Reacciones cruzadas entre alergenos - Alergología e Inmunología ...

REACTIVIDAD CRUZADA ENTRE
ALERGENOS
De todos es sabido que la reacción alérgica,
en un individuo hipersensible a una sustancia
dada, surge ante un segundo encuentro con la
fuente alergénica, después de un contacto inicial
con ella. El primero de tales contactos sensibiliza
al individuo frente a tal alergeno, induciendo
la síntesis de IgE específicas de dicho alergeno
y preparando así su organismo para responder
con mayor eficacia a posteriores encuentros con
él. En estos contactos, la población de anticuerpos
sintetizados desencadena una respuesta
inflamatoria diversa que da lugar a los síntomas
clínicos característicos de la alergia tipo-I.
Sin embargo, un individuo puede sufrir procesos
de alergia frente a sustancias o materiales
con los cuales nunca ha tenido contacto previo.
Ello puede ser explicado por el hecho de que la
fuente de alergia comparta una sustancia alergénica
con otro material con el que el paciente sí
haya tenido relación directa y que aportó el
agente sensibilizante en aquel primer encuentro.
Ante este tipo de acciones, se dice que existe
reactividad cruzada entre ambos materiales: el
individuo posee IgE responsables de esa actividad
y será hipersensible indistintamente a una u
otra fuente de alergia.
Pero, la identidad estructural de los agentes
alergénicos que conducen a la reactividad cruzada
no ha de ser necesariamente absoluta. Basta
con que exista una cierta similitud molecular, en
algunos casos incluso mínima. Basta con que
compartan un epítopo alergénico.
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Revisión
Reacciones cruzadas entre alergenos: implicación de los carbohidratos
R. Rodríguez, M. Villalba
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Complutense, Madrid.
Naturaleza de los agentes implicados en la
reactividad cruzada
La mayor parte de los alergenos de origen natural
son de naturaleza polipeptídica. Pero muchas
proteínas alergénicas poseen además grupos químicos
de diferente naturaleza, siendo los más frecuentes
los carbohidratos. Así, tanto las proteínas
como los glicanos constituyen los mejores candidatos
para ejercer un papel en la reactividad cruzada
entre diversas fuentes alergénicas naturales.
La mayor parte de las células de un organismo
comparten numerosas funciones, y cada una de
estas funciones están ejecutadas por la misma proteína.
Este concepto podemos extenderlo a células
de diferentes organismos. En general, idénticas
funciones son desempeñadas en organismos distintos
por la misma proteína. Sin embargo, la
estructura de esa proteína puede diferir de unas
especies biológicas a otras en un grado muy diverso,
constituyendo una familia de proteínas homólogas.
La similitud entre ellas viene frecuentemente
regida por la proximidad filogenética de las
especies comparadas. Tanto más parecidas serán
las secuencias de aminoácidos (también llamadas
estructuras primarias) de las proteínas con idéntica
función cuanto más cercanas se encuentren las
especies en el árbol evolutivo. Así, si la reactividad
cruzada depende de la similitud de estructuras,
tanto mayor probabilidad de ofrecer tales
reacciones presentarán las proteínas alergénicas
procentes de fuentes biológicas distintas cuanto
más relacionadas filogenéticamente se encuentren
éstas.
Además de las proteínas, los azúcares pueden
también encontrarse implicados en reacciones
Rev. Esp. Alergol Inmunol Clín, Octubre 1997 Vol. 12, Núm. 5, pp. 269-281
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270 R. Rodríguez y M. Villalba Volumen 12
cruzadas. Como discutiremos más adelante con
mayor profundidad, ello se debe a la confluencia
de estructuras, esto es, a la restringida diversidad
de sus estructuras alergénicas.
Factores que condicionan la existencia de
reactividad cruzada
Del análisis de la naturaleza y función de las
moléculas principalmente implicadas en la reactividad
cruzada se puede desprender que hay tres
factores que favorecen su existencia:
a) Una estructura molecular altamente conservada
Del propio concepto de reactividad cruzada se
deduce que ésta será posible cuando el alergeno,
casi siempre una proteína, posea una secuencia de
aminoácidos muy parecida en las diversas fuentes
alergénicas en las que se encuentre. Esa similitud
estructural puede y suele ocurrir, como ya hemos
comentado, entre proteínas con idéntica función
biológica en las distintas especies. A menudo, la
función de la proteína ejerce una presión conservativa
tan fuerte que no es posible alterar apenas su
secuencia en un gran número de posiciones de la
cadena polipeptídica sin que se perturbe su actividad
biológica; incluso, ciertos cambios pueden
desembocar en una proteína totalmente inactiva. La
coincidencia de estructuras entre proteínas homólogas
será tanto mayor cuanto más sometida se
encuentre a restricciones conformacionales. Ello se
traduce en el hecho de que la molécula debe poseer
una estructura sumamente conservada a lo largo
de las diversas especies, por lo que, si la proteína es
alergénica, la reactividad cruzada debida a ella será
altamente probable. Así, por ejemplo, una proteína
que posea múltiples ligandos con los que debe establecer
numerosos contactos, en los que son insustituibles
determinados aminoácidos de la cadena
polipeptídica -frecuentemente residuos expuestos al
medio acuoso circundante-, son las candidatas más
idóneas para encontrarse involucradas en las reacciones
cruzadas. Cuando, por el contrario, la permisividad
a los cambios secuenciales es grande,
esto es, la proteína presenta actividad biológica aún
disponiendo de estructuras primarias poco similares,
la reactividad cruzada es más improbable: las
diferencias estructurales entre el alergeno original y
su homólogo pueden ser detectadas por los anticuerpos
específicos del primero, y no ser capaces
de reconocer en el homólogo los epítopos correspondientes,
lo que se traduce en una ausencia de
alergenicidad por parte de este último en los
pacientes sensibles al alergeno original.
En el primero de los casos se encuentran dos
alergenos a los que se ha atribuido un importante
papel en la reactividad cruzada 1 : Bet v 1 -alergeno
principal del polen de abedul- y sus homólogas en
otros pólenes, y las profilinas. Ambas familias de
proteínas poseen secuencias suficientemente conservadas
en numerosas especies para ser reconocidas
en mayor o menor grado por los anticuerpos
IgE producidos por la estimulación con cualquiera
de sus homólogos. Mucha menor similitud
secuencial presentan, sin embargo, Ole e 1, Lol p
11 y sus equivalentes de otros pólenes no relacionados
filogenéticamente como el de maíz o el de
abedul, evitándose así la alergenicidad cruzada
entre especies evolutivamente alejadas. Así, difícilmente
dichos alergenos serán responsables de
tal reactividad entre los pólenes de oleáceas y gramíneas,
o betuláceas.
b) Coincidencia de tejido
Lógicamente, la presencia de proteínas con
idéntica función biológica -y por tanto con estructuras
semejantes- se acentúa en tejidos homólogos.
