 

5. Neem de gelhouder uit het compartiment, open de clips en verwijder de gedroogde gel. Indien noodzakelijk kunt u de achterzijde (de zijde met 

de plastic steun) van de droge film met een vochtige tissue. De gel is nu gereed voor evaluatie. 

INTERPRETATIE 

De intrathecale synthese binnen het centrale zenuwstelsel [central nervous system] (CNS), wordt geïndiceerd door de aanwezigheid van Ig G banden 

in het immunofixatie patroon van CSF die niet voorkomen in het serumpatroon van dezelfde patiënt (Fig. 16). Zeer zwakke banden zijn altijd aanwezig 

in serum dat wel of niet hetzelfde migratieniveau heeft als die welke waargenomen werden in de CSF. Dergelijke banden zouden eigenlijk buiten de 

interpretatie van de patronen gehouden moeten worden. Zij vertegenwoordigen de heterogeniteit van de serum Ig G’s en kunnen alleen worden 

waargenomen met technieken met een hoge resolutie en hoge gevoeligheid. In theorie is een enkele Ig G band in CSF die afwezig is in het serum 

indicatief zij het enigszins onzeker teken van intrathecale synthese. In de praktijk worden twee of meer banden gezien als een betrouwbare indicatie 

hiervan. Twee of meer banden dienen tevens als ondersteunend bewijs voor multiple sclerosis hoewel er gewoonlijk vier of meer Ig G oligoclonale 

banden aanwezig zijn. Vandaar dat vier banden als indicatie voor MS wordt aanbevolen, hoewel deze eis kan veranderen als er meer gegevens 

worden verzameld. Het moet worden opgemerkt dat het aantal banden in de oligoclonale patronen niet overeenstemt met de ernst en de prognose 

van de bevestigde MS gevallen. Het is om deze redenen dat het aantal banden niet gerapporteerd moet worden om zo verkeerde interpretatie van 

het aantal te vermijden. 

Om correcte vergelijkende interpretatie te garanderen is het van groot belang om de volgende richtlijnen te volgen: 

• Het CSF en de serummonsters moeten tegelijkertijd worden verzameld bij dezelfde patiënt. Enige behandeling die van invloed kan zijn op de 

concentratie van de immunoglobulinen moet vermeden worden. 

• De concentraties CSF en serum Ig G moeten nauwkeurig vastgesteld worden zodat na bijstelling gelijke hoeveelheden van Ig G in CSF en serum 

worden aangebracht op de gel. 

• Als de Ig G concentratie onbekend is dan moet het serum verwerkt worden met een verdunningsfactor van 300 – 400 x en de CSF onverdund. 

Vervolgens moet de ongelijkheid van de Ig G concentraties beschouwd worden voor mogelijke nadelige gevolgen op de interpretatie van de 

patronen. 

De detectie van intrathecale Ig synthese door middel van gevoelige immunofixatie is een meer specifieke en een gevoeliger indicator dan de informatie 

afgeleid uit de verschillende ratio’s berekend uit de totale concentraties CSF en de serum immunoglobulinen, albumine en andere proteïnen. 

Bevestiging van intrathecale Ig synthese is belangrijke informatie op basis waarvan een ontstekingsziekte in het CNS vermoed kan worden. Het 

oligoclonale profiel of enige andere indicatie van de intrathecale synthese van Ig G kan bij verschillende ziekten van het centrale zenuwstelsel 

gevonden worden, zoals: 

• 95 % van multiple sclerosis, 

• 100 % van onbehandelde neurosyphilis, 

• 100 % van subacute scleroterende leucoencephalitis. 

Niet veel voorkomend, kan de indicatie van intrathecale synthese van Ig G ook gevonden worden bij vele ziekten in het CNS, gewoonlijk geassocieerd 

met ontstekingen, zoals infecties, periferale neuropathien, neoplasmen, cerebrovasculaire accidenten, etc. 

De diagnose moet niet uitsluitend gebaseerd zijn op de bevindingen uit immunofixatie. Deze bevindingen moeten beschouwd worden in samenhang 

met de klinische observaties en geschiedenis, en gecomplementeerd worden door biochemische, microbiologische en cytologische testen. 

- 44 -


Interferentie en beperkingen 

Zie MONSTERS VOOR ANALYSE. 

Het gebruik van antiserum anders dan het voor gebruik met HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING procedures met het dynamische masker 

ontwikkelde antiserum, kan de resultaten beïnvloeden. 

Vanwege de beperking aan de resolutie en de gevoeligheid van de elektroforese, is het mogelijk dat sommige oligoclonale componenten met deze 

methode niet worden waargenomen. 

Troubleshooting 

Als de uitvoering van een test in navolging van de instructies voor de preparatie en de opslag van materialen, niet lukt, terwijl de procedure stipt werd 

gevolgd dan adviseren wij u om contact op te nemen met de Technische Dienst van uw leverancier. 

De technische dienst van de leverancier kan eveneens zorgen voor de Safety Data Sheets voor de reagentia in de Kits en informatie over de 

verwerking van afvalproducten. 

RELEVANTE TESTRESULTATEN 

Reproduceerbaarheid 

Reproduceerbaarheid op gels 

CSF en serummonsters van vier patiënten werden elk toegepast in alle 18 tracks van de HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING gels uit twee partijen 

(twee paren met intrathecale synthese en twee paren zonder intrathecale synthese). 

Reproduceerbaarheid van Gel-tot-gel en van partij-tot-partij 

Acht CSF – serum paren werden toegepast op elk van de tien gels HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING uit dezelfde partij en twee gels van een andere 

partij (zes paren met intrathecale synthese en twee paren zonder intrathecale synthese). 

Resultaten: 

Bij de visuele beoordeling, in alle reproduceerbaarheidstudies werd de aanwezigheid / afwezigheid van de oligoclonale banden correct gedetecteerd 

in elk monster en op alle gels met anti-Ig G – PER antiserum, er waren geen foute positieven / negatieven en er werden geen verschillen waargenomen 

bij de herhalingen. 

Nauwkeurigheid - Detectie en identificatie van oligoclonale banden 

CSF en serummonsters van patiënten met verschillende ziekten in het centrale zenuwstelsel (n = 108) werden geanalyseerd met gebruikmaking van 

de standaard HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING kit, materialen en de procedure, parallel met een commercieel beschikbaar systeem voor 

elektroforetische immunofixatie geschikt voor de detectie van Ig G oligoclonale banden. De elektroforegrammen werden visueel geëvalueerd op de 

aanwezigheid van Ig G oligoclonale banden. 

Er was algemene overeenstemming voor wat betreft de detectie van oligoclonale banden tussen de beide tests. De sporadische verschillen die werden 

geobserveerd werden toegeschreven aan de grotere resolutie die de HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING procedure biedt. De resultaten waren 

consistent met de klinische diagnose, indicatie van intrathecale synthese en bloed-hersenbarriere beschadiging. 

Gevoeligheid 

De gevoeligheid van de HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING procedure werd vastgesteld door middel van seriële verdunning van een monoclonaal 

Ig G proteïne, 20 mg/l. De detectielimiet van een Ig G monoclonale band werd vastgesteld op 0.31 mg/l. 

BIBLIOGRAFIE 
























1994, 397 pp. 




- 45 -











1994, 54 : 75-80. 



- 46 -


UTILIZZO 

I kits HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING e HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING sono stati progettati per la rivelazione qualitativa e l’identificazione 

delle bande oligoclonali evidenziate sui profili elettroforetici del liquido cefalorachidiano umano (LCR o CSF: cerebrospinal fluid) e la conferma della 

loro natura immunoglobulinica. La tecnica utilizzata è l’isoelettrofocalizzazione su gel di agarosio nel sistema semi-automatico HYDRASYS, 

completata da un’immunofissazione con un antisiero anti-Ig G marcato alla perossidasi. L’utilizzo di questo antisiero permette di aumentare la 

sensibilità di rivelazione delle bande oligoclonali Ig G del CSF senza previa concentrazione. I profili di immunofissazione del CSF e del siero dello 

stesso paziente sono comparati visivamente. Ciò permette la rivelazione di bande oligoclonali che rappresentano la sintesi intratecale di 

immunoglobuline. 

I kits HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING e HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING sono raccomandati se si sospettano delle malattie del sistema nervoso 

centrale (SNC), quali la sclerosi multipla. La rivelazione di bande oligoclonali e di un processo infiammatorio (sintesi intratecale di immunoglobuline) 

può essere un prezioso aiuto per la diagnosi. 

Per uso diagnostico in vitro. 

PRINCIPIO DEL TEST 

Molte malattie del sistema nervoso centrale sono associate ad un aumento di concentrazione delle proteine nel CSF. Questo può essere dovuto o ad 

un aumento della permeabilità della barriera emato-encefalica o ad una sintesi di immunoglobuline, principalmente Ig G, all’interno del sistema 

nervoso centrale (SNC). In quest’ultimo caso, questa sintesi intratecale di immunoglobuline, è spesso associata ad una restrizione di eterogeneità che 

si presenta come un quadro oligoclonale rivelato nella zona gamma delle migrazioni elettroforetiche ad alta risoluzione. Anche bande che non 

corrispondono a delle immunoglobuline possono anche essere presenti nella zona delle gammaglobuline, ma queste non hanno lo stesso significato 

diagnostico. L’immunofissazione è la tecnica ideale che permette di confermare il carattere immunoglobulinico delle bande oligoclonali, di identificare 

le immunoglobuline implicate e di fornire la specificità diagnostica necessaria al test. 

Dato che la ripartizione oligoclonale delle Ig G ha un significato diagnostico in routine, il test SEBIA è particolarmente raccomandato per la rivelazione 

delle bande oligoclonali d’Ig G, con l’utilizzo di un antisiero specifico anti-Ig G. 

La presenza d’Ig G intratecali suggerisce una malattia infiammatoria del sistema nervoso centrale, causata, per esempio, da una sclerosi multipla. 

Anche se un quadro oligoclonale non è specifico di questa malattia, la sua presenza è largamente utilizzata come complemento di informazione 

importante per la diagnosi e la sua messa in evidenza è considerata come un test essenziale nel Consenso definito nel 1994 dal “Comitato di Azione 

Europea Concertata sulla Sclerosi Multipla”. Si tratta di un test di conferma nei pazienti che hanno degli episodi clinici di sclerosi multipla e di un test 

indicativo nei pazienti che hanno avuto soltanto qualche episodio di sclerosi o dei sintomi clinici non conclusivi. 

I criteri di selezione proposti dal Comitato per la rivelazione delle bande oligoclonali Ig G nel CSF sono i seguenti: 

1. La tecnica più sensibile e più risolutiva per la rivelazione delle Ig G oligoclonali è l’isoelettrofocalizzazione, 

2. Le Ig G oligoclonali devono essere rivelate utilizzando un antisiero specifico, 

3. Per confermare la sintesi intratecale delle Ig G, il siero e il CSF del paziente devono essere analizzati in parallelo per distinguere le differenze di 

profilo di distribuzione delle Ig G, 

4. Per rendere agevole l’interpretazione, le concentrazioni di Ig G del siero e del CSF devono essere uguali, 

5. La concentrazione del CSF deve, se possibile, essere evitata. 

La tecnica HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING rispetta perfettamente questi criteri. 

L’analisi è effettuata in 2 tappe: 

• isoelettrofocalizzazione su gel d’agarosio per separare le proteine del CSF e del siero, 

• immunofissazione con un antisiero anti-Ig G marcato alla perossidasi per rivelare le bande oligoclonali d’Ig G e per dimostrare la differenza o la 

similitudine della distribuzione delle Ig G nel CSF e nel siero. 

Rispetto all’immunofissazione standard, la sensibilità di rivelazione della tecnica HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING è aumentata di circa 

100 volte grazie all’utilizzo di antisieri marcati con un enzima. In tal modo, con una concentrazione di Ig G superiore o uguale a solamente 10 mg/L, 

le Ig G e la loro distribuzione possono essere rivelate e distinte senza concentrare il campione di CSF. 

Il sistema semi-automatico HYDRASYS realizza tutte le tappe necessarie ad ottenere dei gels pronti per l’interpretazione. 

Ogni gel d’agarosio contenuto nel kit HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING è composto da 6 piste e permette quindi un’analisi comparata delle Ig G di 

3 coppie CSF/siero. 

Ogni gel d’agarosio contenuto nel kit HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING è composto da 18 piste e permette quindi un’analisi comparata delle Ig G 

di 9 coppie CSF/siero. 

REAGENTI E MATERIALI FORNITI NEI KITS 3 CSF ISOFOCUSING AND HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING 

COMPONENTI REF. 4353 REF. 4355 Gels di agarosio (pronti all’uso) 10 gels 10 gels Soluzione di etilen glicole (pronta all’uso) 1 flacone, 3 mL 1 flacone, 3 mL Soluzione anodica (pronta all’uso) 1 flacone, 50 mL 1 flacone, 50 mL Soluzione catodica (pronta all’uso) 1 flacone, 50 mL 1 flacone, 50 mL Strisce (da imbibire) 10 confezioni da 2 10 confezioni da 2 Diluente per campione CSF (pronto all’uso) 1 fl. da 85 mL 1 fl. da 85 mL Diluente per antisiero CSF ISOFOCUSING (pronto all’uso) 1 fl. da 3.75 mL 1 fl. da 3.75 mL Soluzione reidratante (pronta all’uso) 2 fl. da 70 mL 2 fl. da 70 mL Solvente TTF3 (pronto all’uso) 2 fl. da 20 mL 2 fl. da 20 mL TTF3 (soluzione concentrata) 2 fl. da 0.5 mL 2 fl. da 0.5 mL Applicatori (pronti all’uso) 1 conf da 10 (6 denti) 1 conf da 10 (18 denti) Recipienti per imbibizione (pronti all’uso) 1 confezione da 2 1 confezione da 2 Barrette antisieri (pronte all’uso) 1 confezione da 10 1 confezione da 10 Cartine da filtro sottili 1 confezione da 10 1 confezione da 10 Cartine da filtro spesse 3 confezione da 10 3 confezione da 10 

| Mascherine di plastica | 1 confezione da 10 | 1 confezione da 10 | 

- 47 - 

FOGLIO DI ISTRUZIONI SEBIA - Italiano

PER RISULTATI OTTIMALI. 

I componenti di uno stesso kit devono sempre essere utilizzati insieme, in accordo con le istruzioni contenute nel kit. 

LEGGERE ATTENTAMENTE LE ISTRUZIONI PER L’USO. 


1. GELS DI AGAROSIO 

Preparazione 

I gels di agarosio sono pronti all’uso. Ogni gel di agarosio contiene: agarosio, 1 g/dL ; anfoliti ; additivi, non rischiosi alle concentrazioni usate, necessari 

per un’analisi ottimale. 

Utilizzo 

Mezzo di supporto per isoelettroforesi ed immunofissazioni proteiche. 

Conservazione, stabilità e segni di deterioramento 

Conservare i gels orizzontalmente, nella confezione originale protettiva e in frigorifero (2 - 8°C). I gels sono stabili fino alla data di scadenza indicata 

sulla scatola del kit o sulla confezione del gel. (La freccia sulla scatola del kit deve essere rivolta verso l’alto). 

Evitare la conservazione in prossimità di finestre o di fonti di calore. Evitare che durante la conservazione il kit subisca importanti variazioni di 

temperatura. 

NON CONGELARE. 

Non utilizzare il gel quando: 

(i) sono presenti cristalli o precipitati sulla superficie del gel oppure la struttura del gel è divenuta molto molle (entrambe conseguenze del 

congelamento del gel), 

(ii) è presente muffa o flora batterica, 

(iii) è presente, nella scatola che contiene il gel, una quantità anormale di liquido (risultato di una fuoriuscita del tampone dal gel dovuta a condizioni 

di conservazione improprie). 

2. SOLUZIONE DI ETILEN GLICOLE 

Preparazione 

La soluzione di etilen glicole è pronta all’uso. 

AVVERTENZA: Nociva se ingerita. 

Utilizzo 

Per permettere un contatto efficace tra la plastica del gel e il piatto di controllo della temperatura del modulo di migrazione durante la migrazione 

elettroforetica. 


Conservare la soluzione di etilen glicole a temperatura ambiente o refrigerata. E’ stabile fino alla data di scadenza indicata sulla scatola del kit o sulla 

etichetta del flacone di etilen glicole. 

3. SOLUZIONI ANODICA E CATODICA 

Preparazione 

La soluzione anodica (acida) e catodica (basica) sono pronte all’uso. Contengono entrambi additivi, non rischiosi alle concentrazioni usate, necessari 

per un’analisi ottimale. 

NOTA: La soluzione anodica è colorata in rosso per rendere più agevole il monitoraggio della sua applicazione e per una facile identificazione della 

striscia anodica pronta. 

ATTENZIONE: La soluzione catodica contiene idrossido di sodio. Irritante per gli occhi e la pelle. In caso di contatto con gli occhi lavare 

immediatamente e abbondantemente con acqua e consultare un medico. 

Utilizzo 

Come elettroliti per preparare le strisce per l’isoelettrofocalizzazione. 

IMPORTANTE: Dopo ogni uso, chiudere immediatamente e con forza il flacone contenente la soluzione catodica per evitare la carbonatazione di 

questa soluzione. 


Le soluzioni anodica e catodica possono essere conservate a temperatura ambiente o refrigerate e sono stabili fino alla data di scadenza indicata 

sulla scatola del kit o sulle etichette dei flaconi delle soluzioni. 

4. STRISCE 

Preparazione 

Imbibire le due strisce spugnose rispettivamente con la soluzione anodica e catodica 5 minuti prima dell’uso: 

Porre il recipiente grigio per la striscia anodica e il recipiente blu per la striscia catodica su di una superficie piana. 

Dispensare 5 mL di soluzione anodica rossa nel contenitore grigio e 5 mL di soluzione catodica non colorata nel contenitore blu. 

Aprire la confezione di strisce, manipolarle dalle estremità di plastica e porne una in ciascuno dei due recipienti. 

Imbibire le strisce premendo diverse volte con il puntale di una pipetta. 

Utilizzare le strisce imbibite immediatamente. 

IMPORTANTE: Le strisce devono essere imbibite al momento dell’utilizzo per evitare la carbonatazione della soluzione catodica. 

Utilizzo 

Le strisce imbibite rispettivamente con le soluzioni di elettroliti anodici e catodici assicurano il contatto tra il gel e gli elettrodi e determinano l’intervallo 

di pH durante la focalizzazione. 


Le strisce umide ma non imbibite possono essere conservate a temperatura ambiente o in frigorifero. 

Devono essere conservate orizzontalmente nella loro confezione protettiva (la freccia sul davanti del kit deve essere puntata verso l’alto). 

Sono stabili fino alla data di scadenza indicata sul kit o sulla confezione delle strisce. NON CONGELARE. 

Eliminare le strisce se la confezione è aperta o se le strisce sono secche. 

- 48 -

5. DILUENTE DEL CAMPIONE CSF 


Preparazione 

Il diluente è pronto all’uso. Contiene: soluzione salina ; albumina bovina ; sodio azide ed additivi, non rischiosi alle concentrazioni utilizzate, necessari 

per ottimizzare un’analisi ottimale. 

Utilizzo 

Per la diluizione dei campioni di siero e CSF. 


Conservare il diluente in frigorifero (2 - 8 °C). Il diluente è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla confezione del kit o sulla etichetta del diluente. 

Il diluente deve essere privo di precipitato. 

6. DILUENTE PER ANTISIERO CSF ISOFOCUSING 

Preparazione 

Il diluente è pronto all’uso. Contiene additivi, non rischiosi alle concentrazioni utilizzate, necessari per un’analisi ottimale. 

Utilizzo 

Per la diluizione degli antisieri, immediatamente prima dell’uso. 


Conservare il diluente a temperatura ambiente o in frigorifero. Il diluente è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla confezione del kit o sulla 

etichetta del diluente. Il diluente deve essere privo di precipitato. 

NOTA: Durante la conservazione, il diluente per antisiero può ingiallire leggermente, senza che ciò abbia delle conseguenze sulla qualità del test. 

7. SOLUZIONE REIDRATANTE 

Preparazione 

La soluzione reidratante è pronta all’uso. Contiene additivi, non rischiosi alle concentrazioni utilizzate, necessari per un’analisi ottimale. 

Utilizzo 

Per reidratare il gel di agarosio prima e dopo la fase di visualizzazione basata sulla perossidasi. 


La soluzione reidratante può essere conservata a temperatura ambiente o in frigorifero ed è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla confezione 

del kit o sull’etichetta della soluzione. La soluzione reidratante deve essere priva di precipitato. 

8. SOLVENTE TTF3 

Preparazione 

Il solvente TTF3 è pronto all’uso. Contiene additivi, non rischiosi alle concentrazioni utilizzate, necessari per un’analisi ottimale. 

Utilizzo 

Per preparare la soluzione di visualizzazione TTF3, come descritto al punto 9. 


Il solvente TTF3 può essere conservato a temperatura ambiente o in frigorifero ed è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla confezione del kit 

o sull’etichetta del solvente. Il solvente TTF3 deve essere privo di precipitato. 

9. TTF3 

Preparazione 

Preparare la soluzione di sviluppo appena prima dell’uso. Aggiungere i reagenti nel seguente ordine: 4 ml di solvente TTF3, 100 µl di TTF3 e 4 µl di 

perossido di idrogeno (H 2 

O 2 

) 30%. 

AVVERTENZA: Il TTF3 contiene dimetilformammide. Nocivo per inalazione! In caso di insufficiente ventilazione, indossare un appropriato 

dispositivo di protezione respiratoria. Non ingerire! Se ingerito consultare immediatamente un medico. Nocivo a contatto con la pelle. 

Indossare appropriati indumenti protettivi. Irritante per gli occhi. In caso di contatto con occhi o pelle, sciacquare immediatamente ed 

abbondantemente con acqua e consultare un medico. Evitare l’esposizione, prima dell’uso fornirsi di istruzioni specifiche. Può provocare 

il cancro. Se accusate dei disturbi, consultare immediatamente un medico (mostrando l’etichetta del prodotto se possibile). 

Utilizzo 

Per la visualizzazione delle immunoglobuline separate per isoelettrofocalizzazione grazie all’antisiero marcato con la perossidasi. 


Conservare il TTF3 a temperatura ambiente o in frigorifero. La soluzione TTF3 è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla scatola del kit o sull’ 

etichetta del flacone. La soluzione TTF3 deve essere priva di precipitato. 

10. APPLICATORI 

Utilizzo 

Applicatori monouso, pretagliati, per l’applicazione dei campioni sul gel. 


Conservare gli applicatori in un posto asciutto a temperatura ambiente o in frigorifero. 

11. RECIPIENTI PER IMBIBIZIONE 

Utilizzo 

Recipienti colorati riutilizzabili per la preparazione delle strisce anodiche e catodiche. 

Il recipiente grigio è destinato alla striscia anodica e il recipiente blu è destinato alla striscia catodica. 

Lavare i recipienti con acqua distillata o demineralizzata dopo ogni utilizzo e asciugarli. 


Conservare i recipienti puliti su di una superficie piana a temperatura ambiente. 

- 49 -

12. BARRETTE ANTISIERI 

Utilizzo 

Barrette colorate monouso, per la stratificazione sul gel dell’ antisiero per l’immunofissazione con la maschera dinamica. 

AVVERTENZA : Le barrette con gli antisieri devono essere manipolate con precauzione. 


13. CARTINE DA FILTRO – SOTTILI 

Utilizzo 

Cartine assorbenti sottili, pretagliate, monouso per l’eliminazione dell’eccesso di liquido dalla superficie del gel prima dell’applicazione dei campioni. 

Conservazione 

Conservare le cartine da filtro sottili in un posto asciutto a temperatura ambiente o in frigorifero. 

14. CARTINE DA FILTRO SPESSE 

Utilizzo 

Cartine assorbenti spesse, pretagliate, monouso, per l’eliminazione dal gel delle proteine non precipitate dopo le fase di immunofissazione e 

reidratazione. 

Conservazione 

Conservare le cartine da filtro spesse in un posto asciutto a temperatura ambiente o in frigorifero. 

15. MASCHERINE PLASTICHE 

Utilizzo 

Fogli plastici, monouso, per proteggere il gel dall’evaporazione durante la migrazione elettroforetica. 

APPARECCHIATURE ED ACCESSORI RICHIESTI 

1. Sistema HYDRASYS SEBIA, REF. 1211 con l’OPZIONE FOCUSING HYDRASYS SEBIA, REF. 1235. 

oppure 

2. Sistema HYDRASYS FOCUSING SEBIA, REF. 1212. 

3. Dispensatore manuale, o in alternativa, per il caricamento degli applicatori dei campioni e delle barrette antisieri, campionatore automatico 

HYDRAPLUS SEBIA, REF. 1216 oppure HYDRAPLUS 2 SEBIA, REF. 1217. 

4. Camera umida, REF. 1270, fornita con HYDRASYS. 

5. Barra metallica per il fissaggio della maschera SEBIA, fornita con HYDRASYS. 

6. Maschera dinamica, SEBIA, REF. 1255 

7. Kit di accessori HYDRASYS CSF ISOFOCUSING SEBIA, REF. 1258. Contiene: le maschere per l’applicazione dei reagenti R3 e ENZ 4 mL e il 

dispositivo per la riduzione di corsa. 

8. Bidoni di plastica forniti con il sistema HYDRASYS. 

9. Pipette: 2 µl, 20 µl, 100 µl e 200 µl e 5 mL. 

REAGENTI RICHIESTI MA NON FORNITI 

1. ANTISIERO ANTI-Ig G-PER 

Preparazione 

Il flacone di antisiero (SEBIA REF. 4743: 1 flacone da 0.60 ml) contiene una soluzione concentrata di antisiero di mammifero anti immunoglobuline 

umane, coniugato con perossidasi, con specificità per le Ig G. Per una facile identificazione e come aiuto nel controllo della sua corretta applicazione, 

l’antisiero è colorato con un colorante atossico; tale colore è riportato sull’etichetta del flacone. 

Preparare la soluzione appena prima dell’uso. 

Per HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING: 25 µl anti-Ig G-PER e 175 µL di diluente antisiero. 

Per HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING: 40 µl anti-Ig G-PER e 300 µL di diluente antisiero. 

Miscelare bene prima dell’uso. 

Utilizzo 

Per l’immunofissazione e la visualizzazione delle Ig G dopo isoelettrofocalizzazione. 


Conservare l’antisiero in frigorifero (2 - 8 °C). L’antisiero è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla etichetta del flacone. Non utilizzare e gettare 

se muta di aspetto, es., se diventa torbido a causa di contaminazione batterica. 

NOTA: Gli antisieri possono originare da differenti specie animali. Non mescolare due flaconi di antisieri diversi, anche con la stessa specificità e 

cambiare SEMPRE il puntale della pipetta per ogni flacone di antisiero. 

Durante il trasporto gli antisieri possono essere mantenuti a temperatura non refrigerata (15 - 30 °C) per 15 giorni senza effetti negativi sulle 

prestazioni. 

2. PEROSSIDO DI IDROGENO: H 2 

O 2 

, 110 volumi (30 %). 

L’acqua ossigenata deve essere conservata al riparo dalla luce ed in frigorifero (tra 2 e 8 °C). Ad ogni prelievo, utilizzare una pipetta perfettamente 

pulita al fine di evitare ogni possibile contaminazione della soluzione. 

3. SOLUZIONE DECOLORANTE 

Preparazione 

Ogni flacone di Soluzione Decolorante concentrata (SEBIA, REF. 4540, 10 flaconi da 100 ml ciascuno) deve essere diluito a 100 litri con acqua 

deionizzata o distillata. Per convenienza diluire solo 5 ml di soluzione concentrata a 5 litri, ossia al volume della tanica della soluzione decolorante. 

Dopo la diluizione la soluzione decolorante contiene: acido citrico, 50 mg/dL. 

- 50 -


Utilizzo 

Per lavare il gel dopo la visualizzazione enzimatica e per asciugare e lavare il compartimento di colorazione dell’HYDRASYS. 

Per neutralizzare l’acidità della soluzione decolorante versare, nella tanica vuota dei liquidi reflui, 15 mL di una soluzione al 50 % di Idrossido di Sodio. 


Conservare la soluzione decolorante concentrata a temperatura ambiente o in frigorifero. La soluzione concentrata è stabile fino alla data di scadenza 

indicata sulla scatola del kit o sull’etichetta del decolorante. La soluzione diluita del decolorante è stabile per una settimana a temperatura ambiente 

in flacone chiuso. Per prevenire le proliferazioni microbiche nella soluzione decolorante diluita, in caso di conservazione per più di una settimana, 

aggiungere 5 µL/dL di ProClin 300. 

La soluzione decolorante diluita con ProClin è stabile in un flacone chiuso a temperatura ambiente o in frigorifero fino alla data di scadenza indicata 

sulla scatola del kit o sulla etichetta del decolorante. 

Non aggiungere sodio azide. 

Eliminare la soluzione decolorante diluita se muta di aspetto, per esempio, diviene torbida a causa di contaminazioni batteriche. 

4. SOLUZIONE DI LAVAGGIO HYDRASYS 

Preparazione 

Ogni flacone di Soluzione di Lavaggio concentrata HYDRASYS (SEBIA, REF. 4541, 10 flaconi da 80 ml ciascuno) deve essere diluito a 5 litri con 

acqua distillata o deionizzata. 

Dopo la diluizione la soluzione di lavaggio contiene: tampone alcalino pH 8.8 ± 0.3 ; sodio azide. 

AVVERTENZA: La soluzione di lavaggio concentrata contiene 0.625 % di sodio azide. Non ingerire! Se ingerita consultare immediatamente 

un medico! La sodio azide può portare alla formazione di composti tossici o esplosivi se posta a contatto con acidi, piombo o rame. Quando 

smaltita, fare scorrere un’abbondante quantità di acqua. 

Utilizzo 

La soluzione di lavaggio HYDRASYS ha la funzione di lavare il compartimento di colorazione di HYDRASYS. Usare periodicamente ; per esempio, 

se lo strumento è usato giornalmente lavare il compartimento di colorazione settimanalmente. 

Consultare l’inserto nella confezione per la procedura di utilizzo. 


Conservare sia la soluzione di lavaggio concentrata che quella diluita a temperatura ambiente o in frigorifero in contenitore chiuso. Entrambe le 

soluzioni sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulla etichetta del flacone della soluzione di lavaggio. 

Eliminare la soluzione di lavaggio diluita se muta di aspetto, per esempio, diviene torbida a causa di contaminazioni batteriche. 

CAMPIONI PER L’ANALISI 

Raccolta e conservazione del campione 

Sieri e CSF dello stesso paziente devono essere prelevati contemporaneamente seguendo la procedura convenzionale per i test clinici di laboratorio. 

Si raccomanda di eseguire l’analisi su campioni di siero e CSF freschi. I campioni possono essere conservati a 2 - 8 °C fino ad una settimana. Per 

conservazioni più lunghe, congelare i campioni. I campioni di siero e CSF congelati sono stabili almeno 1 mese. 

Preparazione del campione 

• Misurare la concentrazione di Ig G nel siero e nel CSF utilizzando le appropriate procedure. 

• La concentrazione di Ig G nei CSF e nei sieri corrispondenti dovrebbe essere normalizzata allo stesso livello. 

La normalizzazione dipende dalla concentrazione originaria delle Ig G del CSF; utilizzare il diluente del campione per tutte le diluizioni: 

Caso 1: La concentrazione della Ig G nel CSF è superiore a 2 mg/dL. 

Diluire CSF e siero con il diluente del campione fino ad ottenere una concentrazione pari a 2 mg/dL. 

Caso 2: La concentrazione della Ig G nel CSF è compresa tra 1 e 2 mg/dL. 

Utilizzare il CSF intero e diluire il siero alla stessa concentrazione del CSF. 

Caso 3: La concentrazione della Ig G nel CSF è inferiore a 1 mg/dL 

Concentrare il CSF con un dispositivo appropriato per ottenere una concentrazione della Ig G tra 1 e 2 mg/dL. Diluire il siero fino ad ottenere la stessa 

concentrazione di Ig G del campione di CSF concentrato. 

Calcolo delle diluizioni (solo per campioni con una concentrazione della Ig G superiore a 2 mg/dL): 

Per il CSF: 

A = concentrazione della Ig G in mg/dL. 

Prelevare 20 µl di CSF mescolarli con 10(A - 2) µl di diluente per il campione. 

Per il siero: 

B = concentrazione della Ig G in mg/dL. 

Diluire il siero 10 volte con il diluente per il campione, es., 10 µl di siero e 90 µl di diluente per il campione. 

Prelevare y µl di siero diluito ed aggiungere [y (B/20 - 1)] µl di diluente per il campione (per un volume suggerito di y = 2 µl , aggiungere [(B/10)-2] µl 

di diluente per il campione). 

Quando la concentrazione delle Ig G non è nota: 

Utilizzare il CSF intero e diluire il siero 300 - 400 volte. 

NOTA: La mancata normalizzazione nei campioni di CSF e siero alla stessa concentrazione di Ig G può avere conseguenze sull’interpretazione dei 

profili – vedere “INTERPRETAZIONE” 

- 51 -


PROCEDURA 

Il sistema HYDRASYS è uno strumento multiparametrico semi-automatico. Le fasi automatiche consistono nel trattamento dei gels di agarosio 

HYDRAGEL nella seguente sequenza: applicazione deI campioni, migrazione elettroforetica per isoelettrofocalizzazione, incubazione con l’antisiero 

coniugato alla perossidasi, incubazione con il substrato, blocco della reazione enzimatica, asciugatura ed essiccazione finale del gel. Le fasi manuali 

consistono nella manipolazione dei campioni, dei gels, l’applicazione dei reagenti e la preparazione dello strumento per l’uso. 

LEGGERE ATTENTAMENTE IL MANUALE DI ISTRUZIONE DI HYDRASYS. 

IMPORTANTE: Verificare che la maschera dinamica sia stata regolata correttamente per un allineamento perfetto tra i profili elettroforetici ed i pozzetti 

della maschera. 

I. MIGRAZIONE 

1. Accendere lo strumento HYDRASYS. 

2. Selezionare la modalità “Alto voltaggio 1000 V”, richiesta per l’isoelettrofocalizzazione, premendo il bottone verde per l’alto voltaggio; 

l’interruttore diventa quindi rosso. 

NOTA: L’interruttore per l’alto voltaggio mostra anche le informazioni relative alla migrazione. Durante la migrazione, per pressioni successive, 

l’interruttore mostra, alternativamente, o i valori dei volt ora (Vh) e della corrente (mA) o i valori del voltaggio (V) e della potenza (W). 

Quando HYDRASYS è in modalità alto voltaggio, lo schermo dell’HYDRASYS indica le intensità di corrente reali, ma gli altri valori (voltaggio, 

volt ora e potenza) sono divisi per 10. 

3. Posizionare un applicatore a 6 denti per HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING o un applicatore a 18 denti per HYDRAGEL 9 CSF 

ISOFOCUSING su di una superficie piana con i numeri dei pozzetti orientati verso l’alto. 

4. Applicare 10 µl di campione in ogni pozzetto dell’applicatore (Fig. 1). Caricare l’applicatore entro 2 minuti. 

L’esempio seguente mostra l’analisi di tre coppie CSF-siero su di un gel HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING e nove coppie CSF-siero su di 

un gel HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING, grazie ad un siero anti- Ig G – PER. 


| CSF | SIERO | CSF | SIERO | 

Pozzetto No. Pozzetto No. Paziente No. (applicatore 6 denti) | (applicatore 18 denti) | 

1 1 2 1 2 2 3 4 3 4 3 5 6 5 6 4 - - 7 8 5 - - 9 10 6 - - 11 12 7 - - 13 14 8 - - 15 16 | 9 | - | - | 17 | 18 | 

- Inserire immediatamente l’applicatore nella camera umida, con i dentini rivolti verso l’alto (maneggiare l’applicatore con precauzione 

mediante la cornice protettiva in plastica). 

Consultare l’inserto all’interno della confezione della camera umida per le modalità d’uso. 

Prima di eseguire l’applicazione dei campioni sul gel, deve essere effettuata una fase di premigrazione fino all’accumulo di 75 Vh, 

secondo le seguenti indicazioni: 

5. Aprire lo sportello del modulo di migrazione ed alzare le cornici mobili porta elettrodi e porta applicatori. 

AVVERTENZA: Non chiudere mai lo sportello se le cornici mobili sono alzate. 

6. Selezionare dal menù dello strumento (lato sinistro della tastiera) il programma di migrazione "3/9 CSF FOCUSING". 

7. Imbibire le strisce con le soluzioni anodica e catodica (ved. paragrafo 4 della sezione “REAGENTI E MATERIALI FORNITI”). Estrarre le strisce 

tamponate dai contenitori; maneggiarle mediante le estremità in plastica. 

8. Agganciare le estremità in plastica forate agli spinotti della cornice porta elettrodi (Fig. 2): 

- Quando il carrello è rialzato, la striscia anodica rossa è posta sull’elettrodo inferiore (anodo) del carrello e la striscia catodica non colorata 

è posta sull’elettrodo superiore (catodo). 

- Il lato della striscia fissato sulle estremità in plastica della striscia è in contatto con l’elettrodo. 

