HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) HYDRAGEL 15 PROTEIN(E) HYDRAGEL 30 PROTEIN(E)

HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) 

Ref. 4100 

HYDRAGEL 15 PROTEIN(E) 

Ref. 4120 

HYDRAGEL 30 PROTEIN(E) 

Ref. 4140 

2005/02

HYDRAGEL 7, 15 & 30 PROTEIN(E) - 2005/02 

UTILISATION 

L’HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) et l’HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 sont des gels d’agarose qui permettent la séparation en tampon alcalin (pH 9,2), 

des protéines du sérum humain et de l’urine, par électrophorèse dans le système semi-automatique HYDRASYS. Les protéines du sérum normal 

humain sont séparées en cinq fractions majeures. 

Le système HYDRASYS permet de réaliser toutes les séquences jusqu’à l’obtention du gel prêt pour l’analyse qualitative ou quantitative. Les protéines 

séparées sont colorées par une solution d’amidoschwarz et l’excès de colorant est éliminé en milieu acide. Les profils électrophorétiques sont 

analysés visuellement pour détecter les anomalies. La densitométrie donne une quantification relative précise de chaque zone individualisée. 

Chaque gel d’agarose est prévu pour l’analyse de : 

• 7 échantillons pour le kit HYDRAGEL 7 PROTEIN(E), 

• 15 échantillons pour le kit HYDRAGEL 15 PROTEIN(E), 

• 30 échantillons pour le kit HYDRAGEL 30 PROTEIN(E). 

À usage in vitro exclusivement. 

PRINCIPE DU TEST 1-16 

L’électrophorèse des protéines du sérum ou d’autres liquides biologiques humains est une analyse très utile en laboratoire d’analyses cliniques pour 

rechercher les modifications du profil protéique. Des techniques d’électrophorèse de zone ont été développées, sur différents supports, chacun 

donnant un fractionnement des protéines sériques en fonction de leur charge, dans un tampon de pH donné. L’agarose, d’utilisation très facile, a été 

choisi comme support. Il donne une séparation des constituants sériques humains en cinq fractions de mobilité différente : albumine, alpha-1 

globulines, alpha-2 globulines, bêta globulines et gamma globulines. Chaque zone contient un ou plusieurs constituants sériques. Le profil 

électrophorétique de l’urine ressemble à celui du sérum. Néanmoins, la présence et l’intensité relative des fractions dépendent fortement de la 

capacité de filtration des reins. 

RÉACTIFS FOURNIS DANS LES KITS HYDRAGEL 7, 15 ET 30 PROTEIN(E) 

COMPOSANTS RÉF. N° 4100 RÉF. N° 4120 RÉF. N° 4140 Gels d’agarose (prêts à l’emploi) 10 gels 10 gels 10 gels Mèches tamponnées (prêtes à l’emploi) 10 sachets de 2 10 sachets de 2 10 sachets de 2 Diluant colorant (solution concentrée) 1 fl. de 60 ml 1 fl. de 60 ml 1 fl. de 60 ml Colorant amidoschwarz (solution concentrée) 1 fl. de 20 ml 1 fl. de 20 ml 1 fl. de 20 ml Applicateurs (prêts à l’emploi) 1 boîte de 10 (7 dents) 1 boîte de 10 (15 dents) 2 boîtes de 10 (15 dents) 

| Papiers-filtres fins | 1 sachet de 10 | 1 sachet de 10 | 1 sachet de 10 | 

POUR DES RÉSULTATS OPTIMUMS 

Les éléments d’un même kit doivent être utilisés ensemble et selon les instructions de la notice. 

LIRE ATTENTIVEMENT LA NOTICE D’UTILISATION. 

1. GELS D’AGAROSE 

Préparation 

Les gels d’agarose sont prêts à l’emploi. Chaque gel contient : agarose, 8 g/l ; tampon tris-barbital, pH 9,2 ± 0,1 ; composants sans danger aux 

concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. 

ATTENTION : Les gels contiennent 0,31 % de barbital et 0,34 % de barbital sodé. Ne pas avaler ! En cas d’ingestion, consulter 

immédiatement un médecin ! 

Utilisation 

Support pour l’électrophorèse des protéines. 

Conservation, stabilité et signes de détérioration 

Les gels doivent être conservés à température ambiante (de 15 à 30 °C) ou au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Ils sont stables jusqu’à la date d’expiration 

indiquée sur le kit ou sur le sachet du gel. Les gels doivent être conservés horizontalement dans leur sachet de protection (la flèche sur le devant du 

kit doit être pointée vers le haut). Ne pas stocker les gels à proximité d’une fenêtre ou d’une source de chaleur. Éviter toute variation brutale de 

température. 

NE PAS CONGELER. 

Éliminer le gel dans les cas suivants : 

(I) apparition de cristaux, de précipité en surface du gel ou texture du gel très molle (indiquant que le gel a gelé) ; 

(II) apparition de bactéries ou de moisissures ; 

(III) présence anormale de liquide dans la boîte du gel (indiquant une exsudation du gel liée à de mauvaises conditions de conservation). 

2. MÈCHES TAMPONNÉES 

Préparation 

Les mèches en éponge tamponnées sont prêtes à l’emploi. Chaque mèche tamponnée contient : tampon tris-barbital, pH 9,2 ± 0,3 ; azoture de 

sodium ; composants sans danger aux concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. 

ATTENTION : Les mèches tamponnées contiennent 0,92 % de barbital, 1,03 % de barbital sodé et 0,3 % d’azoture de sodium. Ne pas avaler ! 

En cas d’ingestion, consulter immédiatement un médecin ! L’azoture de sodium peut former des complexes explosifs ou toxiques en cas 

de contact avec des acides, du plomb ou du cuivre. Au moment de l’élimination des mèches, éviter tout contact avec ces produits. 

Utilisation 

Les mèches en éponge tamponnées jouent un rôle de réservoir de tampon pour l’électrophorèse et assurent le contact entre le gel et les électrodes. 

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NOTICE D’UTILISATION SEBIA - Français



Les mèches tamponnées peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur. 

Elles doivent être conservées horizontalement dans leur sachet de protection (la flèche sur le devant du kit doit être pointée vers le haut). 

Elles sont stables jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur le sachet des mèches tamponnées. NE PAS CONGELER. 

Éliminer les mèches tamponnées si le sachet est ouvert ou si les mèches sont sèches. 

3. DILUANT COLORANT 

Préparation 

Le diluant colorant concentré doit être utilisé comme décrit dans le paragraphe " COLORANT AMIDOSCHWARZ ". Il contient une solution acide. 

Utilisation 

Pour la préparation du colorant amidoschwarz. 


Le diluant colorant concentré peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le 

kit ou sur l’étiquette du flacon de diluant. NE PAS CONGELER. 

Ne pas ajouter d’azoture de sodium. 

4. COLORANT AMIDOSCHWARZ 

Préparation 

Le colorant amidoschwarz concentré est une solution visqueuse qui peut éventuellement gélifier, ce qui n’affecte absolument pas la qualité de la 

solution finale et son pouvoir de coloration. 

Dans tous les cas, pour obtenir une parfaite reconstitution du colorant, il faut respecter le protocole suivant : 

1. Ajouter environ 15 mL de diluant colorant au flacon d’amidoschwarz concentré. 

2. Refermer soigneusement le flacon. 

3. Agiter très vigoureusement le flacon pendant au minimum 5 secondes. 

4. Verser la solution obtenue dans le récipient de préparation de la solution de coloration. 

5. Renouveler cette opération deux fois, trois fois, si nécessaire. 

6. Verser le reste du diluant dans le récipient de préparation de la solution de coloration. 

7. Compléter à 300 mL avec de l’eau distillée ou déminéralisée. 

8. Agiter parfaitement cette solution pendant 5 à 10 minutes. 

Le colorant est prêt à l’emploi. 

REMARQUE : Une reprise incomplète du colorant peut entraîner une mauvaise coloration de la fraction albumine (baisse du pourcentage ou trou 

blanc dans la fraction). 

Après dilution, la solution colorante contient : solution acide pH ≈ 2 ; amidoschwarz, 4 g/L ; éthylène-glycol, 6,7 % ; composants sans danger aux 

concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. 

ATTENTION : Nocif en cas d’ingestion. 

Utilisation 

Pour la coloration des gels après séparation électrophorétique des protéines. 

IMPORTANT : Le colorant est uniquement destiné à la coloration de 10 gels. Renouveler le colorant après 10 utilisations. 


Les solutions de colorant concentrée et diluée peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés pour éviter 

l’évaporation. La solution concentrée est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de colorant. 

La solution diluée est stable pendant 1 mois. 

Ne pas stocker la solution de colorant diluée à proximité d’une source de chaleur. 

5. APPLICATEURS 

Utilisation 

Applicateurs prédécoupés, à usage unique pour le dépôt des échantillons. 

Conservation 

Les applicateurs doivent être conservés dans un endroit sec à température ambiante ou au réfrigérateur. 

6. PAPIERS-FILTRES FINS 

Utilisation 

Feuilles de papier-filtre, à usage unique pour l’absorption de l’excès de liquide à la surface du gel avant l’application des échantillons. 

Conservation 

Les papiers-filtres fins doivent être conservés dans un endroit sec à température ambiante ou au réfrigérateur. 

RÉACTIFS NÉCESSAIRES 

1. DÉCOLORANT 

Préparation 

Chaque flacon de décolorant concentré (SEBIA, référence N° 4540 : 10 flacons de 100 ml chacun) doit être dilué au 1/1 000 avec de l’eau distillée 

ou déminéralisée, il permet d'obtenir 100 litres de solution décolorante. Prélever par quantité de 5 ml et compléter à 5 litres avec de l’eau distillée ou 

déminéralisée. 

Après dilution, la solution décolorante contient : acide citrique, 0,5 g/l. 

Utilisation 

Pour la décoloration, c’est-à-dire l’élimination de l’excès de colorant après coloration du gel. 

Pour le rinçage de la cuve de coloration après lavage. 

Pour neutraliser l’acidité du décolorant, mettre dans le flacon de vidange vide, 15 ml de soude à 50 % (solution du commerce). 

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Le décolorant concentré peut être conservé à température ambiante ou au réfrigérateur. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou 

sur l’étiquette du flacon de décolorant. NE PAS CONGELER. Le décolorant dilué est stable pendant 1 semaine à température ambiante, en flacon 

fermé. 

Éliminer le décolorant dilué s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne. 

Ne pas ajouter d’azoture de sodium. 

En cas de conservation prolongée (au delà d’une semaine) de la solution diluée, ajouter 50 µl/l de ProClin 300 pour prévenir toute prolifération microbienne. 

Le décolorant dilué contenant du ProClin est stable en flacon fermé à température ambiante ou au réfrigérateur jusqu’à la date d’expiration indiquée 

sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de décolorant. 

2. SOLUTION DE LAVAGE HYDRASYS 

Préparation 

Chaque flacon de solution de lavage HYDRASYS concentrée (SEBIA, référence N° 4541 : 10 flacons de 80 ml chacun) doit être complété à 5 litres 

avec de l’eau distillée ou déminéralisée. 

Après dilution, la solution de lavage contient : tampon alcalin, pH 8,8 ± 0,3 ; azoture de sodium. 

ATTENTION : La solution de lavage concentrée contient 0,625 % d'azoture de sodium. Ne pas avaler ! En cas d’ingestion, consulter 

immédiatement un médecin ! L'azoture de sodium peut former des complexes explosifs ou toxiques en cas de contact avec des acides, du 

plomb ou du cuivre. Au moment de l’élimination des solutions, laver abondamment avec une grande quantité d’eau. 

Utilisation 

Pour le lavage périodique de la cuve de coloration de l’HYDRASYS : Par exemple, pour une utilisation journalière, effectuer un lavage hebdomadaire 

de la cuve de coloration. 

Voir la notice de la solution de lavage pour les instructions d’utilisation. 


Les solutions de lavage concentrée et diluée peuvent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés. Elles sont stables 

jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de solution de lavage. 

Éliminer la solution de lavage diluée s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne. 

3. FLUIDIL 

Préparation 

Le Fluidil (SEBIA, référence N° 4587 : 1 flacon de 5 ml) est prêt à l’emploi. 

Utilisation 

Pour la dilution des échantillons visqueux ou troubles (turbidité induite par la présence d’une cryoglobuline ou d’un cryogel). 


Le Fluidil peut être conservé à température ambiante. Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur l’étiquette du flacon de Fluidil. 

Il ne doit pas y avoir de précipité. 

ÉQUIPEMENT ET ACCESSOIRES NÉCESSAIRES 

1. Système HYDRASYS SEBIA, référence N° 1210 ou N° 1211. 

2. Micropipetteur, manuel ou automatique, tel que HYDRAplus SEBIA, référence N° 1215, pour le chargement des applicateurs. 

3. Chambre humide, référence N° 1270, fournie avec le système HYDRASYS. 

4. Bidons plastiques fournis avec le système HYDRASYS. 

5. Pipettes de 10 µl et 200 µl. 

6. Densitomètre / scanner capable de lire un film de 82 x 51 mm ou 82 x 102 mm à 570 nm (filtre jaune) : HYRYS SEBIA, DVSE SEBIA ou scanner 

équipé du logiciel PHORESIS SEBIA. Se reporter aux instructions de chaque appareil pour son utilisation et sa calibration. 

7. Porte-film pour le traitement des demi-gels SEBIA, référence N° 10043110. 

ÉCHANTILLONS À ANALYSER 

Prélèvement et conservation des échantillons 

L’analyse se fait sur échantillons frais. Les sérums ou les urines doivent être prélevés selon la procédure utilisée pour tout test de laboratoire 

d’analyses cliniques. 

Les échantillons peuvent être conservés une semaine au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Pour des conservations prolongées, congeler les échantillons ; 

les échantillons congelés sont stables au minimum 1 mois. 

La conservation des sérums congelés est améliorée par addition à l’échantillon d’azoture de sodium 0,2 g/l. 

La conservation des urines congelées est améliorée par addition à l’échantillon de tampon HEPES 0,1 M (pH 6,75) et d’azoture de sodium 0,2 g/l. 

IMPORTANT : Ne pas utiliser de conservateur contenant de l’acide borique. 

Les échantillons décongelés peuvent donner, au point de dépôt, une trace due à la dénaturation de protéines ou de lipoprotéines. 

Plus le sérum vieillit, plus les bêta lipoprotéines sont anodiques. De même, après congélation, les bêta lipoprotéines sont beaucoup plus anodiques 

que sur sérums frais : leur migration varie de la zone bêta à la zone alpha-2 voire alpha-1. 

Préparation des échantillons 

1. Sérums 

Utiliser directement les échantillons de sérum non dilués. 

Après conservation au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C) ou congélation, certains sérums (en particulier ceux qui contiennent une cryoglobuline ou un 

cryogel) deviennent visqueux ou troubles. Ces sérums présentent des difficultés de manipulation lors du dépôt avec l’applicateur HYDRASYS, car 

ils ne diffusent que très difficilement sur les dents de l’applicateur. Prétraiter ces sérums avec le Fluidil : ajouter 25 µl de Fluidil à 75 µl de sérum, 

agiter 15 secondes au vortex, puis suivre la technique. 

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2. Urines concentrées 

L’analyse est réalisée sur des échantillons dont la concentration protéique est ramenée à environ 15 - 20 g/l par concentration au moyen d’un 

dispositif approprié. 

IMPORTANT : Certaines urines contiennent une concentration importante de sels. Il s’ensuit une déformation du gel au cours de la migration qui 

risque de conduire à une perturbation des profils après électrophorèse. Il convient d’éliminer cet excès de sels par une dialyse. 

NOTE : En cas d’urines troubles (concentrées ou non), il est recommandé d’éliminer les particules en centrifugeant les échantillons (pendant 

10 minutes à 3000 rpm) ou par filtration (sur filtre de 0,45 µm) afin d’obtenir une bonne diffusion sur les applicateurs. 

Échantillons à éviter 

• Ne pas utiliser d’échantillon hémolysé. L’hémolyse entraîne une augmentation des zones alpha-2 et bêta. 

• Ne pas utiliser de plasma. Le fibrinogène donne une bande proche du point de dépôt. Cette bande peut fausser l’interprétation du test (confusion 

avec une gammapathie et augmentation du pourcentage de la fraction correspondante). 

• Ne pas utiliser les échantillons d’urine anciens ou conservés dans de mauvaises conditions, des dégradations enzymatiques peuvent les altérer. 

TECHNIQUE 

Le système HYDRASYS est un instrument multiparamétrique semi-automatique qui assure le traitement des HYDRAGEL selon les étapes suivantes : 

application des échantillons, migration électrophorétique, séchage, coloration, décoloration et séchage final. 

Les étapes manuelles sont les suivantes : préparation des échantillons et du gel, lancement des séquences automatiques. 

LIRE ATTENTIVEMENT LE MANUEL D’INSTRUCTIONS D’HYDRASYS. 

I. PRÉPARATION DE LA MIGRATION 

1. Mettre HYDRASYS sous tension. 

2. Poser un applicateur pour HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) (7 échantillons) et HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 (15 échantillons), ou deux 

applicateurs pour HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 (30 échantillons), à plat sur la paillasse, numérotations (puits) vers le haut (Fig. 1). 

- Déposer 10 µl de sérum pur ou d’urine concentrée dans chaque puits ; le chargement de chaque applicateur ne doit pas excéder 2 minutes. 

- Placer l’(es) applicateur(s) dans la chambre humide, dents vers le haut (en manipulant l’(es) applicateur(s) par la protection en plastique). 

Laisser diffuser 5 minutes après le dépôt du dernier échantillon. Pour une conservation prolongée (8 heures maximum), placer la chambre 

humide au réfrigérateur. 

Voir la notice de la chambre humide pour les instructions d’utilisation. 

3. Ouvrir le capot du module de migration et relever les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes. 

ATTENTION : Ne pas fermer le capot de l’appareil si les chariots sont relevés ! 

4. Sélectionner le programme de migration «7 PROTEIN(E)» pour HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) ou «15/30 PROTEIN(E)» pour HYDRAGEL 

PROTEIN(E) 15/30 dans le menu. 

5. Sortir les mèches tamponnées de leur emballage en les manipulant par les languettes plastiques. Fixer les mèches sur le chariot porteélectrodes 

à l'aide des languettes perforées. La face de la mèche fixée sur la languette vient en contact avec l'électrode (Fig. 2). 

6. Sortir le gel de son emballage. 

- Éliminer rapidement l’excès de liquide en surface, en effleurant le gel avec un papier-filtre fin. 

ATTENTION : Ne surtout pas laisser le papier-filtre en contact prolongé avec le gel pour éviter sa déshydratation. 

- Déposer 120 µl d'eau distillée ou déminéralisée pour HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) ou 200 µl pour HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30, sur le 

plateau de migration dans le tiers inférieur du cadre sérigraphié. 

- Placer le gel (face gel orientée vers le haut) sur le plateau contre la barrette, à l'intérieur du cadre sérigraphié (Fig. 3). 

- Donner une forme concave au gel (Fig. 3) et le dérouler sur le plateau jusqu'au contact de la goutte d'eau qui doit se répartir sur toute la 

largeur du gel. Relever légèrement le gel pour éliminer les bulles d'air éventuellement piégées puis dérouler totalement le gel au contact du 

plateau. La goutte d’eau doit s’étaler sous toute la surface du film. 

7. Abaisser l'ensemble des chariots jusqu'en butée. Dans cette position, les mèches ne touchent pas le gel. NE PAS FORCER LA DESCENTE 

DES CHARIOTS. 

8. Sortir l’(es) applicateur(s) de la chambre humide en le(s) manipulant par la protection plastique. 

- Éliminer la protection des dents. 

- Pour l’analyse de 7 et de 15 échantillons, placer l'applicateur en position N° 6 sur le porte-applicateurs. 

- Pour l’analyse de 30 échantillons, placer les applicateurs en positions N° 3 et 9 sur le porte-applicateurs. 

IMPORTANT : Les numérotations de l'applicateur sont toujours dirigées vers l'opérateur (Fig. 4). 

9. Fermer le capot du module de migration. 

10. Démarrer immédiatement la séquence en appuyant sur «START» (flèche verte à gauche du clavier). 

IMPORTANT : Ne rien placer à proximité immédiate de la grille de ventilation (à droite de l'appareil) 

MIGRATION - DESCRIPTION DES SÉQUENCES AUTOMATIQUES 

• Descente des chariots porte-électrodes et porte-applicateurs pour amener les mèches tamponnées et l’(es) applicateur(s) au contact du gel. 

• Remontée du chariot porte-applicateurs. 

• Migration à 10 W constants pour HYDRAGEL 7 PROTEIN(E), ou à 20 W constants pour HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30, à 20 °C, température 

contrôlée par effet Peltier, jusqu’à 33 Vh accumulés (pendant environ 7 minutes). 

• Déconnexion des électrodes par remontée du chariot porte-électrodes. 

• Séchage du film pendant 10 minutes à 65 °C, par montée en température du plateau. 

• Refroidissement du plateau, quand la température du plateau atteint 50 °C, un signal sonore (bip) retentit et la sécurité du capot du module de 

migration se débloque. Le plateau reste à 50 °C jusqu'à l'ouverture du capot. Après ouverture, la température baisse jusqu’à 20 °C (en moins de 

5 minutes). Une nouvelle migration peut alors être lancée. 

NOTE : Pendant toutes les séquences de migration, le capot du module de migration reste verrouillé. 

II. PRÉPARATION DES SÉQUENCES DE TRAITEMENT DU GEL 

1. Ouvrir le capot du module de migration. 

2. Retirer l’(es) applicateur(s) et le(s) jeter. 

3. Relever les chariots porte-applicateurs et porte-électrodes, retirer les mèches par les languettes et les jeter. 

4. Récupérer le film pour le traitement suivant. 

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5. Nettoyer les électrodes et le plateau de migration avec un papier ouaté humide. 

6. Placer le film sur le porte-film, face gel vers l'opérateur, en procédant comme suit (Fig. 5) : 

- ouvrir le porte-film ; 

- le poser à plat sur la paillasse ; 

- positionner le gel dans les gorges des colonnettes ; 

- refermer le porte-film ; 

- s'assurer que le film soit bien enfoncé dans les gorges des deux colonnettes. 

7. Introduire le porte-film dans le module de traitement / coloration du gel. 

IMPORTANT : Avant de lancer un cycle de coloration, s'assurer que : 

- le flacon de colorant contienne 300 ml de colorant ; 

- le flacon de décolorant contienne 1 litre de décolorant minimum ; 

- le flacon de vidange soit vide. 

Pour le branchement des canaux réactifs : se référer aux instructions affichées sur l’écran de l’appareil (sélectionner la touche : VISU 

CANAUX). 

IMPORTANT : Ne pas oublier d’obturer les canaux non utilisés. 

8. Sélectionner le programme de coloration «PROT./B1-B2/Hb» dans le menu. 

- Démarrer la séquence en appuyant sur «START» (flèche verte à droite du clavier). 

Pendant toutes les séquences de coloration, décoloration et séchage, le système reste verrouillé. 

Après refroidissement de la cuve, un signal sonore (bip) retentit et le système se débloque (la ventilation se maintient jusqu’à la récupération 

du porte-film). 

III. FIN DU TRAITEMENT DU GEL 

1. Sortir le porte-film du compartiment ; ouvrir le porte-film et retirer le gel sec. 

NOTE : Si des taches bleues résiduelles sont observées sur le gel après coloration / décoloration, une étape de lavage supplémentaire avec le 

programme " LAV. ISOENZ/GEL " permet de les éliminer ou de les atténuer fortement (selon leur intensité) avant lecture au densitomètre / 

scanner. 

2. Si nécessaire, nettoyer le dos du gel (support plastique) avec un papier ouaté humide. 

3. Lire au densitomètre / scanner à 570 nm ou avec un filtre jaune. 

NOTE : Pour les gels à rangées multiples (2 ou 3), les longueurs de migration peuvent être sensiblement différentes, sans aucune conséquence 

sur les résultats. 

RÉSULTATS 

Contrôle Qualité 

Pour chaque série d’analyses, il est recommandé d’inclure un sérum de contrôle (tel que le Sérum de Contrôle SEBIA, référence N° 4785). 

Valeurs 

La lecture à 570 nm par densitométrie permet de définir les concentrations relatives (pourcentages) de chaque fraction. 

Les valeurs normales (moyenne ± 2 écarts types) pour chaque fraction sérique sur gel HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30, ont été établies à partir d’une 

population de 158 adultes (hommes et femmes), en bonne santé. 

La quantification des protéines en UV sur CAPILLARYS donne des valeurs similaires à la néphélémétrie (en particulier pour l’albumine). SEBIA 

propose donc une standardisation des valeurs obtenues sur HYDRAGEL en réalisant une calibration des systèmes de lecture. 

Valeurs sans standardisation Valeurs standardisées sur CAPILLARYS 

FRACTION HYRYS - DVSE - PHORESIS HYRYS - DVSE - PHORESIS Albumine 59,8 - 72,4 % 53,8 - 65,2 % Alpha-1 globulines 1,0 - 3,2 % 1,1 - 3,7 % Alpha-2 globulines 7,4 - 12,6 % 8,5 - 14,5 % Bêta globulines 7,5 - 12,9 % 8,6 - 14,8 % 

| Gamma globulines | 8,0 - 15,8 % | 9,2 - 18,2 % | 

Il est recommandé à chaque laboratoire d’établir ses propres valeurs normales. 

Interprétation 1-16 

Sur certains échantillons, la zone alpha-2 peut présenter un léger dédoublement selon l’intensité et la mobilité des fractions qui la composent, voir 

PROFIL ÉLECTROPHORÉTIQUE. 

• Certains sérums ont des phénotypes différents d’haptoglobine ou de GC globuline. 

• La position de l’alpha-1 lipoprotéine dépend de sa concentration et de la conservation de l’échantillon. 

Pour des informations complémentaires sur l'interprétation des profils électrophorétiques obtenus, voir BIBLIOGRAPHIE. 

Interférences et limites 

Voir ÉCHANTILLONS À ANALYSER. 

Compte-tenu des principes analytiques des techniques actuelles (principes de l’électrophorèse de zone, résolution et sensibilité), aucune garantie ne 

peut être donnée quant à la détection totale de toutes les composantes monoclonales. 

Assistance technique 

Contacter le Service Technique SEBIA en cas de test défectueux. 

Les fiches de données de sécurité des différents réactifs du kit ainsi que les informations relatives à l’élimination des déchets sont disponibles auprès 

du Service Technique SEBIA. 

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PERFORMANCES 

Analyse des sérums 

Reproductibilité intra-essai 

Migration de trois (3) échantillons différents de sérum sur 3 gels HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 d’un même lot. Les moyennes, écarts types (ET) et 

coefficients de variation (CV%) (n = 15) sont calculés pour chaque échantillon et chaque fraction. 

Le tableau suivant présente les résultats obtenus pour les 3 échantillons : 

FRACTION MOYENNE (%) ET CV (%) Sérum 1 2 3 1 2 3 1 2 3 Albumine 70,4 68,8 65,9 0,2 0,7 0,6 0,3 1,0 0,9 Alpha-1 1,9 1,9 1,3 0,1 0,1 0,1 3,5 3,9 7,3 Alpha-2 9,9 9,4 7,6 0,2 0,2 0,2 1,6 2,6 2,4 Bêta 10,6 8,6 7,8 0,4 0,3 0,1 3,3 3,5 1,8 

| Gamma | 7,2 11,4 17,4 | 0,2 0,3 0,3 | 3,4 2,8 2,0 | 

Reproductibilité inter-essais 

Migration de quinze (15) échantillons différents de sérum sur 5 gels HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 d’un même lot. Les coefficients de variation 

moyens (CV), écarts types (ET) et coefficients de variation (n = 5) sont calculés pour chaque échantillon et chaque fraction. 

Les résultats sont sensiblement les mêmes pour tous les échantillons. 

Le tableau suivant présente les valeurs extrêmes d’écart type et de coefficient de variation représentant tous les échantillons et un coefficient de 

variation moyen calculé à partir de l’ensemble de tous les coefficients de variation de tous les échantillons (n = 15). 

FRACTION ET CV (%) CV MOYEN (%) Albumine 0,2 – 0,9 0,3 – 1,4 0,8 Alpha-1 0,1 – 0,2 2,1 – 9,8 4,6 Alpha-2 0,1 – 0,3 0,9 – 3,1 1,8 Bêta 0,1 – 0,3 1,1 – 3,8 2,0 

| Gamma | 0,1 – 0,5 | 1,3 – 5,6 | 2,9 | 

Exactitude 

Migration de quatre vingt dix échantillons différents (sérums normaux et pathologiques) sur gels HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 et sur un autre 

système d’agarose disponible dans le commerce. 

Les paramètres de corrélation entre les deux systèmes de gel (y-HYDRAGEL) pour chaque fraction sont : 

Fraction Coefficient de corrélation Intersection-y Pente Limites des valeurs de %* Albumine 0,983 3,673 0,942 54,9 - 72,9 Alpha-1 0,984 0,937 0,972 1,2 - 6,7 Alpha-2 0,984 0,635 0,977 7,6 - 16,5 Bêta 0,953 -0,071 0,984 6,9 - 15,0 

| Gamma | 0,976 | -0,435 | 1,033 | 6,0 - 18,9 | 

* Les valeurs sont définies dans le système HYDRAGEL 15 & 30 PROTEIN(E). 

Sensibilité 

Un sérum pathologique avec une protéine monoclonale à 21,2 g/l est dilué en série puis les dilutions sont analysées sur gel HYDRAGEL PROTEIN(E) 

15/30. Après analyse qualitative à l’œil nu, la plus forte dilution permettant de voir la bande monoclonale est le 1/128. La plus faible concentration 

d’une bande monoclonale détectée est donc de l’ordre de 0,17 g/l. 

NOTE : Selon la position de la bande monoclonale et le fond polyclonal de la zone des gammaglobulines, le seuil de détection d’une paraprotéine 

peut varier. 

Analyse des urines concentrées 

Les résultats obtenus sur gel HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 après analyse quantitative et qualitative indiquent une très bonne répétabilité et 

reproductibilité des kits HYDRAGEL 15 & 30 PROTEIN(E) pour tous les aspects testés. L’analyse qualitative de 28 échantillons différents par 

électrophorèse sur gel HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 et sur un autre système en gel d’agarose disponible dans le commerce montre une parfaite 

corrélation entre les deux systèmes d’analyse. La sensibilité de la technique HYDRAGEL 15 & 30 PROTEIN(E) pour l’analyse d’urine concentrée est 

telle que la limite de détection d’une paraprotéine urinaire est de l’ordre de 0,48 g/l. 

BIBLIOGRAPHIE 

(1) Brouet J.C. Les cryoglobulinémies. La Presse Médicale, 1983, 12, p. 2991 à 2996. 

(2) Brouet J.C. Orientation diagnostiquée en cas d’anomalies des immunoglobulines plasmatiques (Ig E exclues). La Revue du Praticien, n° 9, 

21/03/91, p. 782 à 785. 

(3) Garnier J.P., Laurent D., Clauvel J.P., Danon F., Bousquet B., Dreux C. Dosages des protéines sériques : cause d’erreur en cas 

d’immunoglobuline monoclonale. Act. Pharm. Biol. Clin., 1987, 4, p. 275 à 278. 

(4) Guinan J.E.C., Kenny D.F., Gatenby P.A. Detection and typing of paraproteins : comparison of different methods in a routine diagnostic laboratory. 

Pathology, 1989, 21, p. 35 à 41. 

(5) Keren D. F., “High Resolution Electrophoresis and Immunofixation Techniques and Interpretation”, Butterworth-Heinemann, Woburn, Ma, USA, 

2nd ed., 1994, 397 pp. 

- 6 -


(6) Le Carrer D. Gammapathies monoclonales : mise au point sur leur exploration biochimique en 1991 - Première partie : Les techniques de 

diagnostic protéinologique, principes et limites. L’Eurobiologiste, 1991, Tome XXV, n° 194, p. 203 à 212. 

(7) Le Carrer D. Gammapathies monoclonales : mise au point sur leur exploration biochimique en 1991 - Seconde partie : Diagnostic protéinologique 

du myélome, de la maladie de Waldenström et des autres gammapathies monoclonales. L’Eurobiologiste, 1991,Tome XXV, n° 195, p. 283 à 285. 

(8) Le Carrer D. Intérêt du profil protéique, cible immunitaire en biologie clinique. Revue Française des Laboratoires, 1993. 

(9) Le Carrer D. Électrophorèse et Immunofixation des Protéines Sériques, Interprétations illustrées. Laboratoires SEBIA, 1994, 120 pp, Ed. Hatier 

- Paris. 

(10) Le Carrer D. L’interprétation de l’électrophorèse des protéines. L’Eurobiologiste, 1989 - Tome XXIII, n° 182, p. 27 à 33. 

(11) North M.L. Détection et caractérisation d’une immunoglobuline monoclonale. Revue Française des Laboratoires, Mars 1990, n° 203, p. 54 à 58. 

(12) Peltre G. Électrophorèse, les trois principes de base. Technique et Biologie, 1990, 1, p. 16 à 23. 

(13) Sicard D. Du bon usage de l’électrophorèse des protéines. Le Concours Médical, 05.05.90, 1990, 112, 16, p. 1513 à 1515. 

(14) Van Den Abelle. Électrophorèse des protéines sériques. Intérêt, limites, apport du profil protéique. Larc Medical, 1987, n° 7, Vol VI, p. 348 à 351. 

(15) Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité. 

Impact-Internat, Septembre 1986. 

(16) Wicher J.T., Spence C.E. Serum protein electrophoresis - An out moded test. Ann. Clin. Biochem., 1987, 24, p. 133 à 139. 

PROFIL ÉLECTROPHORÉTIQUE 

Détail de la zone alpha-2 : 

+ 

Albumine 

Orosomucoïde 

α1-Antitrypsine 

α1-Antichymotrypsine 

Ceruloplasmine 

GC Globuline 

α2 Macroglobuline 

Haptoglobine 

α Lipoprotéine 

Transferrine 

Hémopexine 

Plasminogène 

Fibronectine 

Complément C3 

β Lipoprotéine 

γ Globulines 

G - A - M - D - E 

- 

2 (± 5) 2 (± 5) 

1 + 2 + 3 + 4 + 5 1 + 2 + 3 + 4 (± 5) 1 + 3 + 4 (± 5) 

A B C 

1 = α2 Macroglobuline 

2 = Haptoglobine 

3 = Ceruloplasmine 

4 = GC Globuline 

5 = α1 Lipoprotéine 

- 7 -


INTENDED USE 

The HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) and HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 gels are intended for separation of human serum proteins in human serum and 

urine by electrophoresis on alkaline buffered (pH 9.2) agarose gels. By design, the normal human serum proteins separate into five major fractions. 

The kits are used in conjunction with the semi-automated HYDRASYS instrument. The separated proteins are stained with amidoblack. The 

electrophoregrams are evaluated visually for pattern abnormalities. Densitometry provides accurate relative quantification of induividual zones. 

Each agarose gel is intended to run: 

• 7 samples in the HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) kit, 

• 15 samples in the HYDRAGEL 15 PROTEIN(E) kit, 

• 30 samples in the HYDRAGEL 30 PROTEIN(E). 

For In Vitro Diagnostic Use. 

PRINCIPLE OF THE TEST 1-15 

Protein electrophoresis is a well established technique routinely used in clinical laboratories for screening of serum and some other fluids for protein 

abnormalities. It is based on the principles of zone electrophoresis performed on a suitable support medium. Agarose has been developed into a 

versatile and effective support medium. For routine diagnostic applications, serum proteins separate into five major fractions, primarily according to 

their charge at a given pH: albumin, alpha-1 globulins, alpha-2 globulins, beta globulins and gamma globulins. Each zone contains one or more serum 

proteins. The urine protein pattern resemble those of serum. However, the relative intesities of the feractions or their presence may vary greatly 

depending on the filtration capability of the kidney. 

REAGENTS AND MATERIALS SUPPLIED IN THE HYDRAGEL 7, 15 AND 30 PROTEIN(E) KITS 

ITEMS PN 4100 PN 4120 PN 4140 Agarose Gels (ready to use) 10 gels 10 gels 10 gels Buffered Strips (ready to use) 10 packs of 2 each 10 packs of 2 each 10 packs of 2 each Staining solution diluent (stock solution) 1 vial, 60 mL 1 vial, 60 mL 1 vial, 60 mL Amidoblack Stain (stock solution) 1 vial, 20 mL 1 vial, 20 mL 1 vial, 20 mL Applicators (ready to use) 1 pack of 10 (7 teeth) 1 pack of 10 (15 teeth) 2 packs of 10 (15 teeth) 

| Filter Papers | 1 pack of 10 | 1 pack of 10 | 1 pack of 10 | 

FOR OPTIMAL RESULTS 

All reagents from the same kit must be always used together and according to the package insert instructions. 

PLEASE READ THE PACKAGE INSERT CAREFULLY. 

1. AGAROSE GELS 

Preparation 

Agarose gels are ready to use. Each gel contains: agarose, 0.8 g/dL ; tris-barbital buffer pH 9.2 ± 0.1 ; additives, nonhazardous at concentrations 

used, necessary for optimum performance. 

WARNING: Agarose gels contain 0.31 % barbital and 0.34 % sodium barbital. Do not ingest ! If ingested, consult physician immediately ! 

Use 

Support medium for protein electrophoresis. 

Storage, stability and signs of deterioration 

Store the gels horizontally in the original protective packaging at room temperature (15 to 30 °C) or refrigerated (2 to 8 °C). They are stable until the 

expiration date indicated on the kit package and the gel package labels. (The arrow on the front of the kit box must be pointing upwards). Avoid storage 

close to a window or to a heat source. Avoid important variation of temperature during storage. 

DO NOT FREEZE. 

Discard when: 

(i) crystals or precipitate form on the gel surface or the gel texture becomes very soft (all these result from freezing the gel) ; 

(ii) bacterial or mold growth is indicated ; 

(iii) abnormal quantity of liquid is present in the gel box (as a result of buffer exudation from the gel due to improper storage conditions). 

2. BUFFERED STRIPS 

Preparation 

Buffered sponge strips are ready to use. Each contains: tris-barbital buffer pH 9,2 ± 0.3 ; sodium azide ; additives, nonhazardous at concentrations 

used, necessary for optimum performance. 