Las células de los tejidos poseen muchas proteínas
especializadas en desempeñar funciones
propias de dicho tejido, y que son diferentes de las
de otros órganos. Por ello, la reactividad cruzada
será tanto más probable e intensa cuanto más relacionados
se encuentren los tejidos alergénicos.
Por ejemplo, la frecuencia de esta reactividad será
superior entre los propios pólenes de diversas
especies de plantas que con los frutos, las semillas,
las hojas; o bien los epitelios de animales
domésticos entre sí, o entre las esporas de hongos,
o entre los excrementos de ácaros, etc.
Se salen de este patrón proteínas ubicuas, que
poseen una actividad universal, indispensable para
muchos tipos de células, por lo que se pueden
encontrar en cantidades detectables desempeñando
un papel relevante en la reactividad cruzada.
Este es el caso de las profilinas, y quizás la tropomiosina
y proteínas ligantes de calcio, de más
reciente implicación en estos procesos de reactividad
cruzada.
c) Proximidad filogenética de las especies alergénicas
La similitud estructural entre proteínas homólo-
16

Núm. 5 Reacciones cruzadas entre alergenos 271
gas es mayor para las procedentes de fuentes alergénicas
filogenéticamente cercanas. La presión
evolutiva no ha dispuesto del tiempo suficiente
para crear y aceptar los mismos cambios en la
estructura de una proteína de dos especies próximas
que los que pueden mostrarse entre dos más
alejadas. Esta consideración permite agrupar, por
un lado, las especies biológicas animales, por otro
lado, las vegetales y finalmente los microorganismos,
teniendo presente que dentro de cada grupo
especies muy próximas poseerán más probabilidad
de compartir alergenos que aquéllas menos
relacionadas. Por ejemplo, los pólenes de betuláceas
presentarán más frecuentemente reacciones
cruzadas entre ellos, que con los de oleáceas o con
los de gramíneas.
En algunas ocasiones, no es necesario que la
similitud estructural entre las proteínas alergénicas
se extienda a la molécula completa para que
tenga lugar la reactividad cruzada entre ellas. Basta
con que el parecido exista en una pequeña parcela
del polipéptido para que los anticuerpos IgE
puedan unirse al antígeno. Esta situación puede
ser ilustrada mediante los «motivos funcionales».
Se trata de regiones muy definidas de la estructura
de las proteínas, frecuentemente de carácter
conformacional (es decir, tridimensional), que
poseen funciones específicas en proteínas muy
diferentes, funciones tales como catalítica, receptora
de un ligando concreto -que puede ser un
simple ion-, sustrato de una actividad ajena, etc.
La conservatividad de la estructura de estos
«motivos» suele ser muy alta, precisamente para
preservar esa función característica, y cambios
mínimos en ella dan lugar a proteínas inoperantes.
Un ejemplo de este tipo de estructura polipeptídica
serían los bucles característicos de unión del
ion calcio, motivos funcionales muy difundidos a
lo largo de un gran número de proteínas, proteínas
muy diversas y con funciones particulares diferentes.
Su presencia en la estructura polipeptídica tridimensional
en lugares de alta exposición al
medio acuoso, su gran conservatividad, su notable
polaridad (ricos en aminoácidos de carácter ácido),
su ubicuidad, y su estabilidad en presencia
del ion, hacen de ellos firmes candidatos a constituir
determinantes alergénicos responsables de
numerosas reacciones cruzadas entre una amplia
diversidad de especies.
Además de los factores mencionados, existen
17
otros secundarios que condicionan la expresión de
las reacciones cruzadas, como son la solubilidad
del alergeno o su abundancia en la fuente biológica.
Pequeños cambios en la secuencia de una proteína
pueden afectar profundamente a su solubilidad,
por ejemplo la sustitución de un residuo
polar de la superficie de la proteína -como un residuo
de aspártico- por uno de carácter hidrofóbico
como sería una valina. Esta alteración, además de
rebajar la solubilidad del polipéptido, puede inducir
la autoasociación de las moléculas formando
agregados difícilmente extraíbles en sistemas
acuosos, y por ello menos capaces de inducir procesos
alérgicos. Por otro lado, proteínas homólogas
en especies distintas pueden presentarse en
niveles de concentración muy diferentes, y constituirse
o no en alergenos dependiendo de esos
niveles, ya que darían lugar a títulos altos o bajos
de anticuerpos IgE; no en vano se ha observado
que la mayor parte de los alergenos principales
son proteínas abundantes en los extractos alergénicos.
Fuentes biológicas entre las que se da
frecuentemente la reactividad cruzada
En la práctica, la reactividad cruzada -al margen
de algunos escarceos con insectos, peces y
ácaros- posee fundamentalmente dos frentes de
estudio: la que tiene lugar entre los pólenes, y la
que se da entre pólenes y algunos alimentos de
origen vegetal como son las frutas y hortalizas. La
escasez de datos moleculares sobre alergenos y la
ausencia de unas bases coherentes para el análisis
de esas reacciones cruzadas pueden ser la causa
de que, hasta la fecha, apenas se hayan analizado
aquellas responsables de las polinosis que, como
la alergia al polen de abedul, se había observado
en la década de los 80 que predisponían al paciente
al síndrome de alergia oral o a síntomas relacionados
con el consumo de vegetales crudos 1 ,
sobre todo frutas de la familia de las rosáceas,
entre las que se encuentran la manzana y el melocotón.
Otros casos de alergias relacionadas entre
sí son a ambrosía y melón o plátano, o a algunos
insectos y ácaros, a castaña y látex, a caracoles y
ácaros, etc. Pero estas últimas están poco documentadas
aún.
Con todo ello, raramente se han estudiado otras
acciones que no sean las de Bet v 1 y las profili-

272 R. Rodríguez y M. Villalba Volumen 12
nas, ambos alergenos importantes en vegetales.
Cuando el estudio se generalice a otros materiales
alergénicos, o implicando a nuevas proteínas, es
muy probable que la incidencia de la reactividad
cruzada se observe para un gran colectivo de alergenos.
Cada uno de ellos puede tener por cuenta
propia una baja incidencia clínica, pero la diagnosis
de su implicación en reacciones cruzadas puede
ser esencial para el tratamiento y prevención de
las alergias del paciente.
Como hemos dicho, dos proteínas han sido
principalmente involucradas en reacciones cruzadas
1 : las profilinas y el alergeno principal del
polen de abedul, Bet v 1. La profilina, una proteína
capaz de interaccionar con el citoesqueleto
celular y con fosfoinosítidos, está presente en
casi todas las células eucarióticas. Posee una
estructura muy conservada en especies relacionadas
filogenéticamente: las profilinas procedentes
de especies vegetales presentan una identidad de
secuencia de alrededor del 80%, mientras que la
profilina humana tiene alrededor de un 30% de
identidad con la de Acanthamoeba. Dada su ubicuidad
y su carácter alergénico, se la ha definido
como «panalergeno» 2 . Alrededor del 20% de los
pacientes alérgicos al polen de abedul son sensibles
a la profilina, incrementándose este valor
notablemente si consideramos las alergias a
algunos alimentos como manzana y melocotón.