9. Estrarre il gel dalla confezione. 

10. Asciugare il dorso del gel (supporto in plastica) con un tessuto o con carta bibula. 

11. Eliminare l’eccesso di liquido dalla superficie del gel applicando una carta da filtro sottile per 3 secondi. 

12. Dispensare, sul terzo inferiore del riquadro stampato sulla Piastra di Controllo Temperatura del modulo di migrazione, 150 µl di etilen glicole 

per HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING o 300 µl per HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING. 

13. Posizionare la lastrina del gel (gel rivolto verso l’alto) con l’estremità inferiore a ridosso dello scalino alla base del riquadro (Fig. 3). 

Curvare il gel ed adagiarlo sulla goccia di etilen glicole, che deve distribuirsi uniformemente sotto la lastrina. Sollevare leggermente il gel per 

eliminare le bolle d’aria eventualmente rimaste intrappolate e quindi appoggiare il gel in modo che sia totalmente a contatto con il piatto di 

migrazione. La soluzione di etilen glicole deve estendersi sotto tutta la superficie del gel. 

14. Posizionare la mascherina plastica sul gel: 

- Prendere una mascherina plastica. 

- Allineare il lato inferiore della mascherina plastica con il livello superiore dei due rettangoli neri stampati agli angoli della serigrafia del gel 

(Fig. 4). 

- Adagiare la mascherina plastica sulla superficie del gel. Evitare di intrappolare bolle d’aria tra il gel e la mascherina. 

- Rimuovere eventuali bolle d’aria rimaste intrappolate tra il gel e la mascherina, sollevando immediatamente la mascherina dall’estremità più 

vicina a queste bolle fino alla loro completa eliminazione ed adagiarlo nuovamente con delicatezza. 

- Evitare di spostare il gel sul piano di migrazione durante questa manipolazione. 

AVVERTENZA: La mascherina plastica non deve essere posizionata al di sotto dei due rettangoli neri stampati agli angoli della 

serigrafia del gel. 

- 52 -


15. Abbassare entrambe le cornici mobili. In questa posizione le strisce tamponate non toccano il gel. NON FORZARE LE CORNICI MOBILI AD 

ABBASSARSI ULTERIORMENTE. 

16. Chiudere lo sportello del modulo di migrazione. 

17. Avviare la procedura immediatamente premendo la freccia verde "START" sul lato sinistro della tastiera. 

IMPORTANTE: Assicurarsi che la griglia di ventilazione sul lato destro dello strumento non sia ostruita. 

PREMIGRAZIONE - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Le due cornici mobili vengono abbassate in modo che le strisce tamponate entrino in contatto con il gel. 

• La migrazione ha luogo al massimo a 1000 V, a 20 °C controllati mediante effetto Peltier, fino ad accumulare 75 Vh. 

• La cornice mobile porta elettrodi si alza interrompendo il contatto. 

• Un segnale acustico avverte che lo sportello del modulo di migrazione è stato sbloccato. Il segnale rimane attivo fino all’intervento dell’operatore. 

Sullo schermo compare il messaggio lampeggiante: “POS : 1”. 

NOTA: Lo sportello del modulo di migrazione rimane bloccato durante tutte le fasi della migrazione. 

18. Aprire lo sportello del modulo di migrazione. 

19. Recuperare l’applicatore dalla camera umida tenendolo dalla cornice protettiva in plastica. 

- Staccare la cornice di protezione dei dentini dell’applicatore. 

- Inserire l’applicatore sulla cornice mobile in posizione No. 1. 

IMPORTANTE: I numeri stampati sugli applicatori devono essere rivolti verso l’operatore (Fig. 5). 


21. Avviare la procedura immediatamente premendo la freccia verde "START" sul lato sinistro della tastiera. 

MIGRAZIONE - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Le due cornici mobili vengono abbassate in modo che le strisce tamponate e gli applicatori entrino in contatto con il gel. 

• La cornice mobile porta-applicatori si alza. 

• La migrazione ha luogo al massimo a 1000 V, a 20 °C controllati mediante effetto Peltier, fino ad accumulare 700 Vh (per circa 45 minuti). 

• La cornice mobile porta elettrodi si alza interrompendo il contatto. 

• Un segnale acustico avverte che lo sportello del modulo di migrazione è stato sbloccato. Il segnale rimane attivo fino all’intervento dell’operatore. 

Sullo schermo compare il messaggio lampeggiante: " AS" segnalando di applicare l’antisiero marcato. 

NOTA: Lo sportello del modulo di migrazione rimane bloccato durante tutte le fasi della migrazione. 

II. IMMUNOFISSAZIONE – PREPARAZIONE 

La maschera dinamica è composta da una barretta antisieri, da un supporto barretta, da una guida per la maschera dinamica e da un riduttore di 

corsa, presentati nella Fig. 6. 

Durante la migrazione, assemblare la maschera dinamica come segue: 

1. Posizionare la guida per la maschera dinamica su una superficie piana. 

2. Posizionare il riduttore di corsa specifico alla tecnica HYDRAGEL CSF ISOFOCUSING sulla guida per la maschera dinamica. 

3. Posizionare una barretta antisieri sul supporto barretta (Fig. 7) : 

- Inclinare la barretta antisieri con un angolo di 45° e appoggiarla contro le molle plastiche del supporto barretta. 

- Spingendo contro queste molle, allontanare i due elementi e ruotare la barretta per fissarla nelle fessure del supporto barretta. 

AVVERTENZA : Assicurarsi che la barretta sia correttamente inserita nel supporto : gli spinotti all’estremità della barretta devono essere 

bloccati nelle fessure del supporto barretta. 

4. Alloggiare il supporto con il segmento sulla guida della maschera dinamica (Fig. 8). Applicare i reagenti come segue: 

Per HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING : applicare 20 µL di antisiero anti – Ig G – PER nei pozzetti da 4 a 12 della barretta antisieri. 

Per HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING : applicare 20 µL di antisiero anti – Ig G – PER in tutti i pozzetti della barretta antisieri. 

Aspirare i reagenti evitando di intrappolare bolle d’aria nel puntale della pipetta. 

5. Per applicare i reagenti (Fig. 9) : 

- Mantenere la pipetta inclinata. 

- Appoggiando leggermente il puntale su una parete del pozzetto, senza toccare il fondo del pozzetto, iniettare la goccia di reagente nel 

pozzetto. 

III. IMMUNOFISSAZIONE 

1. Dopo la migrazione, aprire lo sportello (il messaggio smette di lampeggiare). 

2. Rimuovere l’applicatore ed eliminarlo. 

3. Alzare entrambe le cornici mobili, rimuovere le strisce tamponate mediante le estremità in plastica ed eliminarle. 

4. Estrarre il carrello porta applicatori e porta-elettrodi. 

5. Pulire gli elettrodi con carta soffice inumidita. 

6. Lasciare il gel in posizione nel modulo di migrazione. 

7. Prima di stratificare l’antisiero anti-Ig G–PER con la maschera dinamica, togliere la mascherina plastica e gettarla. 

AVVERTENZA: Non spostare il gel sul piano di migrazione durante questa operazione. 

8. Posizionare la maschera dinamica e stratificare l’antisiero come segue (Fig. 10): 

- Posizionare la barra metallica di fissaggio per la maschera sui due spinotti di ancoraggio inferiori (la barra può essere sempre lasciata nel 

modulo di migrazione). 

- Tenere la maschera dinamica tramite l’aletta superiore ed inserirla nella barra con l’incavo allineato ai segni. 

- Abbassare la maschera dinamica sulla piastra di HYDRASYS. 

- Posizionare il porta barretta nel punto inferiore della maschera dinamica, verso l’operatore. Tenere il porta barretta con la maniglia posta a 

destra e premere sul punto di pressione centrale in modo che la barretta antisieri tocchi il gel. Rilasciare la pressione; quindi, i reagenti 

diffonderanno sotto ciascuna pista (Fig. 11). 

- Immediatamente, utilizzando la maniglia del porta barretta, muovere la barretta lentamente e con movimento continuo, in avanti ed indietro 

sull’intera lunghezza del gel per applicare i reagenti. Ripetere questo passaggio due volte; l’applicazione dovrebbe richiedere 

approssimativamente 5 secondi per ogni passaggio (Fig. 12). 

- Durante questa operazione, tenere la maschera solo con la maniglia del porta barretta. Evitare di toccare la guida. 

- 53 -


9. Lasciare la maschera dinamica sul gel in posizione bassa. 


11. Fare partire immediatamente la procedura premendo la freccia verde "START" sul lato sinistro della tastiera. Sullo schermo compare il 

messaggio "[INCUBAZIONE]". 

IMMUNOFISSAZIONE - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Incubazione a 20 °C per 10 minuti (temperatura controllata mediante effetto Peltier). 

• Un segnale acustico avverte che lo sportello del modulo di migrazione si è sbloccato. Sullo schermo compare il messaggio: "CARTA". 

NOTA: Durante l’incubazione lo sportello del modulo di migrazione rimane bloccato. 

IV. ASCIUGATURA DEL GEL 


2. Rimuovere la maschera dinamica: 

- tenere la guida dall’aletta superiore, 

- fare ruotare la guida sulla barra metallica e sganciarla, 

- sganciare la barretta dal supporto barretta e gettarla. 

AVVERTENZA: Manipolare la barretta che ha contenuto dell’antisiero con precauzione. 

3. Applicare una cartina da filtro spessa sul gel: 

- inclinare la cartina da filtro a circa 45° e allineare la parte inferiore della carta da filtro con il bordo del gel. 

- abbassare la carta da filtro sul gel ed applicarla sul gel. 

AVVERTENZA: Premere su tutta la superficie della cartina da filtro per assicurare una perfetta aderenza al gel. 

4. Chiudere il modulo di migrazione. 

5. Avviare la procedura premendo il tasto "START" (freccia verde sul lato sinistro della tastiera). 

ASCIUGATURA - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Asciugatura a 20 °C mediante effetto Peltier per 3 minuti. Sullo schermo compare il messaggio “[POMPAGGIO]”. 

• Viene emesso un segnale acustico. Sullo schermo compare il seguente messaggio lampeggiante: "❊ CARTA + REIDR 1" che segnala di togliere 

la carta e di applicare la soluzione reidratante. 

V. REIDRATAZIONE DEL GEL 


2. Eliminare la carta da filtro, lasciando il gel sulla piastra del modulo di migrazione. 

3. Posizionare la mascherina R3 (HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING) o la maschera ENZ 4 mL (HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING) per 

l’applicazione dei reagente (Fig. 13). 

4. Dispensare 4,5 mL (HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING) o 7 mL (HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING) di soluzione reidratante attraverso il 

foro della mascherina (Fig. 14). Assicurarsi che la soluzione sotto la mascherina sia uniformemente distribuita sulla superficie rettangolare 

centrata sul foro della mascherina. 

5. Prelevare la soluzione reidratante evitando bolle d’aria nella punta della pipetta. Per dispensare la soluzione reidratante: 

- Tenere la pipetta verticalmente e appoggiare delicatamente la punta della pipetta nel foro della mascherina. 

- Iniettare progressivamente la soluzione evitando di immettere bolle di aria sotto la mascherina. 


7. Iniziare immediatamente la procedura di incubazione premendo la freccia verde "START" alla sinistra della tastiera (il messaggio smette di 

lampeggiare). 

REIDRATAZIONE DEL GEL - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Incubazione a 20 °C, per 5 minuti, controllata da effetto Peltier. 

• Viene emesso un segnale acustico. Sullo schermo compare il seguente messaggio lampeggiante: "❊ REIDR 1 + CARTA" che segnala di togliere 

la soluzione reidratante e di applicare la carta da filtro spessa. 

VI. ELIMINAZIONE DELLA SOLUZIONE REIDRATANTE 


2. Togliere la soluzione reidratante. 

3. Tenere la pipetta verticalmente e appoggiare la punta della pipetta nel foro della mascherina (Fig. 14). 

4. Aspirare progressivamente il reagente con cautela. 

5. Afferrare la maschera per la deposizione dei reagenti mediante l’aletta, alzarla ed estrarla. L’area del gel deve essere reidratata. 

VII.ASCIUGATURA DEL GEL 

1. Applicare una carta da filtro spessa sull’area reidratata del gel come descritto nel par. IV. 

2. Premere sull’intera superficie della carta da filtro per assicurare la perfetta aderenza al gel. 


4. Iniziare la sequenza di asciugatura premendo il tasto "START" (freccia verde a sinistra della tastiera) (il messaggio smette di lampeggiare). 


• Asciugatura a 20 °C controllata con effetto Peltier per 3 minuti. 

• Viene emesso un segnale acustico. Sullo schermo compare il seguente messaggio lampeggiante: "❊ CARTA + REIDR 2" che segnala di togliere 

la carta e di applicare la soluzione reidratante. 

- 54 -


VIII. REIDRATAZIONE DEL GEL 


2. Eliminare la carta da filtro lasciando il gel al suo posto sulla piastra del modulo di migrazione. 

3. Posizionare la mascherina R3 (HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING) o la maschera ENZ 4 mL (HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING) per 

l’applicazione dei reattivi (Fig. 13). 

4. Dispensare 4,5 ml (HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING) o 7 mL (HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING) di soluzione reidratante attraverso il 

foro della mascherina (Fig. 14). Assicurarsi che la soluzione sotto la mascherina sia uniformemente distribuita sulla superficie rettangolare 

centrata sul foro della mascherina. 

5. Prelevare la soluzione reidratante evitando bolle di aria nella punta della pipetta. Per dispensare la soluzione reidratante procedere come 

descritto nel par. V. 


7. Iniziare immediatamente la procedura di incubazione premendo la freccia verde "START" sul lato sinistro della tastiera. 

REIDRATAZIONE DEL GEL - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Incubazione a 20 °C, per 5 minuti, controllata da effetto Peltier. 

• Dopo il tempo di incubazione viene emesso un segnale acustico. Sullo schermo compare il seguente messaggio lampeggiante: 

"❊ REIDR 2 + TTF3" che segnala di togliere la soluzione reidratante e di applicare la soluzione di visualizzazione. 

IX. ELIMINAZIONE DELLA SOLUZIONE REIDRATANTE 


2. Togliere la soluzione reidratante come precedentemente descritto al par. VI. 

3. Lasciare la mascherina in posizione. 

X. VISUALIZZAZIONE 

1. Applicare 3 mL (HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING) o 3,5 ml (HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING) della soluzione di visualizzazione TTF3, 

preparata appena prima dell’uso, nello spazio al di sotto della mascherina. Assicurarsi che la soluzione ricopra interamente la superficie sotto 

la maschera. 

2. Dispensare la soluzione di visualizzazione TTF3 evitando di aspirare bolle di aria nella punta della pipetta, procedere come descritto nel par. V. 


4. Iniziare immediatamente la procedura di incubazione premendo la freccia verde "START" posta alla sinistra della tastiera (il messaggio smette 

di lampeggiare). 

VISUALIZZAZIONE - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Incubazione a 30 °C, temperatura, controllata da effetto Peltier, per 15 minuti. 

• Dopo il tempo di incubazione viene emesso un segnale acustico. Sullo schermo compare il seguente messaggio lampeggiante: 

"❊ TTF3 + CARTA" che segnala di togliere la soluzione di visualizzazione e di applicare la carta da filtro spessa. 

XI. ELIMINAZIONE DEL REAGENTE 


2. Togliere la soluzione di visualizzazione come precedentemente descritto al par. VI. 

3. Afferrare la maschera per la deposizione dei reagenti mediante l’aletta, alzarla ed estrarla. 

XII.ASCIUGATURA DEL GEL 

1. Applicare sul gel una carta da filtro spessa, procedere come descritto nel par. IV. 

2. Premere l’intera superficie della cartina da filtro per assicurare una perfetta aderenza al gel. 


4. Avviare la sequenza di asciugatura premendo il tasto "START" (freccia verde sul lato sinistro della tastiera). 

5. Lavare la maschera con acqua corrente con uno spazzolino (tipo spazzolino da denti). Per l’utilizzazione successiva, la maschera deve essere 

perfettamente asciutta. Per eliminare le gocce d’acqua che possono essere rimaste imprigionate nel pozzetto, scuoterla leggermente su della 

carta assorbente e asciugarla. 

NOTA: L’alcool può essere utilizzato per pulire la maschera R3 o ENZ 4 mL dopo la fase di rivelazione col TTF3. 


• Asciugatura a 30 °C controllati mediante effetto Peltier, per 3 minuti. 

• Viene emesso un segnale acustico. Sullo schermo compare il seguente messaggio: "❊ CARTA" che segnala di togliere la cartina da filtro spessa. 

XIII. ESSICCAZIONE DEL GEL 


2. Rimuovere la cartina da filtro lasciando il gel in posizione. 

3. Chiudere lo sportello di HYDRASYS. 

4. Avviare la procedura di essiccazione premendo il tasto "START" (freccia verde sul lato sinistro della tastiera). Sul display compare il seguente 

messaggio: "[ESSICCAZIONE]". 

ESSICCAZIONE - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Essiccazione a 50 °C, controllati per effetto Peltier, per 3 minuti. 

• Un segnale acustico avverte di aprire lo sportello. 

• Aprire lo sportello. 

• Rimuovere il gel essiccato. 

NOTE: Dopo l’apertura dello sportello, la temperatura della piastra scende a 20 °C in meno di 5 minuti. 

- Quando la temperatura raggiunge 20 °C può essere iniziata una nuova migrazione. 

- Posizionare il carrello porta applicatori nella sua sede. 

- Pulire la piastra di migrazione con un panno morbido inumidito. 

- 55 -


XIV. LAVAGGIO DEL GEL 

Dopo l’essiccazione, il gel viene lavato nel compartimento di colorazione utilizzando il programma “LAV. ISOENZ/GEL”. Se la camera è stata utilizzata 

precedentemente per colorare delle proteine, lavare la camera con il programma “LAVAGGIO CAMERA”. 

1. Posizionare il gel sul telaio porta-gel, con il gel rivolto verso l’operatore, procedendo nel modo seguente (Fig. 15): 

- Aprire il telaio porta-gel. 

- Metterlo in posizione piana sul bancone. 

- Posizionare il gel nelle scanalature delle due guide. 

- Chiudere il telaio porta-gel. 

- Assicurarsi che il gel sia correttamente posizionato all’interno del telaio. 

2. Inserire il telaio porta-gel nel Modulo di trattamento/colorazione del gel. 

IMPORTANTE: Prima di avviare un ciclo di lavaggio controllare che: 

- la tanica della soluzione decolorante contenga almeno 400 mL di soluzione decolorante, 

- la tanica dei liquidi reflui sia vuota. 

3. Per la connessione dei reagenti: Riferirsi alle informazioni mostrate sullo schermo dello strumento (premere il tasto : “VISUAL CANALI”). 

IMPORTANTE: non dimenticare di chiudere gli ingressi dei canali non utilizzati 

4. Selezionare il programma di lavaggio “LAV. ISOENZ/GEL” nel menu dello strumento ed avviare la procedura premendo il tasto “START” 

(freccia verde sul lato destro dello strumento). 

Durante tutte le fasi di lavaggio ed essiccazione, il compartimento rimane bloccato. 

Dopo i cicli di raffreddamento, un segnale acustico indica che il compartimento è sbloccato (la ventilazione è mantenuta fino a quando il 

supporto del gel viene rimosso). 

5. Rimuovere il telaio porta-gel dal compartimento; aprirlo e rimuovere il gel essiccato. Se necessario pulire il retro della lastrina essiccata (la 

faccia con la plastica di supporto) con una cartina soffice inumidita. 

INTERPRETAZIONE 

La sintesi intratecale, all’interno del sistema nervoso centrale, è indicata dalla presenza di bande Ig G nel profilo elettroforetico del CSF che non sono 

presenti nel profilo del siero dello stesso paziente (Fig. 16). Delle bande molto deboli, che possono o meno essere presenti allo stesso livello di 

migrazione di quelle osservate nel CSF, sono sempre presenti nel siero. Queste bande non devono essere tenute in considerazione per il profilo 

interpretativo. Rappresentano l’eterogeneità delle Ig G del siero e possono essere visualizzate solo con delle tecniche altamente risolutive e sensibili. 

In teoria, una singola banda supplementare nel CSF, assente nella stessa posizione nel siero corrispondente, permette di sospettare una sintesi 

intratecale. In pratica, due o più bande supplementari nel CSF sono interpretate come un’indicazione sufficiente in favore della diagnosi di sclerosi 

multipla. Queste raccomandazioni possono evolvere in funzione dei risultati raccolti. E’ importante tenere presente che il numero di bande osservate 

in un profilo oligoclonale non correla obbligatoriamente con la severità o la prognosi della sclerosi multipla. Per queste diverse ragioni, il numero di 

bande non deve essere tenuto in considerazione al fine di evitare false interpretazioni. 

Per permettere un’analisi comparativa corretta, è indispensabile: 

• analizzare i liquidi biologici del paziente (CSF e siero) prelevati allo stesso momento, in assenza di trattamenti che possono modificare il tasso di 

immunoglobuline, 

• dosare precisamente le immunoglobuline del CSF e del siero, al fine di analizzare delle quantità identiche sul gel. 

• Se la concentrazione di immunoglobuline non è nota, il siero deve essere diluito tra 300 e 400 volte, e il CSF deve essere analizzato puro. In questo 

caso, la differenza di concentrazione delle Ig G può condurre a false interpretazioni. 

La rivelazione di una sintesi intratecale di immunoglobuline per immunofissazione sensibilizzata è più specifica e più sensibile di quella indicata dai 

diversi calcoli di rapporto o indice realizzati a partire dal dosaggio di Ig G, dell’albumina e di altre proteine del CSF e del siero. 

La conferma di una sintesi intratecale di immunoglobuline è un’informazione importante per sospettare una patologia infiammatoria del sistema 

nervoso centrale. 

Un profilo oligoclonale o ogni altra indicazione di sintesi intratecale possono essere ritrovati in diverse patologie cerebrali, quali: 

• 95 % dei casi di sclerosi multipla, 

• 100 % dei casi di neurosifilide non trattata, 

• 100 % dei casi di leucoencefalite sclerosante subacuta. 

In conclusione, una sintesi intratecale può essere rivelata in numerose malattie del SNC associate generalmente ad un’infiammazione, quali infezioni, 

neuropatie periferiche, neoplasmi, incidenti vascolari cerebrali, etc. 

La diagnosi non deve essere basata solamente sui risultati dell’ immunofissazione. Essi devono essere considerati assieme alle osservazioni cliniche 

ed alla storia del paziente, e complementati da test biochimici, microbiologici e citologici. 

Interferenze e limitazioni 

L’uso di antisieri di provenienza diversa dai kits HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING può alterare la qualità dei risultati. 

Tenuto conto dei principi analitici delle tecniche attuali, nessuna garanzia può essere data quanto alla rivelazione totale di tutte le componenti 

monoclonali. 

Eliminazione errori 

Contattare il Servizio di Assistenza Tecnica del fornitore quando, nonostante siano state seguite accuratamente le istruzioni per la preparazione e la 

conservazione dei materiali e per la procedura di impiego, i risultati del test non rispettino le caratteristiche. 

Le schede di sicurezza dei diversi reagenti del kit e le informazione relative all’eliminazione dei rifiuti sono disponibili presso il Servizio Tecnico SEBIA. 

- 56 -


DATI SULLE PRESTAZIONI 

Riproducibilità 

Riproducibilità intra-gel: 

Campioni di CSF e di siero provenienti da quattro pazienti sono stati applicati in tutte e 18 le piste di gels HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING 

provenienti da due lotti (due coppie con sintesi intratecale e due coppie senza sintesi intratecale). 

Riproducibilità intra-lotto e inter-lotti: 

Otto coppie di CSF/siero sono state analizzate su 10 gels HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING di uno stesso lotto e su 2 gels di un lotto diverso 

(6 coppie che presentano una sintesi intratecale e 2 coppie senza sintesi intratecale). 

Risultati 

Dopo l’esame visivo, in tutti gli studi di riproducibilità, la presenza/assenza di quadri oligoclonali sono stati correttamente identificati in ciascun 

campione e su tutti i gel con l’antisiero Ig G - PER; non ci sono stati falsi positivi/negativi e non sono state osservate differenze fra ripetizioni. 

Accuratezza - Rivelazione ed identificazione di quadri oligoclonali 

Campioni di CSF e siero provenienti da pazienti con varie malattie del sistema nervoso centrale (n = 108) sono stati analizzati su un gel HYDRAGEL 

9 CSF ISOFOCUSING con un antisiero anti-Ig G e su di un altro sistema in gel d’agarosio disponibile in commercio. Gli elettroforegrammi sono stati 

valutati visivamente per la presenza di quadri oligoclonali Ig G. 

E’ stato riscontrato una generale concordanza nella rivelazione di quadri oligoclonali fra i due test. 

Le poche differenze osservate sono dovute ad una maggiore risoluzione della procedura HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING. I risultati sono stati 

concordanti con le diagnosi cliniche, le indicazioni di sintesi intratecale e di danno della barriera emato-encefalica. 

Sensibilità 

La sensibilità della metodica HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING è stata determinata effettuando una diluizione seriale di una proteina monoclonale 

Ig G, 2 mg/dL. Il limite di rivelazione di una banda monoclonale Ig G è di 0,031 mg/dL. 

BIBLIOGRAFIA 
























1994, 397 pp. 













1994, 54 : 75-80. 



- 57 -


UTILIZACIÓN 

Los kits HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING e HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING permiten la detección cualitativa, la identificación y la confirmación 

de las inmunoglobulinas oligoclonales puestas en evidencia en los perfiles electroforéticos del líquido cefalorraquídeo humano (LCR ó CSF: 

cerebrospinal fluid). La técnica usada es el isoelectroenfoque en gel de agarosa en el sistema semiautomático HYDRASYS, completado con una 

inmunofijación en la que se usa un antisuero anti-Ig G acoplado a peroxidasa. La utilización de este antisuero permite aumentar la sensibilidad de 

detección de las bandas oligoclonales de Ig G del LCR sin concentración previa. 

El objetivo es poner en evidencia un perfil oligoclonal específico de las inmunoglobulinas G del LCR, debido a síntesis intratecal, comparando después 

de la inmunofijación los perfiles del suero y del LCR del mismo paciente. 

Los kits HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING e HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING están recomendados cuando se sospecha la existencia de algunas 

enfermedades del sistema nervioso central (SNC), como la esclerosis múltiple. La detección de bandas oligoclonales y de un proceso inflamatorio 

(síntesis intratecal de inmunoglobulinas) es una gran ayuda para el diagnóstico. 

Para uso en Diagnóstico In Vitro. 

PRINCIPIO DEL TEST 

Muchas dolencias del sistema nervioso central están asociadas con aumento de la concentración proteica del LCR debida, o bien a un aumento en 

la permeabilidad de la barrera hemato-encefálica, o bien a la síntesis de inmunoglobulinas, principalmente Ig G, dentro del sistema nervioso central. 

En este último caso, esa síntesis intratecal de inmunoglobulinas está a menudo asociada a una restricción de la heterogeneidad, que se manifiesta 

por un reparto oligoclonal detectado en la zona gamma de las migraciones electroforéticas de alta resolución. En la zona de gammaglobulinas pueden 

detectarse también bandas que no son inmunoglobulinas (Ig), pero no tienen la misma importancia diagnóstica. La inmunofijación es la técnica 

elegida, ya que puede confirmar que las bandas oligoclonales corresponden a Ig y puede identificar la Ig implicada, además de proveer la 

especificidad diagnóstica que requiere el análisis. 

El reparto oligoclonal de las Ig G tiene importancia diagnóstica en la rutina, y la prueba de SEBIA está recomendada especialmente para la detección 

de esas bandas oligoclonales de Ig G usando un anticuerpo específico anti-Ig G. 

La presencia de Ig G intratecales sugiere la existencia de una enfermedad inflamatoria del sistema nervioso central, causada por ejemplo por una 

esclerosis múltiple. Aunque el perfil oligoclonal no es exclusivo de esta enfermedad, su presencia se usa como información complementaria 

importante para el diagnóstico, y su detección es considerada como una prueba esencial en el consenso, definido en 1994 por el “Comité de la Acción 

Europea Concertada para la Esclerosis Múltiple”. Es una prueba de confirmación en los pacientes que presentan episodios clínicos de esclerosis 

múltiple, y una prueba indicativa en los pacientes que hayan sufrido pocos episodios de esclerosis o con síntomas clínicos no concluyentes. 

Los criterios de selección propuestos por el Comité para la detección de las bandas oligoclonales de Ig G en el LCR son los siguientes: 

1. La técnica más sensible y resolutiva para la detección de las Ig G oligoclonales es el isoelectroenfoque, 

2. Las Ig G oligoclonales deben ser detectadas usando un antisuero específico, 

3. Para confirmar la síntesis intratecal de las Ig G, hay que analizar en paralelo el suero y el LCR del mismo paciente para distinguir las diferencias 

en el perfil de distribución de las Ig G, 

4. Para facilitar la interpretación, las concentraciones de Ig G del suero y del LCR deben ser idénticas. 

5. Hay que evitar concentrar el LCR si es posible. 

La técnica HYDRAGEL 3 y 9 CSF ISOFOCUSING responde perfectamente a todos estos criterios. 

El análisis se realiza en dos etapas: 

• isoelectroenfoque en gel de agarosa para separar las proteínas del LCR y el suero. 

• Inmunofijación con un antisuero anti-Ig G marcado con peroxidasa para detectar las bandas oligoclonales de Ig G y para mostrar la diferencia o la 

similitud de distribución de las Ig G en el LCR y el suero. 

Una inmunofijación estándar que emplea anticuerpos no marcados necesita que la concentración de las Ig G esté alrededor de 500 mg/L, mientras 

que las concentraciones de las Ig G del LCR están generalmente comprendidas entre 10 y 50 mg/L. Es necesario entonces obtener un volumen total 

de LCR entre 2 y 5 mL para obtener una concentración suficiente. 

Comparada con la inmunofijación estándar, la sensibilidad de detección de la técnica HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING está aumentada unas 

100 veces mediante el uso de anticuerpos marcados con un enzima. Así, con una concentración de Ig G superior o igual a solamente 10 mg/L, las 

Ig G y su distribución pueden ser detectadas y comparadas sin concentrar la muestra de LCR. 

El sistema semiautomático HYDRASYS realiza todas las etapas necesarias para obtener geles listos para ser interpretados. 

Cada gel de agarosa incluido en el kit HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING contiene 6 carriles y permite por tanto realizar el análisis comparado de 

las Ig G de 3 parejas LCR-suero. 

Cada gel de agarosa incluido en el kit HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING contiene 18 carriles y permite por tanto realizar el análisis comparado de 

las Ig G de 9 parejas LCR-suero. 

Esta técnica sencilla y rápida proporciona una imagen clara y fácilmente interpretable. 

- 58 - 

INSTRUCCIONES SEBIA - Español


REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS EN LOS KIT HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING E HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING 

COMPONENTES REF N° 4353 REF N° 4355 Geles de agarosa (listos para usar) 10 geles 10 geles Solución de etilén-glicol (lista para usar) 1 vial de 3 mL 1 vial de 3 mL Solución anódica (lista para usar) 1 vial de 50 mL 1 vial de 50 mL Solución catódica (lista para usar) 1 vial de 50 mL 1 vial de 50 mL Esponjas (a impregnar) 10 bolsas de 2 10 bolsas de 2 Diluyente de muestra CSF (listo para usar) 1 vial de 85 mL 1 vial de 85 mL Diluyente de antisuero CSF ISOFOCUSING (listo para usar) 1 vial de 3.75 mL 1 vial de 3.75 mL Solución rehidratante CSF (lista para usar) 2 viales de 70 mL 2 viales de 70 mL Solvente TTF3 (listo para usar) 2 viales de 20 mL 2 viales de 20 mL TTF3 (solución concentrada) 2 viales de 0.5 mL 2 viales de 0.5 mL Aplicadores (listos para usar) 1 caja de 10 (6 dientes) 1 caja de 10 (18 dientes) Contenedores de tampón (listos para usar) 1 bolsa de 2 1 bolsa de 2 Segmentos para antisueros (listos para usar) 1 caja de 10 1 caja de 10 Papeles de filtro - Finos 1 paquete de 10 1 paquete de 10 Papeles de filtro - Gruesos 3 paquetes de 10 3 paquetes de 10 

| Láminas de plástico | 1 paquete de 10 | 1 paquete de 10 | 

PARA OBTENER RESULTADOS ÓPTIMOS 

Los reactivos de un mismo kit deben ser usados conjuntamente y según las instrucciones suministradas. 

LEA DETENIDAMENTE LA HOJA DE INSTRUCCIONES. 

1. GELES DE AGAROSA 

Preparación 

Los geles de agarosa están listos para su uso. Cada gel contiene: agarosa, 10 g/L ; anfolitos ; aditivos, inocuos a las concentraciones usadas, 

necesarios para un funcionamiento óptimo. 

Uso 

Medio de soporte para el isoelectroenfoque e inmunofijación de las proteínas. 

Conservación, estabilidad y señales de deterioro 

Conserve los geles horizontalmente en el estuche protector y en nevera (2 a 8 °C). Son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del 

kit y en la etiquetas de sus recipientes protectores. (La flecha de la parte frontal del kit debe apuntar hacia arriba). 

No almacene los geles cerca de una ventana o de una fuente de calor. Evite variaciones de temperatura importantes. 

NO LOS CONGELE. 

Deséchelos cuando: 

(i) haya cristales o precipitados en la superficie del gel o su textura sea muy blanda (consecuencias de la congelación del gel), 

(ii) se observe crecimiento bacteriano o fúngico, 

(iii) haya una cantidad anormal del líquido en el estuche del gel (como resultado de la exudación del tampón debido a condiciones de conservación 

inadecuadas). 

2. SOLUCIÓN DE ETILÉN-GLICOL 

Preparación 

La solución de etilén-glicol está lista para usar. 

ATENCIÓN: ¡Nociva en caso de ingestión! 

Uso 

Sirve para garantizar el contacto entre el gel y la placa de migración durante la migración electroforética. 


La solución de etilén-glicol puede conservarse a temperatura ambiente o en nevera. Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en 

la etiqueta del vial. 

3. SOLUCIONES ANÓDICA Y CATÓDICA 

Preparación 

La solución anódica (solución ácida) y la solución catódica (solución básica) están listas para su uso. Ambas contienen componentes, inocuos a las 

concentraciones usadas, necesarios para un funcionamiento óptimo. 

NOTA: Para una fácil identificación y como ayuda para controlar su aplicación, la solución anódica es de color rojo para identificar la esponja anódica. 

ATENCIÓN: La solución catódica contiene hidróxido de sodio. Irrita la piel y los ojos. Si contacta con los ojos, lávelos inmediatamente con 

agua en abundancia y consulte a un médico. 

Uso 

Para tamponar las esponjas anódica y catódica para realizar el isoelectroenfoque. 

IMPORTANTE: Después de cada uso, cierre el vial de solución catódica inmediatamente para evitar que la solución se carbonate. 


Las soluciones anódica y catódica pueden conservarse a temperatura ambiente (entre 15 y 30 °C) o en nevera (entre 2 y 8 °C). Son estables hasta 

la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas de los viales. Las soluciones deben estar exentas de precipitados. 

- 59 -

4. ESPONJAS (PARA TAMPONAR) 


Preparación 

Sature las dos esponjas con las soluciones anódica y catódica respectivamente 5 minutos antes de usarlas: 

Coloque en una superficie plana el contenedor gris para la esponja anódica y el contenedor azul para la esponja catódica. 

Dispense 5 mL de la solución anódica roja en el contenedor gris y 5 mL de solución catódica incolora en el contenedor azul. 

Abra la bolsa de las esponjas no tamponadas, coja las esponjas por los extremos de plástico y coloque una en cada contenedor. 

Empápelas uniformemente presionando varias veces con la punta de pipeta correspondiente. 

Use las esponjas saturadas sin demora. 

IMPORTANTE: Sature las esponjas justo antes de usarlas para evitar que la solución catódica se carbonate. 

Uso 

Las esponjas, empapadas respectivamente con las soluciones anódica y catódica, aseguran el contacto entre el gel y los electrodos y determinan el 

intervalo de pH durante el enfoque. 


Las esponjas húmedas pero no impregnadas pueden conservarse a temperatura ambiente o en nevera. Deben conservarse horizontalmente en sus 

bolsas protectoras (la flecha de la parte frontal del kit debe apuntar hacia arriba). Son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del 

kit o en las etiquetas de la bolsa de las esponjas. 

NO LAS CONGELE. 

Deseche las esponjas si la bolsa está abierta y las esponjas están secas. 

5. DILUYENTE DE MUESTRA CSF 

Preparación 

El diluyente de muestra está listo para su uso. Contiene solución salina suplementada con albúmina sérica bovina, azida sódica y aditivos inocuos a 

las concentraciones usadas, necesarios para un funcionamiento óptimo. 

Uso 

Para las diluciones de las muestras de LCR y suero. 


Conserve el diluyente de muestra en nevera (2 a 8 °C). Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o en la etiqueta del vial. El 

diluyente debe estar exento de precipitados. 

6. DILUYENTE DE ANTISUERO CSF ISOFOCUSING 

Preparación 

El diluyente de antisuero está listo para su uso. Contiene aditivos inocuos a las concentraciones usadas, necesarios para un funcionamiento óptimo. 

Uso 

Para diluir el antisuero marcado con peroxidasa antes de usarlo. 


