TECHNICAL REPORT Validación del test rápido ... - MINITÜB GmbH

TECHNICAL REPORT
11 | 2010
Validación del test rápido eProCheck® de Progesterona en
leche mediante el análisis estándar de la Clínica de Rumiantes
de la Universidad LMU de Munich
Häusler E.-M., 2008. Minitüb GmbH, Germany
Con el ensayo presentado a continuación se compararon los resultados de las mediciones de progesterona en leche con eProCheck® con los
valores correspondientes determinados en suero. El sistema de análisis basado en ELISA del eProCheck® fue aplicado en la Clínica de Rumiantes
de la Universidad Ludwig Maximilian de München/Oberschleißheim y comparado con el método del laboratorio establecido de enzima-inmuno
ensayo (EIA).
Diseño experimental:
El ensayo se realizó en dos planteles con muestras de un total de 15 vacas. Mediante la colocación del dispositivo CIDR se indujo la sincronización
10 días antes del día de ovulación deseado.
Aplicación del dispositivo CIDR día -10
Aplicación de prostaglandinas día - 4
Retiro del dispositivo CIDR día - 3
Día esperado de ovulación/día de inseminación día 0
La colección de muestras de leche y sangre se inició el día de la aplicación de Prostaglandinas, 4 días antes de la ovulación esperada. Se colectaron,
además, muestras paralelas de leche y sangre de las vacas en 11 días definidos del ciclo estral.
Las muestras de leche fueron analizadas en terreno con el test rápido para la determinación inmediata del valor de progesterona de eProCheck®.
Los resultados para este ensayo no fueron entregados por el instrumento como diagrama de barras, sino como valores análogos en nanogramos,
a objeto de poder comparar directamente con los valores posteriormente obtenidos en suero sanguíneo.
El contenido de progesterona en suero fue determinado por un inmuno-ensayo competitivo, con técnica doble de anticuerpos en placas de
microtitulación. Para la comprobación se utilizó un anticuerpo monoclonal progesterona-específico de la rata. De este modo se colectaron y analizaron
pruebas y datos de un total de 12 muestras de leche y 12 muestras de suero por vaca durante un período de 26 días. En el transcurso del
ensayo debieron retirarse por diversos motivos 3 animales de la prueba. Los resultados de los 12 animales remanentes fueron graficados, a fin de
presentar claramente la evolución de los valores de progesterona en leche y suero sanguíneo. Los exámenes de preñez realizados por veterinario
al final del ensayo revelaron 6 vacas gestantes y 6 vacas no gestantes.
www.minitube.de

Resultados:
Gráfico 1: Curva de progesterona en vacas diagnosticadas por examen veterinario como
gestantes al final del ensayo:
En el gráfico precedente se han representado los promedios de todos los valores de medición del análisis de progesterona en leche y del análisis
de progesterona en suero. En la vertical izquierda se ha incluido adicionalmente el diagrama de barras, correspondiente a los valores análogos de
progesterona. Las líneas horizontales discontinuas indican los valores límites de 3 ng/ml y 9 ng/ml. La prostaglandina fue aplicada el día -4. El
valor de progesterona medido en leche cae rápidamente desde un nivel alto de más de 9 ng/ml, lo que indica que había un cuerpo lúteo
activo que entró en regresión por la aplicación de prostaglandina. El diagrama de barras de eProCheck® muestra en este caso al día -2 una regresión
del nivel de progesterona desde 6 a 1 barra. Desde el día 0 (ovulación) el valor comienza a subir, alcanzando al cabo de 2 días una
indicación de 2 barras. Hasta el día 7 se observa una elevación continua del nivel de progesterona. A partir de este día, y con el inicio del diestro,
se supera el nivel de 9 ng/ml de progesterona y eProCheck® los visualiza con la indicación máxima de 6 barras.
Al día 19 tras la inseminación, en el cual se recomienda un control precoz de la gestación a través de la progesterona, puede presumirse con 80%
de probabilidad una gestación, en base al nivel alto y continuo de progesterona. En este momento no es posible dar un 100% de seguridad de la
gestación, debido a posibles irregularidades del ciclo, quistes luteicos o una muerte embrionaria.
www.minitube.de

Gráfico 2: Curva de progesterona en vacas que fueron diagnosticadas por veterinario como no
gestantes al final del ensayo.
En el gráfico 2 se representan los promedios de todas las mediciones de los análisis de progesterona en leche y progesterona en suero sanguíneo
en el segundo grupo de vacas. En a vertical izquierda se encuentran los correspondientes diagramas de barras. Las líneas horizontales discontinuas
indican los valores límites de 3 ng/ml y 9 ng/ml. Al igual que en el Gráfico 1, aquí también se observa una caída del nivel de progesterona
desde un nivel alto el día -4 hasta 1 barra el día 0. Tras la ovulación y el nuevo crecimiento del cuerpo lúteo, el valor asciende rápidamente hasta
superar la barrera de 9 ng/ml y manteniendo un nivel constante de 6 barras durante el diestro. Al día 15 comienza a descender el nivel de
progesterona, alcanzando al día 19 un resultado de medición de 3 barras. Al efectuar un test precoz de gestación, se puede por tanto deducir con
100% de seguridad que no hay gestación, lo cual permite una re-inseminación en la ovulación siguiente, 1 a 2 días más tarde. Sin embargo, los
animales del ensayo no fueron re-inseminados inmediatamente. La ausencia de gestación fue detectada en todos los animales por un descenso
del nivel de progesterona en los días 17-19, y más tarde confirmada por diagnóstico veterinario.
Conclusión:
En base a los gráficos presentados es muy bien visible que existe un claro paralelismo entre los valores de progesterona determinados en leche
entera con eProCheck® , y los valores de progesterona en suero, determinados en el laboratorio por enzima-inmuno ensayo.
Con ello pudo mostrarse que el test rápido del nivel de progesterona determinado con eProCheck® entrega valores informativos, con los cuales es
posible determinar fehacientemente el estatus reproductivo de la vaca.
Los resultados de eProCheck® constituyen, por lo tanto, una base informativa para medidas efectivas en el manejo reproductivo moderno.
www.minitube.de