Chang C T101 Insert - Irvine Scientific

Chang Medium ® C
For Human Amniotic Fluid Cells
Catalog No. T101-019, T101-059, C100+C106, C101+C108
For in vitro diagnostic use.
Zum Gebrauch in der in vitro Diagnostik.
Per uso diagnostico in vitro.
Para uso en diagnóstico in vitro.
Pour l’usage diagnostique in vitro.
Para a utilização em diagnóstico in vitro.
Για in vitro διαγνωστική χρήση.
In vitro diagnostikum.
Til in vitro-diagnostik.
In vitro diagnostiseen käyttöön.
Lietošanai in vitro diagnostikā.
Voor in vitro diagnostisch gebruik.
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Pentru utilizarea fertilizării in vitro
För in vitro-diagnostik.
In vitro diagnostiliseks kasutamiseks.
In vitro diagnosztikai célra.
Skirta in vitro diagnostikos tyrimams.
Symbols:
Storage Temperature for :
T101-019,T101-059,
C100, C106 and C101
European Representative Storage Temperature for:
MPIE
Schutweg 13A
5145 NP Waalwijk, The Netherlands
C108
0050
See instructions
for use.
Catalog Number
Lot Number
Sterilized using aseptic
processing techniques
(filtration)
Expiration:
Year - Month - Day
Caution: See instructions
for use
CE Mark
MPIE Schutweg 13a
5145 NP Waalwijk,
The Netherlands
ENGLISH
INTENDED USE
Chang Medium C may be used for the following
applications:
1. the primary culture of amniotic fluid cells
2. growing passaged amniotic fluid cells
3. the culture of bone marrow cells
4. solid amnion tissue from chorionic villi sampling.
THIS MEDIUM HAS BEEN DESIGNED FOR USE IN
BOTH OPEN (CULTURES EQUILIBRATED WITH A
5% CO 2 ATMOSPHERE) AND CLOSED CULTURE
SYSTEMS (CULTURES FLOODED WITH 5% CO 2
AND INCUBATED WITH THE CULTURE VESSELS
TIGHTLY CAPPED).
Precaution: Do not use Chang Medium C components
beyond the expiration date indicated on the
individual labels.
PRODUCT DESCRIPTION
Chang Medium ® C was developed for the primary culture
of human amniotic fluid cells for use in karyotyping and
other antenatal genetic testing. THIS FORMULA HAS
BEEN OPTIMIZED FOR BOTH OPEN AND CLOSED
SYSTEMS.
STORAGE AND STABILITY
Store Chang Medium C Frozen Supplement at below
-10ºC, Chang Medium C Lyophilized Supplement at
2ºC to 8ºC, Chang Medium B Basal at 2ºC to 8ºC, and
complete Chang Medium C at 2ºC to 8ºC. The Chang
Medium B Basal must not be frozen.
Protect from fluorescent light.
See individual component bottle labels for specific
expiration dates. Complete Chang Medium C may be
stored at 2ºC to 8ºC for 10 days before use without
affecting its function. Storage for longer than 10 days
is not recommended.
DO NOT FREEZE COMPLETE CHANG MEDIUM C.
COMPONENTS
mg/L
Salts …………………………………………….. 7900
Dextrose ………………………………………… 1400
Amino Acids ………………………………………1000
Polypeptides ………………………………………. 66
Vitamins ………………………………………... 22
Deoxyribonucleosides ………………………… 21
Ribonucleosides ………………………………. 20
Sodium Pyruvate ……………………………….. 110
Other Components ……………………………… 8
Hormones and Trace Elements………… 0.0025
Steroid Hormones ………………………….. 0.0013
Newborn Calf Serum ……………………….. 6% v/v
Fetal Bovine Serum ………………………… 6% v/v
PRECAUTIONS AND WARNINGS
This device is intended to be used by staff trained in
procedures that include the indicated application for
which the device is intended.
PREPARATION FOR USE
Lyophilized Supplement
1. Allow Chang Medium C Lyophilized Supplement to
equilibrate to room temperature.
2. Using aseptic techniques, add 10 mL or 50 mL of
sterile distilled water to the lyophilizate. The 10 mL
vial is for 90 mL Chang Medium B Basal; the 50 mL
vial is for 450 mL Chang Medium B Basal.
3. Swirl the vial gently to effect complete solution.
(NOTE: It may be necessary to incubate the vial at
37ºC for 5 to 10 minutes to completely dissolve the
supplement).
4. Aseptically transfer the entire contents of the
reconstituted Chang Medium C Supplement to the
bottle of Chang Medium B Basal.
Use of Chang Medium C for Primary
Cultures: In Situ Methodologies
1. Centrifuge amniotic fluid at low speed to concentrate
the cells.
2. Resuspend the cell pellet in a small volume of the
patient’s own amniotic fluid. For example, aspirate
the supernate of 10 mL of spun amniotic fluid to
0.5 mL above the cell pellet and resuspend. Add
sufficient Chang Medium C to the concentrated
cell suspension to allow for final plating volume of
0.5 mL per cover slip (total of 4 coverslips) or 2 mL
perflaskette.
3. Incubate cultures undisturbed at 37ºC 5% CO 2
atmosphere.
4. Flood cultures on day 2 by adding 2 mL of Chang
Medium C.
5. After 4 to 5 days, the cultures should be checked
for growth. Cultures should be fed once growth has
been observed. Feed cultures by removing all of the
culture supernatant and replacing with 2 mL of fresh
Chang Medium C. It is recommended that cultures
be fed every 2 days thereafter.
6. Check cultures for growth on/or after day 5, and
harvest when sufficient colonies are observed.
7. Best results are obtained when the cultures are fed
with Chang Medium C the day before the harvest.
Use of Chang Medium C for Primary
Cultures: Flask Methodologies
1. Centrifuge amniotic fluid at low speed to concentrate
cells.
2. Resuspend the cell pellet in a small volume of the
patient’s own amniotic fluid. For example, aspirate
the supernate of 10 mL of spun amniotic fluid to 1
mL above the cell pellet and resuspend. Add 4 mL
of Chang Medium C for a total volume of 5 mL per
flask.
3. Incubate cultures undisturbed at 37ºC 5% CO 2
atmosphere.
4. Check for growth on day 5. Change medium with
fresh Chang Medium C and harvest if sufficient cell
growth is observed.
5. Check cultures for growth and completely change
medium every other day thereafter until sufficient
colonies are observed and are ready to harvest.
6. Best results are obtained when the cultures are fed
with Chang Medium C the day before the harvest.
NOTE: For closed systems, flush each culture flask
with 5% CO 2 - 95% air for 20 seconds. Tighten the caps
to the culture flasks and incubate them at 37°C. (It is
recommended that a sterile plugged pasteur pipet be
attached to the CO 2 source to ensure sterility of the
incoming gas.).
Use of Chang Medium C for Growing
Passaged Amniotic Fluid Cells:
To passage the cells, treat the cultures with trypsin (or
pronase, etc.) as you would normally do when cells
are grown in conventional medium. However, protease
treatment should be carefully monitored. Amniotic fluid
cells grown in Chang Medium C tend to be more sensitive
to protease treatment than amniotic fluid cells grown in
conventional medium. It may be necessary to modify
your protocol to take this into account.
QUALITY ASSURANCE
STERILITY

2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588
Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706
Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com
PN 40200 Rev.9
5. Mix the complete Chang Medium C well by swirling
the bottle.
6. Add L-Glutamine, 10.0 mL/L (200 mM). Antibiotics
may be added if desired.
Frozen Supplement
1. Thaw Chang Medium C Frozen Supplement rapidly
by swirling vial in a 37ºC water bath.
2. Aseptically transfer the entire contents of the thawed
Chang Medium C Supplement to the bottle of Chang
Medium B Basal.
3. Mix the complete Chang Medium C well by swirling
the bottle.
4. Add L-Glutamine, 10.0 mL/L (200 mM). Antibiotics
may be added if desired.
ALIQUOTING CHANG MEDIUM C
SUPPLEMENT
Lyophilized Supplement
If you are unable to use the complete Chang Medium C
within 10 days you may wish to make up smaller amounts
by following this modification of procedure:
1. Reconstitute Chang Medium C Lyophilized
Supplement.
2. Distribute aseptically into convenient-sized aliquots
and freeze.
3. Also aseptically dispense the Chang Medium B Basal
into a corresponding number of aliquots.
4. To prepare the complete Chang Medium C, add one
aliquot of thawed Chang Medium C Supplement to
one aliquot of Chang Medium B Basal.
5. Mix well.
Frozen Supplement
1. Thaw Chang Medium C Frozen Supplement.
2. Distribute aseptically into convenient-sized aliquots
and refreeze. (NOTE: The supplement vial contains
14 mL or 70 mL. Distribute equally.)
3. Also aseptically dispense the Chang Medium B Basal
into a corresponding number of aliquots.
4. To prepare the complete Chang Medium C, add one
aliquot of thawed Chang Medium C Supplement to
one aliquot of Chang Medium B Basal.
5. Mix well.
DIRECTIONS FOR USE
THE pH OF THE MEDIUM USED TO FEED
THE CULTURES MUST BE BETWEEN
6.8 - 7.2 (i.e. the medium must be slightly yellowishsalmon
color). pH can easily be adjusted by placing
the medium in a 5% - 8% CO 2 incubator with the cap
slightly loosened.
The final pH must be 6.8 - 7.2.
For additional details on the use of these products, each
laboratory should consult its own laboratory procedures
and protocols which have been specifically developed
and optimized for your individual medical program.
Serum used in the production of Chang Medium C
Supplement has been tested for viral contamination
per CFR Title 9 Part 113.53. It has also been screened
for mycoplasma contamination. Both Chang Medium B
Basal and Chang Medium C Supplement are sterilized
by filtration through a 0.1 micron filter. Representative
samples of Chang Medium B Basal and Chang Medium
C Supplement are tested for possible bacteriological
contamination following the sterility testing protocol
described in the current USP Sterility test .
Chang Medium ® is a registered trademark of Irvine
Scientific.

DEUTSCH
BESTIMMUNGSZWECK
Chang Medium C kann für folgende Methoden eingesetzt
werden:
1. Primär Kultur von Fruchtwasserzellen
2. Zuechten passagierter Fruchtwasserzellen
3. Zuechtung der Kochenmarkzellen
4. Amniongewebe aus Chorion Villi
Probenentnahme.
Dieses Medium wurde hergestellt für die
Verwendung in geoeffnete Kultursystem
(in dem die Kulture ist equilibriert mit
eine 5% CO 2 Atmosphaere), oder fuer ein
geschlossenes Kulturesystem (in dem die
Kultur ueberschwemmt mit 5% CO 2 und
ausgebruetet in einem Behaelter, der fest mit
einer Kappe bedeckt ist).
Achtung: Chang Medium C sollte nicht über das
Verfallsdatum (siehe Etikett) hinaus verwendet
werden.
PRODUKTBESCHREIBUNG
Chang Medium ® C wird verwendet zur Primärkultur
von humanen Fruchtwasserzellen, Karyotyping und
anderen pränatalen genetischen Testmethoden. Diese
Zusammensetzung wurde optimiert für beide die offene
und geschlossene Systeme
LAGERBEDINGUNGEN UND STABILITÄT
Bewahren Sie Chang Medium C Frozen Supplement unter
10°C, Chang Medium C Lyophilized Supplement bei 2ºC bis
8ºC, Chang Medium B Basal bei 2ºC bis 8ºC, und Complete
Chang Medium C bei 2ºC bis 8ºC. Chang Medium B Basal
musste nicht gefroren werden.
Vor fluoreszierendem Licht schützen.
Die spezifische Verfalldaten sind auf die einzelne
Flaschenetikett gezeigt. Complete Chang Medium C kann
an 2ºC zu 8ºC bis 10 Tage vor Gebrauch aufbewahrte
werden. Aufbewahrung länger als 10 Tage wird nicht
empfohlen.
FRIEREN SIE NICHT COMPLETE CHANG MEDIUM C.
BESTANDTEILE
mg/L
Salze ..................................................................7900
Dextrose ....................................................................1400
Aminosäuren .............................................................1000
Polypeptide .....................................................................66
Vitamine ..........................................................................22
Deoxyribonukleoside .....................................................21
Ribonukleoside ..............................................................20
Natrium Pyruvat ...........................................................110
andere Komponenten ......................................................8
Hormone und Spurenelemente ...............................0.0025
Steroid Hormone .....................................................0.0013
Neugeborene Kalb Serum .......................................6% v/v
Foetal Rinder-Serum ...............................................6% v/v
VORSICHTSMASSNAHMEN UND
WARNUNGEN
Diese Vorrichtung ist für die Anwendung durch Personal
vorgesehen, das in Verfahren ausgebildet wurde, welche
die für diese Vorrichtung angegebene zugelassene
Anwendung beinhalten.
VORBEREITUNG
Lyophilisierte Ergänzung (Lyophilized
Supplement)
1. Chang Medium C Lyophilized Supplement sollte beim
Raumtemperatur equilibriert werden.
2. Mit aseptischen Tekniken, fuegen Sie 10 mL oder 50
mL von steriles destilliertes Wasser zum lyophilisierten
Medium hinzu. Die 10 mL Phiole ist fuer das 90 mL
Chang Medium B Basal. Die 50 mL Phiole ist fuer das
450 mL Chang Medium B Basal.
3. Wirbeln Sie die Phiole leicht um eine komplete Loesung
GEBRAUCHSANWEISUNG
DER pH DES MEDIUMS MIT DEM DIE
KULTUREN GEFUETTERT WERDEN, MUSS
IM BEREICH 6.8–7.2 liegen. (d.h. das Medium
sollte eine leichte gelb-rosa Färbung haben). Der pH kann
einfach eingestellt werden, indem das Medium mit leicht
geöffnetem Verschluss für ca. 30 Minuten in einen 5%-8%
CO 2 Inkubator gestellt wird.
Der pH-Wert muss 6,8 - 7,2 betragen.
Für zusätzliche Details über die Verwendung
dieses Produktes, sollte das Labor seine eigenen
Standardverfahren und Protokolle konsultieren, die
spezifisch für den einzelnen medizinischen Service
entwickelt worden und optimiert worden sind.
VERWENDUNG DES CHANG MEDIUM C FUER
PRIMAERKULTUREN: IN SITU METHODEN.
1. Fruchtwasser/Amniofluessigkeit bei niedrigen
Drehzahlen zentrifugieren, um die Zellen zu
konzentrieren.
2. Das Zellpellet in einer kleinen Menge patienteneigener
Fruchtwasser resuspendieren. zB : den Überstand
von 10 ml der zentrifugierten Fruchtwasser bis auf 0,5
ml über dem Zellpellet aspirieren und resuspendieren.
Ausreichend Chang Medium C zu der konzentrierten
Zellsuspension zugeben: 0.5 ml pro Deckglas (maximal
4 Deckgläser) oder 2 ml pro Kulturflasche
3. Kulturen ungestört bei 37°C in 5% CO 2 Atmosphäre
inkubieren.
4. Am 2. Tag die Kulturen mit 2 ml Chang Medium C fluten.
5. Nach 4 bis 5 Tagen sollte das Wachstum der Kulturen
überprüft werden. Die Kulturen sollten gefüttert werden,
sobald sie wachsen. Dazu wird der Zellkulturüberstand
entfernt und durch 2 ml neues Chang Medium C ersetzt.
Danach sollten die Kulturen alle 2 Tage neu gefüttert
werden.
6. Kulturwachstum am oder nach dem 5.Tag überprüfen,
und wenn ausreichend Kulturen vorhanden sind, ernten.
7. Die besten Ergebnisse werden erzielt, wenn am Tag
vor der Ernte nochmals mit Chang Medium C gefüttert
wird.
VERWENDUNG DES CHANG MEDIUM C FUER
PRIMAERKULTUREN: KOLBEN METHODEN.
1. Fruchtwasser bei niedrigen Drehzahlen zentrifugieren,
um die Zellen zu konzentrieren.
2. Das Zellpellet in einer kleinen Menge patienteneigener
Fruchtwasser resuspendieren. zB : den Überstand von
10 ml der zentrifugierten Fruchtwasser bis auf 1 ml über
dem Zellpellet aspirieren und resuspendieren. Fuegen
4 mL von Chang Medium C bis ein Endvolumen von
5mL pro kolben.
3. Kulturen ungestört bei 37°C in 5% CO 2 Atmosphäre
inkubieren.
4. Das Wachstum am 5.Tag überprüfen. Ersetzen mit
neues Chang Medium C, und wenn ausreichend
Kulturen vorhanden sind, ernten.
5. Ueberpruefen das Kulturwachstum, und vollstaendig
aendern das Medium alle zwei Tage danach bis
ITALIANO
SCOPO
Il Chang Medium C può essere usato per le seguenti
applicazioni:
1. colture primarie di cellule di liquido amniotico
2. colture secondarie di cellule di liquido amniotico
3. colture di cellule di midollo osseo
4. tessuto amniotico da villi coriali
QUESTO TERRENO PUO’ ESSERE USATO SIA
IN SISTEMI APERTI (COLTURE EQUILIBRATE IN
ATMOSFERA CON IL 5 % DI CO 2 ) CHE IN SISTEMI
CHIUSI (COLTURE SOTTO FLUSSO CON IL 5% DI CO 2
E INCUBATI IN SUPPORTI CHIUSI ERMETICAMENTE).
Precauzioni: Non usare i componenti del Chang
Medium C dopo la data di scadenza
indicata sull’etichetta.
DESCRIZIONE DEL PRODOTTO
Chang Medium ® C è stato sviluppato per colture primarie
di cellule di fluido amniotico umano per la determinazione
del cariotipo ed altri test genetici prenatali. QUESTA
FORMULA È STATA OTTIMIZZATA SIA PER SISTEMI
APERTI CHE CHIUSI.
ISTRUZIONI PER LA CONSERVAZIONE
Conservare il Chang Medium C Frozen Supplemento al di
sotto del 10°C, il Chang Medium C Supplemento Liofilizzato,
il Chang Medium B Basale e il Chang Medium C completo
(liofilo ricostituito + basale) a 2° - 8° C. Il Chang Medium B
Basale non deve essere congelato.
Proteggere da luce fluorescente.
STABILITÀ
Far riferimento alle etichette dei singoli componenti per
le date di di scadenza specifiche. Il Chang Medium C
completo può essere conservato a 2°- 8° C per 10 giorni
prima dell’uso senza che le prestazioni risultino alterate.
Si raccomanda di non conservare il il CHANG MEDIUM C
Completo a 2-8 °C per più di 10 giorni.
CONCENTRAZIONE DEI COMPONENTI
mg/L
Sale ............................................................................... 7900
Destrosio ....................................................................... 1400
Aminoacidi ..................................................................... 1000
Polipeptidi .......................................................................... 66
Vitamine ............................................................................. 22
Deossiribonucleosidi .........................................................21
Ribonucleosidi ................................................................... 20
Pirovato di Sodio ................................................................ 110
Altri Componenti ................................................................... 8
Ormoni ed Elementi in Tracce .................................... 0.0025
Ormoni Steroidei ......................................................... 0.0013
Siero Bovino Neonatale ................................................ 6% v/v
Siero Bovino Fetale .................................................. 6% v/v
PRECAUZIONI E AVVERTIMENTI
Questo dispositivo è previsto per l’uso da parte di personale
addestrato nelle procedure che comprendono le applicazioni
indicate per le quali il dispositivo è previsto.
PREPARAZIONE PER L’USO
Supplemento Liofilizzato
1. Portare il CHANG MEDIUM C Supplemento Liofilizzato
a temperatura ambiente.
2. Usando supporti sterili, aggiungere 10 mL o 50 mL di
acqua distillata sterile al liofilo. Il flaconcino da 10 mL
è sufficiente per 90 mL di CHANG MEDIUM B Basale;
il flacone da 50 mL è sufficiente per 450mL di Chang
Medium B Basile.
3. Agitare gentilmente il flacone per rendere omogenea
la soluzione (NOTA: Per dissolvere completamente il
Supplemento può essere necessario incubare a 37 °C
per 5-10 minuti).
4. Trasferire in ambiente sterile l’intero contenuto del
flacone di CHANG MEDIUM C Supplemento ricostituito
nel flacone del CHANG Medium Basale.
Uso di CHANG MEDIUM C per colture
primarie:
METODOLOGIE IN SITU
1. Centrifugare il fluido amniotico a bassa velocità per
concentrare le cellule.
2. Risospendere il pellet in una piccola quantità di liquido
amniotico della paziente. Ad esempio, aspirare il
surnatante di 10 mL di liquido amniotico centrifugato
fino a 0.5 mL al di sopra del pellet e risospendere.
Aggiungere alla soluzione concentrata il CHANG
MEDIUM C in modo da ottenere un volume finale di
0.5 mL per cover slip (per un totale di 4 cover slips) o
di 2 mL per fiasca.
3. Incubare le colture a 37 °C in atmosfera al 5% di CO 2 .
4. Al secondo giorno, aggiungere 2 mL di CHANG
MEDIUM C alle colture.
5. Dopo 4 o 5 giorni, controllare la crescita delle colture.
Arricchire le colture non appena si osserva una
crescita rimuovendo il surnatante e sostituendolo con
2 mL di CHANG MEDIUM C fresco. Si raccomanda di
continuare ad arricchire le colture in questo modo ogni
due giorni.
6. Controllare la crescita delle colture dopo 5 giorni e
prelevarle quando si osservano sufficienti colonie.
7. Risultati migliori si ottengono arricchendo con CHANG
MEDIUM C le colture il giorno prima della raccolta.
Uso di CHANG MEDIUM C per colture
primarie:
METODOLOGIE IN FIASCA
1. Centrifugare il fluido amniotico a bassa velocità per
concentrare le cellule.
2. Risospendere il pellet in una piccola quantità di liquido
amniotico della paziente. Ad esempio, aspirare il
surnatante di 10 mL di liquido amniotico centrifugato fino
a 1 mL al di sopra del pellet e risospendere. Aggiungere
4 mL di CHANG MEDIUM C per raggiungere un volume
totale di 5 mL per fiaschetta.
3. Incubare le colture a 37 °C in atmosfera al 5% di CO 2 .
4. Controllare la crescita al 5° giorno . Sostituire il terreno
con CHANG MEDIUM C fresco e raccogliere se si
osserva una sufficiente crescita cellulare.
5. Tenere sotto controllo la crescita e sostituire il terreno
ogni giorno successivo al quinto fino a che le colonie
sono in quantità sufficiente e pronte per la raccolta.
6. I migliori risultati si ottengono con colture arricchite con
CHANG MEDIUM C il giorno prima della raccolta.
NOTA: Per sistemi chiusi, mettere le
fiaschette sotto flusso di aria al 5 % di CO 2
per 20 secondi. Avvitare accuratamente i
tappi delle fiaschette e incubarle a 37 °C
(Si raccomanda di collegare una pipetta
Pasteur sterile e tappata alla fonte di CO 2
per garantire la sterilità del gas entrante).
Uso di CHANG MEDIUM C per colture
secondarie
di liquido amniotico:
Trattare la coltura con tripsina (o pronase ecc.) come nel
caso di cellule in coltura in terreno convenzionale. In ogni
caso il trattamento con proteasi deve essere accuratamente
monitorato. Le cellule del liquido amniotico coltivate nel
terreno CHANG MEDIUM C sono generalmente più sensibili
al trattamento con proteasi di quelle coltivate protease
coltivate in un terreno tradizionale. In ragione di ciò può
essere necessario modificare il protocollo
ASSICURAZIONE DI QUALITÀ