El diluyente de antisuero puede conservarse a temperatura ambiente o en nevera. Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit 

o en la etiqueta del vial. El diluyente de antisuero debe estar exento de precipitados. 

NOTA: Durante el almacenamiento, el diluyente de antisuero puede volverse amarillo sin ningún efecto adverso en su funcionamiento. 

7. SOLUCIÓN REHIDRATANTE 

Preparación 

La solución rehidratante está lista para su uso. Contiene componentes inocuos a las concentraciones usadas, necesarios para un funcionamiento 

óptimo. 

Uso 

Para rehidratar el gel de agarosa antes de la etapa de visualización con peroxidasa. 


La solución rehidratante puede conservarse a temperatura ambiente o en nevera y es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit 

o en la etiqueta del vial. La solución rehidratante debe estar exenta de precipitados. 

8. SOLVENTE DE TTF3 

Preparación 

El solvente de TTF3 está listo para su uso. Contiene componentes inocuos a las concentraciones usadas, necesarios para un funcionamiento óptimo. 

Uso 

Para preparar la solución de visualización TTF3 como se describe en el párrafo nº 9. 


El solvente de TTF3 puede conservarse a temperatura ambiente o en nevera y es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o 

en la etiqueta del vial. El solvente de TTF3 debe estar exento de precipitados. 

9. TTF3 

Preparación 

Prepare la solución de revelado de trabajo justo antes de usarla. Añada los reactivos en el orden siguiente: 4 mL de solvente de TTF3, 100 µL de 

TTF3 y 4 µL de peróxido de hidrógeno (H 2 

O 2 

) al 30 % (110 volúmenes). 

ATENCIÓN: El TTF3 contiene dimetilformamida. ¡Perjudicial por inhalación! Si la ventilación es insuficiente, use un equipo de respiración 

adecuado. ¡No lo ingiera! ¡En caso de ingestión, consulte a un médico inmediatamente! Dañino en contacto con la piel. Lleve ropa 

protectora apropiada. Irrita los ojos. Si contacta con los ojos o la piel, lave inmediatamente la zona afectada con agua en abundancia y 

consulte a un médico. Evite exponerse al producto y obtenga formación especializada antes de usarlo. Puede causar cáncer. Si se 

encuentra mal, consulte a un medico inmediatamente (muestra la etiqueta siempre que sea posible). 

- 60 -

Uso 

Para el revelado de las inmunoglobulinas separadas mediante isoelectroenfoque. 



Conserve el TTF3 a temperatura ambiente o en nevera. Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit o en la etiqueta del vial. 

La solución de TTF3 debe estar exenta de precipitados. 

10. APLICADORES 

Uso 

Aplicadores precortados, de un solo uso, para la aplicación de la muestra en el gel. 


Conserve los aplicadores en un lugar seco a temperatura ambiente o en nevera. 

11. CONTENEDORES DE TAMPÓN 

Uso 

Contenedores coloreados reutilizables para tamponar las esponjas anódica y catódica. 

El contenedor gris es para la esponja anódica y el contenedor azul para la esponja catódica. 

Después de cada uso, lave los dos contenedores con agua destilada o desionizada y séquelos. 


Conserve los contenedores de tampón limpios en una superficie plana a temperatura ambiente. 

12. SEGMENTOS PARA ANTISUEROS 

Uso 

Segmentos coloreados, de un solo uso, para la aplicación del antisuero sobre el gel para realizar la inmunofijación. 

ATENCIÓN: Manipule con cuidado los segmentos con el antisuero ya cargado. 

13. PAPELES DE FILTRO FINOS 

Uso 

Papeles de filtro finos precortados, de un solo uso, para absorber el exceso de humedad de la superficie del gel antes de la aplicación de las muestras. 

Conservación 

Conserve los papeles de filtro finos en un lugar seco a temperatura ambiente o en nevera. 

14. PAPELES DE FILTRO GRUESOS 

Uso 

Papeles de filtro gruesos, de un solo uso, para absorber las proteínas no precipitadas del gel después de la inmunofijación y la rehidratación. 

Conservación 

Conserve los papeles de filtro gruesos en un lugar seco a temperatura ambiente o en nevera. 

15. LÁMINAS DE PLÁSTICO 

Uso 

Láminas de plástico, de un solo uso, para proteger el gel durante la migración electroforética. 

EQUIPAMENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS 

1. Sistema HYDRASYS SEBIA, referencia nº 1211 con la opción FOCUSING HYDRASYS, SEBIA, referencia nº 1235. 

o 

2. Sistema HYDRASYS FOCUSING SEBIA, referencia nº 1212. 

3. Pipeteador, manual o automático, como el HYDRAPLUS SEBIA, referencia nº 1216 o HYDRAPLUS 2 SEBIA, referencia nº 1217, para la carga 

de los aplicadores o los segmentos para antisueros. 

4. Cámara Húmeda, n° 1270, suministrada con el HYDRASYS. 

5. Guía metálica de la plantilla SEBIA, suministrada con el HYDRASYS. 

6. Plantilla dinámica, SEBIA, referencia nº 1255. 

7. Kit de Accesorios HYDRASYS ISOFOCUSING SEBIA, referencia nº 1258. 

8. Contenedores de reactivo suministrados con el sistema HYDRASYS. 

9. Pipetas de 2 µL, 20 µL, 100 µL, 200 µL y 5 mL. 

REACTIVOS NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 

1. ANTISUERO ANTI-Ig G - PER 

Preparación 

El vial de antisuero (SEBIA, referencia nº 4743: 1 vial de 0.60 mL) contiene una solución concentrada de inmunoglobulinas totales de mamífero anti- 

Ig G humanas conjugadas a la peroxidasa. El reactivo tiene un color específico para evitar errores al usarlo. El color aparece en la etiqueta del vial. 

Prepare la solución de trabajo del antisuero justo antes de usarla, mezclando: 

Para el HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING: 25 µL de anti–Ig G - PER y 175 µL de diluyente de antisuero. 

Para el HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING: 40 µL de anti–Ig G - PER y 300 µL de diluyente de antisuero. 

Mezcle bien. 

Uso 

Para la inmunoprecipitación de las proteínas separadas mediante isoelectroenfoque. 

- 61 -



Conserve el antisuero en nevera (2 a 8 °C). Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial de antisuero. 

Deseche el antisuero si cambia de aspecto o se vuelve turbio debido a contaminación microbiana. 

NOTA: Los antisueros pueden proceder de diferentes especies de animales. No mezcle dos viales de antisuero diferentes, incluso si son de la misma 

especificidad, y cambie SIEMPRE la punta de la pipeta al cambiar de vial de antisuero. 

Durante el transporte, el antisuero puede permanecer a temperatura ambiente (15 a 30 °C) durante 15 días sin ningún efecto adverso en su 

funcionamiento. 

2. PERÓXIDO DE HIDRÓGENO: H 2 

O 2 

, 110 volúmenes (30 %). 

El peróxido de hidrógeno debe conservarse protegido de la luz y en nevera (entre 2 y 8 ºC). Use una pipeta perfectamente limpia en cada pipeteo 

para evitar que se contamine. 

3. SOLUCIÓN DECOLORANTE 

Preparación 

Cada vial de Solución Decolorante concentrada (SEBIA, referencia nº 4540: 10 viales de 100 mL cada uno) debe ser diluida 1/1000 con agua destilada 

o desionizada, y permite obtener 100 litros de solución decolorante. Es conveniente diluir sólo 5 mL de la solución concentrada en 5 litros de agua, 

que es el volumen del contenedor de solución decolorante. Después de la dilución, la solución decolorante diluida contiene: ácido cítrico, 0,5 g/L. 

Uso 

Para lavar el gel después del revelado enzimático y el secado. 

Para limpiar la cubeta de coloración del HYDRASYS. 

Para neutralizar la acidez del decolorante antes de desecharlo, dispense 15 mL de una solución de hidróxido de sodio al 50 % en el contenedor de 

desechos vacío. 


El decolorante concentrado puede conservarse a temperatura ambiente o en nevera. Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del 

kit o en la etiqueta del vial. El decolorante diluido es estable durante 1 semana a temperatura ambiente en un contenedor cerrado. No le añada azida 

sódica. 

Deseche el decolorante diluido si cambia de aspecto o se vuelve turbio debido a contaminación microbiana. 

En caso de conservación prolongada (más de una semana) de la solución diluida, añada 50 µL/L de ProClin 300 para evitar la proliferación 

microbiana. 

El decolorante diluido al que se le ha añadido ProClin es estable en un contenedor cerrado a temperatura ambiente o en nevera hasta la fecha de 

caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de decolorante. 

4. SOLUCIÓN DE LAVADO HYDRASYS 

Preparación 

Cada vial de la Solución de Lavado HYDRASYS concentrada (SEBIA, referencia nº 4541: 10 viales de 80 mL cada uno) debe completarse hasta 5 L 

con agua destilada o desionizada. Después de la dilución, la solución de lavado contiene: tampón alcalino 8.8 ± 0.3 ; azida sódica. 

ATENCIÓN: La solución de lavado concentrada contiene un 0.625 % de azida sódica. ¡No la ingiera! ¡En caso de ingestión, consulte a un 

médico inmediatamente! La azida sódica puede formar compuestos explosivos o tóxicos si contacta con ácidos, plomo o cobre. Lave 

siempre con una gran cantidad de agua cuando deseche el producto. 

Uso 

Para el lavado periódico de la cubeta de coloración del HYDRASYS: por ejemplo, si se usa a diario hay que limpiar la cubeta una vez por semana. 

Consulte la hoja de instrucciones de la solución de lavado para conocer las directrices de uso. 


Las soluciones de lavado concentrada y diluida pueden conservarse a temperatura ambiente o en nevera en contenedores cerrados. Son estables 

hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de solución de lavado. 

Deseche la solución de lavado diluida si cambia de aspecto o aparece turbidez debido a contaminación microbiana. 

MUESTRAS PARA EL ANÁLISIS 

Extracción y conservación de las muestras 

El análisis se realiza con suero y LCR obtenidos a la vez, de acuerdo con los procedimientos establecidos de uso en el laboratorio clínico. Se 

recomienda realizar los análisis con sueros y LCR frescos. Las muestras pueden conservarse hasta una semana en nevera (2 a 8 °C). Para 

conservaciones más prolongadas, congele las muestras. El suero y LCR congelados son estables durante un mes por lo menos. 

Preparación de las muestras 

• Mida las concentraciones de Ig G en el suero y el LCR usando procedimientos apropiados. 

• La concentración de Ig G en cada pareja LCR/suero que se va a comparar debe estar ajustada al mismo nivel en ambas muestras. 

El ajuste depende de la concentración inicial de inmunoglobulinas (Ig G) del LCR; use el Diluyente de Muestra para todas las diluciones: 

1er caso: la concentración de Ig G del LCR es superior a 20 mg/L. 

Diluya el LCR y el suero con diluyente de muestra para obtener una concentración de Ig G de 20 mg/L. 

2º caso: la concentración de Ig G del LCR está comprendida entre 10 y 20 mg/L. 

Use LCR sin diluir y diluya el suero con el diluyente de muestra para obtener una concentración de Ig G idéntica a la del LCR. 

3er caso: La concentración de Ig G del LCR es inferior a 10 mg/L. 

Concentre el LCR con un dispositivo apropiado para obtener una concentración de Ig G comprendida entre 10 y 20 mg/L. Diluya el suero con diluyente 

de muestra para obtener una concentración de Ig G idéntica a la del LCR. 

- 62 -

Ejemplo de diluciones (sólo para muestras con una concentración de Ig G superior a 20 mg/L): 

Para el LCR: 

A = concentración de Ig G en mg/L. 

Obtenga 20 µL de LCR y mézclelos con (A - 20) µL de diluyente de muestras. 

Para el suero: 

B = concentración de Ig G en mg/L. 

Diluya el suero 10 veces con diluyente de muestras, por ejemplo, 10 µL de suero y 90 µL de diluyente de muestras. 

Obtenga 2 µL de suero prediluido a 1:10 y añada (B/100 – 2) µL de diluyente de muestras. 


Cuando no se conoce la concentración de Ig G: 

Use LCR neto y diluya el suero entre 300 y 400 veces. 

NOTA: Errores en el ajuste de las concentraciones de Ig G de las muestras de LCR y suero puede afectar a la interpretación de los resultados – 

consulte el párrafo “INTERPRETACIÓN.” 

PROCEDIMIENTO 

El sistema HYDRASYS es un instrumento multiparamétrico semiautomático en el que los geles HYDRAGEL son tratados según las etapas siguientes: 

premigración, aplicación de las muestras, migración electroforética por isoelectroenfoque, incubación con el antisuero marcado, revelado, absorción 

y secado final. 

Las etapas manuales son las siguientes: preparación de las muestras y los geles, aplicación de los reactivos y el inicio de las etapas automáticas. 

LEA DETENIDAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL HYDRASYS. 

IMPORTANTE: Ajuste previamente la posición de la plantilla para obtener una correspondencia perfecta entre los perfiles electroforéticos del gel y 

las pistas de revelado de la plantilla. 

I. PREPARACIÓN DE LA MIGRACIÓN 

1. Encienda el HYDRASYS. 

2. Seleccione el modo "Alta tensión 1000 V", necesario para el isoelectroenfoque, pulsando el botón verde que está encima de la tapa del 

módulo de migración, que pasa a ser de color rojo. 

NOTA: La pantalla de este botón proporciona informaciones durante la migración. Si se presiona sucesivamente durante la migración, el botón 

indica o bien los valores de voltios hora acumulados (Vh) y la intensidad de la corriente (mA), o bien los valores de voltaje (V) y potencia (W). 

Cuando el HYDRASYS está en el modo de alta tensión, su pantalla indica las intensidades de corriente reales, aunque el resto de valores 

(voltaje, voltios hora y potencia) están divididos por 10. 

3. Coloque un aplicador de 6 pocillos para el HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING o un aplicador de 18 pocillos para el HYDRAGEL 9 CSF 

ISOFOCUSING, en una superficie plana, con los números de los pocillos hacia arriba. 

4. Aplique 10 µL de muestra en cada pocillo del aplicador (Fig. 1). Cargue el aplicador en menos de 2 minutos. 

El ejemplo siguiente presenta el análisis de 3 parejas LCR/suero con el HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING, y de 9 parejas LCR/suero con 

el HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING, usando el antisuero anti-Ig G - PER. 


| LCR | SUERO | LCR | SUERO | 

POCILLO Nº POCILLO Nº PACIENTE Nº (aplicador 6 pocillos) | (aplicador 18 pocillos) | 

1 1 2 1 2 2 3 4 3 4 3 5 6 5 6 4 - - 7 8 5 - - 9 10 6 - - 11 12 7 - - 13 14 8 - - 15 16 | 9 | - | - | 17 | 18 | 

- A continuación, coloque inmediatamente el aplicador ya cargado en posición vertical en la cámara húmeda, con los dientes hacia arriba, 

manipulándolo por la protección de plástico. 

Consulte la hoja de instrucciones de la cámara húmeda para conocer las directrices de uso. 

Antes de efectuar la aplicación de las muestras en el gel, debe realizarse una etapa de premigración hasta que se hayan acumulado 

75 Vh, según las indicaciones siguientes: 

5. Abra la tapa del módulo de migración y saque los soportes de los electrodos y el aplicador. 

ATENCIÓN: ¡No cierre la tapa del módulo de migración si los soportes están elevados! 

6. Seleccione el programa de migración "3/9 CSF FOCUSING" en el menú del instrumento. 

7. Saque las esponjas anódica y catódica ya impregnadas con las soluciones correspondientes (vea el párrafo nº 4 del capítulo REACTIVOS 

SUMINISTRADOS) de sus bandejas, cogiéndolas por las lengüetas de plástico. 

8. Coloque las esponjas en el soporte de los electrodos, enganchando los extremos perforados de las lengüetas de plástico en las clavijas 

(Fig. 2) : 

- Cuando los soportes de los electrodos y el aplicador están elevados, la esponja anódica roja se coloca en el electrodo inferior (ánodo), y 

la esponja catódica incolora se coloca en el electrodo superior (cátodo). 

- El lado de la esponja fijado a la lengüeta contacta con el electrodo. 

9. Saque el gel de su estuche. 

- 63 -


10. Seque el respaldo del gel (el lado del soporte de plástico) con un pañuelo de papel. 

11. Elimine el exceso de líquido de la superficie del gel con un papel de filtro fino, durante 3 segundos. 

12. Dispense 150 µL de solución de etilén-glicol para el HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ó 300 µL para el HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING, 

formando una línea, en el tercio inferior del marco serigrafiado en la placa del módulo de migración. 

13. Ponga el gel (con el lado de agarosa hacia arriba) en la placa en el interior del marco serigrafiado, apoyando su parte inferior en la barrita de 

plástico situada en la base del marco serigrafiado (Fig. 3). 

Doble el gel (Fig. 3) y haga que contacte con la solución de etilén-glicol, que debe repartirse por debajo de todo el gel. Levante un poco el 

gel para eliminar las burbujas de aire que hayan podido quedar atrapadas, y después deposite el gel en la placa. La solución de etilén-glicol 

debe estar extendida bajo toda la superficie del gel. 

14. Coloque una lámina de plástico sobre el gel: 

- Coja una lámina de plástico. 

- Alinee la parte inferior de la lámina de plástico con las dos marcas laterales situadas a 1,5 cm del borde catódico, impresas en el soporte 

plástico del gel (en la parte inferior del gel) (Fig. 4). 

- Coloque la lámina de plástico sobre el gel extendiéndola y evitando atrapar burbujas de aire entre el gel y la lámina de plástico. 

- Elimine las burbujas de aire que hayan podido quedar atrapadas elevando la lámina de plástico por la extremidad más cercana a las 

burbujas hasta que hayan desaparecido, volviendo a extender la lámina lentamente a continuación. 

- Evite desplazar el gel sobre la placa de migración durante esta operación. 

ATENCIÓN: La lámina de plástico no debe colocarse debajo de las 2 marcas laterales impresas en el soporte plástico del gel. 

15. Baje ambos soportes. En esta posición, las esponjas tamponadas no tocan el gel. NO FUERCE LOS SOPORTES HACIA ABAJO. 

16. Cierre la tapa del módulo de migración. 

17. Inicie el procedimiento inmediatamente apretando la tecla "INICIO" (flecha verde del lado izquierdo del teclado). 

IMPORTANTE: Compruebe que la rejilla de ventilación del lado derecho del instrumento no está bloqueada). 

PREMIGRACIÓN – DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 

• El soporte de los electrodos desciende para que las esponjas tamponadas contacten con el gel. 

• Migración a 1000 V como máximo, a 20 °C controlados por efecto Peltier, hasta que se hayan acumulado 75 Vh. 

• El soporte de los electrodos se eleva para desconectarlos. 

• Suena un pitido y la tapa se desbloquea. Esta señal sonora se mantendrá hasta que el operario abra la tapa. En pantalla aparece el mensaje 

intermitente: "POS : 1". 

NOTA: La tapa del módulo de migración permanece cerrada durante todas las etapas de la migración. 

18. Abra la tapa del módulo de migración. 

19. Saque el aplicador de la cámara húmeda cogiéndolo por la protección de plástico. 

- Quite la protección de plástico de los dientes. 

- Coloque el aplicador en la posición nº 1 del soporte del aplicador. 

IMPORTANTE: Los números de los pocillos del aplicador deben quedar de cara al operario (Fig. 5). 


21. Inicie inmediatamente el procedimiento pulsando la tecla "INICIO" (flecha verde del lado izquierdo del teclado). 

MIGRACIÓN – DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 

• Los soportes de los electrodos y el aplicador descienden para que las esponjas tamponadas y el aplicador contacten con el gel. 

• El soporte del aplicador se eleva. 

• Migración a 1000 V como máximo, a 20 °C controlados por efecto Peltier, hasta que se hayan acumulado 700 Vh (durante unos 45 minutos). 

• El soporte de los electrodos se eleva para desconectarlos. 

• Suena un pitido y la tapa se desbloquea. Esta señal sonora se mantendrá hasta que el operario abra la tapa. En pantalla aparece el mensaje 

intermitente: " AS", que indica que hay que aplicar el antisuero marcado. 

NOTA: La tapa del módulo de migración permanece cerrada durante todas las etapas de la migración. 

II. PREPARACIÓN DE LA INMUNOFIJACIÓN 

Los diferentes elementos de la plantilla dinámica (segmento para antisueros, soporte del segmento, guía y semireductor de superficie) aparecen en 

la figura 6. 

Durante la migración, monte la plantilla dinámica de la manera siguiente: 

1. Ponga la guía de la plantilla dinámica en una superficie plana. 

2. Coloque el semireductor de superficie específico para la técnica HYDRAGEL CSF ISOFOCUSING en la parte superior de la guía. 

3. Ponga un segmento para antisueros en el soporte del segmento (Figura 7): 

- Coloque el segmento para antisueros, inclinado 45º, contra los resortes del soporte del segmento. 

- Apoyándose en esos resortes, estire el segmento hacia fuera y fíjelo en las muescas del soporte del segmento. 

ATENCIÓN: Compruebe que el segmento esté bien colocado en el soporte: los salientes situados en los extremos del segmento 

deben estar bien encajados en las muescas del soporte. 

4. Coloque el conjunto soporte-segmento en la guía de la plantilla dinámica (Figura 8) equipada con el semireductor de superficie. 

Aplique el antisuero como sigue: 

Para el HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING : aplique 20 µL de antisuero anti-Ig G-PER por pocillo, en los pocillos 4 a 12. 

Para el HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING : aplique 20 µL de antisuero anti-Ig G-PER en todos los pocillos. 

Pipetee el antisuero diluido sin que se formen burbujas de aire en la punta de la pipeta. 

5. Para aplicar el reactivo (Figura 9): 

- sostenga la pipeta inclinada, 

- apoyando ligeramente la punta de la pipeta en el borde del orificio, dispense la gota de reactivo en los pocillos. 

- 64 -


III. INMUNOFIJACIÓN 

1. Abra la tapa del módulo de migración (el mensaje de la pantalla deja de ser intermitente). 

2. Saque el aplicador de muestras y deséchelo. 

3. Eleve ambos soportes, saque las esponjas tamponadas cogiéndolas por las lengüetas y tírelas. 

4. Saque los soportes de los electrodos y el aplicador. 

5. Limpie los electrodos con un pañuelo de papel humedecido. 

6. Deje el gel en su lugar en el módulo de migración. 

7. Antes de aplicar el antisuero anti-Ig G-PER con la plantilla dinámica, saque la lámina de plástico cogiéndola por un extremo y tírela. 

ATENCIÓN: No desplace el gel sobre la placa durante esta operación. 

8. Coloque la plantilla dinámica en el módulo de migración y reparta el antisuero procediendo como sigue (Figura 10): 

9. Coloque la barra metálica que se usa para fijar la plantilla con ayuda de los pernos de anclaje (una vez colocada, la barra metálica puede 

permanecer en el módulo de migración). 

10. Coloque las muescas de la plantilla en las marcas de la barra cogiendo la plantilla por la lengüeta. 

11. Haga descender la plantilla dinámica sobre la placa del HYDRASYS. 

IMPORTANTE: Ajuste previamente la posición de la plantilla dinámica para obtener una correspondencia perfecta entre los perfiles 

electroforéticos del gel y los pocillos de la plantilla. 

12. Ponga el soporte del segmento en el punto más bajo de la guía de la plantilla, dirigido hacia el operario. Sostenga el conjunto soportesegmento 

por el asa situada a la derecha y presione en el punto de apoyo central, de forma que el segmento para antisueros contacte con 

el gel. Deje de presionar, y entonces el antisuero se extenderá por debajo de todo el segmento (Figura 11). 

13. Inmediatamente, con ayuda del asa situada a la derecha, reparta el antisuero realizando dos veces un movimiento lento y regular de ida y 

vuelta de la plantilla dinámica por encima del gel (cada ida y vuelta debe durar unos 8 segundos), evitando la pérdida de contacto entre el 

segmento y el gel (Figura 12). 

- Durante esta operación, coja la plantilla sólo por el asa, sin tocar la guía. 

- Deje la plantilla dinámica sobre el gel en posición baja. 


15. Inicie inmediatamente la incubación presionando la tecla "INICIO" (flecha verde del lado izquierdo del teclado). En pantalla aparece el 

mensaje "[INCUBACION]". 

INMUNOFIJACIÓN – DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 

• Incubación a 20 °C controlados por efecto Peltier, durante 10 minutos. 

• Suena un pitido y la tapa del módulo de migración se desbloquea. En pantalla aparece el mensaje “ PAP.”. 

NOTA: La tapa del módulo de migración permanece bloqueada durante la incubación. 

IV. ABSORCIÓN CON PAPEL 


2. Saque la guía y la plantilla dinámica. 

- coja la guía por el asa. 

- levante la guía y sáquela. 

- saque el segmento del soporte y tírelo. 

ATENCIÓN: Manipule con precaución el segmento que haya contenido antisuero. 

3. Aplique un papel de filtro grueso sobre el gel: 

- incline el papel de filtro grueso unos 45º y alinee el borde inferior del papel de filtro con el borde inferior del gel. 

- coloque el papel encima del gel. 

ATENCIÓN: Presione sobre toda la superficie del papel de filtro para asegurar un contacto perfecto entre el gel y el papel. 


5. Inicie el procedimiento apretando la tecla "INICIO" (flecha verde del lado izquierdo del teclado). 

ABSORCIÓN CON PAPEL – DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 

• Absorción a 20 °C, controlados por efecto Peltier, durante 3 minutos. 

En la pantalla aparece el mensaje "[ABSORCION]". 

• Suena un pitido. 

En la pantalla aparece el mensaje intermitente "❊ PAP. + REHID 1", que indica que hay que sacar el papel de filtro y aplicar la solución 

rehidratante. 

V. REHIDRATACIÓN DEL GEL 


2. Saque el papel de filtro, dejando el gel en su sitio. 

3. Coloque encima del gel la plantilla R3 para el HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING o la plantilla ENZ 4 mL para el HYDRAGEL 9 CSF 

ISOFOCUSING (Figura 13). 

4. Dispense 4,5 mL de solución rehidratante para el HYDRAGEL 3 CSF FOCUSING ó 7 mL para el HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING a través 

del agujero de la plantilla, en el espacio que hay por debajo (Figura 14). 

El líquido recubre la totalidad de la superficie que está por debajo de la plantilla. 

5. No atrape burbujas de aire en la punta de la pipeta al aspirar la solución rehidratante. Para dispensar la solución rehidratante: 

- sostenga la pipeta verticalmente. 

- dispense la solución rehidratante con cuidado y progresivamente sin introducir burbujas de aire por debajo de la plantilla. 


7. Inicie el procedimiento inmediatamente apretando la tecla "INICIO" (flecha verde del lado izquierdo del teclado), y el mensaje dejará de ser 

intermitente. 

- 65 -


REHIDRATACIÓN DEL GEL – DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 


• Suena un pitido. En la pantalla aparece el siguiente mensaje intermitente: "❊ REHYD 1 + PAP.", que indica que hay que eliminar la solución 

rehidratante y aplicar un papel de filtro grueso. 

VI. ELIMINACIÓN DE LA SOLUCIÓN REHIDRATANTE 


2. Elimine la solución rehidratante: 

- sostenga la pipeta en posición vertical y apoye ligeramente la punta de la pipeta en el pocillo (Figura 14); 

- aspire el reactivo con cuidado y progresivamente. 

3. Saque la plantilla de aplicación de reactivos: 

- coja la plantilla por la solapa ; 

- eleve la plantilla y sáquela ; 

- la zona del gel recubierta por el líquido está rehidratada. 

VII.ABSORCIÓN CON PAPEL 

1. Aplique un papel de filtro grueso sobre el gel, tal como se ha descrito en el párrafo IV. 

2. Presione sobre toda la superficie del papel de filtro grueso para que se adhiera bien al gel. 


4. Inicie el procedimiento apretando la tecla "INICIO" (flecha verde del lado izquierdo del teclado); el mensaje de la pantalla dejará de ser 

intermitente. 


• Absorción a 20 °C controlados por efecto Peltier, durante 3 minutos. 

• Suena un pitido. En la pantalla aparece el siguiente mensaje intermitente: "❊ PAP. + REHID 2", que indica que hay que sacar el papel de filtro 

grueso y aplicar solución rehidratante. 

VIII. REHIDRATACIÓN DEL GEL 


2. Saque el papel de filtro, dejando el gel en su sitio. 

3. Coloque encima del gel la plantilla R3 para el HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING o la plantilla ENZ 4 mL para el HYDRAGEL 9 CSF 

ISOFOCUSING (Figura 13). 

4. Dispense 4,5 mL de solución rehidratante para el HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ó 7 mL para el HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING a 

través del agujero de la plantilla, en el espacio que hay por debajo (Figura 14). El líquido recubre la totalidad de la superficie que está por 

debajo de la plantilla. 

5. No atrape burbujas de aire en la punta de la pipeta al aspirar la solución rehidratante. Para dispensar la solución rehidratante proceda tal 

como se ha explicado en el párrafo V. 


7. Inicie el procedimiento inmediatamente apretando la tecla "INICIO" (flecha verde del lado izquierdo del teclado); el mensaje de la pantalla 

dejará de ser intermitente. 

REHIDRATACIÓN DEL GEL – DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 


• Suena un pitido. En la pantalla aparece el siguiente mensaje intermitente: "❊ REHID 2 + TTF3", que indica que hay que eliminar la solución 

rehidratante y aplicar la solución de visualización. 

IX. ELIMINACIÓN DE LA SOLUCIÓN REHIDRATANTE 


2. Elimine la solución rehidratante tal como se ha descrito en el párrafo VI. 

3. No saque la plantilla. 

X. REVELADO 

1. Aplique 3 mL de la solución de revelado TTF3 recién preparada para el HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ó 3.5 mL para el HYDRAGEL 9 

CSF ISOFOCUSING, en el espacio que hay por debajo de la plantilla. La solución de revelado recubre toda la superficie que hay por debajo 

de la plantilla. 

2. No atrape burbujas de aire en la punta de la pipeta al aspirar la solución de revelado. Para dispensar la solución de revelado, proceda tal 

como se ha descrito en el párrafo V. 


4. Inicie el procedimiento inmediatamente apretando la tecla "INICIO" (flecha verde del lado izquierdo del teclado). 

REVELADO – DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 


• Suena un pitido. En la pantalla aparece el siguiente mensaje intermitente: "❊ TTF3 + PAP.", que indica que hay que eliminar la solución de 

revelado y aplicar un papel de filtro grueso. 

XI. ELIMINACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE REVELADO 


2. Elimine la solución de revelado tal como se ha descrito en el párrafo VI. 

3. Saque la plantilla: 

- coja la plantilla de aplicación de reactivos por la solapa ; 

- eleve la plantilla y sáquela. 

- 66 -


XII.ABSORCIÓN CON PAPEL 

1. Aplique un papel de filtro grueso sobre el gel, procediendo tal como se ha descrito en el párrafo IV. 

2. Presione sobre toda la superficie del papel de filtro para que se adhiera bien al gel. 


4. Inicie el procedimiento apretando la tecla "INICIO" (flecha verde del lado izquierdo del teclado). 

5. Lave la plantilla de aplicación de reactivos con agua corriente con un cepillo flexible (tipo cepillo de dientes). La plantilla debe estar 

completamente seca antes de usarla de nuevo. Para eliminar las gotas de agua que hayan podido quedar atrapadas, golpee suavemente la 

plantilla contra un pañuelo de papel y séquela. 

NOTA: Después de la etapa de revelado con el TTF3, se puede limpiar el lado funcional de las plantillas R3 y ENZ 4 mL usando un pañuelo 

de papel impregnado con alcohol. 


• Absorción a 30 °C controlados por efecto Peltier, durante 3 minutos. 

• Suena un pitido. En la pantalla aparece el siguiente mensaje intermitente: "❊ PAP.", que indica que hay que sacar el papel de filtro grueso. 

XIII. SECADO DEL GEL 


2. Saque el papel de filtro grueso y deje el gel en el módulo de migración. 


4. Inicie el secado apretando la tecla "INICIO" (flecha verde del lado izquierdo del teclado). En la pantalla aparece el mensaje: "[SECADO]". 

. 

SECADO – DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 

• Secado del gel a 50 °C controlados por efecto Peltier, durante 3 minutos. 

• Suena un pitido que indica que hay que abrir la tapa. 

• Abra la tapa. 

• Saque el gel seco. 

NOTAS: 

- Después de abrir la tapa, la temperatura de la placa desciende hasta 20 ºC (en menos de 5 minutos). Puede entonces comenzarse una 

nueva migración. 

- Vuelva a colocar en el módulo de migración el soporte de los electrodos y el aplicador. 

- Limpie la placa con un pañuelo de papel humedecido. 

XIV. LAVADO DEL GEL 

1. Coloque el gel en el soporte del gel, con la cara de agarosa hacia el operario, procediendo de la manera siguiente (Figura 15): 

- abra el soporte del gel: 

- póngalo en una superficie plana ; 

- coloque el gel en las ranuras de las varillas ; 

- cierre el soporte del gel ; 

- compruebe que el gel esté bien colocado en las ranuras. 

2. Introduzca el soporte del gel en el módulo de tratamiento / coloración del gel. 

IMPORTANTE: Compruebe lo siguiente antes de comenzar el lavado: 

- el contenedor de solución decolorante contiene al menos 400 mL de solución decolorante. 

- el contenedor de desechos está vacío. 

3. Para saber en qué posición conectar los reactivos debe consultar la información que aparece en la pantalla del aparato después de pulsar la 

tecla : VER CANALES. 

IMPORTANTE: No olvide bloquear los canales no usados. 

4. Seleccione el programa de lavado “LAV. ISOENZ/GEL” en el menú del instrumento e inicie el procedimiento apretando la tecla "INICIO" (flecha 

verde del lado derecho del teclado). 

El sistema permanece bloqueado durante todas las etapas de lavado y secado. 

Después de que se haya enfriado la cubeta, suena un pitido y el módulo se desbloquea (la ventilación se mantiene hasta que se extrae el 

soporte del gel). 

5. Saque el soporte del gel del compartimento; abra el soporte del gel y extraiga el gel seco. Si es necesario, limpie y seque el respaldo del gel 

(el lado de soporte de plástico) con un pañuelo de papel humedecido. El gel está listo para ser interpretado. 

INTERPRETACIÓN 

El principio de interpretación es sencillo: hay que comparar el perfil de las inmunoglobulinas de las parejas LCR/suero correspondientes. 

La síntesis intratecal en el sistema nervioso central (SNC) se detecta por la presencia de bandas de Ig G en el perfil electroforético del LCR que no 

están presentes en el suero del mismo paciente. El suero siempre presenta bandas que pueden ser más o menos visibles, y en posiciones diferentes 

o idénticas a las observadas en el LCR (Figura 16). 

En teoría una única banda suplementaria en el LCR, ausente en la misma posición en el suero correspondiente, permite sospechar la existencia de 

síntesis intratecal. En la práctica, dos o más bandas suplementarias en el LCR son interpretadas como una indicación suficiente a favor del 

diagnóstico de esclerosis múltiple. Estas recomendaciones pueden evolucionar en función de los resultados obtenidos. Hay que tener en cuenta que 

el número de bandas observadas en un perfil oligoclonal no está correlacionado obligatoriamente con la gravedad o el pronóstico de la esclerosis 

múltiple. Por estos motivos, el número de bandas no debe ser tenido en cuenta, para evitar falsas interpretaciones. 

- 67 -


Para poder hacer una interpretación comparativa correcta es indispensable: 

• analizar líquidos biológicos del paciente (LCR y suero) obtenidos al mismo tiempo, en ausencia de cualquier tratamiento que pueda modificar la 

concentración de inmunoglobulinas, 

• medir de forma precisa la concentración de Ig G del LCR y el suero para analizar cantidades idénticas en el gel. 

• Si no se conoce la concentración de inmunoglobulinas, hay que diluir el suero entre 300 y 400 veces, y hay que analizar el LCR sin concentrar. En 

estos casos, la diferencia en la concentración de Ig G puede conducir a realizar interpretaciones falsas. 

La detección de una síntesis intratecal de inmunoglobulinas mediante inmunofijación sensibilizada es más específica y sensible que la indicada por 

los diferentes cálculos de cocientes o de índices realizados a partir de las concentraciones de Ig G, de la albúmina y de otras proteínas del LCR y el 

suero. 

La confirmación de una síntesis intratecal de inmunoglobulinas es una información importante para sospechar una patología inflamatoria del sistema 

nervioso central. 

Un perfil oligoclonal o cualquier otra indicación de síntesis intratecal puede aparecer en diferentes patologías cerebrales, por ejemplo: 

• 95 % de las esclerosis múltiples, 

• 100 % de las neurosífilis no tratadas, 

• 100 % de las leucoencefalitis subagudas esclerosantes. 

En conclusión, se puede detectar síntesis intratecal en numerosas enfermedades del SNC, asociadas generalmente a una inflamación, como las 

infecciones, neuropatías periféricas, neoplasmas, accidentes vasculares cerebrales, etcétera. 

El diagnóstico no debe en ningún caso basarse únicamente en los resultados de la inmunofijación. Estos resultados deben ser incluidos en un 

conjunto de informaciones clínicas e históricas del paciente, completadas con exámenes bioquímicos, microbiológicos y citológicos. 

Interferencias y Limitaciones 

El uso de antisueros distintos a los indicados por el fabricante para los procedimientos HYDRAGEL 3 y 9 CSF ISOFOCUSING puede afectar a los 

resultados. 