WARNING: The buffer in the strips contains 0.92 % barbital, 1.03 % sodium barbital and 0.30 % sodium azide. Do not ingest ! If ingested 

consult physician immediately ! When disposing, prevent contact with acids, lead or copper, as these are known to form explosive or toxic 

compounds with sodium azide. 

Use 

Buffered strips function as electrophoresis buffer reservoir and ensure contact between the gel and electrodes. 


Store the buffered strips horizontally in the original protective packaging at room temperature or refrigerated. (The arrow on the front of the kit box 

must be pointing upwards). 

They are stable until the expiration date indicated on the kit package or buffered strips package label. 

DO NOT FREEZE. 

Discard buffered strips if the package is opened and the strips dry out. 

- 8 - 

SEBIA INSTRUCTIONS - English


3. STAINING SOLUTION DILUENT 

Preparation 

The stock staining solution diluent must be used as described in paragraph " AMIDOBLACK STAIN ". 

It contains an acidic solution. 

Use 

For the preparation of the amidoblack staining solution. 


Store the stock staining solution diluent at room temperature or refrigerated. It is stable until the expiration date indicated on the kit package or staining 

solution diluent vial labels. DO NOT FREEZE. 

Do not add any sodium azide. 

4. AMIDOBLACK STAIN 

Preparation 

The amidoblack concentrated stain is a visquous solution which may gelify. The integrity of the stock staining solution is not altered by the increase in 

viscosity or solidification. 

In all cases, to obtain a perfect reconstitution of the stain, we advise you to respect the following procedure: 

1. Add 15 mL of stain diluent to the concentrated amidoblack vial. 

2. Close carefully the vial. 

3. Shake very vigorously the vial during approximately 5 seconds. 

4. Pour this solution in the container for staining solution processing. 

5. Repeat this step twice, three times if necessary. 

6. Pour the remaining diluent in the container and complete the volume to 300 mL with distilled or deionized water. 

7. Mix contents of stain cubitainer well for 5 to 10 minutes. 

The staining solution is ready to use. 

NOTE : An incomplete reconstitution of the stain will lead to an under-evaluation of albumin fraction (low percentage or white hole inside the fraction). 

After dilution, the working staining solution contains: acid solution pH ≈ 2 ; amidoblack, 0.4 g/dL ; ethylene-glycol, 6.7 % ; additives, nonhazardous at 

concentrations used, necessary for optimum performance. 

WARNING: Harmful if swallowed. 

Use 

For staining gels with electrophoretic protein separations. 

IMPORTANT : The staining solution is designed to stain only 10 gels. Change the solution after 10 staining steps. 


Store both stock and working staining solutions at room temperature or refrigerated in closed containers to prevent evaporation. Stock staining solution 

is stable until the expiration date indicated on the kit package or staining vial labels. 

Working staining solution is stable for 1 month. 

Do not store the working staining solution close to a heat source. 

5. APPLICATORS 

Use 

Precut, single use applicators for sample application. 

Storage 

Store the applicators in a dry place at room temperature or refrigerated. 

6. FILTER PAPERS 

Use 

Precut, single use, thin absorbent paper pads for blotting excessive moisture off the gel surface before sample application. 

Storage 

Store the thin filter papers in a dry place at room temperature or refrigerated. 

REAGENTS REQUIRED 

1. DESTAINING SOLUTION 

Preparation 

Each vial of stock Destaining Solution (SEBIA, PN 4540, 10 vials, 100 mL each) to be diluted up to 100 liters with distilled or deionized water. It is 

convenient to dilute only 5 mL of the stock solution to 5 liters, the volume of the destaining solution container. After dilution, the working destaining 

solution contains: citric acid, 0.05 g/dL. 

Use 

For destaining, that is removal of excess and background stain from the gels. 

For rinsing of the staining compartment after wash step. 

To neutralize the acidity of the destaining solution, pour 15 mL of a 50 % solution of Sodium Hydroxide, into the empty waste container. 


Store the stock destaining solution at room temperature or refrigerated. It is stable until the expiration date indicated on the kit package or destaining 

solution vial labels. DO NOT FREEZE. Working destaining solution is stable for one week at room temperature in a closed bottle. Do not add any 

sodium azide. 

Discard working destaining solution if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination. 

To prevent microbial proliferation in the diluted destaining solution to be stored more than one week, add 5 µL/dL of ProClin 300. 

Working destaining solution added with ProClin is stable in a closed bottle at room temperature or refrigerated until the expiration date indicated on the 

kit package or destaining solution vial labels. 

- 9 -


2. HYDRASYS WASH SOLUTION 

Preparation 

Each vial of the stock HYDRASYS Wash Solution (SEBIA, PN 4541, 10 vials, 80 mL each) to be diluted up to 5 liters with distilled or deionized water. 

After dilution, the working wash solution contains: alkaline buffer pH 8.8 ± 0.3 ; sodium azide. 

WARNING: The stock wash solution contains 0.625 % sodium azide. Do not ingest ! If ingested, consult physician immediately ! Sodium 

azide may lead to formation of explosive or toxic compounds when in contact with acids, lead or copper. Always flush with a large quantity 

of water when disposing. 

Use 

It serves for cleaning of the HYDRASYS Staining Compartment. Use periodically, e.g., if the instrument is used daily, wash the staining compartment 

weekly. 

See the package insert for directions to use. 


Store the stock and working wash solutions in closed containers at room temperature or refrigerated. They are stable until the expiration date indicated 

on the wash solution vial label. 

Discard working wash solution if it changes its appearance, e.g., becomes cloudy due to microbial contamination. 

3. FLUIDIL 

Preparation 

Fluidil (SEBIA, PN 4587, 5 mL) is ready to use. 

Use 

To dilute viscous or turbid samples, e.g., sera containing cryoglobulin or cryogel. 


Store at room temperature. It is stable until the expiration date indicated on the Fluidil vial label. 

Fluidil must be free of precipitate. 

EQUIPMENT AND ACCESSORIES REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 

1. HYDRASYS System SEBIA, PN 1210 or PN 1211. 

2. Micropipettor, either manual or automated, such as HYDRAplus SEBIA, PN 1215, for an alternative way of loading the sample applicators. 

3. Wet Storage Chamber, PN 1270, supplied with HYDRASYS. 

4. Container Kit supplied with HYDRASYS. 

5. Pipettes: 10 µL and 200 µL. 

6. Densitometer / scanner capable of scanning 82 x 51 mm or 82 x 102 mm gel plates at 570 nm or with a yellow filter : HYRYS SEBIA, DVSE SEBIA 

or PHORESIS software for flat-bed scanner. Refer to manufacturer’s instructions for operation and calibration procedures. 

7. Gel holder for half gels, SEBIA, PN 10043110. 

SAMPLES FOR ANALYSIS 

Sample collection and storage 

Fresh serum samples are recommended for analysis. serum and urine must be collected according to established procedures used in clinical 

laboratorytesting. Refrigerate samples (2 to 8 °C) as soon as possible after collection for up to one week. For longer storage periods, keep samples 

frozen (stable at least one month). 

Freezing serum samples with sodium azide, 0.02 g/dL improves the storage stability. 

Freezing urine samples with HEPES 0.1 M (pH 6.75) and sodium azide, 0.02 g/dL improve the storage stability. 

IMPORTANT: Avoid boric acid as preservative. 

Thawed samples can give slight application marks due to protein or lipoprotein denaturation. Storage at 2 to 8 °C and freezing cause anodic shift 

of beta-lipoproteins from beta-zone to alpha-2 or alpha-1 zones ; the older the serum, the greater the shift. 

Sample preparation 

1. Sera 

Use undiluted serum samples. 

Upon storage at 2 to 8 °C or after freezing, some sera (particularly those containing cryoglobulin or cryogel) may become viscous or develope 

turbidity. Such sera might present application problems due to hindered diffusion through the sample applicator teeth. In such case, add 

25 µL Fluidil to 75 µL serum and vortex for 15 seconds. Then follow the standard procedure. 

2. Concentrated urines 

Analysis is performed on samples previously concentrated to a total protein concentration of about 1.5 - 2.0 g/dL (with an adapted device). 

IMPORTANT: Some urines have a salt content. This can cause a gel deformation during migration and consequently, distortion of the migration 

profiles. If such a distortion makes interpretation inacurate, the urine should be dialyzed to remove the salts. 

NOTE : Diffusion of urine samples into the applicator tips may be hindered when the urine (neat or concentrated) is turbid. It is recommended to 

remove the particulates by centrifugation (e.g., 10 minutes at 3,000 rpm) or filtration (e.g., 0.45 µm syringe filter). 

Sample to avoid 

• Do not use hemolysed serum samples. Hemolysis increases alpha-2 and beta-zones. 

• Avoid plasma samples. Fibrinogen gives a band close to the application point which might be taken for a monoclonal immunoglobulin and would 

offset percentage of corresponding zone. 

• Avoid aged, improperly stored urine samples where enzymatic degradation of proteins might occur. 

- 10 -


PROCEDURE 

The HYDRASYS system is a semi-automated multi-parameter instrument. The automated steps include processing of HYDRAGEL agarose gels in 

the following sequence: sample application, electrophoretic migration, drying, staining, destaining and final drying. The manual steps include handling 

samples and gels, and setting up the instrument for operation. 

READ CAREFULLY HYDRASYS INSTRUCTION MANUAL. 

I. MIGRATION SET UP 

1. Switch on HYDRASYS instrument. 

2. Place one applicator for HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) (7 samples) and HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 (15 samples), or two applicators for 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 (30 samples), on a flat surface with the well numbers in the right-side-up position (Fig. 1). 

- Apply 10 µL of neat serum sample or concentrated urine in each well. Load each applicator within 2 minutes. 

- Place the applicator(s) into the wet storage chamber with the teeth up [handle it (them) by the plastic tooth protection frame]. Let the samples 

diffuse into the teeth for 5 minutes after the last sample application. For later use (up to 8 hours), keep the entire chamber under refrigeration. 

See wet chamber package insert for further details. 

3. Open the lid of the Migration Module and raise the electrode and applicator carriers. 

WARNING: Never close the lid while the carriers are raised ! 

4. Select «7 PROTEIN(E)» migration program for HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) or «15/30 PROTEIN(E)» migration program for HYDRAGEL 

PROTEIN(E) 15/30 from the instrument menu (left side of the keyboard). 

5. Remove buffered strips from the package ; handle them by the plastic ends. Engage the punched ends of the strip's plastic backing to the pins 

on the electrode carrier ; the strip's plastic backing must face the carrier (Fig. 2). 

6. Unpack the HYDRAGEL plate. 

- Roll quickly and uniformly one thin filter paper onto the gel surface to absorb the excess of liquid. Remove the paper immediately. 

WARNING: Do not leave the filter paper for a too long contact with the gel to avoid its dehydration. 

- Pool 120 µL of distilled or deionized water for HYDRAGEL 7 PROTEIN(E), or 200 µL for HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30, on the lower third 

of the frame printed on theTemperature Control Plate of the migration module. 

- Place the gel plate (the gel side up) with its edge against the stop at the bottom of the printed frame (Fig. 3). 

- Bend the gel and ease it down onto the water pool (Fig. 3). Ensure that no air bubbles are trapped, water is spread underneath the entire 

gel plate and the gel is lined up with the printed frame. 

7. Lower both carriers down. In this position the buffered strips do not touch the gel. DO NOT FORCE THE CARRIERS ALL THE WAY DOWN. 

8. Remove the applicator(s) from the wet chamber. Handle it (them) by the protection frame. 

- Snap off the applicator teeth's protection frame. 

- For 7 and 15 samples analysis, place the aplicator into position No 6 on the carrier. 

- For 30 samples analysis, place the two applicators each into position No 3 and 9. 

IMPORTANT: The numbers printed on the applicator(s) must face the operator (Fig. 4). 

9. Close the lid of the migration module. 

10. Start the procedure immediately by pressing the green arrow «START» key on the left side of the keyboard. 

IMPORTANT: Make sure that the ventilation air inlet on the right side of the instrument is not blocked. 

MIGRATION - DESCRIPTION OF THE AUTOMATED STEPS 

• The two carriers are lowered so that buffered trips and applicator(s) contact the gel surface. 

• Sample applicator carrier rises up. 

• Migration is carried out under 10 W constant for HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) or 20 W constant for HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30, at 20 °C 

controlled by Peltier effect, until 33 Vh have accumulated (for about 7 minutes). 

• The electrode carrier rises to disconnect the electrodes. 

• The temperature of the control plate rises to 65 °C for 10 minutes to dry the gel. 

• The control plate is cooled down ; when it reaches 50 °C, an audible beep signals that the migration module lid unlocks. The plate temperature 

remains at 50 °C until the lid is opened. Then, the temperature keeps decreasing until it reaches 20 °C (in less than 5 minutes) after which a new 

migration run may start. 

NOTE: The migration module lid remains closed during all migration steps. 

II. GEL PROCESSING SET-UP 

1. Open the lid. 

2. Remove the applicator(s) and discard. 

3. Raise both carriers, remove the buffered strips by their plastic ends and discard. 

4. Remove the dried gel film for further processing. 

5. After each use, wipe the electrodes and the temperature control plate with a soft wet tissue. 

6. Open the Gel Holder. Lay it flat and position the dried gel (with gel side facing up) into the grooves of the two rods and close the holder. Make 

sure that the film is correctly positionned inside the holder (Fig. 5). 

7. Place the gel holder into the Gel Processing / Staining Module. 

IMPORTANT: Before starting the gel processing / staining program, check the following: 

- the staining container is filled with 300 mL of staining solution ; 

- the destaining container contains at least 1 liter of destaining solution ; 

- the waste container is empty. 

For reagent line connection: refer to the information displayed on the screen of the instrument (select key: REAGENT LINES). 

IMPORTANT: Do not forget to block up the unused lines. 

8. Select «PROT./B1-B2/Hb» staining program from the instrument menu and start the run by pressing the «START» key (green arrow on the 

right side of the keyboard). 

During staining, destaining and drying steps, the compartment remains locked. 

After cooling step, an audible beep signals that the compartment unlocks (the ventilation is maintained until the gel holder is removed). 

- 11 -


III. GEL PROCESSING COMPLETION 

1. Remove the gel holder from the compartment, open it and remove the dried gel. 

NOTE : After gel staining / destaining and before densitometry / scanning, a gel may be put through an additional wash step, if needed, to further 

clarify the gel background and to remove any residual stain that may appear as blue spots. Wash the gel using the "WASH ISOENZ/GEL" 

program. 

2. If needed, clean the back side (the plastic support side) of the dry film with a damp soft paper. 

3. Scan using a densitometer / scanner at 570 nm or with a yellow filter. 

NOTE : The lengths of electrophoretic migrations may be slightly different with gels containing 2 or 3 analysis rows, without any adverse effects 

on performance. 

RESULTS 

Quality control 

It is advised to include an assayed control serum (Control serum, SEBIA PN 4785) into each run of samples. 

Values 

Densitometer scanning (at 570 nm) of stained electrophoregrams yields relative concentrations (percentages) of individual protein zones. 

Normal values (mean ± 2 SD) for individual major electrophoretic serum protein zones on HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 gels have been established 

from a healthy population of 158 adults (men and women). 

The protein quantification in UV on CAPILLARYS gives similar values to nephelometric procedure (especially for albumin). SEBIA proposes a 

HYDRAGEL - CAPILLARYS/NEPHELOMETRIC Equivalency of values obtained on HYDRAGEL after calibration of scanning systems. 

Without HYDRAGEL With HYDRAGEL CAPILLARYS/NEPHELOMETRIC CAPILLARYS/NEPHELOMETRIC Equivalency Values Equivalency Values FRACTION HYRYS - DVSE - PHORESIS HYRYS - DVSE - PHORESIS Albumin 59.8 - 72.4 % 53.8 - 65.2 % Alpha-1 globulins 1.0 - 3.2 % 1.1 - 3.7 % Alpha-2 globulins 7.4 - 12.6 % 8.5 - 14.5 % Beta globulins 7.5 - 12.9 % 8.6 - 14.8 % 

| Gamma globulins | 8.0 - 15.8 % | 9.2 - 18.2 % | 

It is recommended each laboratory establishes its own normal values. 

Interpretation 1-15 

Some serum samples may show a slight split which depends on the concentration and mobility of the alpha-2 zone protein components, see 

MIGRATION PATTERN. 

• Some sera have different phenotypes (Haptoglobin, GC Globulin). 

• Alpha-1 lipoprotein depends on the concentration and storage of the sample. 

As an aid in interpretation of serum and urine protein electrophoregrams, see BIBLIOGRAPHY. 

Interference and Limitations 

See SAMPLES ANALYSIS. 

Due to the resolution and sensitivity limits of zone electrophoresis, it is possible that some monoclonal components may not be detected with this 

method. 

Troubleshooting 

Call Technical Service of the supplier when the test fails to perform while the instruction for the preparation and storage of materials, and for the 

procedure were carefully followed. 

Kit reagent Safety Data Sheets and informations on waste products elimination are available from the Technical Service of the supplier. 

PERFORMANCE DATA 

serum analysis 

Reproducibility within run 

Three (3) different samples were each run in 15 tracks on HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 gels from the same lot. The means, SD and CV (n = 15) 

were calculated for each serum sample and each zone. The following table shows results for the 3 serum samples. 

FRACTION MEAN (%) SD CV (%) Serum 1 2 3 1 2 3 1 2 3 Albumin 70.4 68.8 65.9 0.2 0.7 0.6 0.3 1.0 0.9 Alpha-1 1.9 1.9 1.3 0.1 0.1 0.1 3.5 3.9 7.3 Alpha-2 9.9 9.4 7.6 0.2 0.2 0.2 1.6 2.6 2.4 Beta 10.6 8.6 7.8 0.4 0.3 0.1 3.3 3.5 1.8 

| Gamma | 7.2 11.4 17.4 | 0.2 0.3 0.3 | 3.4 2.8 2.0 | 

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Reproducibility between runs 

Fifteen (15) different serum samples were each run during 5 different days using the same batch of HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 gels. The means, 

SD and CV (n = 5) were calculated for each serum sample and each zone. The results were essentially the same for all samples. The following table 

shows the ranges of SD and CV representing all samples and a mean CV from the pooled CV’s for all samples (n = 15). 

FRACTION SD CV (%) MEAN CV (%) Albumin 0.2 – 0.9 0.3 – 1.4 0.8 Alpha-1 0.1 – 0.2 2.1 – 9.8 4.6 Alpha-2 0.1 – 0.3 0.9 – 3.1 1.8 Beta 0.1 – 0.3 1.1 – 3.8 2.0 

| Gamma | 0.1 – 0.5 | 1.3 – 5.6 | 2.9 | 

Accuracy 

Ninety (90) different samples (pathological and normal sera) were run on HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 gels and another commercially available 

agarose gel system. The correlation parameters calculated for individual zones on HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 gels vs. the comparative gel 

system (y-HYDRAGEL) were : 

Fraction Correlation Coefficient y-Intercept Slope Range of % Values of samples used * Albumin 0.983 3.673 0.942 54.9 - 72.9 Alpha-1 0.984 0.937 0.972 1.2 - 6.7 Alpha-2 0.984 0.635 0.977 7.6 - 16.5 Beta 0.953 -0.071 0.984 6.9 - 15.0 

| Gamma | 0.976 | -0.435 | 1.033 | 6.0 - 18.9 | 

* The percent values are as determined in the HYDRAGEL 15 & 30 PROTEIN(E) system. 

Sensitivity 

A pathological serum sample with a monoclonal protein at 2.12 g/dL was serially diluted and the dilutions electrophoresed on HYDRAGEL PROTEIN(E) 

15/30 gel. After visual inspection of the gel, the highest dilution with a discernible monoclonal band was 1/128 for the HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 

system. Thus the lowest concentration of a monoclonal protein was about 0.017 g/dL. 

NOTE : According to the position of the monoclonal component and polyclonal background in the gamma zone, the detection limit may vary. 

Concentrated urines analysis 

Results obtained with HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 gels indicate a very good reproducibility within and between runs for concentrated urines 

samples after quantitative and qualitative analysis. Twenty eight (28) different samples (pathological and normal urines) were run on HYDRAGEL 

PROTEIN(E) 15/30 gels and another commercially available agarose gel system. There were no visually detectable differences among the two 

systems. The sensitivity of detection was determined from the highest serial dilutions of a monoclonal urinary protein giving a discernible band at 

0.048 g/dL. 

BIBLIOGRAPHY 



21/03/91, p. 782 à 785. 




Pathology, 1989, 21, p. 35 à 41. 


2nd ed., 1994, 397 pp. 







- Paris. 






(15) Wicher J.T., Spence C.E. Serum protein electrophoresis - An out moded test. Ann. Clin. Biochem., 1987, 24, p. 133 à 139. 

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MIGRATION PATTERN 

+ 

Albumin 

Orosomucoid 

α1 Antitrypsin 

α1 Antichymotrypsin 

Ceruloplasmin 

GC Globulin 

α2 Macroglobulin 

Haptoglobin 

α Lipoprotein 

Transferrin 

Hemopexin 

Plasminogen 

Fibronectin 

C3 Complement 

β Lipoprotein 

γ Globulins 

G - A - M - D - E 

- 

Alpha-2 zone : 

2 (± 5) 2 (± 5) 

1 + 2 + 3 + 4 + 5 1 + 2 + 3 + 4 (± 5) 1 + 3 + 4 (± 5) 

A B C 

1 = α2 Macroglobulin 

2 = Haptoglobin 

3 = Ceruloplasmin 

4 = GC Globulin 

5 = α1 Lipoprotein 

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ANWENDUNGSBEREICH 

Die gelen HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) und HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 dienen zur elektrophore-tischen Auftrennung von Proteinen in 

Humanserum und Urin auf Agarosegelen in alkalischem Puffer (pH-Wert 9,2). Die normalen Serumproteine werden in fünf Haupt-fraktionen getrennt 

und mit Amidoschwarz gefärbt. Die kits wurden für das halbautomatische Elektrophoresegerät HYDRASYS entwickelt. 

Die Auswertung der Elektropherogramme kann entweder qualitativ durch visuellen Vergleich oder für eine exakte relative Quantifizierung (%) der 

einzelnen Fraktionen durch Densitometrie erfolgen. 

Mit einem Agarosegel 

• des HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) Kits können 7 Proben, 

• des HYDRAGEL 15 PROTEIN(E) Kits können 15 Proben, 

• des HYDRAGEL 30 PROTEIN(E) Kits können 30 Proben, 

analysiert werden. 

In-vitro-Diagnostikum. 

TESTPRINZIP 1-15 

Die Proteinelektrophorese ist eine weit verbreitete Technik, die in klinischen Labors routinemäßig für das Screening von serum und anderen 

Körperflüssigkeiten auf Proteinanomalien verwendet wird. Sie basiert auf dem Prinzip der Zonenelektrophorese, die auf einem geeigneten 

Trägermedium durchgeführt wird. Agarose erwies sich als ein vielseitig einsetzbares und effektives Trägermaterial. Bei diagnostischen Anwendungen 

werden die Serumproteine vor allem entsprechend ihrer Ladung bei einem bekannten pH-Wert in die folgenden fünf Hauptfraktionen getrennt: 

Albumin, Alpha-1-Globuline, Alpha-2-Globuline, Betaglobuline und Gammaglobuline. Jede Fraktion besteht aus einem oder mehreren 

Serumproteinen. Die Urinproteinmuster ähneln den Serumproteinmustern. Dennoch kann die relative Intensität der Urinfraktionen beträchtlich 

variieren, weil sie jeweils von der Filtrationskapazität der Nieren abhängt. 

IN DEN KITS HYDRAGEL 7, 15 UND 30 PROTEIN(E) ENTHALTENE REAGENZIEN UND MATERIALIEN 

BEZEICHNUNG BESTELL-NR. 4100 BESTELL-NR. 4120 BESTELL-NR. 4140 Agarosegele (gebrauchsfertig) 10 Gele 10 Gele 10 Gele Pufferstreifen (gebrauchsfertig) 10 Pack zu 2 Stück 10 Pack zu 2 Stück 10 Pack zu 2 Stück Verdünnungslösung (konzentriert) 1 Fläschchen, 60 ml 1 Fläschchen, 60 ml 1 Fläschchen, 60 ml Amidoschwarz-Färbelösung (konzentriert) 1 Fläschchen, 20 ml 1 Fläschchen, 20 ml 1 Fläschchen, 20 ml Applikatoren (gebrauchsfertig) 

| 1 Pack zu 10 Stück (7 Zähne) 1 Pack zu 10 Stück (15 Zähne) 2 Pack zu 10 Stück (15 Zähne) Filterpapier | 1 Pack zu 10 Stück | 1 Pack zu 10 Stück | 1 Pack zu 10 Stück | 

FÜR OPTIMALE ERGEBNISSE 

Alle Reagenzien eines Kits müssen immer zusammen, gemäß den Instruktionen der Packungsbeilage benutzt werden. 

BITTE DIE PACKUNGSBEILAGE SORGFÄLTIG LESEN. 

1. AGAROSEGELE 

Vorbereitung 

Agarosegele sind gebrauchsfertig. Jedes Gel enthält: Agarose, 8 g/l ; Tris-Barbital-Puffer, pH-Wert 9,2 ± 0,1 ; Additiva zur Optimierung der Leistung, 

in den verwendeten Konzentrationen ungefährlich. 

WARNHINWEIS: Die Agarosegele enthalten 0,31 % Barbital und 0,34 % Natriumbarbital. Nicht einnehmen! Nach dem versehentlichen 

Einnehmen sofort den Arzt aufsuchen! 

Gebrauch 

Hilfsmedium für die Proteinelektrophorese. 

Lagerung, Stabilität und Anzeichen für Verfall 

Die Gele waagerecht in der Originalverpackung bei Raumtemperatur (15 bis 30 °C) oder im Kühlschrank (2 bis 8 °C) aufbewahren. Sie bleiben bis 

zum Verfalldatum stabil, das auf dem Etikett der Kit- oder Gelverpackung angegeben ist. (Der Pfeil auf der Vorderseite der Kit-Schachtel muß nach 

oben zeigen.) Eine Lagerung in der Nähe eines Fensters oder einer Hitzequelle ist zu vermeiden. Starke Temperaturschwankungen sind zu vermeiden. 

NICHT EINFRIEREN. 

Das Gel ist zu verwerfen bei: (i) Kristallen oder Niederschlag auf der Geloberfläche oder sehr weicher Gelstruktur (was darauf hindeutet, daß das Gel 

gefroren war) ; (ii) Bakterien- oder Schimmelpilzbildung ; (iii) einer ungewöhnlich stark ausgeprägten Flüssigkeitsansammlung in der Gel-Box (was auf 

einen Austritt von Puffer aus dem Gel aufgrund unsachgemäßer Lagerung hindeutet). 

2. PUFFERSTREIFEN 

Vorbereitung 

Die als Streifen vorliegenden Pufferschwämme sind gebrauchsfertig. Jeder Pufferstreifen enthält: Tris-Barbital-Puffer, pH-Wert 9,2 ± 0,3 ; Natriumazid ; 

Additiva zur Optimierung der Leistung, in den verwendeten Konzentrationen ungefährlich. 

WARNHINWEIS: Der im Streifen enthaltene Puffer enthält 0,92 % Barbital, 1,03 % Natriumbarbital und 0,30 % Natriumazid. Nicht einnehmen! 

Nach dem versehentlichen Einnehmen sofort den Arzt aufsuchen! Darf bei der Entsorgung nicht mit Säuren, Blei oder Kupfer in Kontakt 

kommen, da sich sonst explosive bzw. toxische Natriumazidverbindungen bilden können. 

Gebrauch 

Die Pufferstreifen fungieren als Elektrophoresepufferreservoir und gewährleisten den Kontakt zwischen dem Gel und den Elektroden. 


Bewahren Sie die Pufferstreifen waagerecht liegend in der Original-Schutzverpackung bei Zimmertemperatur oder gekühlt auf. (Der Pfeil auf der 

Verpackungsschachtel muss nach oben zeigen.) Die Pufferstreifen sind bis zum angegebenen Verfallsdatum auf der Schachtel oder auf dem Etikett 

der Streifen stabil. 

NICHT EINFRIEREN! 

Verwerfen Sie die Pufferstreifen, wenn die Verpackung geöffnet ist und die Streifen ausgetrocknet sind. 

- 15 - 

SEBIA ARBEITSANLEITUNG - Deutsch

3. VERDÜNNUNGSLÖSUNG 

Vorbereitung 

Die Amidoschwarz-Verdünnungslösung ist wie im Abschnitt “Amidoschwarz-Färbelösung” beschrieben zu verwenden. 

Die Lösung enthält Zitronensäure. 

Gebrauch 

Zum Herstellen der Amidoschwarz-Färbelösung. 



Konzentrierte Verdünnungslösung im Kühlschrank oder bei Raumtemperatur aufbewahren. Die Lösung ist bis zum Verfallsdatum (aufgedruckt auf dem 

Kit oder auf dem Flaschenetikett) haltbar. NICHT EINFRIEREN! 

Geben Sie kein Natriumazid zu. 

4. AMIDOSCHWARZ FÄRBELÖSUNG 

Vorbereitung 

Das Amidoschwarz Färbekonzentrat ist eine hochviskose Flüssigkeit deren Viskosität sich durch Lagerung verändern kann. Die Qualität des 

Färbekonzentrats wird durch höhere Viskosität nicht beeinträchtigt. 

Bitte beachten Sie die folgende Anleitung zum Herstellen der Färbelösung : 

1. 15 ml der Verdünnungslösung zu dem Amidoschwarz Färbekonzentrat geben. 

2. Die Färbekonzentrat Flasche fest verschließen. 

3. Die Flasche für etwa 5 Sekunden kräftig schütteln. 

4. Den Inhalt der Flasche in den Färbecontainer des HYDRASYS überführen. 

5. Schritt 1 – 4 zwei- bis dreimal wiederholen. 

6. Die restliche Verdünnungslösung in den Färbecontainer überführen und mit destilliertem oder deionisiertem Wasser auf 300 ml Gesamtvolumen 

auffüllen. 

7. Den Inhalt des Färbecontainers 5 – 10 Minuten mischen. 

Im Anschluss daran ist die Färbelösung gebrauchsfertig. 

ACHTUNG: Eine unvollständige Lösung des Amidoschwarz Konzentrats kann zu einer Unterbestimmung der Albuminfraktion und/oder zu 

Auslöscheffekten der Albuminfraktion führen. 

Nach der Verdünnung enthält die Färbelösung: Zitronensäurelösung pH ≈ 2 ; 0,4 g/dl Amidoschwarz ; 6,7% Ethylenglycol ; zusätzliche Additive zur 

Optimierung (ungiftig in den verwendeten Konzentrationen). 

WARNUNG: Nicht verschlucken! Bei Verschlucken sofort ärztlichen Rat einholen! 

Gebrauch 

Zum Färben der Agarose Gele nach elektrophoretischer Trennung. 

WICHTIG: Die Färbelösung ist für maximal 10 Färbungen konzipiert. Wechseln Sie deshalb die Färbelösung nach 10 Färbungen aus. 


Amidoschwarz- Konzentrat und verdünnte Färbelösung bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank verschlossen aufbewahren um Flüssigkeitsverlust 

durch Verdunstung zu vermeiden. Das Amidoschwarz-Konzentrat ist bis zum Verfallsdatum (aufgedruckt auf dem Kit oder auf dem Flaschenetikett) 

haltbar. 

Verdünnte Färbelösung ist einen Monat haltbar. 

Die gebrauchsfertige Färbelösung nicht neben einer Wärmequelle aufbewahren. 

5. APPLIKATOREN 

Gebrauch 

Einmalapplikatoren für den Probenauftrag. 

Lagerung 

Applikatoren vor Feuchtigkeit geschützt bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. 

6. FILTERPAPIER 

Gebrauch 

Dünnes Filterpapier zum Einmalgebrauch für das Abblotten überschüssiger Flüssigkeit von der Gel-oberfläche vor dem Probenauftrag. 

Lagerung 

Dünnes Filterpapier, vor Feuchtigkeit geschützt, bei Zimmertemperatur oder im Kühlschrank lagern. 

ZUSÄTZLICH BENÖTIGTE REAGENZIEN 

1. ENTFÄRBELÖSUNG 

Vorbereitung 

Den Inhalt eines Fläschchens konzentrierte Entfärbelösung (SEBIA, Bestell-Nr. 4540, 10 Fläschchen zu je 100 ml) mit destilliertem oder entionisiertem 

Wasser auf 100 Liter auffüllen. Es empfiehlt sich, nur 5 ml konzentrierte Lösung auf 5 Liter, dem Fassungsvermögen des Behälters für die 

Entfärbelösung, aufzufüllen. Verdünnte Entfärbelösung enthält: Zitronensäure, 0,5 g/l. 

Gebrauch 

Zum Entfärben, d.h. Auswaschen von überschüssiger Farbe und zur Entfernung der Gelhintergrundfärbung. 

Zum Spülen der Färbekammer nach dem Waschen. 

Zur Neutralisation der sauren Entfärbelösung können 15 ml einer 50 % Natronlauge (NaOH) in den leeren Abfallbehälter gefüllt werden. 


Konzentrierte Entfärbelösung bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Sie bleibt bis zum Verfalldatum stabil, das auf der Kit- 

Verpackung oder auf dem Fläschchenetikett der Entfärbelösung angegeben ist. NICHT EINFRIEREN. Verdünnte Entfärbelösung bleibt bei 

Raumtemperatur in einem verschlossenen Behälter eine Woche stabil. Kein Natriumazid zugeben. 

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Verdünnte Entfärbelösung verwerfen, wenn sich ihr Aussehen verändert hat, z.B. wenn sie infolge mikrobieller Kontamination trübe geworden ist. 

Um mikrobielles Wachstum in der verdünnten Entfärbelösung zu verhindern, wenn sie länger als 1 Woche aufgehoben wird, sollten 

50 µl/l ProClin 300 zugesetzt werden. 

Die mit ProClin versetzte, gebrauchsfertige Entfärbelösung ist in der verschlossenen Flasche bei Zimmertemperatur oder gekühlt bis zum Verfallsdatum 

stabil, das auf der Verpackung oder auf den Flaschenetiketten angegeben ist. 

2. HYDRASYS WASCHLÖSUNG 

Vorbereitung 

Den Inhalt eines Fläschchens konzentrierte HYDRASYS Waschlösung (SEBIA, Bestell-Nr. 4541, 10 Fläschchen zu je 80 ml) mit destilliertem oder 

entionisiertem Wasser auf 5 Liter auffüllen. Verdünnte Waschlösung enthält: alkalischen Puffer, pH-Wert 8,8 ± 0,3 ; Natriumazid. 

WARNHINWEIS: Konzentrierte Waschlösung enthält 0,625 % Natriumazid. Nicht einnehmen! Nach dem versehentlichen Einnehmen sofort 

den Arzt aufsuchen! Natriumazid kann bei Kontakt mit Säuren, Blei oder Kupfer zu explosiven bzw. toxischen Verbindungen reagieren. Bei 

der Entsorgung stets mit reichlich Wasser nachspülen. 

Gebrauch 

Sie wird zum Reinigen des HYDRASYS Färbemoduls eingesetzt. Die Reinigung in regelmäßigen Abständen durchführen: Wird das Gerät zum Beispiel 

täglich genutzt, sollte das Färbemodul einmal pro Woche gereinigt werden. 

Hinweise zum Gebrauch finden Sie auf der Packungsbeilage. 


Konzentrierte und verdünnte Waschlösung in geschlossenen Behältern bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank aufbewahren. Sie bleibt bis zum 

Verfalldatum stabil, das auf dem Fläschchenetikett der Waschlösung angegeben ist. 

Verdünnte Waschlösung verwerfen, wenn sich ihr Aussehen verändert hat, z.B. wenn sie infolge mikrobieller Kontamination trübe geworden ist. 

3. FLUIDIL 

Vorbereitung 

Fluidil (SEBIA, Bestell-Nr. 4587, 1 Fläschchen, 5 ml) ist gebrauchsfertig. 

Gebrauch 

Zum Verdünnen zähflüssiger oder trüber Proben, z.B. von Kryoglobulin- oder Kryogel-haltigen Seren. 


Bei Raumtemperatur aufbewahren. Es bleibt bis zum Verfalldatum stabil, das auf Kit-Verpackung oder auf dem Fluidil-Fläschchenetikett 

angegeben ist. 

Fluidil darf kein Präzipitat aufweisen. 

ZUSÄTZLICH BENÖTIGTE AUSSTATTUNG (NICHT IM KIT ENTHALTEN) 

1. HYDRASYS System, SEBIA, Bestell-Nr. 1210 oder Nr. 1211. 

2. Für das Beladen der Applikatoren kann alternativ eine manuelle Mikropipette oder der Pipettierautomat HYDRAplus SEBIA, Bestell-Nr. 1215, 

verwendet werden. 

3. Feuchte Kammer, Bestell-Nr. 1270, im Lieferumfang des HYDRASYS Systems enthalten. 

4. Behälter-Kit, im Lieferumfang des HYDRASYS Systems enthalten. 

5. Pipetten: 10 µl und 200 µl. 

6. Densitometer / Scanner für das Scannen von 82 x 51 mm oder 82 x 102 mm großen Gelen bei einer Wellenlänge von 570 nm oder mit einem 

Gelbfilter : HYRYS SEBIA, DVSE SEBIA oder PHORESIS Software für Flachbettscanner. Hinweise zur Bedienung und Kalibration entnehmen Sie 

bitte der Bedienungsanleitung des Herstellers. 

7. Gelhalter für halbe SEBIA-Gele, Bestell-Nr. 10043110. 

PROBEN FÜR DIE ANALYSE 

Probensammlung und -lagerung 

Für die Analyse wird frisches Probenmaterial empfohlen. Die Gewinnung von serum und Urin nach einem gebräuchlichen Verfahren für klinische Tests 

durchführen. Die Proben sollten nach der Gewinnung umgehend bei 2 - 8 °C gekühlt und können bis zu eine Woche gelagert werden. Bei längerer 

Lagerung die Proben einfrieren. Durch einfaches Einfrieren bleiben die Proben für mindestens einen Monat. 

Die Lagerstabilität gefrorener serum erhöht sich, wenn sie vor dem Einfrieren mit Natriumazid, 0,2 g/l, versetzt werden. 