zu ergeben. (ANMERKUNG: Es kann notwendig sein,
die Phiole an 37ºC fuer 5 bis 10 Minuten auszubrüten,
damit vollständig die Ergänzung aufzulösen.
4. Bringen Sie den gesamten Inhalt des wiederhergestellten
Chang Medium C Supplement auf die Flasche von
Chang Medium B basal.
5. Wirbeln Sie die Flasche, damit das Complete Chang
Medium C gruendlich gemischt ist.
6. Fuegen Sie L-Glutamin, 10 mL/L (200 mm). Falls
gewunscht, koennen Sie Antibiotika hinzufuegen.
Gefrorene Ergänzung (Frozen Supplement)
1. Tauen Sie Chang Medium C Frozen Supplement schnell
auf, indem Sie wirbeln die Phiole in einem Wasserbad
37ºC.
2. Bringen Sie den gesamten Inhalt des aufgetauten
CHANG MEDIUM C Supplement auf die Flasche von
Chang Medium B Basal.
3. Wirbeln Sie die Flasche damit das Complete Chang
Medium C gruendlich gemischt ist.
4. Fuegen Sie L-Glutamin, 10 mL/L (200 mm) hinzu. Falls
gewuenscht, Antibiotika koennte auch hinzufuegen.
ALIQUOTEN CHANG MEDIUM C ERGÄNZUNG
Lyophilisierte Ergänzung (Lyophilized
Supplement)
1. Wenn Sie das Complete Chang Medium C nicht
innerhalb 10 Tage verwendet kann, dann koennen
Sie kleinere Menge machen, indem Sie die Verfahren
folgen:
2. Wiederherstellen Sie das Chang Medium C Lyophilized
Supplement.
3. Aseptisch Verteilen Sie es in Aliquots und frieren Sie
sie.
4. Teilen Sie das Chang Medium B Basal in Aliquots aus.
5. Vorbereitung des Complete Chang Medium C: fuegen
Sie ein Aliquot von aufgetautem Chang Medium C
Supplement zu einem Aliquot von Chang Medium B
Basal hinzu.
6. Mischen Sie sie gruendlich.
Gefrorene Ergänzung (Frozen Supplement)
1. Tauen Sie das Chang Medium C Frozen Supplement
2. Aseptisch verteilen Sie es in Aliquots und frieren Sie sie
wieder (ANMERKUNG: Die Supplement Phiole enthaelt
14 mL oder 70 mL. Verteilen Sie es gleichmaessig).
3. Aseptisch teilen Sie Chang Medium B Basal in
entsprechende Aliquots aus.
4. Vorbereitung des Complete Chang Medium C: fuegen
Sie ein Aliquot von aufgetautem Chang Medium C
Supplement zu einem Aliquot von Chang Medium B
Basal hinzu.
5. Mischen Sie sie gruendlich
ausreichende Kulturen vorhanden sind.
6. Die besten Ergebnisse werden erzielt, wenn die
Kulturen vor dem Tag der Ernte mit Chang Medium C
gefüttert wird.
ANMERKUNG: Für geschlossene Systeme spuelen Sie
jede Kulturflasche mit 5% CO 2 - 95% Luft für 20 Sekunden.
Verschliessen Sie die Kappen zu den Kulturflaschen fest
und brüten Sie sie an 37° C. aus (es wird empfohlen, daß
eine sterile verstopfte Pasteur Pipette wird angeschlossen
an die CO 2 -Quelle, um Sterilität des ankommenden Gases
zu sichern).
VERWENDUNG DES CHANG MEDIUM C
FUER ZUECHTUNG DER PASSAGIERTEN
KULTUREN FRUCHTWASSERZELLEN.
Zum Passagieren der Zellen werden die Kulturen mit
Trypsin (oder Pronase, etc.) behandelt. Genau so, als
wären die Zellen in einem konventionellen Medium
gewachsen. Allerdings sollte die Protease Behandlung
sorgfältig beobachtet werden, da Fruchtwasserzellen, die
in Chang Medium C kultiviert wurden, sensitiver reagieren
nach Protease Behandlung als Zellen in konventionellen
Medien. Unter Umständen muss das Protokoll entsprechend
modifiziert werden.
QUALITAETSSICHERUNG
STERILITÄT
Serum für die Produktion von Chang Medium C wurde
auf virale Kontamination nach CFR Title 9 Part 113.53
und Mycoplasma Kontamination getestet. Beide Chang
Medium B Basal und Chang Medium C Supplement
wurde sterilisiert durch Filtration mit einem 0.1µ Filter.
Die Proben von Chang Medium B Basal und Chang
Medium C Supplement sind auf mögliche bakterielle
Kontamination getestet nach dem Sterilitäts Test
Protokoll beschrieben unter Sterilität (durch aktuellen
USP Sterility Test ).
Chang Medium ® ist ein eingetragenes Warenzeichen von
Irvine Scientific.
5. Miscelare accuratamente agitando il flacone.
6. Aggiungere L-Glutamina, 10.0 mL/L (200 mM). Se si
desidera si possono anche aggiungere antibiotici.
Supplemento Congelato
1. Scongelare il CHANG MEDIUM C Supplemento
congelato agitando delicatamente il flacone in un bagno
di acqua a 37°C.
2. Trasferire in ambiente sterile l’intero contenuto
del flacone di CHANG MEDIUM C Supplemento
decongelato nel flacone del CHANG MEDIUM B Basale.
3. Miscelare accuratamente agitando il flacone.
4. Aggiungere L-Glutamina, 10.0 mL/L (200mM). Se si
desidera si possono anche aggiungere antibiotici.
SUDDIVISIONE DEL CHANG C SUPPLEMENTO
IN ALIQUOTE
Supplemento Liofilizzato
Se l’intero flacone di CHANG MEDIUM C Completo non
può essere utilizzato entro 10 giorni è possibile aliquotare
la soluzione seguendo la procedura indicata di seguito:
1. Ricostituire il CHANG MEDIUM C Supplemento
Liofilizzato.
2. Aliquotare in ambiente sterile e congelare.
3. Sempre in ambiente sterile dispensare il CHANG
MEDIUM B Basale nelle aliquote corrispondenti.
4. Per preparare il CHANG MEDIUM C completo,
aggiungere una un’aliquota di CHANG MEDIUM C
Supplemento ad una aliquota di CHANG MEDIUM B
Basale.
6. Mescolare accuratamente.
Supplemento Congelato
1. Scongelare il CHANG MEDIUM C Supplemento
congelato.
2. Aliquotare in ambiente sterile e ricongelare (Nota: Il
flacone del Supplemento contiene 14 mL o 70 mL.
Distribuire equamente.)
3. Sempre in ambiente sterile dispensare il contenuto del
flacone di CHANG MEDIUM B Basale nelle aliquote
corrispondenti.
4. Per preparare il CHANG MEDIUM C completo,
aggiungere ad una aliquota di di CHANG MEDIUM
C Supplemento scongelato una aliquota di CHANG
MEDIUM B Basale.
5. Mescolare accuratamente.
ISTRUZIONI PER L’USO
Il pH DEL TERRENO USATO PER ARRICCHIRE
LE COLTURE DEVE ESSERE FRA 6.8 A 7.2 (IL
TERRENO DEVE ESSERE LEGGERMENTE
GIALLO TENDENTE AL SALMONE). IL pH
PUO’ ESSERE FACILMENTE REGOLATO PONENDO IL
TERRENO IN UN INCUBATORE CON CO 2 AL 5% - 8%
CON IL TAPPO LEGGERMENTE SVITATO.
Il pH finale deve essere fra 6.8 e 7.2.
Per ulteriori dettagli sull’uso di questo prodotto, consultare
le vostre proprie procedure di laboratorio e i protocolli che
sono stati specificatamente sviluppati e ottimizzati per il
vostro individuale programma medicale.
STERILITA’
Il siero usato per la produzione del CHANG MEDIUM C
Supplemento è stato testato per escludere contaminazione
virale seguendo la procedura CFR Titolo 9 Parte 113.53.
Il siero è stato anche testato per determinare eventuali
contaminazioni da micoplasma. ll CHANG MEDIUM B
Basale e il CHANG MEDIUM C Supplemento sono stati
sterilizzati per filtrazione mediante filtro da 0.2 mm e sono
stati testati per escludere eventuale contaminazione
batteriologica seguendo il protocollo delle prove di sterilità
descritto nella corrente test di sterilità USP .
Chang Medium ® è un marchio registrato di Irvine Scientific.

ESPAÑOL
APLICACIÓN
El Chang Medium C se puede utilizar en las siguientes
aplicaciones:
1. Cultivo primario de células de líquido amniótico.
2. Cultivo de células del líquido amniótico derivadas
del cultivo primario.
3. Cultivo de células de médula ósea.
4. Tejido amniótico sólido obtenido de vellosidades
coriónicas.
ESTE MEDIO HA SIDO DISEÑADO PARA SER
UTILIZADO TANTO EN INCUBADORES DE CO 2
(CULTIVOS EQUILIBRADOS EN UNA ATMOSFERA
CON 5% CO 2 ) COMO EN SISTEMAS DE CULTIVO
CERRADO (CULTIVOS PERFUNDIDOS CON 5% DE
CO 2 E INCUBADOS EN FRASCOS HERMÉTICAMENTE
CERRADOS.
Precaución: No use los componentes del Chang Medium
C después de la fecha de caducidad indicada
en las distintas etiquetas individuales.
DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO
Chang Medium ® C es un medio desarrollado para
el cultivo primario de células humanas de líquido
amniótico, para análisis de cariotipo y otras pruebas
genéticas de diagnóstico prenatal. ESTA FORMULA
SE HA OPTIMIZADA PARA TRABAJAR TANTO
EN SISTEMAS ABIERTOS COMO CERRADOS.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Conservar el Suplemento Congelado del Chang Medium C
por debajo de -10°C, el Suplemento Liofilizado del Chang
Medium C entre 2°C y 8°C, el Chang Medium B Basal
entre 2°C y 8°C, y el Chang Medium C completo entre 2°C
y 8°C. El Chang Medium B Basal no se debe congelar.
Proteger este producto de la luz fluorescente.
Compruebe las etiquetas individuales de cada botella
para ver las fechas de caducidad específicas de
cada componente. El Chang Medium C Completo
se puede conservar refrigerado entre 2ºC y 8ºC un
máximo de 10 días sin que ello altere su funcionalidad.
No se recomienda almacenarlo más de 10 días.
NO CONGELE EL CHANG MEDIUM C COMPLETO.
COMPONENTES
mg/L
Sales...............................................................7900
Dextrosa..........................................................1400
Aminoácidos....................................................1000
Polipéptidos.........................................................66
Vitaminas.............................................................22
Desoxirribonucleósidos........................................21
Ribonucleósidos..................................................20
Piruvato de Sodio...............................................110
Otros Componentes...............................................8
Hormonas y otros elementos traza................0.0025
Hormonas Esteroides....................................0.0013
Suero de ternera recién nacida.....................6% v/v
Suero fetal de ternera...................................6% v/v
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS
Este dispositivo debe ser utilizado por personal
capacitado en procedimientos que incluyan la aplicación
prevista para el mismo.
PREPARACIÓN DEL PRODUCTO
Suplemento liofilizado
1. Dejar equilibrar a temperatura ambiente el
Suplemento Liofilizado del Chang Medium C.
2. Utilizando condiciones asépticas, añadir 10 mL o 50 mL
de agua destilada estéril al liofilizado. El vial de 10 mL
es para el Chang Medium B Basal de 90 mL; el vial de
50 mL es para el Chang Medium B Basal de 450 mL.
3. Remueva suavemente el vial para facilitar
la completa disolución (NOTA: puede ser
necesario calentar el vial 5 minutos a 37ºC
Utilización de Chang Medium C en cultivos
primarios: Metodología In Situ
1. Centrifugar el líquido amniótico a baja velocidad para
concentrar las células.
2. Resuspender el precipitado de células en un volumen
pequeño del propio líquido amniótico de la paciente. Por
ejemplo, aspirar el sobrenadante de 10 mL dejando 0.5
mL de líquido, y resuspender. Añadir suficiente Chang
Medium C a la suspensión concentrada de células
para alcanzar un volumen de cultivo final de 0.5 mL por
cubre-objetos (un total de 4 cubre-objetos por muestra),
o 2 mL por frasco.
3. Sin perturbarlos, incubar los cultivos a 37°C en una
atmósfera de 5% CO 2 .
4. Realimentar los cultivos en el día 2 añadiendo 2 mL de
Chang Medium C.
5. A los 4 o 5 días, comprobar el crecimiento en los
cultivos. Una vez que se observe crecimiento, aspirar
todo el medio de cultivo y añadir 2 mL de Chang Medium
C fresco. A partir de este momento, es recomendable
cambiar el medio de los cultivos cada 2 días.
6. Comprobar el crecimiento de los cultivos durante o
después del quinto día, y sacrificar cuando se observe
que hay suficientes colonias.
7. Se obtienen mejores resultados cuando se realiza un
cambio de medio con Chang Medium D el día anterior
al sacrificio.
Utilización de Chang Medium C en cultivos
primarios: Metodología en frasco.
1. Centrifugar el líquido amniótico a baja velocidad para
concentrar las células.
2. Resuspender el precipitado celular en un volumen
pequeño del propio líquido amniótico de la paciente.
Por ejemplo, aspirar el sobrenadante de 10 mL dejando
1 mL de líquido y resuspender. Añadir 4 mL de Chang
Medium C para obtener un volumen total de 5 mL por
frasco.
3. Sin perturbarlos, incubar los cultivos a 37°C en una
atmósfera de 5% CO 2 .
4. Revisar el crecimiento en el día 5. Cambiar el medio
por Chang Medium C fresco y sacrificar el cultivo si
observa un crecimiento suficiente .
5. Comprobar el crecimiento de los cultivos y cambiar
completamente el medio cada día de aquí en adelante,
hasta observar un número suficiente de colonias para
sacrificar.
6. Se obtienen mejores resultados cuando se realiza un
cambio de medio con Chang Medium C el día anterior
al sacrificio.
NOTA: para sistemas cerrados, inyecte cada
frasco de cultivo con una mezcla de 5%
CO 2 – 95% aire durante 20 segundos. Cierre
herméticamente los frascos e incúbelos a
37ºC . (Se recomienda unir una pipeta pasteur
estéril a la fuente de CO 2 para garantizar la
esterilidad del gas que se inyecta en el medio
de cultivo).
UTILIZACIÓN DE CHANG MEDIUM C EN
EL CULTIVO DE CÉLULAS DEL LÍQUIDO
AMNIÓTICO DERIVADAS DE CULTIVO
PRIMARIO.
Para realizar pases de los amniocitos cultivados, tratar
los cultivos con tripsina ( o pronasa, etc.) como se tratan
normalmente las células en un medio convencional.
Es conveniente monitorizar los cultivos al tratarlos
con proteasas. Los amniocitos cultivados en Medio
Chang C tienden a ser más sensibles al tratamiento con
FRANÇAIS
UTILISATION
Le milieu Chang C peut être utilisé pour les applications
suivantes :
1. La culture primaire des cellules du liquide
amniotique.
2. Le repiquage des cellules du liquide amniotique.
3. La culture des cellules de la moelle osseuse.
4. La culture des tissus des prélèvements de villosités
choriales.
CE MILIEU A ETE CONCU POUR UNE UTILISATION
DANS DES SYSTEMES DE CULTURE AUSSI BIEN
OUVERTS (CULTURES EQUILIBREES EN ATMOSPHERE
CO 2 5%) QUE FERMES (CULTURES INNONDEES AVEC
5% CO 2 ET INCUBEES AVEC LES RECIPIENTS DE
CULTURE HERMETIQUEMENT FERMES).
Attention: Ne pas utiliser les composantes du milieu
Chang C au-delà des dates d’expirations
figurant sur leurs étiquettes individuelles.
PRODUCT DESCRIPTION
Le milieu Chang ® C a été développé pour la culture
primaire de cellules amniotiques humaines utilisées pour
les caryotypes et autres tests de diagnostic génétique
anténatal. Cette formule a été optimisée pour les
systèmes ouverts et fermés.
CONSERVATION ET STABILITÉ
Conserver le supplément congelé du milieu Chang C audessous
de 10°C. Le supplément lyophilisé, le milieu de
base Chang B et le milieu complet Chang C doivent être
conservés entre 2° et 8°C. Le milieu de base Chang B ne
doit pas être congelé.
Protéger de la lumière fluorescente.
Pour les dates d’expirations, se conférer aux indications sur
les flacons des différentes composantes. Le milieu complet
Chang C peut être conservé entre 2° et 4°C pendant 10
jours avant son utilisation sans que ses fonctions soient
affectées. La conservation au-delà de 10 jours est non
recommandée.
COMPOSANTS
mg/L
Sels.................................................................7900
Dextrose..........................................................1400
Acides aminés........................................................1000
Polypeptides...............................................................66
Vitamines...................................................................22
Désoxyribonucléotides...............................................21
Ribonucléotides..........................................................20
Pyruvate de sodium..................................................110
Autres composants.......................................................8
Hormones et autres éléments traces..................0.0025
Hormones stéroïdes............................................0.0013
Sérum de veau nouveau-né................................6% v/v
Sérum de veau fœtal..........................................6% v/v
PRÉCAUTION ET MISE EN GARDE
Ce dispositif est destiné à une utilisation par un personnel
formé aux procédures comprenant l’application indiquée
pour laquelle le dispositif est destiné.
PRÉPARATION
Supplément lyophilisé
1. Permettre au supplément lyophilisé Chang C de
s’équilibrer à température ambiante.
2. Ajouter stérilement 10ml (correspondants aux
flacons 90ml du milieu de base Chang B) ou 50 ml
(correspondants aux flacons 450ml du milieu de base
Chang B) d’eau distillée stérile.
3. Tourner les tubes doucement pour affecter la solution
complète. (Remarque : il serait peut être nécessaire
d’incuber les flacons à 37°C pendant 5 à 10 minutes
pour dissoudre complètement le supplément).
4. Transférer stérilement le contenu du supplément Chang
C reconstitué flacons de milieu de base Chang B.
UTILISATION DU MILIEU CHANG C POUR
CULTURES PRIMAIRES : METHODE IN SITU
1. Centrifuger le liquide amniotique à faible vitesse pour
concentrer les cellules.
2. Resuspendre le culot cellulaire dans un petit volume
du liquide amniotique de la patiente. Par exemple,
aspirer le surnageant obtenu en centrifugeant 10 ml
de liquide amniotique et suspendre le culot dans 0,5
ml de ce liquide. Ajouter suffisamment de milieu Chang
C à la suspension concentrée des cellules pour obtenir
un volume final nécessaire pour 4 lamelles (0,5 ml par
lamelle) ou 2 ml par petit flacon de culture.
3. Incuber les cultures sans agitation à 37°C en
atmosphère 5% CO 2 .
4. Alimenter les cellules au deuxième jour en ajoutant 2
ml de milieu Chang C.
5. Après 4 à 5 jours, la croissance doit être examinée.
Dès que des foyers ont été observés, les cultures
doivent être alimentées en enlevant le surnageant et
en le remplaçant par 2 ml de milieu Chang C frais. Il
est ensuite recommandé d’alimenter les cultures tous
les deux jours.
6. Examiner la croissance des cultures au/après
le cinquième jour, récolter les cellules lorsque
suffisamment de colonies ont été observées.
7. Les meilleurs résultats sont obtenus lorsque les cultures
sont alimentées la veille de la récolte avec du milieu
Chang C frais.
UTILISATION DU MILIEU CHANG C POUR
CULTURES PRIMAIRES : METHODE EN
FLACON
1. Centrifuger le liquide amniotique à faible vitesse pour
concentrer les cellules.
2. Resuspendre le culot cellulaire dans un petit volume
du liquide amniotique de la patiente. Par exemple,
aspirer le surnageant obtenu en centrifugeant 10 ml
de liquide amniotique et suspendre le culot dans 1
ml de ce liquide. Ajouter 4 ml de milieu Chang C à la
suspension concentrée des cellules un volume final de
5 ml par flacon de culture.
3. Incuber les cultures sans agitation à 37°C en
atmosphère 5% CO 2 .
4. Examiner la croissance au cinquième jour. Changer le
milieu avec du milieu Chang C frais. Récolter les cellules
si la croissance est suffisante.
5. Examiner la croissance et changer complètement le
milieu tous les deux jours ou jusqu’à ce que le nombre
des colonies soit suffisant pour la récolte.
6. Les meilleurs résultats sont obtenus lorsque les cultures
sont alimentées la veille de la récolte avec du milieu
Chang C frais.
Remarque : Pour les systèmes fermés inonder chaque
flacon de culture avec 5% CO 2 et 95% air pendant 20
secondes. Bien visser les bouchons des flacons et incuber
à 37°C. (Il est recommandé qu’une pipette pasteur, bouchée
avec du coton et stérile, soit attaché à la source de CO 2 pour
s’assurer de la stérilité du gaz allant dans la boite de culture).
UTILISATION DU MILIEU CHANG C POUR
LE REPIQUAGE DES CELLULES DU LIQUIDE
AMNIOTIQUE
Pour repiquer les cellules, traiter les cultures avec
la trypsine (ou pronase, etc.) comme vous le faites
normalement lorsque les cellules poussent dans un
milieu conventionnel. Cependant, le traitement avec des
protéases doit être conduit prudemment. Les cellules du
liquide amniotique qui poussent dans le milieu Chang C ont
tendance à être plus sensibles que celles qui poussent dans