Aunque la intensidad de la unión de la profilina
a las IgE de pacientes alérgicos es moderada, la
reactividad cruzada debida a ella tiene lugar
entre numerosos organismos, incluso muy poco
relacionados evolutivamente, por lo que se la
considera como uno de los principales alergenos
responsables de esta actividad. Por otro lado, se
sabe que la alergia a manzana es muy frecuente
entre los pacientes sensibles al polen de abedul.
De ello se ha responsabilizado a las proteínas
homólogas de la familia de Bet v 1 3 , que poseen
secuencias muy semejantes, encontrándose también
implicadas en las reacciones cruzadas a
nivel de IgE entre pólenes de abedul, avellano,
aliso y carpe.
Recientemente se ha observado en pólenes de
diversas especies, incluso no relacionadas filogenéticamente,
la existencia de una proteína
ligante de calcio que podría constituir un nuevo
panalergeno, al menos a nivel de especies vegetales
4 . Se ha detectado en todos los pólenes tes-
tados (oleáceas, gramíneas, betuláceas, compuestas,
pináceas, cupresáceas), lo que hace
suponer que posee una secuencia de aminoácidos
altamente conservada. Se ha podido demostrar
que, en la interacción de las IgE de sueros
de pacientes alérgicos a polen de Cynodon dactilon
con la proteína aislada de este polen, está
implicado uno de los sitios de unión de calcio.
Esto podría estar relacionado con la incipiente
inhibición que ejerce el extracto de polen de
abedul sobre la interacción entre la parvalbúmina
de bacalao (con tres sitios de unión de calcio)
y los sueros de pacientes alérgicos a ella, dato
que sorprendió notablemente a Apold y Elsayed
hace cerca de dos décadas y que nunca habían
podido explicar. Los estudios sobre esta nueva
familia de proteínas son aún preliminares, pero
podrían relacionar epítopos alergénicos presentes
en proteínas de células animales con otros de
células vegetales, con el interés que ello tendría
para explicar las alergias cruzadas, por ejemplo,
entre pólenes y pescados, o de forma más general
entre especies biológicas muy alejadas filogenéticamente.
Finalmente, la tropomiosina constituye otro
objetivo más en los estudios de reactividad alergénica
cruzada. Aunque aún existen pocos datos al
respecto, esta proteína animal, implicada en la
maquinaria contráctil de las células, ha atraído la
atención como posible responsable de procesos de
reactividad cruzada entre fuentes alergénicas muy
diversas, tales como las gambas, los ácaros y los
insectos 5 .
LOS CARBOHIDRATOS COMO
ESTRUCTURAS ANTIGENICAS
Papel de los carbohidratos en la naturaleza
Las funciones atribuidas a las estructuras glicosídicas
son muy numerosas y diversas, y probablemente
la lista no haya sido aún completada.
Además de tareas meramente estructurales, como
contribuir a la estabilidad, conformación y solubilidad
de la proteína de la que forman parte, los
carbohidratos pueden también proporcionarle protección
frente a actividades proteolíticas extracelulares,
o modular la función proteica. Papeles
más dinámicos pueden resumirse en una implicación
en procesos de reconocimiento que incluyen
18

Núm. 5 Reacciones cruzadas entre alergenos 273
el control de la vida celular, la provisión de ligandos
para la unión específica entre proteínas, o de
estructuras diana para microorganismos, el
enmascaramiento de dichas estructuras, o bien la
mediación en las interacciones célula-célula o
célula-matriz extracelular. Muchas de estas actividades
las desempeñan pequeñas estructuras glicosídicas,
oligosacáridos, con no más de diez o doce
unidades monosacáridas, formando parte de proteínas,
glicoproteínas, que pueden ser muy activas
antigénicamente. La heterogeneidad de las cadenas
glicosídicas, incluso de las que comparten la
misma posición de enlace a la cadena polipeptídica,
junto con la dificultad de disponer de ensayos
bioquímicos adecuados, son los principales motivos
de que aún no sea fácil realizar una asignación
específica de roles biológicos a carbohidratos concretos.
Los glicanos de glicoproteínas pueden ser clasificados
en dos grupos: aquellos que poseen una
unión a la cadena polipeptídica de tipo O-glicosídico
a través de la cadena lateral de una serina o
de una treonina -generalmente contienen un residuo
de N-acetilgalactosamina en su extremo
reductor-; y los que se unen mediante un enlace
N-glicosídico a una asparagina del polipéptido,
empleando para ello un resto de N-acetilglucosamina
del extremo reductor. Los primeros, en
general, juegan un papel en las propiedades fisicoquímicas
de las glicoproteínas portadoras. Los
últimos cumplen funciones de ligandos en fenómenos
de reconocimiento entre moléculas de la
superficie celular.
Variedad estructural de los carbohidratos
Los carbohidratos no se han considerado durante
mucho tiempo moléculas inmunogénicas idóneas.
En general, de menor envergadura y variedad
estructural que las proteínas, su capacidad
antigénica sería dudosa. Sin embargo, en las últimas
dos décadas ha sido tal el avance en su análisis
molecular y funcional que aquellos criterios
han quedado obsoletos. Así, se ha observado que
la presencia de determinados monosacáridos en la
estructura del carbohidrato les capacita para constituirse
en potentes antígenos, sobre todo cuando
se encuentran formando parte de glicoproteínas,
esto es, conjugados con cadenas polipeptídicas 6 .
Y, dado que los carbohidratos se encuentran localizados
en la periferia de la estructura de las gli-
19
coproteínas, accesibles a la interacción con otras
moléculas tales como los anticuerpos, se consideran
ahora muy aptos para constituirse en determinantes
antigénicos.
Los seres vivos poseen en su organización
macromolecular tres tipos de biopolímeros mayoritarios:
ácidos nucleicos, proteínas y carbohidratos.
Todos ellos se encuentran constituidos por
unidades monoméricas enlazadas covalentemente,
pero la existencia de ramificaciones y el anomerismo
distingue a las cadenas polisacáridas de las
nucleotídicas y aminoacídicas. La variedad de
monosacáridos (por ejemplo, hexosas) integrantes
de los carbohidratos es aparentemente menor que
la de los aminoácidos que forman las proteínas.
Sin embargo, la posibilidad de unión entre ellos a
través de cuatro posiciones distintas, la configuración
a o ß del enlace, o la conformación alternativa
piranósido/furanósido de cada monómero,
conduce a una gran diversidad de isómeros. Con
una glucosa y una manosa se pueden formar hasta
16 disacáridos diferentes.