Die Lagerstabilität gefrorener Urin erhöht sich, wenn sie vor dem Einfrieren mit HEPES, 0,1 M (pH-Wert 6,75), und Natriumazid, 0,2 g/l, versetzt werden. 

WICHTIG: Keine Borsäure als Konservierungsmittel verwenden. 

Nach dem Auftauen können diese Proben aufgrund der Protein- bzw. Lipoprotein-denaturierung leichte Trennspuren an der Auftragsstelle hinterlassen. 

Durch die Lagerung bei 2 - 8 °C und das Einfrieren der Proben kommt es zu einer anodischen Verschiebung der Beta-Lipoproteine von der 

Beta-1 Zone zur Alpha-2- bis hin zur Alpha-1-Zone ; je älter die Proben sind, desto größer ist die Verschiebung. 

Probenvorbereitung 

1. Serumproben 

Unverdünnte Serumproben verwenden. Nach der Lagerung im Kühl- oder Gefrierschrank können manche Serumproben (insbesondere 

Kryoglobulin- oder Kryogel-haltige Proben) zähflüssig oder trüb werden. Derartige Serumproben lassen sich mitunter schwer auftragen, da sie 

kaum durch die Zähne des Probenapplikators diffundieren. In diesen Fällen zu 75 µl serum 25 µl Fluidil zugeben und für 15 Sekunden im 

Rotationsmischer mischen. Anschließend mit dem Standardverfahren fortfahren. 

2. KonzentrierteUrinproben 

Wird die analyse an Urinproben durchgefürt, die (mit einen geeigneten verfahren) bis zu einem gehalt von 15 - 20 g/l konzentriert wurden. 

WICHTIG: Einige Urinproben sind stark salzhaltig. Dardurch kann es während der Migration zur einer Deformation des Gels und damit zur einer 

Verzerrung der Elektrophoresemuster kommen. Dies läßt sich durch Entfernen des Salzanteils mittels Dialyse vermeiden. 

ZU BEACHTEN: Die Diffusion der Urinproben in die Applikatorspitzen kann behindert sein, wenn der Urin (nativ oder konzentriert) trüb ist. Es wird 

empfohlen, die Partikel durch Zentrifugation (z.B. 10 Minuten bei 3.000 Upm) oder Filtration (z.B. 0,45 µm Filter) zu entfernen. 

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Folgende Proben nicht verwenden 

• Keine hämolysierten Proben verwenden, weil durch die Hämolyse die Alpha-2- und Beta-Fraktionen erhöht werden. 

• Plasmaproben vermeiden. Das Fibrinogen ergibt eine Bande in der Nähe der Auftragstelle, die mit monoklonalem Immunglobulin verwechselt 

werden könnte und durch Überlagerung zu einer Verfälschung des prozentualen Anteils einer dort vorhandenen Fraktion führen würde. 

• Keine zu alten oder ungeeignet gelagerte Urinproben verwenden, weil ein enzymatischer Abbau der Proteine auftreten könnte. 

DURCHFÜHRUNG 

Das HYDRASYS System ist ein halbautomatisches Multiparameter-Gerät, das eine automatische Bearbeitung der HYDRAGEL Agarosegele in der 

nachstehenden Reihenfolge durchführt: Probenapplikation, elektrophoretische Migration, Trocknen, Färben, Entfärben und Endtrocknen. Zu den 

manuellen Schritten gehört die Handhabung der Proben und Gele sowie die Bedienung des Geräts. 

DIE BEDIENUNGSANLEITUNG ZUM HYDRASYS SYSTEM AUFMERKSAM DURCHLESEN. 

I. VORBEREITUNG DER MIGRATION 

1. HYDRASYS einschalten. 

2. Bei Verwendung von HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) (7 Proben) bzw. HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 (15 Proben) einen oder bei Verwendung 

von HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 (30 Proben) zwei Probenapplikatoren so auf eine ebene Unterlage legen, daß die Nummern 

(Vertiefungen) nach oben zeigen (siehe Abb. 1). 

- In jede Vertiefung des Applikators 10 µl unverdünntes serum oder aufkonzentrierten Urin geben. Jeder Applikator sollte innerhalb von zwei 

Minuten beladen werden. 

- Den/die Applikator(en) mit den Zähnen nach oben in die feuchte Kammer legen (nur am Schutzrahmen für die Zähne anfassen). Die Proben 

nach dem Auftragen der letzten Probe 5 Minuten lang in die Zähne einziehen lassen. Erfolgt die Anwendung erst (bis zu 8 Stunden) später, 

die komplette Kammer in den Kühlschrank stellen. Hinweise hierzu finden Sie in der Packungsbeilage zur feuchten Kammer. 

3. Die Abdeckung des Migrationsmoduls öffnen, und die Elektroden-/Applikatoren-Halter nach oben klappen. 

WARNHINWEIS: Die Abdeckung bei hochgestelltem Elektroden-/Applikatoren-Halter nicht schliessen! 

4. Bei Verwendung von HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) im Gerätemenü das Programm «7 PROTEIN(E)» und bei Verwendung von HYDRAGEL 

PROTEIN(E) 15/30 das Programm «15/30 PROTEIN(E)» wählen (an der Tastatur links). 

5. Die Pufferstreifen an den Kunststoffenden aus der Packung nehmen. Die Perforation des Plastikfilms in die Stifte des Elektroden-Halters 

einführen. Die Plastikfolie muß dabei zum Applikator-Halter zeigen (siehe Abb. 2). 

6. Das Gel aus der Verpackung nehmen. 

- Ein dünnes Filterpapier vorsichtig und gleichmäßig auf die Oberfläche legen, um überschüssige Feuchtigkeit zu entfernen. Das Filterpapier 

sofort wieder entfernen. 

WARNUNG: Das Filterpapier nicht zu lange mit dem Gel in Kontakt lassen, damit ein Austrocknen des Gels verhindert wird. 

- Für HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) 120 µl und für HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 200 µl destilliertes oder entionisiertes Wasser in das untere 

Drittel des Rahmens geben, der auf der Peltier-Platte des Migrationsmoduls aufgedruckt ist. 

- Das Gel (mit der Gelseite nach oben) an die untere Kante des aufgedruckten Rahmens anlegen (siehe Abb. 3). 

- Das Gel biegen und auf dem Wasser abrollen (siehe Abb. 3). Darauf achten, daß keine Luftblasen eingeschlossen werden, das Wasser 

unter der gesamten Gelplatte verteilt ist und das Gel am aufgedruckten Rahmen anliegt. 

7. Beide Halter nach unten klappen. In dieser Position dürfen die Pufferstreifen keinen Kontakt mit dem Gel haben. DIE HALTER NICHT MIT 

GEWALT BIS GANZ NACH UNTEN DRÜCKEN. 

8. Den/die Applikator(en) aus der feuchten Kammer nehmen. Dabei nur am Schutzrahmen anfassen. 

- Den Schutzrahmen für die Zähne entfernen. 

- Bei Verwendung von HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) (7 Proben) und HYDRAGEL PROTEIN 15/30 (15 Proben) den Applikator an Position 6 

auf dem Halter einsetzen. 

- Bei Verwendung von HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 (30 Proben) je einen Applikator an Position 3 und 9 einsetzen. 

WICHTIG: Die auf dem/den Applikator(en) aufgedruckten Ziffern müssen immer zum Bediener zeigen (siehe Abb. 4). 

9. Die Abdeckung des Migrationsmoduls schließen. 

10. Die Migration sofort starten. Dazu die grüne Pfeiltaste «START» auf der linken Seite der Tastatur drücken. 

WICHTIG: Darauf achten, daß die Lüftungsschlitze an der rechten Geräteseite nicht verdeckt sind. 

MIGRATION - BESCHREIBUNG DER AUTOMATISCHEN ABLÄUFE 

• Die beiden Halter werden soweit gesenkt, daß die Pufferstreifen und der/die Applikator(en) in Kontakt mit der Geloberfläche kommen. 

• Der Probenapplikator-Halter wird angehoben. 

• Die Migration erfolgt für HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) unter Anlegen eines Gleichstroms von 10 W oder für HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 unter 

Anlegen eines Gleichstroms von 20 W bei einer Temperatur von 20 °C, die durch den Peltier-Effekt aufrechterhalten wird, bis 33 Vh erreicht sind 

(nach etwa 7 Minuten). 

• Der Elektroden-Halter wird angehoben, wodurch der Kontakt zu den Elektroden unterbrochen wird. 

• Zum Trocknen des Gels wird die Temperatur der Peltier-Platte für 10 Minuten auf 65 °C erhöht. 

• Die Platte kühlt ab. Sobald 50 °C erreicht sind, ertönt ein akustisches Signal, um den Bediener darauf aufmerksam zu machen, daß sich die 

Abdeckung des Migrationsmoduls entriegelt. Bis zum Öffnen der Abdeckung wird die Temperatur der Platte auf 50 °C gehalten. Anschließend sinkt 

die Temperatur (in weniger als 5 Minuten) auf 20 °C. Nun kann eine weitere Migration durchgeführt werden. 

HINWEIS: Während der Migration bleibt die Abdeckung des Migrationsmoduls arretiert. 

II. VORBEREITUNG DER GELBEARBEITUNG 

1. Die Abdeckung öffnen. 

2. Den/die Applikator(en) herausnehmen und verwerfen. 

3. Beide Halter anheben, die Pufferstreifen an den Plastikenden herausnehmen und verwerfen. 

4. Das Gel für die weitere Bearbeitung herausnehmen. 

5. Die Elektroden und die Peltier-Platte mit einem feuchten Papiertuch abwischen. 

6. Den Gel-Halter öffnen und flach hinlegen. Das getrocknete Gel (mit der Gelseite nach oben) in die Ausfräsung des Gel-Halters einsetzen, und 

den Gel-Halter schließen. Darauf achten, daß das Gel im Halter korrekt positioniert ist (siehe Abb. 5). 

- 18 -


7. Den Gel-Halter in das Gelbearbeitungs-/Färbemodul einsetzen. 

WICHTIG: Vor dem Start des Gelbearbeitungs-/Färbeprogramms überprüfen, daß: 

- der Färbelösungsbehälter 300 ml Färbelösung enthält ; 

- der Entfärbelösungsbehälter mindestens 1 Liter Entfärbelösung enthält ; 

- der Abfallbehälter leer ist. 

Hinweise zum Anschluß an die Reagenzkanäle werden am Monitor des Gerätes angezeigt (drücken Sie dazu die Taste KANAELE). 

WICHTIG: Nicht vergessen, die nicht benötigten Kanäle zu blockieren. 

8. Im Gerätemenü das Färbeprogramm «PROT./B1-B2/Hb» wählen, und den Vorgang durch Drücken der «START»-Taste (grüner Pfeil auf der 

rechten Seite der Tastatur) starten. 

Während der Färbe-, Entfärbe- und Trocknungsschritte bleibt das Färbemodul verriegelt. 

Nach einer Abkühlphase des Moduls ertönt ein akustisches Signal, und das Färbemodul entriegelt sich (die Luftkühlung erfolgt solange, bis 

der Gel-Halter entnommen wird). 

III. ABSCHLUSS DER GELBEARBEITUNG 

1. Den Gel-Halter aus dem Färbemodul nehmen, die Bügel nach oben klappen und das getrocknete Gel entnehmen. 

ZU BEACHTEN: Nach der Färbung / Entfärbung des Gels und vor der Densitometrie / dem Scannen kann mit dem Gel ein zusätzlicher 

Waschschritt durchgeführt werden, um den Hintergrund des Gels klarer zu machen und überschüssige Farbe, die als blaue Punkte erscheinen 

kann, zu entfernen. Zu diesem Zweck das Gel mit dem Programm "WASC. ISOENZ/GEL" waschen. 

2. Bei Bedarf die Rückseite (den Plastikfilm) der trockenen Folie mit einem weichen, feuchten Papiertuch reinigen. 

3. Mit einem Densitometer / Scanner bei einer Wellenlänge von 570 nm oder unter Verwendung eines Gelbfilters scannen. 

HINWEIS: Die Migrationslänge kann bei Gelen mit 2 oder 3 Analysereihen unterschiedlich sein, ohne jegliche Beeinträchtigung der Leistung. 

ERGEBNISSE 

Qualitätskontrolle 

Es empfiehlt sich, bei jeder Analysenserie ein getestetes Kontrollserum (z.B. SEBIA Kontrollserum, Bestell-Nr. 4785) mitzuführen. 

Werte 

Das Lesen der gefärbten Elektropherogramme mit dem Densitometer (bei 570 nm) ergibt relative Konzentrationen (Prozentangaben) für die einzelnen 

Proteinfraktionen. 

Mit HYDRAGEL PROTEIN 15/30 Gelen wurden auf dem HYDRASYS System bei einer Gruppe von 158 gesunden Erwachsenen (Frauen und Männer) 

für die einzelnen elektrophoretischen Serumprotein-Hauptfraktionen folgende Normalwerte (Mittelwert ± 2 SD) ermittelt. 

Die Protein Quantifizierung im UV-Licht mit CAPILLARYS ergibt die gleichen Werte, wie die nephelometrischen Methode (besonders für Albumin). 

SEBIA empfiehlt nach dem Einrichten des Scanner-Systems eine Standardisierung der über HYDRAGEL erhaltenen Werte. 

Werte ohne Standardisierung Werte mit CAPILLARYS Standardisierung FRAKTION HYRYS - DVSE - PHORESIS HYRYS - DVSE - PHORESIS Albumin 59,8 - 72,4 % 53,8 - 65,2 % Alpha-1-Globuline 1,0 - 3,2 % 1,1 - 3,7 % Alpha-2-Globuline 7,4 - 12,6 % 8,5 - 14,5 % Betaglobuline 7,5 - 12,9 % 8,6 - 14,8 % 

| Gammaglobuline | 8,0 - 15,8 % | 9,2 - 18,2 % | 

Jedes Labor sollte eigene Normalbereiche ermitteln. 

Interpretation 1-15 

Einige Serumproben können in der Alpha-2 Fraktion je nach Konzentration und Mobilität der Protein-Komponenten eine Aufspaltung der Alpha-2 

Fraktion ergeben (siehe MIGRATIONSMUSTER). 

• Einige Seren besitzen unterschiedliche Phänotypen des Haptoglobins und/oder GC-Globulins. 

• Die Position des Alpha-Lipoproteins hängt von seiner Konzentration und der Lagerung der Probe ab. 

Die angegebenen Literaturhinweise dienen als Hilfe für die Interpretation von serum- und Urinelektropherogrammen siehe LITERATUR. 

Interferenzen und Einschränkungen 

Siehe PROBEN FÜR DIE ANALYSE. 

Es wird darauf hingewiesen, dass aufgrund der derzeitigen Kenntnis des zugrundeliegenden Analysenprinzips (Theorie der Zonenelektrophorese, 

Auflösungsvermögen und Sensitivität) keine Garantie für ein 100 % Erkennen aller monoklonalen Komponenten gewährt werden kann. 

Fehlersuche 

Kommt es trotz sachgerechter Lagerung und Vorbereitung der Materialien und Beachtung der Verfahrensbeschreibung zum Versagen des Tests, 

wenden Sie sich bitte an den SEBIA Kundendienst. 

Datensicherheitsblätter sowie Informationen zur Abfallentsorgung sind bei SEBIA GmbH, Fulda zu erfragen. 

- 19 -


LEISTUNGSDATEN 

Serumanalyse 

Intra-Assay-Reproduzierbarkeit 

Auf HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 Gelen wurden drei (3) Serumproben in je 15 Spuren einer Charge analysiert. Für jede Fraktion und jede 

Serumprobe wurden die Mittelwerte, die SD und der VK (n = 15) berechnet. Die nachstehende Tabelle enthält die Wertebereiche für die drei getesteten 

Proben. 

FRAKTION MITTELWERT (%) SD VK (%) Charge 1 2 3 1 2 3 1 2 3 Albumin 70,4 68,8 65,9 0,2 0,7 0,6 0,3 1,0 0,9 Alpha-1 1,9 1,9 1,3 0,1 0,1 0,1 3,5 3,9 7,3 Alpha-2 9,9 9,4 7,6 0,2 0,2 0,2 1,6 2,6 2,4 Beta 10,6 8,6 7,8 0,4 0,3 0,1 3,3 3,5 1,8 

| Gamma | 7,2 11,4 17,4 | 0,2 0,3 0,3 | 3,4 2,8 2,0 | 

Inter-Assay-Reproduzierbarkeit 

Fünfzehn (15) verschiedene Serumproben wurden an 5 verschiedenen Tagen jeweils auf 3 verschiedenen Gelen unter Verwendung von 

3 HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 Gelserien analysiert. Für alle Serumproben und jede Fraktion wurden die Mittelwerte, die SD und der VK (n = 5) 

berechnet. Die Ergebnisse waren bei allen Proben im wesentlichen gleich. Die nachstehende Tabelle enthält die SD und den VK aller Proben sowie 

den mittleren VK, der aus den gepoolten Variationskoeffizienten aller Proben errechnet wurde (n = 15). 

FRAKTION SD VK (%) MITTLERER VK (%) Albumin 0,2 – 0,9 0,3 – 1,4 0,8 Alpha-1 0,1 – 0,2 2,1 – 9,8 4,6 Alpha-2 0,1 – 0,3 0,9 – 3,1 1,8 Beta 0,1 – 0,3 1,1 – 3,8 2,0 

| Gamma | 0,1 – 0,5 | 1,3 – 5,6 | 2,9 | 

Richtigkeit 

Neunzig (90) verschiedene Proben (pathologische und normale Seren) wurden auf HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 Gelen und einem anderen 

handelsüblichen Agarosegelsystem analysiert. Für die einzelnen Fraktionen ergaben sich folgende Korrelationsparameter zwischen den gepoolten 

Daten der HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 Gele und dem Vergleichsgelsystem (y – HYDRAGEL) 

Fraktion Korrelationskoeffizient y-Schnittpunkt Anstieg Wertebereich in % der verwendeten Proben* Albumin 0,983 3,673 0,942 54,9 - 72,9 Alpha-1 0,984 0,937 0,972 1,2 - 6,7 Alpha-2 0,984 0,635 0,977 7,6 - 16,5 Beta 0,953 -0,071 0,984 6,9 - 15,0 

| Gamma | 0,976 | -0,435 | 1,033 | 6,0 - 18,9 | 

* Die %-Werte wurden mit dem HYDRAGEL 15 & 30 PROTEIN(E) Gelsystem ermittelt. 

Empfindlichkeit 

Aus einer pathologischen Serumprobe mit einer monoklonalen Komponente (21,2 g/l) wurde eine Verdünnungsserie hergestellt. Die Elektrophorese 

der Verdünnungen erfolgte auf HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30. Die visuelle Überprüfung der einzelnen Gele ergab, daß die stärkste Verdünnung mit 

einer gerade noch erkennbaren monoklonalen Bande 1/128 im HYDRAGEL 15 & 30 PROTEIN(E) System betrug. Somit lag die gerade noch 

nachweisbare Konzentration eines monoklonalen Proteins bei 170 mg/l (0,17 g/l). 

HINWEIS: Entsprechend der Position der monoklonalen Komponente und des polyklonalen Hintergrundes in der Gamma-Zone kann die 

Detektionsgrenze variieren. 

Analyse von konzentrierten Urinen 

Die Ergebnisse, die auf dem HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 Gelen erzielt wurden, zeigen eine sehr gute Inter– und Intra-Assay-Reproduzierbarkeit 

für konzentrierte Urine nach quantitativer und qualitativer Analyse. Achtundzwanzig (28) verschiedene Proben (pathologische und normale Urine) 

wurden auf HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 Gelen und einem anderen handelsüblichen Agarosegelsystem aufgetrennt. Es waren keine visuellen 

Unterschiede zwischen den beiden Systemen erkennbar. Die Nachweisgrenze wurde von den höchsten seriellen Verdünnungen eines monoklonalen 

Urinproteins mit einer gerade noch erkennbaren Bande bei 0,48 g/L (480 mg/l) nachgewiesen. 

LITERATUR 



21/03/91, p. 782 à 785. 




Pathology, 1989, 21, p. 35 à 41. 


2nd ed., 1994, 397 pp. 

- 20 -








- Paris. 







MIGRATIONSMUSTER 

+ 

Albumin 

Orosomucoïd 

α1 Antitrypsin 

α1 Antichymotrypsin 

Ceruloplasmin 

GC Globulin 

α2 Makroglobulin 

Haptoglobin 

α Lipoprotein 

Transferrin 

Hämopexin 

Plasminogen 

Fibronektin 

Komplement C3 

β Lipoprotein 

γ Globuline 

G - A - M - D - E 

- 

Alpha-2 Fraktion 

2 (± 5) 2 (± 5) 

1 + 2 + 3 + 4 + 5 1 + 2 + 3 + 4 (± 5) 1 + 3 + 4 (± 5) 

A B C 

1 = α2 Makroglobulin 




5 = α1 Lipoprotein 

- 21 -


GEBRUIKSAANWIJZING 

De HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) en HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 gels zijn bedoeld voor de scheiding van proteïnen in menselijk serum en urine 

door middel van elektroforese op alkalisch gebufferde agarose-gels (pH 9.2). De opzet is dat de normale menselijke serumproteïnen zich opsplitsen 

in vijf hoofdfracties. De kits worden gebruikt in combinatie met het halfautomatische HYDRASYS-instrument. De gescheiden proteïnen worden 

gekleurd met behulp van amidozwart. De electroferogrammen worden visueel geëvalueerd op patroonafwijkingen. Densitometrie levert vervolgens 

een nauwkeurige relatieve kwantificatie van de afzonderlijke zones. 

Iedere gel is bedoeld voor de analyse van: 

• 7 monsters in de HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) kit, 

• 15 monsters in de HYDRAGEL 15 PROTEIN(E) kit, 

• 30 monsters in de HYDRAGEL 30 PROTEIN(E) kit. 

Voor gebruik bij in vitro diagnostiek. 

PRINCIPE VAN DE TEST 1-15 

Proteïne-elektroforese is een bekende techniek die inmiddels routinematig wordt gehanteerd in klinische laboratoria voor het screenen van serum en 

andere lichaamsvloeistoffen op proteïne-afwijkingen. Deze techniek is gebaseerd op de principes van zone-elektroforese, uitgevoerd op een geschikt 

ondersteuningsmedium. Agarose is ontwikkeld tot een veelzijdig en effectief ondersteuningsmedium. Voor wat betreft routinetoepassingen in de 

diagnostiek, splitsen serumproteïnen zich in vijf hoofdfracties. De splitsing hangt hoofdzakelijk af van hun lading bij een gegeven pH-waarde: albumine, 

alfa-1-globulinen, alfa-2-globulinen, bèta-globulinen en gamma-globulinen. Iedere zone bevat één of meer serumproteïnen. De patronen van proteïnen 

in urine lijken op die van serum. De relatieve intensiteit van de fracties of hun aanwezigheid kan echter zeer uiteenlopen, afhankelijk van de 

filtercapaciteit van de nier. 

DE HYDRAGEL 7, 15 EN 30 PROTEIN(E) KITS BEVATTEN DE VOLGENDE REAGENTIA EN ANDERE MATERIALEN 

BESTANDDELEN PROD. NR. 4100 PROD. NR. 4120 PROD. NR. 4140 Agarose-gels (klaar voor gebruik) 10 gels 10 gels 10 gels Gebufferde strips (klaar voor gebruik) 10 pakjes van 2 elk 10 pakjes van 2 10 pakjes van 2 Verdunner voor de kleuroplossing (geconcentreerde oplossing) 1 flesje van 60 ml 1 flesje van 60 ml 1 flesje van 60 ml Amidozwartkleurstof (geconcentreerde oplossing) 1 flesje van 20 ml 1 flesje van 20 ml 1 flesje van 20 ml Applicators 

| 1 pakje van 10 stuks (7 tanden) 1 pakje van 10 stuks (15 tanden) 2 pakjes van 10 stuks (15 tanden) Filterpapier | 1 pakje van 10 stuks | 1 pakje van 10 stuks | 1 pakje van 10 stuks | 

VOOR OPTIMALE RESULTATEN 

Onderdelen uit dezelfde kit dienen altijd samen te worden gebruikt en in overeenstemming met de instructies op de bijsluiter. 

LEES DE GEBRUIKSAANWIJZING ALTIJD ZORGVULDIG DOOR. 

1. AGAROSE-GELS 

Voorbereiding 

De agarose-gels zijn klaar voor gebruik. Iedere gel bevat: agarose, 8 g/l ; tris-barbital buffer, pH 9,2 ± 0,1 ; in de gebruikte concentraties niet schadelijke 

toevoegingen die noodzakelijk zijn voor een optimale werking. 

WAARSCHUWING: De agarose-gels bevatten 0,31 % barbital en 0,34 % natriumbarbital. Niet voor inwendig gebruik! Bij abusievelijke inname 

dient onmiddellijk een arts gewaarschuwd te worden! 

Gebruik 

Draagmedium voor proteïnen-elektroforese. 

Opslag, stabiliteit en tekenen van verval 

De gels moeten horizontaal worden opgeslagen in de originele beschermende verpakking en bij kamertemperatuur (15 tot 30 °C) of gekoeld 

(bij 2 tot 8 °C) bewaard worden. De gels zijn stabiel tot de houdbaarheidsdatum die op de verpakking, of op het verpakkingslabel van de gel, staat 

aangegeven. (De pijl op de voorzijde van de verpakking moet naar boven wijzen.) Vermijd opslag dicht bij een raam of een warmtebron. Vermijd 

belangrijke temperatuurwisselingen tijdens de opslag. NIET INVRIEZEN. 

Verwijder de gel wanneer er: 

(I) 

zich kristallen of neerslag op het oppervlak van de gel vormen, of wanneer de textuur van de oppervlakte van de gel erg zacht wordt (dit geeft 

aan dat de gel bevroren is geweest) ; 

(II) bacteriële of schimmelgroei wordt waargenomen ; 

(III) een abnormale hoeveelheid vloeistof in de gelbox aanwezig is (wijst erop dat afscheiding van buffer uit de gel heeft plaatsgevonden tijdens 

onjuiste opslagomstandigheden). 

2. GEBUFFERDE STRIPS 

Voorbereiding 

Gebufferde sponsstrips zijn gereed voor gebruik. Elke strip bevat: tris-barbital buffer, pH 9,2 ± 0,3 ; natriumazide ; in de gebruikte concentraties niet 

schadelijke toevoegingen die noodzakelijk zijn voor een optimale werking. 

WAARSCHUWING: De gebufferde strips bevatten 0,92 % barbital, 1,03 % natriumbarbital en 0,30 % natriumazide. Niet voor inwendig 

gebruik! Bij abusievelijke inname dient onmiddellijk een arts gewaarschuwd te worden! Bij verwijdering contact met zuren, lood of koper 

vermijden aangezien deze explosieve of giftige verbindingen aangaan met natriumazide. 

Gebruik 

Gebufferde sponsstrips fungeren als bufferreservoir bij elektroforese en zorgen voor contact tussen de gel en de elektroden. 


Bewaar de gebufferde strips horizontaal in de originele beschermende verpakking bij kamertemperatuur of in de koeling. (De pijl aan de voorkant van 

de kitdoos dient omhoog te wijzen.) 

- 22 - 

SEBIA INSTRUCTIEBLAD - Nederlands


De strips blijven stabiel tot aan de uiterste houdbaarheidsdatum die vermeld staat op de verpakking van de kit of de etiketten van de verpakking van 

de gebufferde strips. 

NIET INVRIEZEN. 

Gooi de gebufferde strips weg als de verpakking geopend is en de strips uitdrogen. 

3. VERDUNNER VOOR DE KLEUROPLOSSING 

Bereiding 

De voorraad verdunner voor de kleuroplossing moet toegepast worden volgens de beschrijving in de paragraaf "AMIDOZWART KLEUROPLOSSING". 

Het bevat een zure oplossing. 

Toepassing 

Bij de preparatie van de amidozwart kleuroplossing. 


De voorraad verdunner voor de kleuroplossing wordt bewaard bij kamertemperatuur of gekoeld. De verdunner is stabiel tot de houdbaarheidsdatum 

zoals deze is aangegeven op de verpakking van de kit of op de labels van de flesjes met verdunner voor de kleuroplossing. DIT PRODUCT NIET 

INVRIEZEN! 

Geen natriumazide toevoegen. 

4. AMIDOZWART KLEUROPLOSSING 

Bereiding 

De geconcentreerde amidozwart kleuringoplossing is een viskeuze oplossing die kan geleren. De integriteit van de basisoplossing wordt niet beïnvloed 

door de toename van de viscositeit of de hardwording. 

In alle gevallen adviseren wij u de hieronder beschreven procedure te volgen om de perfecte kleuring te behouden: 

1. Voeg 15 ml verdunningsmiddel aan het flesje met geconcerteerd amidozwart toe. 

2. Sluit het flesje zorgvuldig. 

3. Schut het flesje nu stevig gedurende ongeveer 5 seconden. 

4. Giet de oplossing in de houder van waaruit de kleuroplossing verwerkt wordt. 

5. Herhaal deze stap tweemaal, zo nodig driemaal. 

6. Giet de resterende verdunner in de houder en vul het volume aan tot 300 ml met gedestilleerd of gedeioniseerd water. 

7. Meng de inhoud van de cubitainer stevig gedurende 5 tot 10 minuten. 

De kleuringoplossing is nu gereed voor gebruik. 

OPMERKING : Een onvolledige oplossing van de kleurstof zal een onvolledige kleuring van de albuminefractie opleveren (een laag percentage of een 

wit gat in de fractie). 

Na verdunning bevat de werkzame verdunde kleuroplossing: zuuroplossing pH ≈ 2 ; amidozwart, 0.4 g/dl ; ethyleenglycol, 6.7 % ; additieven, 

ongevaarlijk bij te toegepaste concentraties die nodig zijn voor optimale werking. 

WAARSCHUWING: Schadelijk bij inname. 

Toepassing 

Bij het kleuren van gels tijdens elektroforetische proteïneseparatie. 

BELANGRIJK : De kleuroplossing is ontwikkeld voor het kleuren van een maximum van 10 gels. Na het kleuren van 10 gels dient u de oplossing te 

vervangen. 


Zowel de standaard als de gebruiksoplossingen dienen bij kamertemperatuur of gekoeld bewaard te worden in gesloten containers om verdamping 

te voorkomen. De standaard kleuroplossing is stabiel tot de houdbaarheidsdatum zoals deze is aangegeven op de verpakking van de kit of op het 

label van de flesjes met kleuroplossing. 

De gebruiksoplossing is gedurende 1 maand stabiel. 

De verdunde oplossing kleurstof niet in de buurt van een warmtebron bewaren. 

5. APPLICATORS 

Gebruik 

Voorgesneden applicators, voor eenmalig gebruik, voor het aanbrengen van de monsters. 

Opslag 

De applicators op een droge plaats bij kamertemperatuur of gekoeld bewaren. 

6. FILTERPAPIER - DUN 

Gebruik 

Velletjes filterpapier, voor eenmalig gebruik, voor het absorberen van overtollige vloeistof van het oppervlak van de gel net voor het aanbrengen van 

de monsters. 

Opslag 

Bewaar de dunne velletjes filterpapier op een droge plaats bij kamertemperatuur of in de koeling. 

BENODIGDE REAGENTIA 

1. ONTKLEURINGSOPLOSSING 

Voorbereiding 

Elk flesje ontkleuringsoplossing (SEBIA, prod. nr. 4540, 10 flesjes, 100 ml elk) wordt verdund tot 100 liter met gedestilleerd of gedeïoniseerd water. 

Het is praktisch om een verdunning van een klein deel van het concentraat aan te maken, bijvoorbeeld 5 ml concentraat te verdunnen tot 5 liter, de 

inhoud van de tank voor de ontkleuringsoplossing. Na verdunning bevat de ontkleuringsoplossing: citroenzuur, 0,5 g/l. 

Gebruik 

Voor het ontkleuren van gels, d.w.z. het verwijderen van overtollige en achtergrondkleurstof van de gels. 

Voor het spoelen van het kleurcompartiment na de wasstap. 

Giet om de zuurgraad van de vlekkenoplosser te neutraliseren 15 mL van een 50 % Sodium Hydroxyde-oplossing in de lege afvalbak. 

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De concentraat-ontkleuringsoplossing is stabiel bij kamertemperatuur of gekoeld tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de verpakking of 

de labels op de flesjes met ontkleuringsoplossing. NIET INVRIEZEN. De verdunde ontkleuringsoplossing is, in een afgesloten fles en bij 

kamertemperatuur, gedurende 1 maand stabiel. Geen natriumazide toevoegen. 

Verwijder de verdunde buffer zodra er uiterlijke veranderingen optreden, bijvoorbeeld als hij troebel wordt als gevolg van besmetting met microben. 

Om te voorkomen dat micro-organismen zich kunnen verspreiden in de verdunde ontkleuringsoplossing wanneer deze langer dan een week bewaard 

moet worden, kunt u er 5 µL/dL ProClin 300 aan toevoegen. 

De verdunde, ProClin bevattende ontkleuringsoplossing blijft, indien bewaard in een afgesloten fles bij kamertemperatuur of in de koeling, stabiel tot 

aan de uiterste houdbaarheidsdatum die vermeld staat op de verpakking van de kit of op de etiketten van de flesjes ontkleuringsoplossing. 

2. HYDRASYS SPOELOPLOSSING 

Bereiding 

Ieder flesje geconcentreerde HYDRASYS Spoeloplossing (SEBIA, prod. nr. 4541, 10 flesjes, 80 ml elk) wordt verdund tot 5 liter met gedestilleerd of 

gedeïoniseerd water. 

Na verdunning bevat de spoeloplossing: alkalische buffer, pH 8,8 ± 0,3 ; natriumazide. 

WAARSCHUWING: De geconcentreerde spoeloplossing bevat 0,625 % natriumazide. Niet voor inwendig gebruik! Bij abusievelijke inname 

dient onmiddellijk een arts gewaarschuwd te worden! Bij verwijdering contact met zuren, lood of koper vermijden, aangezien deze 

explosieve of giftige verbindingen vormen met natriumazide, en spoelen met ruime hoeveelheden water. 

Gebruik 

Voor het spoelen van het HYDRASYS Kleuringscompartiment. Gebruik periodiek, d.w.z. als het instrument dagelijks wordt gebruikt, spoelt u het 

kleuringscompartiment wekelijks. 

Voor verdere instructies met betrekking tot het gebruik wordt u verwezen naar de bijsluiter in de verpakking. 


De geconcentreerde oplossing en de verdunde oplossing in gesloten flessen bewaren, bij kamertemperatuur of gekoeld. De oplossingen blijven stabiel 

tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de kit of de labels op de flesjes met spoeloplossing. Ruim de verdunde spoeloplossing op zodra 

deze van aspect verandert, bijvoorbeeld als hij troebel wordt als gevolg van besmetting met microben. 

3. FLUIDIL 

Voorbereiding 

Fluidil (SEBIA, prod. nr. 4587, 1 flesje, 5 ml) is gereed voor gebruik. 

Gebruik 

Voor de verdunning van viskeuze of troebele monsters, bijvoorbeeld sera die cryoglobuline of cryogel bevatten. 


Bewaren bij kamertemperatuur. Blijft stabiel tot de houdbaarheidsdatum zoals aangegeven op de labels op de flesjes met Fluidil. 

Het Fluidil moet vrij van neerslag zijn. 

BENODIGDE UITRUSTING EN ACCESSOIRES 

1. HYDRASYS System SEBIA, prod. nr. 1210 of nr. 1211. 

2. Micro-pipet, voor handmatig dan wel automatisch gebruik, zoals bijvoorbeeld de HYDRAplus SEBIA, prod. nr. 1215, als extra keuzemogelijkheid 

voor het vullen van de monsterapplicators. 

3. Natte Opslagkamer, prod. nr. 1270, geleverd met HYDRASYS. 

4. Container Kit, geleverd met HYDRASYS. 

5. Pipetten: 10 µl en 200 µl. 

6. Densitometer / scanner in staat tot scannen van 82 x 51 mm of 82 x 102 mm gelplaten bij 570 nm of met geel filter: HYRYS SEBIA, DVSE SEBIA 

of FORESE software voor de scanner met vlakke papier doorvoer. Zie voor gebruiks- en kalibratieprocedures de instructies van de fabrikant. 

7. Gelhouder voor halve gels SEBIA, prod. nr. 10043110. 

MONSTERS VOOR ANALYSE 

Verzameling en opslag van monsters 

De aanbeveling geldt dat de analyse wordt uitgevoerd op verse monsters. serum en urine dienen te worden verzameld volgens de vaste procedures die 

gelden voor het uitvoeren van testen in klinische laboratoria. Plaats de monsters zo snel mogelijk na verzameling in de koeling (bij 2 tot 8 °C), en laat 

ze daar maximaal gedurende één week staan. Voor langere opslagperioden kunt u de monsters invriezen (ze blijven dan ten minste een maand stabiel). 

Invriezing van sera met natriumazide, 0,2 g/l, komt de opslagstabiliteit ten goede. 

Invriezen urine met HEPES 0,1 M (pH 6,75) en natriumazide, 0,2 g/l bevordert de kwaliteit van de opslag. 

BELANGRIJK: Gebruik geen boorzuur als conserveermiddel. 

Ontdooide monsters kunnen lichte applicatiesporen vertonen vanwege denaturatie van de proteïne of de lipoproteïne. Opslag bij 2 tot 8 °C en invriezen 

veroorzaken een anodische verschuiving van de bèta-lipoproteïnen in serum uit de bèta-1-zone tot de alfa-2- of alfa-1-zones ; hoe ouder het serum, 

hoe groter de verschuiving. 

Voorbereiding van het monster 

1. Serummonsters 

Gebruik pure serummonsters. Nadat ze in de koeling zijn geplaatst bij 2 tot 8 °C of na invriezing kunnen sommige sera (met name die welke 

cryoglobuline of cryogel bevatten) stroperig worden of vertroebeling gaan vertonen. Dergelijke sera zouden problemen kunnen geven bij de 

applicatie door een belemmerde diffusie door de tandjes van de monsterapplicator. In dergelijke gevallen kunt u 25 µl Fluidil toevoegen aan 75 µl 

serum, en dit gedurende 15 seconden in de vortexmixer zetten. Volg daarna de standaard procedure. 