Debido a los principios analíticos de las técnicas actuales, es posible que algunos componentes monoclonales no sean detectados por este método. 

Resolución de problemas 

Contacte con el Servicio de Asistencia Técnica de su distribuidor cuando la prueba no funcione pese a haber seguido cuidadosamente las 

instrucciones para la preparación y conservación de los materiales. 

Puede solicitar las fichas de seguridad de los diferentes reactivos y las informaciones relativas a la eliminación de los productos de desecho al Servicio 

de Asistencia Técnica de su distribuidor. 

CARACTERÍSTICAS TÉCNICAS 

Reproducibilidad intraserial (repetibilidad) 

Las muestras de LCR y suero de cuatro pacientes han sido analizadas en 2 lotes diferentes de geles HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING, realizando 

9 análisis de cada pareja LCR / suero en cada gel (2 parejas presentaban síntesis intratecal y 2 parejas no la presentaban). 

Reproducibilidad intralote e interlotes 

Ocho parejas LCR/suero han sido analizadas en 10 geles HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING de un mismo lote y en 2 geles de un lote diferente 

(6 parejas presentaban síntesis intratecal y 2 parejas no la presentaban). 

Resultados: 

Los resultados obtenidos en el HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING mediante análisis cualitativo indican una muy buena repetibilidad y 

reproducibilidad del kit HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING en todos los aspectos probados usando el antisuero marcado dirigido contra las 

inmunoglobulinas de tipo G. 

Respecto a la repetibilidad y reproducibilidad, cada muestra analizada proporciona los mismos resultados en los 2 lotes de geles probados y los 

perfiles obtenidos son característicos de cada una de las muestras analizadas. 

Exactitud – Detección e identificación de bandas oligoclonales 

El análisis de 108 muestras diferentes de pacientes que presentan diferentes enfermedades del sistema nervioso central, mediante electroforesis en 

el gel HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING usando el antisuero anti-Ig G y otro sistema comercial de geles de agarosa, muestra una correlación 

perfecta entre los dos sistemas de análisis, con una sensibilidad del 100 % y una especificidad del 84,6 % respecto a la última técnica, calculadas 

según el método recomendado (Wending, 1986). 

Sensibilidad 

La sensibilidad de la técnica HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING es tal que el límite de detección de una paraproteína G, a la concentración inicial 

de 20 mg/L, es del orden de 0,31 mg/L. 

BIBLIOGRAFÍA 










- 68 -
















1994, 397 pp. 













1994, 54 : 75-80. 

(22) Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : Justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité. 

Impact-Internat, 1986 ; Sept : 93-97. 



- 69 -


UTILIZAÇÃO 

Os kits HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING e HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING Destinam-se à detecção qualitativa e identificação pondo em 

evidência um perfil oligoclonal específico nas bandas electroforéticas do líquido cefaloraquidiano e confirmação do carácter das imunoglobulinas (Ig) 

do mesmo. A técnica consiste num método de electroforese de alta resolução em gel de agarose, realizado com o sistema semi-automático 

HYDRASYS, seguido de imunofixação realizado com antisoros anti-Ig G. A utilização de enzimas antisoros marcadas anti-Ig G permite detectar 

apenas as bandas verdadeiras de Ig G oligoclonais, aumentando a sensibilidade de detecção para que a análise possa ser realizada na generalidade 

em LCR sem concentração prévia. Os parâmetros de imunofixação da Ig G de LCR e soro, do mesmo doente, são visualmente comparáveis. Este 

facto permite a detecção de bandas oligoclonais que representam a síntese intratecal de imunoglobulinas. 

Os kits HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING e HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING estão indicados na suspeita de algumas doenças do sistema 

nervoso central, tais como, esclerose múltipla, em que a detecção de bandas oligoclonais e processos inflamatórios (síntese intratecal de 

imunoglobulinas) podem ser úteis no diagnóstico. 

Para diagnóstico in vitro. Registado no INFARMED. 

PRINCÍPIO DO TESTE 

Vários distúrbios do sistema nervoso central estão associados ao aumento da concentração de proteínas de LCR quer devido ao aumento da 

permeabilidade da barreira sangue-LCR quer devido à síntese de imunoglobulinas, sobretudo Ig G, dentro do sistema nervoso central. Este último 

caso, a síntese intratecal de Ig’s, está frequentemente associado a uma heterogeneidade da Ig que se manifesta como uma “pistagem oligoclonal” 

que é reconhecida nos padrões de migração electroforéticos de alta resolução. As bandas na zona de gama-globulina não são sempre as verdadeiras 

bandas oligoclonais, i.e. Ig’s não têm, portanto, o mesmo significado diagnóstico do que as bandas oligoclonais de Ig. A imunofixação é uma técnica 

de valor uma vez que pode provar a característica de Ig da pista oligoclonal e identificar a Ig presente. Para confirmar a síntese intratecal de Ig, devem 

ser analisados em paralelo o soro e o LCR do doente de modo a demonstrar as diferenças nos padrões de distribuição de Ig’s entre o LCR e o soro. 

A confirmação da síntese intratecal de Ig é uma informação importante para se poder suspeitar de uma doença inflamatória do sistema nervoso 

central, como as causadas por esclerose múltipla. Embora as bandas oligoclonais não sejam específicas da esclerose múltipla, nem mesmo para o 

seu diagnóstico, são largamente utilizadas como informação de suporte e considerado um teste essencial pelo consenso de 1994 “Committe of the 

European Concerted Action for Multiple Sclerosis”. Está comprovado em doentes com episódios clínicos de esclerose múltipla e sugerido em doentes 

com apenas alguns episódios ou sintomas clínicos inconclusivos. Entre outros, o Comité determinou os seguinte critérios para a detecção da banda 

de Ig G oligoclonal em LCR: (i) A técnica de maior resolução e sensibilidade para a detecção de bandas oligoclonais é a electroforese de alta 

resolução, (ii) a Ig G oligoclonal deverá ser detectada por antisoro específico, (iii) para confirmar a síntese de Ig G intratecal, o soro do doente e o 

seu LCR devem ser analisados em paralelo para que se acentuem as diferenças na distribuição da Ig G, (iv) como ajuda na interpretação, a 

concentração de Ig G na amostra de LCR e soro devem ser ajustada ao mesmo nível, e (v) a concentração elevada de LCR deverá ser evitada. O 

teste de HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING respeita os critérios acima referidos. 

A técnica é composta de duas fases: 

• Electroforese de alta resolução em gel de agarose, fraccionando as proteínas em amostras de LCR e soro; 

• Imunofixação com enzimas (peroxidase) marcada de antisoro anti-Ig G permitindo detectar e identificar as bandas oligoclonais em LCR, fazendo 

uma análise comparativa da distribuição das diferentes especificidades das imunoglobulinas nas amostras de LCR ou soro. 

A sensibilidade de revelação das proteínas é aumentada em cerca de 100 vezes com a técnica de HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING, 

comparativamente às técnicas colorimétricas utilizadas habitualmente nas imunofixações. Assim, com Ig G numa concentração de 1 mg/dL ou mais, 

esta pode ser detectada e a sua distribuição identificada sem concentração da amostra de LCR. 

O sistema semi-automático HYDRASYS realiza todos as fases necessárias para obtenção do gel pronto para interpretação. 

Cada gel de agarose de HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING contém 6 pistas, as quais se destinam a correr três pares de amostras de LCR – soro. 

Cada gel de agarose de HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING contém 18 pistas, as quais se destinam a correr nove pares de amostras de LCR – soro. 

REAGENTES E MATERIAIS FORNECIDOS NOS KITS HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING E HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING 

ITEM REF N° 4353 REF N° 4355 Geles de agarose (prontos a usar) 10 geles 10 geles Etilenoglicol (pronta a usar) 1 frasco, 3 ml 1 frasco, 3 ml Solução anódica (pronta a usar) 1 frasco, 50 ml 1 frasco, 50 ml Solução catódica (pronta a usar) 1 frasco, 50 ml 1 frasco, 50 ml Tiras de tampão 10 pacotes de 2 10 pacotes de 2 Diluente de amostras CSF (pronto a usar) 1 frasco, 85 ml 1 frasco, 85 ml Diluente de anti-soro CSF ISOFOCUSING (pronto a usar) 1 frasco, 3,75 ml 1 frasco, 3,75 ml Solução rehidratante CSF 2 frascos, 70 ml 2 frascos, 70 ml Solvente TTF3 (pronto a usar) 2 frascos, 20 ml 2 frascos, 20 ml TTF3 (solução concentrada) 2 frascos, 0,5 ml 2 frascos, 0,5 ml Aplicadores (prontos a usar) 1 pacote de 10 (6 dentes) 1 pacote de 10 (18 dentes) Frasco de Tampão (pronto a usar) 1 pacote de 2 1 pacote de 2 Segmentos antisoro (pronto a usar) 1 pacote de 10 1 pacote de 10 Papéis de filtro finos 1 pacote de 10 1 pacote de 10 Papéis de filtro espessos 3 pacotes de 10 cada 3 pacotes de 10 cada 

| Máscaras de plástico | 1 pacote de 10 | 1 pacote de 10 | 

PARA RESULTADOS ÓPTIMOS 

Todos os reagentes do mesmo kit podem ser sempre utilizados em conjunto e de acordo com as instruções inclusas na embalagem. 

POR FAVOR, LER CUIDADOSAMENTE O INTERIOR DA EMBALAGEM. 

- 70 - 

INSTRUÇÕES DE USO SEBIA - Português


1. GELES DE AGAROSE 

Preparação 

Os geles de agarose estão prontos a usar. Cada gel contém: agarose, 1 g/dl ; anfólitos ; aditivos, não perigosos nas concentrações usadas, 

necessários para optimizar o ensaio. 

Utilização 

Meio de suporte para electroforese e imunofixação das proteínas. 

Armazenamento, estabilidade e sinais de deterioração 

Armazenar os geles horizontalmente, na embalagem protectora de origem, no frigorífico (2 - 8 ºC) (a seta existente na parte da frente da caixa do kit 

deve ficar voltada para cima). São estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit e nos rótulos das embalagens dos geles. NÃO CONGELAR! 

Evitar variações da temperatura durante o armazenamento (ex: não armazenar perto de uma janela ou de uma fonte de calor). 

Deitar fora o gel quando: 

(i) houver cristais ou precipitados na superfície do gel ou quando a textura do mesmo for muito macia (isto sucede se o gel for congelado); 

(ii) há desenvolvimento de bactérias ou fungos; 

(iii) estiver presente uma quantidade anormal de líquido na embalagem do gel (resultante da exsudação do gel devido a condições de 

armazenamento inadequadas). 

2. SOLUÇÃO DE ETILENOGLICOL 

Preparação 

A solução de etilenoglicol está pronta a usar. 

AVISO: Não ingerir! Se ingerida, consultar imediatamente um médico! 

Utilização 

Destina-se a efectivar o contacto entre a parte plástica do gel e ao superfície de temperatura controlada do módulo de migração, durante a migração 

electroforética. 


Armazene a solução de etilenoglicol à temperatura ambiente ou no frigorífico. 

A solução é estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit e nos rótulos dos frascos das soluções de etilenoglicol. 

3. SOLUÇÕES ANÓDICA E CATÓDICA 

Preparação 

As soluções anódica (solução ácida) e a solução catódica (solução básica) estão prontas a usar. Ambas contém aditivos, não perigosos nas 

concentrações usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

NOTA: A solução catódica é corada de vermelho para distinção na monitorização da sua aplicação e para uma fácil identificação na preparação da 

tira anódica. 

AVISO: A solução catódica contém hidróxido de sódio, irritante aos olhos e pele. No caso de contacto com os olhos, lavar imediatamente 

com água abundante e consulte imediatamente o médico! 

Utilização 

Funcionam como electrólitos para a preparação das tiras anódica e catódica para electroforese. 

IMPORTANTE: Após cada utilização, feche imediatamente e de forma estanque, o frasco da solução catódica, por forma a evitar a carbonização da 

solução. 


Armazenar as soluções anódicas e catódicas à temperatura ambiente ou no frigorífico. São estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit 

e nos rótulos dos frascos das soluções. 

As soluções não devem apresentar precipitado. 

4. TIRAS DE TAMPÃO 

Preparação 

Saturar duas tiras de esponja, respectivamente, com solução anódica e catódica 5 minutos antes de utilizar: 

Coloque o frasco cinzento para a tira da solução anódica e o frasco azul para a tira da solução catódica, numa superfície plana. 

Despeje 5 ml de solução anódica vermelha no frasco cinzento e 5 ml de solução catódica incolor no frasco azul. 

Abra a embalagem das esponjas, agarre nas tiras pelas extremidades plásticas e insira-as em cada frasco. 

Ensope as tiras pressionando várias vezes com a ponta das pipetas correspondentes. 

Utilize as tiras imediatamente. 

IMPORTANTE: Sature as tiras imediatamente antes da sua utilização, para evitar carbonização da solução catódica. 

Utilização 

As tiras de tampão ensopadas em soluções anódicas e catódicas, respectivamente, asseguram asseguram o contacto entre o gel e os eléctrodos e 

determinam o intervalo do pH durante a forese. 


Armazenar as tiras horizontalmente nas embalagens protectoras originais à temperatura ambiente ou no frigorífico (a seta existente na parte da frente 

da caixa do kit deve voltada para cima). São estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit e nos rótulos das embalagens das tiras. 

NÃO CONGELAR. 

Deitar fora os pacotes que estiverem abertos ou cujas tiras estejam secas. 

5. DILUENTE DE AMOSTRAS LCR 

Preparação 

O diluente de amostras vem pronto a usar. Contém: solução salina com suplemento de albumina de soro bovino, azida de sódio e aditivos, não 

perigosos nas concentrações usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

Utilização 

Para diluição das amostras de LCR e soro. 

- 71 -



Armazenar o diluente de amostras no frigorífico (2 - 8 ºC). É estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou nos rótulos dos frascos. O 

diluente deve estar isento de precipitados. 

6. DILUENTE DE ANTI-SORO CSF ISOFOCUSING 

Preparação 

O diluente de anti-soro vem pronto a usar. Contém azida de sódio e aditivos, não perigosos nas concentrações usadas, necessários para optimizar 

o ensaio. 

Utilização 

Para diluição de anti-soro imediatamente antes da aplicação. 


Armazenar o diluente de anti-soro no frigorífico (2 - 8 ºC). É estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou nos rótulos dos frascos. O 

diluente de anti-soro deve estar isento de precipitados. 

NOTA: Enquanto armazenado, o diluente de anti-soro pode ficar amarelo sem que tal tenha efeitos adversos na sua actuação. 

7. SOLUÇÃO REHIDRATANTE CSF 

Preparação 

A solução rehidratante vem pronta a usar. Contém solução aquosa, pH 6.0, e aditivos, não perigosos nas concentrações usadas, necessários para 

optimizar o ensaio. 

Utilização 

Para rehidratar os geles antes e após a revelação peroxidásica. 


A solução rehidratante pode ser armazenada à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou 

nos rótulos dos frascos da solução. A solução rehidratante deve estar isenta de precipitados. 

8. SOLVENTE DE TTF3 

Preparação 

O solvente de TTF3 vem pronto a usar. Contém componentes não perigosos nas concentrações usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

Utilização 

Para preparação da solução reveladora TTF3, conforme descrito no ponto nº 9. 


O solvente de TTF3 pode ser armazenado à temperatura ambiente ou no frigorífico e é estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou nos 

rótulos dos frascos do solvente. O solvente de TTF3 deve estar livre de precipitados. 

9. TTF3 

Preparação 

Preparar a solução de revelação imediatamente antes de a utilizar. Adicionar os reagentes pela seguinte ordem: 4 ml de solvente de TTF3; 100 µl de 

TTF3 e 4 µl de água oxigenada (H 2 

O 2 

) (30 %). 

AVISO: O TTF3 contem dimetilformamida. A sua inalação é prejudicial à saúde! No caso de haver ventilação insuficiente usar equipamento 

respiratório adequado. Não ingerir! Se ingerido, procure assistência médica imediata! Nocivo quando em contacto com a pele. Usar 

vestuário de protecção adequado. Irritante para os olhos. Se houver contacto acidental com a pele e com os olhos proceda a lavagem 

imediata e abundante com água e procure assistência médica. Evite a exposição e obtenha instruções especiais de utilização antes do 

manuseamento. Pode provocar cancro. Se se sentir indisposto procure assistência médica imediata (mostre a etiqueta do frasco, se 

possível). 

Utilização 

Para a revelação das imunoglobulinas nos geles, separadas por electroforese via peroxidase nos antisoros marcados. 


O TTF3 pode ser armazenado à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou no rótulo do 

frasco. A solução de TTF3 deve estar livre de precipitados. 

10. APLICADORES 

Utilização 

Aplicadores pré-cortados, de utilização única, para aplicação das amostras no gel. 


Armazenar os aplicadores em local seco à temperatura ambiente ou no frigorífico. 

11. FRASCOS DE TAMPÃO 

Utilização 

Frascos reutilizáveis para a preparação de tiras anódicas e catódicas. 

O frasco cinzento destina-se à tira anódica e o frasco azul à tira catódica. 

Após cada uso, lavar os dois frascos com água destilada ou desionizada e secá-los. 


Armazenar os frascos secos e limpos numa superfície plana e à temperatura ambiente. 

12. SEGMENTOS DE ANTI-SOROS 

Utilização 

Utilização única. Segmentos coloridos para aplicação de antisoros sobre o gel de imunofixação. 

AVISO: Segmentos com antisoros devem ser manuseados com cuidado. 

- 72 -


13. PAPEL DE FILTRO FINO 

Utilização 

Pré-cortados, de utilização única, destinam-se a absorver o excesso de líquido da superfície do gel antes da aplicação da amostra. 

Armazenamento 

Armazenar os papéis de filtro finos num local seco à temperatura ambiente ou no frigorífico. 

14. PAPEL DE FILTRO ESPESSO 

Utilização 

De utilização única, destinam-se a absorver as proteínas não precipitadas da superfície do gel depois das fases da imunofixação e da rehidratação 

e a eliminar o excesso de revelador após a revelação peroxidásica. 

Armazenamento 

Armazenar os papéis de filtro espessos num local seco à temperatura ambiente ou no frigorífico. 

15. MÁSCARAS DE PLÁSTICO 

Utilização 

Máscaras de plástico pré-cortadas, de utilização única, que se destinam a proteger o gel durante a fase electroforética da migração. 

EQUIPAMENTO E ACESSÓRIOS NECESSÁRIOS 

1. Sistema HYDRASYS SEBIA, ref. n° 1211 com OPTION FOCUSING HYDRASYS SEBIA, ref. nº 1235. 

ou 

2. HYDRASYS FOCUSING System SEBIA, ref. nº 1212. 

3. Micropipetador, manual ou automático, tal como o HYDRAPLUS SEBIA, ref. nº 1216 ou HYDRAPLUS 2 SEBIA, ref. nº 1217, como alternativa na 

pipetagem das amostras para os aplicadores respectivos ou segmentos de antisoro. 

4. Câmara húmida fornecida com o sistema HYDRASYS, ref. n° 1270. 

5. Guia da Barra para a fixação da máscara SEBIA, fornecida com o sistema HYDRASYS. 

6. Máscara dinâmica, SEBIA, ref. nº 1255. 

7. Kit de acessórios HYDRASYS 3 CSF ISOFOCUSING SEBIA, ref. nº 1258. Contém: reagente de aplicação R3, ENZ 4 ml e aparelho de redução 

de comprimento a metade. 

8. Kit de frasco fornecido com o HYDRASYS. 

9. Pipetas: 2 µl, 20 µl, 100 µl, 200 µl e 5 ml (pipetas graduadas: 0-100 µl, 100-500 µl e 1-10 ml). 

REAGENTES NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOS 

1. ANTI-SORO ANTI-Ig G-PER 

Preparação 

O frasco de antisoro (SEBIA ref. nº 4743: 1 frasco, 0,60 ml) contém uma solução de imunoglobulinas totais de mamífero anti-Ig G humanas 

conjugadas a uma peroxidase. O reagente tem uma cor específica de modo a evitar erros durante a utilização. A cor é a mesma da etiqueta do frasco. 

Preparar a solução de antisoro extemporaneamente misturando por cada par LCR/soro a analisar: 

Para HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING : 25 µl de anti-Ig G-PER e 175 µl de diluente de antisoro. 

Para HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING : 40 µl de anti-Ig G-PER e 300 µl de diluente de antisoro. 

Misture bem. 

Utilização 

Para imunoprecipitação e visualização das Ig G’s separadas por electroforese. 


Armazenar o antisoro no frigorífico (2 - 8 ºC). É estável até ao fim da validade indicada no rótulo do frasco do antisoro. 

Deitar fora se notar alterações no seu aspecto, por exemplo, se ficar turva devido a contaminação microbiana. 

NOTA: Os antisoros podem ter origem de diferentes espécies animais. Não misturar dois frascos diferentes de antisoro, mesmo tendo a mesma 

especificidade, e mudar SEMPRE a ponta da pipeta quando se mudar de frasco de antisoro. 

Durante o transporte, os antisoros podem ser mantidos à temperatura ambiente (entre 15 e 30 ºC) durante 15 dias, sem que esse facto afecte a 

qualidade do teste. 

2. ÁGUA OXIGENADA: H 2 

O 2 

a 110 Volumes (30 %) 

A água oxigenada deve ser conservada num frasco de vidro escuro e colocado no frigorífico (2 - 8 ºC). Quando utilizada, deve usar SEMPRE pipetas 

limpas de modo a evitar contaminações. 

3. SOLUÇÃO DESCORANTE 

Preparação 

Cada frasco de descorante concentrado (SEBIA, PN 4540, 10 frascos, de 100 ml cada) deve ser diluído a 1/100 com água destilada ou 

desmineralizada. É conveniente diluir apenas 5 ml da solução concentrada de cada vez, para o volume final de 5 litro, o volume do frasco de solução 

descorante. Após diluição, a solução descorante contém: ácido cítrico, 50 mg/dl. 

Utilização 

Para lavagem do gel após visualização enzimática, assim como, para lavagem e secagem da câmara de coloração do HYDRASYS. 

Para neutralizar a acidez da solução descorante para deitar fora, coloque 15 ml de 50 % de uma solução de hidróxido de sódio, num recipiente vazio 

para desperdício. 


Armazenar a solução descorante original à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou nos 

rótulos dos frascos da solução descorante. A solução descorante diluída é estável por uma semana à temperatura ambiente, quando conservada em 

frasco fechado. 

- 73 -


Para evitar contaminação microbiana na solução descorante diluída, se esta for armazenada mais de uma semana, adicione 5 µl/dl de ProClin 300. 

A solução resultante é estável à temperatura ambiente ou no frigorífico até à data indicada na embalagem do kit ou no rótulo do frasco da solução 

descorante. 

Não adicionar azida de sódio. 

Deitar fora a solução diluída se o seu aspecto se alterar ou se ficar turva devido a contaminação microbiana. 

4. SOLUÇÃO DE LAVAGEM HYDRASYS 

Preparação 

Cada frasco de solução de lavagem concentrada HYDRASYS (SEBIA, ref. nº 4541, 10 frascos de 80 ml cada) deve ser diluído para a obtenção do 

volume final de 5 litros com água destilada ou desionizada. Após diluição, a solução de lavagem contém: tampão alcalino pH 8,8 ± 0,3 ; azida de 

sódio. 

AVISO: A solução de lavagem contém 0,625 % de azida de sódio. Não ingerir! Se ingerida, consultar imediatamente um médico! Quando em 

contacto com ácidos, chumbo ou cobre, a azida de sódio pode levar à formação de compostos explosivos ou tóxicos. Quando deitar fora 

lavar abundantemente com grandes quantidades de água. 

Utilização 

A solução destina-se à limpeza da câmara de coloração do HYDRASYS. Utilize-a periodicamente, ou seja, lave a câmara semanalmente se o 

instrumento for utilizado diariamente. 

Ver as instruções de utilização incluídas na embalagem. 


Armazenar a solução de lavagem concentrada e diluída em recipientes fechados à temperatura ambiente ou no frigorífico. Ambas são estáveis até 

ao fim da validade indicada no rótulo do frasco da solução de lavagem. 

Deitar fora a solução de lavagem diluída se houver alterações no seu aspecto, por exemplo, se ficar turva devido a contaminação microbiana. 

AMOSTRAS 

Colheita e conservação das amostras 

O soro e o LCR do mesmo doente devem ser colhidos ao mesmo tempo, de acordo com os métodos utilizados nos laboratórios de análises clínicas. 

É recomendada a utilização de amostras de soro e LCR frescas. As amostras podem ser conservadas uma semana no frigorifico (2 - 8 ºC). Para 

conservações prolongadas, congelar as amostras. As amostras de soro e CSF congeladas são estáveis durante um mês, no mínimo. 

Preparação das amostras 

• Dosear as imunoglobulinas que queremos analisar no soro e no LCR. 

• A concentração de qualquer imunoglobulina específica a ser comparada nos pares de soro e LCR deve ser sempre ajustada, de modo a ser igual 

nas duas amostras. 

O ajustamento depende da concentração de Ig’s de LCR original. Usar diluente de amostra para todas as diluições: 

1º caso: A concentração em Ig G do LCR é superior a 2 mg/dl 

Diluir o LCR e o soro com diluente de amostra para obter uma concentração em Ig G, da especificidade a analisar, de 2 mg/dl. 

2º caso: A concentração em Ig G do LCR está entre 1 e 2 mg/dl 

Usar o LCR puro e diluir o soro com diluente de amostra para obter a mesma concentração em Ig G, da especificidade a analisar, que o LCR. 

3º caso: A concentração em Ig G do LCR é inferior a 1 mg/dl 

Concentrar o LCR por qualquer técnica apropriada, de forma a que a concentração em Ig G, da especificidade a analisar, fique entre 1 e 2 mg/dl. 

Diluir o soro com diluente de amostra para obter uma concentração em Ig G, da especificidade a analisar, idêntica à do LCR. 

Cálculo da diluição a aplicar (apenas aplicável a amostras com concentração de Ig G superior a 2,0 mg/dl): 

Para o LCR: 

A mg/dl = concentração da Ig G a analisar superior a 2 mg/l. 

Pipetar 20 µl de CSF e adicionar 10 x (A - 2) µl de diluente de amostra. 

Para o soro: 

B mg/dl = concentração da Ig G a analisar. 

Diluir o soro 10 vezes, juntando 10 µl de soro e 90 µl de diluente de soro. 

Pipetar “y” µl de soro diluído e adicionar [ y (B/20 -1)] µl de diluente de amostra (valor aconselhado para y = 2 µl, e [(B/10) – 2] µl de diluente de 

amostra. 

Quando a concentração de Ig G é desconhecida: 

Utilize LCR puro e dilua o soro 300 - 400 vezes. 

NOTA: Uma falha no ajuste da concentração das amostras de LCR e soro com a concentração de Ig G, podem afectar negativamente a interpretação 

dos parâmetros – ver “INTERPRETAÇÃO”. 

PROCEDIMENTO 

O sistema HYDRASYS é um aparelho multiparâmetros semi-automático. As etapas automatizadas incluem o processamento dos geles de agarose 

HYDRAGEL, de acordo com a seguinte sequência: pré-migração, aplicação da amostra, migração electroforética por focalização isoeléctrica, 

incubação com o antisoro marcado com enzima, revelação com substracto da enzima, paragem da reacção enzimática, coloração e secagem final 

do gel. As etapas manuais incluem: preparação das amostras e geles, aplicação dos reagentes e preparação do aparelho para entrada em 

funcionamento. 

LER ATENTAMENTE O MANUAL DE INSTRUÇÕES DO HYDRASYS. 

IMPORTANTE: Verificar se a máscara dinâmica está correctamente posicionada, para obtenção de um alinhamento correcto entre os perfis 

electroforéticos e as pistas de revelação da máscara. 

- 74 -


I. PREPARAÇÃO DA MIGRAÇÃO 

1. Ligar o aparelho HYDRASYS. 

2. Pressionar o interruptor verde de alta voltagem para o modo de alta voltagem, de forma a obter a alta voltagem necessária para a focalização 

isoeléctrica; em seguida o interruptor fica vermelho. 

NOTA: O interruptor de alta voltagem fornece informações da migração. Durante a migração indica os valores de volt hora atingidos (Vh) e 

da intensidade de corrente actual (mA). Quando pressionado durante a migração, indica os valores da tensão (V) e da potência (W). Se 

pressionado de novo, volta aos valores Vh e mA. 

Quando o HYDRASYS está no modo de alta tensão, o écran mostra o valor real da intensidade de corrente, mas os outros valores (tensão, 

volt horas e potência) estão divididos por 10. 

3. Colocar um aplicador de 6 dentes para o HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ou um aplicador de 18 dentes para o HYDRAGEL 9 CSF 

ISOFOCUSING, numa superfície plana, com os números dos poços voltados para cima. 

4. Colocar 10 µL da amostra em cada poço do aplicador (Fig. 1). O enchimento do aplicador não deve exceder os 2 minutos. 

Apresenta-se a seguir um exemplo de uma análise de três pares de LCR-Soro em HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING gel e nove pares LCR- 

Soro em HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING gel. 


| LCR | SORO | LCR | SORO | 

DOENTE Nº DOENTE Nº POÇO Nº (aplicador de 6 dentes) | (aplicador de 18 dentes) | 

1 1 2 1 2 2 3 4 3 4 3 5 6 5 6 4 - - 7 8 5 - - 9 10 6 - - 11 12 7 - - 13 14 8 - - 15 16 | 9 | - | - | 17 | 18 | 

- Colocar imediatamente o aplicador na câmara húmida, com os dentes virados para cima (manejando-o pela protecção plástica dos dentes). 

Para mais informações consultar as instruções de utilização da câmara húmida. 

Antes de efectuar a aplicação das amostras na superfície do gel, é necessário efectuar a etapa de pré-migração até serem atingidos 

75 Vh, de acordo com as seguintes instruções: 

5. Abrir a tampa do módulo de migração e levantar as plataformas do porta-aplicadores e do porta-eléctrodos. 

AVISO: Nunca fechar a tampa enquanto as plataformas do porta-aplicadores e porta-eléctrodos estão levantadas ! 

6. Seleccionar o programa de migração "3/9 CSF FOCUSING" a partir do menu do aparelho (lado esquerdo do teclado). 

7. Impregnar as tiras anódica e catódica nas soluções correspondentes. Consultar o parágrafo nº 4 do capítulo REAGENTES E MATERIAIS 

FORNECIDOS. Remover as tiras das tinas anódica e catódica, manuseando-as pelas extremidades plásticas. 

8. Fixar as tiras sobre a plataforma porta-electrodos com a ajuda das linguetas perfuradas (Fig. 2): Quando a plataforma estiver elevada a tira 

anódica vermelha é colocada sobre o eléctrodo inferior (ânode) da plataforma, e a tira catódica não corada é colocada sobre o eléctrodo 

superior (cátodo). O lado da tira fixada sobre a lingueta deve estar em contacto com o eléctrodo. 

9. Retirar a placa de gel de agarose, HYDRAGEL, da embalagem. 

10. Colocar a face plástica da placa sobre um tecido ou papel de filtro, para remover as gotículas de água. 

11. Eliminar o excesso de líquido à superfície do gel, com um papel de filtro fino durante 3 segundos. 

12. Colocar 150 µL de etilenoglicol (EG) para o HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ou 300 µL para o HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING, sob a 

forma de uma linha, ao longo do terço inferior da moldura impressa, na Placa de Controlo da Temperatura do módulo de migração. 

13. Colocar a placa do gel (o gel voltado para cima) contra a barreta, no interior da moldura impressa (Fig. 3). 

Dar uma forma côncava ao gel (Fig. 3) e deixá-lo deslizar sobre a placa até entrar em contacto com a solução de etilenoglicol (ET). Assegurar 

que não ficam bolhas de ar retidas. A solução de etilenoglicol deve estar espalhada sob toda a superfície do gel. O gel está alinhado com a 

moldura impressa. 

14. Colocar uma máscara de plástico no gel: 

- Pegar numa máscara de plástico. 

- Alinhar a parte inferior da máscara de plástico com as 2 marcas laterais impressas a 1.5 cm da parte inferior do suporte plástico do gel 

(lado catódico) (Fig. 4). 

- Aplicar a máscara sobre a superfície do gel. Evitar a retenção de bolhas de ar entre o gel e a máscara. 

- Se ficarem retidas bolhas de ar, retirar imediatamente a máscara de um dos lados, para eliminar as bolhas e aplicá-la novamente, 

lentamente, sobre o gel. 

- Evitar mover o gel no tabuleiro de migração durante esta manipulação. 

AVISO : A máscara de plástico não deve ser colocada abaixo das duas marcas laterais impressas no suporte plástico do gel. 

15. Fazer descer as duas plataformas. Nesta posição, as tiras tamponadas não tocam o gel. NÃO FORÇAR A DESCIDA DAS PLATAFORMAS. 

16. Fechar a tampa do modulo de migração. 

17. Iniciar imediatamente o processo, pressionando a seta verde "START" situada no lado esquerdo do teclado. 

IMPORTANTE: Certifique-se que a entrada de ar do ventilador, situada no lado direito do aparelho, não está bloqueada. 

PRÉ-MIGRAÇÃO – DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMATIZADOS 

• Descer o porta-eléctrodos para que as tiras tamponadas entrem em contacto com a superfície do gel. 

• A migração é efectuada num máximo de 1000 V, à temperatura de 20 ºC, controlada pelo efeito Peltier até se atingir 75 Vh. 

- 75 -


• A plataforma porta-eléctrodos eleva-se para desligar os eléctrodos. 

• Ecoa um sinal sonoro e a tampa fica desbloqueada. O sinal sonoro persiste até à intervenção do operador. No écran é mostrada a seguinte 

mensagem intermitente: "POS : 1" avisando para a colocação imediata do aplicador na plataforma. 

NOTA: A tampa do modulo de migração permanece fechada durante todos as etapas da migração. 

18. Abrir a tampa do modulo de migração. 

19. Remover o aplicador da câmara húmida. Manuseá-lo pela protecção plástica. 

- Eliminar a protecção plástica dos dentes do aplicador. 

- Colocar o aplicador na posição No. 1 sobre o porta-aplicadores. 

IMPORTANTE: Os números impressos no aplicador têm de estar virados para o operador (Fig. 5). 

20. Fechar a tampa do modulo de migração. 

21. Dar início imediato à sequência, pressionando a seta verde "START" no lado esquerdo do teclado. 

MIGRAÇÃO – DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMATIZADOS 

• Descer as duas plataformas para que as tiras tamponadas e o aplicador entrem em contacto com a superfície do gel. 

• A plataforma do aplicador da amostra sobe. 

• A migração é efectuada num de máximo a 1000 V, durante cerca de 45 minutos, à temperatura de 20 ºC controlada pelo efeito Peltier, até se atingir 

700 Vh. 

• A plataforma porta-eléctrodos eleva-se para desligar os eléctrodos. 

• Ecoa um sinal sonoro e a tampa fica desbloqueada. O sinal sonoro persiste até à intervenção do operador. No écran é mostrada a seguinte 

mensagem intermitente: “ AS”, avisando para a aplicação do antisoro marcado. . 

NOTA: Durante todos os passos da migração, a tampa do modulo de migração permanece fechada. 

II. PREPARAÇÃO DA IMUNOFIXAÇÃO 

A máscara dinâmica contém um segmento de antisoros, um apoio de segmento, uma barra metálica para ligação da máscara e um aparelho de 

redução de comprimento (Fig. 6). 

Durante a migração, preparar a máscara do seguinte modo: 

1. Colocar a máscara dinâmica numa superfície plana. 

2. Para o HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING, posicione o dispositivo redutor de comprimento na parte final do guia da máscara dinâmica. 

3. Preparar um segmento antisoro no apoio de segmentos (Fig. 7). 

- Inclinar o segmento antisoro num ângulo de 45º e posicioná-lo contra as molas de plástico do apoio de segmentos. 

- Separar os dois elementos e manobre o segmento de modo a fixá-lo nos encaixes do apoio de segmentos. 

AVISO: Assegurar que o segmento está correctamente posicionado no apoio: os pinos nas pontas do segmento devem estar 

bloqueados nos encaixes do apoio. 

4. Colocar o apoio com o segmento na guia da máscara dinâmica com o dispositivo para redução de metade do comprimento já no seu lugar 

(Fig. 8). 

Aplicar reagentes do modo seguinte: 

Para HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING : aplicar 20 µl/poço de antisoro anti-Ig G – PER nos poços 4 e 12 ; 

Para HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING : aplicar 20 µl/poço de antisoro anti-Ig G – PER em cada um dos 15 poços. 

Aspirar os reagentes evitando qualquer bolha de ar na ponta da pipeta. 

5. Aplicar os reagentes (Fig. 9). 

- Segurar a pipeta num ângulo definido e pousar a ponta levemente no lado do poço sem tocar no fundo do mesmo. 

- Injectar a gota de reagente no poço. 

III. IMUNOFIXAÇÃO 

1. Após a migração: Abrir a tampa (a mensagem pára de piscar). 

2. Retirar o aplicador e deitá-lo fora. 

3. Levantar os suportes, retirar as tiras de tampão pegando-lhes pelas suas extremidades de plástico e deitá-las fora. 

4. Retirar os suportes. 

5. Limpar os eléctrodos com um pano macio e húmido. 

6. Deixar o gel no seu lugar na câmara de migração e remova a máscara de plástico a partir de um dos cantos e deite-a fora. 