Sin embargo, la variedad de carbohidratos naturales
no puede compararse con la de las estructuras
proteicas; éstas poseen 20 monómeros diferentes,
organizados en todas las combinaciones
posibles, y además plegados en una arquitectura
tridimensional, lo que les confiere una diversidad
casi imposible de imaginar. La razón que subyace
al limitado número de estructuras oligosacáridas y
polisacáridas naturales es que los organismos, las
células, poseen sólo unos pocos sistemas distintos
de síntesis de carbohidratos, que conducen a la
formación de moléculas bastantes definidas,
muchas de las cuales poseen en común una porción
importante de su estructura. De ello da cuenta
incluso el reducido número de tipos de unión
del glicano a la cadena polipeptídica: N-glicosídico
y O-glicosídico. Sin embargo, y a pesar de
existir fórmulas mínimas comunes a muchos carbohidratos,
el hecho de que en los vegetales, por
ejemplo, estos sistemas posean rutas de síntesis (o
enzimas distintas para completar el proceso) diferentes
que en las especies animales, hace que los
productos finales no sean idénticos, y, por tanto,
los carbohidratos de aquéllos puedan resultar antigénicos
en éstos. Así, la antigenicidad de los carbohidratos
en mamíferos se refiere casi exclusivamente
a los glicanos procedentes de plantas
-especialmente los de glicoproteínas vegetales-, y

274 R. Rodríguez y M. Villalba Volumen 12
en menor grado a los de algunos microorganismos
e invertebrados.
¿Qué característica del carbohidrato puede ser
responsable de su alergenicidad?
Los tipos de oligosacáridos presentes en glicoproteínas
de plantas, enlazados mediante uniones
N-glicosídicas, se encuentran resumidos en la Fig.
1. Todos los carbohidratos N-glicosídicos poseen
en común el «núcleo pentasacárido» Mana1-
6(Mana1-3)Manß1-4NAcGlcß1-4NAcGlc. Dependiendo
de los sustituyentes que posean sobre
este núcleo, se obtendrán las tres subclases de
cadenas: de tipo complejo, rico en manosas, e
híbrido. El tipo complejo no posee más residuos
de manosa que los contenidos en el núcleo pentasacárido,
pero posee unidades de diversos monosacáridos
tales como N-acetilglucosamina, fucosa,
o xilosa, en diferentes posiciones del núcleo. Por
el contrario, las cadenas del tipo rico en manosas
presentan sólo residuos de este monosácarido
enlazados al núcleo y frecuentemente al menos
hasta un número de cinco. El tercer tipo posee
características de ambos, se alternan residuos
complementarios de manosas -casi siempre unidas
sobre la manosaa1-6 del núcleo-, con otros componentes
típicos de los complejos como es la xilosa.
Gal NAG Fuc
Gal NAG Man
Gal NAG Man – NAG – NAG – Asn
Gal NAG
Man COMPLEJO
Gal NAG
Man Man
Man
Man Man Man – NAG – NAG – Asn
Man Man Man
RICO EN MANOSA
Man
Man Fuc
Gal
Man
NAG Man – NAG – NAG – Asn
Man
NAG Xil HIBRIDO
Fig. 1. Tipos de oligosacáridos N-glicosídicos. Se muestran
tres ejemplos representativos, indicándose la unión a la asparagina.
En sombreado se recogen los núcleos pentasacáridos.
Fuc: fucosa; Gal: galactosa; Man: manosa: NAG: N-acetilglucosamina;
Xil: xilosa.
Los glicanos complejos de las células de mamíferos,
además de ser de mayor envergadura que
los de vegetales, poseen frecuentemente ácido siálico
y galactosa, raramente fucosa y nunca xilosa.
Estas diferencias pueden marcar la antigenicidad
de los carbohidratos de glicoproteínas de plantas
en el hombre. De hecho, la presencia de una xilosaß1-2
sobre la N- acetilglucosamina interna del
núcleo pentasacárido parece tener un valor decisivo
en la antigenicidad, e incluso en la alergenicidad
de algunas glicoproteínas vegetales. En este
sentido, también se le ha atribuido actividad antigénica
en mamíferos a la fucosaa1-3 enlazada a
la N-acetilglucosamina terminal, incluso se han
purificado anticuerpos específicos que la reconocen
y que pueden ser empleados en la determinación
de la presencia de residuos equivalentes en
otros carbohidratos.
En efecto, mediante experimentos de inhibición
se demostró en 1991 que el residuo de fucosaa1-
3 enlazado a la N- acetilglucosamina terminal
contribuye de manera importante a la antigenicidad
de la peroxidasa de rábano en conejos 7 , pues
los anticuerpos IgG específicos inducidos al
inyectar el conejo con esta proteína reconocían de
manera especial esa fucosa. Estos datos han sido
posteriormente corroborados por otros equipos
que, además de atribuir un papel a ese residuo en
la alergenicidad de la fosfolipasa A2 8 (PLA2), han
implicado también a la xilosaß1-2 en tales acciones
9 , e incluso han purificado aquellos anticuerpos
IgG específicos de fucosa o xilosa 10 .
Estos datos ponen de manifiesto la naturaleza
de los grupos monosacáridos que pueden estar
implicados en la antigenicidad de los oligosacáridos
de las glicoproteínas de plantas; xilosa y fucosa
son residuos ausentes o muy poco frecuentes en
las células de mamíferos y pueden ser reconocidos
como elementos extraños por el sistema
inmunológico humano.
Sin embargo, la importancia de cada carbohidrato,
o de cada monosacárido, en la reactividad
frente a las IgE de sueros de pacientes hipersensibles
es característica de cada alergeno. La presencia
de xilosa o fucosa en un oligosacárido no es
garantía de su alergenicidad.
Análisis de la alergenicidad y estructura de
carbohidratos
Los procedimientos disponibles para el aisla-
20

Núm. 5 Reacciones cruzadas entre alergenos 275
miento y manipulación de los carbohidratos presentes
en glicoproteínas están lejos de poderse
considerar sencillos; incluso la cuantificación del
glicano obliga a determinaciones laboriosas y
muchas veces adolece de un alto grado de inexactitud.
Además, la cantidad de proteína de partida
es, muy a menudo, insuficiente para completar los
datos deseados. Por ello, la mayor parte de los
métodos utilizados implican comparar la potencia
alergénica de la proteína glicosilada con la de formas
parcial o totalmente desglicosiladas. Esto
pone de relevancia los sistemas de desglicosilación,
porque de su efectividad y control dependerá
la fiabilidad de las conclusiones.
Existen dos tipos de sistemas de desglicosilación,
los que utilizan reactivos químicos y los que
emplean enzimas. De entre los primeros destacamos
los tratamientos con ácido trifluorometanosulfónico
(TFMS) y con ácido peryódico. El
TFMS hidroliza el enlace entre el carbohidrato y
la cadena polipeptídica, lo que conduce a la separación
completa del azúcar. Este tratamiento puede
afectar a la fracción aminoacídica de la proteína,
de manera que una pérdida de antigenicidad
como consecuencia de su utilización podría ser
debida a la alteración de uno o varios epítopos
polipeptídicos. El ácido peryódico, por otro lado,
elimina secuencialmente monosacárido a monosácarido
de la cadena oligosácarida, por lo que, para
asegurarse de la retirada completa del glicano, es
importante determinar la cinética de desglicosilación,
y elegir las condiciones más adecuadas. Este
tratamiento también puede originar oxidaciones
indeseables en la estructura polipeptídica y conducir
a la alteración de su antigenicidad. Así, después
de ambos tratamientos se aconseja analizar
el estado de la proteína, no sólo a nivel conformacional
sino sobre todo revisar la composición original
de sus aminoácidos constituyentes.