- 24 -


2. Geconcentreerde urinemonsters 

Wordt de analyse uitgevoerd op urinemonsters die geconcentreerd zijn tot 15 - 20 g/l (met een aangepast apparaat). 

BELANGRIJK: Sommige urinemonsters bevatten een hoge concentratie zout. Dit kan gel-deformatie veroorzaken tijdens de migratie en daardoor 

kunnen de migratieprofielen vertekend raken. Als door een dergelijke vertekening de interpretatie niet nauwkeurig is, dient de urine 

te wordengedialyseerd om de zouten te verwijderen. 

LET OP: Bij troebele urinemonsters (al dan niet geconcentreerd) wordt aanbevolen de hiervoor verantwoordelijke deeltjes te elimineren door 

middel van centrifugatie van de monsters (gedurende 10 minuten bij 3000 toeren per minuut) dan wel door middel van filtratie (op een filter 

van 0,45 µm) teneinde een goede verspreiding te realiseren op de applicators. 

Te vermijden monsters 

• Gebruik geen gehemolyseerde serummonsters. Hemolyse zorgt voor een verhoging in alfa-2- en bèta-zones. 

• Vermijd het gebruik van plasmamonsters. Fibrinogeen geeft een band te zien dicht bij het applicatiepunt, die per abuis zou kunnen worden 

aangezien voor een monoclonale immunoglobuline, waardoor een vertekening zou ontstaan van het percentage van de bijbehorende b-zone. 

• Vermijd het gebruik van oude of onder verkeerde omstandigheden bewaarde urinemonsters waarbij zich enzymatische degradatie van de proteïnen 

zou kunnen voordoen. 

PROCEDURE 

Het HYDRASYS systeem is een semi-automatisch multiparameter-instrument. Tot de geautomatiseerde stappen behoort bewerking van HYDRAGEL 

agarose-gels in de volgende volgorde: applicatie van het monster, elektroforetische migratie, drogen, kleuren, ontkleuren en een laatste droogfase. 

Tot de handmatige stappen behoren: het voorbereiden van de monsters en de gel, en het in werking stellen van het instrument. 

LEES HET HYDRASYS-INSTRUCTIEHANDBOEK NAUWKEURIG. 

I. MIGRATIE 

1. Schakel het HYDRASYS instrument in. 

2. Plaats één voor HYDRAGEL 7 (7 monsters) en PROTEIN(E) 15/30 (15 monsters) of twee voor HYDRAGEL PROTEIN(E) (30 monsters) 

applicator(s) vlak op het tafelblad, met de genummerde applicatieholtes naar boven gericht (Fig. 1). 

- Breng 10 µl puur serummonster of geconcentreerde urine aan in iedere holte. Vul alle applicators binnen 2 minuten. 

- Plaats de applicator(s) in de natte opslagkamer, met de strips omhoog. Manipuleer deze aan het plastic beschermframe van de strips. Laat 

de monsters gedurende 5 minuten, na de applicatie van het laatste monster, in de strips trekken. 

Voor gebruik op een later tijdstip (maximaal 8 uur), dient de gehele kamer in de koeling gezet te worden. 

Voor instructies met betrekking tot het gebruik van de natte opslagkamer wordt u verwezen naar de instructies die bij dit apparaat meegeleverd 

worden. 

3. Open het deksel van de Migratiemodule en til de dragers van de elektroden en de applicators op. 

WAARSCHUWING: Sluit het deksel niet als de dragers nog omhoog staan! 

4. Selecteer het «7 PROTEIN(E)» migratieprogramma voor HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) of het «15/30 PROTEIN(E)» migratieprogramma voor 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30, uit het menu op het instrument (linkerzijde van het bedieningspaneel). 

5. Neem de gebufferde strips uit de verpakking ; manipuleer deze aan de plastic uiteinden. Druk de geperforeerde uiteinden van de plastic 

achterzijde van de strips over de pinnen op de elektrodedrager ; de plastic achterzijde van de strip moet in de richting van de drager 

liggen (Fig. 2). 

6. Pak de HYDRAGEL agarose-gel uit. 

- Rol het dunne filterpapier snel en gelijkmatig uit over het oppervlak van de gel zodat het teveel aan vloeistof geabsorbeerd kan worden. 

Verwijder het filter papier direct. 

WAARSCHUWING : Laat het filterpapier niet te lang in contact met de gel om dehydratatie te voorkomen! 

- Giet 120 µl gedestilleerd of gedeïoniseerd water voor HYDRAGEL 7 PROTEINE of 200 µl gedestilleerd of gedeïoniseerd water voor 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 op het migratieframe dat afgedrukt is op de temperatuurcontroleplaat van de migratiemodule. 

- Plaats de gelplaat (met de gelzijde omhoog) met de rand tegen de begrenzer aan de onderzijde van het afgedrukte frame (Fig. 2). 

- Buig de gel en breng deze naar beneden in het water (Fig. 3). Zorg ervoor dat er geen luchtbellen worden ingesloten, dat het water zich 

onder de gehele gelplaat verspreidt (Fig. 3) en dat de gel parallel met het afgedrukte frame ligt. 

7. Breng beide dragers omlaag. In deze positie raken de gebufferde strips de gel niet. FORCEER DE DRAGERS NIET HELEMAAL NAAR 

BENEDEN. 

8. Haal de applicator(s) uit de natte kamer. Manipuleer deze aan het plastic beschermframe. 

- Klik het beschermframe los van de tanden van de applicator(s). 

- Plaats de applicator met HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) (7 monsters) en HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 (15 monsters) in positie nr. 6 op de 

drager. Plaats de applicators met HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 (30 monsters) respectievelijk in positie nr. 3 en nr. 9. 

BELANGRIJK: De nummers die op de applicator(s) zijn geprint moeten door de bediener gelezen kunnen worden (Fig. 4). 

9. Sluit het deksel van de migratiemodule. 

10. Start de procedure ogenblikkelijk door het indrukken van de «START»-knop (groene pijl aan de linkerzijde van het bedieningspaneel). 

BELANGRIJK: Zorg ervoor dat de ventilatieopening aan de rechterzijde van het instrument niet geblokkeerd is. 

MIGRATIE - BESCHRIJVING VAN DE AUTOMATISCHE STAPPEN 

• De beide dragers worden omlaag gebracht zodat de gebufferde strips en applicator(s) in contact komen met de gel. 

• De drager van de monsterapplicator komt omhoog. 

• Migratie wordt uitgevoerd bij een constante stroom van 10 W bij HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) of bij een constante stroom van 20 W bij HYDRAGEL 

PROTEIN(E) 15/30, bij een temperatuur van 20 °C, gecontroleerd door het Peltier-effect, tot 33 Vh is opgebouwd (gedurende ongeveer 7 minuten). 

• De elektrodedrager komt omhoog zodat de elektroden uitgeschakeld worden. 

• De temperatuur van de controleplaat stijgt naar 65 °C, en de gel wordt gedurende 10 minuten gedroogd. 

• De controleplaat wordt afgekoeld ; als deze een temperatuur van 50 °C bereikt klinkt er een piepsignaal dat aangeeft dat het deksel van de module 

ontsloten wordt. De plaat behoudt deze temperatuur (50 °C) totdat het deksel geopend wordt. Na opening blijft de temperatuur afnemen tot 

deze 20 °C bereikt (in minder dan 5 minuten), waarna een nieuwe migratiecyclus kan beginnen. 

OPMERKING: Gedurende alle migratiestappen blijft het deksel van de migratiemodule vergrendeld. 

- 25 -


II. VOORBEREIDING VAN DE GELVERWERKINGSFASEN 

1. Open het deksel van de migratiemodule. 

2. Verwijder de monsterapplicator(s) en doe deze weg. 

3. Breng beide dragers omhoog, verwijder de gebufferde strips aan hun plastic uiteinden en doe deze weg. 

4. Neem de gedroogde gelfilm eruit voor verdere bewerking. 

5. Maak de elektroden schoon met een vochtig doekje. 

6. Plaats de gel op de gelhouder, met de gelzijde naar de bediener gericht (Fig. 5). Ga daarbij als volgt te werk: 

- Open de gelhouder. 

- Leg deze vlak op het rooster. 

- Plaats de gedroogde gel (met de gelkant naar boven gericht) in de spleten van de beide stangen. 

- Sluit de houder. 

- Zorg ervoor dat de film op de juiste wijze in de houder geplaatst is (Fig. 5). 

7. Plaats de gelhouder in de gelverwerkings- / kleuringsmodule. 

BELANGRIJK: Voordat met het gelverwerkings-/kleuringsprogramma kan worden begonnen, moet het volgende gecontroleerd worden: 

- de kleuringscontainer is gevuld met 300 ml kleuringsoplossing ; 

- de ontkleuringscontainer bevat ten minste 1 liter ontkleuringsoplossing ; 

- de afvalcontainer is leeg. 

Voor de aansluiting van reagent lines: U wordt verwezen naar de informatie op het scherm op het instrument (keuzetoets: REAGENT LINES). 

BELANGRIJK: Vergeet niet de ongebruikte lijnen te blokkeren. 

8. Selecteer het «PROT./B1-B2/Hb» kleuringsprogramma uit het menu op het instrument. Stel de procedure in werking door het indrukken van 

de «START»-knop (groene pijl op de rechterzijde van het bedieningspaneel). 

Gedurende de kleur-, ontkleuren droogstappen blijft het compartiment gesloten. 

Na de koelstap geeft een audiosignaal aan dat het compartiment ontsloten wordt (de ventilatie wordt doorgezet totdat de gelhouder 

verwijderd is). 

III. AFRONDING VAN DE GELVERWERKING 

1. Verwijder de gelhouder uit het compartiment ; open de gelhouder en haal de gedroogde gel eruit. 

LET OP: Na het kleuren of ontkleuren van gels en voorafgaand aan densitometrie of scannen, kunt u een extra spoelfase van de gel toevoegen 

om de achtergrond nog duidelijker te maken en eventueel resterende kleurstof in de vorm van blauwe vlekjes, te verwijderen. Spoel de gel met 

behulp van het ‘WASH ISOENZ/GEL’-programma. 

2. Indien nodig kunt u de achterzijde van de gel (plastic steun) met een vochtig doekje schoonmaken. 

3. Scan de droge gel met een densitometer / scanner met een geel filter of bij 570 nm. 

NOOT: Voor de gels met verschilende rijen (2 of 3) kunnen de migratielengtes aanzienlijk verschillen, zonder de resultaten te beïnvloeden. 

RESULTATEN 

Kwaliteitscontrole 

Het wordt aanbevolen een controleserum (Controleserum, SEBIA prod. nr. 4785) toe te voegen aan elke serie monsters. 

Waarden 

Scannen met de densitometer bij 570 nm van gekleurde elektroforegrammen levert de relatieve concentraties (percentages) van de afzonderlijke 

proteïnenzones op. 

Normale waarden (gemiddeld ± 2 SD) voor de afzonderlijke proteïnenzones in HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 gels zijn vastgesteld op basis van een 

gezonde populatie van 158 volwassenen (mannen en vrouwen). 

De proteïnekwantificering in UV op CAPILLARYS produceert waarden vergelijkbaar met die verkregen via de nefelometrische procedure (in het 

bijzonder bij albumine). SEBIA stelt daarom een standaardisatie van de waarden, zoals verkregen op HYDRAGEL, voor na kalibrering van de 

scanningsystemen. 

Zonder standaardisatie van waarden Met standaardisatie van waarden op CAPILLARYS 

FRACTIE HYRYS - DVSE - PHORESIS HYRYS - DVSE - PHORESIS Albumine 59,8 - 72,4 % 53,8 - 65,2 % Alfa-1 globulinen 1,0 - 3,2 % 1,1 - 3,7 % Alfa-2 globulinen 7,4 - 12,6 % 8,5 - 14,5 % Bèta globulinen 7,5 - 12,9 % 8,6 - 14,8 % 

| Gamma globulinen | 8,0 - 15,8 % | 9,2 - 18,2 % | 

Het wordt aanbevolen dat elk laboratorium zijn eigen normaalwaarden vaststelt. 

Interpretatie 1-15 

Sommige serummonsters kunnen een geringe splitsing vertonen hetgeen afhankelijk is van de concentratie en de mobiliteit van de 

proteïnecomponenten van de alfa-2 zone, zie MIGRATIEPATRONEN. 

• Sommige sera vertonen verschillende fenotypen (Haptoglobine, GC Globuline). 

• Alfa-1 lipoproteïne is afhankelijk van de concentratie en de opslag van het monster. 

Voor aanwijzingen voor de interpretatie van elektroforegrammen van serum- en urineproteïne, zie BIBLIOGRAFIE. 

Interferentie en begrenzingen 

Zie MONSTERS TER ANALYSE. 

Met het oog op de resolutie- en gevoeligheidsbeperkingen van zone-elektroforese is het mogelijk dat niet alle monoclonale componenten met deze 

methode volledig worden gedetecteerd. 

- 26 -


Troubleshooting 

Bel de technische dienst van de leverancier als de test mislukt terwijl u de instructies voor voorbereiding en opslag van materialen, en voor de 

procedure, nauwkeurig hebt gevolgd. 

De veiligheidsbladen behorend bij de reagentia in de Kit als ook informatie over de verwerking van afval of restproducten kunt u verkrijgen bij de 

Technische Dienst van de leverancier. 

UITSLAGEN 

Serum analyse 

Reproduceerbaarheid binnen de serie 

Er werden drie (3) verschillende monsters steeds op 15 tracks aangebracht op de HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 gels uit dezelfde partij. De 

gemiddelden, SD’s en CV’s (n = 15) werden voor elke zone en elke partij afzonderlijk berekend. 

De hiernavolgende tabel laat de resultaten zien voor het serummonster op de 3 geteste gels : 

FRACTIE GEMIDDELD (%) SD CV (%) Serum 1 2 3 1 2 3 1 2 3 Albumine 70,4 68,8 65,9 0,2 0,7 0,6 0,3 1,0 0,9 Alfa-1 1,9 1,9 1,3 0,1 0,1 0,1 3,5 3,9 7,3 Alfa-2 9,9 9,4 7,6 0,2 0,2 0,2 1,6 2,6 2,4 Bèta 10,6 8,6 7,8 0,4 0,3 0,1 3,3 3,5 1,8 

| Gamma | 7,2 11,4 17,4 | 0,2 0,3 0,3 | 3,4 2,8 2,0 | 

Reproduceerbaarheid binnen de series 

Vijftien (15) verschillende serummonsters werden gedurende 5 verschillende dagen steeds op gels uit dezelfde batch van de HYDRAGEL 

PROTEIN(E) 15/30 gels aangebracht. De gemiddelden, SD’s en CV’s (n = 5) werden voor elk serummonster en elke zone afzonderlijk berekend. De 

resultaten waren voor alle monsters vrijwel identiek. 

De hiernavolgende tabel laat het bereik van de SD’s en CV’s zien die alle monsters vertegenwoordigen, alsmede een gemiddelde CV, berekend uit 

de gecombineerde CV’s van alle monsters (n = 15). 

FRACTIES SD CV (%) GEMIDDELDE CV (%) Albumine 0,2 – 0,9 0,3 – 1,4 0,8 Alfa-1 0,1 – 0,2 2,1 – 9,8 4,6 Alfa-2 0,1 – 0,3 0,9 – 3,1 1,8 Bèta 0,1 – 0,3 1,1 – 3,8 2,0 

| Gamma | 0,1 – 0,5 | 1,3 – 5,6 | 2,9 | 

Nauwkeurigheid 

Negentig (90) verschillende monsters (pathologische en normale sera) werden op de HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 gels en een ander commercieel 

beschikbaar agarose gelsysteem aangebracht. De berekende correlatieparameters voor de afzonderlijke zones uit de verzamelde gegevens voor 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 gels versus het vergelijkbare gelsysteem (y-HYDRAGEL) worden weergegeven in de hiernavolgende tabel : 

Fractie Correlatiecoëfficiënt y-Intercept Helling Bereik van % waarden Albumine 0,983 3,673 0,942 54,9 - 72,9 Alfa-1 0,984 0,937 0,972 1,2 - 6,7 Alfa-2 0,984 0,635 0,977 7,6 - 16,5 Bèta 0,953 -0,071 0,984 6,9 - 15,0 

| Gamma | 0,976 | -0,435 | 1,033 | 6,0 - 18,9 | 

* De % waarden zijn zoals bepaald in het HYDRAGEL 15 & 30 PROTEIN(E) systeem. 

Gevoeligheid 

Een pathologisch serummonster met een monoklonaal proteïne (2,12 g/dL) werd serieel verdund en de verdunde oplossingen ondergingen 

elektroforese op de HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 gel. Na de visuele inspectie van de afzonderlijke gels, was de sterkste verdunning, in het 

HYDRAGEL 15 & 30 PROTEIN(E) systeem, met een monoklonale band die onderscheiden kon worden, een verdunning van 1/128. De laagste 

waargenomen concentratie van een monoklonaal proteïne was dus ongeveer 0.017 g/dL. 

LET OP: Afhankelijk van de positie van de monoclonale band en de polyclonale achtergrond van de gammaglobulinenzone kan de 

detecteringsdrempel van een paraproteïne variëren. 

Geconcentreerde urineanalyse 

De resultaten die werden verkregen met HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 gels laten een zeer goede reproduceerbaarheid zien, zowel binnen als 

tussen runs met geconcentreerde urinemonsters, na kwantitatieve en kwalitatieve analyse. Achtentwintig (28) verschillende monsters (van 

pathologische en normale urine) werden op de HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 gels en op een andere commercieel beschikbaar agarose gelsysteem 

aangebracht. Er waren geen visueel herkenbare verschillen tussen de beide systemen. De gevoeligheid van de detectie werd afgeleid uit de hoogste 

seriële oplossingen van een monoklonaal urine proteïne dat een nog te onderscheiden band liet zien bij een verdunning van 0.048 g/dL. 

- 27 -


BIBLIOGRAFIE 



21/03/91, p. 782 à 785. 




Pathology, 1989, 21, p. 35 à 41. 


2nd ed., 1994, 397 pp. 







- Paris. 







MIGRATIEPATRONEN 

Alfa-2 zone : 

+ 

Albumine 

Orosomucoïde 

α1 Antitrypsine 

α1 Antichymotrypsine 

Ceruloplasmine 

GC Globuline 

α2 Macroglobuline 

Haptoglobine 

α Lipoproteïne 

Transferrine 

Hemopexine 

Plasminogen 

Fibronectine 

C3 Complement 

β Lipoproteïne 

γ Globuline 

G - A - M - D - E 

- 

2 (± 5) 2 (± 5) 

1 + 2 + 3 + 4 + 5 1 + 2 + 3 + 4 (± 5) 1 + 3 + 4 (± 5) 

A B C 

1 = α2 Macroglobuline 

2 = Haptoglobine 

3 = Ceruloplasmine 

4 = GC Globuline 

5 = α1 Lipoproteïne 

- 28 -


UTILIZZO 

I gels HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) e HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 sono stati progettati per la separazione delle proteine del siero umano e delle 

urine, mediante elettroforesi su gel di agarosio tamponato in mezzo alcalino (pH 9.2). Lo scopo è di separare le proteine normali del siero umano nelle 

cinque frazioni principali. I kits sono usati in combinazione con il sistema semi-automatico HYDRASYS. 

Le proteine separate, sono colorate con amidoschwarz. Gli elettroforegrammi possono essere valutati visivamente per l’interpretazione dei quadri 

anormali. La densitometria fornisce un’accurata quantificazione relativa delle singole zone. 

Ogni gel di agarosio permette di processare: 

• 7 campioni con il kit HYDRAGEL 7 PROTEIN(E), 

• 15 campioni nel kit HYDRAGEL 15 PROTEIN(E), 

• 30 campioni nel kit HYDRAGEL 30 PROTEIN(E). 

Per uso diagnostico in vitro. 

PRINCIPIO DEL METODO 1-15 

L’elettroforesi delle proteine è una tecnica diffusissima, comunemente usata nei laboratori clinici per la ricerca nel siero ed in altri fluidi biologici di 

alterazioni proteiche. Tale tecnica è basata sul principio della elettroforesi zonale effettuata su di un adatto mezzo di supporto. L’agarosio è stato reso 

un versatile ed efficace mezzo di supporto. Per le applicazioni diagnostiche, le sieroproteine vengono separate, principalmente in base alla loro carica 

elettrica netta ad un determinato pH, nelle cinque frazioni principali: albumina, alfa-1 globuline, alfa-2 globuline, beta globuline e gamma globuline. 

Ogni zona contiene una o più sieroproteine. I quadri delle proteine urinarie assomigliano a quelli del siero. Comunque, l’intensità relativa delle frazioni 

o la loro presenza può variare fortemente in funzione della capacità di filtrazione dei reni. 

REAGENTI E MATERIALI FORNITI NEI KITS HYDRAGEL 7, 15 E 30 PROTEIN(E) 

COMPONENTI PN 4100 PN 4120 PN 4140 Gels di Agarosio (pronti all’uso) 10 gels 10 gels 10 gels Strisce tamponate(pronte all’uso) 10 confezioni da 2 10 confezioni da 2 10 confezioni da 2 Diluente per la soluzione colorante (soluzione concentrata) 1 flacone da 60 ml 1 flacone da 60 ml 1 flacone da 60 ml Colorante amidoschwarz (soluzione concentrata) 1 flacone da 20 ml 1 flacone da 20 ml 1 flacone da 20 ml Applicatori (pronti all’uso) 1 confezione da 10 (7 denti) 1 confezione da 10 (15 denti) 2 confezioni da 10 (15 denti) 

| Cartine da filtro sottili | 1 confezione da 10 | 1 confezione da 10 | 1 confezione da 10 | 

PER RISULTATI OTTIMALI 

I componenti di uno stesso kit devono sempre essere utilizzati insieme, in accordo con le istruzioni contenute nel kit. 

LEGGERE ATTENTAMENTE LE ISTRUZIONI PER L’USO. 

1. GELS DI AGAROSIO 

Preparazione 

I gels di agarosio sono pronti all’uso. Ogni gels di agarosio contiene: agarosio, 8 g/l ; tampone tris-barbital pH 9,2 ± 0.1 ; additivi, non rischiosi alle 

concentrazioni usate, necessari per ottimizzare l’analisi. 

AVVERTENZA: I gels di agarosio contengono 0.31 % di barbital e 0.34 % di barbital sodico. Non ingerire! Se ingerito consultare 

immediatamente un medico ! 

Utilizzo 

Mezzo di supporto per elettroforesi proteiche. 

Conservazione, stabilità e segni di deterioramento 

Conservare i gels orizzontalmente nella confezione originale protettiva a temperatura ambiente (15 - 30 °C) o in frigorifero (2 - 8 °C). I gels sono stabili 

fino alla data di scadenza indicata sulla scatola del kit o sulla confezione del gel. (La freccia sulla scatola del kit deve essere rivolta verso l’alto). Evitare 

la conservazione nelle seguenti condizioni : in prossimità di fenestre ; in prossimità di sorgenti di calore ; in presenza di brusche e/o significative 

variazioni di temperatura. NON CONGELARE. 

Non utilizzare il gel quando: (i) sono presenti cristalli o precipitati sulla superficie del gel oppure la struttura del gel è divenuta molto molle (entrambe 

conseguenze del congelamento del gel) (ii) sono presenti muffe o flora batterica o (iii) è presente, nella scatola che contiene il gel, una quantità 

anormale di liquido (risultato di una fuoriuscita del tampone dal gel dovuta a condizioni di conservazione improprie). 

2. STRISCE TAMPONATE 

Preparazione 

Le strisce di spugna tamponate sono pronte all’uso. Ogni striscia contiene: tampone tris-barbital pH 9,2 ± 0.3 ; sodio azide ; additivi, non rischiosi alle 

concentrazioni usate, necessari per ottimizzare l’analisi. 

AVVERTENZA: Il tampone nelle strisce contiene 0.92 % di barbital, 1.03 % di barbital sodico e 0.30 % di sodio azide. Non ingerire! Se ingerite 

consultare immediatamente un medico! Quando smaltite, evitare il contatto con acidi, piombo o rame poiché possono originare composti 

esplosivi o tossici con la sodio azide. 

Utilizzo 

Le strisce di spugna tamponate funzionano da riserva di tampone per l’elettroforesi ed assicurano il contatto tra il gel e gli elettrodi. 


Conservare le strisce tamponate orizzontalmente nella loro confezione protettiva, a temperatura ambiente o in frigorifero. (La freccia sulla scatola del 

kit deve essere rivolta verso l’alto). 

Le strisce sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulla confezione del kit o sull’etichetta della confezione delle strisce. 

NON CONGELARE. 

Non utilizzare le strisce se la confezione è aperta e le strisce sono asciutte. 

- 29 - 

FOGLIO DI ISTRUZIONI SEBIA - Italiano


3. DILUENTE PER LA SOLUZIONE COLORANTE 

Preparazione 

Il diluente per il colorante deve essere utilizzato come descritto nel paragrafo "COLORANTE AMIDOSCHWARZ". 

Contiene una soluzione acida. 

Utilizzo 

Per la preparazione della soluzione colorante amidoschwarz. 


Conservare il diluente concentrato per il colorante a temperatura ambiente o in frigorifero. E’ stabile fino alla data di scadenza indicata sulla scatola 

del kit o sull’etichetta del diluente. NON CONGELARE. 

Non aggiungere sodio azide. 

4. COLORANTE AMIDOSCHWARZ 

Preparazione 

Il colorante amidoschwarz concentrato è una soluzione viscosa, che può eventualmente gelificare, senza che la qualità della soluzione finale e del 

suo potere colorante siano minimamente alterati. 

Per ottenere una perfetta ricostituzione del colorante, bisogna rispettare il seguente protocollo. 

1. Aggiungere circa 15 mL di diluente del colorante al flacone di amidoschwarz concentrato. 

2. Chiudere accuratamente il flacone. 

3. Agitare con molto vigore il flacone per almeno 5 secondi. 

4. Versare la soluzione ottenuta nel recipiente di preparazione della soluzione di colorazione. 

5. Ripetere questa operazione due o tre volte se necessario. 

6. Versare il resto del diluente nel recipiente di preparazione della soluzione di colorazione. 

7. Completare a 300 mL con acqua distillata o demineralizzata. 

8. Agitare perfettamente questa soluzione per 5 - 10 minuti. 

Il colorante è pronto all’uso. 

NOTA : Una risospensione incompleta del colorante può causare una cattiva colorazione della frazione albumina (percentaule bassa di albumina o 

svuotamento al centro della frazione). 

Dopo la diluizione, la soluzione di colorante contiene: soluzione acida pH ≈ 2 ; amidoschwarz, 4 g/L ; Etilen-glicol, 6,7 % ; componenti, non pericolosi 

alle concentrazioni utilizzate, necessarie per i risultati ottimali. 

AVVERTENZA: Nocivo in caso di ingestione. 

Utilizzo 

Per la colorazione dei gels dopo la separazione elettroforetica delle proteine. 

IMPORTANTE: La soluzione colorante è destinata alla colorazione di solamente 10 gels. Sostituire la soluzione colorante dopo 10 cicli di colorazione. 


Conservare sia la soluzione concentrata del colorante sia quella diluita a temperatura ambiente o in frigorifero, in contenitore chiuso per prevenire 

l’evaporazione. La soluzione concentrata del colorante è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla scatola del kit o sull’etichetta del colorante. 

Il colorante diluito è stabile 1 mese. 

Non conservare la soluzione di colorante diluita in prossimità di una sorgente di calore. 

5. APPLICATORI 

Utilizzo 

Applicatori monouso, pretagliati, per l’applicazione dei campioni. 

Conservazione 

Conservare gli applicatori lontano dall’umidità a temperatura ambiente o in frigorifero. 

6. CARTINE DA FILTRO 

Utilizzo 

Cartine sottili monouso, pretagliate, per l’eliminazione dell’eccesso di liquido dalla superficie del gel prima dell’applicazione dei campioni. 

Conservazione 

Conservare le cartine da filtro sottili in luogo secco a temperatura ambiente o in frigorifero. 

REAGENTI RICHIESTI 

1. SOLUZIONE DECOLORANTE 

Preparazione 

Ogni flacone di soluzione decolorante concentrata (SEBIA, PN 4540, 10 flaconi da 100 ml ciascuno) deve essere diluito a 100 litri con acqua 

deionizzata o distillata. Per convenienza diluire solo 5 ml di soluzione concentrata a 5 litri, ossia al volume della tanica della soluzione decolorante. 

Dopo la diluizione la soluzione decolorante contiene: acido citrico, 0.5 g/l. 

Utilizzo 

Come decolorante, ossia per rimuovere l’eccesso di colorante e la colorazione di fondo dal gel. 

Per il risciacquo del compartimento di colorazione dopo la fase di lavaggio. 

Per neutralizzare l’acidità della soluzione decolorante versare, nella tanica vuota dei liquidi reflui, 15 mL di una soluzione al 50 % di Idrossido di Sodio. 


Conservare la soluzione decolorante concentrata a temperatura ambiente o in frigorifero. La soluzione concentrata è stabile fino alla data di scadenza 

indicata sulla scatola del kit o sulla etichetta del decolorante. La soluzione diluita del decolorante è stabile per una settimana a temperatura ambiente 

in flacone chiuso. Non aggiungere sodio azide. 

Gettare la soluzione decolorante diluita se muta di aspetto, per esempio, diviene torbida a causa di contaminazioni batteriche. 

Per prevenire le proliferazioni microbiche nella soluzione decolorante diluita, da conservare oltre una settimana, aggiungere 5 µL/dL di ProClin 300. 

La soluzione decolorante diluita addizionata con ProClin e conservata a temperatura ambiente o in frigorifero in bottiglia chiusa, è stabile fino alla data 

di scadenza indicata sulla confezione o sull’etichetta del flacone di decolorante. 

- 30 -


2. SOLUZIONE DI LAVAGGIO HYDRASYS 

Preparazione 

Ogni flacone di Soluzione di Lavaggio concentrata HYDRASYS (SEBIA, PN 4541, 10 flaconi da 80 ml ciascuno) deve essere diluito a 5 litri con acqua 

distillata o deionizzata. Dopo la diluizione la soluzione di lavaggio contiene: tampone alcalino pH 8.8 ± 0.3 ; sodio azide. 

AVVERTENZA: La soluzione di lavaggio concentrata contiene 0.625 % di sodio azide. Non ingerire! Se ingerita consultare immediatamente 

un medico! La sodio azide può portare alla formazione di composti tossici o esplosivi se posta a contatto con acidi, piombo o rame. Quando 

smaltita, fare scorrere un’abbondante quantità di acqua. 

Utilizzo 

Serve per lavare il compartimento di colorazione di HYDRASYS. Usare periodicamente ; per esempio, se lo strumento è usato giornalmente, lavare 

il compartimento di colorazione settimanalmente. 

Consultare l’inserto nella confezione per la procedura di utilizzo. 


Conservare sia la soluzione lavaggio concentrata che quella diluita a temperatura ambiente o in frigorifero in contenitore chiuso. Entrambe le soluzioni 

sono stabili fino alla data di scadenza indicata sulla etichetta del flacone della soluzione di lavaggio. 

Gettare la soluzione di lavaggio diluita se muta di aspetto, per esempio, diviene torbida a causa di contaminazioni batteriche. 

3. FLUIDIL 

Preparazione 

Fluidil (SEBIA, PN 4587, 5 ml) è pronto all’uso. 

Utilizzo 

Per diluire campioni viscosi o torbidi, per esempio, sieri contenenti crioglobuline o criogel. 


Conservare a temperatura ambiente. Fluidil è stabile fino alla data di scadenza indicata sulla etichetta del flacone. 

Fluidil deve essere privo di precipitato. 

APPARECCHIATURE ED ACCESSORI RICHIESTI MA NON FORNITI 

1. Sistema HYDRASYS SEBIA, PN 1210 o PN 1211. 

2. Dispensatore manuale, o in alternativa, per il caricamento degli applicatori dei campioni, campionatore automatico HYDRAplus SEBIA , PN 1215. 

3. Camera umida, PN 1270, fornita con HYDRASYS. 

4. Kit di taniche fornito con HYDRASYS. 

5. Pipette: 10 µl e 200 µl. 

6. Densitometro / scanner in grado di effettuare la scansione di gels 82 x 51 mm o 82 x 102 mm a 570 nm o con filtro giallo: HYRYS SEBIA, DVSE 

SEBIA o programma PHORESIS per Scanner a piano fisso. Fare riferimento alle istruzioni del produttore per le procedure di lavoro e di 

calibrazione. 

7. Telaio porta gel per gel da 7, SEBIA, PN 10043110. 

CAMPIONI PER L’ANALISI 

Raccolta e conservazione del campione 

Per l’analisi sono raccomandati campioni freschi. I sieri e le urine devono essere prelevati seguendo le procedure convenzionali per i tests clinici di 

laboratorio. Refrigerare i campioni (2 - 8 °C) subito dopo il prelievo fino ad una settimana. Per periodi di conservazioni più lunghi, mantenere i campioni 

congelati (stabili almeno 1 mese). 

I sieri congelati con aggiunta di sodio azide, 0.2 g/l migliorano la stabilita’ di conservazione. 

I urine congelati con HEPES 0.1 M (pH 6.75) e sodio azide, 0.2 g/l si migliora la conservazione. 

IMPORTANTE: Non usare acido borico come conservante. 

I campioni scongelati possono dare luogo a leggeri segni nel punto di applicazione causati dalla denaturazione delle proteine o delle lipoproteine. La 

conservazione a 2 - 8 °C ed il congelamento causano, nel siero, lo spostamento anodico delle beta-lipoproteine dalla zona beta-1 alle zone alfa-1 o 

alfa-2 ; più vecchio è il siero, maggiore è tale spostamento. 

Preparazione del campione 

1. Sieri 

Utilizzare campioni di siero non diluiti. Dopo refrigerazione a 2 - 8 °C o congelamento, alcuni sieri (in particolare quelli contenenti crioglobuline o 

criogel), possono diventare viscosi o torbidi. Tali sieri possono presentare problemi di applicazione dovuti alla impedita diffusione nei dentini 

dell’applicatore. In tali casi, aggiungere 25 µl di Fluidil a 75 µl di campione ed agitare per 15 secondi. Seguire quindi la procedura standard. 

2. Urine concentrate 

L’analisi viene svolta con campione concentrato fino a 15 - 20 g/l (con idoneo mezzo). 

IMPORTANTE: Alcune urine hanno un alto contenuto di sali. Questo puo` produrre una deformazione del gel durante la migrazione e, quindi, 

distorsione del profilo elettroforetico. Per evitare questo problema e` necessario eliminare i sali con una dialisi. 

NOTA: La diffusione nei dentini degli applicatori di campioni di urina (intera o concentrata) torbidi, può essere ostacolata. Si raccomanda di 

rimuovere il particolato centrifugando i campioni (es., 10 minuti a 3000 rpm) o per filtrazione (es., filtri da siringa 0.45 µm). 

Campioni da evitare 

• Non utilizzare campioni di siero emolizzati. L’emolisi causa un aumento delle zone alfa-2 e beta. 

• Evitare campioni di plasma. Il fibrinogeno dà luogo ad una banda vicino al punto di applicazione che può essere scambiata per una immunoglobulina 

monoclonale ed alterare la quantificazione percentuale della zona beta corrispondente. 

• Evitare campioni di urina vecchi o conservati impropriamente nei quali può intervenire la degradazione enzimatica delle proteine. 

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PROCEDURA 

Il sistema HYDRASYS è uno strumento semi-automatico multiparametrico. Le fasi automatiche includono il trattamento dei gels di agarosio 

HYDRAGEL, nella seguente sequenza: applicazione del campione, migrazione elettroforetica, essiccazione, colorazione, decolorazione ed 

essiccazione finale. Le fasi manuali includono la manipolazione dei campioni e dei gels e la preparazione dello strumento per l’uso. 

LEGGERE ATTENTAMENTE IL MANUALE DI ISTRUZIONE HYDRASYS. 

I. MIGRAZIONE 

1. Accendere lo strumento HYDRASYS. 

2. Posizionare un applicatore per HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) (7 campioni) e per HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 (15 campioni), o due 

applicatori per HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 (30 campioni) su di una superficie piana con i numeri dei pozzetti correttamente orientati verso 

l’alto (Fig. 1). 

- Applicare in ogni pozzetto 10 µl di siero intero o di urina concentrata. Caricare ciascun applicatore entro 2 minuti. 

- Inserire l’applicatore(i) nella camera umida di conservazione con i dentini rivolti verso l’alto (maneggiare i depositori mediante la cornice 

protettiva in plastica). Lasciare che i campioni diffondano nei dentini per 5 minuti dall’applicazione dell’ultimo campione. Mantenere la 

camera così preparata in frigorifero se si intende usare gli applicatori più tardi (fino ad 8 ore). 

Consultare l’inserto all’interno della confezione della camera umida per ulteriori dettagli. 

3. Aprire lo sportello del modulo di migrazione ed alzare le cornici mobili porta elettrodi e porta applicatori. 

AVVERTENZA: Non chiudere mai lo sportello se le cornici mobili sono alzate! 

4. Selezionare dal menù dello strumento (lato sinistro della tastiera) il programma di migrazione «7 PROTEIN(E)» per il kit HYDRAGEL 

7 PROTEIN(E), il programma di migrazione «15/30 PROTEIN(E)» per il kit HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30. 

5. Estrarre le strisce tamponate dalla confezione ; maneggiarle mediante le estremità in plastica. Agganciare le estremità in plastica forate, sugli 

spinotti della cornice porta elettrodi ; le estremità in plastica della striscia devono essere rivolte verso la cornice mobile (Fig. 2). 

6. Estrarre il gel dalla confezione. 

- Eliminare rapidamente l’eccesso di liquido in superficie, tamponando il gel con una carta assorbente sottile 

ATTENZIONE : Fate attenzione a non lasciare la carta da filtro troppo a lungo a contatto con il gel per evitarne la disidratazione. 

- Dispensare sul terzo inferiore del riquadro stampato sulla Piastra di Controllo Temperatura del modulo di migrazione, 120 µl di acqua 

distillata o deionizzata per HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) o 200 µl per HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30. 

- Posizionare la lastrina del gel (gel rivolto verso l’alto) con l’estremità inferiore a ridosso dello scalino alla base del riquadro (Fig. 3). 