para disolver completamente el suplemento).
4. Tr a n s f e r i r a s é p t i c a m e n t e e l c o n t e n i d o
c o m p l e t o d e l S u p l e m e n t o r e c o n s t i t u i d o
a la botella de Chang Medium B Basal.
5. Mezclar el Chang Medium C Completo removiendo
bien la botella.
6. Añadir L-Glutamina, 10 mL/L (200mM). Si se desea,
se puede añadir antibióticos.
Suplemento congelado
1. Descongelar el Suplemento Congelado del Chang
Medium C agitando rápidamente el vial en un baño a
37ºC.
2. Transferir asépticamente el contenido completo del
Suplemento descongelado a la botella de Chang
Medium B Basal.
3. Mezclar el Chang Medium C Completo removiendo bien
la botella.
4. Añadir L-Glutamina 10 mL/L (200mM). Si se desea, se
puede añadir antibióticos.
PREPARACIÓN DE ALÍCUOTAS DE
SUPLEMENTO
DEL CHANG MEDIUM C
Suplemento liofilizado
Si no se va a utilizar el Chang Medium C Completo en un
período de 10 días es conveniente preparar cantidades
más pequeñas de medio siguiendo el siguiente protocolo:
1. Reconstituir el Suplemento Liofilizado del Chang
Medium C.
2. En condiciones asépticas, repartir el suplemento en
alícuotas de un tamaño adecuado y congelarlas.
3. También en condiciones de asepsia, dispensar el Chang
Medium B Basal en el mismo número de alícuotas.
4. Para preparar el Chang Medium C Completo, añadir
una alícuota descongelada de Suplemento de Chang
Medium C a una alícuota de Chang Medium B Basal.
5. Mezclar bien.
Suplemento congelado
1. Descongelar el Suplemento Congelado del Chang
Medium C.
2. En condiciones asépticas, repartir el suplemento en
alícuotas de un tamaño adecuado y congelarlas (NOTA:
el vial de suplemento contiene 14 mL o 70 mL. Distribuir
uniformemente).
3. Tambien en condiciones de asepsia, dispensar el Chang
Medium B Basal en el mismo número de alícuotas.
4. Para preparar el Chang Medium C Completo, añadir
una alícuota descongelada de Suplemento de Chang
Medium C a una alícuota de Chang Medium B Basal.
5. Mezclar bien.
INSTRUCCIONES DE USO
El pH usado de los medios debe estar entre
6.8 y 7.2 (el medio debe ser de color ligeramente
asalmonado). El pH puede ajustarse fácilmente poniendo
el medio en un incubador al 5% a 8% CO 2 , con el tapón
ligeramente desenroscado durante unos 30 minutos.
El pH final debe ser de 6.8 a 7.2.
Para más detalles sobre la utilización de este producto,
consulte los protocolos de trabajo de su propio laboratorio,
los cuales han sido desarrollados y especialmente
optimizados de acuerdo a su programa médico particular.
proteasas que los cultivados en medios convencionales.
Es recomendable controlar el proceso para reajustar el
protocolo en caso que sea necesario.
CONTROL DE CALIDAD
ESTERILIDAD
El suero usado en la producción de Chang Medium C
se ha testado para contaminación viral de acuerdo a la
normativa CFR capítulo 9, apartado 113.53. Asimismo,
se ha comprobado la contaminación por Micoplasma.
El Suplemento del Chang Medium C y el Chang
Medium B Basal están esterilizados por filtración en
filtros de 0.2 micras. Muestras representativas del
Chang Medium B Basal y del Suplemento del Chang
Medium C son testadas para posibles contaminaciones
bacteriológicas siguiendo los protocolos de esterilidad
descritos en el test de esterilidad USP actual.
Chang Medium ® es una marca registrada de Irvine Scientific.
5. Bien mélanger le milieu Chang C complet en agitant
les flacons.
6. Ajouter du L-Glutamine, 10mg/l (200mM) et les
antibiotiques.
Supplément congelé
1. Décongeler le supplément congelé Chang C rapidement
en agitant le flacon dans un bain marie à 37°C.
2. Transférer stérilement le contenu du flacon du
supplément Chang C au flacon du milieu de base Chang
B.
3. Bien mélanger le milieu complet Chang C en agitant le
flacon.
4. Ajouter du L-Glutamine, 10mg/l (200mM) et les
antibiotiques.
PRÉPARATION D’ALIQUOTES DU
SUPPLÉMENT CHANG C
Supplément lyophilisé
Si vous n’êtes pas prêt à utiliser la totalité du milieu complet
Chang C dans les 10 jours, vous pourriez le répartir en
petites quantités en suivant le protocole qui suit :
1. Reconstituer le supplément lyophilisé Chang C.
2. Répartir stérilement en plusieurs petits volumes à votre
convenance et congeler.
3. Répartir stérilement le milieu de base Chang B en un
nombre égale de petits volumes.
4. Préparer le milieu complet Chang C en ajoutant une
aliquote du supplément Chang C décongelé à un
aliquote du milieu de base Chang B.
5. Bien mélanger.
Supplément congelé
1. Décongeler le supplément congelé Chang C.
2. Répartir stérilement en plusieurs petits volumes à
votre convenance et congeler. (Remarque : le flacon
du supplément contient soit 14ml soit 70ml. Répartir
équitablement)
3. Répartir stérilement le milieu de base Chang B en un
nombre égale de petits volumes.
4. Préparer le milieu complet Chang C en ajoutant une
aliquote du supplément Chang C décongelé à un
aliquote du milieu de base Chang B.
5. Bien mélanger
CONSEILS D’UTILISATION
Le pH du milieu utilise pour alimenter les
cellules doit etre entre 6,8 et 7,2 (le milieu doit
être légèrement de couleur jaunâtre-saumon). Le pH peut
facilement être ajusté en plaçant les flacons du milieu dans
une étuve à CO 2 (5 à 8%), le bouchon légèrement dévissé.
Le pH final doit être entre 6,8 et 7,2.
Pour plus de détails sur l’utilisation de ce produit, chaque
laboratoire doit consulter ses propres procédures et
protocoles spécialement développés et optimisés pour
chaque indication médicale particulière.
un milieu traditionnel. Il est nécessaire d’en tenir compte
dans votre protocole.
ASSURANCE QUALITÉ
STÉRILITÉ
Le sérum utilisée dans la fabrication du supplément
Chang C a été testé pour les contaminations virales
selon le code des régulations fédérales CFR Title 9 Part
113.53. Il a été aussi testé pour les contaminations par
mycoplasme. Le milieu de base Chang B et le supplément
lyophilisé Chang C sont stérilisés par filtration avec des
filtres de 0,2 µm. Des échantillons du milieu de base
Chang B et du supplément Chang C sont testés pour une
éventuelle contamination bactérienne selon les protocoles
des tests de stérilité courants de la pharmacopée
américaine (USP) .
Milieu Chang ® est une marque déposée de Irvine Scientific.

PORTUGUÊS
UTILIZAÇÃO PREVISTA
O Chang Medium C pode ser utilizado nas seguintes
aplicações:
1. Cultura primária de células de líquido amniótico.
2. Cultura de células do líquido amniótico derivadas
da cultura primária.
3. Cultura de células de medula óssea.
4. Tecido amniótico sólido obtido de amostras de
vilosidades coriónicas.
ESTE MEIO FOI CONCEBIDO PARA SER UTILIZADO
EM SISTEMAS ABERTOS (CULTURAS EQUILIBRADAS
NUMA ATMOSFERA COM 5% - 8% CO 2 ) E EM SISTEMAS
DE CULTURA FECHADOS (CULTURAS PERFUNDIDAS
COM 5% DE CO 2 E INCUBADAS EM RECIPIENTES
HERMÉTICAMENTE FECHADOS).
Atenção: Não utilizar componentes do Chang Medium
C depois da data de expiração indicada
individualmente em cada rótulo.
DESCRIÇÃO DO PRODUTO
O Chang Medium ® C foi desenvolvido para a cultura
primária de células humanas de líquido amniótico,
para análises de cariótipo e outras provas genéticas
de diagnóstico pré-natal. ESTA FÓRMULA ESTÁ
OPTIMIZADA PARA SISTEMAS ABERTOS E FECHADOS.
ESTABILIDADE E CONSERVAÇÃO
Conservar o Suplemento Congelado Chang Medium C
inferior a -10°C. O Suplemento Liofilizado Chang Medium C
entre 2ºC – 8ºC. O Chang Medium B Basal entre 2ºC – 8ºC,
e o Chang Medium C Completo entre 2ºC – 8ºC. O Chang
Medium B Basal não pode ser congelado.
Proteger este produto da luz fluorescente.
Verifique os rótulos individuais de cada recipiente para ver
o prazo de validade específico de cada componente. O
Chang Medium C Completo pode conservar-se refrigerado
entre 2ºC e 8ºC no máximo de 10 dias sem que isso altere a
sua funcionalidade. Não se recomenda o armazenamento
por mais de 10 dias.
COMPONENTES
mg/L
Sais .................................................................... 7900
Dextrose ............................................................. 1400
Aminoácidos ....................................................... 1000
Polipéptidos ............................................................ 66
Vitaminas ............................................................... 22
Desoxirribonucleósidos ........................................... 21
Ribonucleósidos ..................................................... 20
Piruvato de Sodio ................................................. 110
Outros Componentes ............................................... 8
Hormonas e traços de outros elementos .......... 0.0025
Hormonas Esteróides .......................................0.0013
Soro Vitelo Recém Nascido ............................. 6% v/v
Soro Bovino Fetal ............................................ 6% v/v
PRECAUÇÕES E AVISOS
Este dispositivo deve ser utilizado por funcionários
treinados em procedimentos aos quais se destina.
PREPARAÇÃO PARA UTILIZAÇÃO
Suplemento liofilizado
1. Deixar equilibrar à temperatura ambiente o Suplemento
Liofilizado do Chang Medium C.
2. Utilizando condições estéreis, adicionar 10 mL ou 50
mL de água destilada estéril ao liofilizado. O recipiente
de 10 mL é para o Chang Medium B Basal de 90 mL; o
recipiente de 50 mL é para o Chang Medium B Basal
de 450 mL.
3. Agitar o recipiente suavemente para facilitar a
completa dissolução (NOTA: pode ser necessário
aquecer o recipiente 5 minutos a 37ºC para dissolver
completamente o suplemento).
4. Transferir esterilmente o conteúdo completo do
Suplemento Chang Medium C reconstituído no
Utilização de Chang Medium C em culturas
primárias: Metodologia In Situ.
1. Centrifugar o líquido amniótico a baixa velocidade para
concentrar as células.
2. Ressuspender o precipitado de células num volume
pequeno do próprio líquido amniótico do doente. Por
exemplo, aspirar o sobrenadante de 10 mL deixando
0.5 mL de líquido, e ressuspender. Adicionar suficiente
Chang Medium C à suspensão concentrada de células
para alcançar um volume de cultura final de 0.5 mL por
lamela (num total de 4 lamelas), ou 2 mL por recipiente.
3. Sem perturbar, incubar as culturas a 37°C numa
atmosfera de 5% - 8% CO 2 .
4. No dia 2 de cultura, adicionar 2 mL de Chang Medium
C.
5. Após 4 ou 5 dias, comprovar o crescimento das culturas.
Uma vez que se observe crescimento, aspirar todo o
meio de cultura e adicionar 2 mL de Chang Medium C
fresco. A partir deste momento, é recomendável mudar
o meio de cultura de 2 em 2 dias.
6. Verificar o crescimento das culturas durante ou depois
do quinto dia, e colher quando se observem números
suficientes de colónias.
7. Obtém-se melhores resultados quando se muda o meio
com Chang Medium C no dia anterior à colheita.
Utilização de Chang Medium C em culturas
primárias: Metodologia em recipiente.
1. Centrifugar o líquido amniótico a baixa velocidade para
concentrar as células.
2. Ressuspender o precipitado de células num volume
pequeno do próprio líquido amniótico do doente. Por
exemplo, aspirar o sobrenadante de 10 mL deixando
1 mL de líquido e ressuspender. Adicionar 4 mL de
Chang Medium C para obter um volume total de 5 mL
por recipiente.
3. Sem perturbar, incubar as culturas a 37°C numa
atmosfera de 5% - 8% CO 2 .
4. Verificar o crescimento ao dia 5. Mudar o meio por
Chang Medium C fresco e colher a cultura se observar
um crescimento suficiente .
5. Verificar o crescimento das culturas e mudar
completamente o meio todos os dias daqui para a
frente até observar um número suficiente de colónias
para colheita.
6. Obtém-se melhores resultados quando se muda o meio
com Chang Medium C no dia anterior à colheita.
NOTA: para sistemas fechados, injecte cada recipiente
de cultura com uma mistura de 5% CO 2 – 95% ar durante
20 segundos. Feche hermeticamente os recipientes e
incube-os a 37ºC . (Recomenda-se a utilização de um pipeta
Pasteur estéril na fonte de CO 2 para garantir a esterilidade
do gás que se injecta no meio de cultura).
UTILIZAÇÃO DE CHANG MEDIUM C NA
CULTURA DE CÉLULAS DO LÍQUIDO
AMNIÓTICO DERIVADAS DE CULTURAS
PRIMÁRIAS.
Para passar as células cultivadas, tratar as culturas com
tripsina (ou pronase, etc.) tal como se tratam normalmente
as células num meio convencional. Contudo, o tratamento
com pronase deve ser monitorizado cuidadosamente. Os
amniócitos cultivados em Meio Chang C tendem a ser mais
sensíveis ao tratamento con proteases que os cultivados em
meios convencionais. Tendo este aspecto em conta, pode
ser por vezes necessário reajustar o protocolo.
CONTROLO DE QUALIDADE
ΕΛΛΗΝΙΚΆ
ΕΠΙΔΙΩΚΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗ
Το Chang Medium C μπορεί να χρησιμοποιηθεί στις
παρακάτω εφαρμογές:
1. την πρωτογενή καλλιέργεια κυττάρων αμνιακού
υγρού
2. την ανάπτυξη κυττάρων διόδου αμνιακού υγρού
3. την καλλιέργεια κυττάρων μυελού των οστών
4. την δειγματοληψία συμπαγούς ιστού αμνίου από
χοριακές λάχνες
ΤΟ ΜΕΣΟ ΕΧΕΙ ΣΧΕΔΙΑΣΤΕΙ ΓΙΑ ΧΡΗΣΗ ΣΕ ΑΝΟΙΚΤΑ
(ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΣ ΙΣΟΡΡΟΠΗΜΕΝΕΣ ΜΕ ΑΤΜΟΣΦΑΙΡΑ
5% CO 2 ) ΚΑΙ ΚΛΕΙΣΤΑ ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ
(ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΕΣ ΓΕΜΙΣΜΕΝΕΣ ΜΕ 5% CO 2 ΚΑΙ
ΕΠΩΑΣΜΕΝΕΣ ΜΕ ΤΑ ΔΟΧΕΙΑ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΣΦΙΧΤΑ
ΚΛΕΙΣΤΑ).
Προσοχή: Μην χρησιμοποιείτε τα συστατικά του Chang
Medium C πέρα από την ημερομηνία λήξης
που αναγράφεται στις ξεχωριστές ετικέτες.
ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣ
Το Chang Medium ® C δημιουργήθηκε για την
πρωτογενή καλλιέργεια ανθρώπινων κυττάρων αμνιακού
υγρού για χρήση σε καρυοτυποποίηση και άλλες
προγεννητικές γενετικές εξετάσεις. ΑΥΤΗ Η ΣΥΝΘΕΣΗ
ΕΧΕΙ ΒΕΛΤΙΣΤΟΠΟΙΗΘΕΙ ΓΙΑ ΑΝΟΙΚΤΑ ΚΑΙ ΚΛΕΙΣΤΑ
ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ.
ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ
Φυλάσσετε το Chang Medium C Κατεψυγμένα συμπλήρωμα
σε θερμοκρασία κάτω των 10°C, το Chang Medium C
Λυοφιλοποιημένο Συμπλήρωμα στους 2°C έως 8°C, το
Chang Medium B Βασικό στους 2°C έως 8°C, και το πλήρες
Chang Medium C στους 2°C έως 8°C. Το Chang Medium
B Βασικό δεν πρέπει να ψύχεται.
Προστατεύστε από φθορίζον φως.
ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑ
Βλ. ξεχωριστές ετικέτες φιαλών για συγκεκριμένες
ημερομηνίες λήξης. Το πλήρες Chang Medium C μπορεί να
φυλαχτεί στους 2οC έως 8οC για 10 μέρες πριν τη χρήση,
χωρίς να επηρεαστεί η λειτουργία του. Δεν συστήνεται η
φύλαξη για διάστημα μεγαλύτερο των 10 ημερών.
ΜΗΝ ΚΑΤΑΨΥΧΕΤΕ ΤΟ ΠΛΗΡΕΣ CHANG MEDIUM C.
ΣΥΣΤΑΤΙΚΑ
mg/L
Άλατα............................................................................7900
Δεξτρόζη........................................................................1400
Αμινοξέα........................................................................1000
Πολυπεπτίδια...................................................................66
Βιταμίνες...........................................................................22
Δεοξυριβονουκλεοζίτες.....................................................21
Ριβονουκλεοζίτες ..............................................................20
Πυροσταφιλικό Νάτριο....................................................110
Λοιπά Συστατικά.................................................................8
Ορμόνες και Ιχνοστοιχεία..........................................0.0025
Στεροειδείς Ορμόνες..................................................0.0013
Ορός Νεογέννητου Μοσχαριού..................................6% v/v
Ορός Εμβρυϊκού Βοοειδούς ......................................6% v/v
ΔΙΑΣΦΑΛΙΣΗ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ
Η συσκευή αυτή προορίζεται για χρήση από προσωπικό
που έχει εκπαιδευτεί σε διαδικασίες που περιλαμβάνουν
τη συγκεκριμένη εφαρμογή για την οποία προορίζεται
η συσκευή.
ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΓΙΑ ΧΡΗΣΗ
Λυοφιλοποιημένο Συμπλήρωμα
1. Αφήστε το Chang Medium C Λυοφιλοποιημένο
Συμπλήρωμα να ισορροπήσει σε θερμοκρασία
δωματίου.
2. Ακολουθώντας ασηπτικές τεχνικές, προσθέστε 10 mL
ή 50 mL αποστειρωμένου, απεσταγμένο νερού στο
λυoφιλοποιημένο. Το φιαλίδιο των 10 mL είναι για 90
mL Chang Medium B Βασικό και το φιαλίδιο των 50
mL για 450 mL Chang Medium B Βασικό.
ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣ
ΤΟ pH ΤΟΥ ΜΕΣΟΥ ΠΟΥ ΧΡΗΣΙΜΟΠΟΙΕΙΤΑΙ
ΓΙΑ ΤΡΟΦΗ ΤΩΝ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΩΝ ΠΡΕΠΕΙ
ΝΑ ΕΙΝΑΙ 6.8 - 7.2 (δηλαδή το μέσο θα πρέπει να
έχει ελαφρώς κίτρινο χρώμα σολομού). Το pH μπορεί
να προσαρμοστεί εύκολα, τοποθετώντας το μέσο σε
επωαστήρα 5% - 8% CO2 με το πώμα ελαφρώς χαλαρό.
Το τελικό pH πρέπει να είναι 6.8 - 7.2.
Για επιπρόσθετα στοιχεία σχετικά με τη χρήση αυτών των
προϊόντων, κάθε εργαστήριο θα πρέπει να συμβουλεύεται
τις δικές του εργαστηριακές διαδικασίες και τα πρωτόκολλα
που έχουν αναπτυχθεί και βελτιστοποιηθεί συγκεκριμένα
για το δικό σας ιατρικό πρόγραμμα.
Χρήση Chang Medium C για Κύριες
Καλλιέργειες: In Situ Μεθοδολογίες
1. Υποβάλλετε σε φυγόκεντρο το αμνιακό υγρό, σε χαμηλή
ταχύτητα, για συμπύκνωση των κυττάρων.
2. Ανα-αιωρείστε το κυτταρικό συσσωμάτωμα σε
μικρό όγκο του αμνιακού υγρού της ασθενούς. Για
παράδειγμα, αναρροφήστε το υπερκείμενο υγρό
των 10 mL από νηματοποιημένο αμνιακό υγρό σε
0.5 mL πάνω από το κυτταρικό συσσωμάτωμα και
ανα-αιωρείστε. Προσθέστε επαρκές Chang Medium
C στο συμπυκνωμένο κυτταρικό αιώρημα ώστε να
έχετε τελικό όγκο καλλιέργειας 0.5 mL ανά καλυπτρίδα
(σύνολο 4 καλυπτρίδες) ή 2 mL ανά φιαλίδιο.
3. Επωάστε τις καλλιέργειες αδιατάρακτες σε
θερμοκρασία 37ο C 5% CO 2 ατμόσφαιρα.
4. Γεμίστε τις καλλιέργειες την 2η ημέρα, προσθέτοντας
2 mL Chang Medium C.
5. Μετά από 4 έως 5 ημέρες, ελέγξτε την ανάπτυξη
των καλλιεργειών. Οι καλλιέργειες πρέπει να
τρέφονται αφού παρατηρηθεί ανάπτυξη. Θρέψτε τις
καλλιέργειες αφαιρώντας όλο το υπερκείμενο υγρό και
αντικαθιστώντας με 2 mL φρέσκο Chang Medium C.
Συστήνεται οι καλλιέργειες να τρέφονται κάθε 2 ημέρες
μετά από αυτό το σημείο.
6. Ελέγξετε την ανάπτυξη των καλλιεργειών την / μετά την
5η ημέρα και συλλέξτε όταν παρατηρηθούν επαρκείς
αποικίες.
7. Τα καλύτερα αποτελέσματα λαμβάνονται όταν οι
καλλιέργειες τρέφονται με Chang Medium C την ημέρα
πριν τη συλλογή.
Χρήση Chang Medium C για Πρωτογενείς
Καλλιέργειες: Μεθοδολογίες Προχοϊδών
1. Υποβάλλετε σε φυγόκεντρο το αμνιακό υγρό σε χαμηλή
ταχύτητα, για συμπύκνωση των κυττάρων.
2. Ανα-αιωρείστε το κυτταρικό συσσωμάτωμα σε
μικρό όγκο του αμνιακού υγρού της ασθενούς. Για
παράδειγμα, αναρροφήστε το υπερκείμενο υγρό των 10
mL από νηματοποιημένο αμνιακό υγρό σε 1 mL πάνω
από το κυτταρικό συσσωμάτωμα και ανα-αιωρείστε.
Προσθέστε 4 mL από Chang Medium C για συνολικό
όγκο 5 mL ανά φιαλίδιο.
3. Επωάστε τις καλλιέργειες αδιατάρακτες στους 37°C
5% CO 2 ατμόσφαιρα.
4. Ελέγξτε την ανάπτυξη την 5η ημέρα. Αλλάξτε το μέσο με
φρέσκο Chang Medium C και συλλέξτε αν παρατηρείται
επαρκής κυτταρική ανάπτυξη.
5. Ελέγξτε την ανάπτυξη στις καλλιέργειες και αλλάξτε
πλήρως το μέσο μέρα παρά μέρα, μέχρι να
παρατηρηθούν επαρκείς αποικίες και να είναι έτοιμες
για συλλογή.
6. Τα καλύτερα αποτελέσματα λαμβάνονται όταν οι
καλλιέργειες τρέφονται με Chang Medium C την ημέρα