Teniendo en cuenta las anteriores consideraciones,
serían los métodos enzimáticos los más convenientes
para una desglicosilación delicada, sin
alteración de la estructura polipeptídica, pero eficaz
en la eliminación del glicano. Hasta hace poco
tiempo no existían enzimas comerciales adecuadas
a tal objetivo. En la actualidad disponemos de
glicosidasas que escinden específicamente el enlace
N-glicosídico entre la cadena polipeptídica y el
carbohidrato, dependiendo de la naturaleza del
azúcar. Entre ellas se encuentra la endoglicosida-
21
sa H (Endo H) que actúa únicamente cuando el
oligosacárido es de tipo rico en manosas. Quizás
la enzima más útil es la péptido-N-(acetil-ß- glucosaminil)-asparagina
amidasa F (PNGasa F) que
utiliza un sustrato N-glicosídico, siempre que no
posea fucosa unida en posición a1-3 a la N-acetilglucosamina
terminal del núcleo pentasacárido.
Finalmente, la PNGasa A escinde todo carbohidrato
con enlace N-glicosídico; sin embargo, aunque
pudiera parecer la más adecuada por la magnitud
de su hidrólisis, su actividad no siempre es
patente ya que muchas proteínas se resisten, en la
práctica, a ser desglicosiladas por esta enzima;
además, su gran inestabilidad es otro factor a considerar
antes de decidir su utilización. Una vez
retirado el carbohidrato de la cadena polipeptídica
se puede analizar la actividad antigénica y alergénica
de la proteína remanente y compararla con la
de la glicoproteína nativa.
Como alternativa a la utilización de glicosidasas
específicas en la preparación del carbohidrato
para su análisis molecular o inmunológico, se dispone
de proteasas inespecíficas - como proteinasa
K o pronasa- que producen la degradación casi
completa de la fracción polipeptídica respetando
el azúcar anclado a una mínima secuencia de aminoácidos
(glicopéptido) que puede llegar a ser tan
reducida como la propia asparagina enlazante del
carbohidrato.
El glicano, por su parte, puede ser fraccionado
y aislado por diversas técnicas cromatográficas,
entre las que se encuentran la cromatografía de
afinidad con soportes de lectinas, o la de alta presión
en fase reversa y con matrices especialmente
diseñadas para esta finalidad. El manejo y la
detección del oligosacárido se ven facilitados si se
marca previamente, bien mediante radiactividad,
bien con un producto que origina un derivado
fluorescente o coloreado. Una vez separadas todas
las especies de carbohidrato que coexisten en una
proteína alergénica, la técnica por excelencia para
el análisis de cada una de ellas es la resonancia
magnética nuclear que, mediante las señales originadas
por los protones de la muestra y en comparación
con las de moléculas conocidas, proporciona
la estructura completa del carbohidrato. Esta
técnica puede también emplearse sobre la glicoproteína
intacta, pero algunas señales inherentes
al glicano podrían permanecer enmascaradas por
las de los aminoácidos y quedar sin resolver.

276 R. Rodríguez y M. Villalba Volumen 12
Además de la metodología descrita anteriormente,
existen diversos procedimientos que proporcionan
datos más o menos completos sobre
la estructura de los azúcares de glicoproteínas, o
rinden formas defectivas en el glicano que pueden
ser objeto de estudio. Tal es el uso de las
lectinas, de los anticuerpos específicos de monosacáridos
y de las exoglicosidasas. Las lectinas
son proteínas que unen estructuras glicosídicas,
mostrando frecuentemente una afinidad selectiva
hacia ciertos tipos de residuos monosacáridos,
con lo que su interacción con un carbohidrato
dado indicaría la existencia de tales restos
glicosídicos. Una de las lectinas más utilizada es
la concanavalina A, capaz de unirse a las ramificaciones
de manosas terminales que suelen
aparecer en los oligosacáridos con unión a la
proteína de tipo N-glicosídico. En otro lugar se
encuentran los anticuerpos específicos de monosacáridos
concretos: algunos grupos de investigación
han obtenido anticuerpos frente a xilosa
o frente a fucosa, anticuerpos que se unen selectivamente
a carbohidratos que poseen uno de
estos residuos en su estructura. El problema para
su uso es que no son comerciales, y por lo tanto
no disponibles para la comunidad científica. De
igual forma que las lectinas, la reactividad de
estos anticuerpos con un azúcar dado indicaría
la existencia del monosacárido específico reconocido
por la inmunoglobulina. Como alternativa
a este método, se puede hacer uso de un anticuerpo
comercial obtenido frente a peroxidasa
de nabo, que reconoce específicamente la presencia
de xilosa y/o fucosa en la glicoproteína
analizada. El uso de este anticuerpo con el alergeno
Ole e 1 del polen de olivo dio magníficos
resultados 11 . Por último, exoglicosidasas tales
como fucosidasa, manosidasa, xilosidasa, etc,
proporcionan un producto defectivo en un
monosacárido concreto cuya actividad antigénica
puede ser analizada en comparación con la
del glicano original.
Finalmente, de la existencia de reactividad
cruzada de un alergeno glicoproteico con una
glicoproteína de cuyo carbohidrato se conoce la
estructura pueden extraerse importantes conclusiones
sobre la estructura del glicano del primero.
La coincidencia de reconocimientos indica,
al menos sugiere, coincidencia en algún componente.
ALERGENOS GLICOPROTEICOS
Estructura
La verdadera investigación sobre proteínas alergénicas
ha tenido lugar durante la última década.
A principios de 1990 sólo se habían clonado y
secuenciado los genes de cinco alergenos. A finales
de 1994 ya eran 48 los alergenos clonados, y
en la actualidad hay registrados más de 100 en la
lista oficial del Comité de Nomenclatura de la
IUIS. A mediados de la década de los ochenta, se
comenzó a tener indicios de la existencia de carbohidratos
en la estructura de algunos alergenos
polipeptídicos. El primero en ser caracterizado
como glicoproteína fue un alergeno principal de
Apis mellifera, PLA 2, en la década de los 70. Desde
entonces la lista se ha incrementado considerablemente.
La Tabla I recoge los glicoalergenos
que se conocen en la actualidad, así como las referencias
más relacionadas con el carácter alergénico
de su carbohidrato 12-25 . De ellos destacan, por su
número, los procedentes de pólenes, aunque
encontramos también un alergeno de epitelio de
gato, Fel d 1, y uno de insecto, la PLA2 de veneno
de abeja. Mención aparte requiere el antígeno
H del tunicado Styela plicata (parásito adherido a
las ostras), alergeno ocupacional que extrañamente
no ha sido recogido en las más recientes listas
de alergenos caracterizados 26, 27 .