AVISO: Não mova o gel durante este passo. 

7. Colocar em posição a máscara dinâmica, para aplicação dos antisoros no gel, da seguinte forma (Fig. 10): 

- Colocar a barra metálica para a ligação da máscara de incubação nos pinos de fixação (a barra metálica pode permanecer no módulo de 

migração). 

- Segurar a máscara pela pega e colocá-la sobre a barra metálica (encaixando as extremidades nas reentrâncias da mesma). 

- Baixar a máscara sobre o gel. 

- Certifique-se que o suporte do segmento se encontra no ponto mais baixo da guia da máscara, de frente para o operador. 

- Segure o suporte de segmento pela pega localizada à direita e pressione o ponto de pressão central de forma a que o antisoro contacte 

com o gel. 

- Liberte a pressão. Os reagentes espalhar-se-ão por cada pista (Fig. 11). 

- Imediatamente a seguir, utilizando a pega do segmento, mova-o devagar em movimentos firmes de cima para baixo a todo o comprimento 

do gel para espalhar os reagentes. Repita este passo duas vezes; a aplicação deverá demorar aproximadamente 5 segundos em cada 

passagem (Fig. 12). 

- Durante este passo, segure na máscara apenas pela pega do segmento. Evite tocar na guia. 

8. Deixe a máscara dinâmica na câmara do HYDRASYS com o segmento de antisoro no ponto mais baixo da guia da máscara. 

9. Feche a tampa do módulo de migração. 

10. Inicie imediatamente o processo de incubação premindo a tecla "START" (tecla verde situada no lado esquerdo do teclado). 

Aparece a mensagem "[INCUBAÇÃO]" no ecrã. 

- 76 -


IMUNOFIXAÇÃO - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Incubação a 20 ºC durante 10 minutos (controlada pelo efeito de Peltier). 

• Ouve-se um sinal sonoro indicando que a tampa do módulo de migração se encontra destrancada. Aparece a seguinte mensagem no ecrã: 

" PAP.". 

NOTA: A tampa da câmara de migração permanece fechada durante a incubação. 

IV. ABSORÇÃO DO GEL 

1. Abrir a tampa da câmara de migração. 

2. Desagregar a reunião da máscara dinâmica: 

- Remover o suporte de segmentos utilizando a sua pega. 

- Remover o segmento de antisoros do suporte e deitá-lo fora. 

AVISO : O segmento com antisoros deve ser manuseado com cuidado. 

3. Aplicar uma folha de papel de filtro espesso sobre o gel: 

- Inclinar o papel de filtro 45º. Alinhar a sua margem inferior com a margem do gel. 

- Aplique-o sobre o gel. 

AVISO : Pressione firme e uniformemente, para assegurar um contacto perfeito com o gel. 

4. Feche a tampa do módulo de migração. 

5. Dar início à sequência de absorção premindo a tecla verde "START" (situada no lado esquerdo do teclado). 

ABSORÇÃO - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Absorção a 20 ºC controlados pelo efeito de Peltier, durante 3 minutos. 

Uma mensagem aparece no ecrã: "[BOMBAGEM]". 

• Ouve-se um sinal sonoro e a seguinte mensagem aparece no ecrã: "❊ PAP. + REHID 1" indicando que se deve remover o papel de filtro e 

aplicar a solução de rehidratação. 

V. REHIDRATAÇÃO DO GEL 


2. Retirar o papel de filtro deixando o gel no seu lugar na câmara de migração. 

3. Colocar a máscara R3 para o HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ou a ENZ 4 mL para o HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING (Fig. 13). 

4. Pipetar a solução de rehidratação evitando introduzir bolhas de ar na ponta da pipeta. 

5. Aplicar 4,5 ml para o HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ou 7 ml para o HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING de solução rehidratante através 

do poço da máscara para o espaço subjacente (Fig. 14). Assegurar que a solução sob a máscara está uniformemente espalhada na superfície 

rectangular, cujo centro é o poço da máscara. 

- Segure a pipeta na vertical e assente levemente a sua ponta no fundo do poço. 

- Cuidadosa e progressivamente, injectar o rehidratante, sem introduzir bolhas de ar. 

6. Fechar a tampa da câmara de migração. 

7. Dar início imediatamente ao processo de incubação, premindo a tecla "START" (tecla verde situada no lado esquerdo do teclado). 

REHIDRATAÇÃO DO GEL - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Incubação a 20 ºC controlada pelo efeito de Peltier, durante 5 minutos. 

• Ouve-se um sinal sonoro e aparece a seguinte mensagem no ecrã: "❊ REHID 1 + PAP.", indicando que se deve remover a solução de 

rehidratação e aplicar o papel de filtro. 

VI. ELIMINAÇÃO DA SOLUÇÃO DE REHIDRATAÇÃO 


2. Retirar a solução de rehidratação. 

3. Segure a pipeta na vertical e assente levemente a sua ponta no fundo do poço (Fig.14). 

4. Lenta e cuidadosamente aspirar o rehidratante. 

5. Pegar na máscara pela sua pega, levantá-la e retirá-la. A área do gel está rehidratada. 

VII.ABSORÇÃO DO GEL 

1. Aplicar uma folha de papel de filtro espesso na área rehidratada do gel como descrito no § IV. 

2. Exercer pressão uniforme, para assegurar um contacto perfeito com o gel. 


4. Dar início à sequência de absorção, premindo a tecla "START" (tecla verde situada no lado esquerdo do teclado). 


• Absorção a 20 ºC controlada pelo efeito de Peltier, durante 3 minutos. 

• Ouve-se um sinal sonoro e a seguinte mensagem aparece no ecrã: "❊ PAP + REHID 2", indicando que o papel de filtro deve ser removido e a 

solução de rehidratação aplicada. 

VIII. REHIDRATAÇÃO DO GEL 


2. Retirar o papel de filtro deixando o gel no seu lugar na câmara de migração. 

3. Colocar a máscara R3 para o HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ou a ENZ 4 ml para o HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING (Fig. 13). Pipetar 

a solução de rehidratação evitando introduzir bolhas de ar na ponta da pipeta e aplicar 4,5 ml para o HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ou 

7 ml para o HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING de solução rehidratante através do poço da máscara para o espaço subjacente (Fig. 14). 

- Assegurar que a solução sob a máscara está uniformemente espalhada na superfície rectangular, cujo centro é o poço da máscara. 

- Segure a pipeta na vertical e assente levemente a sua ponta no fundo do poço. 

- Cuidadosa e progressivamente, injectar o rehidratante, sem introduzir bolhas de ar. 


6. Dar início imediatamente ao processo de incubação, premindo a tecla "START" (tecla verde situada no lado esquerdo do teclado). 

- 77 -


REHIDRATAÇÃO DO GEL - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Incubação a 20 ºC controlada pelo efeito de Peltier, durante 5 minutos. 

• Decorrido o tempo de incubação, soa um sinal sonoro e a seguinte mensagem no ecrã: "❊ REHID 2 + TTF3" indicando que a solução de 

rehidratação deve ser removida e a solução de revelação aplicada. 

IX. ELIMINAÇÃO DA SOLUÇÃO DE REHIDRATAÇÃO 


2. Retirar a solução de rehidratação conforme anteriormente descrito no § VI. 

3. Deixar a máscara no seu lugar. 

X. REVELAÇÃO 

1. Aplicar 3 ml de solução de revelação TTF3 preparada imediatamente antes da utilização para o HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ou 3,5 ml 

para o HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING. A solução de revelação cobre a totalidade da superfície sob a máscara. 

2. Pipetar a solução de revelação TTF3 evitando introduzir bolhas de ar na ponta da pipeta. Para a aplicação da solução de revelação proceder 

como descrito no § V. 


4. Dar início imediatamente ao processo de incubação, premindo a tecla verde "START" situada no lado esquerdo do teclado. 

REVELAÇÃO - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Incubação a 30 ºC controlados pelo efeito de Peltier, durante 15 minutos. 

• Ouve-se um sinal sonoro e a seguinte mensagem aparece no ecrã: "❊ TTF3 / PAP.", indicando que se deve remover a solução de revelação e 

aplicar uma folha de papel de filtro espesso. 

XI. REMOÇÃO DA SOLUÇÃO DE REVELAÇÃO 


2. Eliminar a solução de revelação como anteriormente descrito no § VI. 

3. Pegar na máscara pela sua pega, levantá-la e retirá-la. 

XII.ABSORÇÃO DO GEL 

1. Aplicar uma folha de papel de filtro espesso sobre o gel como descrito no § IV. 

2. Exercer pressão uniforme, para assegurar um contacto perfeito com o gel. 


4. Dar início à sequência de absorção, premindo a tecla "START" (tecla verde situada no lado esquerdo do teclado). 

5. Enxaguar a máscara sob água corrente, com uma pequena escova (ex: escova de dentes). Antes de a reutilizar, assegure-se de que a 

máscara está completamente seca; remova as eventuais gotículas de água do seu interior batendo com ela suavemente em papel 

absorvente. 

NOTA: Contrariamente à máscara CSF, pode ser usado álcool para limpeza da máscara R3 ou ENZ 4 ml depois da etapa de revelação com 

TTF3. 


• Absorção a 30 ºC controlada pelo efeito de Peltier, durante 3 minutos. 

• Ouve-se um sinal sonoro e a seguinte mensagem aparece a piscar no ecrã: "❊PAP.", indicando que se deve remover a folha de papel de filtro 

espesso. 

XIII. SECAGEM DO GEL 


2. Retirar a folha de papel de filtro e deixar o gel no seu lugar. 

3. Fechar a tampa do HYDRASYS. 

4. Dar início à sequência de secagem premindo a tecla verde "START" situada no lado esquerdo do teclado. Surge a mensagem seguinte no 

ecrã: "[SECAGEM]". 

SECAGEM - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Secagem do gel a 50 ºC controlada pelo efeito de Peltier, durante 3 minutos. 

• Ouve-se um sinal sonoro dando a indicação para a abertura da tampa. 

• Abrir a tampa. 

• Retirar o gel seco. 

NOTAS: 

- A temperatura da placa diminui para 20 ºC em menos de 5 minutos. Quando se atingem os 20 ºC pode-se dar início a um novo processo 

de migração. 

- Colocar o aplicador de amostras e o porta eléctrodos no seu lugar. 

- Limpar a placa de controlo de temperatura com um pano macio e húmido. 

XIV. LAVAGEM E PROCESSAMENTO FINAL DO GEL 

Após secagem o gel é lavado no compartimento de coloração utilizando o programa “LAV ISOENZ/GEL”. Se o compartimento foi utilizado 

previamente para corar gel proteico, limpe o compartimento com programa “LAVAGEM DE COMPARTIMENTO”. 

1. Abra o suporte do gel e coloque-o em posição vertical. Posicione o gel (face de gel voltada para cima) nas ranhuras das duas varas e feche 

o suporte. Certifique-se que o file está correctamente posicionado dentro do suporte (Fig. 15). 

2. Coloque o suporte do gel dentro do processador/colorador de gel. 

IMPORTANTE: Antes de começar o programa de processamento/coloração do gel, certifique-se que o recipiente de solução de descoloração 

contém no mínimo 400 ml de solução de descoloração e que o recipiente para desperdício se encontra vazio. 

3. Para a ligação entre reagentes e linhas: referindo a informação apresentada no ecrã do instrumento (seleccione a tecla: VER CANAIS). 

- 78 -


4. Seleccione o programa de lavagem “LAV. ISOENZ/GEL” no menu do instrumento e pressione a tecla verde "START" situada no lado esquerdo 

do teclado. 

NOTA: Durante os passos de lavagem e secagem, o compartimento mantém-se fechado. Após o passo de refrescamento, ouve-se um sinal 

sonoro indicando que o compartimento se encontra destrancado (a ventilação permanece até que o suporte do gel seja retirado). 

5. Remova o suporte do gel do compartimento; abra os clips e retire o gel seco. Se necessário, limpe a parte de trás (a parte de plástico do gel) 

do gel com um papel fino molhado. O gel encontra-se pronto para avaliação. 

INTERPRETAÇÃO 

O principio de interpretação é simples: Compara-se o perfil das imunoglobulinas do LCR e do soro. O perfil diferente das imunoglobulinas ou a 

presença de bandas suplementares monoclonais ou oligoclonais no LCR permite concluir que houve uma síntese intratecal de imunoglobulinas Ig G 

(Fig.16). 

Bandas ténues estão sempre presentes no soro e podem ou não estar no mesmo nível de migração das observadas com o LCR. Estas bandas não 

devem ser tidas em conta para a interpretação. Representam a heterogeneidade das Ig G’s do soro e podem ser identificadas apenas através de 

técnicas de elevada resolução e sensibilidade. Em teoria, uma banda mais forte, uma banda adicional ou mesmo uma única banda ténue de 

imunofixação observada no perfil do LCR, mas não no perfil do soro, é indicativo de síntese de Ig intratecal. Na prática, duas ou mais bandas são 

tomadas como indicações seguras de síntese intratecal. Duas ou mais bandas surgem também como evidência de suporte à esclerose múltipla, 

embora possam ser geralmente representadas quatro ou mais bandas oligoclonais Ig G. Assim, alguns recomendam as quatro bandas como suporte 

à esclerose múltipla embora esta percepção tenha vindo a mudar com a descoberta de mais informação sobre o tema. Deve ter-se em conta que o 

número de bandas oligoclonais não se correlaciona com a severidade e prognóstico, em casos de esclerose múltipla confirmada. Por esta razão, o 

número de bandas não deverá ser relatado para evitar falhas de interpretação relativamente ao seu número. 

Para assegurar uma correcta interpretação comparativa, é imperativo que: 

• As amostras de LCR e de soro do mesmo doente devem ser colhidas ao mesmo tempo. Deve ser evitado qualquer tratamento das amostras que 

possa alterar a concentração das imunoglobulinas. 

• As concentrações das imunoglobulinas do soro e do LCR devem ser determinadas com precisão, de forma a que, depois dos ajustamentos, sejam 

aplicadas ao gel iguais quantidades da Ig em questão, na amostra de soro e na amostra de LCR. 

• Se a concentração de Ig G for desconhecida, o soro utilizado deve ser diluído a 300 - 400x e o LCR deve ser utilizado puro. De seguida, durante 

o processo de interpretação, a desigualdade das concentrações de Ig G devem ser tidas em conta, aquando possíveis efeitos não esperados. 

A detecção da síntese intratecal de Ig por imunofixação sensibilizada é mais específica e mais sensível do que a informação proporcionada pelos 

vários cálculos determinados a partir das concentrações totais das imunoglobulinas, albuminas e outras proteínas do soro e do LCR. 

A confirmação da síntese intratecal de Ig é uma informação importante quando se suspeita de doenças inflamatórias do sistema nervoso central. O 

perfil oligoclonal ou outra indicação da síntese intratecal das Ig pode ser encontrada em várias doenças do sistema nervoso central tais como: 

• 95% das escleroses múltiplas. 

• 100% das neurosífilis não tratadas. 

• 100% das leucoencefalites esclerosantes sub-agudas. 

Raramente, a indicação da síntese intratecal de Ig G pode ser encontrada em várias doenças do Sistema Nervoso Central, usualmente associadas 

a processos inflamatórios, infecções, neuropatias periféricas, neoplasmas, acidentes cerebrovasculares, etc. 

O diagnóstico não se deve basear apenas em determinações por imunofixação. Devem ser consideradas conjuntamente as observações clínicas e 

a história do doente, complementadas por ensaios bioquímicos e microbiológicos. 

Interferências e limitações 

Antisoro: O uso de outros antisoros que não os recomendados para a utilização com os kits HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING pode afectar a 

qualidade dos resultados. 

Devido aos limites de resolução e sensibilidade da zona de electroforese, é possível que alguns componentes monoclonais possam não ser 

detectados através deste método. 

Assistência técnica 

Em caso de maus resultados contactar os serviços técnicos do fornecedor ainda que tenham sido seguidas, escrupulosamente, as instruções para 

a preparação e armazenamento dos reagentes, assim como as instruções de utilização da técnica. 

Informações e Folhas de Dados de Segurança do kit de reagentes sobre a eliminação de produtos de desperdício são disponibilizados pelo Serviço 

Técnico do fornecedor. 

CARACTERÍSTICAS DO ENSAIO 

Reprodutibilidade 

Reprodutibilidade intra-gel 

Foram aplicadas amostras de soro e de LCR de quatro doentes em todas as 18 pistas de geles HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING provenientes de 

dois lotes (dois pares com síntese intratecal e outros dois pares sem síntese intratecal). 

Reprodutibilidade do gel inter-lote 

Oito pares de amostras LCR/soro foram aplicadas em cada dez geles HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING do mesmo lote e em dois geles de outro 

lote (seis pares com síntese intratecal e dois pares sem síntese intratecal). 

Resultados: 

Após observação visual, em todos os estudos de reprodutibilidade a presença ou ausência de bandas oligoclonais foi frequentemente detectado em 

cada amostra e em todos os geles com antisoro anti-Ig G – PER. Não ocorreram falsos positivos ou negativos e não foram observadas diferenças 

entre as repetições. 

- 79 -


Precisão - Detecção e identificação de bandas oligoclonais 

Amostras de soro e de LCR de doentes com várias doenças do sistema nervoso central (n = 108) foram analisadas com o kit HYDRAGEL 9 CSF 

ISOFOCUSING, materiais e técnicas em paralelo com outro sistema de electroforese de imunofixação disponível no mercado para a detecção de 

bandas Ig G oligoclonais. 

Verificou-se uma perfeita correlação na detecção de fracções oligoclonais entre os dois sistemas de análise. As poucas diferenças observadas 

basearam-se na grande resolução da técnica HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING. Os resultados foram consistentes com os diagnósticos clínicos, 

indicação de síntese intratecal e danos na barreira hemato-encefálica. 

Sensibilidade 

A sensibilidade da técnica HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING foi determinada por diluições em série de uma proteína monoclonal, 2 mg/dl. O limite 

de detecção de uma banda monoclonal do tipo Ig G determinado foi 0,031 mg/dl. 

BIBLIOGRAFIA 
























1994, 397 pp. 













1994, 54 : 75-80. 



- 80 -


ANVÄNDNINGSOMRÅDE 

HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING och HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING kit är designade för kvalitativ detektering och identifiering av 

"oligoklonala" band i de elektroforetiska mönstren hos cerebrospinalvätska (CSF) samt bekräftelse på dess immunoglobulina karraktär. Proceduren 

inkluderar isoelektrofokusering på agarosgel, utförd med det semiautomatiska HYDRASYS systemet, följt av immunofixering med ett anti-Ig G 

antiserum. Användningen av enzyminmärkt anti-lg G antiserum tillåter detektion av endast ”korrekt” lg G bandning med ökad detektionskänslighet så 

att analysen generellt kan utföras på okoncentrerad CSF. Immunofixeringsmönstren för Ig G hos CSF och serum från samma patient jämförs sedan 

visuellt. Detta tillåter detektering av oligoklonal bandning som representerar intratekal syntes av immunoglobuliner. 

HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING och HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING kit rekommenderas när vissa sjukdomar misstänks i det centrala 

nervsystemet (CNS) såsom multipel skleros där detektion av oligoklonala band och inflammatoriska processer (intratekal syntes av immunoglobuliner) 

kan vara till hjälp vid diagnos. 

Endast för in vitro diagnostik. 

TESTPRINCIPER 

Många sjukdomar i centrala nervsystemet associeras med ökad koncentration av CSF proteiner antingen på grund av ökad genomsläpplighet hos 

blod-CSF barriären eller på grund av syntes av immunoglobuliner inom det central nervsystemet (CNS), primärt Ig G. I det senare fallet gäller att sådan 

intratekal syntes av immunoglobuliner (lg:s) ofta associeras med begränsad heterogenitet vilket visar sig som "oligoklonal bandning" som kan ses i 

gammazonen hos elektroforetiska migrationsmönster vid hög upplösning. Band som icke är lg band kan också vara närvarande i gammaglobulinzonen 

men de har inte samma diagnostiska betydelse. Immunofixering är detektionstekniken som valts eftersom den kan påvisa Ig egenskaperna hos de 

oligoklonala banden, identifiera de Ig band som är involverade samt ge nödvändig specificitet hos testen. Eftersom endast oligoklonal bandning av Ig 

G har en rutinmässig diagnostisk betydelse är detta SEBIA test primärt utvecklat för detektion av oligoklonala band för Ig G med specifikt Ig G 

antiserum. 

Närvaro av intratekal Ig G tyder på inflammatoriska sjukdomar i centrala nervsystemet (CNS), som till exempel orsakats av multipel skleros. Även om 

oligoklonal bandning varken är diagnostisk eller specifik för MS, så används den allmänt som stödjande information och anses som ett nödvändigt 

test i samstämmighet med 1994:s “Committee of the European Concerted Action for Multiple Sclerosis” (kommitté för gemensam europeisk 

handlingsplan för multipel skleros). Den är konfirmatorisk hos patienter med kliniska MS episoder samt tyder på MS hos patienter med endast få 

episoder eller ej helt entydiga kliniska symptom. 

Bland annat har kommitten fastställt kriterier för detektion av lg G oligoklonala band hos CSF: (i) teknik med bäst upplösning och känslighet för 

detektering av oligoklonala band är isoelektrisk fokusering, (ii) oligoklonalt lg G måste detekteras med specifikt antiserum, (iii) för att bekräfta intratekal 

lg G syntes måste patientserum och CSF analyseras parallellt för att påvisa skillnader i distribuering av lg G, (iv) koncentrationen av lg G hos CSF 

och serumprover skall justeras till samma nivå för hjälp vid tolkning, (v) koncentrering av CSF bör undvikas. 

HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING tester uppfyller alla ovanstående kriterier. 

Analysen utförs i två delar: 

• Isoelektrisk fokusering på agarosgel för att fraktionera proteinerna i CSF- och serumprov. 

• Immunofixering med enzyminmärkt (peroxidas), Ig G antiserum för detektering av oligoklonala band av Ig G för påvisa skillnad, eller icke skillnad, i 

fördelning av Ig G i CSF och serum. 

Jämfört med standard-immunofixering uppnås ungefär 100 gånger högre detektionskänslighet med HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING kit, vilka 

använder enzyminmärkta antikroppar. Det innebär att redan vid en Ig G koncentration av 1 mg/dL eller mer, kan Ig G detekteras och dess fördelning 

urskiljas utan koncentrering av CSF provet. 

Det halv-automatiska HYDRASYS systemet utför alla nödvändiga steg för att erhålla geler färdiga för tolkning. 

Varje agarosgel hos HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING innehåller 6 spår och är avsedd till att köra tre CSF – serum provpar. 

Varje agarosgel hos HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING innehåller 18 spår och är avsedd till att köra nio CSF – serum provpar. 

MEDFÖLJANDE REAGENSER OCH MATERIAL I HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING OCH HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING KITEN 

OBJEKT PN 4353 PN 4355 Agaros geler (färdiga att använda) 10 geler 10 geler Etylen-glykol lösning (färdig att använda) 1 flaska 3 mL 1 flaska 3 mL Anodisk lösning (färdig att använda) 1 flaska, 50 mL 1 flaska, 50 mL Katodisk lösning (färdig att använda) 1 flaska, 50 mL 1 flaska, 50 mL Strips 10 förp. 2 i varje 10 förp. 2 i varje Provspädningsdiluent CSF (färdig att använda) 1 flaska, 85 mL 1 flaska, 85 mL Antiserum diluent CSF ISOFOCUSING (färdig att anv) 1 flaska, 3.75 mL 1 flaska, 3.75 mL Rehydrerande lösning CSF (färdig att använda) 2 flaskor, 70 mL 2 flaskor, 70 mL TTF3 Lösningsmedel (färdig att använda) 2 flaskor, 20 mL 2 flaskor, 20 mL TTF3 (brukslösning) 2 flaskor, 0.5 mL 2 flaskor, 0.5 mL Applikatorer (färdiga att använda) 1 förp. med 10 (6 tänder) 1 förp. med 10 (18 tänder) Buffertbehållare (färdig att använda) 1 förp. med 2 1 förp. med 2 Antiserumsegment (färdig att använda) 1 förp. med 10 1 förp. med 10 Filterpapper – tunna 1 förp. med 10 1 förp. med 10 Filterpapper – tjocka 3 förp. med 10 i varje 3 förp. med 10 i varje 

| Plastmasker | 1 förp. med 10 i varje | 1 förp. med 10 i varje | 

FÖR OPTIMALA RESULTAT 

Reagenser från samma kit måste alltid användas tillsammans och enligt de instruktioner som anges på förpackningens insticksblad. 

LÄS NOGGRANNT FÖRPACKNINGENS INSTICKSBLAD. 

- 81 - 

SEBIA INSTRUKTIONER - Svenska


1. AGAROS GELER 

Förberedelse 

Agaros geler är färdiga att använda. Varje gel innehåller: agaros, 1 g/dL ; amfolyter ; tillsatser, ofarliga vid använda koncentrationer men nödvändiga 

för optimala prestanda. 

Användning 

Hjälpmedel för protein isoelektrisk-fokusering och immunofixering. 

Lagring, stabilitet och tecken på förändring 

Förvara gelerna horisontellt i originalförpackningen, i kylskåp (2 till 8 °C). De är hållbara fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på 

gelförpackningens etiketter (Pilen på förpackningens framsida måste peka uppåt). 

Undvik förvaring nära fönster eller värmekälla. Undvik större temperaturvariationer under lagring. 

FRYS INTE IN GELEN. 

Släng gelen om: 

(i) kristaller eller fällning bildas på gelytan eller om gelkonsistensen blivit väldigt mjuk (inträffar när gelen varit fryst), 

(ii) bakteriell tillväxt eller mögeltillväxt påvisas, 

(iii) onormal mängd vätska är närvarande i påsförpackningen (som ett resultat av buffertutsöndring från gelen på grund av felaktiga 

lagringsförhållanden). 

2. ETYLEN-GLYKOL LÖSNING 

Förberedelse 

Etylen-glykol lösning, färdig att använda. 

VARNING: Farligt att svälja. 

Användning 

För att ge effektiv kontakt mellan gelens plastbaksida och temperaturkontrollplattan på migrationsmodulen under elektroforetisk migrering. 


Lagra etylen-glykol lösningen vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är hållbar fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på etylenglykolflaskans 

etikett. 

3. ANOD OCH KATOD LÖSNINGAR 

Förberedelse 

Anodlösningen (sur lösning) och katodlösningen (basisk lösning) är färdiga att använda. Båda lösningarna innehåller komponenter, ofarliga vid 

använda koncentrationer men nödvändiga för optimala prestanda. 

NOTERA : För enkel identifiering och som en hjälp vid appliceringen är anodlösningen rödfärgad för att lätt identifiera den anodiska buffertsvampen. 

VARNING: Katodlösningen innehåller natriumhydroxid. Irriterande för ögon och hud. Om lösning kommer i kontakt med ögonen, skölj 

omedelbart med mycket vatten och uppsök läkare. 

Användning 

Som elektrolyter för att buffra de anodiska och katodiska stripsen för isoelektrisk fokusering. 

VIKTIGT : Efter varje användning, stäng flaskan med den katodiska lösningen direkt och se till att den är ordentligt tillsluten för att undvika 

karbonatisering av lösningen. 


Anod- och katodlösningarna kan lagras i rumstemperatur eller i kylskåp och är hållbara fram till angivet utgångsdatum på paketet eller flaskornas 

etiketter. Lösningarna måste vara fria från fällning. 

4. STRIPS 

Förberedelse 

Blötlägg två svampstrips i respektive anod- och katodlösning i 5 minuter innan användning. 

Placera den grå behållaren för anodstrips och den blå behållaren för katodstrips på en slät yta. 

Fördela 5 mL av den röda anodiska lösningen i den grå behållaren och 5 mL av den ofärgade katodlösningen i den blå behållaren. 

Öppna förpackningen med obuffrade svampar, hantera stripsen i deras plasttändar och placera en i varje behållare. 

Fukta dem jämnt genom att trycka flera gånger med spetsen hos motsvarande pipetter. 

Använd de mättade stripsen omedelbart. 

VIKTIGT: Blötlägg stripsen strax innan användning för att undvika karbonatisering av katodlösningen. 

Användning 

Stripsen som har mättats med respektive anod- och katodlösning säkerställer kontakt mellan gel och elektroder och fastställer pH-området under 

fokusering. 


Fuktade svampar i originalförpackning kan lagras vid rumstemperatur eller i kylskåp. De måste lagras liggande i den skyddande originalförpackningen 

(pilen på framsidan av paketet måste peka uppåt). De är hållbara fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller stripsförpackningens etiketter. 

FRYS EJ. 

Släng stripsen om de är uttorkade eller om paketet är öppnat. 

5. PROVSPÄDNINGS DILUENT CSF 

Förberedelse 

Provspädningsdiluent är färdig att använda. Den innehåller saltlösning supplementerad med serum albumin av däggdsjursursprung, natriumazid och 

tillsatser, vilka är ofarliga vid använda koncentrationer, men nödvändiga för optimala prestanda. 

Användning 

För CSF och spädning av serumprov. 


Förvara provspädningsdiluenten i kylskåp (2 till 8°C). Den är hållbar till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på diluentflaskornas etiketter. 

Diluenten måste vara fri från fällning. 

- 82 -


6. ANTISERUM DILUENT CSF ISOFOCUSING 

Förberedelse 

Antiserum diluent är färdig att använda. Den innehåller tillsatser vilka är ofarliga vid använda koncentrationer, men nödvändiga för optimala prestanda. 

Användning 

För spädning av antisera strax innan användning. 


Antiserum diluent kan lagras vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är hållbar till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på antiserumets 

flasketiketter. Antiserum diluent måste vara fri från fällning. 

NOTERA: Under lagring, kan antiserum skifta till gul färg utan någon negativ inverkan på prestandan. 

7. CSF REHYDRERANDE LÖSNING 

Förberedelse 

Rehydrerande lösning är färdig att använda. Den innehåller komponenter, vilka är ofarliga vid använda koncentrationer, men nödvändiga för optimala 

prestanda. 

Användning 

För rehydrering av agarosgel innan och efter det peroxidas-baserade visualiseringssteget. 


Rehydrerande lösning kan lagras vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är hållbar fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på den 

rehydrerande lösningens flasketiketter. Rehydrerande lösning måste vara fri från fällning. 

8. TTF3 LÖSNINGSMEDEL 

Förberedelse 

TTF3 lösningsmedel är färdig att använda. Den innehåller komponenter, vilka är ofarliga vid använd koncentration, men nödvändig för optimal 

prestanda. 

Användning 

För förberedelse av TTF3 visualiseringslösning, som är beskrivet i nr. 9. 


TTF3 lösning kan lagras vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är hållbar till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på TTF3 lösningens 

flasketiketter. TTF3 lösning måste vara fri från fällning. 

9. TTF3 

Förberedelse 

Strax innan användning, förbered arbetslösningen. Tillsätt reagenserna i följande ordning: 4 mL av TTF3 lösning, 100 µL av TTF3 och 4 µL väteperoxid 

(H 2 

O 2 

) 30 %. 

VARNING: TTF3 innehåller Dimetylformamid. Farligt att inandas ! Vid otillräcklig ventilation, bär lämplig andningsutrustning. Förtär ej! Om 

så skulle ske, kontakta omedelbart läkare! Farlig vid hudkontakt. Använd för ändamålet lämplig skyddsklädsel. Medlet irriterar ögonen. Efter 

ögon- eller hudkontakt, skölj omedelbart med mycket vatten, sök medicinsk rådgivning. Undvik exponering, införskaffa 

säkerhetsinformation innan användning. Kan orsaka cancer. Vid illamående, sök direkt läkare (visa etiketten om möjligt). 

Användning 

För peroxidas visualisering av immunoglobuliner separerade med isofokusering. 


Lagra TTF3 stamlösning vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är hållbar fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på flasketiketterna. 

TTF3 lösning måste vara fri från fällning. 

10. APPLIKATORER 

Användning 

Tillskurna applikatorer för engångsbruk. För provapplicering på gel. 


Förvara applikatorerna på en torr plats, vid rumstemperatur eller i kylskåp. 

11. BUFFERTBEHÅLLARE 

Användning 

Återanvändbara färgade behållare för att buffra anodiska och katodiska strips. 

Grå behållare är avsedd för anodisk svamp och blå behållare för katodisk svamp. 

Efter varje användning, tvätta båda behållarna med destillerat eller avjoniserat vatten och torka dem. 


Lagra de rena buffertbehållarna på en slät yta vid rumstemperatur. 

12. ANTISERUMSEGMENT 

Användning 

Engångsanvändning, färgade segment för applicering av antiserum på gel för immunofixering med dynamisk mask. 

VARNING : Segment laddade med antiserum måste behandlas försiktigt. 

13. FILTERPAPPER - TUNNA 

Användning 

Tunnt tillskurna och absorberande pappersbitar för engångsbruk. Används för bortagning av fukt på gelytan innan provapplicering. 

Förvaring 

Förvara de tunna filterpappren på ett torrt ställe i rumstemperatur eller i kylskåp. 

- 83 -

14. FILTERPAPPER- TJOCKA 


Användning 

För engångsbruk, tjocka absorberande pappersbitar för blottning av oprecipiterade proteiner från gelen efter immunofixering- och rehydreringstegen. 

Förvaring 

Förvara de tjocka filterpappren på en torr plats, vid rumstemperatur eller i kylskåp. 

15. PLASTMASKER 

Användning 

Plastblad, för engångsbruk, för att skydda gelen under elektroforetisk migrering. 

UTRUSTNING OCH NÖDVÄNDIGA TILLBEHÖR 

1. HYDRASYS System SEBIA, PN 1211 med TILLVAL HYDRASYS SEBIA, PN 1235. 

eller 


3. Mikropipett, manuell eller automatisk, t.ex. HYDRAPLUS SEBIA, PN 1216 eller HYDRAPLUS 2 SEBIA, PN 1217, ett alternativt sätt att ladda 

provapplikatorerna eller antiserasegmenten. 

4. Fuktkammare, PN 1270, levererad med HYDRASYS. 

5. Mallguide SEBIA levererad med HYDRASYS. 

6. Dynamisk mask, SEBIA, PN 1255. 

7. Tillbehörskit för HYDRASYS CSF ISOFOCUSING SEBIA, PN 1258. Den innehåller: masker för reagensapplicering R3, ENZ 4 mL och en halvlängdreducerande 

ram. 

8. Behållarsats levererad med HYDRASYS. 

9. Pipetter: 2 µL, 20 µL, 100 µL, 200 µL och 5 mL. (eller graderade pipetter: 0-100 µL, 100-500 µL och 1-10 mL.) 

EJ LEVERERADE MEN NÖDVÄNDIGA REAGENSER 


Flaska med antiserum (SEBIA PN 4743: 1 flaska, 0.60 mL) innehåller brukslösning av icke-humant immunoglobulin antiserum av däggdjursursprung 

med specificitet för Ig G, konjugerad med peroxidas. För lätt indentifikation och som en hjälp av övervaka dess användning är antiserum färgat med 

en ofarlig färg som matchar färgen på flasketiketten. 

Förbered arbetslösningen strax innan användning: 

För HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING : 25 µL anti–Ig G - PER och 175 µL antiserum diluent. 

För HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING : 40 µL anti–Ig G - PER och 300 µL antiserum diluent. 

Blanda väl. 

Användning 

För immunofixering och visualisering av isoelektrofokuserade lg G. 


Förvara antiserum i kylskåp (2 till 8 °C). Den är hållbar till angivet utgångsdatum på antiserumets flasketiketter. 

Kassera antiserum om den ändrar utseende, t.ex. blir grumlig på grund av mikrobiell kontaminering. 

VIKTIGT: Antisera kan härröra från olika djurarter. Blanda inte två olika antiseraflaskor även om de har samma specificitet, och byt ALLTID pipettspets 

vid byte mellan antiserumflaskor. 

Under transport kan antisera förvaras utan kyla (15 to 30 °C) i 15 dagar utan några negativa effekter på prestandan. 

2. VÄTEPEROXID: H 2 

O 2 

, 30 % (110 Vol.) 

Väteperoxid måste förvaras i mörk flaska och i kylskåp (2 till 8 °C). Vid pipettering, använd alltid en ren pipett för att undvika kontaminering av flaskans 

innehåll. 

3. AVFÄRGNINGSLÖSNING 

Förberedelse 

Varje flaska med stamlösning av (SEBIA, PN 4540, 10 flaskor 100 mL i varje) skall spädas upp till 100 liter med destillerat eller avjoniserat vatten. 

Lämpligt är att endast späda 5 mL av stamlösning till 5 liter, som är volymen hos behållaren för avfärgningslösningen. Efter spädning innehåller den 

färdiga avfärgningslösningen: citronsyra, 50 mg/dL. 

Användning 

För att tvätta gelen efter enzymatisk visualisering samt för torkning och avsköljning av HYDRASYS färgfack. 

För att neutralisera den sura avfärgningslösningen vid avyttring, häll 15 mL av en 50 % Natrium-hydroxidlösning, in i den tomma avfallsbehållaren. 


Förvara stamlösning vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är hållbar till angivet utgångsdatum på avfärgningslösningens förpackning eller på 

flasketiketterna. 