ecipiente do Chang Medium B Basal.
5. Misturar bem o Chang Medium C Completo agitando
bem o recipiente.
6. Adicionar L-Glutamina, 10 mL/L (200mM). Se desejar,
pode adicionar antibióticos.
Suplemento congelado
1. Descongelar o Suplemento Congelado do Chang
Medium C agitando rapidamente o recipiente em banho
Maria a 37ºC.
2. Transferir esterilmente o conteúdo completo do
Suplemento Chang Medium C descongelado ao
recipiente de Chang Medium B Basal.
3. Misturar o Chang Medium C Completo agitando bem
o recipiente.
4. Adicionar L-Glutamina, 10 mL/L (200mM). Se desejar,
pode adicionar antibióticos.
PREPARAÇÃO DE ALÍQUOTAS DE
SUPLEMENTO
DE CHANG MEDIUM C
Suplemento liofilizado
Se não utilizar o Chang Medium C Completo durante um
período de 10 dias é conveniente preparar quantidades
mais pequenas de meio seguindo o seguinte protocolo:
1. Reconstituir o Suplemento Liofilizado do Chang Medium
C.
2. Em condições estéreis, repartir o suplemento em
alíquotas de tamanho adequado e congelá-las.
3. Também em condições de esterilidade, distribuir
o Chang Medium B Basal pelo mesmo número de
alíquotas.
4. Para preparar o Chang Medium C Completo, adicionar
uma alíquota descongelada de Suplemento de Chang
Medium C a uma alíquota de Chang Medium B Basal.
5. Misturar bem.
Suplemento congelado
1. Descongelar o Suplemento Congelado do Chang
Medium C.
2. Em condições de esterilidade, repartir o suplemento
em alíquotas de um tamanho adequado e congelá-las
(NOTA: o recipiente de suplemento contém 14 mL ou
70 mL. Distribuir uniformemente).
3. Também em condições de esterilidade, repartir o Chang
Medium B Basal pelo mesmo número de alícuotas.
4. Para preparar o Chang Medium C Completo, adicionar
uma alíquota descongelada de Suplemento de Chang
Medium C a uma alíquota de Chang Medium B Basal.
5. Misturar bem.
INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃO
O pH do meio utilizado deve estar entre 6.8 e
7.2 (o meio deve apresentar uma coloração ligeiramente
cor de salmão). O pH pode ajustar-se facilmente colocando
o meio numa incubadora a 5% - 8% CO 2 , com a tampa
ligeiramente desenroscada.
O pH final deve ser entre 6.8 - 7.2.
Para mais detalhes sobre a utilização deste produto, o
laboratório deve consultar os seus próprios protocolos
de trabalho, os quais foram desenvolvidos e optimizados
especificamente de acordo com cada laboratório médico.
ESTERILIDADE
O soro utilizado na produção de Suplemento Chang
Medium C foi testado para a contaminação viral de
acordo com a norma CFR capítulo 9, parte 113.53. Foi
também testado para a contaminação por Micoplasma.
Ambos, o Chang Medium B Basal e o Suplemento Chang
Medium C foram esterilizado por filtração com filtros de
0.2 micras. Amostras representativas de Chang Medium
B Basal e de Suplemento Chang Medium C foram
testadas para a possível contaminação bacteriológica
seguindo os protocolos de esterilidade descritos no
teste de esterilidade actual da USP .
Chang Medium ® é uma marca registada da Irvine Scientific.
3. Στροβιλίστε απαλά το φιαλίδιο για να έχετε ένα
πλήρες διάλυμα. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Μπορεί να χρειαστεί να
επωάσετε το φιαλίδιο στους 37οC για 5 έως 10 λεπτά,
ώστε να διαλυθεί πλήρως το συμπλήρωμα).
4. Μεταφέρετε ασηπτικά όλα τα περιεχόμενα του
ανασυσταμένου Chang Medium C Συμπληρώματος
στη φιάλη του Chang Medium B Βασικού.
5. Ανακατέψτε το πλήρες Chang Medium C καλά,
στροβιλίζοντας τη φιάλη.
6. Προσθέστε L-Γλουταμίνη, 10.0 mL/L (200 mM).
Μπορείτε επίσης να προσθέσετε αντιβιοτικά, αν το
επιθυμείτε.
Κατεψυγμένο Συμπλήρωμα
1. Αποψύξτε το Chang Medium C Κατεψυγμένο
Συμπλήρωμα γρήγορα, στροβιλίζοντας το φιαλίδιο σε
υδατόλουτρο θερμοκρασίας 37°C.
2. Μεταφέρετε ασηπτικά όλα τα περιεχόμενα του
αποψυγμένου Chang Medium C Συμπληρώματος στη
φιάλη του Chang Medium B Βασικού.
3. Ανακατέψτε το πλήρες Chang Medium C καλά,
στροβιλίζοντας τη φιάλη.
4. Προσθέσετε L-Γλουταμίνη, 10.0 mL/L (200 mM).
Μπορείτε επίσης να προσθέσετε αντιβιοτικά, αν το
επιθυμείτε.
ΔΙΑΜΟΙΡΑΣΜΟΣ ΣΕ ΥΠΟΠΟΛΛΑΠΛΑΣΙΑ
ΤΟΥ CHANG MEDIUM C ΣΥΜΠΛΗΡΩΜΑΤΟΣ
Λυοφιλοποιημένο Συμπλήρωμα
Αν δεν μπορείτε να χρησιμοποιήσετε το πλήρες Chang
Medium C εντός 10 ημερών, μπορείτε να δημιουργήσετε
μικρότερες ποσότητες ακολουθώντας την εξής τροποποίηση
της διαδικασίας:
1. Ανασυστήστε το Chang Medium C Λυοφιλοποιημένο
Συμπλήρωμα.
2. Διανέμετε ασηπτικά σε πρακτικού μεγέθους
υποπολλαπλάσια και καταψύξτε.
3. Διαχύστε επίσης ασηπτικά το Chang Medium B Βασικό
σε αντίστοιχο αριθμό υποπολλαπλασίων.
4. Για να προετοιμάσετε το πλήρες Chang Medium C,
προσθέστε ένα υποπολλαπλάσιο αποψυγμένου Chang
Medium C Συμπληρώματος σε ένα υποπολλαπλάσιο
Chang Medium B Βασικού.
5. Ανακατέψτε καλά.
Κατεψυγμένο Συμπλήρωμα
1. Αποψύξτε το Chang Medium C Κατεψυγμένο
Συμπλήρωμα.
2. Διανέμετε ασηπτικά σε πρακτικού μεγέθους
υποπολλαπλάσια και καταψύξτε ξανά. (ΣΗΜΕΙΩΣΗ:
το φιαλίδιο συμπληρώματος περιέχει 14 mL ή 70 mL.
Διανείμετε ίσα.)
3. Διαχύστε επίσης ασηπτικά το Chang Medium B Βασικό
σε αντίστοιχο αριθμό υποπολλαπλασίων.
4. Για να προετοιμάσετε το πλήρες Chang Medium C,
προσθέστε ένα υποπολλαπλάσιο αποψυγμένου Chang
Medium C Συμπληρώματος σε ένα υποπολλαπλάσιο
Chang Medium B Βασικού.
5. Ανακατέψτε καλά.
πριν τη συλλογή.
ΣΗΜΕΙΩΣΗ: Για κλειστά συστήματα, ξεπλύνετε κάθε
φιαλίδιο καλλιέργειας με 5% CO2 - 95% αέρα για 20
δευτερόλεπτα. Σφίξτε τα πώματα στα φιαλίδια καλλιεργειών
και επωάστε τα στους 37°C. (Προτείνεται να προσδένεται
αποστειρωμένη πιπέτα Παστέρ στην πηγή CO2 για να
διασφαλίζεται η αποστείρωση του εισερχόμενου αερίου).
Χρήση Chang Medium C για Ανάπτυξη
Κυττάρων Διόδου Αμνιακού Υγρού:
Για να σχηματίσετε διόδους στα κύτταρα, χορηγήστε
στις καλλιέργειες θρυψίνη (ή προνάση, κλπ.) όπως θα
κάνατε με κύτταρα που αναπτύσσονται σε συμβατικό
μέσο. Ωστόσο, η χορήγηση πρωτεάσης θα πρέπει να
ελέγχεται προσεκτικά. Τα κύτταρα αμνιακού υγρού που
αναπτύσσονται σε Chang Medium C τείνουν να είναι
περισσότερο ευαίσθητα στην χορήγηση πρωτεάσης απ’
ότι τα κύτταρα αμνιακού υγρού που αναπτύσσονται σε
συμβατικά μέσα. Μπορεί να χρειαστεί να τροποποιήσετε
το πρωτόκολλό σας για να λάβετε υπόψη τα παραπάνω.
ΔΙΑΣΦΑΛΙΣΗ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣ
ΑΠΟΣΤΕΙΡΩΣΗ
Ο ορός που χρησιμοποιείται στην παραγωγή του
Chang Medium C Συμπληρώματος έχει ελεγχθεί για
ιογενή μόλυνση σύμφωνα με το CFR Title 9 Part 113.53.
Έχει επίσης ελεγχθεί για μόλυνση μυκοπλάσματος.
Το Chang Medium B Basal και το Chang Medium C
Supplement αποστειρώνονται με διήθηση μέσω φίλτρου
0.1 εκατομμυριοστόμετρων. Αντιπροσωπευτικά δείγματα
του Chang Medium B Βασικού και του Chang Medium C
Συμπληρώματος ελέγχονται για πιθανή βακτηριολογική
μόλυνση ακολουθώντας το πρωτόκολλο ελέγχου
στειρότητας που περιγράφεται στην τρέχουσα εξέταση
Στειρότητας της συνθήκης Φαρμακοποϊίας των ΗΠΑ.
Το Chang Medium ® είναι σήμα κατατεθέν της Irvine
Scientific.