Aunque se conocen la mayor parte de las
estructuras polipeptídicas de estos alergenos, muy
poco se sabe de su componente glicosídico, a
excepción de los de la PLA2 y de los alergenos Art
v 2 y Cry j 1 de los pólenes de artemisa y cedro
japonés. Del alergeno Ole e 1 del polen de olivo
se tienen algunos datos muy preliminares aún,
como son el sitio de glicosilación y el número y
tipo de especies que posee. Todos los oligosacáridos
de estos alergenos se encuentran enlazados a
la cadena aminoacídica a través de una asparagina
(enlace tipo N- glicosídico) y se presentan como
estructuras polimórficas, esto es, existen varias
especies moleculares distintas (aunque similares)
formando parte del componente carbohidrato de la
misma cadena polipeptídica. La unión N-glicosídica
es prácticamente la única encontrada en los
glicoalergenos analizados.
El polimorfismo, por otra parte, es muy frecuente
en las glicoproteínas de plantas. No aparece
una única especie de glicano unido a la frac-
22

Núm. 5 Reacciones cruzadas entre alergenos 277
ción polipeptídica. Por el contrario, suelen coexistir
varias diferentes, incluso compartiendo la misma
posición de la cadena de aminoácidos. Art v 2
posee una mezcla de carbohidratos ricos en manosas
que no han sido encontrados, sin embargo, ni
en PLA2 ni en Cri j 1. En PLA2 se han obtenido
más de 6 estructuras de oligosacárido de tipo
complejo muy similares, varias de ellas con fucosa
y ninguna con xilosa, y todas unidas al mismo
residuo de la proteína. En el caso del alergeno de
cedro japonés, Cri j 1, se han determinado hasta
cuatro estructuras distintas del oligosacárido, también
de tipo complejo todas ellas, unidas a dos
posiciones diferentes del polipéptido, las asparaginas
120 y 333. En ambos alergenos, sobre una
estructura mínima común del carbohidrato, se
alternan varios sustituyentes distintos: en Cry j 1
se encuentran xilosa, fucosas, galactosas y N-acetilglucosaminas,
y en PLA2 fucosas y manosas.
Tabla I. Alergenos glicoproteicos documentados
23
Por otro lado, el alergeno Ole e 1 del polen de olivo,
también glicoproteico, posee un sitio de glicosilación
conocido, que debe ser compartido por
los dos oligosacáridos mayoritarios que contiene,
uno rico en manosa y otro híbrido con xilosa; ninguno
de ellos presenta fucosa. Además, posee una
especie minoritaria (menos del 10% del total glicosídico)
probablemente de tipo complejo con
este monosacárido.
Como puede observarse, las estructuras de las
fracciones glicosídicas de las glicoproteínas alergénicas
conocidas no guardan un patrón único,
aunque sí poseen algunas características comunes,
como son el núcleo pentasacárido y, en muchas
ocasiones, la presencia de xilosa y/o fucosa.
Alergenicidad del carbohidrato
La presencia de carbohidrato en la estructura de
un alergeno proteico no es, sin embargo, garantía
Glicoalergeno Estr a Origen Ref b IgE c
Api m 1 SI Apis mellifera (abeja) 12 SI
Fosfolipasa A2 (PLA2) insecto-veneno 9 fucosa
8 SI
13 poco
Art v 2 SI Artemisia vulgaris
vegetal-polen
14 NO
Cla h 2 NO Cladosporium herbarum
hongo-esporas
15 –
Par j 1 NO Parietaria judaica 16 dudoso
vegetal-polen 17 NO
Fel d 1 NO Felis domesticus (gato)
animal-epitelio
18 –
CM16* y CM6* NO Triticum turgidum (trigo) 19 SI
Hor v 1 (BMAI-1) NO Hordeum vulgare (cebada) 20 SI
Inhibidores a-amilasa vegetal-semilla
Cri j 1 SI Criptomeria japonica 21 SI
peptato liasa (cedro japonés)
vegetal-polen
22 poco
Ole e 1 NO Olea europaea (olivo) 23 –
vegetal-polen 24 SI
11 SI
Antígeno H SI Styela plicata (tunicado)
procordado
25 SI
a: Estructura conocida del carbohidrato.
b: Referencia en relación con el carácter glicoproteico del alergeno.
c: Existencia de IgE específicas del carbohidrato y/o actividad alergénica de éste.

278 R. Rodríguez y M. Villalba Volumen 12
de alergenicidad. En efecto, de entre los alergenos
glicoproteicos vegetales estudiados (Tabla I) sólo
los oligosacáridos de PLA2 8, 9, 12 , de los inhibidores
de a-amilasa de los pólenes de cebada y trigo 19, 20 ,
y de Ole e 1 del polen de olivo 11, 24 , se ha demostrado
que están implicados en la alergenicidad de
la proteína completa. En todos los casos, la desglicosilación
del alergeno proporciona un derivado
con una capacidad de unirse a las inmunoglobulinas
IgE de los sueros de los pacientes
hipersensibles menor que la del alergeno glicosilado.
La contribución del glicano a la alergenicidad
de otras proteínas tales como Par j 1 o Cry j 1 es
dudosa o cuando menos muy reducida. En Cry j 1,
el carbohidrato podría influir sólo conformacionalmente
a la reactividad con las IgE específicas 22 ,
y aunque Par j 1 pierde la capacidad de unir IgE
de los sueros de pacientes alérgicos después del
tratamiento desglicosilante, éste distorsionó tanto
la estructura tridimensional de la proteína que
aquella inhabilitación pudo ser el resultado de los
cambios polipeptídicos 17 . Así, ni para Cri j 1 ni
para Par j 1 se ha encontrado una correlación definitiva
entre la presencia del oligosacárido y la
actividad enlazante al anticuerpo. Finalmente, el
carbohidrato de Art v 2 no posee actividad alergénica
14 - aunque unos primeros resultados parecían
indicar lo contrario-, lo que estaría de acuerdo,
según la hipótesis formulada sobre la participación
de fucosa y xilosa en la actividad alergénica,
con su natural composición de glicano rico en
manosas en el que están ausentes estos monosacáridos.
Además de los alergenos glicosilados de la
Tabla I, se han analizado numerosos extractos
cuya capacidad de unión de IgE de sueros de
pacientes alérgicos es sensible al tratamiento con
peryodato. Y, aunque proceden fundamentalmente
de alimentos vegetales 1 como avellana, cacahuete,
trigo, arroz, guisante, espinaca, plátano, patata,
soja, fresa, y tomate 28 , también se han detectado
en moluscos como el mejillón 1 .