- Curvare il gel ed adagiarlo sulla goccia di acqua (Fig. 3). Assicurarsi che non siano rimaste intrappolate bolle d’aria. L’acqua deve essere 

uniformemente stratificata al di sotto della lastrina di gel e questa deve essere allineata all’interno del riquadro stampato. 

7. Abbassare entrambe le cornici mobili. In questa posizione le strisce tamponate non toccano il gel. NON FORZARE LE CORNICI MOBILI AD 

ABBASSARSI ULTERIORMENTE. 

8. Estrarre l’applicatore(i) dalla camera di umidificazione. Maneggiare gli applicatori mediante la cornice di protezione. 

- Staccare la cornice di protezione dei dentini dell’applicatore. 

- Con 7 e 15 campioni inserire l’applicatore, sulla cornice mobile, in posizione No. 6, con 30 campioni inserire i due applicatori rispettivamente 

in posizione No. 3 e 9. 

IMPORTANTE: I numeri stampati sugli applicatori devono essere rivolti verso l’operatore (Fig. 4). 

9. Chiudere lo sportello del modulo di migrazione. 

10. Avviare la procedura immediatamente premendo la freccia verde «START» sul lato sinistro della tastiera. 

IMPORTANTE: Assicurarsi che la griglia di ventilazione sul lato destro dello strumento non sia ostruita. 

MIGRAZIONE - DESCRIZIONE DELLE FASI AUTOMATICHE 

• Le due cornici mobili vengono abbassate in modo che le strisce tamponate e gli applicatori entrino in contatto con il gel. 

• La cornice mobile porta applicatori si alza. 

• Ha luogo la migrazione in condizioni di potenza costante 10 W per HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) o 20 W per HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30, a 20 °C 

controllati mediante effetto Peltier, fino ad accumulare 33 Vh (per circa 7 minuti). 

• La cornice mobile porta elettrodi si alza interrompendo il contatto. 

• La temperatura della piastra sale fino a 65 °C, tale temperatura è mantenuta 10 minuti per essiccare il gel. 

• La piastra viene raffreddata ; quando raggiunge 50 °C un segnale acustico avverte che lo sportello del modulo di migrazione è stato sbloccato. La 

temperatura della piastra rimane a 50 °C finchè lo sportello non viene alzato. 

NOTA: Lo sportello del modulo di migrazione rimane bloccato durante tutte le fasi della migrazione 

II.TRATTAMENTO DEL GEL 

1. Aprire lo sportello. 

2. Rimuovere e gettare gli applicatori. 

3. Alzare entrambe le cornici mobili, togliere le strisce tamponate mediante le estremità in plastica e gettarle. 

4. Estrarre il gel essiccato pronto per le fasi successive. 

5. Dopo ogni utilizzo, pulire gli elettrodi e la Piastra di Controllo Temperatura con della carta soffice inumidita. 

6. Aprire il telaio porta gel. Metterlo in posizione piana ed inserire la lastrina (con il gel rivolto verso l’operatore) nelle scanalature delle due guide, 

quindi chiudere il telaio. Assicurarsi che il gel sia correttamente posizionato all’interno del telaio (Fig. 5). 

7. Inserire il telaio porta gel nel Modulo di trattamento/colorazione del gel. 

IMPORTANTE: Prima di avviare il programma di trattamento/colorazione del gel controllare che: 

- la tanica del colorante contenga 300 ml di soluzione colorante. 

- la tanica del decolorante contenga almeno 1 litro di soluzione decolorante. 

- la tanica dei liquidi reflui sia vuota. 

Per la connessione dei reagenti: Riferirsi alle informazioni mostrate sul visore dello strumento (premere il tasto: VISUAL CANALI). 

IMPORTANTE: Non dimenticare di chiudere gli ingressi dei reagenti non utilizzati. 

8. Selezionare il programma di colorazione «PROT./B1-B2/Hb» dal menù dello strumento ed avviare la procedura premendo il tasto «START» 

(freccia verde sul lato destro dello strumento). 

- 32 -


Durante i cicli di colorazione, decolorazione e asciugatura, il compartimento rimane bloccato. 

Dopo il ciclo di raffreddamento, un segnale acustico indica che il compartimento è sbloccato (la ventilazione è mantenuta fino a quando il 

supporto del gel viene rimosso) 

III. COMPLETAMENTO DEL TRATTAMENTO DEL GEL 

1. Rimuovere il telaio porta gel dal compartimento ; aprirlo e rimuovere il gel essiccato. 

NOTA: Se dopo la fase di colorazione/decolorazione sul gel sono visibili macchie blu residuali, una fase addizionale di lavaggio con il 

programma "LAV. ISOENZ/GEL", prima della lettura densitometrica, permette di eliminarle o di attenuarle fortemente. 

2. Se necessario pulire il retro della lastrina essiccata (la faccia con la plastica di supporto) con una carta soffice inumidita. 

3. Effettuare la scansione usando un densitometro / scanner a 570 nm o con filtro giallo. 

NOTA : Le lunghezze di migrazione dei gels con 2 o 3 righe analitiche possono essere sensibilmente differenti, senza alcuna conseguenza sui 

risultati. 

RISULTATI 

Controllo Qualità 

Si consiglia di includere, in ogni gruppo di campioni processati, un siero di controllo (Siero di Controllo SEBIA PN 4785). 

Valori 

La lettura densitometrica (a 570 nm) del protidogramma fornisce le concentrazioni relative (percentuali) delle singole zone proteiche. 

I valori normali (media ± 2DS) per le principali frazioni elettroforetiche sieroproteiche su HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30, sono stati determinati su una 

popolazione sana di 158 adulti (uomini e donne). 

La quantificazione delle proteine con gli UV su CAPILLARYS da’ dei valori simili alla nefelometria (in particolare per l’albumina). SEBIA propone 

dunque una standardizzazione dei valori ottenuti su HYDRAGEL effettuando una calibrazione dei sistemi di lettura. 

Valori senza standardizzazione Valori standardizzati su CAPILLARYS FRAZIONE HYRYS - DVSE - PHORESIS HYRYS - DVSE - PHORESIS Albumina 59.8 - 72.4 % 53.8 - 65.2 % Alfa-1 globuline 1.0 - 3.2 % 1.1 - 3.7 % Alfa-2 globuline 7.4 - 12.6 % 8.5 - 14.5 % Beta globuline 7.5 - 12.9 % 8.6 - 14.8 % 

| Gamma globuline | 8.0 - 15.8 % | 9.2 - 18.2 % | 

Si raccomanda ad ogni laboratorio di stabilire i propri valori normali. 

Interpretazione 1-15 

Alcuni campioni di siero possono mostrare, in zona alfa-2, un lieve sdoppiamento della frazione, funzione della concentrazione e della mobilità delle 

proteine che la compongono, vedi QUADRO DI MIGRAZIONE. 

• Alcuni campioni contengono fenotipi diversi di Aptoglobina o di GC Globulina. 

• La posizione dell’alfa-1 lipoproteina dipende dalla sua concentrazione e dalla conservazione del campione. 

Per un aiuto nell’interpretazione degli elettroforegrammi delle sieroproteine o delle urine concentrate, vedi BIBLIOGRAFIA. 

Interferenze e limitazioni 

Vedi CAMPIONI PER L’ANALISI. 

Per i limiti di risoluzione e sensibilità dell’elettroforesi zonale, è possibile che alcune componenti monoclonali possano non essere rilevate con questo 

metodo. 

Eliminazione errori 

Contattare il Servizio di Assistenza Tecnica del fornitore quando, nonostante siano state seguite accuratamente le istruzioni per la preparazione e 

conservazione dei materiali e per la procedura di impiego, i risultati del test non rispettino le caratteristiche. 

Le Schede di Sicurezza dei componenti del kit e le informazioni per lo smaltimento dei rifiuti sono disponibili presso il Servizio di Assistenza Tecnica 

SEBIA. 

DATI SULLE PRESTAZIONI 

Analisi del siero 

Precisione nella serie 

Tre (3) diversi campioni di siero sono stati processati ciascuno nelle 15 piste di gels HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 dello stesso lotto. Le medie, SD 

e CV (n = 15) sono state calcolate per ciascun campione e frazione. 

La tabella che segue mostra i risultati per i 3 campioni di siero. 

FRAZIONE MEDIA (%) SD CV (%) Siero 1 2 3 1 2 3 1 2 3 Albumina 70,4 68,8 65,9 0,2 0,7 0,6 0,3 1,0 0,9 Alfa-1 1,9 1,9 1,3 0,1 0,1 0,1 3,5 3,9 7,3 Alfa-2 9,9 9,4 7,6 0,2 0,2 0,2 1,6 2,6 2,4 Beta 10,6 8,6 7,8 0,4 0,3 0,1 3,3 3,5 1,8 

| Gamma | 7,2 11,4 17,4 | 0,2 0,3 0,3 | 3,4 2,8 2,0 | 

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Precisione tra serie 

Quindici (15) diversi campioni di siero sono stati processati ciascuno in 5 diverse giornate utilizzando lo stesso lotto di HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30. 

Media, SD e CV (n = 5) sono stati calcolati per ciascun campione e ciascuna frazione. I risultati sono stati sostanzialmente uguali per tutti i campioni. 

La tabella che segue mostra le variazioni di SD e CV rappresentative di tutti i campioni ed il CV medio calcolato dai CV aggregati per tutti i campioni 

(n = 15). 

FRAZIONE SD CV (%) CV MEDIO (%) Albumina 0,2 – 0,9 0,3 – 1,4 0,8 Alfa-1 0,1 – 0,2 2,1 – 9,8 4,6 Alfa-2 0,1 – 0,3 0,9 – 3,1 1,8 Beta 0,1 – 0,3 1,1 – 3,8 2,0 

| Gamma | 0,1 – 0,5 | 1,3 – 5,6 | 2,9 | 

Accuratezza 

Novanta (90) campioni diversi (sieri normali e patologici) sono stati processati su gels HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 e su un diverso sistema su gel 

di agarosio reperibile in commercio. I parametri di correlazione calcolati, per le singole frazioni di HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 verso il sistema di 

riferimento (y-HYDRAGEL) sono: 

Frazione Coefficiente di correlazione y-Intercetta Pendenza Variazione dei valori*% dei campioni utilizzati Albumina 0,983 3,673 0,942 54,9 - 72,9 Alpha-1 0,984 0,937 0,972 1,2 - 6,7 Alpha-2 0,984 0,635 0,977 7,6 - 16,5 Bêta 0,953 -0,071 0,984 6,9 - 15,0 

| Gamma | 0,976 | -0,435 | 1,033 | 6,0 - 18,9 | 

* Valori % determinati con il sistema HYDRAGEL 15 & 30 PROTEIN(E). 

Sensibilità 

Un campione di siero patologico, con una proteina monoclonale di 2,12 g/dL è stato diluito scalarmente e le diluizioni processate su gels HYDRAGEL 

PROTEIN(E) 15/30. Dopo l’ispezione visiva del gel, la diluizione più alta con una banda monoclonale distinguibile è risultata essere 1/128. Quindi la 

più bassa concentrazione di proteina monoclonale rilevabile è stata 0,017 g/dL. 

NOTA: In funzione della posizione della banda monoclonale e del fondo policlonale della zona delle gammaglobuline, il limite di rilevamento di una 

paraproteina può variare. 

Analisi di urine concentrate 

Dopo l’analisi qualitativa e quantitativa dei campioni di urina concentrati, i risultati ottenuti con i gels HYDRAGEL PROTEINE 15/30, indicano una 

riproducibilità molto buona nella serie e tra serie. Ventotto (28) diversi campioni (urine normali e patologiche) sono stati processati su gels HYDRAGEL 

PROTEINE 15/30 e su un diverso sistema su gels di agarosio reperibile in commercio. Tra i due sistemi non sono state rilevate differenze visibili. La 

sensibilità di rilevamento è stata determinata dalla più alta diluizione scalare di una proteina urinaria monoclonale in grado di fornire una banda 

distinguibile a 0,048 g/dL. 

BIBLIOGRAFIA 



21/03/91, p. 782 à 785. 




Pathology, 1989, 21, p. 35 à 41. 


2nd ed., 1994, 397 pp. 






(9) Le Carrer D. Électrophorèse et Immunofixation des Protéines Sériques, Interprétations illustrées. Laboratoires SEBIA, 1994, 120 pp, Ed. Hatier - Paris. 







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QUADRO DI MIGRAZIONE 

+ 

Albumina 

Orosomucoide 

α1 Antitripsina 

α1 Antichimotripsina 

Ceruloplasmina 

GC Globulina 

α2 Macroglobulina 

Aptoglobina 

α Lipoproteina 

Transferrina 

Emopexina 

Plasminogeno 

Fibronectina 

Complemento C3 

β Lipoproteina 

γ Globulina 

G - A - M - D - E 

- 

Dettaglio della zona alfa-2 

2 (± 5) 2 (± 5) 

1 + 2 + 3 + 4 + 5 1 + 2 + 3 + 4 (± 5) 1 + 3 + 4 (± 5) 

A B C 

1 = α2 Macroglobulina 

2 = Aptoglobina 

3 = Ceruloplasmina 

4 = GC Globulina 

5 = α1 Lipoproteina 

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ESPECIFICACIONES DE USO 

Los geles HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) y HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 están diseóados para la separación de las proteínas del suero y orina 

humanas mediante electroforesis en geles de agarosa alcalinos (pH 9.2). Las proteínas del suero humano normal se separan en cinco fracciones 

principales adrede. Los kits se utilizan junto con el instrumento semiautomático HYDRASYS. Las proteínas separadas se tiñen con negro amido. Las 

separaciones electroforéticas son evaluadas visualmente para la detección de anormalidades en el patrón de migración. La densitometría proporciona 

una cuantificación relativa exacta de las fracciones individuales. 

Cada gel de agarosa está diseñado para analizar : 

• 7 muestras en el kit HYDRAGEL 7 PROTEIN(E), 

• 15 muestras en el kit HYDRAGEL 15 PROTEIN(E), 

• 30 muestras en el kit HYDRAGEL 30 PROTEIN(E). 

Para Uso Diagnóstico In Vitro. 

PRINCIPIO DEL TEST 1-15 

La electroforesis de proteínas es una técnica arraigada que se utiliza rutinariamente en los laboratorios clÌnicos para investigar la presencia de 

anormalidades proteicas en el suero y en otros fluidos corporales. Está basada en los principios de la electroforesis de zona realizada en un medio 

de soporte adecuado. La agarosa se ha convertido en un medio de soporte versátil y efectivo. Para aplicaciones diagnósticas de rutina, las proteínas 

séricas se separan en cinco fracciones principales, de acuerdo con su carga a un pH dado: albúmina, alfa-1 globulinas, alfa-2 globulinas, beta 

globulinas y gamma globulinas. Cada fracción contiene una o más proteínas séricas. Los patrones proteicos de la orina se parecen a los del suero. 

Sin embargo, las intensidades relativas de las fracciones o su presencia pueden variar enormemente en función de la capacidad de filtración del riñón. 

REACTIVOS Y MATERIALES SUMINISTRADOS EN LOS KITS HYDRAGEL 7, 15 Y 30 PROTEIN(E) 

ARTÍCULO PN 4100 PN 4120 PN 4140 Geles de agarosa (listos para su uso) 10 geles 10 geles 10 geles Esponjas tamponadas (listas para su uso) 10 bolsas de 2 10 bolsas de 2 10 bolsas de 2 Diluyente del colorante (solución stock) 1 frasco, 60 ml 1 frasco, 60 ml 1 frasco, 60 ml Colorante Negro Amido (solución stock) 1 frasco, 20 ml 1 frasco, 20 ml 1 frasco, 20 ml Aplicadores (listos para su uso) 1 caja de 10 (7 dientes) 1 caja de 10 (15 dientes) 2 cajas de 10 (15 dientes) 

| Papeles de filtro | 1 bolsa de 10 | 1 bolsa de 10 | 1 bolsa de 10 | 

PARA OBTENER RESULTADOS ÓPTIMOS 

Los elementos de un mismo kit deben utilizarse conjuntamente y según las instrucciones incluidas. 

LEER ATENTAMENTE LAS INSTRUCCIONES. 

1. GELES DE AGAROSA 

Preparación 

Los geles de agarosa están listos para su uso. Cada gel contiene: agarosa, 8 g/l ; tampón tris-barbital pH 9,2 ± 0.1 ; aditivos, inocuos a las 

concentraciones usadas, necesarios para un resultado óptimo. 

ATENCIÓN: Los geles de agarosa contienen barbital 0.31 % y barbital sódico 0.34 %. ¡No ingerir! ¡En caso de ingestión accidental, consultar 

inmediatamente al médico ! 

Uso 

Medio de soporte para la electroforesis de proteínas. 

Almacenamiento, estabilidad y señales de deterioro 

Almacenar los geles horizontalmente en sus recipientes protectores originales a temperatura ambiente (15 a 30 °C) o refrigerados (2 a 8 °C). Son 

estables hasta la fecha de caducidad indicada en la caja del kit y en sus recipientes protectores. (La flecha situada en la cara frontal de la caja del 

kit debe apuntar hacia arriba). Evitar su almacenamiento cerca de una ventana o de una fuente de calor. Evitar variaciones importantes de 

temperatura durante su almacenamiento. NO CONGELAR. 

Desechar cuando: (i) haya cristales o precipitados en la superficie del gel o su textura sea muy blanda (consecuencias de la congelación del gel) ; 

(ii) se observe crecimiento bacteriano o fúngico ; o (iii) se videncie una cantidad excesiva de líquido en el recipiente del gel (consecuencia de la 

exudación del tampón debida a un almacenamiento inadecuado). 

2. ESPONJAS TAMPONADAS 

Preparación 

Las esponjas tamponadas están listas para su uso. Contienen: tampón tris-barbital pH 9,2 ± 0.3 ; azida sódica ; aditivos, inocuos a las 

concentraciones usadas, necesarios para un funcionamiento óptimo. 

ATENCIÓN: El tampon de las esponjas contiene barbital 0.92 %, barbital sódico 1.03 % y azida sódica 0.30 %. ¡No ingerir! ¡En caso de 

ingestión accidental, consultar inmediatamente al médico! Al desechar, evitar el contacto con ácidos, plomo o cobre, ya que se conoce su 

tendencia a formar compuestos explosivos con la azida sódica. 

Uso 

Las esponjas tamponadas funcionan como reservorio de tampón de electroforesis y aseguran el contacto entre el gel y los electrodos. 


Las esponjas tamponadas pueden conservarse a temperatura ambiente o en la nevera. 

Deben ser conservadas horizontalmente en su bolsa protectora (la flecha situada en la parte frontal del kit debe apuntar hacia arriba). 

Son estables hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en su bolsa protectora. NO LAS CONGELE. 

Deseche las esponjas tamponadas si la bolsa está abierta o si las esponjas están secas. 

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INSTRUCCIONES SEBIA - Español

3. DILUYENTE DEL COLORANTE 


Preparación 

El diluyente del colorante concentrado debe ser usado como se ha descrito en el párrafo "COLORANTE NEGRO AMIDO". Contiene una solución 

ácida. 

Uso 

Para la preparación del colorante negro amido. 

Conservación, estabilidad y señales de deterioro 

El diluyente del colorante concentrado puede conservarse a temperatura ambiente o en la nevera. Es estable hasta la fecha de caducidad indicada 

en el kit o en la etiqueta del vial de diluyente. NO LO CONGELE. 

No le añada azida sódica. 

4. COLORANTE NEGRO AMIDO 

Preparación 

El colorante negro amido concentrado es una solución viscosa que puede gelificarse, lo que no afecta de ningún modo a la calidad de la solución 

final y su capacidad de coloración. 

Para obtener una perfecta reconstitución del colorante, siempre hay que prepararlo como se indica a continuación : 

1. Añada unos 15 mL de diluyente del colorante en el vial de negro amido concentrado. 

2. Cierre el vial con cuidado. 

3. Agite el vial intensamente durante un mínimo de 5 segundos. 

4. Vierta la solución obtenida en el recipiente de preparación de la solución de coloración. 

5. Repita esta operación dos veces, o tres veces si es necesario. 

6. Vierta el resto de diluyente en el recipiente de preparación de la solución de coloración. 

7. Complete hasta 300 mL con agua destilada o desionizada. 

8. Agite esta solución de 5 a 10 minutos. 

El colorante está listo para usar. 

NOTA : Una reconstitución incompleta del colorante puede implicar una mala coloración de la fracción albúmina (disminución de su porcentaje o 

aparición de un agujero blanco en el centro de la fracción). 

Después de la dilución, la solución colorante contiene: solución ácida pH ≈ 2 ; negro amido, 4 g/L ; etilén-glicol, 6,7 % ; aditivos inocuos a las 

concentraciones usadas, necesarios para un funcionamiento óptimo. 

ATENCIÓN: Nocivo en caso de ingestión. 

Uso 

Para la coloración de los geles después de la separación electroforética de las proteínas. 

IMPORTANTE: El colorante está destinado para colorear sólo 10 geles. Cambie el colorante después de 10 usos. 

Conservación, estabilidad y señales de deterioro 

Las soluciones de colorante concentrada y diluida pueden conservarse a temperatura ambiente o en la nevera, en contenedores cerrados para evitar 

la evaporación. La solución concentrada es estable hasta la fecha de caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de colorante. 

La solución diluida es estable durante 1 mes. 

No almacene la solución de colorante diluida cerca de una fuente de calor. 

5. APLICADORES 

Uso 

Aplicadores precortados de un solo uso para la aplicación de la muestra. 

Almacenamiento 

Almacenar los aplicadores en un lugar seco a temperatura ambiente o refrigerados. 

6. PAPELES DE FILTRO 

Uso 

Papeles finos absorbentes precortados, de un solo uso, para secar el exceso de humedad de la superficie del gel antes de la aplicación de la muestra. 

Conservación 

Conserve los papeles de filtro finos en un lugar seco a temperatura ambiente o en nevera. 

REACTIVOS NECESARIOS 

1. SOLUCIÓN DECOLORANTE 

Preparación 

Cada vial de Solución Decolorante stock (SEBIA, PN 4540, 10 viales de 100 ml) se diluye hasta 100 litros con agua destilada o desionizada. Es 

conveniente diluir sólo 5 ml de la solución stock hasta 5 litros, volumen del contenedor de la solución decolorante. Después de la dilución, la solución 

decolorante de trabajo contiene: ácido cítrico, 0.5 g/l. 

Uso 

Para la destinción, ésto es, la eliminación del exceso de tinción y la coloración de fondo de los geles. 

Para el lavado del compartimento de coloración. 

Para neutralizar la acidez del decolorante, introduzca dentro del contenedor de desechos vacío 15 ml de sosa al 50 % (solución comercial). 


Almacenar la solución decolorante stock a temperatura ambiente o refrigerada. La solución stock de decolorante es estable hasta la fecha de 

caducidad indicada en la caja del kit o en las etiquetas del vial. NO CONGELAR. La solución decolorante de trabajo es estable una semana a 

temperatura ambiente en un contenedor cerrado. No añadir azida sódica. 

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Desechar la solución decolorante de trabajo si cambia su apariencia, p. ej., si se vuelve turbia debido a contaminación microbiana. 

Para evitar la proliferación microbiana en la solución decolorante diluida que se vaya a almacenar durante más de una semana, añada 5 µL/dL de ProClin 300. 

El decolorante diluido al que se ha añadido ProClin es estable en un contenedor cerrado a temperatura ambiente o en la nevera hasta la fecha de 

caducidad indicada en el kit o en la etiqueta del vial de decolorante. 

2. SOLUCIÓN DE LAVADO HYDRASYS 

Preparación 

Cada vial de la Solución stock de lavado HYDRASYS (SEBIA, PN 4541, 10 viales de 80 ml) se diluye hasta 5 litros con agua destilada o desionizada. 

Después de la dilución, la solución de trabajo de lavado contiene: tampón alcalino pH 8.8 ± 0.3 ; azida sódica. 

ATENCIÓN: La solución stock de lavado contiene azida sódica 0.625 %. ¡No ingerir! ¡En caso de ingestión accidental, consultar 

inmediatamente al médico! Cuando sea posible, evitar el contacto con ácidos, plomo o cobre, ya que se conoce su tendencia a formar 

compuestos explosivos con la azida sódica. Lavar siempre con gran cantidad de agua al desechar. 

Uso 

Sirve para limpiar el Compartimento de Tinción del HYDRASYS. Usar periódicamente, p. ej., si el instrumento se usa a diario, lavar el compartimento 

de tinción semanalmente. 

Ver la hoja de instrucciones para las indicaciones de uso. 


Almacenar ambas soluciones de lavado, stock y de trabajo, a temperatura ambiente o refrigeradas en contenedores cerrados. La solución stock de 

lavado es estable hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas del vial. 

Desechar la solución de trabajo de lavado si cambia su apariencia, p. ej., si se vuelve turbia debido a contaminación microbiana. 

3. FLUIDIL 

Preparación 

El Fluidil (SEBIA, PN 4587, 5 ml) está listo para su uso. 

Uso 

Para diluir muestras turbias o viscosas, p. ej., sueros que contienen crioglobulinas o criogeles. 


Almacenar a temperatura ambiente. Es estable hasta la fecha de caducidad indicada en las etiquetas del vial de Fluidil. 

El Fluidil debe mostrar ausencia de precipitados. 

EQUIPAMIENTO Y ACCESORIOS NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 

1. Sistema HYDRASYS SEBIA, PN 1210 o PN 1211. 

2. Micropipeteador, manual o automatico, como el HYDRAplus SEBIA, PN 1215, para cargar los aplicadores de muestra de una forma alternativa. 

3. Cámara húmeda, PN 1270, suministrada con el HYDRASYS. 

4. Kit de Contenedores suministrado con el HYDRASYS. 

5. Pipetas: 10 µl y 200 µl. 

6. Densitómetro / escáner capaz de leer geles de 82 x 51 mm ó 82 x 102 mm a 570 nm o con un filtro amarillo, p. ej., HYRYS SEBIA, DVSE SEBIA 

o el programa PHORESIS para escáner de sobremesa. Observar las indicaciones del fabricante para los procedimientos de operación y 

calibración. 

7. Soporte para geles pequeñios, SEBIA PN 10043110. 

MUESTRAS PARA ANALISIS 

Extracción y almacenamiento de las muestras 

Se recomienda analizar muestras frescas. El suero y la orina deben obtenerse de acuerdo con los procedimientos establecidos de uso en los 

laboratorios clínicos. Refrigere las muestras (2 a 8 °C) tan pronto como sea posible después de su obtención, durante una semana. Para períodos 

de almacenamiento más prolongados, almacene las muestras congeladas (son estables durante un mes al menos). 

Congelar los sueros con azida sódica, 0.2 g/l, mejora la estabilidad del almacenaje. 

Congelar orina con HEPES 0.1 M (pH 6.75) y azida sódica, 0.2 g/l, mejora la estabilidad del almacenaje. 

IMPORTANTE: No utilizar ácido bórico como conservante. 

Las muestras descongeladas pueden dar lugar a ligeras marcas de aplicación debidas a la desnaturalización de proteínas o lipoproteínas. El 

almacenamiento entre 2 y 8 °C y la congelación causan un desplazamiento anódico de las beta-lipoproteínas del suero, desde la fracción beta-1 hasta 

las fracciones alfa-2 o alfa-1 ; cuanto más antiguo sea el suero mayor será el desplazamiento. 

Preparación de las muestras 

1. Suero 

Use muestras de suero no diluidas. Al almacenarlos entre 2 y 8 °C o congelarlos, algunos sueros, especialmente aquellos que contengan 

crioglobulinas o criogeles, pueden volverse viscosos o desarrollar turbidez. Tales sueros podrían presentar problemas de aplicación debidos a la 

difusión dificultada a través de los dientes del aplicador de muestras. En tal caso, añada 25 µl de Fluidil a 75 µl de suero y agite la mezcla en el 

vórtex durante 15 segundos. Siga entonces con el procedimiento habitual. 

2. Orinas concentradas 

El análisis se lleva a cabo con orinas concentradas hasta 15 - 20 g/l (con un mecanismo adaptado). 

IMPORTANTE: Algunas orinas presentan un alto contenido de sales. Esto puede provocar que el gel se deforme durante la migración y, por lo 

tanto, distorsión de los perfiles electroforéticos. Para evitar este problema es necesario eliminar las sales con una diálisis. 

NOTA : En caso de orinas turbias (concentradas o no), se recomienda eliminar las partículas, centrifugando las muestras (durante 10 minutos a 

3000 rpm) o por filtración (en un filtro de 0,45 µm) para obtener una buena difusión en los aplicadores. 

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Muestras a descartar 

• No utilice muestras de suero hemolizadas. La hemólisis incrementa las fracciones alfa-2 y beta. 

• No utilice muestras de plasma. El fibrinógeno da lugar a una banda cerca del punto de aplicación que puede ser confundida con una 

inmunoglobulina monoclonal y afectaría al porcentaje de la fracción beta correspondiente. 

• No utilice muestras de orina muy antiguas o almacenadas incorrectamente en las que pueda haber tenido lugar degradación enzimática de las 

proteínas. 

PROCEDIMIENTO 

El sistema HYDRASYS es un instrumento semiautomático multiparamétrico. Las etapas automáticas incluyen el procesamiento de los geles de 

agarosa HYDRAGEL en la siguiente secuencia: aplicación de la muestra, migración electroforética, secado, tinción, decoloración y secado final. Las 

etapas manuales incluyen el manejo de las muestras y los geles, y la puesta en marcha del instrumento para la operación. 

LEER CUIDADOSAMENTE EL MANUAL DE INSTRUCCIONES DEL HYDRASYS. 

I. PUESTA EN MARCHA DE LA MIGRACIÓN 

1. Encender el HYDRASYS. 

2. Colocar un aplicador para el HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) (7 muestras) y HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 (15 muestras), o dos aplicadores 

para el HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 (30 muestras), en una superficie plana con los números de los pocillos en la cara superior (Fig. 1). 

- Aplique 10 µl de muestra de suero sin diluir o de orina concentrada en cada pocillo. Cargue cada aplicador en menos de 2 minutos. 

- Colocar el(los) aplicador(es) en la cámara húmeda con el peine hacia arriba [asirlos por el plástico protector del peine]. Dejar difundir las 

muestras a través de los papeles del peine durante 5 minutos, después de la aplicación de la última muestra. Para uso posterior (hasta 

8 horas), guardar todo el conjunto en refrigeración. 

Ver la hoja de instrucciones de la cámara húmeda para más detalles. 

3. Abrir la puerta del Módulo de migración y elevar los soportes de los electrodos y el aplicador. 

ATENCIÓN: ¡Nunca cerrar la puerta cuando los soportes están elevados! 

4. Seleccionar el programa de migración «7 PROTEIN(E)» para el HYDRAGEL 7 PROTEIN(E), o el programa de migración 

«15/30 PROTEIN(E)» para el HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 en el menú del instrumento (mitad izquierda del teclado). 

5. Extraer las esponjas tamponadas de su envoltorio ; asirlas por los extremos de plástico. Engarzar los extremos de plástico agujereados con 

las puntas metálicas del soporte de los electrodos ; los extremos de plástico deben quedar encarados al soporte (Fig. 2). 

6. Abrir el contenedor del HYDRAGEL. 

- Extienda un papel de filtro fino de manera rápida y uniforme sobre la superficie del gel para absorber el exceso de líquido. Retire el papel 

inmediatamente. 

ADVERTENCIA: Para evitar que se deshidrate, no deje que el papel de filtro contacte con el gel durante mucho tiempo. 

- Dispensar 120 µl de agua destilada o desionizada para el HYDRAGEL 7 PROTEIN(E), ó 200 µl para el HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30, 

en el tercio inferior del marco serigrafiado en la Superficie de Control de Temperatura del módulo de migración. 

- Colocar el gel (la cara de agarosa hacia arriba) con su lado inferior en contacto con el tope inferior del marco serigrafiado (Fig. 3). 

- Aplicar el gel en la superficie, haciéndolo contactar con el agua (Fig. 3). Asegurarse que no queden burbujas, que el agua esté extendida 

bajo toda la superficie del gel y que éste esté alineado con el marco serigrafiado. 

7. Devolver ambos soportes a su posición original. En esta posición, las esponjas tamponadas no deben tocar el gel. NO FORZAR LOS 

SOPORTES HACIA ABAJO. 

8. Extraer el(los) aplicador(es) de la cámara húmeda. Asirlo(s) por el plástico protector. 

- Romper el plástico protector precortado del peine. 

- Con 7 y 15 muestras colocar el aplicador en la posición No 6 del soporte. 

- Con 30 muestras colocar los dos aplicadores en las posiciones No 3 y 9. 

IMPORTANTE: Los números impresos en el(los) aplicador(es) deben quedar de cara al usuario (Fig. 4). 

9. Cerrar la puerta del módulo de migración. 

10. Iniciar el procedimiento inmediatamente, presionando la tecla «START» (flecha verde)en el lado izquierdo del teclado. 

IMPORTANTE: Asegurarse que la toma de aire en el lado derecho del instrumento no está bloqueada. 

MIGRACIÓN - DESCRIPCIÓN DE LAS ETAPAS AUTOMÁTICAS 

• Los dos soportes descienden, con lo cual esponjas tamponadas y aplicador(es) entran en contacto con la superficie del gel. 

• El soporte del aplicador se eleva. 

• La migración se realiza a una corriente constante de 10 W en el caso del HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) ó 20 W en el caso de HYDRAGEL 

PROTEIN(E) 15/30, a una temperatura controlada por efecto Peltier de 20 °C, con un acumulado de 33 Vh (para 7 minutos). 

• El soporte de los electrodos se eleva para desconectar los electrodos. 

• La temperatura de la Superficie de Control de Temperatura se eleva a 65 °C durante 10 minutos para el secado del gel. 

• La Superficie de Control de Temperatura se enfría ; cuando alcanza los 50 °C, un pitido audible indica que la puerta del módulo de migración queda 

desbloqueada. La temperatura permanece a 50 °C hasta que se abre la puerta. Luego, la temperatura desciende hasta los 20 °C (en menos de 

5 minutos) después de lo cual puede iniciarse una nueva migración. 

NOTA: La puerta del módulo de migración permanece bloqueada durante todas las etapas de la migración. 

II. PUESTA EN MARCHA DEL PROCESADO DEL GEL 

1. Abrir la puerta del módulo de migración. 

2. Extraer el(los) aplicador(es) y desechar. 

3. Elevar ambos soportes, extraer las esponjas tamponadas por sus extremos de plástico y desechar. 

4. Extraer el gel seco para el procesamiento posterior. 

5. Después de cada uso, limpiar los electrodos y la Superficie de Control de Temperatura con un pañuelo de papel suave humedecido. 

6. Extraer el Soporte del Gel. Dejarlo en una superficie plana y encajar el gel seco (con la superficie de agarosa de cara arriba) en las muescas 

de los dos cilindros. Cerrar el Soporte del Gel. Asegurarse que el gel está posicionado correctamente en su soporte (Fig. 5). 

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7. Colocar el soporte del gel en el Módulo de Tinción y Procesamiento. 

IMPORTANTE: Antes de iniciar el programa de tinción y procesado del gel, comprobar lo siguiente: 

- el contenedor de colorante contiene 300 ml de solución de tinción ; 

- el contenedor de decolorante contiene al menos 1 litro de solución decolorante ; 

- el contenedor de desechos está vacío. 

Para conocer en qué posiciones conectar los reactivos : consultar la información que aparece en la pantalla del instrumento (seleccionar la 

tecla : VER CANALES). 

IMPORTANTE: No olvidar bloquear los canales no utilizados. 

8. Seleccionar el programa de tinción «PROT./B1-B2/Hb» en el menú del instrumento e iniciar el ciclo presionando la tecla «START» (flecha 

verde de la parte derecha del teclado). 

Durante todas las secuencias de coloración, decoloración y secado, el sistema permanece bloqueado. 

Después del enfriamiento de la cubeta, una señal sonora (bip) suena y el sistema se desbloquea (la ventilación se mantiene hasta la 

recuperación del porta-films). 

III. FINALIZACIÓN DEL PROCESADO DEL GEL 

1. Extraer el Soporte del Gel de su compartimento, abrirlo y extraer el gel seco. 

NOTA : Si se observan manchas azules residuales en los geles después de la coloración / decoloración, una etapa de lavado suplementario 

con el programa " LAV. ISOENZ/GEL " permite eliminarlas o atenuarlas (según su intensidad) antes de su lectura en densitómetro o escáner. 

2. Si es necesario, limpiar la superficie trasera (la cara del soporte plástico) de del gel seco con un paño suave humedecido. 

3. Realizar la densitometría / escáner a 570 nm o con un filtro amarillo. 

NOTA: En los geles con varias filas de muestras (2 ó 3), las longitudes de migración pueden ser ligeramente diferentes, sin ninguna repercusión 

en los resultados. 

RESULTADOS 

Control de calidad 

Se aconseja incluir un suero control valorado (Suero Control, SEBIA PN 4785) en cada análisis de muestras. 

Valores 

El barrido densitométrico (a 570 nm) de los geles teñidos proporciona las concentraciones relativas (porcentajes) de las fracciones individuales de 

proteína. 

Los valores normales (media ± 2 SD) para las fracciones electroforéticas principales de proteínas séricas en los geles HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 

han sido establecidos a partir de una población sana de 158 adultos (hombres y mujeres). 

La cuantificación de las proteínas en UV en el CAPILLARYS proporciona valores similares a los de la nefelometría (en especial para la albúmina). 

SEBIA propone una estandarización de los valores obtenidos en HYDRAGEL realizando una calibración de los sistemas de lectura. 

Valores sin estandarización Valores estandarizados en el CAPILLARYS FRACCIÓN HYRYS - DVSE - PHORESIS HYRYS - DVSE - PHORESIS Albúmina 59.8 - 72.4 % 53.8 - 65.2 % Alfa-1 globulinas 1.0 - 3.2 % 1.1 - 3.7 % Alfa-2 globulinas 7.4 - 12.6 % 8.5 - 14.5 % Beta globulinas 7.5 - 12.9 % 8.6 - 14.8 % 

| Gamma globulinas | 8.0 - 15.8 % | 9.2 - 18.2 % | 

Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de normalidad. 

Interpretación 1-15 

En algunas muestras de suero, la fracción alfa-2 puede presentar un ligero desdoblamiento que depende de la concentración y la movilidad de sus 

componentes proteicos, consulte el PATRÓN DE MIGRACIÓN. 