ČESKY
,URČENÉ POUŽITÍ
Chang Medium C lze použít k následujícím činnostem:
1. primární kultivace buněk z plodové vody
2. množení pasážovaných buněk z plodové vody
3. kultivace buněk kostní dřeně
4. odběr vzorků pevné amniotické tkáně z choriových
klků.
TOTO MÉDIUM JE URČENO K POUŽITÍ V OTEVŘENÝCH
(KULTIVACE V ATMOSFÉŘE S 5 % CO 2 ) I UZAVŘENÝCH
SYSTÉMECH (KULTURY INKUBOVÁNY V PEVNĚ
UZAVŘENÝCH KULTIVAČNÍCH NÁDOBKÁCH V 5% CO 2 ).
Upozornění: Složky média neužívejte po uplynutí doby
použitelnosti uvedené na jejich štítcích.
POPIS VÝROBKU
Chang Medium® C bylo vyvinuto k primární kultivaci
lidských buněk z plodové vody pro účely karyotypizace
a jiných genetických testů. SLOŽENÍ PŘÍPRAVKU BYLO
OPTIMALIZOVÁNO PRO OTEVŘENÉ I UZAVŘENÉ
SYSTÉMY.
UCHOVÁNÍ A STABILITA
Zmrazený doplněk Chang Medium C Frozen Doplatek za
cenu nižší než 10°C, Lyofilizovaný doplněk Chang Medium
C při teplotě 2 až 8 ºC, základní Chang Medium B při teplotě
2 až 8 ºC a úplné Chang Medium C při teplotě 2 až 8 ºC.
Základní Chang Medium B nesmí být zmrazeno.
Chraňte před fluorescenčním světlem.
Datum použití jednotlivých složek najdete na štítku jejich
lahvičky. Úplné Chang Medium C lze bez vlivu na funkci
uchovávat při teplotě 2 až 8 ºC po 10 dní. Skladování déle
než 10 dní se nedoporučuje.
ÚPLNÉ CHANG MEDIUM C CHRAŇTE PŘED MRAZEM.
SLOŽKY
mg/l
Soli................................................................................7900
Glukóza.........................................................................1400
Aminokyseliny................................................................1000
Polypeptidy........................................................................66
Vitamíny.............................................................................22
Deoxyribonukleosidy.........................................................21
Ribonukleosidy..................................................................20
Pyruvát sodný..................................................................110
Jiné složky..........................................................................8
Hormony a stopové prvky..........................................0,0025
Steroidní hormony......................................................0,0013
Prekolostrální telecí sérum......................................6 % obj.
Fetální telecí sérum.................................................6 % obj.
BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ A VAROVÁNÍ
Zařízení bylo určeno pro použití školeným personálem při
zákrocích, které zahrnují indikovanou aplikaci, pro kterou
je zařízení určeno.
PŘÍPRAVA K POUŽITÍ
Lyofilizovaný doplněk
1. Lyofilizovaný doplněk Chang Medium C nechte
vytemperovat na pokojovou teplotu.
2. Asepticky přidejte k lyofilizátu 10 ml nebo 50 ml sterilní
destilované vody. 10ml lahvička je určena pro 90ml
balení základního Chang Medium B; 50ml lahvička
pak pro 450ml balení základního Chang Medium B.
3. Jemně lahvičkou zakružte, aby se obsah úplně rozpustil.
(POZNÁMKA: Možná bude k úplnému rozpuštění nutné
lahvičku 5 – 10 minut inkubovat při teplotě 37 ºC.)
4. Asepticky přeneste všechen rozpuštěný doplněk do
láhve se základním Chang Medium B.
5. Dobře promíchejte kroužením láhve.
6. Přidejte L-glutamin, 10,0 ml/l (200 mM). V případě
potřeby lze přidat antibiotika.
Použití média k primární kultivaci: kultivace
in situ
1. Odstřeďte plodovou vodu při nízkých otáčkách a
koncentrujte tak buňky.
2. Rozpusťte buněčnou peletu v malém objemu plodové
vody stejné pacientky. Například odsajte supernatant z
10 ml plodové vody a ponechte jen 0,5 ml nad peletou.
Poté znovu rozpusťte. Ke koncentrované buněčné
suspenzi přidejte dostatečné množství Chang Medium
C, abyste měli 0,5 ml suspenze na jedno krycí sklíčko
(celkem 4 krycí sklíčka) nebo 2 ml na kultivační lahvičku.
3. Inkubujte kultury v klidu při teplotě 37° C a atmosféře
5 % CO 2 .
4. Druhý den kultury zalijte 2 ml přípravku Chang Medium
C.
5. Po 4 – 5 dnech zkontrolujte růst kultur. Jakmile začnou
růst, je třeba dodat živiny. Odstraňte proto veškerý
supernatant a nahraďte 2 ml čerstvého Chang Medium
C. Poté doporučujeme doplňovat živiny každé 2 dny.
6. Dále růst kultury kontrolujte průběžně a odeberte
materiál, jakmile se vytvoří dostatek kolonií.
7. Optimálních výsledků dosáhnete odebráním materiálu
den po přidání čerstvého média.
Použití Chang Medium C k primární kultivaci:
kultivace v lahvích
1. Odstřeďte plodovou vodu při nízkých otáčkách a
koncentrujte tak buňky.
2. Rozpusťte buněčnou peletu v malém objemu plodové
vody stejné pacientky. Například odsajte supernatant
z 10 ml plodové vody a ponechte jen 1 ml nad peletou.
Poté znovu rozpusťte. Přidejte 4 ml přípravku Chang
Medium C do celkového objemu 5 ml na láhev.
3. Inkubujte kultury v klidu při teplotě 37° C a atmosféře
5 % CO 2 .
4. Zkontrolujte růst 5. den. Vyměňte médium za čerstvé
Chang Medium C, a pokud je kultura dostatečně
narostlá, odeberte materiál.
5. Poté obden kontrolujte růst kultury a zcela vyměňujte
médium, dokud se nevytvoří dostatek kolonií a nejsou
připraveny k použití.
6. Optimálních výsledků dosáhnete odebráním materiálu
den po přidání čerstvého média.
POZNÁMKA: U uzavřených systémů proplachujte každou
kultivační láhev 20 sekund směsí 5 % CO 2 – 95 % vzduchu.
Uzavřete kultivační láhve čepičkami a inkubujte při teplotě
37 °C. Doporučujeme k ústí zdroje plynu připojit sterilní
Pasteurovou pipetu, abyste zajistili sterilitu plynu.
Použití k množení pasážovaných buněk z
plodové vody:
Chcete-li buňky pasážovat, ošetřete kulturu trypsinem
(nebo pronázou atd.), jak to normálně provádíte u buněk
pěstovaných v konvenčním médiu. Průběh ošetření
proteázou však pečlivě monitorujte. Buňky z plodové vody
kultivované v přípravku Chang Medium C bývají citlivější na
ošetření proteázou než buňky z konvenčního média. Možná
bude nutné v tomto smyslu upravit protokol.
KONTROLA KVALITY
STERILITA
Sérum použité k produkci doplňku média bylo testováno na
možnou virovou kontaminaci dle amerického předpisu CFR
Title 9 Part 113.53. Byl proveden také screening možné
kontaminace mykoplazmaty. Doplněk Chang Medium C i
základní Chang Medium B jsou sterilizovány filtrací přes
0,1µm filtry. Reprezentativní vzorky doplňku i základního
DANSK
ANVENDELSE
Chang Medium C kan anvendes til følgende applikationer:
1. Primær dyrkning af amnionvæskeceller
2. Dyrkning af passerede amnionvæskeceller
3. Dyrkning af knoglemarvsceller
4. Solidt amnionvæv fra chorionvilliprøver
DETTE MEDIUM ER FREMSTILLET TIL BRUG I BÅDE
ÅBNE (KULTURER DER ER TILPASSET EN ATMOSFÆRE
PÅ 5 % CO 2 ) OG LUKKEDE DYRKNINGSSYSTEMER
(KULTURER TILSAT 5 % CO 2 OG INKUBERET MED TÆT
LUKKET LÅG PÅ DYRKNINGSKARRENE).
Forsigtig: Chang Medium C-komponenter må ikke
anvendes efter udløbsdatoen på de enkelte
etiketter.
PRODUKTBESKRIVELSE
Chang Medium ® C blev udviklet til primær dyrkning af
humane amnionvæskeceller til karyotypebestemmelse og
anden antenatal genetisk testning. DENNE FORMULERING
ER OPTIMERET TIL BÅDE ÅBNE OG LUKKEDE
SYSTEMER.
OPBEVARING OG STABILITET
Opbevar Chang Medium C frossent supplement tillæg på
under 10°C, Chang Medium C lyofiliseret supplement ved
2-8 ºC, Chang Medium B basal ved 2-8 ºC og komplet
Chang Medium C ved 2-8 ºC. Chang Medium B basal må
ikke nedfryses.
Beskyttes mod fluorescerende lys.
Se udløbsdatoen på de enkelte flaskers etiket. Komplet
Chang Medium C kan opbevares ved 2-8 ºC i højest 10 dage
inden brug uden, at det mister sin virkning. Det anbefales
ikke at opbevare det længere end 10 dage.
KOMPLET CHANG MEDIUM C MÅ IKKE NEDFRYSES.
KOMPONENTER
mg/l
Salte...........................................................................7900
Dekstrose...................................................................1400
Aminosyrer..................................................................1000
Polypeptider....................................................................66
Vitaminer.........................................................................22
Deoxyribonukleosider.....................................................21
Ribonukleosider..............................................................20
Natriumpyruvat.............................................................110
Andre komponenter..........................................................8
Hormoner og sporelementer....................................0.0025
Steroidhormoner......................................................0,0013
Serum fra nyfødt kalv........................................6 % vol/vol
Føtalt bovint serum...........................................6 % vol/vol
FORHOLDSREGLER OG ADVARSLER
Dette udstyr er beregnet til brug af personale, der er
uddannet i procedurer, der inkluderer den indicerede
anvendelse, som dette udstyr er beregnet til.
FORBEREDELSE
Lyofiliseret supplement
1. Lad Chang Medium C lyofiliseret supplement nå
stuetemperatur.
2. Brug aseptisk teknik og tilsæt 10 ml eller 50 ml sterilt,
destilleret vand til lyofilisatet. 10 ml-flasken er til 90 ml
Chang Medium B basal, og 50-ml-flasken er til 450 ml
Chang Medium B basal.
3. Hvirvl flasken forsigtigt, så indholdet opløses helt.
(BEMÆRK: Det kan være nødvendigt at inkubere
flasken ved 37 ºC i 5-10 minutter for at opløse
supplementet helt).
4. Overfør aseptisk hele indholdet af det restituerede
Chang Medium C supplement til flasken med Chang
Medium B basal.
5. Bland det komplette Chang Medium C godt ved at
hvirvle flasken.
Anvendelse af Chang Medium C til primære
kulturer: Metodologi in situ
1. Centrifuger amnionvæsken ved lav hastighed for at
koncentrere cellerne.
2. Resuspender cellepelleten i en lille volumen af
patientens egen amnionvæske. Aspirer fx
supernatanten fra 10 ml centrifugeret amnionvæske til
0,5 ml over cellepelleten, og resuspender. Tilsæt nok
Chang Medium C til den koncentrerede cellesuspension
for at få en endelig volumen på 0,5 ml pr. dækglas (i alt
4 dækglas) eller 2 ml pr. ampul.
3. Inkubér kulturerne uforstyrret ved 37 °C i en atmosfære
med 5 % CO 2 .
4. Skyl kulturerne på dag 2 ved at tilsætte 2 ml Chang
Medium C.
5. Efter 4-5 dage skal kulturernes vækst kontrolleres.
Kulturerne skal forsynes med nyt medium, når
vækst observeres. Dette gøres ved at fjerne hele
kultursupernatanten og tilsætte 2 ml friskt Chang
Medium C. Det anbefales, at kulturerne forsynes med
friskt medium hver 2. dag herefter.
6. Kontroller kulturernes vækst på/eller efter dag 5 og høst,
når der kan observeres nok kolonier.
7. De bedste resultater opnås, hvis kulturerne forsynes
med Chang Medium C dagen inden, at de høstes.
Anvendelse af Chang Medium C til primære
kulturer: Metodologi med kolbe
1. Centrifuger amnionvæsken ved lav hastighed for at
koncentrere cellerne.
2. Resuspender cellepelleten i en lille volumen af
patientens egen amnionvæske. Aspirer fx supernatanten
fra 10 ml centrifugeret amnionvæske til 1 ml over
cellepelleten, og resuspender. Tilsæt 4 ml Chang
Medium C, så den totale volumen er 5 ml pr. kolbe.
3. Inkubér kulturerne uforstyrret ved 37 °C i en atmosfære
med 5 % CO 2 .
4. Kontroller væksten på dag 5. Udskift mediet med friskt
Chang Medium C og høst, hvis tilstrækkelig cellevækst
kan observeres.
5. Kontroller kulturernes vækst og udskift mediet
fuldstændigt hver anden dag herefter, indtil nok kolonier
kan observeres, som er klar til at blive høstet.
6. De bedste resultater opnås, hvis kulturerne forsynes
med Chang Medium C dagen inden, at de høstes.
BEMÆRK: I lukkede systemer skal hver dyrkningskolbe
tilsættes 5 % CO2 - 95 % luft i 20 sekunder. Luk låget tæt til
på dyrkningskolberne og inkuber ved 37 °C. (Det anbefales
at slutte en steril Pasteurpipette med hætte til CO2-kilden
for at sikre, at den indgående gas er steril).
Anvendelse af Chang Medium C til dyrkning
af passerede amnionvæskeceller:
Passage af cellerne opnås ved at behandle kulturerne med
trypsin (eller pronase m.m.) som ved celler, der dyrkes i
konventionelt medium. Proteasebehandling skal imidlertid
overvåges nøje. Amnionvæskeceller, der dyrkes i Chang
Medium C, har en tendens til at være mere sensitive over
for proteasebehandling end amnionvæskeceller, der dyrkes
i konventionelt medium. Det kan være nødvendigt at ændre
protokollen for at tage hensyn hertil.
KVALITETSSIKRING
STERILITET
Det serum, der er anvendt til fremstilling af Chang Medium
C supplement, er blevet testet for viruskontamination ifølge
CFR Title 9 Part 113.53. Det er også blevet screenet for
mykoplasmakontamination. Chang Medium B basal og

Zmrazený doplněk
1. Zmrazený doplněk Chang Medium C rychle rozmrazte
kroužením lahví ve vodní lázni vyhřáté na 37 °C.
2. Asepticky přeneste celý obsah rozmrazeného doplňku
do láhve se základním Chang Medium B.
3. Dobře promíchejte kroužením láhve.
4. Přidejte L-glutamin, 10,0 ml/l (200 mM). V případě
potřeby lze přidat antibiotika.
DÁVKOVÁNÍ DOPLŇKU CHANG MEDIUM C
Lyofilizovaný doplněk
Pokud nemůžete úplné Chang Medium C spotřebovat do
10 dní, můžete připravit i menší množství, a to následující
úpravou postupu:
1. Rozpusťte Lyofilizovaný doplněk Chang Medium C.
2. Asepticky rozdělte do alikvotů o vhodné velikosti a
zmrazte.
3. Rovněž asepticky nadávkujte základní Chang Medium
B do odpovídajícího počtu alikvotů.
4. Až budete chtít připravit úplné Chang Medium C,
přidejte jeden díl rozmrazeného doplňku k jednomu
dílu základního Chang Medium B.
5. Dobře promíchejte.
Zmrazený doplněk
1. Rozmrazte Zmrazený doplněk Chang Medium C.
2. Asepticky rozdělte do alikvotů o vhodné velikosti
a znovu zmrazte. (POZNÁMKA: Lahvička doplňku
obsahuje 14 ml nebo 70 ml přípravku. Rozdělte materiál
rovnoměrně.)
3. Rovněž asepticky nadávkujte základní Chang Medium
B do odpovídajícího počtu alikvotů.
4. Až budete chtít připravit úplné Chang Medium C,
přidejte jeden díl rozmrazeného doplňku k jednomu
dílu základního Chang Medium B.
5. Dobře promíchejte.
POKYNY K POUŽITÍ
pH MÉDIA POUŽÍVANÉHO K DOPLNĚNÍ ŽIVIN
MUSÍ BÝT V ROZMEZÍ 6,8–7,2 (médium tedy musí
mít mírně nažloutlou lososovou barvu). pH lze snadno
upravit vložením média s mírně povolenou čepičkou do
inkubátoru s atmosférou 5-8 % CO 2 .
Výsledné pH musí být v rozmezí 6,8-7,2.
Pro dodatečné podrobnosti o použití těchto výrobků by
každá laboratoř měla konzultovat vlastní laboratorní metody
a protokoly, které byly vytvořeny a optimalizovány zvlášť pro
váš konkrétní zdravotnický program.
média jsou kontrolovány s ohledem na možnou kontaminaci,
a to podle protokolu pro test sterility popsaného v aktuálním
znění testu USP Sterility .
Chang Medium ® je registrovaná ochranná známka
společnosti Irvine Scientific.
6. Tilsæt L-glutamin, 10,0 ml/l (200 mM). Antibiotika kan
eventuelt tilsættes.
Frossent supplement
1. Optø hurtigt Chang Medium C frossent supplement ved
at hvirvle flasken i et 37 °C vandbad.
2. Overfør aseptisk hele indholdet af det optøede Chang
Medium C supplement til flasken med Chang Medium
B basal.
3. Bland det komplette Chang Medium C godt ved at
hvirvle flasken.
4. Tilsæt L-glutamin, 10,0 ml/l (200 mM). Antibiotika kan
eventuelt tilsættes.
AFMÅLING AF CHANG MEDIUM C
SUPPLEMENT I MINDRE MÆNGDER
Lyofiliseret supplement
Hvis det komplette Chang Medium C ikke kan anvendes
inden for 10 dage, kan det afmåles i mindre mængder vha.
denne ændring i proceduren:
1. Restituer Chang Medium C lyofiliseret supplement.
2. Fordel mediet aseptisk i mængder af passende størrelse
og nedfrys dem.
3. Dispenser også aseptisk Chang Medium B basal i et
tilsvarende antal mængder.
4. Det komplette Chang Medium C klargøres ved at tilsætte
én afmålt mængde optøet Chang Medium C supplement
til én afmålt mængde Chang Medium B basal.
5. Bland godt.
Frossent supplement
1. Optø Chang Medium C frossent supplement.
2. Fordel mediet aseptisk i mængder af passende
størrelse og nedfrys dem. (BEMÆRK: Flaskerne med
supplement indholder 14 ml eller 70 ml. Fordel ligeligt).
3. Dispenser også aseptisk Chang Medium B basal i et
tilsvarende antal mængder.
4. Det komplette Chang Medium C klargøres ved at
tilsætte én afmålt mængde optøet Chang Medium C
supplement til én afmålt mængde Chang Medium B
basal.
5. Bland godt.
BRUGSANVISNING
PH-VÆRDIEN AF DET MEDIUM, DER
ANVENDES TIL KULTURERNE, SKAL VÆRE
6,8-7,2 (dvs. at mediet skal have en let gullig laksefave).
pH-værdien kan let justeres ved at anbringe mediet i en
inkubator med 5-8 % CO2 med låget løsnet let.
Den endelige pH-værdi skal ligge på 6,8-7,2.
For yderligere oplysninger om brug af disse produkter
skal hvert laboratorium henvise til egne procedurer og
protokoller, som er blevet specifikt udviklet og optimeret til
laboratoriets eget, medicinske program.
Chang Medium C supplement er steriliseret vha. filtrering
gennem et filter på 0,1 mikron. Repræsentative prøver af
Chang Medium B basal og Chang Medium C supplement
er blevet testet for bakteriologisk kontamination ifølge den
aktuelle protokollen for sterilitetstesting som beskrevet i den
aktuelle USP sterilitetstest .
Chang Medium ® er et registreret varemærke tilhørende
Irvine Scientific.