Den färdigspädda avfärgningsslösningen är hållbar i en vecka under förutsättning att den förvaras i en stängd flaska vid rumstemperatur. 

För att förhindra mikrobiell tillväxt i den spädda avfärgningslösningen (vid lagring mer än 1 vecka) tillsätt 5 µl/dL av ProClin 300. 

Bruksavfärgningslösning tillsatt med ProClin är hållbar i stängd flaska, förvarad vid rumstemperatur eller i kylskåp till angivet urgångsdatum på 

förpackningen eller på avfärgninglösningens flasketiketter. 

Tillsätt ej natriumazid. 

Kassera brukslösning om den förändras i utseende t.ex., blir grumlig p.g.a. mikrobiell kontaminering. 

- 84 -


4. HYDRASYS TVÄTTLÖSNING 

Förberedelse 

Varje flaska av HYDRASYS stamtvättlösning (SEBIA, PN 4541, 10 flaskor, 80 mL i varje) skall spädes upp till 5 liter med destillerat eller avjoniserat 

vatten. Efter spädning innehåller den färdiga tvättlösningen : alkalisk buffert pH 8.8 ± 0.3 ; natriumazid. 

VARNING: Brukstvättlösning innehåller 0.625 % natriumazid. Farligt att förtära ! Vid förtäring, kontakta läkare omedelbart ! Natriumazid kan 

leda till bildning av explosiva eller giftiga ämnen vid kontakt med syror, bly eller koppar. Spola alltid med en stor mängd vatten vid avyttring. 

Användning 

HYDRASYS tvättlösning används för rengöring av HYDRASYS färgfack. Använd regelbundet, t.ex. om instrumentet används dagligen, tvätta 

färgfacket varje vecka. 

Se insticksbladet för användarinstruktioner. 


Förvara bruks- och arbetstvättlösningarna i stängda behållare vid rumstemperatur eller i kylskåp. Lösningarna är hållbara fram till angivet 

utgångsdatum på tvättlösningsflaskornas etiketter. 

Kassera brukstvättlösningen om den förändras i utseende, t.ex. blir grumlig på grund av mikrobiell kontaminering. 

PROV FÖR ANALYS 

Provinsamling och förvaring 

Serum och CSF från samma patient måste insamlas samtidigt och enligt vedertagna rutiner använda vid klinisk laboratorietestning. Rekommenderat 

är att utföra analyserna på färska serumprov och CSF. Proven kan förvaras i kylskåp upp till en vecka (2 till 8 °C). För längre lagringstider, frys in 

proven! Fruset serum och CSF är hållbara i minst en månad. 

Provförberedelse 

• Analysera CSF och serum Ig G koncentrationer på lämpligt tillvägagångssätt. 

• Koncentration av Ig G i motsvarande CSF och serumprov bör korrigeras till samma nivå. 

Korrigeringarna beror på ursprunglig CSF Ig koncentration; använd provspädningsdiluent för alla spädningar. 

Fall 1: koncentrationen av Ig G är över 2 mg/dL. 

Späd CSF och serum med diluent för att erhålla en Ig G koncentration på 2 mg/dL. 

Fall 2: CSF koncentrationen av Ig G är mellan 1 och 2 mg/dL. 

Använd outspätt CSF. Späd serum för att erhålla samma Ig G koncentration som i CSF provet. 

Fall 3: CSF koncentrationen av Ig G är under 1 mg/dL. 

Koncentrera CSF på lämpligt sätt för att erhålla en Ig G koncentration mellan 1 och 2 mg/dL. Späd serum till samma Ig G koncentration som i det 

koncentrerade CSF provet. 

Exempel på spädningar (endast för prov med en Ig G koncentration över 2.0 mg/dL) : 

För CSF: 

A = Ig G koncentration i mg/dL. 

Pippetera 20 µL CSF och blanda väl med 10 (A-2) µL diluent. 

För serum: 

B = Ig G koncentration i mg/dL. 

Späd serum 10 gånger med provspädningsmedel, t.ex.,10 µL serum och 90 µL provspädningsmedel. 

Pippetera y µL spätt serum och tillsätt y[(B/20) -1] µL diluent (för ett föreslaget värde av y = 2 µL, tillsätt [(B/10) – 2] µL provspädningdiluent). 

När koncentrationen av lg G är okänd 

Använd outspätt CSF och späd serum 300 - 400 gånger. 

NOTERA: Justeras inte CSF och serumprov till samma lg G koncentration, kan detta negativt påverka tolkning av mönster – se “TOLKNING”! 

PROCEDUR 

HYDRASYS systemet är ett halv-automatiskt multi-parameter instrument. De automatiserade stegen inkluderar processning av HYDRAGEL agaros 

geler i följande ordning: för-migrering, provapplicering, isoelektrisk fokusering, inkubering med enzyminmärkt antiserum, inkubering med 

enzymsubstrat, stopp av enzymatisk reaktion, blottning och slutlig torkning av gelen. De manuella stegen omfattar behandling av prover och geler, 

applicering av reagens och förbereda instrumentet för användning. 

LÄS NOGGRANNT HYDRASYS INSTRUKTIONS MANUAL. 

VIKTIGT : Kontrollera att den dynamiska masken har blivit korrekt placerad i perfekt linje mellan de elektroforetiska profilerna och maskens brunnar. 

I. MIGRERING 

1. Starta HYDRASYS instrumentet. 

2. För att erhålla erforderlig högspänning för isoelektrisk-fokusering, tryck på den gröna högvoltsknappen för att koppla om till högvoltsläge, 

knappen blir röd. 

NOTERA: Knappen för högvolt visar information om migrering. Under migrering, visas volttimmar (Vh) och strömstyrka (mA). Trycker man på 

knappen under migrering, visas volt- (V) och effekt- (W) värden. Om man trycker på knappen igen, visar displayen åter volttimmar (Vh) och 

strömstyrka (mA). 

När HYDRASYS är i högvoltsläge, visar displayen på instrumentet endast den verkliga strömstyrkan och 1/10 av andra värden som volt, 

volttimmar och effekt. 

3. Placera en applikator med 6 tänder för HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING eller en applikator med 18 tänder för HYDRAGEL 9 CSF 

ISOFOCUSING, på en slät yta med brunnens nummer (angivet på höger sida) vänt uppåt. 

- 85 -


4. Applicera 10 µL prov i varje brunn på applikatorn (Fig. 1). Ladda applikatorerna inom 2 minuter. 

Följande exempel visar analys med tre CSF/serumpar på en HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING gel och nio CSF/serumpar på en HYDRAGEL 

9 CSF ISOFOCUSING gel. 



BRUNN NR. BRUNN NR. PATIENT NR. (applikator 6 tänder) | (applikator 18 tänder) | 

1 1 2 1 2 2 3 4 3 4 3 5 6 5 6 4 - - 7 8 5 - - 9 10 6 - - 11 12 7 - - 13 14 8 - - 15 16 | 9 | - | - | 17 | 18 | 

- Placera omedelbart applikatorn i fuktkammaren med tänderna uppåt (håll applikatorn i den skyddande plastramen). 

För ytterligare upplysningar, se bifogat insticksblad i fukt kammarens förpackning. 

Innnan proverna appliceras till gelens yta, skall en för-migrering upp till 75 Vh utföras enligt följande instruktion: 

5. Öppna luckan till migrationsmodulen och lyft upp elektrod- och applikatorhållarna. 

VIKTIGT: Stäng aldrig luckan när hållaren är i höjt läge ! 

6. Välj "3/9 CSF FOCUSING" migrationsprogram på instrumentmenyn (tangentbordets vänstra sida). 

7. Förbered elektrodstripsen med katodiska och anodiska lösningar, se punkt 4 under MEDFÖLJANDE REAGENSER OCH MATERIAL. Ta ur 

stripsen ur de anodiska och katodiska behållarna; ta dem i plaständarna. 

8. På den höjda hållaren: sätt de hålstansade plaständarna på stripsen till elektrodhållarens pinnar, stripsens plaststöd måste vara vända mot 

hållaren (Fig. 2). Det röda anodiska stripset appliceras underst (anod), det ofärgade katodiska stripset överst (katod). 

9. Ta ut en HYDRAGEL agaros gelplatta. 

10. Placera plastsidan nedåt på en servett eller filterpapper för att avlägsna eventuell fukt. 

11. Rulla ett tunt filterpapper på gelytan och lämna det där under 3 sekunder för borttagning av överflödig vätska. 

12. Gör en linje med 150 µL etylen-glykol (EG) för HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING eller 300 µL för HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING över 

den tryckta ramens nedre tredjedel belägen på migrationmodulens temperaturkontrollplatta. 

13. Placera gelplattan (gelsidan uppåt) med kanterna mot stoppet i botten på den tryckta ramen (Fig. 3). 

Böj gelen och släpp den långsamt ned på EG (Etylen-glykol) linjen. 

Förvissa dig om att inga luftbubblor finns kvar, att EG (Etylen-glykol) fördelar sig under hela gelplattan och att gelen är i linje med den tryckta 

ramen. 

14. Placera en plastmask på gelen: 

- Ta en plastmask. 

- Passa in plastmaskens nedre sida mot de två svarta rektanglarna tryckta på gelens nedre del (Fig.4). 

- Rulla masken på gelytan. Undvik luftbubblor mellan gel och mask. 

- Om luftbubblor bildas, ta bort masken från en sida för att ta bort luftbubblan, rulla den därefter åter sakta på gelen. 

- Rubba inte gelens position på migrationsplattan under detta moment. 

VARNING:Plastmasken måste täckta gelens nedre del utan att överlappa kontaktzonen mellan gelen och buffertsvampar. 

15. Sänk ned båda hållarna. I detta läge, berör inte de buffrade stripsen gelen. TRYCK INTE HÅLLARNA HELA VÄGEN NED. 

16. Stäng luckan till migrationsmodulen. 

17. Starta proceduren omedelbart genom att trycka ned den gröna pilen "START" på tangentbordets vänstra sida. 

VIKTIGT: Förvissa dig om att ventilationsintaget på instrumentets högra sida inte är blockerat. 

FÖR-MIGRERING – BESKRIVNING AV DE AUTOMATISERADE STEGEN 

• Elektrodhållarna sänks ner så att de buffrade stripsen får kontakt med gelen. 

• Migrering sker vid 20 °C kontrollerat av Peltier effekt, tills 75 Vh uppnås ; spänningen stiger gradvis till ett maximum värde (1000 V) som krävs för 

proceduren. 

• Elektrodhållarna höjer sig för att koppla ur elektroderna. 

• En ljudsignal hörs och luckan öppnas. Signalen fortsätter tills operatören ingriper. Följande meddelande som blinkar visas på skärmen: "POS : 1" 

indikerar att omedelbart placera applikatorn i applikatorarmen. 

NOTERA: Luckan till migrationsmodulen förblir stängd under alla migrationsstegen. 

18. Öppna luckan till migreringsmodulen. 

19. Avlägsna applikatorn från fuktkammaren. Håll den i dess skyddande ram. 

- Avlägsna applikatorns tandskyddsram. 

- Placera applikatorn i position Nr. 1 på applikatorhållaren. 

VIKTIGT: Det tryckta numret på applikatorn måste vara vänt mot operatören (Fig. 5). 


21. Starta proceduren omedelbart genom att trycka ned den gröna pilen "START" på tangentbordets vänstra sida. 

- 86 -


MIGRERING – BESKRIVNING AV DE AUTOMATISERADE STEGEN 

• Elektrodhållarna sänks ner så att de buffrade stripsen får kontakt med gelen. 

• Applikatorhållaren höjer sig. 

• Migrering sker under cirka 45 minuter vid 20 °C kontrollerat av Peltier effekt, tills 700 Vh har uppnåts; spänningen stiger gradvis till ett maximum 

värde (1000 V) som krävs för proceduren. 

• Elektrodhållarna höjer sig för att koppla ur elektroderna. 

• En ljudsignal hörs och luckan öppnas. Signalen fortsätter tills operatören ingriper. Följande meddelande som blinkar visas på skärmen: “ AS” 

indikerar att antisera skall appliceras. 

NOTERA: Luckan till migrationsmodulen förblir stängd under alla migrationsstegen. 

II. IMMUNOFIXERING 

Under migrering förbered den dynamiska masken som innehåller ett antiserumsegment, en segmenthållare, en dynamisk mask guide och en halvlängdreducerande 

ram (Fig. 6). 

1. Placera den dynamiska masken på en slät yta. 

2. För HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING, placera en halv-längdreducerande ram längst ut på den dynamiska maskguiden. 

3. Placera ett antiserumsegment i segmenthållaren (Fig. 7) : 

- Luta antiserasegmentet i en 45° vinkel och placera det mot plastfjädrarna i segmenthållaren. 

- Dra i segmentet och sväng ned segmentet så att det fixeras i skårorna på segmenthållaren. 

VARNING : Förvissa dig om att segmentet är korrekt placerat i hållaren; pinnarna i ändan av segmentet måste låsas i 

segmenthållarens skåror. 

4. Sätt hållaren med segmentet på den dynamiska masken med den halv-längdreducerande ramen redan på sin plats (Fig. 8). 

Applicera reagenserna enligt nedan: 

För HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING, applicera 20 µL/brunn med antiserum anti-Ig G - PER i brunnarna 4 till 12. 

För HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING, applicera 20 µL/brunn med antiserum anti-Ig G - PER i var och en av de 15 brunnarna. 

Aspirera reagenserna, undvik luftbubblor vid pipettspetsen. 

5. Applicera reagenserna (Fig. 9): 

- Håll pipetten vinklad och luta dess spets lätt mot sidan av brunnen utan att röra brunnens botten. 

- Pipettera reagensinnehållet i brunnen. 

III. IMMUNOFIXERING 

1. Efter migrering, öppna luckan (meddelandet slutar att blinka). 

2. Avlägsna provapplikatorn och kassera. 

3. Lyft bägge hållarna, avlägsna de buffrade stripsen genom att hålla i plasttändarna och kassera. 

4. Ta bort båda hållarna. 

5. Torka försiktigt av elektroderna med en mjuk fuktig servett. 

6. Lämna gelen på sin plats i migrationsmodulen. Ta bort plastmasken i kanten och kasta. 

VARNING : Flytta inte gelen på den tryckta ramen under detta steg. 

7. Förbered den dynamiska masken för applicering av antiserum på gel enligt följande (Fig. 10): 

- Placera maskguiden på den förankrande klämman (guiden kan stanna i migrationsmodulen hela tiden). 

- Håll den dynamiska masken i fliken och placera den i guiden med skårorna i linje med markeringarna. 

- Sänk den dynamiska masken ned på HYDRASYS-plattan. 

- Förvissa dig om att segmenthållaren befinner sig på maskguidens lägsta punkt, vänd mot operatören. 

- Håll segmenthållaren i handtaget placerat på dess högra sida och tryck på segmenthållarens bakre del så att antiserum-segmentet får direkt 

kontakt med gelen. Lätta på trycket; därefter kommer reagensen att sprida sig under hela segmentet (Fig. 11). 

- Omedelbart, genom att använda segmenthållarhandtaget, för segmentet sakta men säkert, upp och ned längs hela gelen för att applicering 

av reagens. Repetera detta steg två gånger; applicering bör ta ca. 5 sekunder för varje omgång (Fig. 12). 

- Under detta steg, håll endast i masken med segmenthållar-handtaget. Undvik att röra guiden. 

8. Lämna den dynamiska masken i HYDRASYS kammaren med antiserumsegmentet på maskguidens nedersta punkt. 


10. Starta omedelbart inkubering genom att trycka på den gröna pilen "START" på tangentbordets vänstra sida. Följande meddelande visas på 

skärmen: "[INCUBATION]"./inkubering. 

IMMUNOFIXERING – BESKRIVNING AV AUTOMATISKA STEG 

• Inkubera vid 20 °C kontrollerat av Peltiereffekten, under 10 minuter. 

• En ljudsignal hörs och luckan till migrationsmodulen öppnas. Följande meddelande visas på skärmen: " PAP.". 

NOTERA: Luckan till migrationsmodulen förblir stängd under inkubation. 

IV. BLOTTNING AV GEL 

1. Öppna luckan till migrationsmodulen. 

2. Avlägsna den dynamiska maskenheten. 

- Avlägsna segmenthållaren med dess handtag. 

- Avlägsna antiserumsegmentet från hållaren och kassera. 

VARNING : Segment med antiserum måste behandlas försiktigt. 

3. Applicera ett tjockt filterpapper med den mjuka sidan nedåt på gelen. 

- Luta filterpappret ca. 45°. Rikta in filterpapprets nedre kant mot gelsidan. 

- För filterpappret mot gelen. 

VARNING : Tryck med stadig hand på filterpapprets hela yta med gelkanten för att uppnå perfekt kontakt med gelen. 


5. Starta blottningssekvensen genom att trycka på tangenten "START" (grön pil på tangentbordets vänstra sida). 

- 87 -


BLOTTNING – BESKRIVNING AV AUTOMATISKA STEG 

• Blottning vid 20 °C kontrollerat av Peltiereffekten, under 3 minuter. Följande meddelande visas på skärmen: "[BLOTTING]". 

• En ljudsignal hörs. Följande meddelande som blinkar visas på skärmen: "❊ PAP. + REHYD 1" indikerar att ta bort filterpappret och applicera den 

första rehydrerande lösningen. 

V. TORKNING AV GEL 


2. Ta bort filterpappret och låt gelen vara kvar på sin plats på migrationmodulens platta. 

3. Använd reagensapplicerings-mask R3 för HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING eller mask ENZ 4 mL för HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING 

(Fig. 13) 

4. Använd rehydrerande lösning för HYDRAGEL CSF FOCUSING, undvik luftbubblor i pipettspetsen. 

5. Applicera 4.5 mL av lösningen för HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING eller 7 mL för HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING genom hålet i masken 

(Fig. 14). Försäkra dig om att lösningen sprids jämt ut på den rektangulära ytan under mallen. 

- Håll pipetten upprätt. 

- Tryck försiktigt pipettspetsen ner i hålet i mallen. 

- Injicera lösningen försiktigt och gradvis utan att några luftbubblor gömmer sig under mallen. 


7. Starta omedelbart inkubering genom att trycka på den gröna pilen "START" på tangentbordets vänstra sida. 

TORKNING AV GEL – BESKRIVNING AV AUTOMATISKA STEG 


• En ljudsignal hörs. Följande meddelande som blinkar visas på skärmen: "❊ REHYD 1 + PAP." indikerar att avlägsna den första rehydrerande 

lösning genom att återpipettera överflödig vätska och applicera ett tjockt filterpapper. 

VI. AVLÄGSNANDE AV REHYDRERANDE LÖSNING 


2. Avlägsna rehydrerande lösning. 

3. Håll pipetten upprätt och tryck försiktigt pipettspetsen in i brunnen (Fig. 14). 

4. Pipettera upp reagenset sakta och jämt. 

5. Ta i fliken på mallen för reagensapplicering, lyft upp och avlägsna den. Gelytan måste vara torr. 

VII.BLOTTNING AV GEL 

1. Applicera ett tjockt filterpapper på gelens torkade yta som anges i § IV. 

2. Tryck hela filterpapprets yta mot gelen för att uppnå perfekt kontakt med gelen. 


4. Starta blottningsekvensen genom att trycka på tangenten "START" (grön pil på tangentbordets vänstra sida). 


• Blottning vid 20 °C kontrollerat av Peltiereffekten, under 3 minuter. 

• En ljudsignal hörs. Följande blinkande meddelande visas på skärmen: "❊ PAP. + REHYD 2" visar att filterpappret skall avlägsnas och en andra 

rehydrerande lösning skall appliceras. 

VIII. TORKNING AV GEL 


2. Ta bort filterpappret och låt gelen vara kvar på sin plats på migrationmodulens platta. 

3. Använd reagensapplicerings-mask R3 för HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING eller mask ENZ 4 mL för HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING 

(Fig. 13). 

4. Använd rehydrerande lösning för HYDRAGEL CSF FOCUSING undvik luftbubblor i pipettspetsen. Applicera 4.5 mL lösning för HYDRAGEL 

3 CSF ISOFOCUSING eller 7 mL för HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING genom hålet i mallen (Fig 14). Förvissa dig om att lösningen sprids 

jämt på den rektangulära ytan under masken. 

5. Håll pipetten upprätt. 

6. Tryck försiktigt pipettspetsen ner i hålet i mallen. 

7. Injicera lösningen försiktigt och gradvis utan att några luftbubblor gömmer sig under mallen. 


9. Starta omedelbart inkubering genom att trycka på den gröna pilen "START" på tangentbordets vänstra sida. 

TORKNING AV GEL – BESKRIVNING AV AUTOMATISKA STEG 


• Efter inkubationstiden hörs en ljudsignal, följande blinkande meddelande visas på skärmen: "❊ REHYD 2 + TTF3" indikerar att avlägsna 

rehydrerande lösning och applicera visualiseringslösning. 

IX. AVLÄGSNANDE AV REHYDRERANDE LÖSNING 


2. Avlägsna rehydrerande lösning som tidigare visats i § VI. 

3. Låt masken vara kvar på sin plats. 

X. VISUALISERING 

1. Applicera TTF3 visualiseringslösning, förberedes strax innan applicering i masken: 3 mL för HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING eller 3.5 mL 

för HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING. Följ samma instruktioner som tidigare angivits. 

2. Använd TTF3 visualiseringslösning, undvik luftbubblor i pipettspetsen. 

Försäkra dig om att lösningen under masken sprids jämt på den rektangulära ytan centrerad under maskens hål. 


4. Starta omedelbart inkubering genom att trycka på den gröna tangenten "START" på tangentbordets vänstra sida. 

- 88 -


INKUBATION – BESKRIVNING AV AUTOMATISKA STEG 


• En ljudsignal hörs. Följande blinkande meddelande visas på skärmen: "❊ TTF3 + PAP." indikerar att avlägsna visuliseringslösning och applicera 

ett tjockt filterpappper. 

XI. AVLÄGSNANDE AV VISULISERINGSLÖSNING 


2. Avlägsna visualiseringslösning som tidigare visats i § VI. 

3. Ta tag i fliken på masken för reagensapplicering, lyft upp och avlägsna den. 

XII.BLOTTNING AV GEL 

1. Applicera ett tjockt filterpapper på gelens bearbetade yta, som visats i § IV. 

2. Tryck hela filterpapprets yta mot gelen för att uppnå perfekt kontakt med gelen. 


4. Starta blottning genom att trycka på tangenten "START" (grön pil på tangentbordets vänstra sida). 

5. Skölj mallen med destillerat vatten och torka noga med ett mjukt absorberande papper. Innan återanvändning, försäkra dig om att mallen är 

helt torr; avlägsna droppar från brunnnarna med mjukt papper. 

NOTERA: Alkohol kan användas för rengöring av appliceringsmallarna R3 eller ENZ 4 mL efter visuliseringssteg med TTF3. 


• Blottning vid 30 °C kontrollerat av Peltiereffekten, under 3 minuter. 

• En ljudsignal hörs. Följande meddelande som blinkar visas på skärmen: " ❊ PAP." visar att filterpapper skall avlägsnas. 

XIII. TORKNING AV GEL 


2. Ta bort filterpappret och låt gelen vara kvar på sin plats. 

3. Stäng luckan till HYDRASYS. 

4. Starta torkningsteget genom att trycka på tangenten "START" (grön pil på tangentbordets vänstra sida). Följande meddelande visas på 

skärmen: "[DRYING]"/ torkning. 

ṪORKNING – BESKRIVNING AV AUTOMATISKA STEG 

• Torka gelen vid 50 °C, under 3 minuter. 

• En ljudsignal anger att luckan skall öppnas. 

• Öppna luckan. 

• Avlägsna den torkade gelen. 

NOTERA :Plattans temperatur sjunker till 20 °C på mindre än 5 minuter. 

- När 20 °C har nåtts, kan man starta en ny migrationskörning. 

- Placera provapplikatorn och elektrodhållaren på sina platser. 

- Rengör temperaturkontrollplattan med en mjuk fuktad servett. 

XIV. TVÄTT OCH SLUTGILTIG GELBEARBETNING 

Efter torkning, tvättas gelen i färgningmodulen med “WASH ISOENZ/GEL” program. Om kammaren tidigare använts för färgning av proteingel, rengör 

kammaren med programmet ”WASH CHAMBER”. 

1. Öppna gelhållaren. Lägg ned den torkade gelen i rätt läge (med gelsidan vänd uppåt) i fördjupningarna i de två listerna och stäng hållaren. 

Förvissa dig om att filmen är korrekt placerad inuti hållaren (Fig. 15). 

2. Placera gelhållaren i modulen för gelbearbetning- / färgning. 

VIKTIGT : Innan start av gelbearbetning- /färgningsprogrammet, kontrollera följande: 

- att behållaren med avfärgningslösning innehåller minst 400 mL avfärgningslösning ; 

- att avfallsbehållaren är tom. 

3. För reagenslinjeförbindelse: Se visad information på instrumentets skärm (välj tangent: REAGENT LINES). 

VIKTIGT : Glöm inte att spärra oanvända linjer. 

4. Välj "WASH ISOENZ/GEL" tvättprogram på instrumentmenyn och starta körningen genom att trycka på tangenten "START" (grön pil på 

tangentbordets högra sida). 

Under tvätt- och torkningsstegen, förblir facket låst. 

Efter kylningssteget, hörs en ljudsignal när facket öppnas (ventilation upprätthålls tills gelhållaren avlägsnas). 

5. Avlägsna gelhållaren från facket, öppna hållarna och ta ur den torkade gelen. Om nödvändigt, rengör baksidan (stödsidan av plast) på den 

torra filmen med en fuktad mjuk servett. Gelen är klar för utvärdering. 

TOLKNING 

Den intratekala syntesen, inom centrala nervsystemet (CNS), påvisas genom närvaro av Ig G band i immunofixeringsmönstret hos CSF, som ej är 

närvarande i serum från samma patient (Fig. 16). Väldigt svaga band är alltid närvarande i serum och dessa kan, eller kan inte vara på samma 

migrationsnivå som de som observeras i CSF. Sådana band skall bortses från vid tolkning av mönstren. De representerar heterogenicitet hos serumets 

Ig G och ses endast med teknik med hög upplösning och hög känslighet. I teorin är ett enda Ig G band som är närvarande i CSF men frånvarande 

hos serum ett indikativt, men ej fullständigt pålitligt tecken på intratekal syntes. I praktiken så ses två eller flera band som en pålitlig indikation. Två 

eller fler band är även stödjande bevis för multipel skleros även om fyra eller fler Ig G oligoklonala band generellt är närvarande. Därför rekommenderar 

en del fyra band som stödjande bevis på MS fast detta kan komma att ändras allteftersom mer data samlas in. Det bör noteras att antalet band i de 

oligoklonala mönstren ej korrelerar med svårighetsgrad och prognos hos konfirmerade MS fall. P.g.a dessa orsaker skall antalet band ej rapporteras 

för att undvika misstolkningar avseende antalet band. 

- 89 -


För att försäkra sig om korrekt jämförande tolkning så är det absolut nödvändigt att observera följande: 

• CSF och serumprov måste tas vid samma tidpunkt från samma patient. All behandling av proverna som skulle kunna förändra koncentrationen av 

immunoglobuliner måste undvikas. 

• Koncentrationerna hos CSF och serum lg G måste bestämmas noggrant så att efter justering skall samma kvantitet av lg G hos CSF och serum 

appliceras på gelen. 

• Om lg G koncentration är okänd, bör serum köras vid 300 – 400 x spädning och CSF outspätt. I detta fall kan skillnaden i lg G koncentration leda 

till missvisande tolkning av mönster. 

Detektion av intratekal Ig syntes genom sensitiv immunofixering är en mer specifik och känslig indikator än informationen som ges av olika kvoter 

uträknade från totala koncentrationer av CSF och serumimmunoglobuliner, albumin och andra proteiner. 

Bekräftelse av intratekal Ig syntes är viktig information vid misstanke om inflammatorisk sjukdom i det centrala nervsystemet (CNS). Den oligoklonala 

profilen eller annan indikering på intratekal syntes av Ig G kan påträffas hos olika sjukdomar i det centrala nervsystemet såsom: 

• 95 % av multipel skleros, 

• 100 % av obehandlad neurosyfilis, 

• 100 % av subakut skleros leukoencefalit. 

I mer ovanliga fall kan indikation på intratekal syntes av Ig G ses hos många sjukdomar i centrala nervsystemet (CNS), vanligtvis i associerat med 

inflammation, såsom infektioner, perifera neuropatier, neoplasmier, cerebrovaskulära olyckor, etc. 

Diagnosen får ej baseras enbart på resultat av immunofixering. Dessa resultat måste övervägas tillsammans med kliniska observationer och historik, 

och kompletteras med biokemiska, mikrobiologiska och cytologiska tester. 

Interferens och begränsningar 

Se PROV FÖR ANALYS. 

Användning av andra antisera andra än de som är designade för HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING procedurerna med dynamisk mask, kan 

påverka resultaten. 

På grund av upplösnings- och sensitivitetsbegränsningar hos elektrofores, är det möjligt att vissa oligoklonala komponenter inte blir upptäckta med 

denna metod. 

Felsökning 

Ring leverantörens tekniska support om testet misslyckas trots att manualen och givna instruktioner för materialförvaring och förberedelse av test följts. 

Varuinformationsblad för reagenserna i kiten och information för avfallshantering finns tillgängliga hos leverantören tekniska service. 

PRESTANDADATA 

Reproducerbarhet 

Reproducerbarhet inom gel 

CSF och serumprov från fyra patienter applicerades vart och ett i alla 18 spår på HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING geler från två batcher (två par 

med intratekal syntes och två par utan intratekal syntes). 

Gel-till-gel och lot-till-lot reproducerbarhet 

Åtta CSF – serumpar applicerades på var och en av tio geler HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING från samma lot och två geler från en annan lot (sex 

par med intratekal syntes och två par utan intratekal syntes). 

Resultat : 

Vid visuell granskning hos alla reproducerbarhetsstudier blev förekomst/avsaknad av oligoklonala band korrekt identifierade i varje prov och på alla 

geler med anti-Ig G – PER antiserum, det fanns inga falskt positiva/negativa och inga skillnader observerades mellan upprepningarna. 

Tillförlitlighet - Detektering och identifiering av oligoklonala band 

CSF och serumprov från patienter med olika sjukdomar i det centrala nervsystemet (n = 108) analyserades med ett standard HYDRAGEL 9 CSF 

ISOFOCUSING kit, material och procedur parallellt med ett annat kommersiellt tillgängligt immunofixering-elektroforessystem avsett för detektering av 

oligoklonala band av lg G typ. Elektroforetogrammen utvärderades visuellt för förekomst av oligoklonala Ig band. 

Det påvisades allmän överensstämmelse i detektion av oligoklonala band mellan de två testerna. De få skillnader som observerades berodde på högre 

upplösning för HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING proceduren. Resultaten var i överensstämmelse med klinisk diagnos, en indikation på intratekal 

syntes och skada på blod-hjärn-barriären. 

Sensitivitet 

Sensitiviteten för HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING proceduren har fastställts med seriell spädning av ett monklonalt lg G protein 2 mg/dL. 

Detektionsgränsen för ett monoklonalt lg G band fastställdes till 0.031 mg/L 

BIBLIOGRAFI 












- 90 -














1994, 397 pp. 













1994, 54 : 75-80. 



- 91 -


ΠΡΟΒΛΕΠΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ 

Τα κιτ HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING και HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING είναι σχεδιασµένα για την ποιοτική ανίχνευση και 

ταυτοποίηση « ολιγoκλωνικών » ζωνών στο ηλεκτροφορητικό αποτύπωµα του εγκεφαλονωτιαίου υγρού (ΕΝΥ) και την επιβεβαίωση του 

ανοσοσφαιρινικού τους χαρακτήρα. Η διαδικασία περιλαµβάνει ισοηλεκτρική εστίαση σε πηκτή αγαρόζης, πραγµατοποιούµενη στο ηµιαυτοµατοποιηµένο 

σύστηµα HYDRASYS, ακολουθούµενη από ανοσοκαθήλωση µε αντι-Ig G αντιορό. Η χρήση ενζυµοσηµασµένου αντι- 

Ig G αντιορού επιτρέπει την ανίχνευση µόνο των “αληθών” Ιg G ολιγοκλωνικών ζωνών µε αυξηµένη ευαισθησία ανίχνευσης µε αποτέλεσµα 

η ανάλυση να µπορεί να πραγµατοποιείται σε µη συµπυκνωµένο ΕΝΥ. Στη συνέχεια πραγµατοποιείται οπτική σύγκριση ανάµεσα στα Ig G 

ανοσοτυπώµατα του ΕΝΥ και του ορού από τον ίδιο ασθενή. Έτσι είναι δυνατή η ανίχνευση ολιγοκλωνικών ζωνών οι οποίες 

αντιπροσωπεύουν ενδορραχιαία σύνθεση ανοσοσφαιρινών. 

Η χρήση των κιτ HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING και HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING ενδείκνυται όταν υπάρχει υποψία συγκεκριµένων 

νόσων του ΚΝΣ, όπως πολλαπλή σκλήρυνση, όπου η ανίχνευση ολιγοκλωνικών ζωνών και φλεγµονωδών διαδικασιών (ενδορραχιαία 

σύνθεση ανοσοσφαιρινών) µπορεί να βοηθήσει στη διάγνωση. 

Για In Vitro ∆ιαγνωστική Χρήση. 

ΑΡΧΗ ΤΗΣ ∆ΟΚΙΜΑΣΙΑΣ 

Πολλές διαταραχές του ΚΝΣ σχετίζονται µε αυξηµένη συγκέντρωση πρωτεϊνών στο ΕΝΥ, είτε λόγω αύξησης της διαπερατότητας του 

αιµατοεγκεφαλικού φραγµού, είτε λόγω ενδορραχιαίας σύνθεσης ανοσοσφαιρινών, κυρίως Ig G. Στη δεύτερη περίπτωση, η ενδορραχιαία 

σύνθεση Ig σχετίζεται συχνά µε περιορισµένη ετερογένεια των Ig η οποία εκδηλώνεται ως «ολιγοκλωνικότητα» στη ζώνη γάµµα στα 

ηλεκτροφορητικά προφίλ υψηλής ανάλυσης. Οι ζώνες στην περιοχή της γάµµα σφαιρίνης δεν είναι πάντα αληθείς ανοσοσφαιρινικές ζώνες 

και εποµένως δεν έχουν την ίδια διαγνωστική σηµασία µε τις ολιγοκλωνικές ζώνες Ig. Η ανοσοκαθήλωση είναι µια τεχνική επιλογής, αφού 

µπορεί να αποδείξει τον ανοσοσφαιρινικό χαρακτήρα των ολιγοκλωνικών ζωνών, να ταυτοποιήσει την εµπλεκόµενη Ig και να παρέχει την 

απαραίτητη ειδικότητα. Καθώς µόνο οι Ig G ολιγοκλωνικές ζώνες έχουν διαγνωστική σηµασία στην κλινική πράξη, η δοκιµασία της SEBIA 

αναφέρεται πρωτευόντως στην ανίχνευση των Ig G ολιγοκλωνικών ζωνών µε ειδικό αντι-Ig G αντιορό. 

Η παρουσία ενδορραχιαίας Ig G υποδεικνύει φλεγµονώδη νόσο του ΚΝΣ, όπως π.χ. πολλαπλή σκλήρυνση (MS). Αν και οι ολιγοκλωνικές 

ζώνες δεν είναι ούτε διαγνωστικές, ούτε ειδικές για την MS, χρησιµοποιούνται ευρέως ως υποστηρικτική πληροφορία και θεωρούνται 

απαραίτητη εξέταση από την οµοφωνία του 1994 της “Επιτροπής Συντονισµένης Ευρωπαϊκής ∆ράσης για την Πολλαπλή Σκλήρυνση”. Είναι 

επιβεβαιωτική δοκιµασία σε ασθενείς µε κλινικά επεισόδια MS και ενδεικτική σε ασθενείς µε λίγα επεισόδια µη παθογνωµονικών κλινικών 

εκδηλώσεων. Μεταξύ άλλων, η Επιτροπή έθεσε κριτήρια για την ανίχνευση Ig G ολιγοκλωνικών ζωνών στο ΕΝΥ: (i) η πιο αναλυτική και 

ευαίσθητη τεχνική για την ανίχνευση των ολιγοκλωνικών ζωνών είναι η ισοηλεκτρική εστίαση, (ii) η ολιγοκλωνική Ig G πρέπει να 

ανιχνεύεται µε ειδικό αντιορό, (iii) για την επιβεβαίωση της ενδορραχιαίας σύνθεσης Ig G, ο ορός και το ΕΝΥ του ασθενούς πρέπει να 

αναλύονται παράλληλα ώστε να επιδεικνύονται διαφορές στην κατανοµή της Ig G, (iv) για την ευχερέστερη ερµηνεία των αποτελεσµάτων, 

η συγκέντρωση της Ig G στα δείγµατα ΕΝΥ-ορού πρέπει να προσαρµόζεται στα ίδια επίπεδα και (v) θα πρέπει να αποφεύγεται η 

συµπύκνωση του ΕΝΥ. Τα κιτ HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING πληρούν όλα τα ανωτέρω κριτήρια. 