Algunos de los datos obtenidos por distintos
grupos acerca de la contribución particular de un
carbohidrato a la alergenicidad de la glicoproteína
de la que forman parte entran en controversia,
pues según el tipo de ensayo así como el modelo
utilizado en la comparación pueden derivar a
conclusiones diferentes. Antes hemos menciona-
do los trabajos realizados con PLA2, fundamentalmente
estudios de modificación química y
enzimática, y análisis antigénico mediante ensayos
de ELISA e «immunoblotting» con el producto
modificado, estudios que probaban la
implicación del carbohidrato en la unión del
alergeno a las inmunoglobulinas IgE de los sueros
de pacientes alérgicos al veneno de los véspidos
8, 9, 12 . Sin embargo, experimentos recientes
de liberación de histamina de basófilos sensibilizados
y reacciones cutáneas, utilizando alternativamente
la proteína natural, la forma recombinante
producida en E. coli -que no puede estar
glicosilada debido a la inexistencia de los sistemas
correspondientes en la bacteria-, y el derivado
natural desglicosilado, llevaron a la conclusión
de que, si bien el correcto plegamiento de la
cadena polipeptídica es esencial en la reactividad
cutánea de tipo I y para la actividad estimulante
de secreción de histamina, la glicosilación parece
resultar de menor relevancia, ya que la reactividad
cutánea fue similar para las formas glicosilada
y desglicosilada del alergeno, y tanto la
proteína natural como la recombinante eran efectivas
en la liberación del mediador desde los
basófilos 13 . Así, no hay evidencia de que los grupos
carbohidratos de la PLA2 sean epítopos B
dominantes ni esenciales para anticuerpos IgE 13 .
Pero debemos recordar que este alergeno no
posee xilosa en su estructura glicosídica.
Hasta el momento, y como se puede observar,
los datos obtenidos se refieren a la comparación
de actividades entre formas completas de los
alergenos y derivados defectuosos en los carbohidratos;
no se han presentado estudios con el
propio glicano aislado, lo que llevaría a una conclusión
definitiva. Recientemente se ha purificado
el componente oligosacárido liberado por la
PNGasa F del alergeno Ole e 1. Con él se han
realizado ensayos de liberación de histamina a
partir de basófilos obtenidos de pacientes alérgicos
al polen de olivo (Rodríguez y cols., manuscrito
en preparación). Los resultados son muy
prometedores, pues se han obtenido respuestas
positivas para muestras en las que no existen
indicios de la presencia de fragmentos polipeptídicos
del alergeno. En la actualidad se están
llevando a cabo estudios de este tipo, así como
ensayos cutáneos, con los dos componentes
mayoritarios de ese carbohidrato separados por
24

Núm. 5 Reacciones cruzadas entre alergenos 279
cromatografía de afinidad. Una respuesta positiva
en cualquiera de los dos frentes iluminaría
definitivamente los conceptos sobre la capacidad
real de determinadas especies de carbohidratos
en la respuesta alérgica.
Importancia de los carbohidratos en las
reacciones cruzadas alergénicas
La existencia de lectinas en los extractos vegetales
planteó importantes dudas sobre el papel de
los carbohidratos en las reacciones cruzadas, ya
que son moléculas que unen anticuerpos a través
de su fracción glicosídica y habrían podido ser los
responsables de la respuesta positiva a los sueros
de pacientes alérgicos. Sin embargo, al menos dos
datos primarios apoyan la actividad de los epítopos
glicosídicos: los extractos alergénicos tratados
con peryodato perdían su capacidad de unión a
IgE, y muchos sueros con títulos de IgE muy altos
no poseían capacidad de unión a los extractos. Por
otro lado, y como argumento definitivo, se ha
demostrado la existencia de anticuerpos IgE específicos
de carbohidratos 1, 8, 11, 12, 20, 25, 28 .
Como acabamos de ver, los carbohidratos
implicados en la actividad alergénica de glicoproteínas
presentan estructuras con numerosos rasgos
en común, aunque pertenezcan a fuentes biológicas
poco o nada relacionadas entre sí. Por este
motivo, los carbohidratos pueden jugar un papel
importante en las reacciones cruzadas ya que en
los extractos alergénicos, sobre todo en los procedentes
de vegetales, las glicoproteínas pueden
representar un componente muy abundante. La
presencia de xilosa o de fucosa en una glicoproteína
que acceda al paciente hipersensible podría
ser fácilmente reconocida por las IgE de su suero,
IgE específicas de esos monosacáridos y producidas
previamente en el contacto con otro alergeno
glicoproteico, que aunque no fuera idéntico, contuviera
la xilosa o la fucosa en su carbohidrato.
Además se ha observado que los sueros de algunos
pacientes alérgicos son capaces de distinguir
pequeñas diferencias estructurales en los glicanos
reconocidos ya que la magnitud de su respuesta es
distinta hacia los diversos extractos 1 . Esta propiedad
podría contribuir al análisis molecular de los
alergenos glicosídicos.
Ya que las fuentes alergénicas de origen vegetal
son las que a priori más glicoproteínas contendrían,
debemos discutir aquí el papel que podrían
25
jugar los azúcares en la reactividad cruzada alergénica
a alimentos procedentes de plantas. Pues
bien, la responsabilidad de los glicanos en la alergia
a alimentos vegetales de un paciente cuyo suero
posee IgE anti-carbohidrato, por haber sido
sensibilizado quizás por un polen con alergeno
glicoproteico, podemos suponer que debe ser
nula, o cuando menos dudosa. En todo caso le
produciría síndrome alérgico oral. En efecto, las
estructuras glicosídicas son sensibles a actividades
degradantes que actúan en las primeras etapas de
la digestión, a-amilasas que intervienen en la actividad
digestiva bucal hidrolizando los carbohidratos
rápidamente a monosacáridos, que son ya
estructuras sin valor antigénico. Así, la existencia
de carbohidratos en alergenos alimentarios no
implica su actividad alergénica cruzada, pues ese
glicano será destruido antes de que pueda llegar a
tomar contacto con las IgE del suero; sin embargo,
sí puede ser responsable de las reacciones
derivadas de su presencia en la regiones altas del
aparato digestivo, de ahí que puedan explicarse
los síntomas del síndrome alérgico oral. Por todo
ello, la validez de las reacciones cruzadas a nivel
de los carbohidratos se debería restringir a aquellos
alergenos que en su vía de asalto al individuo
eviten las actividades glicolíticas. Alergenos inhalados,
o inyectados, no están sometidos a estas
actividades, al menos en la misma cuantía, por lo
que sí podrían ser reconocidos por los anticuerpos
del suero.
La implicación de los carbohidratos en reacciones
antigénicas y alergénicas cruzadas ha sido claramente
demostrada in vitro. Es su responsabilidad
en la actividad alergénica in vivo, en las
reacciones cutáneas o en la liberación de histamina,
lo que aún plantea dudas -el reducido tamaño
del glicano, 1-1,5 kDa de masa molecular, es uno
de los principales escollos para aceptar su participación
en la asociación de los receptores celulares-.
Las expectativas para resolver este importante
item se encuentran centradas en la posibilidad
de realizar los análisis con preparaciones de carbohidratos
puros, aislados del correspondiente glicoalergeno
o de síntesis, una vez determinadas las
estructuras moleculares a las que se atribuye el
posible papel alergénico. Y del hallazgo de datos
generalizables en esos experimentos depende la
validez de las conclusiones que puedan extraerse.