SUOMI
KÄYTTÖTARKOITUS
Chang Medium C:tä voidaan käyttää seuraaviin
sovellutuksiin:
1. amnionnesteen solujen primääriviljely
2. viljelmässä jakautuneiden amnionnesteen solujen
kasvatus
3. luuydinsolujen viljely
4. kiinteä amnionkudos korionvillusnäytteistä.
TÄMÄ ELATUSAINE ON SUUNNITELTU KÄYTETTÄVÄKSI
SEKÄ AVOIMISSA (VILJELMÄT TASAPAINOTETAAN
5 % CO2-ILMAKEHÄSSÄ) ETTÄ SULJETUISSA
VILJELYJÄRJESTELMISSÄ (VILJELMÄT TÄYTETÄÄN
5 % CO2:LLA JA INKUBOIDAAN VILJELYPULLOJEN
KORKIT TIUKASTI SULJETTUINA).
Varoitus: Älä käytä Chang Medium C:n aineosia etiketissä
annetun viimeisen käyttöpäivän jälkeen.
TUOTTEEN KUVAUS
Chang Medium® C kehitettiin ihmisen amnionnesteen
solujen primääriseen viljelyyn karyotyypitystä ja muuta
antenataalista geneettistä testausta varten. TÄMÄ
KOOSTUMUS ON OPTIMOITU SEKÄ AVOIMIA ETTÄ
SULJETTUJA JÄRJESTELMIÄ VARTEN.
SÄILYTYS JA STABIILIUS
Säilytä Chang Medium C Frozen Supplement alle -10 °C,
Chang Medium C lyofilisoitu lisäaine lämpötilassa 2 °C – 8
°C, Chang Medium B Basal lämpötilassa 2 °C – 8 °C, ja
täydellinen Chang Medium C lämpötilassa 2 °C – 8 °C.
Chang Medium B Basal -elatusainetta ei saa pakastaa.
Suojaa fluoresoivalta valolta.
Katso yksittäisten aineosien pullojen etiketeistä spesifiset
viimeiset käyttöpäivät. Täydellistä Chang Medium C
-elatusainetta voidaan säilyttää lämpötilassa 2 °C – 8 °C
10 päivän ajan ennen käyttöä ilman että tämä vaikuttaisi sen
toimintaan. Yli 10 päivän säilytystä ei suositella.
ÄLÄ PAKASTA TÄYDELLISTÄ CHANG MEDIUM C
-ELATUSAINETTA.
AINEOSAT
mg/l
Suolat..........................................................................7,900
Dekstroosi...................................................................1,400
Aminohapot.................................................................1,000
Polypeptidit.......................................................................66
Vitamiinit...........................................................................22
Deoksiribonukleosidit........................................................21
Ribonukleosidit.................................................................20
Natriumpyruvaatti............................................................110
Muut aineosat.....................................................................8
Hormonit ja hivenaineet.............................................0,0025
Steroidihormonit.........................................................0,0013
Vastasyntyneen vasikan seerumi.............................6 % v/v
Fetaalinaudan seerumi.............................................6 % v/v
VAROTOIMET JA VAROITUKSET
Tämä laite on tarkoitettu sellaisten henkilöiden käytettäväksi,
jotka on koulutettu suorittamaan toimenpiteitä, joihin kuuluu
laitteen käyttötarkoituksen mukainen asianmukainen käyttö.
VALMISTELU KÄYTTÖÄ VARTEN
Lyofilisoitu lisäaine
1. Anna Chang Medium C lyofilisoidun lisäaineen
tasapainottua huoneenlämpötilaan.
2. Lisää aseptisilla tekniikoilla 10 ml tai 50 ml steriiliä
tislattua vettä lyofilisaattiin. 10 ml:n pullo on Chang
Medium B Basal -elatusainetta (90 ml) varten; 50 ml
pullo on Chang Medium B Basal -elatusainetta (450
ml) varten.
3. Pyöritä pulloa hellävaroen täydellisen liukenemisen
aikaansaamiseksi. (HUOMAUTUS: Voi olla
välttämätöntä inkuboida pulloa 37 °C:n lämpötilassa
5–10 minuuttia lisäaineen liuottamiseksi täysin).
Chang Medium C:n käyttö primääriviljelmiin:
in situ menetelmät
1. Sentrifugoi amnionneste pienellä nopeudella solujen
konsentroimiseksi.
2. Suspendoi solusakka uudelleen pieneen tilavuuteen
potilaan omaa amnionnestettä. Esimerkiksi ime
sentrifugoidun amnionnesteen (10 ml) supernatantti
0,5 ml:n tilavuuteen solusakan yläpuolella ja
suspendoi uudelleen. Lisää riittävästi Chang Medium
C:tä konsentroituun solusakkaan, jotta lopullinen
maljaustilavuus on 0,5 ml per peitinlasi (kaikkiaan 4
peitinlasia) tai 2 ml per pieni pullo.
3. Inkuboi viljelmiä niitä liikuttamatta 37 °C:n lämpötilassa
5 % CO2-ilmakehässä.
4. Täytä viljelmät päivänä 2 lisäämällä 2 ml Chang Medium
C:tä.
5. Viljelmien kasvu tulee tarkistaa 4–5 päivän kuluttua.
Viljelmiä on ruokittava kun kasvua on havaittu. Ruoki
viljelmiä poistamalla kaikki viljelmän supernatantti ja
vaihtamalla tilalle 2 ml tuoretta Chang Medium C:tä.
Suositellaan, että viljelmiä ruokitaan tämän jälkeen
joka toinen päivä.
6. Tarkista viljelmien kasvu päivänä 5 tai sen jälkeen ja
kerää solut, kun havaitset riittävän määrän pesäkkeitä.
7. Parhaat tulokset saadaan, kun viljelmiä ruokitaan Chang
Medium C:llä keräämistä edeltävänä päivänä.
Chang Medium C:n käyttö primääriviljelmiin:
Pullossa suoritettavat menetelmät
1. Sentrifugoi amnionneste pienellä nopeudella solujen
konsentroimiseksi.
2. Suspendoi solusakka uudelleen pieneen tilavuuteen
potilaan omaa amnionnestettä. Esimerkiksi ime
sentrifugoidun amnionnesteen (10 ml) supernatantti
1 ml:n tilavuuteen solusakan yläpuolella ja suspendoi
uudelleen. Lisää 4 ml Chang Medium C:tä niin, että
kokonaistilavuus on 5 ml per pullo.
3. Inkuboi viljelmiä niitä liikuttamatta 37 °C:n lämpötilassa
5 % CO2-ilmakehässä.
4. Tarkista kasvu päivänä 5. Vaihda elatusaine tuoreeseen
Chang Medium C:hen ja kerää, jos havaitset riittävää
solujen kasvua.
5. Tarkista viljelmien kasvu ja vaihda kokonaan elatusaine
joka toinen päivä tämän jälkeen, kunnes havaitaan
riittävästi pesäkkeitä ja ne ovat valmiita kerättäviksi.
6. Parhaat tulokset saadaan, kun viljelmiä ruokitaan Chang
Medium C:llä keräämistä edeltävänä päivänä.
HUOMAUTUS: Suljetuissa järjestelmissä huuhtele jokainen
viljelypullo kaasuseoksella 5 % CO2 – 95 % ilmaa 20
sekunnin ajan. Sulje viljelypullojen korkit tiukasti ja inkuboi
niitä 37 °C:n lämpötilassa. (On suositeltavaa, että steriili,
suodattimella varustettu pasteur-pipetti kiinnitetään
CO2-lähteeseen sisään tulevan kaasun steriiliyden
varmistamiseksi.)
Chang Medium C:n käyttö viljelmässä
jakautuneiden amnionnesteen solujen
kasvattamiseksi:
Kun haluat antaa solujen jakautua viljelmässä, käsittele
viljelmiä trypsiinillä (tai pronaasilla jne.), kuten normaalisti
tekisit silloin kun soluja kasvatetaan tavanomaisessa
elatusaineessa. Proteaasikäsittelyä on kuitenkin seurattava
huolellisesti. Amnionnesteen soluilla, jotka kasvatetaan
Chang Medium C:llä, on taipumus olla herkempiä
proteaasikäsittelylle kuin amnionnesteen soluilla, jotka
kasvatetaan tavanomaisessa elatusaineessa. Protokollan
muuttaminen tämän ottamiseksi huomioon saattaa olla
LATVISKI
IETEICAMĀ IZMANTOŠANA
Chang Medium C var lietot turpmāk minētajos gadījumos:
1. augļa ūdeņu šūnu primārajā kultivēšanā
2. nošķirtu augļa ūdeņu šūnu audzēšanā
3. kaulu smadzeņu šūnu kultivēšanā
4. kompaktajiem amnija audiem, kas iegūti horija
bārkstiņu parauga izmeklēšanā.
ŠĪ BAROTNE IR PAREDZĒTA IZMANTOŠANAI GAN
VAĻĒJĀS (KULTŪRAS STABILIZĒTAS 5% CO2 VIDĒ),
GAN SLĒGTĀS KULTIVĒŠANAS SISTĒMĀS (KULTŪRAS
UZPLUDINĀTAS AR 5% CO2 UN KULTŪRU SATUROŠIE
KONTEINERI IEVIETOTI INKUBATORĀ AR STINGRI
NOSLĒGTIEM AIZBĀŽŅIEM).
Uzmanību: Nelietojiet Chang Medium C veidojošās daļas
pēc derīguma termiņa, kas norādīts katra
konkrētā iepakojuma marķējumā.
PRODUKTA APRAKSTS
Chang Medium ® C ir izveidots izmantošanai cilvēka augļa
ūdeņu šūnu primārajā kultivēšanā, lai veiktu kariotipu
noteikšanas un citus antenatālos ģenētiskos testus. ŠIS
SASTĀVS IR OPTIMIZĒTS IZMANTOŠANAI GAN AR
VAĻĒJU, GAN SLĒGTU SISTĒMU.
UZGLABĀŠANA UN STABILITĀTE
Uzglabājiet Chang Medium C Frozen Supplement
temperatūrā zem -10ºC temperatūrā, Chang Medium C
liofilizēto piedevu jāuzglabā 2ºC līdz 8ºC temperatūrā,
Chang Medium B Basal (pamata) jāuzglabā 2ºC līdz 8ºC
temperatūrā, bet pilnīgo (complete) Chang Medium C - 2ºC
līdz 8ºC temperatūrā. Chang Medium B Basal (pamata)
nedrīkst saldēt.
Aizsargāt no fluorescējošas gaismas iedarbības.
Konkrēto derīguma termiņu skatiet atsevišķās sastāvdaļas
pudeles marķējumā. Pirms lietošanas Complete Chang
Medium C var uzglabāt 2ºC līdz 8ºC temperatūrā 10
dienas, neiespaidojot barotnes funkcijas. Šādi nav ieteicams
uzglabāt ilgāk par 10 dienām.
NESALDĒT COMPLETE CHANG MEDIUM C.
SASTĀVDAĻAS
mg/l
Sāļi ……………………………………........... 7900
Dekstroze ………………………………………………. 1400
Aminoskābes ………………………………... 1000
Polipeptīdi …………………………………….... 66
Vitamīni ……………………………………........ 22
Dezoksiribonukleozīdi ………………………… 21
R i b o n u k l e o z ī d i … … … … … … … … … … … … 2 0
Nātrija piruvāts …………………………………………….. 110
Citas sastāvdaļas ………………………………………… 8
Hormoni un iezīmēšanas sastāvdaļas …………… 0.0025
Steroīdhormoni…………………………………….. 0.0013
Jaundzimušu teļu serums ………… 6% no kopējā tilpuma
Liellopu embriju serums …………... 6% no kopējā tilpuma
PIESARDZĪBAS PASĀKUMI UN BRĪDINĀJUMI
Šo ierīci ir paredzēts izmantot personālam, kas ir
apmācīts tādu procedūru veikšanai, kuras ietver norādīto
izmantošanu, kurai šī ierīce ir paredzēta.
SAGATAVOŠANA LIETOŠANAI
Liofilizētā piedeva
1. Ļaujiet Chang Medium C liofilizētajai piedevai
nostabilizēties līdz istabas temperatūrai.
2. Izmantojot aseptiskus paņēmienus, pievienojiet
liofilizātam 10 ml vai 50 ml sterila, destilēta ūdens. 10
ml flakons ir paredzēts 90 ml Chang Medium B Basal
(pamata); 50 ml flakons ir paredzēts 450 ml Chang
Medium B Basal (pamata).
3. Uzmanīgi pagroziet flakonu, lai panāktu pilnīgu
izšķīšanu. (PIEZĪME: Var būt nepieciešams inkubēt
flakonu 37º C temperatūrā 10 minūtes, lai piedevu
Chang Medium C lietošana primārai
kultivēšanai: in situ metode
1. Centrifugējiet augļa ūdeņu šķidrumu ar nelielu ātrumu,
lai koncentrētu šūnas.
2. Suspendējiet šūnu lodīti no jauna nelielā daudzumā
paša pacienta augļa ūdeņu šķidruma. Piemēram,
aspirējiet līdz 0,5 ml supernatanta no 10 ml augļa
ūdeņu centrifugāta virs šūnas lodītes un resuspendējiet.
Pievienojiet koncentrētajai šūnu suspensijai pietiekamu
daudzumu Chang Medium C, lai galīgajam uzklāšanas
daudzumam paredzētu 0,5 ml uz katru segstikliņu
(pavisam 4 segstikliņi) vai 2 ml uz flakonu.
3. Netraucēti inkubējiet kultūras 37º C temperatūrā 5%
CO 2 vidē.
4. 2. dienā uzpludiniet kultūras, pievienojot 2 ml Chang
Medium C.
5. Pēc 4 līdz 5 dienām jāpārbauda kultivēto šūnu augšana.
Tiklīdz tiek novērota kultūru augšana, tām jāpapildina
barība. Papildiniet barotni, noņemot visu supernatantu
no kultūras un aizvietojot to ar 2 ml svaiga Chang
Medium C. Pēc tam ieteicams kultūrām pievienot
barotni ik pa 2 dienām.
6. Pārbaudiet kultūru augšanu 5. dienā/pēc 5. dienas un
veiciet ievākšanu, kad var novērot pietiekama apjoma
kolonijas.
7. Vislabākie rezultāti tiek iegūti, pievienojot kultūrām
Chang Medium C barotni iepriekšējā dienā pirms
ievākšanas.
Chang Medium C lietošana primārai kultivēšanai: Flakona
metode
1. Centrifugējiet augļa ūdeņu šķidrumu ar nelielu ātrumu,
lai koncentrētu šūnas.
2. Suspendējiet šūnu lodīti no jauna nelielā daudzumā
paša pacienta augļa ūdeņu šķidruma. Piemēram,
aspirējiet līdz 1 ml supernatanta no 10 ml augļa
ūdeņu centrifugāta virs šūnas lodītes un suspendējiet
atkārtoti. Pievienojiet 4 ml Chang Medium C, lai kopējais
daudzums katrā flakonā būtu 5 ml.
3. Netraucēti inkubējiet kultūras 37º C temperatūrā 5%
CO 2 vidē.
4. 5. dienā pārbaudiet augšanu. Aizvietojiet barotni ar
svaigu Chang Medium C un veiciet ievākšanu, ja
novērojama pietiekami efektīva šūnu augšana.
5. Pēc tam pārbaudiet kultūru augšanu un pilnībā
nomainiet barotni katru otro dienu, līdz var novērot
pietiekama apjoma kolonijas, kas gatavas ievākšanai.
6. Vislabākie rezultāti tiek iegūti, pievienojot kultūrām
Chang Medium C barotni iepriekšējā dienā pirms
ievākšanas.
PIEZĪME: Slēgtām sistēmām katra kultūras flakona
skalošanai izmantojiet 5% CO 2 - 95% gaisa maisījumu 20
sekundes. Cieši uzlieciet kultūras flakoniem aizbāžņus un
inkubējiet tos 37° C temperatūrā. (Ieteicams piestiprināt CO 2
avotam sterilu Pastēra pipeti ar aizbāzni, lai nodrošinātu
ieplūstošās gāzes sterilitāti.)
Chang Medium C lietošana nošķirtu augļa
ūdeņu šūnu audzēšanā:
Lai nošķirtu šūnas, apstrādājiet kultūras ar tripsīnu
(vai pronāzi, u. c.), kā Jūs parasti darītu, ja šūnas tiktu
audzētas standarta barotnē. Tomēr, apstrādājot ar proteāzi,
jāveic uzmanīga novērošana. Augļa ūdeņu šūnām, kas
audzētas Chang Medium C, ir nosliece uz lielāku jutīgumu
pret apstrādi ar proteāzi nekā augļa ūdeņu šūnām, kas
audzētas standarta barotnē. Var būt nepieciešams pārveidot
protokolu, lai ņemtu vērā šo faktu.

4. Siirrä aseptisesti uudelleen liuotetun Chang Medium
C -lisäaineen koko sisältö Chang Medium B Basal
-pulloon.
5. Sekoita täydellinen Chang Medium C hyvin pyörittämällä
pulloa.
6. Lisää L-glutamiini, 10,0 ml/l (200 mM). Muita
antibiootteja voidaan lisätä haluttaessa.
Pakastettu lisäaine
1. Sulata Chang Medium C pakastettu lisäaine nopeasti
pyörittämällä pulloa 37 °C:n vesihauteessa.
2. Siirrä aseptisesti sulatetun Chang Medium C -lisäaineen
koko sisältö Chang Medium B Basal -pulloon.
3. Sekoita täydellinen Chang Medium C hyvin pyörittämällä
pulloa.
4. Lisää L-glutamiini, 10,0 ml/l (200 mM). Muita
antibiootteja voidaan lisätä haluttaessa.
CHANG MEDIUM C -LISÄAINEEN JAKAMINEN
ERIIN
Lyofilisoitu lisäaine
Jos et pysty käyttämään täydellistä Chang Medium C:tä 10
päivän sisällä, haluat kenties jakaa sen pienempiin määriin
noudattamalla tämä muutettua menetelmää:
1. Liuota Chang Medium C lyofilisoitu lisäaine.
2. Jaa aseptisesti sopivan kokoisiin alikvootteihin (eriin)
ja pakasta.
3. Jaa myös aseptisesti Chang Medium B Basal
vastaavaksi määräksi alikvootteja.
4. Täydellisen Chang Medium C:n valmistamiseksi
lisää yksi sulatettu Chang Medium C -lisäaineen
alikvootti yhteen alikvoottiin Chang Medium B Basal
-elatusainetta.
5. Sekoita hyvin.
Pakastettu lisäaine
1. Sulata Chang Medium C pakastettu lisäaine.
2. Jaa aseptisesti sopivan kokoisiin alikvootteihin (eriin)
ja pakasta uudelleen. (HUOMAUTUS: Lisäainepullo
sisältää 14 ml tai 70 ml. Jaa tasaisesti.)
3. Jaa myös aseptisesti Chang Medium B Basal
vastaavaksi määräksi alikvootteja.
4. Täydellisen Chang Medium C:n valmistamiseksi
lisää yksi sulatettu Chang Medium C -lisäaineen
alikvootti yhteen alikvoottiin Chang Medium B Basal
-elatusainetta.
5. Sekoita hyvin.
KÄYTTÖOHJEET
VILJELMIEN RUOKKIMISEEN KÄYTETYN
ELATUSAINEEN pH:N ON OLTAVA VÄLILLÄ
6,8–7,2 (eli elatusaineen on oltava väriltään hieman
kellertävän lohenpunainen). pH:ta voidaan säätää helposti
sijoittamalla elatusaine 5 % – 8 % CO2-soluviljelykaappiin
niin että korkki on hieman löysällä.
Lopullisen pH:n on oltava 6,8–7,2.
Lisätietoja näiden tuotteiden käytöstä kunkin laboratorion
tulee hakea omista menettelyohjeistaan ja protokollista,
jotka on erityisesti kehitetty ja optimoitu paikallista
lääkinnällistä ohjelmaa varten.
tarpeen.
LAADUNVARMISTUS
STERIILIYS
Chang Medium C -lisäaineen tuotantoon käytettävästä
seerumista on testattu viruskontaminaatio CFR Title
9 Part 113.53:n mukaisesti. Sille on myös tehty
mykoplasmakontaminaatiota koskeva seulontatutkimus.
Sekä Chang Medium B Basal että Chang Medium C -lisäaine
steriloidaan suodattamalla 0,1 mikronin suodattimen
läpi. Chang Medium B Basal -elatusaineesta ja Chang
Medium C -lisäaineesta testataan edustavien näytteiden
mahdollinen bakteerikontaminaatio noudattamalla
steriiliyden testausprotokollaa, joka on kuvattu nykyisessä
USP-steriiliystestissä .
Chang Medium ® on Irvine Scientificin rekisteröity
tavaramerkki.
pilnībā izšķīdinātu).
4. Aseptiski pārnesiet visu sagatavotā Chang Medium
C Supplement (piedevas) saturu uz Chang Medium B
Basal (pamata) pudeli.
5. Labi samaisiet pilnīgo Chang Medium C, pavirpinot
pudeli.
6. Pievienojiet 10,0 ml (200 mM) L-glutamīna. Ja vēlams,
var pievienot antibiotikas.
Saldētā piedeva
1. Ātri atlaidiniet Chang Medium C saldēto piedevu,
pagrozot pudeli 37°C ūdens peldē.
2. Aseptiski pārnesiet visu sagatavotā Chang Medium
C Supplement (piedevas) saturu uz Chang Medium B
Basal (pamata) pudeli.
3. Labi samaisiet pilnīgo Chang Medium C, pavirpinot
pudeli.
4. Pievienojiet 10,0 ml (200 mM) L-glutamīna. Ja vēlams,
var pievienot antibiotikas.
CHANG MEDIUM C PIEDEVU IEDALĪŠANA
DEVĀS
Liofilizētā piedeva
Ja nespējat izlietot pilnīgo Chang Medium C 10 dienu laikā,
Jūs, iespējams, vēlēsieties sagatavot mazāku daudzumu,
izmantojot šo modificēto procedūru:
1. Izšķīdiniet Chang Medium C liofilizēto piedevu.
2. Aseptiski iedaliet parocīga lieluma devās un sasaldējiet
atkārtoti.
3. Aseptiski iedaliet arī Chang Medium B Basal (pamata)
atbilstoša skaita devās.
4. Lai sagatavotu pilnīgo Chang Medium C, pievienojiet
vienu devu atlaidinātas Chang Medium C Supplement
(piedevas) vienai devai Chang Medium B Basal
(pamata).
5. Labi samaisiet.
Saldētā piedeva
1. Atlaidiniet Chang Medium C saldēto piedevu.
2. Aseptiski iedaliet parocīga lieluma devās un sasaldējiet
atkārtoti. (PIEZĪME: Flakons satur 14 ml vai 70 ml
piedevas. Iedaliet vienlīdzīgās daļās.)
3. Aseptiski iedaliet arī Chang Medium B Basal (pamata)
atbilstoša skaita devās.
4. Lai sagatavotu pilnīgo Chang Medium C, pievienojiet
vienu devu atlaidinātas Chang Medium C Supplement
(piedevas) vienai devai Chang Medium B Basal
(pamata).
5. Labi samaisiet.
LIETOŠANAS NORĀDĪJUMI
Tās barotnes pH, kuru izmanto kultūru
barotņu papildināšanai, ir jābūt 6,8-7,2 (t. i.,
barotnei jābūt nedaudz iedzeltenā laša krāsā). pH līmeni
iespējams vienkārši pielāgot, ievietojot barotnes flakonu ar
nedaudz vaļīgāk uzliktu aizbāzni 5%-8% CO 2 inkubatorā.
Galīgajam pH līmenim ir jābūt 6,8-7,2.
Lai uzzinātu papildu informāciju par šo produktu lietošanu,
katrai laboratorijai jāiepazīstas ar tajā noteiktajām
procedūrām un protokoliem, kas īpaši izstrādāti un optimizēti
individuālas medicīniskas programmas veikšanai.
KVALITĀTES NODROŠINĀŠANA
STERILITĀTE
Chang Medium C Supplement (piedevas) ražošanā
izmantotais serums ir ticis testēts attiecībā uz kontamināciju
ar vīrusiem saskaņā ar Federālā noteikumu kodeksa (CFR)
9. nodaļas, sadaļas 113.53 nosacījumiem. Barotne tikusi
rūpīgi testēta attiecībā uz piesārņojumu ar mikoplazmu.
Gan Chang Medium B Basal (pamata), gan Chang
Medium C Supplement (piedeva) ir sterilizēti, filtrējot caur
0,1 mikronu filtru. No Chang Medium B Basal (pamata) un
Chang Medium C Supplement (piedeva) ņemtie paraugi
ir pārbaudīti, lai noteiktu iespējamo bakterioloģisko
piesārņojumu, ievērojot sterilitātes testēšanas protokolu,
kas aprakstīts pašreizējos ASV Farmakopejas (USP)
noteikumos par sterilitātes testēšanu .
Chang Medium ® ir reģistrēta Irvine Scientific preču zīme.