• Algunos sueros tienen fenotipos diferentes de Haptoglobina o de Globulina GC. 

• La posición de la lipoproteína alfa-1 depende de su concentración y de la conservación de la muestra. 

Para consultas sobre la interpretación de las separaciones electroforéticas de proteínas séricas y urinarias, vea la BIBLIOGRAFÍA. 

Interferencias y limitaciones 

Vea MUESTRAS PARA ANILISIS. 

Teniendo en cuenta los principios analíticos de las técnicas actuales (principios de la electroforesis de zona, resolución y sensibilidad), no puede darse 

ninguna garantía respecto a la detección de la totalidad de todos los componente monoclonales. 

Resolución de problemas 

Avisar al Servicio de Atención Técnica del distribuidor cuando el test no funcione, pese a haber seguido cuidadosamente las instrucciones para la 

preparación y almacenaje de los materiales y para el procedimiento a seguir. 

Las hojas de seguridad de los diferentes reactivos del kit, así como las informaciones relativas a la eliminación de los desechos, están disponibles 

en el Servicio de Asistencia Técnica de su distribuidor. 

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CARACTERÍSTICAS TÉCNICAS 

Análisis de suero 

Reproducibilidad intraserial 

Tres (3) muestras diferentes fueron analizadas cada una en 15 carriles de geles HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 del mismo lote. Se calcularon las 

medias, SD y CV (n = 15) para cada muestra de suero y fracción. La tabla siguiente muestra los resultados correspondientes a las 3 muestras de suero. 

FRACCIÓN MEDIA (%) SD CV (%) Serum 1 2 3 1 2 3 1 2 3 Albumina 70,4 68,8 65,9 0,2 0,7 0,6 0,3 1,0 0,9 Alpha-1 1,9 1,9 1,3 0,1 0,1 0,1 3,5 3,9 7,3 Alpha-2 9,9 9,4 7,6 0,2 0,2 0,2 1,6 2,6 2,4 Beta 10,6 8,6 7,8 0,4 0,3 0,1 3,3 3,5 1,8 

| Gamma | 7,2 11,4 17,4 | 0,2 0,3 0,3 | 3,4 2,8 2,0 | 

Reproducibilidad interserial 

Quince (15) muestras de suero diferentes fueron analizadas cada una durante 5 días diferentes usando el mismo lote de geles HYDRAGEL 

PROTEIN(E) 15/30. Se calcularon las medias, SD y CV (n = 5) para cada muestra de suero y fracción. Los resultados fueron esencialmente los 

mismos para todas las muestras. La tabla siguiente muestra las series de SD y CV que representan a todas las muestras y un CV medio obtenido a 

partir de los CV agrupados de todas las muestras (n = 15). 

FRACCIÓN SD CV (%) CV MEDIO (%) Albumina 0,2 – 0,9 0,3 – 1,4 0,8 Alpha-1 0,1 – 0,2 2,1 – 9,8 4,6 Alpha-2 0,1 – 0,3 0,9 – 3,1 1,8 Beta 0,1 – 0,3 1,1 – 3,8 2,0 

| Gamma | 0,1 – 0,5 | 1,3 – 5,6 | 2,9 | 

Exactitud 

Se analizaron noventa (90) muestras diferentes (sueros normales y patológicos) en geles HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 y en otro sistema comercial 

de geles de agarosa. Los parámetros de correlación, calculados para las fracciones individuales de los geles HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 respecto 

al sistema de geles comparado (y-HYDRAGEL), fueron: 

Fracción Coeficiente de Correlación Punto de corte en y Pendiente Rango de valores en % de las muestras usadas* Albumina 0,983 3,673 0,942 54,9 - 72,9 Alpha-1 0,984 0,937 0,972 1,2 - 6,7 Alpha-2 0,984 0,635 0,977 7,6 - 16,5 Beta 0,953 -0,071 0,984 6,9 - 15,0 

| Gamma | 0,976 | -0,435 | 1,033 | 6,0 - 18,9 | 

* Los valores en tanto por ciento son los determinados con el sistema HYDRAGEL 15 & 30 PROTEIN(E). 

Sensibilidad 

Una muestra de suero patológica con una proteína monoclonal de 2.12 g/dL se diluyó seriadamente y las diluciones se sometieron a electroforesis 

en un gel HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30. Después de inspeccionar el gel visualmente, la mayor dilución que proporcionaba una banda monoclonal 

distinguible fue la de 1/128 en el sistema HYDRAGEL 15 & 30 PROTEIN(E). Por lo tanto, la menor concentración de una proteína monoclonal estaba 

alrededor de 0.017 g/dL. 

NOTA: El límite de detección puede variar en función de la posición de la banda monoclonal y el fondo policlonal de la fracción de las 

gammaglobulinas. 

Análisis de orinas concentradas 

Los resultados obtenidos con los geles HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 indican una muy buena reproducibilidad intra e interseriales para muestras 

de orina concentradas después de un análisis cuantitativo y cualitativo. Veintiocho (28) muestras diferentes (orinas patológicas y normales) fueron 

analizadas en geles HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 y en otro sistema comercial de geles de agarosa. No hubo diferencias detectables visualmente 

entre los dos sistemas. La sensibilidad de detección se determinó a partir de la mayor dilución serial de una proteína monoclonal urinaria, que 

proporcionó una banda distinguible a 0.048 g/dL. 

BIBLIOGRAFÍA 



21/03/91, p. 782 à 785. 




Pathology, 1989, 21, p. 35 à 41. 


2nd ed., 1994, 397 pp. 

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(9) Le Carrer D. Électrophorèse et Immunofixation des Protéines Sériques, Interprétations illustrées. Laboratoires SEBIA, 1994, 120 pp, Ed. Hatier - Paris. 







PATRÓN DE MIGRACIÓN 

+ 

Albúmina 

Orosomucoide 


α1 Antiquimotripsina 


Globulina GC 


Haptoglobina 

Lipoproteínas α 

Transferrina 

Hemopexina 

Plasminogeno 

Fibronectina 


Lipoproteínas β 

γ Globulinas 

G - A - M - D - E 

- 

Detalle de la fracción alfa-2 

2 (± 5) 2 (± 5) 

1 + 2 + 3 + 4 + 5 1 + 2 + 3 + 4 (± 5) 1 + 3 + 4 (± 5) 

A B C 


2 = Haptoglobina 


4 = Globulina GC 

5 = Lipoproteínas α1 

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UTILIZAÇÃO 

Os kits HYDRAGEL 7, 15 e 30 PROTEIN(E) destinam-se à separação em meio alcalino (pH 9,2), das proteínas humanas no soro e urina em cinco 

fracções principais, por electroforese em geles de agarose no aparelho semi-automático HYDRASYS. As proteínas separadas são coradas com negro 

de amido e o excesso de corante eliminado em meio ácido. As electroforeses resultantes podem ser analisadas visualmente para determinar 

alterações do perfil ou ser avaliadas por densitómetria, o que dá uma quantificação relativa e precisa de cada zona individual. 

Cada gel de agarose poderá analisar: 

• 7 amostras no kit HYDRAGEL 7 PROTEIN(E), 

• 15 amostras no kit HYDRAGEL 15 PROTEIN(E), 

• 30 amostras no kit HYDRAGEL 30 PROTEIN(E). 

Para diagnóstico in vitro. Registado no INFARMED. 

PRINCÍPIO DO TESTE 1-16 

A electroforese das proteínas séricas e de outros fluídos é uma análise muito útil, usada em rotina nos laboratórios de análises clínicas, com vista à 

detecção de anomalias no perfil proteico. Baseia-se nos princípios da electroforese de zona executada num suporte adequado. A agarose tem sido 

utilizada por ser um meio de suporte versátil e eficaz. Para determinação em rotina as proteínas são separadas apenas em cinco fracções de 

mobilidade diferente, de acordo com a sua carga a um determinado pH: albumina, alfa-1 globulinas, alfa-2 globulinas, beta globulinas e gama 

globulinas. Cada zona contem uma ou mais proteínas do soro. Os perfis das proteínas na urina são semelhantes aos do soro. No entanto, as 

intensidades relativas das fracções ou a sua presença podem variar de acordo com a capacidade de filtração do rim. 

REAGENTES E MATERIAIS FORNECIDOS NOS KITS HYDRAGEL 7, 15 E 30 PROTEIN(E) 

ITEM REF. N° 4100 REF. N° 4120 REF. N° 4140 Geles de agarose (prontos a usar) 10 geles 10 geles 10 geles Tiras de tampão (prontas a usar) 10 pacotes de 2 10 pacotes de 2 10 pacotes de 2 Diluente da solução corante (solução concentrada) 1 frasco de 60 ml 1 frasco de 60 ml 1 frasco de 60 ml Corante negro de amido (solução concentrada) 1 frasco de 20 ml 1 frasco de 20 ml 1 frasco de 20 ml Aplicadores (prontos a usar) 1 caixa de 10 (7 dentes) 1 caixa de 10 (15 dentes) 2 caixas de 10 (15 dentes) 

| Papéis de filtro finos | 1 pacote de 10 | 1 pacote de 10 | 1 pacote de 10 | 

PARA OPTIMIZAÇÃO DOS RESULTADOS 

Os elementos de um mesmo kit devem ser utilizados em conjunto, e de acordo com as instruções de utilização. 

LER ATENTAMENTE AS INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO. 

1. GELES DE AGAROSE 

Preparação 

Os geles de agarose estão prontos a usar. Cada gel contem: agarose, 8 g/l ; tampão tris-barbital pH 9,2 ± 0,1 ; aditivos, não perigosos nas 

concentrações usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

AVISO: Os geles contêm 0,31 % de barbital e 0,34 % de barbital sódico. Não ingerir! Se ingerido, consultar imediatamente um médico! 

Utilização 

Suporte para electroforese das proteínas. 

Armazenamento, estabilidade e sinais de deterioração 

Armazenar os geles horizontalmente, na embalagem protectora de origem, à temperatura ambiente (15 - 30 °C) ou no frigorífico (2 - 8 °C) (a seta 

existente na parte da frente da caixa do kit deve ficar voltada para cima). São estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit e nos rótulos 

das embalagens dos geles. Evitar variações da temperatura durante o armazenamento (ex: não armazenar perto de uma janela ou de uma fonte de 

calor). 

NÃO CONGELAR! 

Deitar fora o gel quando: 

(I) houver cristais ou precipitados na superfície do gel ou quando a textura do mesmo for muito macia (isto sucede se o gel for congelado) ; 

(II) há desenvolvimento de bactérias ou fungos ; 

(III) estiver presente uma quantidade anormal de líquido na embalagem do gel (resultante da exsudação do gel devido a condições de 

armazenamento inadequadas). 

2. TIRAS DE TAMPÃO 

Preparação 

As tiras de esponja com tampão estão prontas a usar. Cada uma contem: tampão tris-barbital, pH 9,2 ± 0,3 ; azida de sódio ; aditivos, não perigosos 

nas concentrações usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

AVISO: As tiras de tampão contêm 0,92 % de barbital, 1,03 % de barbital sódico e 0,3 % de azida de sódio. Não ingerir! Se ingerido, consultar 

imediatamente um médico! A azida de sódio pode formar complexos explosivos ou tóxicos em caso de contacto com ácidos, chumbo, ou 

cobre. 

Utilização 

Tampão para a electroforese. 


As tiras de tampão podem ser conservadas à temperatura ambiente (de 15 a 30 °C) ou no frigorífico (entre 2 e 8 °C). 

As tiras de tampão devem ser conservadas horizontalmente dentro da embalagem protectora (a seta na parte da frente da caixa deve permanecer 

apontada para cima). 

As tiras são estáveis até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou na embalagem protectora das tiras. NÃO CONGELAR. 

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INSTRUÇÕES DE USO SEBIA - Português


3. DILUENTE DA SOLUÇÃO CORANTE 

Preparação 

O diluente da solução corante deverá ser utilizado como está descrito no parágrafo " SOLUÇÃO CORANTE NEGRO DE AMIDO ". 

Contém uma solução ácida. 

Utilização 

Para a preparação das soluções de corante negro de amido. 


Armazenar o diluente à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou no rótulo do frasco. NÃO 

CONGELAR. 

Não adicionar azida de sódio. 

4. CORANTE NEGRO DE AMIDO 

Preparação 

O corante negro de amido concentrado, é uma solução viscosa que pode eventualmente gelificar, o que não afecta nada a qualidade da solução final 

e o seu poder de coloração. 

Em qualquer caso, para obter uma perfeita reconstituição do corante, é necessário que seja respeitado o procedimento seguinte: 

1. Adicionar cerca de 15 ml do diluente do corante ao frasco do negro de amido concentrado. 

2. Fechar cuidadosamente o frasco. 

3. Agitar muito vigorosamente o frasco durante pelo menos 5 segundos. 

4. Transferir esta solução para o recipiente de preparação da solução de coloração. 

5. Repetir esta etapa duas vezes ou se necessário 3 vezes. 

6. Transferir o diluente restante para o recipiente de preparação da solução de coloração. 

7. Completar o volume para 300 ml com água destilada ou desmineralizada. 

8. Agitar muito bem esta solução durante 5 a 10 minutos. 

A solução corante está pronta a utilizar. 

NOTA : Uma reconstituição incompleta do corante pode provocar uma má coloração da fracção de albumina (baixa da percentagem ou lacuna dentro 

da fracção). 

Após diluição, a solução de corante contém: solução ácida pH ≈ 2 ; negro de amido, 4 g/l ; etilenoglicol, 6,7 % ; aditivos, não perigosos nas 

concentrações usadas, necessários para optimizar o ensaio. 

AVISO: Nocivo em caso de ingestão. 

Utilização 

Para corar geles depois da electroforese das proteínas. 

IMPORTANTE : A solução corante é unicamente destinada à coloração de 10 geles. Recomenda-se a renovação da solução após as 10 utilizações. 


Armazenar a solução de corante concentrada e a solução diluída à temperatura ambiente ou no frigorífico em frascos fechados para evitar a 

evaporação. 

A solução concentrada é estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou nos rótulos dos frascos. 

A solução diluída de corante é estável por um mês. 

Não guardar a solução de trabalho do corante próximo de uma fonte de calor. 

5. APLICADORES 

Utilização 

Aplicadores pré-cortados, de utilização única, para aplicação das amostras. 

Armazenamento 

Armazenar os aplicadores em local seco à temperatura ambiente ou no frigorífico. 

6. PAPEL DE FILTRO FINO 

Utilização 

De utilização única, estes finos papéis absorventes destinam-se à absorção do excesso de líquido da superfície do gel antes da aplicação da amostra. 

Armazenamento 

Armazenar os papéis de filtro finos num local seco à temperatura ambiente ou no frigorífico. 

REAGENTES NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOS 

1. SOLUÇÃO DESCORANTE 

Preparação 

Cada frasco de solução descorante concentrada (SEBIA, ref. n° 4540, 10 frascos de 100 ml cada) deve ser diluída a 1/1000 com água destilada ou 

desionisada e permite obter 100 litros de solução total. É conveniente diluir apenas 5 ml da solução concentrada de cada vez, para o volume final de 

5 litros (a capacidade do recipiente onde se vai colocar a solução descorante). Após diluição, a solução descorante contem: ácido cítrico ; 0,5g/l. 

Utilização 

Na descoloração, isto é, remoção do excesso de corante do gel. 

No enxaguamento da câmara de coloração, após lavagem. 

Para neutralizar a acidez do descorante, colocar no frasco de despejo 15 ml de soda a 50 % (solução disponível comercialmente). 


Armazenar a solução descorante concentrada à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada na caixa do kit ou 

nos rótulos dos frascos da solução descorante. A solução descorante diluída é estável por uma semana à temperatura ambiente, quando conservada 

em recipiente fechado. Não adicionar azida de sódio. 

Deitar fora a solução diluída se houver alterações no seu aspecto, por exemplo, se ficar turva devido a contaminação microbiana. 

Em caso de conservação prolongada (mais de uma semana) da solução diluída, adicionar 50 µl/l de ProClin 300 para evitar a proliferação bacteriana. 

A solução descorante diluída contendo ProClin é estável à temperatura ambiente (de 15 a 30 °C) ou no frigorífico (entre 2 e 8 °C). É estável até ao 

fim da validade indicada na caixa do kit ou no rótulo do frasco do descolorante. 

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2. SOLUÇÃO DE LAVAGEM HYDRASYS 

Preparação 

Cada frasco de solução de lavagem concentrada HYDRASYS (SEBIA, ref. n° 4541, 10 frascos de 80 ml cada) deve ser diluído para a obtenção do 

volume final de 5 litros com água destilada ou desionisada. Após diluição, a solução de lavagem contem: tampão alcalino pH 8,8 ± 0,3 ; azida de sódio. 

AVISO: A solução de lavagem contem 0,625 % de azida de sódio. Não ingerir! Se ingerida, consultar imediatamente um médico! Quando em 

contacto com ácidos, chumbo ou cobre a azida de sódio pode levar à formação de compostos explosivos ou tóxicos. Quando deitar fora, 

lavar abundantemente com grandes quantidades de água. 

Utilização 

Para a lavagem da câmara de coloração do HYDRASYS. Utilizar periodicamente. Por exemplo, se o aparelho for utilizado diariamente, fazer a 

lavagem da câmara de coloração uma vez por semana. 

Ver as instruções de utilização incluídas na embalagem. 


Armazenar a solução concentrada e a solução diluída em recipientes fechados à temperatura ambiente ou no frigorífico. A solução concentrada é 

estável até ao fim da validade indicada no rótulo do frasco da solução de lavagem. 

Deitar fora a solução de lavagem diluída se houver alterações no seu aspecto, por exemplo, se ficar turva devido a contaminação microbiana. 

3. FLUIDIL 

Preparação 

O Fluidil (SEBIA ref. n° 4587, 5 ml) vem pronto a ser usado. 

Utilização 

Destina-se a diluir amostras viscosas ou turvas, por exemplo, soro contendo uma crioglobulina ou um criogel. 


Armazenar à temperatura ambiente ou no frigorífico. É estável até ao fim da validade indicada no rótulo do frasco de Fluidil. 

O Fluidil não deve conter quaisquer precipitados. 

EQUIPAMENTOS E ACESSÓRIOS NECESSÁRIOS 

1. Sistema HYDRASYS, ref. n° 1210 ou ref. n° 1211. 

2. HYDRAplus SEBIA, ref. n° 1215, micropipetador, manual ou automático, como alternativa na pipetagem das amostras para os aplicadores 

respectivos. 

3. Câmara húmida, ref. n° 1270, fornecida com o HYDRASYS. 

4. Frascos de plástico fornecidos com o HYDRASYS. 

5. Pipetas: 10 µl e 200 µl. 

6. Densitómetro / scanner capaz de ler geles de 82 x 51 mm ou 82 x 102 mm a 570 nm (com filtro amarelo), por exemplo, HYRYS SEBIA, DVSE 

SEBIA ou um scanner equipado com PHORESIS SEBIA. Para a sua utilização e calibração seguir as instruções de cada aparelho. 

7. Suportes para meios geles SEBIA, ref. n° 10043110. 

AMOSTRAS 

Colheita e conservação das amostras 

É recomendada a utilização de amostras frescas. Os soros e as urinas devem ser colhidos de acordo com os métodos utilizados nos laboratórios de 

análises clínicas 

As amostras podem ser conservadas uma semana no frigorífico (2 - 8 °C). Para conservações prolongadas, congelar as amostras. As amostras 

congeladas são estáveis durante pelo menos um mês. O congelamento das urinas com azida de sódio a 0,2 g/l e HEPES 0,1 M (pH 6,75) e dos soros 

com azida de sodio a 0,2 g/l aumenta a estabilidade do armazenamento. 

IMPORTANTE : Não usar ácido bórico como conservante. 

As amostras descongeladas podem levar ao aparecimento de ligeiras bandas no ponto de aplicação, devido à desnaturação das proteínas ou 

lipoproteínas. 

Quanto mais velhas forem as amostras, mais as b lipoproteínas são anódicas. Do mesmo modo, após congelamento, as b lipoproteínas são muito 

mais anódicas do que no soro fresco: a sua migração varia da zona ß até às zonas α-2 ou α-1. 

Preparação das amostras 

1. Soro 

Utilizar directamente amostras de soro puras. Após conservação a 2 - 8 °C ou congelamento, alguns soros (especialmente os que contêm uma 

crioglobulina ou um criogel) podem tornar-se viscosos ou turvos. Estes soros podem apresentar problemas na aplicação porque difundem com 

muita dificuldade pelos dentes do aplicador de amostras. Neste caso, adicionar 25 µl de Fluidil a 75 µl de soro e agitar no vortex durante 

15 segundos. Depois, seguir a técnica normal. 

2. Urinas concentradas 

A urina deve ser concentrada até 15 - 20 g/l de proteínas totais (com um dispositivo adaptado). 

IMPORTANTE : Algumas urinas contêm um elevado teor em sais. Isso pode provocar uma deformação do gel durante a migração e, 

consequentemente, uma distorção do perfil electroforético. Para evitar este problema é necessário eliminar os sais por meio 

de diálise. 

NOTA: No caso de urinas turvas (concentradas ou não), recomenda-se a eliminação das partículas por centrifugação das amostras (durante 

10 minutos a 3000 rpm) ou por filtração (com filtro de 0,45 µm), de modo a obter uma boa difusão nos aplicadores. 

Amostras a evitar 

• Não utilizar amostras hemolisadas: a hemólise aumenta as zonas α-2 e ß. 

• Não utilizar amostras de plasma. O fibrinogénio leva ao aparecimento de uma banda perto do ponto de aplicação que pode ser confundida com 

uma gamapatia monoclonal e aumentar a percentagem da zona correspondente. 

• Evitar amostras de urina armazenadas à muito tempo ou mal armazenadas, uma vez que pode ocorrer a degradação enzimática das proteínas. 

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TÉCNICA 

O sistema HYDRASYS é um aparelho semi-automático multi-paramétrico. Os passos automáticos incluem o tratamento dos geles de agarose 

HYDRAGEL segundo as etapas seguintes: aplicação da amostra, migração electroforética, secagem, coloração, descoloração e secagem final. Os 

passos manuais são os seguintes: preparação das amostras e dos geles e lançamento das sequências automáticas. 

LER ATENTAMENTE O MANUAL DE INSTRUÇÕES DO HYDRASYS. 

I. PREPARAÇÃO DA MIGRAÇÃO 

1. Ligar o aparelho HYDRASYS. 

2. Colocar um aplicador para o HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) (7 amostras) e para o HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 (15 amostras) ou 

2 aplicadores para o HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 (30 amostras) numa superfície plana com os números dos poços virados para cima 

(Fig. 1). 

- Aplicar 10 µl de soro puro ou urina concentrada em cada poço. A pipetagem das amostras em cada aplicador não deve ultrapassar o tempo 

de dois minutos. 

- Colocar o(s) aplicador(es) na câmara húmida com os dentes voltados para cima. (Segure-o(s) pela protecção de plástico). Deixar as 

amostras difundirem-se pelos dentes durante cinco minutos após a aplicação da última amostra. Para uma conservação prolongada 

(8 horas no máximo), colocar a câmara húmida no frigorífico. 

Ver as instruções de utilização da câmara húmida para mais detalhes. 

3. Abrir a tampa da câmara de migração e levantar os suportes do aplicador e dos eléctrodos. 

AVISO: Nunca fechar a tampa quando os suportes estão levantados! 

4. Seleccionar o programa de migração "7 PROTEIN(E)" para o HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) ou "15/30 PROTEIN(E)" para o HYDRAGEL 

PROTEIN(E) 15/30 no menu apresentado pelo aparelho (lado esquerdo do teclado). 

5. Retirar as tiras de tampão da embalagem ; colocar as tiras de tampão sobre os eléctrodos fixando as extremidades de plástico perfuradas aos pinos 

do suporte dos eléctrodos. A face das tiras de tampão onde estão fixadas as partes de plástico fica em contacto com os eléctrodos. (Fig. 2). 

6. Desempacotar a placa HYDRAGEL. 

- Eliminar rapidamente o excesso de líquido da superfície do gel com a ajuda de um papel de filtro fino. 

ATENÇÃO: Não deixar o papel de filtro em contacto prolongado com o gel, para evitar a sua desidratação. 

- Aplicar 120 µl de água destilada ou desionisada para o HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) ou 200 µl para o HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 no 

terço inferior do quadro impresso na placa de migração. 

- Colocar o gel virado para cima, contra a parte inferior do quadro impresso na placa de migração (Fig. 3). 

- Dar uma forma côncava ao gel (Fig. 3) e baixá-lo lentamente até contacto com a gota de água. A gota deve repartir-se por toda a largura 

do gel. Ajustar ligeiramente o gel de modo a eliminar as bolhas de ar que se tenham formado. Baixar o gel até ficar na horizontal. 

7. Baixar os dois suportes. Nesta posição as tiras de tampão não tocam no gel. NÃO FORÇAR A DESCIDA DOS SUPORTES MANUALMENTE. 

8. Retirar o(s) aplicador(es) da câmara húmida. Segurá-lo(s) pela estrutura de protecção plástica. 

- Quebrar e retirar a protecção dos dentes. 

- Para analisar 7 ou 15 amostras, colocar o aplicador na posição n° 6 do suporte. 

- Para analisar 30 amostras, colocar os aplicadores nas posições n° 3 e 9. 

IMPORTANTE : Os números impressos nos aplicadores devem ficar virados para o operador (Fig. 4). 

9. Fechar a tampa da câmara de migração. 

10. Dar início imediatamente ao processo apoiando em "START" (flecha verde situada no lado esquerdo do teclado). 

IMPORTANTE : Assegure-se de que a grelha de ventilação não está tapada (à direita do aparelho). 

MIGRAÇÃO - DESCRIÇÃO DOS PASSOS AUTOMÁTICOS 

• Descida dos suportes do aplicador e dos eléctrodos de forma a que as tiras de tampão e o(s) aplicador(es) contactem com a superfície do gel. 

• Subida do aplicador de amostras. 

• A migração é feita à potência constante de 10 W no HYDRAGEL 7 PROTEIN(E), ou a 20 W no HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30, a 20 °C, controlada 

por efeito de Peltier, até que tenham sido atingidos 33 Vh, durante cerca de 7 minutos. 

• Os eléctrodos são desligados com a subida do suporte. 

• Secagem do gel a 65 °C durante cerca de 10 minutos. 

• A placa de migração é arrefecida ; quando chega aos 50 °C ouve-se um sinal sonoro que indica que a tampa da câmara de migração foi 

desbloqueada. A temperatura da placa permanece a 50 °C até que a tampa seja aberta. Depois, a temperatura continua a decrescer até chegar 

aos 20 °C (em menos de 5 minutos). Pode dar-se início a um novo processo de migração. 

NOTA : A tampa da câmara de migração permanece fechada durante todos os passos da migração. 

II. PREPARAÇÃO DAS SEQUÊNCIAS DE TRATAMENTO DO GEL 

1. Abrir a tampa. 

2. Retirar o(s) aplicador(es) e deitá-lo(s) fora. 

3. Levantar os suportes, retirar as tiras de tampão pegando-lhes pelas suas extremidades de plástico e deitá-las fora. 

4. Retirar o gel para tratamento posterior. 

5. Depois de cada utilização, limpar os eléctrodos e a placa de migração com um pano macio e húmido. 

6. Colocar o gel no suporte da câmara de coloração (gel virado para cima) da seguinte maneira (Fig. 5) : 

- Abrir o suporte. 

- Colocá-lo na bancada. 

- Encaixar o gel nas ranhuras existentes. 

- Fechar o suporte. 

- Verificar se o gel está bem encaixado. 

7. Colocar o suporte do gel na câmara de coloração. 

IMPORTANTE : Antes de dar início ao programa de coloração do gel, verificar o seguinte: 

- se o frasco do corante está cheio com 300 ml de solução corante ; 

- se o frasco de descorante contem pelo menos 1 litro de solução descorante ; 

- se o frasco de despejo está vazio. 

Para seleccionar os canais de entrada dos reagentes: consultar a informação indicada no ecrã do aparelho (premir a tecla: "VER CANAIS"). 

IMPORTANTE : Não esquecer de tapar os canais não utilizados. 

8. Seleccionar o programa de coloração "PROT./B1-B2/Hb" no menu do aparelho. 

- Iniciar a operação premindo a tecla "START" (flecha verde no lado direito do teclado). 

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Durante todas as sequências de coloração, descoloração e secagem a câmara permanece fechada. Após arrefecimento da câmara ouve-se 

um sinal sonoro que indica que a tampa da câmara de migração foi desbloqueada. A ventilação é mantida até que o suporte seja retirado. 

III. FINALIZAÇÃO DO TRATAMENTO DO GEL 

1. Retirar o suporte da câmara, abrir e remover o gel seco. 

NOTA: Caso se observem manchas azuis residuais no gel após coloração / descoloração, pode-se realizar uma etapa de lavagem 

suplementar com o programa " LAV. ISOENZ/GEL ", que permite eliminar ou atenuar grandemente as manchas (em termos de intensidade) 

antes da leitura com o densitómetro / scanner. 

2. Se necessário, limpar a parte de trás (suporte plástico) do gel seco com um papel macio e húmido. 

3. Ler num densitómetro / scanner a 570 nm ou com filtro amarelo. 

NOTA : Para os geles com linhas de migração múltiplas (2 ou 3), as extensões da migração podem ser sensivelmente diferentes, sem qualquer 

consequência negativa nos resultados. 

RESULTADOS 

Controlo de qualidade 

Recomenda-se, para cada série de análises, incluir um soro de controlo (ex: Soro de control SEBIA, ref. n° 4785). 

Valores 

A leitura por densitómetria (a 570 nm ou com filtro amarelo) permite definir as concentrações relativas (percentagens) de cada fracção. 

Os valores normais (média ± 2 DP) para cada fracção, obtidos no gel HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30, foram estabelecidos a partir de uma população 

de 158 adultos saudáveis (homens e mulheres). 

A quantificação das proteínas por UV no CAPILLARYS dá valores semelhantes ao procedimento por nefelometria (principalmente para a albumina). 

A SEBIA propõe uma padronização dos valores obtidos com HYDRAGEL após calibração dos sistemas de leitura. 

Valores sem padronização Valores padronizados no CAPILLARYS 

FRACÇÃO HYRYS - DVSE - PHORESIS HYRYS - DVSE - PHORESIS Albumina 59,8 - 72,4 % 53,8 - 65,2 % α-1 globulinas 1,0 - 3,2 % 1,1 - 3,7 % α-2 globulinas 7,4 - 12,6 % 8,5 - 14,5 % ß globulinas 7,5 - 12,9 % 8,6 - 14,8 % 

| γ globulinas | 8,0 - 15,8 % | 9,2 - 18,2 % | 

Recomenda-se que cada laboratório estabeleça os seus próprios valores normais. 

Interpretação 1-16 

Algumas amostras podem apresentar uma ligeira separação na zona alfa-2, dependendo da intensidade e da mobilidade das fracções que a 

compõem, ver PERFIL ELECTROFORÉTICO. 

• Certos soros apresentam fenotipos diferentes de haptoglobina ou de GC globulina. 

• A posição da lipoproteína alfa-1 depende da sua concentração e da conservação da amostra. 

Para informações complementares sobre a interpretação dos perfis electroforéticos obtidos, ver BIBLIOGRAFIA. 

Limitações 

Ver AMOSTRAS PARA ANÁLISE. 

De acordo com os princípios analíticos das técnicas actuais (princípios de electroforese de zona, resolução e sensibilidade), não pode ser dada 

qualquer garantia quanto à detecção total de todos os compostos monoclonais. 

Assistência técnica 

Em caso de maus resultados contactar os serviços técnicos do fornecedor ainda que tenham sido seguidas, escrupulosamente, as instruções para 

a preparação e armazenamento dos reagentes, assim como as instruções de utilização da técnica. 

Estão disponíveis nos Serviços Técnicos da SEBIA fichas de dados de segurança dos diversos reagentes do kit, bem como informação relativa à 

eliminação dos desperdícios. 

CARACTERÍSTICAS DO ENSAIO 

Análise de soros 

Reprodutibilidade intra-ensaio 

Efectuou-se a migração de três (3) amostras diferentes de soro em 3 geles HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 de um mesmo lote. As médias, desvio 

padrão (DP) e coeficientes de variação (CV) (n = 15) foram calculados para cada amostra e cada fracção. A tabela seguinte apresenta os resultados 

obtidos para a 3 amostras. 

FRACÇÃO MÉDIA (%) DV CV% Soro 1 2 3 1 2 3 1 2 3 Albumina 70,4 68,8 65,9 0,2 0,7 0,6 0,3 1,0 0,9 Alfa-1 1,9 1,9 1,3 0,1 0,1 0,1 3,5 3,9 7,3 Alfa-2 9,9 9,4 7,6 0,2 0,2 0,2 1,6 2,6 2,4 Beta 10,6 8,6 7,8 0,4 0,3 0,1 3,3 3,5 1,8 

| Gama | 7,2 11,4 17,4 | 0,2 0,3 0,3 | 3,4 2,8 2,0 | 

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Reprodutibilidade inter-ensaios 

Efectuou-se a migração de quinze (15) amostras diferentes de soro em 5 geles HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 de um mesmo lote. Os coeficientes 

de variação médios (CV), desvio padrão (DP) e coeficientes de variação (CV) (n = 5) foram calculados para cada amostra e cada fracção. Os 

resultados são sensivelmente os mesmos para todas as amostras. A tabela seguinte apresenta os valores de desvio padrão e de coeficiente de 

variação representando todas as amostras e um coeficiente de variação médio obtido a partir do conjunto de todos os coeficientes de variação de 

todas as amostras. 

FRACÇÃO DP CV (%) CV MEDIA (%) Albumina 0,2 - 0,9 0,3 - 1,4 0,8 Alfa-1 0,1 - 0,2 2,1 - 9,8 4,6 Alfa-2 0,1 - 0,3 0,9 - 3,1 1,8 Beta 0,1 - 0,3 1,1 - 3,8 2,0 

| Gama | 0,1 - 0,5 | 1,3 - 5,6 | 2,9 | 

Precisão 

Efectuou-se a migração de noventa (90) amostras diferentes de soro (soros normais e patológicos) em geles HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 e num 

outro sistema de agarose disponível comercialmente. 

Os parametros de correlacção entre os dois sistemas de gel (Y - HYDRAGEL) para cada fracção são: 

Fracção Coeficiente de correlação Intercepção - y Declive Limites de valores %* Albumina 0,983 3,673 0,942 54,9 - 72,9 Alfa-1 0,984 0,937 0,972 1,2 - 6,7 Alfa-2 0,984 0,635 0,977 7,6 - 16,5 Beta 0,953 -0,071 0,984 6,9 - 15,0 

| Gama | 0,976 | -0,435 | 1,033 | 6,0 - 18,9 | 

* Valores definidos no sistema HYDRAGEL 15 & 30 PROTEIN(E). 

Sensibilidade 

Um soro patológico com uma proteína monoclonal a 21,2 g/l é diluído em série. Realiza-se a migração das diluições no gel HYDRAGEL PROTEIN(E) 

15/30 e noutro sistema em gel de agarose disponível comercialmente. Após comparação a olho nú, a maior diluição que permite ver a banda 

monoclonal é de 1/128 para o gel HYDRAGEL. A concentração mais baixa detectada de uma banda monoclonal é de 0,17 g/l. 

NOTA: Consoante a posição da banda monoclonal e do fundo policlonal na zona das gamaglobulinas, o limite de detecção de uma paraproteína pode variar. 

Análise das urinas concentradas 

Os resultados obtidos com o gel HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 após análise quantitativa e qualitativa indicam uma reprodutibilidade muito boa do 

kit HYDRAGEL 15 & 30 PROTEIN(E) em todos os aspectos testados. A análise qualitativa de 28 amostras diferentes por electroforese no gel 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 e noutro sistema em gel de agarose disponível comercialmente mostra uma correlação entre os dois sistemas de 

análise. A sensibilidade da técnica HYDRAGEL 15 & 30 PROTEIN(E), para a análise de urina concentrada, que permite detectar uma paraproteína 

urinária é da ordem de 0,48 g/l. 

BIBLIOGRAFIA 



21/03/91, p. 782 à 785. 

(3) Garnier J.P., Laurent D., Clauvel J.P., Danon F., Bousquet B., Dreux C. Dosages des protéines sériques : cause d’erreur en cas d’immunoglobuline 

monoclonale. Act. Pharm. Biol. Clin., 1987, 4, p. 275 à 278. 


Pathology, 1989, 21, p. 35 à 41. 


2nd ed., 1994, 397 pp. 




du myélome, de la maladie de Waldenström et des autres gammapathies monoclonales. L’Eurobiologiste, 1991, Tome XXV, n° 195, p. 283 à 285. 


(9) Le Carrer D. Électrophorèse et Immunofixation des Protéines Sériques, Interprétations illustrées. Laboratoires SEBIA, 1994, 120 pp, Ed. Hatier - 

Paris. 









- 48 -


PERFIL ELECTROFORÉTICO 

+ 

Albumina 

Orosomucóide 


α1 Antiquimotripsina 


GC Globulina 


Haptoglobina 

α Lipoproteína 

Transferrina 

Hemopexina 

Plasminogéneo 

Fibronectina 


β Lipoproteína 

γ Globulinas 

G - A - M - D - E 

- 

Detalhe da zona alfa-2 : 

2 (± 5) 2 (± 5) 

1 + 2 + 3 + 4 + 5 1 + 2 + 3 + 4 (± 5) 1 + 3 + 4 (± 5) 

A B C 


2 = Haptoglobina 


4 = GC Globulina 

5 = α1 Lipoproteína 

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ANVÄNDNINGSOMRÅDE 

HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) och HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 geler är avsedda för separation av proteiner i humant serum och urin genom 

elektrofores på alkaliskt buffrade (pH 9.2) agaros geler. De normala serumproteinerna separeras i fem huvudfraktioner. Kiten används tillsammans 

med det halvautomatiska instrumentet HYDRASYS. Separerade proteiner färgas med amidosvart. Elektroforesogrammen utvärderas visuellt för 

abnormala mönster. Densitometri ger en noggrann och relativ kvantifiering av inviduella zoner. 