Pero las respuestas no están muy lejos.

280 R. Rodríguez y M. Villalba Volumen 12
BIBLIOGRAFIA
1. Van Ree R, Aalberse RC. Pollen-vegetable food
crossreactivity: serological and clinical relevance of
crossreactive IgE. J Clin Immunoassay 1993; 16:
124-30.
2. Valenta R, Duchene M, Ebner C. Profilins constitute
a novel family of functional plant pan-allergens.
J Exp Med 1992; 175: 377-85.
3. Calkhoven PG, Aalbers M, Koshte VL, et al.
Cross-reactivity among birch pollen, vegetables
and fruits as detected by IgE antibodies is due to at
least three distinct cross- reactive structures.
Allergy 1987; 42: 382-
4. Batanero E, Villalba M, Ledesma A, Puente XS,
Rodríguez R. Ole e 3, an olive-tree allergen,
belongs to a widespread family of pollen proteins.
Eur J Biochem 1996; 241: 772-8.
5. Witteman AM, Akkerdaas JH, Van Leeuwen J, Van
der Zee JS, Aalberse RC. Identification of a crossreactive
allergen (presumible tropomiosin) in
shrimp, mite and insects. Int Arch Allergy Immunol
1994; 105: 56-61.
6. Feizi T, Childs RA. Carbohydrates as antigenic
determinants of glycoproteins. Biochem J 1985;
245: 1-11.
7. Kurosaka A, Yano A, Itho N, Kuroda Y, Nakagawa
T, Kawasaji T. The structure of a neutral specific
carbohydrate epitope of horseradish peroxidase
recognized by antihorseradish peroxidase antiserum.
J Biol Chem 1991; 166: 4168-72.
8. Tretter V, Altmann F, Kubelka V, Marz L, Becker
WM. Fucose a1,3-linked to the core region of glycoprotein
N-glycans creates an important epitope
for IgE from honeybee venom allergic individuals.
Int Arch Allergy Immunol 1993; 102: 259-66.
9. Prenner C, Mach L, Glossl J, Marz L. The antigenicity
of the carbohydrate moiety of an insect glycoprotein,
honey- bee (Apis mellifera) venom
phospholipase A2. Biochem J 1992; 284: 377-80.
10. Faye L, Gomord V, Fichette-Laine AC, Chrispeels
MJ. Affinity purification of antibodies specific for
Asn-linked glycans containing a1-3 fucose or ß1-2
xylose. Anal Biochem 1993; 209: 104-8.
11. Batanero E, Villalba M, Monsalve RI, Rodríguez
R. Cross-reactivity between the major allergen
from olive pollen and unrelated glycoproteins: Evidence
of an epitope in the glycan moiety of the
allergen. J Allergy Clin Immunol 1996; 97: 1264-
71.
12. Weber A, Schöeder H, Thalberg K, März L. Specific
interaction of IgE antibodies with a carbohydrate
epitope of honey bee venom phospholipase A2.
Allergy 1987; 42: 464- 70.
13. Müller UR, Dudler T,Schneider T, et al. Type I skin
reactivity to native and recombinant phospholipase
A2 from honeybee venom is similar. J Allergy Clin
Immunol 1995; 96: 395-402.
14. Nilsen BM, Sletten K, Smestad-Paulsen B, O’Neill
M, Van Halbeek H. Structural analysis of the glycoprotein
allergen Art v II from the pollen of mugwort
(Artemisia vulgaris L.). J Biol Chem 1991;
266: 2660-8.
15. Swärd-Nordmo M, Paulsen BS, Wold JK. The
glycoprotein Ag-54 (Cla h II) from Cladosporium
herbarum. Further biochemical characterization.
Int Arch Allergy Appl Immunol 1988; 85: 295-
301.
16. Polo F, Ayuso R, Carreira J. Studies on the relationship
between structure and IgE-binding ability
of Parietaria judaica allergen I. Mol Immunol
1990; 28: 169-75.
17. Mucci N, Liberatore P, Federico R, et al. Role of
the carbohydrate moieties in cross-reactivity between
different components of Parietaria judaica
extract. Allergy 1992; 47: 424-30.
18. Duffort OA, Carreira J, Nitti G, Polo F, Lombardero
M. Studies on the biochemical structure of the
major allergen Felis domesticus I. Mol Immunol
1991; 28: 301-9.
19. Sánchez-Monge R, Gómez L, Barber D, López-
Otin C, Armentia A, Salcedo G. Wheat and barley
allergens associated with baker’s asthma. Biochem
J 1992; 281: 401-5.
20. García-Casado G, Sánchez-Monge R, Chrispeels
MJ, Armentia A, Salcedo G, Gómez L. Role of
complex asparagine-linked glycans in the allergenicity
of plant glycoproteins. Glycobiology 1996; 6:
471-7.
21. Taniai M, Kayano T, Takakura R, et al. Epitopes on
Cry j I and Cry j II for the human IgE antibodies
cross-reactive between Cupressus sempervirens and
Cryptomeria japonica pollen. Mol Immunol 1993;
30: 183-9.
22. Ogawa H, Hijikata A, Amano M, et al. Structures
and contribution to the antigenicity of oligosaccharides
of Japanese cedar (Cryptomeria japonica)
pollen allergen Cry j I: relationship between the
structures and antigenic epitopes of plant N-linked
complex-type glycans. Glycoconjugate J 1996; 13:
555-66.
23. Villalba M, Batanero E, López-Otin C, et al. The
amino acid sequence of Ole e I, the major allergen
from olive tree (Olea europaea) pollen. Eur J Biochem
1993; 216: 863-9.
24. Batanero E, Villalba M, Rodríguez R. Glycosylation
site of the major allergen from olive tree
pollen. Allergenic implications of the carbohydrate
moiety. Mol Immunol 1994; 31: 31-7.
25. Shigeta S, Okamura M, Tsutsumi M, et al. Structu-
26

Núm. 5 Reacciones cruzadas entre alergenos 281
re of an allergenic pentasaccharitol, Gp-1ß-b6, isolated
from a sea squirt antigen, Gi-rep, as a minimun
structural unit responsibles for its allergenicity.
J Biochem 1990; 108: 47-52.
26. Liebers V, Sander I, Vankampen V, Raulf-Heimsoth
M. Overview on denominated allergens. Clin Exp
Allergy 1996; 26: 494-516.
Rosalía Rodríguez
Dpto. Bioquímica y Biología Molecular
Facultad de Química
Universidad Complutense
28040 Madrid
27
27. IUIS Allergen Nomenclature Sub-Commitee. Official
list of Allergens. Mayo 1997.
28. Petersen A, Vieths S, Aulepp H, Schlaak M, Becker
W-M. Ubiquitous structures responsible for IgE
cross-reactivity between tomato fruit and grass
pollen allergens. J Allergy Clin Immunol 1996; 98:
505-15.