Catalog No. T101-019, T101-059, C100+C106, C101+C108
For in vitro diagnostic use.
Zum Gebrauch in der in vitro Diagnostik.
Per uso diagnostico in vitro.
Para uso en diagnóstico in vitro.
Pour l’usage diagnostique in vitro.
Para a utilização em diagnóstico in vitro.
Για in vitro διαγνωστική χρήση.
In vitro diagnostikum.
Til in vitro-diagnostik.
In vitro diagnostiseen käyttöön.
Lietošanai in vitro diagnostikā.
Voor in vitro diagnostisch gebruik.
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Pentru utilizarea fertilizării in vitro
För in vitro-diagnostik.
In vitro diagnostiliseks kasutamiseks.
In vitro diagnosztikai célra.
Skirta in vitro diagnostikos tyrimams.
Chang Medium ® C
For Human Amniotic Fluid Cells
Symbols:
European Representative Storage Temperature for:
MPIE
Schutweg 13A
5145 NP Waalwijk, The Netherlands
C108
0050
See instructions
for use.
Catalog Number
Lot Number
Sterilized using aseptic
processing techniques
(filtration)
Expiration:
Year - Month - Day
Caution: See instructions
for use
Storage Temperature for :
T101-019,T101-059,
C100, C106 and C101
CE Mark
MPIE Schutweg 13a
5145 NP Waalwijk,
The Netherlands
NEDERLANDS
BEDOELD GEBRUIK
Chang Medium C kan worden gebruikt voor de volgende
toepassingen:
1. de primaire kweek van vruchtwatercellen
2. groeiende gepasseerde vruchtwatercellen
3. de kweek van beenmergcellen
4. vast amnionweefsel uit chorion villi-monsters.
DIT MEDIUM IS GESCHIKT VOOR GEBRUIK IN
ZOWEL OPEN (KWEKEN DIE ZIJN GEËQUILIBREERD
MET EEN 5% CO2-ATMOSFEER) EN GESLOTEN
KWEEKSYSTEMEN (KWEKEN VOLLEDIG BEDEKT MET
5% CO2 EN GEÏNCUBEERD MET KWEEKFLESSEN MET
GOED VASTGEDRAAIDE DOPPEN).
Voorzichtig: gebruik Chang Medium C-componenten niet
na de vervaldatum die op de afzonderlijke
stickers is vermeld.
PRODUCTBESCHRIJVING
Chang Medium® C werd ontwikkeld voor de primaire
kweek van humane vruchtwatercellen voor gebruik bij
karyotypering en ander prenataal genetisch onderzoek.
DEZE FORMULE IS GEOPTIMALISEERD VOOR ZOWEL
OPEN ALS GESLOTEN SYSTEMEN.
BEWAREN EN STABILITEIT
Bewaar Store Chang Medium C Frozen Supplement minder
dan 10°C, Chang Medium C gelyofiliseerd supplement bij
2 ºC tot 8 ºC, Chang Medium B basaal bij 2 ºC tot 8 ºC en
compleet Chang Medium C bij 2 ºC tot 8 ºC. Chang Medium
B basaal mag niet worden ingevroren.
Beschermen tegen fluorescerend licht.
Zie de afzonderlijke componentenstickers op de flessen
voor de specifieke vervaldatum. Compleet Chang Medium
C mag worden bewaard bij 2 ºC tot 8 ºC gedurende
10 dagen voordat het wordt gebruikt, zonder dat dit de
werking beïnvloedt. Bewaren gedurende meer dan 10
dagen wordt afgeraden.
COMPLEET CHANG MEDIUM C MAG NIET WORDEN
INGEVROREN.
COMPONENTEN
mg/l
Zouten..................................................................7900
Dextrose...............................................................1400
Aminozuren..........................................................1000
Polypeptiden............................................................66
Vitaminen.................................................................22
Deoxyribonucleosiden..............................................21
Ribonucleosiden.......................................................20
Natriumpyruvaat.....................................................110
Andere componenten.................................................8
Hormonen en sporenelementen........................0,0025
Steroïdehormonen.............................................0,0013
Serum van pasgeboren kalveren......................6% v/v
Serum van ongeboren kalveren (FBS)..............6% v/v
VOORZORGSMAATREGELEN EN
WAARSCHUWINGEN
Dit hulpmiddel is bedoeld voor gebruik door personeel
dat opgeleid is voor procedures inclusief de aangegeven
toepassing waarvoor het hulpmiddel is bedoeld.
PREPAREREN VAN COMPLEET CHANG
MEDIUM C
Gelyofiliseerd supplement
1. Laat Chang Medium C gelyofiliseerd supplement op
omgevingstemperatuur komen.
2. Voeg op aseptische wijze 10 ml of 50 ml steriel
gedistilleerd water toe aan het lyofilisaat. De 10 ml
flacon is voor 90 ml Chang Medium B basaal; de 50 ml
flacon is voor 450 ml Chang Medium B basaal.
3. Draai de flacon voorzichtig rond om een goede
oplossing te krijgen. (OPM.: het kan noodzakelijk zijn om
de flacon in een incubator te zetten bij 37 ºC gedurende
5 tot 10 minuten om het supplement volledig te laten
Gebruik van Chang Medium C voor primaire
kweken: in situ-methode
1. Centrifugeer het vruchtwater met lage snelheid om de
cellen te concentreren.
2. Resuspendeer het celpellet in een kleine hoeveelheid
van het eigen vruchtwater van de patiënt. Voorbeeld:
aspireer het supernatant van 10 ml gecentrifugeerd
vruchtwater tot 0,5 ml boven het celpellet en
resuspendeer. Voeg voldoende Chang Medium C toe
aan de geconcentreerde celsuspensie zodat er een
eindvolume van 0,5 ml per afdekplaatje (in totaal 4
afdekplaatjes) of 2 ml per fles beschikbaar is.
3. Zet de kweken ongestoord in de incubator bij 37 °C en
5% CO2-atmosfeer.
4. Bedek de kweken op dag 2 volledig door 2 ml Chang
Medium C toe te voegen.
5. Na 4 tot 5 dagen moet de groei van de kweken worden
gecontroleerd. De kweken moeten worden gevoed
als eenmaal is vastgesteld dat zij groeien. Voed de
kweken door al het kweeksupernatant te verwijderen
en te vervangen door 2 ml vers Chang Medium C. Het
verdient aanbeveling de kweken
daarna om de 2 dagen te voeden.
6. Controleer de kweken op groei op/na dag 5, en oogst
als voldoende kolonies worden waargenomen.
7. De beste resultaten worden verkregen als de kweken
worden gevoed met Chang Medium C op de dag vóór
het oogsten.
Gebruik van Chang Medium C voor primaire
kweken: flesmethode
1. Centrifugeer het vruchtwater met lage snelheid om de
cellen te concentreren.
2. Resuspendeer het celpellet in een kleine hoeveelheid
van het eigen vruchtwater van de patiënt. Voorbeeld:
aspireer het supernatant van 10 ml gecentrifugeerd
vruchtwater tot 1 ml boven het celpellet en
resuspendeer. Voeg 4 ml Chang Medium C toe zodat
het totaalvolume per fles 5 ml bedraagt.
3. Zet de kweken ongestoord in de incubator bij 37 °C en
5% CO2-atmosfeer.
4. Controleer op groei op dag 5. Vervang het medium door
vers Chang Medium C en oogst als voldoende celgroei
wordt waargenomen.
5. Controleer of de kweken groeien en vervang het
medium volledig elke dag daarna totdat voldoende
kolonies worden waargenomen en kunnen worden
geoogst.
6. De beste resultaten worden verkregen als de kweken
worden gevoed met Chang Medium C op de dag vóór
het oogsten.
OPM.: bij gesloten systemen moet elke kweekfles
gedurende 20 seconden met 5% CO2 - 95% lucht worden
gespoeld. Draai de doppen van de kweekflessen vast en
zet deze in de incubator bij 37 °C. (Het verdient aanbeveling
een steriel, afgesloten Pasteurpipet aan te sluiten op de
CO2-bron om de steriliteit van het instromende gas te
garanderen.).
Gebruik van Chang Medium C voor groeiende
gepasseerde vruchtwatercellen:
Om de cellen te passeren, behandel de kweken met
trypsine (of pronase etc.) zoals u dat normaal gesproken
zou doen als cellen groeien in een traditioneel medium. De
proteasebehandeling dient echter zorgvuldig in de gaten
te worden gehouden. Vruchtwatercellen die gekweekt
zijn in Chang Medium C hebben de neiging gevoeliger
te zijn voor proteasebehandeling dan vruchtwatercellen

2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588
Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706
Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.com
PN 40200 Rev.9
oplossen).
4. Breng de gehele inhoud van het gereconstitueerde
Chang Medium C supplement op aseptische wijze over
naar de fles met Chang Medium B basaal.
5. Meng het complete Chang Medium C goed door de fles
rond te draaien.
6. Voeg L-glutamine toe, 10,0 ml/l (200 mM). Antibiotica
kunnen, indien gewenst, worden toegevoegd.
Bevroren supplement
1. Ontdooi Chang Medium C bevroren supplement snel
door de flacon rond te draaien in een 37 ºC waterbad.
2. Breng de gehele inhoud van het ontdooide Chang
Medium C supplement op aseptische wijze over naar
de fles met Chang Medium B basaal.
3. Meng het complete Chang Medium C goed door de fles
rond te draaien.
4. Voeg L-glutamine toe, 10,0 ml/l (200 mM). Antibiotica
kunnen, indien gewenst, worden toegevoegd.
OPDELEN VAN CHANG MEDIUM C
SUPPLEMENT
Gelyofiliseerd supplement
Als u het complete Chang Medium C binnen 10 dagen niet
kunt gebruiken, kunt u kleinere hoeveelheden aanmaken
met de onderstaande gewijzigde procedure:
1. Reconstituteer Chang Medium C gelyofiliseerd
supplement.
2. Verdeel het op aseptische wijze in gemakkelijk
hanteerbare delen en vries deze in.
3. Verdeel Chang Medium B basaal ook op aseptische
wijze in een overeenkomstig aantal delen.
4. Om het complete Chang Medium C te prepareren, voeg
één deel ontdooid Chang Medium C supplement toe aan
één deel Chang Medium B basaal.
5. Meng het goed.
Bevroren supplement
1. Ontdooi Chang Medium C bevroren supplement.
2. Verdeel het op aseptische wijze in gemakkelijk
hanteerbare delen en vries deze opnieuw in. (OPM.:
de supplementflacon bevat 14 ml of 70 ml. Verdeel dit
in gelijke delen.)
3. Verdeel Chang Medium B basaal ook op aseptische
wijze in een overeenkomstig aantal delen.
4. Om het complete Chang Medium C te prepareren, voeg
één deel ontdooid Chang Medium C supplement toe
aan één deel Chang Medium B basaal.
5. Meng het goed.
GEBRUIKSAANWIJZING
DE pH VAN HET MEDIUM DAT WORDT
GEBRUIKT OM DE KWEKEN TE VOEDEN
MOET LIGGEN TUSSEN 6,8 EN 7,2 (d.w.z. het
medium moet een lichtgele zalmkleur hebben). De pH
kan iets worden aangepast door het medium met iets
losgedraaide dop in een 5%-8% CO2-incubator te zetten.
De definitieve pH moet liggen tussen 6,8 en 7,2.
Voor aanvullende informatie over het gebruik van
deze producten, dient elk laboratorium haar eigen
laboratoriumprocedures en -protocollen te raadplegen
die speciaal zijn ontwikkeld en geoptimaliseerd voor uw
individueel medisch programma.
die zijn gekweekt in een traditioneel medium. Het kan
noodzakelijk zijn om uw protocol te wijzigen om hiermee
rekening te houden.
KWALITETISBORGING
STERILITEIT
Het serum dat is gebruikt bij de productie van Chang
Medium C Supplement is getest op virale besmetting
volgens CFR Title 9, Part 113.53. Het is ook getest op
mycoplasmabesmetting. Zowel Chang Medium B basaal
als Chang Medium C supplement zijn gesteriliseerd middels
filtratie met behulp van een 0,1 micron filter. Representatieve
Chang Medium B basaal- en Chang Medium C supplementmonsters
zijn getest op mogelijke bacteriologische
besmetting volgens het steriliteitstestprotocol zoals
beschreven in de huidige USP-steriliteitstest .
Chang Medium ® is een gedeponeerd handelsmerk van
Irvine Scientific.

POLSKI
ZASTOSOWANIE
Pożywka Chang Medium C może być używana w
następujących procedurach:
1. hodowla pierwotna komórek ludzkiego płynu
owodniowego
2. rosnące pasażowane komórek płynu owodniowego
3. hodowla komórek szpiku kostnego
4. biopsja stałej tkanki owodni z kosmówki.
POŻYWKA TA JEST PRZEZNACZONA DO UŻYCIA
Z A R Ó W N O W S Y S T E M A C H O T W A R T Y C H
(RÓWNOWAŻONYCH W ATMOSFERZE 5% CO2),
JAK I ZAMKNIĘTYCH (POSIEWY TRAKTOWANE 5%
CO2 I INKUBOWANE W SZCZELNIE ZAMKNIĘTYCH
NACZYNIACH NA POSIEW).
Środki ostrożności: Nie stosować składników Chang
Medium C po upływie daty ważności
podanej na poszczególnych etykietach.
OPIS PRODUKTU
Pożywka Chang Medium® C została wyprodukowana
dla hodowli pierwotnych komórek ludzkiego płynu
owodniowego do kariotypowania i przeprowadzania innych
przedporodowych testów genetycznych. TA PROCEDURA
ZOSTAŁA ZOPTYMALIZOWANA ZARÓWNO DLA
OTWARTYCH, JAK I ZAMKNIĘTYCH SYSTEMÓW.
PRZECHOWYWANIA I STABILNOŚĆ
Przechowywać zamrożony dodatek pożywki Chang
Medium C w temperaturze poniżej -10°C, liofilizowany
dodatek Chang Medium C w temperaturze od 2°C do 8°C,
podstawową pożywkę w temperaturze od 2°C do 8°C i
całkowitą pożywkę Chang Medium C w temperaturze od
2°C do 8°C. Podstawowa pożywka Chang Medium B nie
może być zamrożona.
Chronić przed światłem fluorescencyjnym.
Data ważności znajduje się na etykietach butelek
poszczególnych składników. Całkowita pożywka Chang
Medium C może być przechowywana w temperaturze od
2°C do 8°C przez 10 dni bez negatywnego wpływu na jej
działanie. Nie zaleca się przechowywania dłużej niż 10 dni.
NIE ZAMRAŻAĆ CAŁKOWITEJ POŻYWKI CHANG
MEDIUM C.
SKŁADNIKI
mg/l
Sole......................................................................7900
Dekstroza.............................................................1400
Aminokwasy..........................................................1000
Polipeptydy...............................................................66
Witaminy...................................................................22
Dezoksyrybonukleozydy...........................................21
Rybonukleozydy.......................................................20
Pirogronian sodu....................................................110
Inne składniki.............................................................8
Hormony i elementy śladowe............................0,0025
Hormony steroidowe.........................................0,0013
Surowica nowonarodzonego cielęcia................6% v/v
Płodowa surowica bydlęca................................6% v/v
ŚRODKI OSTROŻNOŚCI I OSTRZEŻENIA
To urządzenie jest przeznaczone do użycia przez personel
wykwalifikowany w dziedzinie procedur obejmujących
wskazane zastosowanie, dla którego to urządzenie jest
przeznaczone.
PRZYGOTOWANIE CAŁKOWITEJ POŻYWKI
CHANG MEDIUM C.
Dodatek liofilizowany
1. Pozostawić liofilizowany dodatek Chang Medium C do
osiągnięcia temperatury pokojowej.
2. Stosując technikę aseptyczną, dodać 10 ml lub 50 ml
sterylnej wody destylowanej do liofilizatu. Fiolka 10
ml jest przeznaczona dla 90 ml pożywki podstawowej
Chang Medium B; fiolka 50 ml jest przeznaczona dla
450 ml pożywki podstawowej Chang Medium B.
INSTRUKCJE UŻYCIA
pH pożywki używanej do odżywiania hodowli
musi mieścić się w granicach 6,8 – 7,2 (tzn. kolor
pożywki musi być lekko zółtawo-różowy). pH można łatwo
dostosować przez umieszczenie pożywki w inkubatorze
5%-8% atmosferze CO2 z lekko poluzowaną zatyczką.
Końcowe pH musi być 6,8 – 7,2. Zob.
Aby zapoznać się z dodatkowymi szczegółami użycia
tych produktów, każde laboratorium powinno odwołać się
do jego własnych procedur laboratoryjnych i protokołów,
które zostały specjalnie opracowane i zoptymalizowane
dla indywidulanego programu medycznego.
Użycie Chang Medium C do hodowli
pierwotnych: metodologie in situ.
1. Wirować płyn owodniowy przy niskich obrotach, aby
spowodować skupienie komórek.
2. Ponownie zawiesić pelet w małej objętości własnego
płynu owodniowego pacjentki. Na przykład odebrać
10 ml nadsączu z wirowanego płynu owodniowego do
0,5 ml peletu ponad komórkami i ponownie zawiesić.
Dodać wystarczającą ilość pożywki Chang Medium
C do stężonej zawiesiny komórek, aby zapewnić
ostateczną objętość posiewu bakterii na pożywce stałej
wynoszacą 0,5 ml na szkiełko nakrywkowe (razem 4
szkiełka nakrywkowe) lub 2 ml na kolbkę.
3. Inkubować hodowle nienaruszone w temperaturze
37°C, 5% atmosferze CO2.
4. W drugim dniu przepłukać hodowle poprzez dodanie 2
ml Chang Medium C.
5. Po 4 do 5 dniach należy sprawdzić wzrost hodowli.
Hodowle należy odżywiać po zaobserwowaniu wzrostu.
Odżywiac hodowle poprzez odebranie wszystkich
nadsączy i wymianę z 2 ml świeżej pożywki Chang
Medium C. Zaleca się, żeby hodowle były nastepnie
odżywiane co 2 dni.
6. Sprawdzić wzrost hodowli w piątym dniu lub póżniej
i zebrać je jeśli zaobserwowano wystarczającą ilość
kolonii.
7. Najlepsze wyniki otrzymywano, gdy hodowle były
odżywiane pożywką Chang Medium C na dzień przed
zebraniem.
Użycie Chang Medium C do hodowli
pierwotnych: metodologie dla kolb
1. Wirować płyn owodniowy przy niskich obrotach, aby
spowodować skupienie komórek.
2. Ponownie zawiesić pelet w małej objętości własnego
płynu owodniowego pacjentki. Na przykład odebrać 10
ml nadsączu z wirowanego płynu owodniowego do 1 ml
peletu ponad komórkami i ponownie zawiesić. Dodać
4 ml Chang Medium C do całkowitej objętości 5 ml na
kolbę.
3. Inkubować hodowle nienaruszone w temperaturze
37°C, 5% atmosferze CO2.
4. Sprawdzić wzrost dnia 5-ego. Jeżeli zaobserwowano
wystarczający wzrost, zmienić pożywkę na świeżą
Chang Medium C i zebrać.
5. Sprawdzić wzrost hodowli i całkowicie zmieniać
pożywkę codziennie do zaobserwowania wystarczającej
ilości kolonii, gotowej do zbioru.
6. Najlepsze wyniki otrzymywano, gdy hodowle były
odżywiane pożywką Chang Medium C na dzień przed
zebraniem.
UWAGA: W przypadku systemów zamkniętych, przepłukać
każdą kolbę na posiew mieszaniną 5% CO2 - 95%
ROMÂNĂ
INDICAŢIILE UTILIZĂRII MEDIULUI
Chang Medium C poate fi utilizată pentru următoarele
aplicaţii:
1. Cultura primară de lichid de celule amniotice
2. Tranziţia celulelor lichidului amniotic în creştere
3. Cultura celulelor de măduvă osoasă
4. Ţesutul solid de amnion din mostre chorionic villi
ACEST MEDIU POATE FI UTILIZAT PENTRU AMBELE
SISTEME: DESCHISE (CULTURI ECHILIBRATE CU 5%
CO2 ATMOSFERIC) ŞI SISTEME DE CULTURĂ ÎNCHISE
(CULTURI INUNDATE CU 5% CO 2 ŞI INCUBATE CU VASE
DE CULTURĂ ÎNCHISE ERMETIC)
Precauţiunii: A nu se utiliza componenţii Chang Medium
C după data expirări indicată pe etichetele
individuale.
DESCRIEREA PRODUSULUI
Chang Medium ® C este destinată pentru culturile primare de
celule din lichidul amniotic uman pentru utilizarea în caritipuri
şi alte analize prenatale genetice. ACEASTĂ FORMULĂ
POATE FI UTILIZATĂ PENTRU AMBELE SISTEME:
DESCHISE SAU ÎNCHISE.
MODUL DE PĂSTRARE ŞI TERMENUL DE
VALABILITATE
Păstraţi Suplementul congelat de Chang Medium C la sub
-10ºC, Suplementul Chang Medium C Lipolizat de la 2 ºC
până la 8 ºC, Chang Medium B Basal de la 2 ºC până la 8
ºC, şi Chang Medium C complet de la 2 ºC până la 8 ºC.
Chang Medium B Basal nu trebuie congelat.
Feriţi de lumină fluorescentă.
MODUL DE PĂSTRARE ŞI TERMENUL DE
VALABILITATE
Vezi componentele individuale pe eticheta sticlei pentru
date specifice de expirare. Chang Medium C complet se
poate păstra de la 2 ºC până la 8 ºC pe 10 zile înainte de
utilizare fără să afecteze proprietăţile. Nu se recomandă
păstrarea peste 10 zile.
COMPONENŢII
mg/L
Săruri............................................................................. 7900
Dextroză ....................................................................... 1400
Amino Acizi .................................................................... 1000
Polipeptide ...................................................................... 66
Vitamine ........................................................................... 22
Dezoxiribonicleotide ......................................................... 21
Ribonucleotide .................................................................. 20
Piruvat de Sodiu ............................................................... 110
Alte Componente ................................................................. 8
Hormoni şi Elemente Reziduale .................................... 0.0025
Hormoni Steroizi ......................................................... 0.0013
Serum de Viţel nou născut ............................................... 6% v/v
Ser de Bovină fetală ...................................................... 6% v/v
AVERTISMENTE ŞI PRECAUŢIUNI
Acest dispozitiv este destinat să fie utilizat de personalul
specializat în proceduri care includ aplicarea indicată pentru
care a fost creat dispozitivul.
PREPARAREA PENTRU UTILIZARE
Suplimentul Liofilizat
1. Permiteţi Suplimentul Liofilizat Chang Medium C să fie
echilibrat la temperatura camerei.
2. Utilizând technici aseptice, adăugaţi 10 mL sau 50 mL
de apă destilată sterilă la liofilizat. La flaconul de 10 mL
este 90 mL de Chang Medium Basal; la flaconul de 50
mL este 450 mL Chang Medium B Basal.
3. Învârtiţi flaconul cu grijă pentru ca să formeze soluţia.
(NOTĂ: Poate să necesite să fie incubat flaconul la
37 ºC pentru 5 - 10 minute ca să se dizolve complet
suplimentul).
4. Transferaţi aseptic tot conţinutul reconstituit de
Suplimentul Chang Medium C la sticla de Chang
Medium B Basal.
Utilizaţi Chang Medium C pentru Culturi
Primare: Metodologie In Situ
1. Centrifugaţi lichidul amniotic la viteză joasă pentru a
concentra celulele.
2. Resuspendaţi celula pelată într-un volum mic de
lichid amniotic al pacientei. De exemplu, aspiraţi
supernatantul de 10 mL de lichid amniotic la 0.5 mL
deasupra celulei pelate şi resuspendaţi. Adăugaţi
Chang Medium C suficient la concentratul de celulă
suspensie pentru a permite acoperirea finală a
volumului de 0.5 mL pe lamelă (total 4 lamele) sau 2
mL pe flaconaşe.
3. Incubaţi culturile nedistribuite la 37 ºC 5% CO 2
atmosferic.
4. Inundaţi culturile în ziua două prin adăugarea de 2mL
de Chang Medium C.
5. După 4 la 5 zile, culturile trebuie verificată dezvoltarea
culturilor. Culturile trebuie să fie hrănite odată ce se
obsearvă dezvoltarea lor. Hrăniţi culturile prin eliminarea
supernatantului şi înlocuiţi cu 2 mL de Chang Medium
C proaspăt. Este recomandat să fie hrănite culturile în
fiecare 2 zile după aceea.
6. Verificaţi culturile pentru dezvoltare în/sau după ziua
5-a, şi recoltaţi când colonii suficiente sunt observate.
7. Cele mai bune rezultate sunt obţinute când culturile sunt
hrănite cu Chang Medium C ziua înainte de recoltare.
Utilizaţi Chang Medium C pentru Culturi
Primare: Metodologie Flacone
1. Centrifugaţi lichidul amniotic la viteză joasă pentru a
concentra celulele.
2. Resuspendaţi celula pelată într-un volum mic de
lichid amniotic al pacientei. De exemplu, aspiraţi
supernatantul de 10 mL de lichid amniotic la 1 mL
deasupra celulei pelate şi resuspendaţi. Adăugaţi 4 mL
de Chang Medium C la volumul total de 5 mL pe flacon.
3. Incubaţi culturile nedistribuite la 37 ºC 5% CO 2
atmosferic.
4. Verificaţi dezvoltarea în ziua a 5-a. Schimbaţi mediul cu
Chang Medium C proaspăt şi recoltaţi dacă sunt celule
suficiente dezvoltate.
5. Verificaţi culturile pentru dezvoltare şi schimbaţi complet
mediul la două zile după acea până când apar colonii
suficiente gata pentru recoltare.
6. Cele mai bune rezultate sunt obţinute când culturile sunt
hrănite cu Chang Medium C ziua înainte de recoltare.
(NOTĂ: Pentru sisteme închise clătiţi fiecare flacon cu 5%
CO 2 – 95% aer pentru 20 de secunde. Strângeţi capacul
falconului de cultură şi după acea incubaţi la 37 ºC. (Este
recomandat ca să fie ataşată o pipetă sterilă de sursa CO 2
pentru a asigura sterilitatea gazului introdus).
Utilizarea Chang Medium C pentru celule de
tranziţie de lichid amniotic:
Pentru a transfera celulele, trataţi cultura cu tripsină (sau
pronase, etc.) aşa cum aţi proceda normal când celulele
se dezvoltă în mediu convenţional. Oricum, tratamentul
de protează trebuie să fie supravegheat cu mare atenţie.
Celule de lichidul amniotic a celulelor dezvoltate in Chang
Medium C au tendinţă să fie mai sensibile la tratamentul
de protează decât cele dezvoltate în mediul convenţional.
Poate fi necesară modificarea protocolului D-vs. Pentru a
lua aceasta în considerare.
ASIGURAREA CALITĂŢII
STERILITATE
Serul utilizat la producţia Suplimentului de Chang Medium