Varje agarosgel är avsedd för körning: 

• 7 prov i HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) kit, 

• 15 prover i HYDRAGEL 15 PROTEIN(E) kit, 

• 30 prover i HYDRAGEL 30 PROTEIN(E). 

Endast för in vitro diagnostik. 

TESTPRINCIPER 1-15 

Elektrofores av proteiner är en väletablerad teknik som används rutinmässigt vid kliniska laboratorier för screening av serum och andra vätskor för 

proteinabnormaliteter. Den är baserat på principen hos zonelektrofores som utförs på ett lämpligt hjälpmedium. Agaros har utvecklats till ett mångsidigt 

och användbart hjälpmedium. Vid rutinmässiga diagostiska applikationer, separeras serumproteiner in i fem huvudfraktioner, huvudsakligen enligt 

deras laddning vid ett givet pH: albumin, alfa-1 globuliner, alfa-2 globuliner, beta globuliner och gamma globuliner. Varje zon innehåller en eller flera 

serumproteiner. Proteinmönstren för urin liknar dem för serum. Dock kan de relativa intensiteterna hos fraktionerna eller deras närvaro variera mycket 

beroende på njurarnas filteringskapacitet. 

MEDFÖLJANDE REAGENSER OCH MATERIAL I HYDRAGEL 7, 15 OCH 30 PROTEIN(E) KITEN 

OBJEKT PN 4100 PN 4120 PN 4140 Agaros geler (färdiga att anv.) 10 geler 10 geler 10 geler Buffrade strips (färdiga att anv.) 10 förp. med 2 10 förp. med 2 10 förp. med 2 Färgningslösning diluent (stamlösning) 1 flaska, 60 mL 1 flaska, 60 mL 1 flaska, 60 mL Amidosvart färg (stamlösning) 1 flaska, 20 mL 1 flaska, 20 mL 1 flaska, 20 mL Applikatorer (färdiga att anv.) 1 förp. med 10 (7 tänder) 1 förp. med 10 (15 tänder) 2 förp. med 10 (15 tänder) 

| Filterpapper | 1 förp. med 10 | 1 förp. med 10 | 1 förp. med 10 | 

FÖR OPTIMALA RESULTAT 

Alla reagenser från samma kit måste alltid användas tillsammans och enligt de instruktioner som anges på förpackningens insticksblad. 

LÄS NOGGRANNT FÖRPACKNINGENS INSTICKSBLAD 

1. AGAROS GELER 

Förberedelse 

Agaros geler är färdiga att använda. Varje gel innehåller: agaros, 0.8 g/dL ; tris-barbital buffetr pH 9.2 ± 0.1 ; tillsatser, ofarliga vid använda 

koncentrationer men nödvändiga för optimala prestanda. 

VARNING: Agaros geler innehåller 0.31 % barbital och 0.34 % natrium barbital. Färtär inte ! Om så sker, kontakta läkare omedelbart ! 

Användning 

Hjälpmedium för proteinelektrofores. 

Lagring, stabilitet och tecken på förändring 

Förvara gelerna liggande i originalförpackningen vid rumstemperatur (15 till 30 °C) eller i kylskåp (2 till 8 °C). De är hållbara fram till angivet 

utgångsdatum på förpackningen eller på gelförpackningens etiketter. (Pilen på förpackningens framsida måste peka uppåt). 

Undvik förvaring nära fönster eller värmekälla. Undvik större temperaturvariationer under lagring. 

FRYS INTE IN GELEN. 

Släng gelen om: 

(i) kristaller eller fällning bildats på gelytan eller om gelkonsistensen blivit väldigt mjuk (inträffar när gelen varit fryst), 

(ii) bakteriell tillväxt eller mögeltillväxt påvisas, 

(iii) onormal mängd vätska är närvarande i påsförpackningen (som ett resultat av buffertutsöndring från gelen på grund av felaktiga 

lagringsförhållanden). 

2. BUFFRADE STRIPS 

Förberedelse 

Buffrade svampstrips är färdiga att använda. Varje strips innehåller: tris-barbital buffert pH 9,2 ± 0.3 ; natriumazid ; tillsatser, ofarliga vid använda 

koncentrationer, men nödvändiga för optimala prestanda. 

VARNING: Bufferten i stripsen innehåller 0.92 % barbital, 1.03 % natrium-barbital och 0.30 % natriumazid Förtär inte !! Om så skulle ske, 

kontakta läkare omedelbart ! Vid avyttring, undvik kontakt med syra, bly eller koppar, då dessa kan bilda explosiva eller giftiga föreningar 

med natriumazid. 

Användning 

Buffrade strips fungerar som en elektroforetisk buffertreservoar och säkerställer kontakt mellan gelen och elektroderna. 


Förvara de buffrade stripsen liggande i sin originalförpackning vid rumstemperatur eller i kylskåp. (Pilen för förpackningens framsida måste peka 

uppåt). 

De är hållbara fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på stripsens förpackningsetikett. 

FRYS INTE STRIPSEN. 

Kasta! om förpackningen är öppen eller om stripsen är uttorkade. 

- 50 - 

SEBIA INSTRUKTIONER - Svenska


3. FÄRGNINGSLÖSNING DILUENT 

Förberedelse 

Stamfärglösnings diluent måste användas enligt beskrivning i paragraf " AMIDOSVART FÄRG " 

Den innehåller en sur lösning. 

Användning 

För förberedelse av amidosvart färglösning. 


Lagra stamfärglösnings diluent vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är hållbar framtill angivet utgångsdatum på förpackningen eller på eller på 

stamfärglösningens flasketiketter. 

FRYS INTE IN. 

Tillsätt inte natriumazid. 

4. AMIDOSVART FÄRG 

Förberedelse 

Amidosvart koncentratet är visköst och kan bli trögflytande. Egenskaperna hos stamlösningen påverkas ej av ökad viskositet eller löslighet. 

För att uppnå en perfekt rekonstituering av färgen, vänligen respektera nedansående procedur: 

1. Tillsätt 15 ml färgdiluent till vialen amidosvartkoncentrat. 

2. Stäng vialen omsorgsfullt. 

3. Skaka vialen kraftigt i c:a 5 sekunder. 

4. Häll lösningen i behållaren för färgprocessning. 

5. Repetera dessa steg 2 eller 3 gånger om nödvändigt. 

6. Överför återstående diluent till behållaren och fyll upp till 300 ml med destillerat eller avjoniserat vatten. 

7. Blanda innehållet i behållaren noga 5 till 10 minuter. Färglösningen är nu redo att användas. 

NOTERA: En icke komplett reconstituerad färglösning kan leda till en undervärdering av albuminfraktionen (lågt procenttal eller vita hål i fraktionen). 

Efter spädning innehåller arbetsfärglösningen : sur lösning pH ≈ 2 ; amidosvart, 0.4 g/dL ; etylen-glykol, 6.7 % ; tillsatser, ofarliga vid använda 

koncentrationer men nödvändiga för optimala prestanda. 

VARNING: Farligt att svälja. 

Användning 

För färgning av geler med elektroforetisk proteinseparering. 

VIKTIGT : Färglösningen är avsedd för färgning av endast 10 geler. Byt lösning efter 10 färgsteg. 


Lagra både stam- och arbetsfärglösningarna vid rumstemperatur eller i kylskåp i stängda behållare för att förhindra avdunstning. Stamfärglösningen 

är hållbar fram till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på färgflaskornas etiketter. 

Arbetsfärglösningen är hållbar i 1 månad. 

Förvara inte arbetsfärglösningen i närheten av en värmekälla. 

5. APPLIKATORER 

Användning 

Tillskurna applikatorer för engångsbruk. För provapplicering på gel. 

Förvaring 

Förvara applikatorerna på en torr plats, vid rumstemperatur eller i kylskåp. 

6. FILTERPAPPER 

Användning 

Tunnt tillskurna och absorberande pappersbitar för engångsbruk. Används för borttagning av fukt på gelytan innan provapplicering. 

Förvaring 

Förvara filterpappren på ett torrt ställe i rumstemperatur eller i kylskåp. 

ERFORDERLIGA REAGENSER 

1. AVFÄRGNINGSLÖSNING 

Förberedelse 

Varje flaska med stamfärgningslösning (SEBIA, PN 4540, 10 flaskor 100 mL i varje) skall spädas upp till 100 liter med destillerat eller avjoniserat 

vatten. Det är lämpligt att endast späda 5 mL av stamlösningen till 5 liter, som är volymen hos behållaren för avfärgningslösning. Efter spädning 

innehåller den färdiga bruksavfärgningslösningen: citronsyra, 0.05 g/dL. 

Användning 

För avfärgning, vilket innebär borttagning av överflödig färg samt bakgrundsfärg från gelerna. 

För rengöring av färgfacket efter tvättsteget. 

För att neutralisera den sura avfärgningslösningen, pippetera 15 mL av en 50 % Natriumhydroxidlösning, in i den tomma avfallsbehållaren. 


Lagra avfärgningsstamlösningen vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är hållbar till angivet utgångsdatum på förpackningen eller på 

avfärgninglösningens flasketiketter. 

FRYS INTE IN AVFÄRGNINGSLÖSNINGEN ! Den färdigspädda avfärgningsslösningen är hållbar i en vecka vid rumstemperatur i en stängd flaska. 

Tillsätt ej natriumazid ! 

Kasta bruksavfärgningslösningen om den förändras i utseende t.ex., blir grumlig p.g.a. mikrobiell kontaminering. 

För att förhindra mikrobiell tillväxt i den spädda avfärgningslösningen (vid lagring mer än 1 vecka) tillsätt 5 µl/dL ProClin 300. 

Bruksavfärgningslösning tillsatt med ProClin är hållbar i stängd flaska, förvarad vid rumstemperatur eller i kylskåp till angivet utgångsdatum på 

förpackningen eller på avfärgninglösningens flasketiketter. 

- 51 -

2. HYDRASYS TVÄTTLÖSNING 


Förberedelse 

Varje flaska av HYDRASYS stamtvättlösning (SEBIA PN 4541, 10 flaskor, 80 mL varje) skall spädas upp till 5 liter med destillerat eller avjoniserat 

vatten. Efter spädning innehåller den färdiga tvättlösningen : alkalisk buffert pH 8.8 ± 0,3 ; natriumazid. 

VARNING: Brukstvättlösningen innehåller 0.625 % natriumazid. Farligt att förtära ! Om så skulle ske, kontakta läkare omedelbart ! 

Natriumazid kan leda till bildning av explosiva eller giftiga ämnen vid kontakt med syror, bly eller koppar. Spola alltid med en stor mängd 

vatten vid avyttring. 

Användning 

HYDRASYS tvättlösning används för rengöring av HYDRASYS färgfack. Använd regelbundet, t.ex. om instrumentet används dagligen, tvätta 

färgfacket varje vecka. 

Se förpackningens insticksblad för användarinstruktioner. 


Förvara stam- och brukstvättlösningarna i stängda behållare vid rumstemperatur eller kylskåp. Lösningarna är hållbara fram till angivet utgångsdatum 

på tvättlösningsflaskornas etiketter. Kassera brukstvättlösningen om den förändras i utseende, t.ex. blir grumlig på grund av bakteriell kontaminering. 

3. FLUIDIL 

Förberedelse 

Fluidil (SEBIA, PN 4587, 5 mL) är färdig att använda. 

Användning 

För spädning av viskösa eller grumliga prov, t.ex. serum som innehåller kryoglobulin eller kryogel. 


Förvara vid rumstemperatur eller i kylskåp. Den är hållbar till angivet utgångsdatum på Fluidilflaskans etikett. 

Fluidil måste vara fri från fällning. 

UTRUSTNING OCH NÖDVÄNDIGA TILLBEHÖR MEN INTE MEDLEVERERADE 

1. HYDRASYS System SEBIA, PN 1210 eller PN 1211. 

2. Mikropipett, manuell eller automatisk, t.ex. HYDRAplus SEBIA, PN 1215, ett alternativt sätt att ladda provapplikatorerna. 

3. Fuktkammare, PN 1270, levererad med HYDRASYS. 

4. Behållarsats levererad med HYDRASYS. 

5. Pipetter: 10 µl och 200 µl. 

6. Densitometer / scanner kapabel att scanna 82 x 51 mm eller 82 x 102 mm gelplatttor vid 570 nm eller med ett gult filter: HYRYS SEBIA, DVSE 

SEBIA eller PHORESIS mjukvara anpassat för en flat-bed scanner. Se tillverkarens instruktioner för åtgärder och kalibreringsrutiner. 

7. Gelhållare för halva geler, SEBIA, PN 10043110. 

PROV FÖR ANALYS 

Provinsamling och lagring 

Färska serumprov rekommenderas för analys. Serum och urin måste insamlas enligt vedertagna rutiner vid klinisk laboratorietestning. Förvara proven 

i kylskåp (2 till 8 °C) direkt efter insamling och upp till en vecka. Vid längre förvaring, frys in proven. (hållbara minst en månad). 

Frysning av serumprov med natriumazid 0,02 g/dL ökar hållbarheten. 

Frysning av urinprov med HEPES 0.1 M (pH 6.75) och natriumazid, 0,02 g/dL, ökar hållbarheten. 

VIKTIGT: Undvik borsyra som konserveringsmedel. 

Tinade prover kan ge lätta appliceringsmärken på grund av protein- eller lipoproteindenaturering. 

Lagring vid 2 till 8 °C och frysning orsakar anodisk förskjutning av beta-lipoproteiner från betazonen till alfa-2 eller alfa-1 zonerna ; ju äldre serum, 

desto större förskjutning. 

Provförberedelse 

1. Sera 

Använd outspädda serumprov. 

Efter lagring vid 2 till 8 °C eller efter frysning, kan vissa sera (speciellt de som innehåller kryoglobulin eller kryogel) bli viskösa eller utveckla 

grumlighet. Sådana sera kan ge appliceringsproblem på grund av förhindrad diffundering i provapplikatorns tänder. I sådant fall, tillsätt 25 µl Fluidil 

till 75 µl serum och vortexa i 15 sekunder. Följ därefter normalt förfaringssätt. 

2. Koncentrerade urinprov 

Analys utförs på prover som tidigare koncentrerats till en total proteinkoncentration på 1.5 - 2.0 g/dL (med lämpligt hjälpmedel). 

VIKTIGT: En del urinprover är salthaltiga. Detta kan ge upphov till geldeformering under migrering och som följd, förvridning av 

migrationsprofilerna. Om en sådan förvridning gör tolkningen felaktig, måste urinprovet dialyseras för bortagning av salterna. 

NOTERA : Diffundering av urinprover in i applikatorspetsarna kan hindras när urinen (ospädd eller koncentrerad) är grumlig. Det rekommenderas 

att avlägsna partiklar med centrifugering (t.ex. 10 minuter vid 3,000 rpm) eller filtrering (t.ex., 0.45 µm filter för sterilfiltrering). 

Prov att undvika 

• Använd inte hemolyserade serumprov. Hemolys ökar alfa-2 och betazoner. 

• Undvik plasmaprov. Fibrinogen ger ett band i närheten av appliceringspunkten som kan tas för monoklonalt immunoglobulin och skulle utöka 

procenthalten för motsvarande zon. 

• Undvik gamla, felaktigt lagrade urinprover där enzymatisk nedbrytning av proteiner kan ha förekommit. 

- 52 -


TILLVÄGAGÅNGSSÄTT 

HYDRASYS-systemet är ett halvautomatiskt multi-parameter instrument. De automatiska stegen inkluderar bearbetning av HYDRAGEL agarosgeler 

i följande ordning: provapplicering, elektroforetisk migrering, torkning, färgning, avfärgning och slutligen torkning av gelen. De manuella stegen 

inkluderar hantering av prov och geler, applicering av reagenser samt att förbereda instrumentet för arbete. 

LÄS NOGGRANT HYDRASYS INSTRUKTIONSMANUAL. 

I. MIGRERING 

1. Starta HYDRASYS instrumenet. 

2. Placera en applikator för HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) (7 prov) och HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 (15 prov), eller två applikatorer för 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 (30 prov), på en slät med brunnarnas nummer (angivna på höger sida) vända uppåt (Fig. 1). 

- Applicera 10 µL ospätt serum eller koncentrerat urinprov i varje brunn. Ladda varje applikator inom 2 minuter. 

- Placera applikatorn / applikatorerna i fuktkammaren med tänderna uppåt (håll i den skyddande plast ramen). Låt proverna diffundera in i 

tänderna i 5 minuter efter den sista provappliceringen. För senare användning (upp till 8 timmar), förvara hela kammaren i kylskåp. 

Se förpackningsbilagan för fuktkammaren för ytterligare detaljer. 

3. Öppna luckan till Migrationsmodulen, och lyft upp elektrod- och applikatorhållaren 

VARNING: Stäng aldrig luckan när hållarna är i höjt läge. 

4. Välj "7 PROTEIN(E)" migrationsprogram för HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) eller "15/30 PROTEIN(E)" migrationsprogram för HYDRAGEL 

PROTEIN(E) 15/30 på instrumentmenyn (tangentbordets vänstra sida). 

5. Ta ur de buffrade stripsen ur förpackningen ; ta dem i plaständarna. Sätt de hålstansade plaständarna på stripsen på elektrodhållarens stift ; 

stripsens plaststöd måste vara vända mot elektrodhållaren (Fig. 2). 

6. Ta ut HYDRAGEL plattan. 

- Rulla snabbt och jämt med ett tunt filterpapper på gelytan för bortagning av överflödig vätska.Ta direkt bort pappret. 

VARNING: För att undvika uttorkning : låt inte filterpappret vara i kontakt med gelen under längre tid. 

- Pippettera 120 µL destillerat eller avjoniserat vatten för HYDRAGEL 7 PROTEIN(E), eller 200 µL för HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30, på 

den lägre tredjedelen av ramen som är tryckt på migrationsmodulens temperaturkontrollplatta. 

- Placera gelplattan (gelsidan uppåt) med kanten mot stoppet i botten på den tryckta ramen (Fig. 3). 

- Böj gelen och släpp den försiktigt ned i vattendroppen (Fig. 3). Förvissa dig om att inga luftbubblor finns kvar, att vattnet fördelar sig under 

hela gelplattan och att gelen är i linje med den tryckta ramen. 

7. Fäll ned båda hållarna. I detta läge berör inte de buffrade stripsen gelen. TRYCK INTE NED HÅLLARNA HELT. 

8. Avlägsna applikatorn/applikatorerna från fuktkammaren. Håll i den skyddande plastramen. 

- Avlägsna applikatorns tandskyddsram. 

- För 7 och 15 provsanalys, placera applikatorn i position nr. 6 på hållaren. 

- För 30 provsanalys, placera de två applikatorerna var och en i position nr. 3 och 9. 

VIKTIGT: Det tryckta numret på applikatorn(applikatorerna måste vara vänt mot operatören (Fig. 4). 

9. Stäng luckan till migrationsmodulen 

10. Starta proceduren direkt genom att trycka på den gröna piltangenten "START" på tangentbordets vänstra sida. 

VIKTIGT: Förvissa dig om att ventilationsintaget på instrumentets högra sida inte är blockerat. 

MIGRERING – BESKRIVNING AV AUTOMATISKA STEG 

• De två hållarna sänks så att de buffrade stripsen och applikatorn/applikatorerna får kontakt med gelytan. 

• Provapplikatorn höjer sig 

• Migrering sker under 10 W konstant strömstyrka för HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) eller 20 W konstant strömstyrka för HYDRAGEL PROTEIN(E) 

15/30, vid 20 °C kontrollerat av Peltiereffekten, tills 33 Vh har ackumulerats (under ca. 7 minuter). 

• Elektrodhållaren höjer sig för att koppla ur elektroderna. 

• Kontrollplattans temperatur ökar till 65 °C under 10 minuter för att torka gelen. 

• Kontrollplattan kyls ned; när temperaturen når 50 °C, hörs en ljudsignal som aviserar att migrationmodulens lucka låses upp. Plattans temperatur 

hålls vid 50 °C tills luckan öppnas. Därefter sjunker temperaturen ner till 20 °C (på under 5 minuter) Därefter kan en ny migrationskörning startas. 

NOTERA: Locket till migrationsmodulen förblir stängt under alla migrationsstegen 

II. GELBEARBETNING 

1. Öppna luckan. 

2. Avlägsna och släng applikatorn / applikatorerna. 

3. Lyft upp båda hållarna, avlägsna de buffrade stripsen och släng dem. 

4. Avlägsna den torkade gelfilmen för vidare bearbetning. 

5. Efter varje användning, torka av elektroderna och temperaturkontrollplattan med en fuktad mjuk servett. 

6. Öppna Gelhållaren. Lägg den torkade gelen (med gelsidan uppåt) i fördjupningarna på de två listerna och stäng gelhållaren. Förvissa dig om 

att filmen är korrekt placerad inuti hållaren (Fig. 5). 

7. Placera gelhållaren i färgningsmodulen. 

VIKTIGT: Innan start av gelbearbetning-/färgningsprogrammet, kontrollera följande : 

- att färgningsbehållaren är fylld med 300 mL färgningslösning ; 

- att avfärgningsbehållaren innehåller minst 1 liter avfärgningslösning 

- att avfallsbehållaren är tom. 

För reagenslinjeförbindelse: Hänvisas till visad information på instrumentets skärm (välj tangent: "REAGENT LINES"). 

VIKTIGT: Glöm inte att spärra oanvända linjer. 

8. Välj "PROT./B1-B2/Hb" färgningsprogram på instrumentmenyn och starta körningen genom att trycka på tangenten "START" (grön pil på 

tangentbordets högra sida). 

Under färgning-, avfärgning- och torkningsstegen, förblir facket låst. 

Efter kylningssteget, hörs en ljudsignal när facket öppnas (ventilation upprätthålls tills gelhållaren avlägsnas). 

- 53 -


III. SLUTFÖRANDE AV GELBEARBETNING 

1. Ta ut gelhållaren från facket, öppna och avlägsna den torkade gelen. 

NOTERA : Efter gelfärgning/avfärgning och innan densitometri/scanning, kan en gel genomgå ett ytterligare tvättsteg, om nödvändigt, för att 

ytterligare klargöra gelbakgrunden och avlägsna eventuella färgrester som kan framträda som blåa fläckar. Tvätta gelen med användning av 

programmet "WASH ISOENZ/GEL". 

2. Om nödvändigt, rengör den torra filmens baksida (stödsidan av plast) med ett fuktat mjukt papper. 

3. Scanna med densitometer/scanner vid 570 nm eller med ett gult filter. 

ANMÄRKNING : Längden hos de elektroforetiska migreringarna kan vara något olika för geler innehållande 2 eller 3 analysspår, utan några 

ofördelaktiga effekter på utförandet. 

RESULTAT 

Kvalitetskontroll 

Det rekommenderas att inkludera ett kontrollserum (Control Serum, SEBIA PN 4785) i varje provkörning. 

Värden 

Scanning med densitometer (vid 570 nm) på färgade elektroforesogram ger relativa koncentrationer (i procent) för invididuella proteinzoner. 

Normalvärden (medel ± 2 SD) för individuella betydande elektroforetiska serumproteinzoner hos HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 geler geler har 

fastställts för en frisk population på 158 vuxna (män och kvinnor). 

UV-proteinkvantifiering med CAPILLARYS ger liknande värden som med ett nefelometrisk metod (speciellt för albumin). SEBIA föreslår en 

standardisering av erhållna värden hos HYDRAGEL efter kalibrering av scanningssystemen. 

Utan standardiseringsvärden Med CAPILLARYS standardiseringsvärden 

FRAKTION HYRYS - DVSE - PHORESIS HYRYS - DVSE - PHORESIS Albumin 59.8 - 72.4 % 53.8 - 65.2 % Alfa-1 globuliner 1.0 - 3.2 % 1.1 - 3.7 % Alfa-2 globuliner 7.4 - 12.6 % 8.5 - 14.5 % Beta globuliner 7.5 - 12.9 % 8.6 - 14.8 % 

| Gamma globuliner | 8.0 - 15.8 % | 9.2 - 18.2 % | 

Det rekommenderas att varje laboratorium fastställer sina egna normalvärden. 

Tolkning 1-15 

En del sera kan eventuellt visa en svag separering vilket beror på koncentrationen och rörligheten hos alfa-2 zon proteinkomponenterna, se 

MIGRATIONSMÖNSTER. 

• En del sera har olika fenotyper (Haptoglobin, GC Globulin). 

• Alfa-1 lipoprotein är beroende på koncentration och förvaring av provet. 

För hjälp vid tolkning av serum och urinprotein-elektroforesogram ; se BIBLIOGRAFI. 

Interferens och begränsningar 

Se PROVANALYS. 

På grund av upplösnings- och sensitivitetsbegränsningar hos zonelektrofores, är det möjligt att vissa monoklonala komponenter inte blir upptäckta 

med denna metod. 

Felsökning 

Ring leverantörens tekniska support om testet misslyckas trots att manualen och att givna instruktioner för materialförvaring och förberedelse av test 

följts. 

Säkerhetsinformation för reagenserna i satsen och information för avfallshantering finns tillgängliga hos leverantörens tekniska serviceavdelning. 

PRESTANDADATA 

Serumanalys 

Reproducerbarhet inom serie 

Tre (3) olika prov kördes vart och ett i 15 spår på HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 geler från samma gelbatch. Medelvärden, SD och CV (n = 15) 

beräknades för varje serumprov och för varje zon. Följande tabell visar resultaten för de 3 serumproven. 

FRAKTION MEDEL (%) SD CV (%) Serum 1 2 3 1 2 3 1 2 3 Albumina 70.4 68.8 65.9 0.2 0.7 0.6 0.3 1.0 0.9 Alfa-1 1.9 1.9 1.3 0.1 0.1 0.1 3.5 3.9 7.3 Alfa-2 9.9 9.4 7.6 0.2 0.2 0.2 1.6 2.6 2.4 Beta 10.6 8.6 7.8 0.4 0.3 0.1 3.3 3.5 1.8 

| Gamma | 7.2 11.4 17.4 | 0.2 0.3 0.3 | 3.4 2.8 2.0 | 

Reproducerbarhet utom serie 

Femton(15) olika serumprov kördes vart och ett under 5 olika dagar med samma batch av HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 geler. Medelvärden, SD 

och CV (n = 5) beräknades för varje serumprov och för varje zon. Erhållna resultat var i stort samma för alla prover. Följande tabell visar områden för 

SD och CV representerande alla prov och ett medel CV från sammanslagna CV’s för alla prov (n = 15). 

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FRAKTIONER SD CV (%) MEDEL CV (%) Albumin 0.2 - 0.9 0.3 - 1.4 0.8 Alfa-1 0.1 - 0.2 2.1 - 9.8 4.6 Alfa-2 0.1 - 0.3 0.9 - 3.1 1.8 Beta 0.1 - 0.3 1.1 - 3.8 2.0 

| Gamma | 0.1 - 0.5 | 1.3 - 5.6 | 2.9 | 

Nogrannhet 

Nittio (90) olika prov (patologiska och normala sera) kördes på HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 geler och ett annat kommersiellt tillgängligt agaros 

gelsystem. Korrelationsparametrar beräknades för inviduella zoner på HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 geler vs. jämförbara gelsystem (y- 

HYDRAGEL) var : 

Fraktion Korrelationskoefficient y-brytpunkt Kurva Område för % värden för använda prov * Albumin 0.983 3.673 0.942 54.9 - 72.9 Alfa-1 0.984 0.937 0.972 1.2 - 6.7 Alfa-2 0.984 0.635 0.977 7.6 - 16.5 Beta 0.953 -0.071 0.984 6.9 - 15.0 

| Gamma | 0.976 | -0.435 | 1.033 | 6.0 - 18.9 | 

* Procentvärderna är fastställda för HYDRAGEL 15 & 30 PROTEIN(E) systemet. 

Sensitivitet 

Ett patologiskt serumprov med en monoklonal protein 2.12 g/dL blev seriellt spätt och spädningarna genomgick elektrofores på HYDRAGEL 

PROTEIN(E) 15/30 geler. Efter visuell granskning av gelen, var den högsta spädningen med ett urskiljbart monoklonalt band 1/128 för HYDRAGEL 

PROTEIN(E) 15/30 systemet. Således, lägsta detekterbara koncentration för ett monoklonalt protein var ca. 0.017 g/dL. 

NOTERA : Beroende på den monoklonala komponentens läge och polyklonala bakgrund i gammazonen, kan detektionsgränsen variera. 

Analys av koncentrerade urinprov 

Erhållna resultat med HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 geler indikerar en mycket god reproducerbarhet inom och mellan körningar gällande för 

koncentrerade urinprov efter kvantitativ och kvalitativ analys. Tjugoåtta (28) olika prov (patologiska- och normal urinprov) kördes på HYDRAGEL 

PROTEIN(E) 15/30 geler och på ett annat komersiellt tillgängligt agaros gelsystem. Det fanns inga visuellt detekterbara skillnader mellan de två 

systemen. Detektionskänsligheten fastställdes från de högsta seriella spädningarna från ett monoklonalt urinprotein som visade ett urskiljbart band vid 

0.048 g/dL. 

BIBLIOGRAFI 



21/03/91, p. 782 à 785. 




Pathology, 1989, 21, p. 35 à 41. 


2nd ed., 1994, 397 pp. 







Paris. 







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MIGRATIONSMÖNSTER 

+ 

Albumin 

Orosomukoid 

α1-Antitrypsin 

α1-Antikymotrypsin 

Ceruloplasmin 

GC Globulin 

α2-Makroglobulin 

Haptoglobin 

β-Lipoprotein 

Transferrin 

Hemopexin 

Plasminogen 

Fibronektin 

C3-Komplement 

β-Lipoprotein 

γ-Globulin 

G - A - M - D - E 

- 

Alfa-2 : 

2 (± 5) 2 (± 5) 

1 + 2 + 3 + 4 + 5 1 + 2 + 3 + 4 (± 5) 1 + 3 + 4 (± 5) 

A B C 

1 = α2-Makroglobulin 




5 = α1-Lipoprotein 

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ΠΡΟΒΛΕΠΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ 

Τα κιτ HYDRAGEL 7, 15 και 30 PROTEIN(E) είναι σχεδιασµένα για το διαχωρισµό πρωτεϊνών του ανθρώπινου ορού και ούρων µε 

ηλεκτροφόρηση σε αλκαλική (pH 9.2) γέλη αγαρόζης. Λόγω σχεδιασµού, οι φυσιολογικές πρωτεΐνες του ορού διαχωρίζονται σε έξι κύρια 

κλάσµατα. Τα κιτ χρησιµοποιούνται µε την ηµι-αυτοµατοποιηµένη συσκευή ηλεκτροφόρησης HYDRASYS. Οι διαχωρισµένες πρωτεΐνες 

υφίστανται χρώση µε amidoblack. Τα προκύπτοντα ηλεκτροφορήµατα αξιολογούνται οπτικά. Η πυκνοµέτρηση προσφέρει ακριβή, σχετική 

ποσοτικοποίηση των επιµέρους ζωνών. 

Κάθε gel αγαρόζης προορίζεται για την ανάλυση : 

• 7 δειγµάτων στο κιτ HYDRAGEL 7 PROTEIN(E), 

• 15 δειγµάτων στο κιτ HYDRAGEL 15 PROTEIN(E), 

• 30 δειγµάτων στο κιτ HYDRAGEL 30 PROTEIN(E). 

Για In Vitro διαγνωστική χρήση. 

ΑΡΧΗ ΤΗΣ ∆ΟΚΙΜΑΣΙΑΣ 1-15 

Η ηλεκτροφόρηση πρωτεϊνών είναι µια καθιερωµένη τεχνική η οποία χρησιµοποιείται καθηµερινά στα κλινικά εργαστήρια για την εξέταση 

ορού και άλλων σωµατικών υγρών. Βασίζεται στις αρχές της ηλεκτροφόρησης ζώνης πραγµατοποιούµενη σε κατάλληλο υποστηρικτικό 

µέσο. Η αγαρόζη έχει αναπτυχθεί σε ένα πολυχρηστικό και αποτελεσµατικό υποστηρικτικό µέσο. Στις καθηµερινές διαγνωστικές 

εφαρµογές, οι πρωτεΐνες του ορού διαχωρίζονται σε πέντε κύρια κλάσµατα: αλβουµίνη, άλφα-1 σφαιρίνες, άλφα-2 σφαιρίνες, βήτα 

σφαιρίνες, και γάµµα σφαιρίνες. Κάθε ζώνη περιέχει µία ή περισσότερες πρωτεΐνες του ορού. Τα προφίλ των πρωτεϊνών του ορού 

οµοιάζουν µε αυτά του ορού. Ωστόσο, οι σχετικές εντάσεις των κλασµάτων ή η παρουσία τους µπορεί να ποικίλλουν ευρέως ανάλογα µε 

τη διηθητική επάρκεια του νεφρού. 

ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΑ ΚΑΙ ΥΛΙΚΑ ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΜΕ ΤΑ ΚΙΤ HYDRAGEL 7, 15 ΚΑΙ 30 PROTEIN(E) 

ΕΙ∆ΟΣ PN 4100 PN 4120 PN 4140 Gel αγαρόζης (έτοιµα προς χρήση) 10 gel 10 gel 10 gel Ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος (έτοιµες προς χρ.) 10 συσκ. των 2 10 συσκ. των 2 10 συσκ. των 2 Μέσο αραίωσης διαλύµατος χρώσης (πυκνό διάλυµα) 1 φιαλίδιο, 60 mL 1 φιαλίδιο, 60 mL 1 φιαλίδιο, 60 mL Χρωστική amidoblack (πυκνό διάλυµα) 1 φιαλίδιο, 20 mL 1 φιαλίδιο, 20 mL 1 φιαλίδιο, 20 mL Εφαρµογείς (έτοιµοι προς χρήση) 1 συσκ. των 10 (7 δόντια) 

| 1 συσκ. των 10 (15 δόντια) 2 συσκ. των 10 (15 δόντια) ∆ιηθητικά χαρτιά | 1 συσκ. των 10 | 1 συσκ. των 10 | 1 συσκ. των 10 | 

ΓΙΑ ΑΡΙΣΤΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ 

Όλα τα αντιδραστήρια από ίδιο κιτ πρέπει να χρησιµοποιούνται πάντα µαζί και σύµφωνα µε τις οδηγίες χρήσης. 

ΠΑΡΑΚΑΛΟΥΜΕ ∆ΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΦΥΛΛΟ Ο∆ΗΓΙΩΝ. 

1. GEL ΑΓΑΡΟΖΗΣ 

Προετοιµασία 

Τα gel αγαρόζης είναι έτοιµα προς χρήση. Κάθε gel περιέχει: αγαρόζη, 0.8 g/dL, ρυθµιστικό διάλυµα tris-βαρβιτάλη pH 9.2 ± 0.1, πρόσθετα, 

µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Τα gel αγαρόζης περιέχουν 0.31 % βαρβιτάλη και 0.34 % νατριούχο βαρβιτάλη. Μην το καταπίνετε! Αν το καταπιείτε, 

συµβουλευτείτε αµέσως ιατρό ! 

Χρήση 

Μέσο για ηλεκτροφόρηση και ανοσοκαθήλωση πρωτεϊνών. 

Φύλαξη, σταθερότητα και σηµεία αλλοίωσης 

Φυλάσσετε τα gel οριζόντια εντός της συσκευασίας τους σε θερµοκρασία δωµατίου (15 έως 30 °C) ή στη συντήρηση (2 έως 8 °C). (Το βέλος 

στην πρόσθια επιφάνεια του κουτιού του κιτ πρέπει να δείχνει προς τα άνω). Αποφύγετε την αποθήκευση κοντά σε παράθυρο ή σε πηγή 

θερµότητας. Αποφύγετε τις µεγάλες διακυµάνσεις θερµοκρασίας κατά τη φύλαξη. 

ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. 

Πετάξτε τα gel όταν: 

(i) σχηµατιστούν κρύσταλλοι ή ίζηµα στην επιφάνεια του gel ή αν η υφή του gel γίνει πολύ µαλακή (όλα αυτά προκύπτουν αν το gel 

καταψυχθεί), 

(ii) αναπτυχθούν βακτήρια ή µούχλα, 

(iii) υπάρχει µεγαλύτερη από το φυσιολογικό ποσότητα στο κουτί του gel (αποτέλεσµα της εξίδρωσης του ρυθµιστικού διαλύµατος από το 

gel λόγω ακατάλληλων συνθηκών φύλαξης). 

2. ΤΑΙΝΙΕΣ ΜΕ ΡΥΘΜΙΣΤΙΚΟ ∆ΙΑΛΥΜΑ 


Σπογγώδεις ταινίες µε ρυθµιστικό διάλυµα έτοιµες προς χρήση. Καθεµιά περιέχει: ρυθµιστικό διάλυµα tris-βαρβιτάλη pH 9.2 ± 0.3, αζίδιο 

του νατρίου, πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Το ρυθµιστικό διάλυµα στις ταινίες περιέχει 0.92 % βαρβιτάλη, 1.03 % νατριούχο βαρβιτάλη και 0.30 % αζίδιο του 

νατρίου. Μην το καταπίνετε! Αν το καταπιείτε, συµβουλευτείτε αµέσως ιατρό ! Όταν το πετάτε αποφύγετε επαφή µε οξέα, µόλυβδο ή 

χαλκό, καθώς µπορεί να σχηµατιστούν εκρηκτικές ή τοξικές ενώσεις µε το αζίδιο του νατρίου. 

Χρήση 

Οι ταινίες µε ρυθµιστικό διάλυµα λειτουργούν ως δεξαµενή ρυθµιστικού διαλύµατος για την ηλεκτροφόρηση και εξασφαλίζουν επαφή 

µεταξύ του gel και των ηλεκτροδίων. 

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Ο∆ΗΓΙΕΣ SEBIA - Ελληνικά



Φυλάσσετε τις ταινίες σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Παραµένουν σταθερές µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται 

στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και της συσκευασίας των ταινιών. 

ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. 

Πετάξτε τις ταινίες αν η συσκευασία τους έχει ανοιχθεί και οι ταινίες έχουν στεγνώσει. 

3. ΜΕΣΟ ΑΡΑΙΩΣΗΣ ∆ΙΑΛΥΜΑΤΟΣ ΧΡΩΣΗΣ 


Το πυκνό µέσο αραίωσης διαλύµατος χρωστικής πρέπει να χρησιµοποιείται όπως περιγράφεται στην παράγραφο “ΧΡΩΣΤΙΚΗ 

AMIDOBLACK“. 