Η µέθοδος εκτελείται σε δύο στάδια: 

• Ισοηλεκτρική εστίαση σε πηκτή αγαρόζης για την κλασµατοποίηση των πρωτεϊνών στα δείγµατα ΕΝΥ και ορού. 

• Ανοσοκαθήλωση µε σηµασµένους µε ένζυµο (υπεροξειδάση) αντιορό έναντι Ig G για την ανίχνευση Ig G ολιγοκλωνικών ζωνών στο ΕΝΥ 

και την ανάδειξη διαφορών ή απουσίας αυτών στην κατανοµή της Ig G στο ΕΝΥ και στον ορό. 

Σε σύγκριση µε την τυπική ανοσοκαθήλωση, επιτυγχάνεται αύξηση της ευαισθησίας περίπου στο 100πλάσιο µε τα κιτ HYDRAGEL 3 & 9 CSF 

ISOFOCUSING, τα οποία χρησιµοποιούν σηµασµένα µε ένζυµο αντισώµατα. Έτσι, µε τη συγκέντρωση της Ig G στο όριο του 1 mg/dl ή 

παραπάνω, η Ig G µπορεί να ανιχνευθεί και να διαπιστωθεί η κατανοµή της χωρίς συµπύκνωση του δείγµατος ΕΝΥ. 

Το ηµι-αυτοµατοποιηµένο σύστηµα HYDRASYS εκτελεί όλα τα αναγκαία στάδια για να ληφθούν gel έτοιµα για αξιολόγηση. 

Κάθε gel αγαρόζης στο κιτ HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING περιέχει 6 ίχνη και προορίζεται για επεξεργασία τριών ζευγών ΕΝΥ – ορού. 

Κάθε gel αγαρόζης στο κιτ HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING περιέχει 18 ίχνη και προορίζεται για επεξεργασία εννέα ζευγών ΕΝΥ – ορού. 

ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΜΕ ΤΑ ΚΙΤ HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ΚΑΙ HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING 

ΕΙ∆ΟΣ PN 4353 PN 4355 Gel αγαρόζης (έτοιµα προς χρήση) 10 gel 10 gel ∆ιάλυµα αιθυλενογλυκόλης (έτοιµο προς χρήση) 1 φιαλίδιο, 3 mL 1 φιαλίδιο, 3 mL Ανοδικό διάλυµα (έτοιµο προς χρήση) 1 φιαλίδιο, 50 mL 1 φιαλίδιο, 50 mL Καθοδικό διάλυµα (έτοιµο προς χρήση) 1 φιαλίδιο, 50 mL 1 φιαλίδιο, 50 mL Ταινίες 10 συσκ. των 2 10 συσκ. των 2 Μέσο αραίωσης CSF (έτοιµο προς χρήση) 1 φιαλίδιο, 85 mL 1 φιαλίδιο, 85 mL Μέσο αραίωσης αντιορού CSF ISOFOCUSING (έτοιµο προς χρήση) 1 φιαλίδιο, 3.75 mL 1 φιαλίδιο, 3.75 mL ∆ιάλυµα επανυδάτωσης CSF (έτοιµο προς χρήση) 2 φιαλίδια, 70 mL 2 φιαλίδια, 70 mL ∆ιαλύτης TTF3 (έτοιµος προς χρήση) 2 φιαλίδια, 20 mL 2 φιαλίδια, 20 mL TTF3 (πυκνό διάλυµα) 2 φιαλίδια, 0.5 mL 2 φιαλίδια, 0.5 mL Εφαρµογείς (έτοιµοι προς χρήση) 1 συσκ. των 10 (6 δόντια) 1 συσκ. των 10 (18 δόντια) Περιέκτες ρυθµιστικού διαλύµατος (έτοιµοι προς χρήση) 1 συσκ. των 2 1 συσκ. των 2 Εφαρµογείς αντιορών (έτοιµοι προς χρήση) 1 συσκ. των 10 1 συσκ. των 10 ∆ιηθητικά χαρτιά - Λεπτά 1 συσκ. των 10 1 συσκ. των 10 ∆ιηθητικά χαρτιά - Αδρά 3 συσκ. των 10 3 συσκ. των 10 

| Πλαστικές καλύπτρες | 1 συσκ. των 10 | 1 συσκ. των 10 | 

ΓΙΑ ΑΡΙΣΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ 

Όλα τα αντιδραστήρια από ίδιο κιτ πρέπει να χρησιµοποιούνται πάντα µαζί και σύµφωνα µε τις οδηγίες χρήσης. 

ΠΑΡΑΚΑΛΟΥΜΕ ∆ΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΦΥΛΛΟ Ο∆ΗΓΙΩΝ. 

- 92 - 

Ο∆ΗΓΙΕΣ SEBIA - Ελληνικά


1. GEL ΑΓΑΡΟΖΗΣ 

Προετοιµασία 

Τα gel αγαρόζης είναι έτοιµα προς χρήση. Κάθε gel περιέχει: αγαρόζη 1 g/dL, αµφολύτες, πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες 

συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

Χρήση 

Μέσο για ισοηλεκτρική εστίαση πρωτεϊνών και ανοσοκαθήλωση. 

Φύλαξη, σταθερότητα και σηµεία αλλοίωσης 

Φυλάσσετε τα gel οριζόντια εντός της συσκευασίας τους στο ψυγείο (2 έως 8 °C). Είναι σταθερά µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία 

σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των gel. (Το βέλος στην πρόσθια επιφάνεια του κουτιού του κιτ πρέπει να δείχνει 

προς τα άνω). 

Αποφύγετε την αποθήκευση κοντά σε παράθυρο ή σε πηγή θερµότητας. Αποφύγετε τις µεγάλες διακυµάνσεις θερµοκρασίας κατά τη 

φύλαξη. 

ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. 

Πετάξτε τα gel όταν : 

(i) σχηµατιστούν κρύσταλλοι ή ίζηµα στην επιφάνεια του gel ή αν η υφή του gel γίνει πολύ µαλακή (όλα αυτά προκύπτουν αν το gel 

καταψυχθεί), 

(ii) αναπτυχθούν βακτήρια ή µούχλα, 

(iii) υπάρχει µεγαλύτερη από το φυσιολογικό ποσότητα υγρού στο κουτί του gel (αποτέλεσµα της εξίδρωσης του ρυθµιστικού διαλύµατος 

από το gel λόγω ακατάλληλων συνθηκών φύλαξης). 

2. ∆ΙΑΛΥΜΑ ΑΙΘΥΛΕΝΟΓΛΥΚΟΛΗΣ 


Το διάλυµα αιθυλενογλυκόλης είναι έτοιµο προς χρήση. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Επιβλαβές αν καταποθεί. 

Χρήση 

Εξασφάλιση αποτελεσµατικής επαφής ανάµεσα στην πλαστική επιφάνεια του gel και της πλάκας ελέγχου θερµοκρασίας της µονάδας 

ηλεκτροφόρησης κατά τη διάρκεια της ηλεκτροφόρησης. 


Φυλάσσετε το διάλυµα αιθυλενογλυκόλης σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Παραµένει σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η 

οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και του φιαλιδίου του διαλύµατος. 

3. ΑΝΟ∆ΙΚΟ ΚΑΙ ΚΑΘΟ∆ΙΚΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ 


Το ανοδικό (όξινο) και το καθοδικό (βασικό) διάλυµα είναι έτοιµα προς χρήση. Περιέχουν αµφότερα πρόσθετα, µη επιβλαβή στις 

χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Για την εύκολη αναγνώρισή του και την παρακολούθηση της χρήσης του, το ανοδικό διάλυµα είναι χρωµατισµένο ερυθρό. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Το καθοδικό διάλυµα περιέχει υδροξείδιο του νατρίου. Ερεθιστικό για τα µάτια και το δέρµα. Αν έρθει σε επαφή µε το 

δέρµα ή τα µάτια ξεπλύνετε αµέσως µα άφθονο νερό και αναζητήστε ιατρική συµβουλή. 

Χρήση 

Ως ηλεκτρολύτες για την παρασκευή ανοδικών και καθοδικών ταινιών για την ισοηλεκτρική εστίαση. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Μετά από κάθε χρήση, κλείστε αµέσως και σφιχτά το καθοδικό διάλυµα για να αποφύγετε αλλοίωσή του. 


Τα διαλύµατα µπορούν να φυλάσσονται σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις 

ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων. Τα διαλύµατα πρέπει να είναι ελεύθερα ιζήµατος. 

4. ΤΑΙΝΙΕΣ 


Εµποτίστε δύο σπογγώδεις ταινίες µε ανοδικό διάλυµα τη µία και καθοδικό την άλλη 5 λεπτά πριν τη χρήση: 

Τοποθετήστε τον γκρι περιέκτη για την ανοδική ταινία και τον µπλε περιέκτη για την καθοδική ταινία σε µια επίπεδη επιφάνεια. 

Εγχύστε 5 mL από το ερυθρό ανοδικό διάλυµα στον γκρι περιέκτη και 5 mL από το άχρωµο καθοδικό διάλυµα στον µπλε περιέκτη. 

Ανοίξτε τη συσκευασία των σπογγωδών ταινιών, πιάστε τις ταινίες από τα πλαστικά άκρα τους και τοποθετήστε τις σε κάθε περιέκτη. 

Εµποτίστε τις οµοιόµορφα πιέζοντάς τις αρκετές φορές µε την άκρη των αντιστοίχων πιπεττών. 

Χρησιµοποιείτε τις εµποτισµένες ταινίες χωρίς καθυστέρηση. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Εµποτίστε τις ταινίες λίγο πριν τη χρήση για να αποφύγετε ενανθράκωση του καθοδικού διαλύµατος. 

Χρήση 

Οι εµποτισµένες στο ανοδικό και στο καθοδικό διάλυµα ταινίες εξασφαλίζουν την επαφή µεταξύ του gel και των ηλεκτροδίων και 

προσδιορίζουν το εύρος του pH κατά την εστίαση. 


Φυλάσσετε τις ταινίες εντός της πρωτότυπης συσκευασίας τους σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Πρέπει να φυλάσσονται σε όρθια 

θέση (το βέλος στην πρόσθια επιφάνεια του κουτιού του κιτ πρέπει να δείχνει προς τα άνω). Είναι σταθερές µέχρι την ηµεροµηνία λήξης 

η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και της συσκευασίας των ταινιών. 

ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. 

Πετάξτε τις ταινίες αν η συσκευασία τους έχει ανοιχθεί και οι ταινίες έχουν στεγνώσει. 

5. ∆ΙΑΛΥΜΑ ΑΡΑΙΩΣΗΣ ∆ΕΙΓΜΑΤΩΝ ΕΝΥ 


Το µέσο αραίωσης των δειγµάτων είναι έτοιµο προς χρήση. Περιέχει χλωριονατριούχο διάλυµα µε βόειο αλβουµίνη, αζίδιο του νατρίου και 

πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

Χρήση 

Για αραίωση των δειγµάτων ΕΝΥ και ορού. 

- 93 -



Φυλάσσεται στο ψυγείο (2 ως 8 °C). Είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του 

κιτ και των φιαλιδίων. Πρέπει να είναι ελεύθερο ιζήµατος. 

6. ∆ΙΑΛΥΜΑ ΑΡΑΙΩΣΗΣ ΑΝΤΙΟΡΩΝ ΕΝΥ 


Το µέσο αραίωσης των αντιορών είναι έτοιµο προς χρήση. Περιέχει πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, 

αναγκαία για άριστη απόδοση. 

Χρήση 

Για την αραίωση του αντιορού λίγο πριν τη χρήση. 


Φυλάσσετε το µέσο αραίωσης σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται 

στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων. Πρέπει να είναι ελεύθερο ιζήµατος. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Κατά τη φύλαξη, το διάλυµα µπορεί να γίνει κίτρινο χωρίς επιπτώσεις στην απόδοσή του. 

7. ∆ΙΑΛΥΜΑ ΕΠΑΝΥ∆ΑΤΩΣΗΣ 


Το διάλυµα επανυδάτωσης είναι έτοιµο προς χρήση. Περιέχει πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία 

για άριστη απόδοση. 

Χρήση 

Για επανυδάτωση των gel αγαρόζης πριν το στάδιο εµφάνισης µε την υπεροξειδάση. 


Φυλάσσεται στο ψυγείο ή σε θερµοκρασία δωµατίου και είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στην ετικέτα του 

κιτ και του φιαλιδίου. Το διάλυµα επανυδάτωσης πρέπει να είναι ελεύθερο ιζήµατος. 

8. ∆ΙΑΛΥΤΗΣ TTF3 


Ο διαλύτης TTF3 είναι έτοιµος προς χρήση. Περιέχει πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη 

απόδοση. 

Χρήση 

Για την παρασκευή του διαλύµατος εµφάνισης TTF3, όπως περιγράφεται στην παρ. 9. 


Φυλάσσεται στο ψυγείο ή σε θερµοκρασία δωµατίου και είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στην ετικέτα του 

κιτ και του φιαλιδίου. Ο διαλύτης TTF3 πρέπει να είναι ελεύθερος ιζήµατος. 

9. TTF3 


Ετοιµάστε το διάλυµα εργασίας λίγο πριν τη χρήση. Προσθέστε τα αντιδραστήρια µε την ακόλουθη σειρά: 4 mL διαλύτη TTF3, 100 µL TTF3 

και 4 µL υπεροξείδιο του υδρογόνου (H 2 

O 2 

) 30 %. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Το TTF3 περιέχει διµεθυλοφορµαµίδιο. Επιβλαβές αν καταποθεί! Σε περίπτωση ανεπαρκούς εξαερισµού, 

χρησιµοποιείτε κατάλληλο αναπνευστικό εξοπλισµό. Μην το καταπίνετε! Αν καταποθεί, αναζητήστε αµέσως ιατρική συµβουλή! Επιβλαβές 

αν έρθει σε επαφή µε το δέρµα. Φοράτε κατάλληλο προστατευτικό ρουχισµό. Ερεθιστικό για τα µάτια. Αν έρθει σε επαφή µε το δέρµα ή 

τα µάτια ξεπλύνετε αµέσως µα άφθονο νερό και αναζητήστε ιατρική συµβουλή. Αποφύγετε την έκθεση, λάβετε ειδικές οδηγίες πριν τη 

χρήση. Μπορεί να προκαλέσει καρκίνο. Αν αισθανθείτε αδιαθεσία, αναζητήστε αµέσως ιατρική συµβουλή (δείξτε την ετικέτα του φιαλιδίου 

όπου είναι δυνατό). 

Χρήση 

Για την εµφάνιση των ανοσοσφαιρινών οι οποίες έχουν διαχωριστεί µε ισοηλεκτρική εστίαση µε τον σηµασµένο µε υπεροξειδάση αντιορό. 


Φυλάσσετε το πυκνό TTF3 σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις 

ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων. Το διάλυµα TTF3 πρέπει να είναι ελεύθερο ιζήµατος. 

10. ΕΦΑΡΜΟΓΕΙΣ 

Χρήση 

Εφαρµογείς µιας χρήσης για την εφαρµογή των δειγµάτων στο gel. 


Φυλάσσετε τους εφαρµογείς σε ξηρό µέρος σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. 

11. ΠΕΡΙΕΚΤΕΣ ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΩΝ ∆ΙΑΛΥΜΑΤΩΝ 

Χρήση 

Πολλαπλών χρήσεων έγχρωµοι περιέκτες για την παρασκευή των ανοδικών και καθοδικών ταινιών. 

Ο γκρι περιέκτης προορίζεται για την ανοδική ταινία και ο µπλε περιέκτης για την καθοδική ταινία. 

Μετά από κάθε χρήση, πλύνετε τους δύο περιέκτες µε απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ και στεγνώστε τους. 


Φυλάσσετε τους καθαρούς περιέκτες σε επίπεδη επιφάνεια σε θερµοκρασία δωµατίου. 

12. ΕΦΑΡΜΟΓΕΙΣ ΑΝΤΙΟΡΩΝ 

Χρήση 

Μιας χρήσης, έγχρωµοι εφαρµογείς για την εφαρµογή του αντιορού στο gel για την ανοσοκαθήλωση µε δυναµική κάλυψη. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Οι εφαρµογείς αντιορών οι οποίοι έχουν φορτωθεί µε αντιορό απαιτούν προσεκτικό χειρισµό. 

- 94 -

13. ∆ΙΗΘΗΤΙΚΑ ΧΑΡΤΙΑ - ΛΕΠΤΑ 


Χρήση 

Μιας χρήσης, λεπτά απορροφητικά χαρτιά για στύπωµα της υγρασίας από την επιφάνεια του gel πριν την τοποθέτηση των δειγµάτων. 

Φύλαξη 

Φυλάσσονται σε ξηρό µέρος σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. 

14. ∆ΙΗΘΗΤΙΚΑ ΧΑΡΤΙΑ - Α∆ΡΑ 

Χρήση 

Μιας χρήσης, αδρά απορροφητικά χαρτιά για στύπωµα των µη κατακρηµνισθεισών πρωτεϊνών από την επιφάνεια του gel µετά την 

ανοσοκαθήλωση και την επανυδάτωση. 

Φύλαξη 

Φυλάσσονται σε ξηρό µέρος σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. 

15. ΠΛΑΣΤΙΚΕΣ ΚΑΛΥΠΤΡΕΣ 

Χρήση 

Πλαστικά φύλλα, µιας χρήσης, για την κάλυψη του gel κατά την ηλεκτροφόρηση. 

ΕΞΟΠΛΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΑ ΕΞΑΡΤΗΜΑΤΑ 

1. HYDRASYS System SEBIA, PN 1211 ππ OPTION FOCUSING HYDRASYS SEBIA, PN 1235. 

ή 


3. Σύστηµα µικροπιπεττών, χειροκίνητο ή αυτόµατο, όπως το HYDRAPLUS SEBIA, PN 1216 ή HYDRAPLUS 2 SEBIA, PN 1217, ως 

εναλλακτικός τρόπος φόρτωσης των εφαρµογέων δειγµάτων ή των εφαρµογέων των αντιορών. 

4. Θάλαµος Υγρής Φύλαξης, PN 1270, παρεχόµενος µε το HYDRASYS. 

5. Οδηγός µήτρας SEBIA παρεχόµενος µε το HYDRASYS. 

6. ∆υναµική καλύπτρα, SEBIA, PN 1255. 

7. Κιτ συµπληρωµατικών εξαρτηµάτων για το HYDRASYS CSF ISOFOCUSING SEBIA, PN 1258. Περιέχει : οι καλύπτρες εφαρµογής 

αντιδραστηρίων R3, ENZ 4 mL και η συσκευή υποδιπλασιασµού του µήκους. 

8. Κιτ περιεκτών παρεχόµενο µε το HYDRASYS. 

9. Πιπέττες: 2 µL, 20 µL, 100 µL, 200 µL και 5 mL (ή διαβαθµισµένες πιπέττες : 0-100 µL, 100-500 µL και 1-10 mL). 

ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΑ ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΑ ΑΛΛΑ ΜΗ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ 

1. ΑΝΤΙΟΡΟΣ ANTI-Ig G-PER 

Το φιαλίδιο του αντιορού (SEBIA PN 4743: 1 φιαλίδιο, 0.60 mL) περιέχει πυκνό διάλυµα προερχόµενης από θηλαστικά αντι-ανθρώπειας 

αντι-ανοσοσφαιρινικής ανοσοσφαιρίνης, συνδεδεµένης µε υπεροξειδάση, µε ειδικότητα για την Ig G. Για την εύκολη αναγνώρισή του και 

την παρακολούθηση της χρήσης του, ο αντιορός είναι χρωµατισµένος µε µη επιβλαβή χρωστική η οποία ταιριάζει µε το χρώµα της 

ετικέττας του φιαλιδίου. 

Παρασκευάστε το διάλυµα εργασίας λίγο πριν τη χρήση. 

Για το HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING : 25 µL anti–Ig G - PER και 175 µL µέσο αραίωσης αντιορού. 

Για το HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING : 40 µL anti–Ig G - PER και 300 µL µέσο αραίωσης αντιορού. 

Αναµίξτε καλά. 

Χρήση 

Για ανοσοκαθήλωση και εµφάνιση των Ig G µετά την ισοηλεκτρική τους εστίαση. 


Φυλάσσετε τον αντιορό στο ψυγείο (2 έως 8 °C). Είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στην ετικέττα του 

φιαλιδίου του αντιορού. 

Πετάξτε τον αντιορό αν µεταβληθεί η όψη του, π.χ. θόλωση λόγω µικροβιακής επιµόλυνσης. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Οι αντιοροί µπορεί να προέρχονται από διαφορετικά είδη ζώων. Μην αναµιγνύετε δύο αντιορούς από διαφορετικά φιαλίδια, 

ακόµη και µε την ίδια ειδικότητα, και αλλάζετε ΠΑΝΤΑ το ρύγχος της πιπέττας όταν αλλάζετε φιαλίδια αντιορού. 

Κατά τη µεταφορά, ο αντιορός µπορεί να διατηρείται εκτός ψυγείου (στους 15 ως 30 °C) για 15 ηµέρες χωρίς δυσµενή επίδραση στην 

απόδοσή του. 

2. ΥΠΕΡΟΞΕΙ∆ΙΟ ΤΟΥ Υ∆ΡΟΓΟΝΟΥ: H 2 

O 2 

, 30 % (110 Vol.). 

Το υπεροξείδιο του υδρογόνου πρέπει να φυλάσσεται σε σκουρόχρωµη φιάλη στο ψυγείο (2 έως 8 °C). Κατά την αναρρόφηση, 

χρησιµοποιείτε πάντα καθαρή πιπέττα για να αποφύγετε επιµόλυνση του περιεχοµένου της φιάλης. 

3. ∆ΙΑΛΥΜΑ ΑΠΟΧΡΩΜΑΤΙΣΜΟΥ 


Κάθε φιαλίδιο πυκνού ∆ιαλύµατος Αποχρωµατισµού (SEBIA, PN 4540, 10 φιαλίδια, 100 mL έκαστο) αραιώνεται έως όγκου 100 λίτρων µε 

απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ. Είναι ευχερές να αραιώνονται µόνο 5 mL του πυκνού διαλύµατος σε όγκο 5 λίτρα, τον όγκο του 

περιέκτη του διαλύµατος αποχρωµατισµού. Μετά την αραίωση, το διάλυµα εργασίας αποχρωµατισµού περιέχει: κιτρικό οξύ, 50 mg/dL. 

Χρήση 

Για πλύση του gel µετά την ενζυµατική εµφάνιση και το στέγνωµα καθώς και για τον καθαρισµό του τµήµατος χρώσης του HYDRASYS. 

Για την εξουδετέρωση της οξύτητας του διαλύµατος αποχρωµατισµού, προσθέστε 15 mL διαλύµατος 50 % υδροξειδίου του νατρίου, στο 

κενό δοχείο αχρήστων. 

- 95 -



Φυλάσσετε το πυκνό διάλυµα σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται 

στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων. 

Το διάλυµα εργασίας είναι σταθερό για µια εβδοµάδα σε θερµοκρασία δωµατίου σε κλειστό δοχείο. 

Για να αποτρέψετε πολλαπλασιασµό µικροβίων στο αραιωµένο διάλυµα αποχρωµατισµού αν πρόκειται να το φυλάξετε για περισσότερο 

από µια εβδοµάδα, προσθέστε 5 µL/dL ProClin 300. 

Το διάλυµα εργασίας στο οποίο έχει προστεθεί ProClin είναι σταθερό σε κλειστό δοχείο σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο µέχρι την 

ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων. 

Μην προσθέτετε αζίδιο του νατρίου. 

Πετάξτε το διάλυµα αν µεταβληθεί η όψη του, π.χ. αν θολώσει λόγω µικροβιακής επιµόλυνσης. 

4. ∆ΙΑΛΥΜΑ ΠΛΥΣΗΣ HYDRASYS 


Κάθε φιαλίδιο του πυκνού ∆ιαλύµατος Πλύσης HYDRASYS (SEBIA, PN 4541, 10 φιαλίδια, 80 mL το καθένα) αραιώνεται σε όγκο 5 λίτρα, µε 

απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ. Μετά την αραίωση, το διάλυµα εργασίας της χρωστικής περιέχει : αλκαλικό ρυθµιστικό διάλυµα 

pH 8.8 ± 0.3, αζίδιο του νατρίου. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Το πυκνό διάλυµα πλύσης περιέχει 0.625 % αζίδιο του νατρίου. Μην το καταπίνετε! Αν καταποθεί, αναζητήστε αµέσως 

ιατρική συµβουλή! Το αζίδιο του νατρίου µπορεί να οδηγήσει στο σχηµατισµό εκρηκτικών ή τοξικών ενώσεων ερχόµενο σε επαφή µε οξέα, 

µόλυβδο ή χαλκό. Πάντοτε ξεπλένετε µε άφθονο νερό όταν το πετάτε. 

Χρήση 

Το διάλυµα πλύσης HYDRASYS είναι σχεδιασµένο για τον καθαρισµό του θαλάµου χρώσης του HYDRASYS. Χρησιµοποιείτε το περιοδικά, 

π.χ. αν το όργανο χρησιµοποιείται καθηµερινά, πλένετε το θάλαµο χρώσης κάθε εβδοµάδα. 

∆είτε το φύλλο οδηγιών για οδηγίες χρήσης. 


Φυλάσσετε το πυκνό διάλυµα και το διάλυµα εργασίας σε κλειστά δοχεία σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Είναι σταθερά µέχρι την 

ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες των φιαλιδίων. 

Πετάξτε το διάλυµα αν µεταβληθεί η όψη του, π.χ. αν θολώσει λόγω µικροβιακής επιµόλυνσης. 

∆ΕΙΓΜΑΤΑ ΠΡΟΣ ΑΝΑΛΥΣΗ 

Λήψη και διατήρηση δειγµάτων 

Ο ορός και το ΕΝΥ από τον ίδιο ασθενή πρέπει να λαµβάνονται ταυτόχρονα σύµφωνα µε τις συνήθεις διαδικασίες της κλινικής 

εργαστηριακής πρακτικής. Συνιστάται να πραγµατοποιούνται οι αναλύσεις σε φρέσκα δείγµατα ορού και ΕΝΥ. Τα δείγµατα µπορούν να 

φυλάσσονται επί ως µια εβδοµάδα στο ψυγείο (2 ως 8 °C). Για µεγαλύτερες περιόδους διατήρησης, καταψύξτε τα δείγµατα. Τα 

κατεψυγµένα δείγµατα ορού και ΕΝΥ είναι σταθερά για τουλάχιστον ένα µήνα. 

Προετοιµασία των δειγµάτων 

Μετρήστε τη συγκέντρωση της Ig G στον ορό και το ΕΝΥ µε κατάλληλες διαδικασίες. 

Η συγκέντρωση της Ig G στο ΕΝΥ και τον ορό πρέπει πάντοτε να προσαρµόζεται στο ίδιο επίπεδο στα δύο δείγµατα. 

Η προσαρµογή εξαρτάται από την αρχική συγκέντρωση της Ig στο ΕΝΥ. Χρησιµοποιείτε το ∆ιάλυµα Αραίωσης ∆ειγµάτων για όλες τις 

αραιώσεις: 

1η περίπτωση: η συγκέντρωση της Ig G είναι άνω των 2 mg/dL. 

Αραιώστε το ΕΝΥ και τον ορό µε το διάλυµα αραίωσης ώστε να λάβετε συγκέντρωση Ig G 2 mg/dL. 

2η περίπτωση: η συγκέντρωση της Ig G στο ΕΝΥ είναι 1 - 2 mg/dL. 

Χρησιµοποιήστε ΕΝΥ χωρίς αραίωση. Αραιώστε τον ορό ώστε να λάβετε την ίδια συγκέντρωση Ig G µε το δείγµα ΕΝΥ. 

3η περίπτωση: η συγκέντρωση της Ig G είναι κάτω του 1 mg/dL. 

Συµπυκνώστε το ΕΝΥ µε οποιαδήποτε κατάλληλη συσκευή ώστε να λάβετε συγκέντρωση Ig G 1 - 2 mg/dL. Αραιώστε τον ορό ώστε να 

λάβετε την ίδια συγκέντρωση Ig G µε το συµπυκνωµένο δείγµα ΕΝΥ. 

Παραδείγµατα αραιώσεων (µόνο για δείγµατα µε συγκέντρωση της Ig G άνω των 2.0 mg/dL) : 

Για το ΕΝΥ: 

A = συγκέντρωση της Ig G σε mg/dL. 

Λάβετε 20 µl ΕΝΥ και αναµίξτε καλά µε 10(A - 2) µL µέσο αραίωσης δειγµάτων. 

Για τον ορό: 

Β = συγκέντρωση της Ig G σε mg/dL. 

Αραιώστε τον ορό στο 10 πλάσιο µε µέσο αραίωσης δειγµάτων, π.χ. 10 µL ορός και 90 µL µέσο αραίωσης δειγµάτων. 

Λάβετε y µl αραιωµένου ορού και προσθέστε [ y (B/20 - 1)] µL µέσο αραίωσης (για την προτεινόµενη τιµή y = 2 µL, προσθέστε [(B/10)–2]µL 

µέσου αραίωσης δειγµάτων). 

Όταν η συγκέντρωση της Ig G είναι άγνωστη 

Χρησιµοποιήστε µη συµπυκνωµένο ΕΝΥ και αραιώστε τον ορό 300 - 400 φορές. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Αν η συγκέντρωση της Ig G στο ΕΝΥ και στον ορό δεν ρυθµιστεί στα ίδια επίπεδα, αυτό ενδέχεται να επηρεάσει αρνητικά την 

ερµηνεία των αποτυπωµάτων – βλέπε “ΕΡΜΗΝΕΙΑ”. 

- 96 -


∆ΙΑ∆ΙΚΑΣΙΑ 

Το σύστηµα HYDRASYS είναι ένα ηµι-αυτοµατοποιηµένο πολυπαραµετρικό όργανο. Τα αυτοµατοποιηµένα στάδια λειτουργίας 

περιλαµβάνουν την επεξεργασία των gel αγαρόζης HYDRAGEL µε την ακόλουθη σειρά: προ-ηλεκτροφόρηση, εφαρµογή δείγµατος, 

ηλεκτροφόρηση µε ισοηλεκτρική εστίαση, επώαση µε ενζυµοσηµασµένο αντιορό, επώαση µε ενζυµικό υπόστρωµα, διακοπή της ενζυµικής 

αντίδρασης, στύπωµα και τελικό στέγνωµα. Τα µη αυτοµατοποιηµένα στάδια περιλαµβάνουν το χειρισµό των δειγµάτων και των gel, την 

εφαρµογή των αντιδραστηρίων και τη ρύθµιση της συσκευής για λειτουργία. 

∆ΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΕΓΧΕΙΡΙ∆ΙΟ Ο∆ΗΓΙΩΝ ΤΟΥ HYDRASYS. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Προσαρµόστε τη θέση της δυναµικής καλύπτρας ώστε να τα βοθρία της να είναι τέλεια ευθυγραµµισµένα µε τα 

ηλεκτροφορητικά ίχνη. 

Ι. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗΣ 

1. Θέστε το HYDRASYS σε λειτουργία. 

2. Για να εφαρµοστεί η υψηλή τάση η οποία απαιτείται για την ισοηλεκτρική εστίαση, πιέστε τον πράσινο διακόπτη υψηλής τάσης στη 

θέση υψηλής τάσης, οπότε γίνεται κόκκινος. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Ο διακόπτης υψηλής τάσης εµφανίζει πληροφορίες για την ηλεκτροφόρηση. Κατά την ηλεκτροφόρηση, εµφανίζει 

volt.hours (Vh) και τιµές έντασης ρεύµατος (mA). Όταν πιεστεί κατά την ηλεκτροφόρηση, εµφανίζει την τάση (V) και τιµές ισχύος 

(W). Αν πιεστεί και πάλι επιστρέφει σε τιµές Vh και mA. 

Όταν το HYDRASYS βρίσκεται στην κατάσταση υψηλής τάσης, το παράθυρο ενδείξεων εµφανίζει την πραγµατική τιµή έντασης 

ρεύµατος και το 1/10 των άλλων τιµών, όπως της τάσης, των volt.hours και της ισχύος. 

3. Τοποθετήστε έναν εφαρµογέα µε 6 δόντια για το HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ή έναν εφαρµογέα µε 18 δόντια για το 

HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING, σε µια επίπεδη επιφάνεια µε τους αριθµούς των βοθρίων στη δεξιά πλευρά. 

4. Χρησιµοποιήστε 10 µL δείγµατος σε κάθε βοθρίο του εφαρµογέα (Σχ. 1). Φορτώστε τον εφαρµογέα εντός 2 min. 

Το ακόλουθο παράδειγµα παρουσιάζει ανάλυση τριών ζευγών ΕΝΥ-ορού σε ένα gel HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING και εννέα 

ζευγών ΕΝΥ-ορού σε ένα gel HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING. 


| ENY | Ορός | ENY | Ορός | 

Βοθρίο Αρ. Βοθρίο Αρ. Αρ. ασθενή (εφαρµογέας µε 6 δόντια) | (εφαρµογέας µε 18 δόντια) | 

1 1 2 1 2 2 3 4 3 4 3 5 6 5 6 4 - - 7 8 5 - - 9 10 6 - - 11 12 7 - - 13 14 8 - - 15 16 | 9 | - | - | 17 | 18 | 

- Τοποθετήστε αµέσως τον εφαρµογέα στο θάλαµο υγρής φύλαξης µε τα δόντια προς τα άνω (κρατήστε τον από το πλαστικό 

προστατευτικό κάλυµµα των δοντιών). 

Βλέπε το φύλλο οδηγιών του θαλάµου υγρής φύλαξης για περισσότερες λεπτοµέρειες. 

Πριν από την εφαρµογή του δείγµατος στην επιφάνεια του gel, πρέπει να πραγµατοποιηθεί προ-ηλεκτροφόρηση µέχρι να 

συµπληρωθούν 75 Vh, σύµφωνα µε τις παρακάτω οδηγίες: 

5. Ανοίξτε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης και σηκώστε τους φορείς των ηλεκτροδίων και των εφαρµογέων. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Ποτέ µην κλείνετε το καπάκι ενώ οι φορείς είναι σηκωµένοι! 

6. Επιλέξτε το πρόγραµµα ηλεκτροφόρησης «3/9 CSF FOCUSING» από το µενού της συσκευής (αριστερή πλευρά του 

πληκτρολογίου). 

7. Ετοιµάστε τις ταινίες µε το καθοδικό και το ανοδικό διάλυµα: βλ. αρ. 4 στο ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ. Αφαιρέστε 

τις ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος από τους ανοδικούς και καθοδικούς περιέκτες, κρατώντας τις από τις πλαστικές τους άκρες. 

8. Προσαρµόστε τη διάτρητη άκρη των ταινιών στις ακίδες του φορέα ηλεκτροδίων. Το πλαστικό κάλυµµα της ταινίας πρέπει να είναι 

στραµµένο προς το φορέα (Εικ. 2). Η κόκκινη ανοδική ταινία βρίσκεται στον πυθµένα (άνοδος), η άχρωµη καθοδική ταινία βρίσκεται 

στην κορυφή (κάθοδος). 

9. Αποσυσκευάστε την πλάκα του gel αγαρόζης HYDRAGEL. 

10. Τοποθετήστε την πλαστική της πλευρά σε διηθητικό χαρτί για να αποµακρύνετε τα σταγονίδια νερού. 

11. Περάστε γρήγορα και οµοιόµορφα ένα διηθητικό χαρτί στην επιφάνεια του gel επί 3 sec για να απορροφήσει την περίσσεια υγρού. 

12. Εισαγάγετε 150 µL αιθυλενογλυκόλης (EG) για το HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ή 300 µL για το HYDRAGEL 9 CSF 

ISOFOCUSING, µέχρι το κατώτερο τρίτο του πλαισίου που είναι τυπωµένο στην Πλακέτα Ελέγχου Θερµοκρασίας της µονάδας 

ηλεκτροφόρησης. 

13. Τοποθετήστε την πλάκα του gel (µε την επιφάνεια του gel προς τα άνω) µε το άκρο της να αγγίζει το stop στο κάτω τµήµα του 

τυπωµένου πλαισίου κλίµακας (Εικ. 3). 

Λυγίστε το gel και χαµηλώστε το επί της επιφάνειας της EG. Βεβαιωθείτε ότι δεν έχουν παγιδευτεί φυσαλίδες αέρα, ότι η EG έχει 

απλωθεί κάτω από ολόκληρη την πλακέτα του gel και το gel είναι ευθυγραµµισµένο µε το τυπωµένο πλαίσιο. 

14. Τοποθετήστε µια πλαστική καλύπτρα στο gel: 

- Πάρτε µια πλαστική καλύπτρα. 

- Ευθυγραµµίστε την κάτω πλευρά της πλαστικής καλύπτρας µε τα δύο πλευρικά σηµάδια σε απόσταση 1,5 cm από την πλαστική 

βάση του gel (καθοδική πλευρά) (Σχ. 4). 

- Απλώστε την καλύπτρα στην επιφάνεια του gel. Αποφύγετε την παγίδευση φυσαλίδων αέρα ανάµεσα στο gel και την καλύπτρα. 

- 97 -


- Αν παγιδευτούν φυσαλίδες αέρα, σηκώστε την καλύπτρα αµέσως από τη µια πλευρά για να διώξετε τον παγιδευµένο αέρα και 

απλώστε την πάλι αργά πάνω στο gel. 