Περιέχει όξινο διάλυµα. 

Χρήση 

Για την παρασκευή του διαλύµατος χρωστικής amidoblack. 


Φυλάσσετε το πυκνό µέσο αραίωσης διαλύµατος χρωστικής σε θερµοκρασία δωµατίου ή στοψυγείο. Είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία 

λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων. ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. 

Μην προσθέτετε αζίδιο του νατρίου. 

4. ΧΡΩΣΤΙΚΗ AMIDOBLACK 


Η πυκνή χρωστική amidoblack είναι ένα ιξώδες διάλυµα το οποίο ενδέχεται να µετατραπεί σε γέλη. Η καταλληλότητα του πυκνού 

διαλύµατος χρωστικής δεν επηρεάζεται από την αύξηση της γλοιότητάς του ή τη στερεοποίησή του. 

Σε όλες τις περιπτώσεις, για να επιτύχετε τέλεια ανασύσταση της χρωστικής, σας συνιστούµε να ακολουθήσετε την εξής διαδικασία : 

1. Προσθέστε 15 mL του µέσου αραίωσης χρωστικής στο φιαλίδιο του πυκνού διαλύµατος. 

2. Κλείστε προσεκτικά το φιαλίδιο. 

3. Ανακινήστε έντονα το φιαλίδιο για περίπου 5 δευτερόλεπτα. 

4. Αδειάστε αυτό το διάλυµα στο δοχείο που προορίζεται για την επεξεργασία του διαλύµατος χρωστικής. 

5. Επαναλάβετε αυτό το βήµα δύο φορές, ή τρεις αν χρειάζεται. 

6. Αδειάστε το υπόλοιπο µέσο αραίωσης στο δοχείο και συµπληρώστε µε απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ έως όγκου 300 mL. 

7. Ανακινήστε καλά τα περιεχόµενα του δοχείου για 5 - 10 λεπτά. 

Το διάλυµα χρωστικής είναι έτοιµο προς χρήση. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Η ατελής ανασύσταση της χρωστικής θα οδηγήσει σε υποεκτίµηση του κλάσµατος της αλβουµίνης. 

Μετά την αραίωση, το διάλυµα εργασίας της χρωστικής περιέχει: όξινο διάλυµα pH ≈ 2, amidoblack, 0.4 g/dL, αιθυλενογλυκόλη, 6.7 %, 

πρόσθετα, µη επιβλαβή στις χρησιµοποιούµενες συγκεντρώσεις, αναγκαία για άριστη απόδοση. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Επιβλαβές αν καταποθεί. 

Χρήση 

Για τη χρώση των gel µετά από ηλεκτροφορητικό διαχωρισµό πρωτεϊνών. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Το διάλυµα χρωστικής είναι σχεδιασµένο για χρώση µόνο 10 gel. Αλλάξτε το διάλυµα µετά από 10 διαδικασίες χρώσης. 


Φυλάσσετε τα διαλύµατα προ και µετά την αραίωση σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο σε κλειστούς περιέκτες για να αποτραπεί η 

εξάτµιση. Το πυκνό διάλυµα χρωστικής είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας 

του κιτ και των φιαλιδίων. 

Το διάλυµα εργασίας είναι σταθερό για 1 µήνα. 

Μην αποθηκεύετε το διάλυµα χρώσης κοντά σε πηγή θερµότητας. 

5. ΕΦΑΡΜΟΓΕΙΣ 

Χρήση 

Έτοιµοι, εφαρµογείς µιας χρήσης για τοποθέτηση των δειγµάτων. 

Φύλαξη 

Φυλάσσετε τους εφαρµογείς σε ξηρό µέρος σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. 

6. ∆ΙΗΘΗΤΙΚΑ ΧΑΡΤΙΑ 

Χρήση 

Μιας χρήσης απορροφητικά χαρτιά για στύπωµα της υγρασίας από την επιφάνεια του gel πριν την τοποθέτηση των δειγµάτων. 

Αποθήκευση 

Τα λεπτά διηθητικά χαρτιά αποθηκεύονται σε στεγνό µέρος, σε θερµοκρασία δωµατίου ή σε ψύξη. 

ΑΠΑΡΑΙΤΗΤΑ ΑΝΤΙ∆ΡΑΣΤΗΡΙΑ 

1. ∆ΙΑΛΥΜΑ ΑΠΟΧΡΩΜΑΤΙΣΜΟΥ 


Κάθε φιαλίδιο ∆ιαλύµατος Αποχρωµατισµού (SEBIA, PN 4540, 10 φιαλίδια, 100 mL το καθένα) αραιώνεται µε έως 100 λίτρα απεσταγµένου 

ύδατος. Είναι ευχερές να αραιώνονται µόνο 5 mL του διαλύµατος σε 5 λίτρα, τον όγκο του περιέκτη του διαλύµατος αποχρωµατισµού. 

Μετά την αραίωση το διάλυµα αποχρωµατισµού περιέχει: κιτρικό οξύ 0.05 g/dL. 

Χρήση 

Για αποχρωµατισµό, δηλαδή αφαίρεση της περίσσειας χρωστικής από τη γέλη. 

Για καθαρισµό του τµήµατος χρώσης. 

Για την εξουδετέρωση της οξύτητας του διαλύµατος αποχρωµατισµού, προσθέστε 15 mL διαλύµατος 50 % υδροξειδίου του νατρίου, στο 

κενό δοχείο αχρήστων. 

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Φυλάσσετε το διάλυµα προ της αραίωσης σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Το πυκνό διάλυµα είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία 

λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων του διαλύµατος. 

ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ. Το αραιωµένο διάλυµα είναι σταθερό για µια εβδοµάδα σε θερµοκρασία δωµατίου σε κλειστό δοχείο. Μην προσθέτετε 

αζίδιο του νατρίου. 

Πετάξτε το διάλυµα αν µεταβληθεί η όψη του, π.χ. θόλωση λόγω µικροβιακής επιµόλυνσης. 

Για να αποτρέψετε πολλαπλασιασµό µικροβίων στο αραιωµένο διάλυµα αποχρωµατισµού αν πρόκειται να το φυλάξετε για περισσότερο 

από µια εβδοµάδα, προσθέστε 5 µL/dL ProClin 300. 

Το διάλυµα εργασίας στο οποίο έχει προστεθεί ProClin είναι σταθερό σε κλειστό δοχείο σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο µέχρι την 

ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στις ετικέττες της συσκευασίας του κιτ και των φιαλιδίων. 

2. ∆ΙΑΛΥΜΑ ΕΚΠΛΥΝΣΗΣ HYDRASYS 


Κάθε φιαλίδιο του πυκνού διαλύµατος έκπλυνσης HYDRASYS (SEBIA, PN 4541, 10 φιαλίδια, 80 mL το καθένα) αραιώνεται µε έως 5 λίτρα, 

µε απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ. Μετά την αραίωση το διάλυµα εργασίας περιέχει: αλκαλικό ρυθµιστικό διάλυµα pH 8.8 ± 0.3, αζίδιο 

του νατρίου. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Το πυκνό διάλυµα περιέχει 0.625 % αζίδιο του νατρίου. Μην το πίνετε! Αν το πιείτε, συµβουλευτείτε αµέσως ιατρό! Το 

αζίδιο του νατρίου µπορεί να οδηγήσει σε σχηµατισµό εκρηκτικών ή τοξικών ουσιών όταν έρχεται σε επαφή µε οξέα, µόλυβδο ή χαλκό. 

Πάντοτε ξεπλένετε µε άφθονο νερό όταν το πετάτε. 

Χρήση 

Το διάλυµα έκπλυνσης χρησιµεύει για την αποµάκρυνση των µη κακατακρηµνισθεισών πρωτεϊνών από τα gel. Χρησιµεύει επίσης για 

καθαρισµό του θαλάµου χρώσης του HYDRASYS. Χρησιµοποιείτε το περιοδικά, π.χ. αν το όργανο λειτουργεί καθηµερινά, πλένετε το 

θάλαµο χρώσης κάθε εβδοµάδα. 

∆είτε το φύλλο οδηγιών για οδηγίες χρήσης. 


Φυλάσσετε το πυκνό διάλυµα σε θερµοκρασία δωµατίου ή στο ψυγείο. Το πυκνό διάλυµα είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η 

οποία σηµειώνεται στις ετικέττες των φιαλιδίων του διαλύµατος. 

Πετάξτε το διάλυµα αν µεταβληθεί η όψη του, π.χ. θόλωση λόγω µικροβιακής επιµόλυνσης. 

3. FLUIDIL 


Το Fluidil (SEBIA, PN 4587, 1 φιαλίδιο, 5 mL) είναι έτοιµο προς χρήση. 

Χρήση 

Για τη διάλυση ιξωδών ή θολών δειγµάτων, π.χ. οροί µε κρυοσφαιρίνες. 


Φυλάσσεται σε θερµοκρασία δωµατίου. Είναι σταθερό µέχρι την ηµεροµηνία λήξης η οποία σηµειώνεται στην ετικέτα του φιαλιδίου του 

Fluidil. 

Το Fluidil πρέπει να είναι ελεύθερο ιζήµατος. 

ΕΞΟΠΛΙΣΜΟΣ ΚΑΙ ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΙΚΑ ΕΞΑΡΤΗΜΑΤΑ 

1. HYDRASYS System SEBIA, PN 1210 ή PN 1211. 

2. Σύστηµα µικροπιπεττών, χειροκίνητο ή αυτόµατο, όπως το HYDRAplus SEBIA, PN 1215, ως εναλλακτικός τρόπος φόρτωσης των 

εφαρµογέων δειγµάτων ή των εφαρµογέων αντιορών. 

3. Θάλαµος Υγρής Φύλαξης, PN 1270, παρεχόµενος µε το HYDRASYS. 

4. Κιτ περιεκτών παρεχόµενο µε το HYDRASYS. 

5. Πιπέττες: 10 µL και 200 µL. 

6. Πυκνόµετρο / σαρωτής µε δυνατότητα σάρωσης gel 82 x 51 mm ή 82 x 102 mm στα 570 nm ή µε κίτρινο φίλτρο, π.χ. HYRYS SEBIA, 

DVSE SEBIA ή PHORESIS. Ανατρέξτε στις οδηγίες χρήσης και βαθµονόµησης του κατασκευαστή. 

7. Στατήρας gel για µισά gel, SEBIA, PN 10043110. 

∆ΕΙΓΜΑΤΑ ΠΡΟΣ ΑΝΑΛΥΣΗ 

Λήψη και διατήρηση δειγµάτων 

Η ανάλυση συνιστάται να γίνεται σε φρέσκα δείγµατα. Ο ορός και τα ούρα πρέπει να συλλέγονται σύµφωνα µε τις καθιερωµένες 

διαδικασίες κλινικής εργαστηριακής πρακτικής. ∆ιατηρήστε τα δείγµατα στο ψυγείο στους 2 ως 8 °C για έως µια εβδοµάδα 

(ΣΗΜΕΙΩΣΗ : το κλάσµα βήτα-2, κλάσµα C3 του συµπληρώµατος, εξαφανίζεται µετά από 3 ηµέρες). Για µακρότερη διατήρηση, διατηρήστε 

τα κατεψυγµένα (σταθερά για τουλάχιστον ένα µήνα). 

Κατεψυγµένα δείγµατα ορού µε αζίδιο του νατρίου, 0.02 g/dL, ή κατεψυγµένα δείγµατα ούρων µε HEPES 0.1 M (pH 6.75) και αζίδιο του 

νατρίου, 0.02 g/dL διατηρούνται περισσότερο. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Αποφύγετε το βορικό οξύ ως συντηρητικό. 

Τα αποψυγµένα δείγµατα µπορεί να δώσουν ελαφρά σηµάδια στο σηµείο εφαρµογής οφειλόµενα σε µετουσίωση πρωτεϊνών ή 

λιποπρωτεϊνών. ∆ιατήρηση στους 2 ως 8 °C και η κατάψυξη µπορούν να προκαλέσουν µετακίνηση προς την άνοδο των βήταλιποπρωτεϊνών 

από τη βήτα-ζώνη στην άλφα-2 ή άλφα-1. Όσο πιο παλιός ο ορός, τόσο µεγαλύτερη η µετακίνηση. 

Προετοιµασία των δειγµάτων 

1. Οροί 

Χρησιµοποιείτε µη αραιωµένα δείγµατα ορού. 

Μετά από ψύξη ή κατάψυξη, µερικοί οροί (ιδιαίτερα εκείνοι που περιέχουν κρυοσφαιρίνες) µπορεί να γίνουν ιξώδεις ή να αναπτύξουν 

θολερότητα. Τέτοιοι οροί µπορεί να παρουσιάσουν προβλήµατα εφαρµογής λόγω παρακώλυσης της διάχυσης στα δόντια του 

εφαρµογέα δείγµατος. Σε αυτήν την περίπτωση, προσθέστε 25 µL Fluidil σε 75 µL ορού και περιδινήστε (vortex) για 15 sec. Στη 

συνέχεια ακολουθήστε την τυπική διαδικασία. 

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2. Συµπυκνωµένα ούρα 

Η ανάλυση γίνεται σε δείγµατα συµπυκνωµένα σε συνολική πρωτεϊνική συγκέντρωση περίπου 1.5 - 2.0 g/dL (µε κατάλληλη συσκευή). 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Μερικές φορές τα ούρα περιέχουν υψηλές συγκεντρώσεις αλάτων. Αυτό µπορεί να προκαλέσει παραµόρφωση του gel 

κατά την ηλεκτροφόρηση και συνεπώς αλλοίωση των προφίλ ηλεκτροφόρησης. Αν η αλλοίωση αυτή καθιστά την ερµηνεία των 

αποτελεσµάτων ανακριβή, τα ούρα πρέπει να απαλλαγούν από τα άλατα. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Η διάχυση των δειγµάτων ούρων στις υποδοχές του εφαρµογέα µπορεί να παρακωλύεται όταν τα ούρα είναι θολά. 

Συνιστάται η αποµάκρυνση των σωµατιδίων µε φυγοκέντρηση (π.χ. 10 min στις 3,000 rpm) ή διήθηση (π.χ. ηθµός 0.45 µm). 

∆είγµατα προς αποφυγή 

• Αποφύγετε αιµολυµένα δείγµατα. Η αιµόλυση αυξάνει τις ζώνες άλφα-2 και βήτα. 

• Αποφύγετε δείγµατα πλάσµατος. Το ινωδογόνο δίνει µια ζώνη στο ίχνος αναφοράς κοντά στο σηµείο εφαρµογής η οποία θα µπορούσε 

να εκληφθεί ως µονοκλωνική ανοσοσφαιρίνη και επηρεάζει τη µέτρηση της σχετικής συγκέντρωσης της ζώνης. 

• Αποφύγετε παλαιά, πληµµελώς διατηρηµένα δείγµατα ούρων, στα οποία µπορεί να έχει συµβεί ενζυµατική διάσπαση των πρωτεϊνών. 

∆ΙΑ∆ΙΚΑΣΙΑ 

Το σύστηµα HYDRASYS είναι ένα ηµι-αυτοµατοποιηµένο πολυπαραµετρικό όργανο. Τα αυτοµατοποιηµένα στάδια λειτουργίας 

περιλαµβάνουν την επεξεργασία των gel αγαρόζης HYDRAGEL µε την ακόλουθη σειρά: εφαρµογή δειγµάτων, ηλεκτροφόρηση, στέγνωµα, 

χρώση, αποχρωµατισµός και τελικό στέγνωµα. Τα χειροκίνητα στάδια περιλαµβάνουν το χειρισµό των δειγµάτων και των gel καθώς και την 

προετοιµασία του οργάνου για λειτουργία. ∆ΙΑΒΑΣΤΕ ΠΡΟΣΕΚΤΙΚΑ ΤΟ ΕΓΧΕΙΡΙ∆ΙΟ Ο∆ΗΓΙΩΝ ΤΟΥ HYDRASYS. 

I. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗΣ 

1. Θέστε το HYDRASYS σε λειτουργία. 

2. Τοποθετήστε έναν εφαρµογέα για το HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) (7 δείγµατα) και το HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 (15 δείγµατα) ή 

δύο εφαρµογείς για το HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 (30 δείγµατα) σε µια επίπεδη επιφάνεια µε τους αριθµούς των βοθρίων στη 

δεξιά πλευρά (Εικ. 1). 

- Τοποθετήστε 10 µL από τα δείγµατα στα βοθρία του εφαρµογέα. Φορτώστε κάθε εφαρµογέα εντός 2 min. 

- Τοποθετήστε τον εφαρµογέα στο θάλαµο υγρής φύλαξης µε τα δόντια προς τα άνω (κρατήστε τον από το πλαστικό 

προστατευτικό κάλυµµα των δοντιών). 

- Αφήστε τα δείγµατα να διαχυθούν στα δόντια για 5 min µετά την τοποθέτηση του τελευταίου δείγµατος. 

Βλέπε το φύλλο οδηγιών του θαλάµου υγρής φύλαξης για περισσότερες λεπτοµέρειες. 

3. Ανοίξτε το καπάκι της Μονάδας Ηλεκτροφόρησης και σηκώστε τους φορείς των ηλεκτροδίων και του εφαρµογέα. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Ποτέ µην κλείνετε το καπάκι ενώ οι φορείς είναι σηκωµένοι! 

4. Επιλέξτε το πρόγραµµα ηλεκτροφόρησης «7 PROTEIN(E)» για το HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) ή το «15/30 PROTEIN(E)» από το µενού 

του οργάνου (αριστερή πλευρά του πληκτρολογίου). 

5. Αφαιρέστε τις ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος από τη συσκευασία τους. Κρατήστε τις από την πλαστική άκρη τους. Προσαρµόστε 

τη σηµαδεµένη άκρη των ταινιών στις ακίδες του φορέα ηλεκτροδίων, το πλαστικό κάλυµµα της ταινίας πρέπει να είναι στραµµένο 

προς το φορέα (Εικ. 2). 

6. Ανοίξτε τη συσκευασία του HYDRAGEL. 

- Περάστε γρήγορα και οµοιόµορφα ένα διηθητικό χαρτί στην επιφάνεια του gel για να απορροφήσει την περίσσεια υγρού. 

Αφαιρέστε το χαρτί αµέσως. 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΗ: Μην αφήνετε το διηθητικό χαρτί σε επαφή µε το gel επί µακρόν για να µην αφυδατωθεί. 

- Εισαγάγετε 120 µL απεσταγµένο ή απιονισµένο ύδωρ για το HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) ή 200 µL για το HYDRAGEL 

PROTEIN(E) 15/30, µέχρι το κατώτερο τρίτο της κλίµακας που είναι τυπωµένη στην Πλάκα Ελέγχου Θερµοκρασίας της µονάδας 

ηλεκτροφόρησης. 

- Τοποθετήστε την πλακέτα του gel (µε την επιφάνεια του gel προς τα άνω) µε το άκρο της να αγγίζει το stop στο κάτω τµήµα της 

τυπωµένης κλίµακας (Εικ. 3). 

- Λυγίστε το gel και χαµηλώστε το επί της επιφάνειας του νερού. (Εικ. 3). Βεβαιωθείτε ότι δεν έχουν παγιδευτεί φυσαλίδες αέρα, 

ότι το νερό έχει απλωθεί κάτω από ολόκληρη την πλακέτα του gel και το gel είναι ευθυγραµµισµένο µε την τυπωµένη κλίµακα. 

7. Κατεβάστε και τους δύο φορείς. Σε αυτήν τη θέση, οι ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος δεν αγγίζουν το gel. ΜΗΝ ΠΙΕΖΕΤΕ ΤΟΥΣ 

ΦΟΡΕΙΣ ΤΕΛΕΙΩΣ ΠΡΟΣ ΤΑ ΚΑΤΩ. 

8. Αφαιρέστε τον εφαρµογέα από τον υγρό θάλαµο. Κρατήστε τον από το προστατευτικό κάλυµµα. 

- Αποσπάστε το προστατευτικό κάλυµµα των δοντιών του εφαρµογέα. 

- Για ανάλυση 7 και 15 δειγµάτων, τοποθετήστε τον εφαρµογέα στη θέση N° 6 του φορέα. 

- Για ανάλυση 30 δειγµάτων, τοποθετήστε τους δύο εφαρµογείς στις θέσεις N° 3 και 9. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Οι τυπωµένοι αριθµοί στον εφαρµογέα πρέπει να είναι στραµµένοι προς τον χειριστή (Εικ. 4). 

9. Κλείστε το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης. 

10. Αρχίστε τη διαδικασία αµέσως πιέζοντας το πλήκτρο µε το πράσινο βέλος «START» στην αριστερή πλευρά του πληκτρολογίου. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Βεβαιωθείτε ότι η είσοδος αερισµού στη δεξιά πλευρά του οργάνου είναι ελεύθερη. 

ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΣΗ – ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΤΩΝ ΑΥΤΟΜΑΤΟΠΟΙΗΜΕΝΩΝ ΣΤΑ∆ΙΩΝ 

• Οι δύο φορείς χαµηλώνουν ώστε οι ταινίες µε το ρυθµιστικό διάλυµα και ο εφαρµογέας να είναι σε επαφή µε την επιφάνεια του gel. 

• Ο φορέας του εφαρµογέα σηκώνεται. 

• Η ηλεκτροφόρηση πραγµατοποιείται υπό συνεχές ρεύµα 10 W για το HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) ή 20 W για το HYDRAGEL PROTEIN(E) 

15/30, στους 20 °C, µέχρι να συµπληρωθούν 33 Vh (για περίπου 7 min). 

• Ο φορέας ηλεκτροδίων ανυψώνεται για να αποσυνδεθούν τα ηλεκτρόδια. 

• Η θερµοκρασία της πλακέτας ελέγχου αυξάνεται στους 65 °C για 15 min για να στεγνώσει το gel. 

• Η πλακέτα ελέγχου κρυώνει. Όταν φτάσει τους 50 °C, ένας ήχος σηµατοδοτεί το ξεκλείδωµα της µονάδας ηλεκτροφόρησης. Η 

θερµοκρασία της πλακέτας ελέγχου παραµένει στους 50 °C µέχρι να ανοιχθεί το καπάκι. Στη συνέχεια η θερµοκρασία συνεχίζει να 

πέφτει µέχρι τους 20 °C (σε λιγότερο από 5 min) και στη συνέχεια µπορεί να ακολουθήσει νέα ηλεκτροφόρηση. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Το καπάκι της µονάδας ηλεκτροφόρησης παραµένει κλειστό κατά τη διάρκεια όλων των σταδίων της ηλεκτροφόρησης. 

- 60 -


II. ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΤΗΣ ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΙΑΣ ΤΩΝ GEL 

1. Ανοίξτε το καπάκι. 

2. Αφαιρέστε τον εφαρµογέα και πετάξτε τον. 

3. Σηκώστε και τους δύο φορείς, αφαιρέστε τις ταινίες ρυθµιστικού διαλύµατος από την πλαστική άκρη τους και πετάξτε τις. 

4. Αφαιρέστε το στεγνωµένο gel για περαιτέρω επεξεργασία. 

5. Μετά από κάθε χρήση, σκουπίστε τα ηλεκτρόδια και την πλάκα ελέγχου θερµοκρασίας µε µαλακό υγρό πανάκι. 

6. Ανοίξτε τον στατήρα των gel. Τοποθετήστε το στεγνό gel (µε την επιφάνεια του gel προς τα άνω) στις αύλακες και κλείστε τον 

στατήρα. Βεβαιωθείτε ότι το film είναι σωστά τοποθετηµένο µέσα στον στατήρα (Εικ. 5). 

7. Τοποθετήστε τον στατήρα στη Μονάδα Επεξεργασίας / Χρώσης των gel. 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Πριν την έναρξη της επεξεργασίας / χρώσης των gel, ελέγξτε τα ακόλουθα: 

- ο περιέκτης χρώσης είναι γεµάτος µε 300 mL χρωστικού διαλύµατος, 

- ο περιέκτης διαλύµατος αποχρωµατισµού περιέχει τουλάχιστον 1 λίτρο διαλύµατος αποχρωµατισµού, 

- ο περιέκτης αχρήστων είναι κενός. 

Για τη σύνδεση των γραµµών των αντιδραστηρίων: ανατρέξτε στις πληροφορίες που εµφανίζονται στην οθόνη του οργάνου 

(επιλέξτε: REAGENT LINES). 

ΣΗΜΑΝΤΙΚΟ: Μην ξεχνάτε να αποφράσσετε τις µη χρησιµοποιούµενες γραµµές. 

8. Επιλέξτε το πρόγραµµα χρώσης «PROT./B1-B2/Hb» από το µενού του οργάνου και αρχίστε τη διαδικασία πατώντας το πλήκτρο 

«START» (πράσινο βέλος στη δεξιά πλευρά του πληκτρολογίου). 

Κατά τα στάδια χρώσης, αποχρωµατισµού και στεγνώµατος, η µονάδα παραµένει κλειδωµένη. 

Μετά το στάδιο ψύξης, ένας ήχος σηµατοδοτεί το ξεκλείδωµα της µονάδας (ο αερισµός διατηρείται µέχρι την αφαίρεση του 

στατήρα των gel). 

III. ΟΛΟΚΛΗΡΩΣΗ ΤΗΣ ΕΠΕΞΕΡΓΑΣΙΑΣ ΤΩΝ GEL 

1. Αφαιρέστε τον στατήρα των gel από τη µονάδα, ανοίξτε τον και αφαιρέστε το στεγνό gel. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Μετά τη χρώση / αποχρωµατισµό και πριν την πυκνοµέτρηση / σάρωση, το gel µπορεί να περάσει από ένα ακόµη στάδιο 

έκπλυνσης, αν χρειάζεται, για τον περαιτέρω καθαρισµό του background και την αποµάκρυνση υπολειπόµενης χρώσης η οποία 

µπορεί να εµφανίζεται µε τη µορφή µπλε κηλίδων. Πλύνετε το gel µε το πρόγραµµα “ WASH ISOENZ/GEL “. 

2. Αν χρειαστεί, καθαρίστε την πίσω (πλαστική) επιφάνεια του στεγνού φιλµ µε υγρό χαρτί. 

3. Σαρώστε µε πυκνόµετρο / σαρωτή στα 570 nm ή µε κίτρινο φίλτρο. 

ΣΗΜΕΙΩΣΗ : Τα µήκη των ηλεκτροφορηµάτων ενδέχεται να είναι ελαφρώς διαφορετικά στα gel µε 2 ή 3 σειρές ανάλυσης, χωρίς 

δυσµενή επίδραση στην απόδοση. 

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ 

Ποιοτικός έλεγχος 

Συνιστάται να περιλαµβάνεται ένας ορός ελέγχου (Ορός Ελέγχου, SEBIA PN 4785) σε κάθε σειρά δειγµάτων. 

Τιµές 

Η σάρωση (στα 570 nm ή µε κίτρινο φίλτρο) των χρωσµένων ηλεκτροφορηµάτων παρέχει σχετικές συγκεντρώσεις (ποσοστά) των 

επιµέρους πρωτεϊνικών ζωνών. 

Οι φυσιολογικές τιµές (µ.ο. ± 2 SD) για τις επιµέρους κύριες ηλεκτροφορητικές ζώνες των πρωτεϊνών του ορού στα gel ΗYDRAGEL 

PROTEIN(E) 15/30 στο σύστηµα HYDRASYS έχουν εξαχθεί από ένα υγιή πληθυσµό 158 ενηλίκων (ανδρών και γυναικών). 

Η ποσοτικοποίηση των πρωτεϊνών σε UV στο σύστηµα CAPILLARYS αποδίδει παρόµοιες τιµές µε τη νεφελοµετρική µέθοδο (ειδικά για την 

αλβουµίνη). Η SEBIA προτείνει τυποποίηση των λαµβανόµενων τιµών µε το HYDRAGEL µετά από βαθµονόµηση των συστηµάτων 

σάρωσης. 

Χωρίς τιµές τυποποίησης Με τιµές τυποποίησης CAPILLARYS ΖΩΝΗ HYRYS - DVSE - PHORESIS HYRYS - DVSE - PHORESIS Αλβουµίνη 59.8 - 72.4 % 53.8 - 65.2 % α-1 σφαιρίνες 1.0 - 3.2 % 1.1 - 3.7 % α-2 σφαιρίνες 7.4 - 12.6 % 8.5 - 14.5 % β σφαιρίνες 7.5 - 12.9 % 8.6 - 14.8 % 

| γ σφαιρίνες | 8.0 - 15.8 % | 9.2 - 18.2 % | 

Συνιστάται κάθε εργαστήριο να διαµορφώνει τις δικές του φυσιολογικές τιµές. 

Ερµηνεία 1-15 

Μερικά δείγµατα ορού µπορεί να παρουσιάσουν ελαφρύ διαχωρισµό της ζώνης α2 ανάλογα µε τη συγκέντρωση και κινητικότητα των 

πρωτεϊνών της ζώνης αυτής. Βλ. ΗΛΕΚΤΡΟΦΟΡΗΤΙΚΑ ΠΡΟΦΙΛ. 

• Μερικοί οροί έχουν διαφορετικούς φαινότυπους (απτοσφαιρίνη, σφαιρίνη GC). 

• Η α1 λιποπρωτεΐνη µεταβάλλεται ανάλογα µε τη συγκέντρωση και διατήρηση του δείγµατος. 

Επικουρικά για την ερµηνεία των ηλεκτροφορηµάτων πρωτεϊνών του ορού και των ούρων βλ. τη ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ. 

Παρεµβολές και περιορισµοί 

Βλέπε ∆ΕΙΓΜΑΤΑ ΠΡΟΣ ΑΝΑΛΥΣΗ. 

Λόγω των ορίων διακριτικής ικανότητας και ευαισθησίας της ηλεκτροφόρησης, είναι πιθανό κάποια µονοκλωνικά στοιχεία να µην 

ανιχνεύονται µε αυτήν τη µέθοδο. 

- 61 -


Αντιµετώπιση προβληµάτων 

Καλέστε την Τεχνική Υπηρεσία του προµηθευτή αν η ανάλυση δεν λειτουργεί παρόλο που οι οδηγίες προετοιµασίας και φύλαξης των 

υλικών και οι οδηγίες λειτουργίας τηρούνται προσεκτικά. 

Τα Φύλλα ∆εδοµένων Ασφαλείας των αντιδραστηρίων των κιτ και πληροφορίες για την ασφαλή απόρριψή τους διατίθενται επίσης από την 

Τεχνική Υπηρεσία του προµηθευτή. 

∆Ε∆ΟΜΕΝΑ ΑΠΟ∆ΟΣΗΣ 

Αναπαραγωγιµότητα εντός σειράς ανάλυσης 

Τρία (3) διαφορετικά δείγµατα ορού έτρεξαν το καθένα σε 15 ίχνη σε gel HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 από την ίδια παρτίδα. Η µέση τιµή, 

η SD και ο CV (n = 15) υπολογίστηκαν για κάθε δείγµα και κάθε ζώνη. Ο πίνακας δείχνει τα αποτελέσµατα για τα 3 δείγµατα. 

ΖΩΝΗ Μ.Ο. (%) SD CV (%) Ορός 1 2 3 1 2 3 1 2 3 Αλβουµίνη 70.4 68.8 65.9 0.2 0.7 0.6 0.3 1.0 0.9 α-1 1.9 1.9 1.3 0.1 0.1 0.1 3.5 3.9 7.3 α-2 9.9 9.4 7.6 0.2 0.2 0.2 1.6 2.6 2.4 β 10.6 8.6 7.8 0.4 0.3 0.1 3.3 3.5 1.8 

| γ | 7.2 11.4 17.4 | 0.2 0.3 0.3 | 3.4 2.8 2.0 | 

Αναπαραγωγιµότητα µεταξύ των σειρών 

∆εκαπέντε (15) διαφορετικά δείγµατα ορού έτρεξαν το καθένα σε gel από µία παρτίδα HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 για πέντε διαδοχικές 

ηµέρες. Η µέση τιµή, η SD και ο CV υπολογίστηκαν για κάθε δείγµα και κάθε ζώνη. Τα αποτελέσµατα ήταν ουσιαστικά όµοια για όλα τα 

δείγµατα. Ο ακόλουθος πίνακας παρουσιάζει το εύρος της SD και του CV για τα δείγµατα κατά την περίοδο των 5 ηµερών και ο µέσος CV 

από τους συγκεντρωµένους CV για όλα τα δείγµατα και τον µέσο CV από τους συγκεντρωµένους CV για όλα τα δείγµατα (n = 15). 

ΖΩΝΕΣ SD CV (%) ΜΕΣΟΣ CV (%) Αλβουµίνη 0.2 - 0.9 0.3 - 1.4 0.8 α-1 0.1 - 0.2 2.1 - 9.8 4.6 α-2 0.1 - 0.3 0.9 - 3.1 1.8 β 0.1 - 0.3 1.1 - 3.8 2.0 

| γ | 0.1 - 0.5 | 1.3 - 5.6 | 2.9 | 

Ακρίβεια 

Παθολογικά και φυσιολογικά δείγµατα ορού (n = 90) έτρεξαν σε gel HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 και άλλο συγκρίσιµο εµπορικά διαθέσιµο 

σύστηµα gel αγαρόζης. Οι παράµετροι συσχέτισης για τις µεµονωµένες ζώνες στα gel HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 έναντι του 

συγκρινόµενου συστήµατος gel (y = HYDRAGEL) ήταν : 

ΖΩΝΗ Συντελεστής συσχέτισης Τοµή του y Κλίση Εύρος % τιµών των δειγµάτων * Αλβουµίνη 0.983 3.673 0.942 54.9 - 72.9 α-1 0.984 0.937 0.972 1.2 - 6.7 α-2 0.984 0.635 0.977 7.6 - 16.5 β 0.953 -0.071 0.984 6.9 - 15.0 

| γ | 0.976 | -0.435 | 1.033 | 6.0 - 18.9 | 

* Οι εκατοστιαίες τιµές παρουσιάζονται όπως προσδιορίστηκαν στο σύστηµα HYDRAGEL 15 & 30 PROTEIN(E). 

Ευαισθησία 

Σειριακές αραιώσεις ενός δείγµατος ορού µε µια µονοκλωνική πρωτεΐνη, 2.12 g/dL, ηλεκτροφορήθηκαν σε gel HYDRAGEL PROTEIN(E) 

15/30. Η µεγαλύτερη αραίωση στην οποία προέκυψε διακριτή µονοκλωνική ζώνη ήταν 1/128. Εποµένως η χαµηλότερη συγκέντρωση 

µονοκλωνικής πρωτεΐνης ήταν 0.017 g/dL. 

Ανάλυση συµπυκνωµένων ούρων 

Τα αποτελέσµατα που λαµβάνονται µε τα gel HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 δείχνουν πολύ καλή αναπαραγωγιµότητα εντός και µεταξύ 

σειρών για τα δείγµατα συµπυκνωµένων ούρων µετά από ποσοτική και ποιοτική ανάλυση. Είκοσι οκτώ (28) διαφορετικά δείγµατα 

(παθολογικά και φυσιολογικά) έτρεξαν σε gel HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 και σε συγκρίσιµο σύστηµα gel αγαρόζης. ∆εν υπήρχαν οπτικά 

εµφανείς διαφορές µεταξύ των συστηµάτων. Η ευαισθησία ανίχνευσης προσδιορίστηκε από τις υψηλότερες αραιώσεις µονοκλωνικής 

πρωτεΐνης που έδωσαν ορατή ζώνη στα 0.048 g/dL. 

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 



21/03/91, p. 782 à 785. 




Pathology, 1989, 21, p. 35 à 41. 


2nd ed., 1994, 397 pp. 

- 62 -








Paris. 









ΗΛEKTPOΦOPHTIKO ΠPOΦIΛ 

ΖΩΝΗ α2 : 

+ 

Αλβουµίνη 

Οροµουκοειδές 

α1 αντιτρυψίνη 

α1 αντιχυµοθρυψίνη 

σερουλοπλασµίνη 

GC σφαιρίνη 

α2 µακροσφαιρίνη 

απτοσφαιρίνη 

α λιποπρωτεΐνη 

τρανσφερρίνη 

αιµοπηξίνη 

πλασµινογόνο 

ινονεκτίνη 

C3 συστατικό του 

β λιποπρωτεΐνη 

γ σφαιρίνες 

G - A - M - D - E 

- 

2 (± 5) 2 (± 5) 

1 + 2 + 3 + 4 + 5 1 + 2 + 3 + 4 (± 5) 1 + 3 + 4 (± 5) 

A B C 

1 = α2 µακροσφαιρίνη 

2 = απτοσφαιρίνη 

3 = σερουλοπλασµίνη 

4 = GC σφαιρίνη 

5 = α1 λιποπρωτεΐνη 

- 63 -


For en dansk version af dette pakningsvedlæg, henvend Dem til den danske distributør af produkter fra SEBIA : 

ILS ApS Gydevang 22A DK-3450 Allerød 

Tlf : +45 48 14 18 50 

Fax : +45 48 14 18 60 

e-mail : ils@ilsdk.dk 

- 64 - 

SEBIA INSTRUKTION - Dansk


SCHÉMAS / FIGURES 

Figure 1 Figure 2 

1 2 3 4 567 8 9 10 11 121314 15 

Figure 3 Figure 4 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 

sebia 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

Figure 5 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 

sebia 

16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 

HYDRAGEL PROTEIN(E) 15/30 

sebia 

16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 


sebia 

1 2 3 4 5 6 7 


sebia 

1 2 3 4 5 6 7 

- 65 -

Benelux s.a. / n.v. 

Rue de la Fusée, 62 

Raketstraat, 62 

1130 Bruxelles / Brussel 

BELGIQUE / BELGIË 

GmbH 

Michael Henkel Straße 4-6 

36043 Fulda 

DEUTSCHLAND 

Hispania S.A. 

C/Sicilia, 394 

08025 Barcelona 

ESPAÑA 

Parc Technologique Léonard de Vinci 

Rue Léonard de Vinci 

CP 8010 Lisses 

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ISO 13485 

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50012 Bagno a Ripoli, Firenze 

ITALIA 

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400-1705 Corporate Drive 

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HYDRAGEL 7 PROTEIN(E) HYDRAGEL 15 PROTEIN(E) HYDRAGEL 30 PROTEIN(E)

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