- Αποφύγετε να µετακινήσετε το gel πάνω στην πλάκα της ηλεκτροφόρησης κατά τη διάρκεια αυτών των χειρισµών. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Η πλαστική καλύπτρα δεν πρέπει να τοποθετείται κάτω από τα δύο πλευρικά σηµάδια της πλαστικής βάσης του 

gel. 

15. Κατεβάστε τους δύο φορείς. Σε αυτήν τη θέση, οι ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος δεν αγγίζουν το gel. ΜΗΝ ΠΙΕΖΕΤΕ ΤΟΥΣ ΦΟΡΕΙΣ 

ΤΕΛΕΙΩΣ ΠΡΟΣ ΤΑ ΚΑΤΩ. 

16. Κλείστε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης. 

17. Αρχίστε τη διαδικασία αµέσως πιέζοντας το πλήκτρο µε το πράσινο βέλος «START» στην αριστερή πλευρά του πληκτρολογίου. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Βεβαιωθείτε ότι η είσοδος αερισµού στη δεξιά πλευρά του οργάνου είναι ελεύθερη. 

ΠΡΟ-ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ – ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Οι φορείς των ηλεκτροδίων χαµηλώνουν ώστε οι ταινίες µε το ρυθµιστικό διάλυµα να έρθουν σε επαφή µε την επιφάνεια του gel. 

• Η ηλεκτροφόρηση πραγµατοποιείται στους 20 °C ελεγχόµενη µε το φαινόµενο Peltier, µέχρι να συµπληρωθούν 75 Vh, η τάση αυξάνεται 

σταδιακά στη µέγιστη τιµή της (1000 V), η οποία απαιτείται για τη διαδικασία Peltier. 

• Ο φορέας ηλεκτροδίων ανυψώνεται για να αποσυνδεθούν τα ηλεκτρόδια. 

• Ένα ηχητικό σήµα σηµατοδοτεί την απασφάλιση του σκεπάσµατος της µονάδας. Το σήµα αυτό επιµένει µέχρι να επέµβει ο χειριστής. Το 

ακόλουθο µήνυµα εµφανίζεται τότε στην οθόνη : «POS : 1» για να τοποθετήσετε αµέσως τον εφαρµογέα στο φορέα. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης παραµένει κλειστό κατά τη διάρκεια όλων των σταδίων της ηλεκτροφόρησης. 

18. Ανοίξτε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης. 

19. Αφαιρέστε τον εφαρµογέα από τον υγρό θάλαµο. Κρατήστε τον από το προστατευτικό κάλυµµα. 

- Αποσπάστε το προστατευτικό κάλυµµα των δοντιών του εφαρµογέα. 

- Τοποθετήστε τον εφαρµογέα στη θέση N° 1 του φορέα. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Οι τυπωµένοι αριθµοί στον εφαρµογέα δειγµάτων πρέπει να είναι πάντα στραµµένοι προς το χειριστή (βλ. εικ. 5). 



ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ – ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Οι δύο φορείς χαµηλώνουν ώστε οι ταινίες µε το ρυθµιστικό διάλυµα και ο εφαρµογέας να έρθουν σε επαφή µε την επιφάνεια του gel. 

• Ο φορέας των εφαρµογέων δειγµάτων ανυψώνεται. 

• Η ηλεκτροφόρηση πραγµατοποιείται επί περίπου 45 min στους 20 °C, ελεγχόµενη από το φαινόµενο Peltier, µέχρι να συµπληρωθούν 

700 Vh, η τάση αυξάνεται σταδιακά στη µέγιστη τιµή της (1000 V), η οποία απαιτείται για τη διαδικασία. 

• Ο φορέας ηλεκτροδίων ανυψώνεται για να αποσυνδεθούν τα ηλεκτρόδια. 

• Ένα ηχητικό σήµα σηµατοδοτεί την απασφάλιση του σκεπάσµατος της µονάδας. Το σήµα αυτό επιµένει µέχρι να επέµβει ο χειριστής. Το 

ακόλουθο µήνυµα εµφανίζεται τότε στην οθόνη : “ AS” για την εφαρµογή των αντιορών. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης παραµένει κλειστό κατά τη διάρκεια όλων των σταδίων της ηλεκτροφόρησης. 

II. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΑΝΟΣΟΚΑΘΗΛΩΣΗΣ 

Κατά τη διάρκεια της ηλεκτροφόρησης, συναρµολογήστε τη δυναµική καλύπτρα, η οποία περιέχει έναν εφαρµογέα αντιορών, µια βάση 

εφαρµογέων αντιορών, έναν οδηγό της δυναµικής καλύπτρας και µια συσκευή µείωσης του µήκους (Εικ. 6). 

1. Τοποθετήστε τον οδηγό της δυναµικής καλύπτρας σε επίπεδη επιφάνεια. 

2. Για τα HYDRAGEL 3 & 9 CSF ISOFOCUSING, είναι απαραίτητο να τοποθετηθεί στον οδηγό της δυναµικής καλύπτρας µια συσκευή 

µείωσης του µήκους. 

3. Τοποθετήστε έναν εφαρµογέα αντιορών στη βάση εφαρµογέων (Εικ. 7) : 

- Κλίνετε τον εφαρµογέα αντιορών κατά 45° και τοποθετήστε τον σε επαφή µε τα πλαστικά ελατήρια της βάσης εφαρµογέων. 

- Αποµακρύνετε τα δύο αντικείµενα και περιστρέψτε τον εφαρµογέα για να τον σταθεροποιήσετε στις εγκοπές της βάσης. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Βεβαιωθείτε ότι ο εφαρµογέας είναι σωστά τοποθετηµένος στη βάση : οι ακίδες στα άκρα του εφαρµογέα 

πρέπει να είναι σταθεροποιηµένες στις εγκοπές της βάσης. 

4. Τοποθετήστε τη βάση µε τον εφαρµογέα στον οδηγό της δυναµικής καλύπτρας, έχοντας ήδη τοποθετήσει τη συσκευή µείωσης του 

µήκους (Εικ. 8). 

Τοποθετήστε τα αντιδραστήρια ως εξής: 

Για το HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING, τοποθετήστε αντιορό αντι-Ig G – PER 20 µL/βοθρίο στα βοθρία 4 ως 12. 

Για το HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING, τοποθετήστε αντιορό αντι-Ig G - PER 20 µL/βοθρίο στα βοθρία 1 ως 15. 

Αναρροφάτε τα αντιδραστήρια αποφεύγοντας φυσαλίδες αέρα στο ρύγχος της πιπέττας. 

5. Τοποθετήστε τα αντιδραστήρια (Εικ. 9) : 

- Κρατήστε την πιπέττα υπό γωνία και αγγίξτε το ρύγχος της ελαφρά στο πλάγιο του βοθρίου, χωρίς να αγγίζετε τον πυθµένα του 

βοθρίου. 

- Εγχύστε τη σταγόνα του αντιδραστηρίου στο βοθρίο. 

ΙII. ΑΝΟΣΟΚΑΘΗΛΩΣΗ 

1. Μετά την ηλεκτροφόρηση, ανοίξτε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης (το µήνυµα σταµατά να αναβοσβήνει). 

2. Αφαιρέστε τον εφαρµογέα και πετάξτε τον. 

3. Σηκώστε και τους δύο φορείς, αφαιρέστε τις ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος από την πλαστική άκρη τους και πετάξτε τις. 

4. Αφαιρέστε και τους δύο φορείς. 

5. Σκουπίστε τα ηλεκτρόδια µε µαλακό υγρό απορροφητικό χαρτί. 

6. Αφήστε το gel στη θέση του στη µονάδα ηλεκτροφόρησης και αφαιρέστε την πλαστική καλύπτρα σηκώνοντας την από τη γωνία 

και πετάξτε την. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Μην µετακινείτε το gel στο τυπωµένο πλαίσιο κατά τη διάρκεια αυτού του χειρισµού. 

- 98 -


7. Ετοιµάστε τη δυναµική καλύπτρα για εφαρµογή των αντιορών ως εξής (Εικ. 10): 

- Τοποθετήστε τον οδηγό της καλύπτρας στο clip συγκράτησης (ο οδηγός µπορεί να παραµένει στη µονάδα ηλεκτροφόρησης 

µόνιµα). 

- Κρατώντας τη δυναµική καλύπτρα από την άκρη της τοποθετήστε την στον οδηγό µε τις εγκοπές ευθυγραµµισµένες µε τα 

σηµάδια. 

- Χαµηλώστε τη δυναµική καλύπτρα επάνω στην πλάκα του HYDRASYS. 

- Βεβαιωθείτε ότι η βάση των εφαρµογέων βρίσκεται στο κατώτερο σηµείο του οδηγού της καλύπτρας, στραµµένη προς το 

χειριστή. 

- Κρατήστε τη βάση των εφαρµογέων από τη λαβή στα δεξιά της και πιέστε το κεντρικό σηµείο πίεσης ώστε ο εφαρµογέας 

αντιορών να ακουµπήσει στο gel. 

- ∆ιακόψτε την πίεση. Τα αντιδραστήρια θα απλωθούν κάτω από κάθε ηλεκτροφορητικό ίχνος (Εικ. 11). 

- Αµέσως, χρησιµοποιώντας τη λαβή της βάσης του εφαρµογέα αντιδραστηρίων, µετακινήστε τον εφαρµογέα αργά αλλά σταθερά 

πάνω – κάτω σε όλο το µήκος του gel για να εφαρµόσετε το αντιδραστήριο. Επαναλάβετε δις. Αυτό θα πρέπει να διαρκέσει 

περίπου 5 sec κάθε φορά (Εικ. 12). 

- Κατά τη διάρκεια αυτού του βήµατος, κρατάτε την καλυπτρίδα µόνο από τη λαβή της βάσης του εφαρµογέα αντιδραστηρίων. 

Αποφύγετε να αγγίζετε τον οδηγό. 

8. Αφήστε τη δυναµική καλύπτρα στο θάλαµο του HYDRASYS µε τη βάση των εφαρµογέων βρίσκεται στο κατώτερο σηµείο του 

οδηγού της καλύπτρας. 

9. Κλείστε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης του HYDRASYS. 

10. Αρχίστε τη διαδικασία αµέσως πιέζοντας το πλήκτρο µε το πράσινο βέλος «START» στην αριστερή πλευρά του πληκτρολογίου. Το 

ακόλουθο µήνυµα εµφανίζεται τότε στην οθόνη : «[INCUBATION]». 

ΑΝΟΣΟΚΑΘΗΛΩΣΗ – ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Επώαση στους 20 °C ελεγχόµενη µε το φαινόµενο Peltier, για 10 min. 

• Ένα ηχητικό σήµα σηµατοδοτεί την απασφάλιση του σκεπάσµατος της µονάδας. Το ακόλουθο µήνυµα εµφανίζεται τότε στην οθόνη : “ 

PAP.”. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης παραµένει ασφαλισµένο κατά τη διάρκεια της επώασης. 

IV. ΣΤΥΠΩΜΑ ΤΟΥ GEL 


2. Αφαιρέστε τα εξαρτήµατα της δυναµικής καλύπτρας : 

- Αφαιρέστε τη βάση του εφαρµογέα αντιδραστηρίων κρατώντας την από τη λαβή της. 

- Αφαιρέστε τον εφαρµογέα αντιορών από τη βάση του και πετάξτε τον. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Οι εφαρµογείς αντιορών απαιτούν προσεκτικό χειρισµό. 

3. Τοποθετήστε ένα αδρό διηθητικό χαρτί στο gel: 

- ∆ώστε του κλίση 45°. Ευθυγραµµίστε την κάτω πλευρά του διηθητικού χαρτιού µε την άκρη του gel. 

- Χαµηλώστε το πάνω στο gel. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Πιέστε σταθερά σε όλη την επιφάνεια του gel ώστε να εξασφαλιστεί καλή προσκόλληση. 

4. Κλείστε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης του HYDRASYS. 


ΣΤΥΠΩΜΑ – ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Στύπωµα στους 20 °C, για 3 min. Το ακόλουθο µήνυµα εµφανίζεται τότε στην οθόνη : «[BLOTTING]». 

• Ηχεί ακουστικό σήµα. Το ακόλουθο µήνυµα εµφανίζεται τότε στην οθόνη : «❊ PAP. + REHYD 1» ζητώντας την αποµάκρυνση του 

διηθητικού χαρτιού. 

V. ΕΠΑΝΥ∆ΑΤΩΣΗ ΤΟΥ GEL 


2. Αφαιρέστε το διηθητικό χαρτί και αφήστε το gel στη θέση του. 

3. Τοποθετήστε την καλύπτρα εφαρµογής αντιδραστηρίων R3 για το HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ή ENZ 4 mL για το HYDRAGEL 

9 CSF ISOFOCUSING (Εικ. 13). 

4. Αναρροφήστε το διάλυµα επανυδάτωσης για το HYDRAGEL CSF FOCUSING χωρίς να παγιδευτούν φυσαλίδες αέρα στο ρύγχος 

της πιπέττας. 

5. Εισαγάγετε 4.5 mL διαλύµατος επανυδάτωσης για το HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ή 7 mL για το HYDRAGEL 9 CSF 

ISOFOCUSING µέσω της οπής της µήτρας στο χώρο κάτω από αυτήν (Εικ. 14). Βεβαιωθείτε ότι το διάλυµα κάτω από τη µήτρα είναι 

οµοιόµορφα απλωµένο στην ορθογώνια επιφάνεια. 

- Κρατήστε την πιπέττα κατακόρυφα. 

- Ακουµπήστε το ρύγχος της ελαφρά στην οπή της µήτρας. 

- Προσεκτικά εγχύστε το διάλυµα ώστε να απλωθεί κάτω από τη µήτρα χωρίς να παγιδευτούν φυσαλίδες. 



ΕΠΑΝΥ∆ΑΤΩΣΗ ΤΟΥ GEL - ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 


• Ηχεί ακουστικό σήµα. Το ακόλουθο µήνυµα εµφανίζεται τότε στην οθόνη : «❊ REHYD 1 + PAP.» ζητώντας την αποµάκρυνση του 

πρώτου διαλύµατος επανυδάτωσης. 

VI. ΑΠΟΜΑΚΡΥΝΣΗ ΤΟΥ ∆ΙΑΛΥΜΑΤΟΣ ΕΠΑΝΥ∆ΑΤΩΣΗΣ 


2. Αποµακρύνετε το διάλυµα επανυδάτωσης : 

3. Κρατήστε την πιπέττα κατακόρυφα και ακουµπήστε το ρύγχος της ελαφρά στο βοθρίο. (Εικ. 14). 

4. Προσεκτικά και προοδευτικά αναρροφήστε το αντιδραστήριο. 

5. Κρατήστε τη µήτρα εφαρµογής αντιδραστηρίων από το ωτίο της, σηκώστε την και αφαιρέστε την. Η περιοχή του gel πρέπει να έχει 

επανυδατωθεί. 

- 99 -


VII.ΣΤΥΠΩΜΑ ΤΟΥ GEL 

1. Τοποθετήστε ένα αδρό διηθητικό χαρτί στο gel όπως περιγράφεται στην § IV. 

2. Πιέστε σταθερά σε όλη την επιφάνεια του gel ώστε να εξασφαλιστεί καλή προσκόλληση. 




• Στύπωµα στους 20 °C, για 3 min. 

• Ηχεί ακουστικό σήµα. Το ακόλουθο µήνυµα εµφανίζεται τότε στην οθόνη : «❊ PAP. + REHYD 2» ζητώντας την αποµάκρυνση του 

διηθητικού χαρτιού. 

VIII. ΕΠΑΝΥ∆ΑΤΩΣΗ ΤΟΥ GEL 



3. Τοποθετήστε την καλύπτρα εφαρµογής αντιδραστηρίων R3 για το HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ή ENZ 4 mL για το HYDRAGEL 

9 CSF ISOFOCUSING (Εικ. 13). 

4. Αναρροφήστε το διάλυµα επανυδάτωσης για το HYDRAGEL CSF FOCUSING χωρίς να παγιδευτούν φυσαλίδες αέρα στο ρύγχος 

της πιπέττας. Εισαγάγετε 4.5 mL διαλύµατος επανυδάτωσης για το HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING ή 7 mL για το HYDRAGEL 

9 CSF ISOFOCUSING µέσω της οπής της µήτρας στο χώρο κάτω από αυτήν (Εικ. 14). Βεβαιωθείτε ότι το διάλυµα κάτω από τη µήτρα 

είναι οµοιόµορφα απλωµένο στην ορθογώνια επιφάνεια. 

5. Κρατήστε την πιπέττα κατακόρυφα. 

6. Ακουµπήστε το ρύγχος της ελαφρά στην οπή της µήτρας. 

7. Προσεκτικά εγχύστε το διάλυµα ώστε να απλωθεί κάτω από τη µήτρα χωρίς να παγιδευτούν φυσαλίδες. 



ΕΠΑΝΥ∆ΑΤΩΣΗ ΤΟΥ GEL - ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 


• Μετά την επώαση, ηχεί ακουστικό σήµα και το ακόλουθο µήνυµα εµφανίζεται τότε στην οθόνη : «❊ REHYD 2 + TTF3» ζητώντας την 

αποµάκρυνση του διαλύµατος επανυδάτωσης. 

IX. ΑΠΟΜΑΚΡΥΝΣΗ ΤΟΥ ∆ΙΑΛΥΜΑΤΟΣ ΕΠΑΝΥ∆ΑΤΩΣΗΣ 


2. Αποµακρύνετε το διάλυµα επανυδάτωσης όπως περιγράφεται στην § IV. 

3. Αφήστε τη µήτρα στη θέση της. 

X. ΕΜΦΑΝΙΣΗ 

1. Εγχύστε το διάλυµα TTF3, παρασκευασµένο λίγο πριν τη χρήση, στο χώρο κάτω από τη µήτρα. 3 mL για το HYDRAGEL 3 CSF 

ISOFOCUSING ή 3.5 mL για το HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING. ∆ιατηρήστε τις ίδιες προφυλάξεις που έχουν περιγραφεί. 

2. Αναρροφήστε το διάλυµα TTF3 χωρίς να παγιδευτούν φυσαλίδες αέρα στο ρύγχος της πιπέττας. 

Βεβαιωθείτε ότι το διάλυµα κάτω από τη µήτρα είναι οµοιόµορφα απλωµένο στην ορθογώνια επιφάνεια. 



ΕΠΩΑΣΗ – ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 


• Ηχεί ακουστικό σήµα. Το ακόλουθο µήνυµα εµφανίζεται τότε στην οθόνη : «❊ TTF3 + PAP.» ζητώντας την αποµάκρυνση του 

διαλύµατος εµφάνισης. 

XI. ΑΠΟΜΑΚΡΥΝΣΗ ΤΟΥ ∆ΙΑΛΥΜΑΤΟΣ ΕΜΦΑΝΙΣΗΣ 


2. Αποµακρύνετε το διάλυµα εµφάνισης όπως περιγράφεται στην § VI. 

3. Κρατήστε τη µήτρα εφαρµογής αντιδραστηρίων από το ωτίο της, σηκώστε την και αφαιρέστε την. 

XII.ΣΤΥΠΩΜΑ ΤΟΥ GEL 

1. Τοποθετήστε ένα αδρό διηθητικό χαρτί στο gel όπως περιγράφεται στην § IV. 

2. Πιέστε σταθερά σε όλη την επιφάνεια του gel ώστε να εξασφαλιστεί καλή προσκόλληση. 



5. Καθαρίστε τη µήτρα µε απεσταγµένο νερό και σκουπίστε την µε µαλακό απορροφητικό χαρτί. Πριν την ξαναχρησιµοποιήσετε, 

βεβαιωθείτε ότι η µήτρα είναι τελείως στεγνή. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Μπορεί να χρησιµοποιηθεί οινόπνευµα για τον καθαρισµό της µήτρας R3 ή ENZ 4 mL 



• Ηχεί ακουστικό σήµα. Το ακόλουθο µήνυµα εµφανίζεται τότε στην οθόνη : « ❊ PAP.» για να αποµακρυνθεί το διηθητικό χαρτί. 

XIII. ΣΤΕΓΝΩΜΑ ΤΟΥ GEL 



3. Κλείστε το καπάκι του HYDRASYS. 

4. Αρχίστε τη διαδικασία αµέσως πιέζοντας το πλήκτρο µε το πράσινο βέλος «START» στην αριστερή πλευρά του πληκτρολογίου. Το 

ακόλουθο µήνυµα εµφανίζεται τότε στην οθόνη : «[DRYING]». 

- 100 -

ΣΤΕΓΝΩΜΑ – ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 


• Ένα ηχητικό σήµα σηµατοδοτεί την απασφάλιση του σκεπάσµατος της µονάδας. 

• Ανοίξτε το καπάκι. 

• Αφαιρέστε το στεγνωµένο gel. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Η θερµοκρασία της πλάκας µειώνεται τους 20 °C σε λιγότερο από 5 min. 

- Τότε µπορεί να αρχίσει νέα ηλεκτροφόρηση. 

- Επαναφέρετε τους φορείς των εφαρµογέων δειγµάτων και των ηλεκτροδίων στη θέση τους. 

- Σκουπίστε την πλάκα ελέγχου της θερµοκρασίας µε µαλακό υγρό απορροφητικό χαρτί. 


XIV. ΠΛΥΣΗ ΚΑΙ ΤΕΛΙΚΗ ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΙΑ ΤΟΥ GEL 

Μετά τη σάρωση, το gel πλένεται στο θάλαµο χρώσης µε το πρόγραµµα “WASH ISOENZ/GEL”. Αο θάλαµος έχει προηγουµένως 

χρησιµοποιηθεί για χρώση, καθαρίστε τον µε το πρόγραµµα ”WASH CHAMBER”. 

1. Ανοίξτε το στατήρα των gel. Τοποθετήστε το στεγνό gel (µε την επιφάνεια του gel προς τα άνω) στις αύλακες των δύο ράβδων και 

κλείστε τον στατήρα. Βεβαιωθείτε ότι το film είναι σωστά τοποθετηµένο µέσα στον στατήρα (Εικ. 15). 

2. Τοποθετήστε τον στατήρα στη Μονάδα Επεξεργασίας / Χρώσης των gel. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Πριν την έναρξη του προγράµµατος επεξεργασίας / χρώσης των gel, ελέγξτε τα ακόλουθα : 

- περιέκτης διαλύµατος αποχρωµατισµού περιέχει τουλάχιστον 400 mL διαλύµατος αποχρωµατισµού, 

- περιέκτης αχρήστων είναι κενός. 

3. Για τη σύνδεση των γραµµών των αντιδραστηρίων: ανατρέξτε στις πληροφορίες που εµφανίζονται στην οθόνη του οργάνου 

(επιλέξτε: REAGENT LINES). 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Μην ξεχνάτε να αποφράσσετε τις µη χρησιµοποιούµενες γραµµές. 

4. Επιλέξτε το πρόγραµµα πλύσης “WASH ISOENZ/GEL” από το µενού του οργάνου και αρχίστε τη διαδικασία πατώντας το πλήκτρο 

«START» (πράσινο βέλος στη δεξιά πλευρά του πληκτρολογίου). 

Σηµείωση: Κατά τα στάδια πλύσης και στεγνώµατος, η µονάδα παραµένει κλειδωµένη. 

Μετά το στάδιο ψύξης, ένας ήχος σηµατοδοτεί το ξεκλείδωµα της µονάδας (ο αερισµός διατηρείται µέχρι την αφαίρεση του 

στατήρα των gel). 

5. Αφαιρέστε τον στατήρα των gel από τη µονάδα, ανοίξτε τον και αφαιρέστε το στεγνό gel. Αν χρειάζεται, καθαρίστε την πίσω 

(πλαστική) επιφάνεια του στεγνού φιλµ µε υγρό µαλακό χαρτί. Το gel είναι έτοιµο προς εκτίµηση. 

ΕΡΜΗΝΕΙΑ 

Η ενδορραχιαία σύνθεση ανοσοσφαιρινών υποδεικνύεται από την παρουσία ζωνών Ig G στο ανοσοαποτύπωµα του ΕΝΥ, οι οποίες 

απουσιάζουν από τον ορό του ίδιου ασθενούς (Εικ. 16). Πολύ αµυδρές ζώνες βρίσκονται πάντα στον ορό οι οποίες µπορεί να βρίσκονται 

ή όχι στην ίδια θέση µε το ΕΝΥ. Οι ζώνες αυτές θα πρέπει να αγνοούνται κατά την αξιολόγηση. Αντιπροσωπεύουν ετερογένεια των Ig G 

του ορού και θα µπορούσαν να οπτικοποιηθούν µόνο µε τεχνικές υψηλής ανάλυσης και ευαισθησίας. Θεωρητικά, µια µοναδική ζώνη Ig G 

στο ΕΝΥ η οποία απουσιάζει από τον ορό είναι ενδεικτικό αλλά επισφαλές σηµείο ενδορραχιαίας σύνθεσης. Στην πράξη, δύο ή 

περισσότερες ζώνες θεωρούνται αξιόπιστη ένδειξη. ∆ύο ή περισσότερες ζώνες χρησιµεύουν επίσης ως υποστηρικτική ένδειξη πολλαπλής 

σκλήρυνσης αν και γενικά ανευρίσκονται τέσσερις ή περισσότερες ολιγοκλωνικές Ig G ζώνες. Εποµένως, µερικοί συνιστούν να 

θεωρούνται οι τέσσερις ή περισσότερες ζώνες ως ενδεικτικές MS, αν και αυτό επιδέχεται περαιτέρω διερεύνησης. Πρέπει να σηµειωθεί 

ότι ο αριθµός τω ζωνών στα ολιγοκλωνικά ανοσοαποτυπώµατα δεν συσχετίζεται µε τη βαρύτητα και την πρόγνωση των επιβεβαιωµένων 

περιπτώσεων MS. Ως εκ τούτου, ο αριθµός των ζωνών δεν πρέπει να ανακοινώνεται ώστε να αποφεύγονται λανθασµένες ερµηνείες του 

αριθµού. 

Για να εξασφαλιστεί ορθή συγκριτική ερµηνεία, επιβάλλεται να τηρηθούν τα εξής: 

• Τα δείγµατα ΕΝΥ και ορού πρέπει να λαµβάνονται ταυτόχρονα από τον ίδιο ασθενή. Οποιαδήποτε επεξεργασία των δειγµάτων που θα 

µπορούσε να διαφοροποιήσει τη συγκέντρωση των Ιg πρέπει να αποφεύγεται. 

• Οι συγκεντρώσεις των ανοσοσφαιρινών στο ΕΝΥ και τον ορό πρέπει να προσδιορίζονται µε ακρίβεια έτσι ώστε µετά την προσαρµογή να 

εφαρµόζονται στο gel ίσες ποσότητες της Ig G. 

• Αν η συγκέντρωση της Ig G είναι άγνωστη, ο ορός πρέπει να τρέχει σε αραίωση 300 – 400 x και το ΕΝΥ ως έχει. Στη συνέχεια η ανισότητα 

των συγκεντρώσεων της Ig G πρέπει να λαµβάνεται υπόψη ως προς την πιθανή επίδρασή της στην ερµηνεία της εξέτασης. 

Η ανίχνευση ενδορραχιαίας σύνθεσης Ig µε την ανοσοκαθήλωση είναι πιο ειδική και πιο ευαίσθητη από τις πληροφορίες που παρέχονται 

από τους διάφορους λόγους που υπολογίζονται από τις ολικές συγκεντρώσεις στο ΕΝΥ και τον ορό των ανοσοσφαιρινών, της αλβουµίνης 

και των άλλων πρωτεϊνών. 

Η επιβεβαίωση της ενδορραχιαίας σύνθεσης Ig συνιστά µια σηµαντική πληροφορία για την υποψία φλεγµονώδους νόσου του ΚΝΣ. Το 

ολιγοκλωνικό προφίλ ή άλλη ένδειξη σύνθεσης Ιg G στο ΚΝΣ µπορεί να σχετίζεται µε διάφορες νόσους του ΚΝΣ, όπως : 

• 95 % των περιπτώσεων πολλαπλής σκλήρυνσης, 

• 100 % των περιπτώσεων µη θεραπευθείσας νευροσυφιλίδος, 

• 100 % των περιπτώσεων υποξείας σκληρωτικής λευκοεγκεφαλίτιδος. 

Σπάνια, ενδείξεις ενδορραχιαίας σύνθεσης Ig G µπορεί να διαπιστωθεί σε πολλές νόσους του ΚΝΣ, οι οποίες συνήθως σχετίζονται µε 

φλεγµονή, όπως λοιµώξεις, περιφερικές νευροπάθειες, νεοπλάσµατα, αγγειακά εγκεφαλικά επεισόδια κ.λ.π. 

Η διάγνωση πρέπει να βασίζεται µόνο στα ευρήµατα της ανοσοκαθήλωσης. Τα ευρήµατα αυτά πρέπει να συνεκτιµώνται µε την κλινική 

εικόνα και το ιστορικό και να συµπληρώνονται από βιοχηµικές, µικροβιολογικές και κυτταρολογικές εξετάσεις. 

Παρεµβολές και περιορισµοί 

Βλέπε ∆ΕΙΓΜΑΤΑ ΠΡΟΣ ΑΝΑΛΥΣΗ. 

Η χρήση άλλων αντιορών από τους ειδικούς για τις διαδικασίες ανοσοκαθήλωσης µε δυναµική κάλυψη HYDRAGEL 3 & 9 CSF 

ISOFOCUSING µπορεί να επηρεάσει τα αποτελέσµατα. 

Λόγω των ορίων διακριτικής ικανότητας και ευαισθησίας της ηλεκτροφόρησης ζώνης, είναι πιθανό κάποια ολιγοκλωνικά στοιχεία να µην 

ανιχνεύονται µε αυτήν τη µέθοδο. 

- 101 -


Αντιµετώπιση προβληµάτων 

Καλέστε την Τεχνική Υπηρεσία του προµηθευτή αν η ανάλυση δεν λειτουργεί παρόλο που οι οδηγίες προετοιµασίας και φύλαξης των 

υλικών και οι οδηγίες λειτουργίας τηρούνται προσεκτικά. 

Τα Φύλλα ∆εδοµένων Ασφαλείας των αντιδραστηρίων των κιτ και πληροφορίες για την ασφαλή απόρριψή τους διατίθενται από την Τεχνική 

Υπηρεσία του προµηθευτή. 

∆Ε∆ΟΜΕΝΑ ΑΠΟ∆ΟΣΗΣ 

Αναπαραγωγιµότητα 

Αναπαραγωγιµότητα εντός των gel 

∆είγµατα ΕΝΥ και ορού από τέσσερις ασθενείς εφαρµόστηκαν το καθένα και στα 18 ίχνη HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING από δύο 

παρτίδες (δύο ζεύγη µε ενδορραχιαία σύνθεση και δύο ζεύγη χωρίς ενδορραχιαία σύνθεση). 

Αναπαραγωγιµότητα µεταξύ παρτίδων και µεταξύ των gel 

Οκτώ ζεύγη ΕΝΥ και ορού εφαρµόστηκαν σε καθένα από δέκα gel HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING από την ίδια παρτίδα και σε δύο gel 

από άλλη παρτίδα (έξι ζεύγη µε ενδορραχιαία σύνθεση και δύο ζεύγη χωρίς ενδορραχιαία σύνθεση). 

Αποτελέσµατα : 

Με την οπτική εξέταση, σε όλες τις µελέτες αναπαραγωγιµότητας η ολιγοκλωνική ζώνη ταυτοποιήθηκε ορθά σε κάθε δείγµα και σε όλα 

τα gel µε τον αντιορό αντι-Ig G – PER και δεν υπήρξαν ψευδώς αρνητικά ή θετικά αποτελέσµατα και δεν παρατηρήθηκαν διαφορές µεταξύ 

των επαναλήψεων. 

Ακρίβεια - Ανίχνευση και ταυτοποίηση ολιγοκλωνικών ζωνών 

∆είγµατα ΕΝΥ και ορού από ασθενείς µε διάφορες νόσους του ΚΝΣ (n = 108) αναλύθηκαν µε το κιτ HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING και 

συγκρίσιµο εµπορικά διαθέσιµο σύστηµα ηλεκτροφόρησης µε ανοσοκαθήλωση για ανίχνευση ολιγοκλωνικών ζωνών Ig G. Τα προκύπτοντα 

ηλεκτροφορήµατα αξιολογήθηκαν οπτικά για την παρουσία ολιγοκλωνικών ζωνών Ig G. 

Υπήρξε γενική συµφωνία ως προς την ανίχνευση των ολιγοκλωνικών ζωνών µεταξύ των δύο δοκιµασιών. Οι λίγες διαφορές που 

παρατηρήθηκαν οφείλονταν στη µεγαλύτερη ευαισθησία της διαδικασίας HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING. Τα αποτελέσµατα ήταν 

σύµφωνα µε την κλινική διάγνωση, καθώς και µε το δείκτη ενδορραχιαίας σύνθεσης και το δείκτη βλάβης του αιµατοεγκεφαλικού 

φραγµού . 

Ευαισθησία 

Η ευαισθησία της διαδικασίας HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING έχει προσδιοριστεί µε σειριακές αραιώσεις µονοκλωνικής Ig G πρωτεΐνης, 

2 mg/dL. Το όριο ανίχνευσης µιας µονοκλωνικής ζώνης Ig G προσδιορίστηκε στα 0.031 mg/dL. 

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 
























1994, 397 pp. 













1994, 54 : 75-80. 



- 102 -


For en dansk version af dette pakningsvedlæg, henvend Dem til den danske distributør af produkter fra SEBIA : 

ILS ApS Gydevang 22A DK-3450 Allerød 

Tlf : +45 48 14 18 50 

Fax : +45 48 14 18 60 

e-mail : ils@ilsdk.dk 

- 103 - 

SEBIA INSTRUKTION - Dansk

2 


SCHÉMAS / FIGURES 

Figure 1 Figure 2 

1 2 3 4 567 8 9 10 11 121314 15 

Figure 3 

Figure 4 

Cache plastique 


1 1' 

2' 3 3' 4 4' 5 5' 6 6' 7 7' 8 8' 9 9' 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

Plastic mask 

Figure 5 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 

sebia 

- 104 -



Figure 6 

Barrette antisérum 

Antiserum Segment 

Bossage (Boss) 

Support barrette 

Segment Holder 

Ergot (Pin) 

Poignée (Flap) 

Encoche (notch) 

Puits (wells) 

Point d'appui central 

(Central Pressure Point) 

Ressorts (Springs) 

Demi réducteur de course 

IEF Length Reducing Device 

Guide du masque dynamique 

Dynamic Mask Guide 

Poignée (Flap) 

- 105 -




1 

1 

2 


GEL 9 CSF ISOFOCUSING 

2 2' 3' 3 ' 4 4' 5 5' 6 6' 7 7' 8 8' 9 9' 


DRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING 

1' 2 2' 3 3' 4 4' 5 5' 6 6' 7 7' 8 8' 9 9' 

DRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING 

1' 2 2' 3 3' 4 4' 5 5' 6 6' 7 7' 8 8' 9 9' 

- 106 -




Figure 15 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 

sebia 

16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 

sebia 

16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) 

sebia 

1 2 3 4 5 6 7 

HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) 

sebia 

1 2 3 4 5 6 7 

- 107 -


PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES / MIGRATION PATTERNS 

CSF 

Polyclonal 

1 

Serum 

Polyclonal 

Same 


Oligoclonal 

2 

Serum 

Polyclonal 

Different 


Oligoclonal 

3 

Serum 

Oligoclonal 

Different 


Oligoclonal 

4 

Serum 

Oligoclonal 

Same 

5 


Monoclonal 

Same 

Serum 

Monoclonal 

Type 1 : Profil normal 

Type 2 : Synthèse intrathécale d’Ig G (ex : Sclérose en Plaques) 

Type 3 : Synthèse intrathécale d’Ig G dans les maladies systémiques 

Type 4 : Inflammation systémique (profil en miroir avec bandes oligoclonales) 

Type 5 : Gammapathie monoclonale (profil en miroir avec bandes monoclonales) 

Type 1 : Normal pattern 

Type 2 : Intrathecal Ig G synthesis (ex : Multiple Sclerosis) 

Type 3 : Intrathecale Ig G synthesis in systemic disease 

Type 4 : Systemic inflammation (mirror pattern with oligoclonal pattern) 

Type 5 : Monoclonal gammopathy (mirror pattern with monoclonal bands) 

- 108 -

Benelux s.a. / n.v. 

Rue de la Fusée, 62 

Raketstraat, 62 

1130 Bruxelles / Brussel 

BELGIQUE / BELGIË 

GmbH 

Michael Henkel Straße 4-6 

36043 Fulda 

DEUTSCHLAND 

Hispania S.A. 

C/Sicilia, 394 

08025 Barcelona 

ESPAÑA 

Parc Technologique Léonard de Vinci 

Rue Léonard de Vinci 

CP 8010 Lisses 

91008 EVRY CEDEX - FRANCE 

ISO 13485 

Italia s.r.l. 

Via Antonio Meucci, 15/a 

Località Ponte a Ema 

50012 Bagno a Ripoli, Firenze 

ITALIA 

Inc. 

400-1705 Corporate Drive 

Norcross, Georgia 30093 

U.S.A.

HYDRAGEL 3 CSF ISOFOCUSING HYDRAGEL 9 CSF ISOFOCUSING

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?