3. Potrząsnąć delikatnie fiolkę ruchem wirowym, aby
doprowadzić do powstania roztworu. (UWAGA: Może
być konieczne inkubowanie fiolki w temperaturze 37°C
przez 5 do 10 minut, aby całkowicie rozpuścić dodatek).
4. Przenieść aseptycznie całą zawartość rozpuszczonego
dodatku Chang Medium C do butelki z podstawową
pożywką Chang Medium B.
5. Wymieszać całkowitą pożywkę Chang Medium C przez
wirowanie butelki.
6. Dodać L-glutaminę, 10,0 ml/l (200 mM). W razie
potrzeby można zastosować dodatkowe antybiotyki.
Dodatek zamrożony
1. Szybko rozmrozić dodatek Chang Medium C przez
wirowanie fiolki w łaźni wodnej o temperaturze 37°C.
2. Przenieść aseptycznie całą zawartość rozpuszczonego
dodatku Chang Medium C do butelki z podstawowa
pożywką Chang Medium B.
3. Wymieszać calkowitą pożywkę Chang Medium C przez
wirowanie butelki.
4. Dodać L-glutaminę, 10,0 ml/l (200 mM). W razie
potrzeby można zastosować dodatkowe antybiotyki.
ROZDZIAŁ DODATKU CHANG MEDIUM C
NA ALIKWOTY
Dodatek liofilizowany
Jeżeli nie jest możliwe zużycie całkowitej pożywki Chang
Medium C w ciągu 10 dni, można przygotować mniejsze
ilości przez następujące zmodyfikowanie procedury:
1. Rozpuścić liofilizowany dodatek Chang Medium C.
2. Rozdzielić aseptycznie na odpowiednie wielkościowo
alikwoty i zamrozić.
3. Także rozdzielić aseptycznie pożywkę podstawową
Chang Medium B do odpowiadających
alikwotów.
4. Aby przygotować całkowitą pożywkę Chang Medium
C, dodać jeden alikwot rozmrożonego dodatku Chang
Medium C do jednego alikwotu podstawowej pożywki
Chang Medium B.
5. Wymieszać dokładnie.
Dodatek zamrożony
1. Rozmrozić zamrożony dodatek Chang Medium C.
2. Rozdzielić aseptycznie na odpowiednie wielkościowo
alikwoty i ponownie zamrozić. (UWAGA: Fiolka z
dodatkiem zawiera 14 ml lub 70 ml. Rozdzielić po
równo.)
3. Także rozdzielić aseptycznie pożywkę podstawową
Chang Medium B do odpowiadających alikwotów.
4. Aby przygotować całkowitą pożywke Chang Medium
C, dodać jeden alikwot rozmrożonego dodatku Chang
Medium C do jednego alikwotu podstawowej pożywki
Chang Medium B.
5. Wymieszać dokładnie.
powietrze przez 20 minut. Szczelnie zamknąć zatyczki
kolb z posiewami I inkubować w temperaturze 37°C. (Jest
zalecane, aby sterylna pipeta Pasteura została dołączona
do źródła CO2, aby zapewnić sterylność wchodzącego
gazu).
Użycie Chang Medium C do posiewów
wzrastających pasażowanych komórek płynu
owodniowego:
W celu pasażowania komórek poddać hodowle działaniu
trypsyny (lub pronazy, itd.), tak jak postępuje się w
przypadkach gdy komórki wzrastają na konwencjonalnej
pożywce. Jednakże, działanie proteazy należy dokładnie
monitorować. Komórki płynu owodniowego rosnące na
pożywce Chang Medium C są bardziej czułe na działanie
proteazy niż komórki płynu owodniowego rosnące na
pożywce konwencjonalnej. Jeśli wziąć to pod uwagę może
być konieczna modyfikacja protokołu.
KONTROLA JAKOŚCI
STERYLNOŚĆ
Surowica używana do produkcji dodatku Chang Medium
C została przetestowana na zanieczyszczenia wirusowe,
zgodnie z CFR Title 9 Part 113.53. Pożywka ta była
też badana przesiewowo na obecność zanieczyszczeń
mykoplazmą. Pożywka podstawowa Chang Medium B i
dodatek Chang Medium C są sterylizowane przez filtrację
przy zastosowaniu filtra o wielkości porów 0,1 mikrona.
Wybrane próbki pożywki podstawowej Chang Medium
B i dodatku Chang Medium C zostały przetestowane na
obecność zanieczyszczeń bakteriologicznych, zgodnie z
protokołem testowania sterylności, opisanym w bieżącym
teście sterylności USP .
Chang Medium ® jest zarejestrowanym znakiem towarowym
Irvine Scientific.
5. Amestecaţi complet Chang Medium C bine prin
învârtirea sticlei.
6. Adăugaţi Glutamina -L, 10.0 mL/L (200 mM). Pot fi
adăugate antibiotice dacă doriţi.
Suplimentul Congelat
1. Decongelaţi Suplimentul Chang Medium C Congelat
repede prin învârtirea flaconului în baie de apă la 37 ºC.
2. Transferaţi aseptic tot conţinutul reconstituit dezgheţat
de Suplimentul Chang Medium C la sticla de Chang
Medium B Basal.
3. Amestecaţi complet Chang Medium C bine prin
învârtirea sticlei.
4. Adaugaţi Glutamina -L, 10.0 mL/L (200 mM). Pot fi
adăugate antibiotice dacă doriţi.
ALICOTAREA SUPLIMENTULUI DE CHANG
MEDIUM C
Supliment Liofilizat
Dacă nu puteţi să completaţi Chang Medium C în timp de
10 zile puteţi să preparaţi porţiuni mai mici prin următoarele
modificări de procedură:
1. Reconstiuiţi Suplimentul Liofilizat Chang Medium C.
2. Distribuiţi aseptic în porţiuni conveniabile de alicot şi
congelaţi.
3. De asemenea distribuiţi aseptic Chang Medium B Basal
în număr corespunzător de alicoţi.
4. Pentru a prepara Chang Medium C complet, adăugaţi
alicot dezgheţat de Suplimentul Chang Medium C la
alicotul de Chang Medium B Basal.
5. Amestecaţi bine.
Suplimentul Congelat
1. Dezgheţaţi Suplimentul de Chang Medium C congelat.
2. Distribuiţi aseptic în porţiuni conveniabile de alicot şi
recongelaţi. (NOTĂ: Suplimentul de flacon conţine 14
mL sau 70 mL. Distribuiţi egal).
3. De asemenea distribuiţi aseptic Chang Medium B Basal
în număr corespunzător de alicoţi.
4. Pentru a prepara Chang Medium C complet, adăugaţi
alicot dezgheţat din Suplimentul Chang Medium C la
alicotul de Chang Medium B Basal.
5. Amestecaţi bine.
INSTRUCŢIUNI DE UTILIZARE
Ph –ul MEDIULUI UTILIZAT SĂ HRĂNIŢI
CULTURILE TREBUIE SĂ FIE ÎNTRE 6.8—7.2
(de exemplu mediul trebuie să fie galben roz-portocaliu în
culoare). pH-ul poate fi ajustat prin amplasarea mediului în
5% - 8% incubator CO 2 cu capacul puţin slăbit.
Ph –ul final trebuie să fie între 6.8- 7.2.
Pentru detalii suplimentare privind folosirea acestui produs,
fiecare laborator trebuie să consulte protocolul pentru
procedurile utilizate în laborator care sunt specifice şi
optimizate pentru programul medical individual.
C au fost testate pentru contaminări virale pe baza CFR
titlul 9 partea 1113.53. Deasemenea a fost verificat pentru
contaminare cu mycoplasmă. Ambele medii: Chang
Medium B Basal şi Suplimentul Chang Medium C au fost
sterilizate prin filtrare cu un filtru de 0.1 microni. Mostre
reprezentative de Chang Medium B Basal şi Supliment
de Chang Medium C au fost testate pentru posibilitatea
contaminări bacteriologice urmând protocolul curent pentru
testul de sterilizare descris în USP -ul test de sterilitate.
Chang Medium ® este o marcă înregistrată de către Irvine
Scientific.

SVENSKA
AVSEDD ANVÄNDNING
Chang Medium C kan användas för följande tillämpningar:
1. primärodling av celler i amnionvätska
2. odling av celler från amnionvätska i efterföljande
passage
3. odling av benmärgsceller
4. för fast vävnad från chorionvilli-prov.
DETTA MEDIUM HAR UTVECKLATS FÖR ANVÄNDNING
I BÅDE ÖPPNA (KULTURER EKVILIBRERADE I EN 5
% CO2-ATMOSFÄR) OCH SLUTNA ODLINGSSYSTEM
(KULTURER FLÖDADE MED 5 % CO2 OCH INKUBERADE
MED ODLINGSKÄRLEN TÄTT FÖRSLUTNA).
Obs! Använd inte Chang Medium C-komponenterna efter
de utgångsdatum som anges på de individuella etiketterna.
PRODUKTBESKRIVNING
Chang Medium® C har utvecklats för primärodling av celler
i human amnionvätska för karyotypbestämning och andra
antenatala genetiska tester. DENNA NÄRINGSLÖSNING
HAR OPTIMERATS FÖR BÅDE ÖPPNA OCH SLUTNA
SYSTEM.
FÖRVARING OCH HÅLLBARHET
Chang Medium C fryst supplement skall förvaras vid
under –10°C, Chang Medium C frystorkat supplement vid
2–8 ºC, Chang Medium B basaltt vid 2–8 ºC och komplett
Chang Medium C vid 2–8 ºC. Chang Medium B basalt
får inte frysas.
Skyddas från fluorescerande ljus.
Se flasketiketterna på de individuella komponenterna för
specifika utgångsdatum. Komplett Chang Medium C kan
förvaras vid 2–8 ºC i 10 dagar före användning utan att
dess funktion påverkas. Förvaring under längre tid än 10
dagar rekommenderas ej.
KOMPLETT CHANG MEDIUM C FÅR EJ FRYSAS.
KOMPONENTER
mg/L
Salter....................................................................7900
Dextros.................................................................1400
Aminosyror............................................................1000
Polypeptider...............................................................66
Vitaminer...................................................................22
Deoxiribonukleosider................................................21
Ribonukleosider........................................................20
Natriumpyruvat........................................................110
Andra komponenter....................................................8
Hormoner och spårämnen.................................0.0025
Steroider.............................................................0.0013
Serum från nyfödda kalvar................6 % volym/volym
Fetalt bovint serum............................6 % volym/volym
FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER OCH
VARNINGAR
Denna produkt är avsedd att användas av personal med
utbildning i procedurer vilka inkluderar den indicerade
tillämpning för vilken produkten är avsedd.
BEREDNING AV KOMPLETT CHANG MEDIUM
C
Frystorkat supplement
1. Låt Chang Medium C frystorkat supplement uppnå
rumstemperatur.
2. Använd aseptisk teknik för att tillsätta 10 mL eller 50
mL sterilt destillerat vatten till det frystorkade pulvret.
10 mL-ampullen är avsett för 90 mL Chang Medium B
basalt; 50 mL-ampullen är avsedd för 450 mL Chang
Medium B basalt.
3. Snurra ampullen varligt så att allt pulver löses
upp. (OBS! Det kan vara nödvändigt att inkubera
ampullen vid 37 ºC i 5–10 minuter för att helt lösa upp
supplementet).
4. Överför aseptiskt hela mängden rekonstituerat Chang
Medium C-supplement till flaskan med Chang Medium
Användning av Chang Medium C för
primärodling: In situ-metodik
1. Centrifugera amnionväskan på låg hastighet så att
cellerna koncentreras.
2. Resuspendera pelleten i en liten volym av patientens
egen amnionvätska. Aspirera t.ex. supernatanten
från 10 mL centrifugerad amnionvätska till 0,5 mL
ovanför cellpelleten och resuspendera pelleten.
Tillsätt tillräckligt med Chang Medium C till den
koncentrerade cellsuspensionen för att möjliggöra en
slutlig utstryksvolym av 0,5 mL per täckglas (totalt 4
täckglas) eller 2 mL per flaskett.
3. Inkubera kulturerna utan att störa dem vid 37 ºC i 5 %
CO2-atmosfär.
4. Flöda kulturerna på dag 2 genom att tillsätta 2 mL Chang
Medium C.
5. Efter 4-5 dagar bör kulturerna kontrolleras med
avseende på växt. När växt har observerats bör
kulturerna tillföras näring. Tillför näring till kulturerna
genom att avlägsna all supernatant och ersätta den med
2 mL färskt Chang Medium C. Det rekommenderas att
därefter tillföra näring till kulturerna varannan dag.
6. Kontrollera kulturerna med avseende på växt på/efter
dag 5 och skörda dem när tillräckligt med kolonier
observeras.
7. Bästa resultat erhålls när kulturerna tillförs näring med
Chang Medium C dagen innan de skördas.
Användning av Chang Medium C för
primärodling: Metod med flaska
1. Centrifugera amnionväskan på låg hastighet så att
cellerna koncentreras.
2. Resuspendera pelleten i en liten volym av patientens
egen amnionvätska. Aspirera t.ex. supernatanten från
10 mL centrifugerad amnionvätska till 1 mL ovanför
cellpelleten och resuspendera pelleten. Tillsätt 4 mL
Chang Medium C till en total volym på 5 mL per flaska.
3. Inkubera kulturerna utan att störa dem vid 37 ºC i 5 %
CO2-atmosfär.
4. Kontrollera kulturerna med avseende på växt på dag 5.
Byt till färskt Chang Medium C och skörda om tillräcklig
cellväxt observeras.
5. Kontrollera kulturerna med avseende på växt och byt
därefter ut mediet varannan dag tills tillräckligt med
kolonier observeras och är klara att skördas.
6. Bästa resultat erhålls när kulturerna tillförs näring med
Chang Medium C dagen innan de skördas.
OBS! I slutna system flushas varje odlingsflaska med
5 % CO2 – 95 % luft i 20 sekunder. Dra åt locket på
odlingsflaskorna och inlubera dem vid 37 °C. (Det
rekommenderas att ansluta en steril, pluggad pasteurpipett
till CO2-källan för att säkerställa att den inkommande
gasen är steril.).
Användning av Chang Medium C för odling
av celler från amnionvätska i efterföljande
passage:
För passage av cellerna behandlas kulturerna med
trypsin (eller pronas, etc.) på normalt sätt som vid odling
av celler i konventionellt medium. Proteasbehandlingen
bör dock noga övervakas. Celler från amnionvätska som
odlas i Chang Medium C tenderar att vara känsligare för
proteasbehandling än celler från amnionvätska som odlas i
konventionellt medium. Laboratoriets protokoll kan behöva
modifieras för att ta hänsyn till detta faktum.
KVALITETSSÄKRING
STERILITET
EESTI
KASUTUSVALDKOND
Söödet Chang Medium C võib kasutada järgmisteks
rakendusteks:
1. amnionivedeliku rakkude tüvikultuuri kultiveerimine
2. passaaži läbinud amnionivedeliku rakkude
kasvatamine
3. luuüdirakkude kultiveerimine
4. kõldkestahattudest tahkete amnioni kudede
proovide võtmine.
SÖÖDE ON KOOSTATUD KASUTAMISEKS NII LAHTISE
(5% CO2-ATMOSFÄÄRIGA TASAKAALUSTATUD
KULTUURIDEGA) KUI KA KINNISE KULTUURI
SÜSTEEMIDES (5% CO2-GA LOPUTATUD JA TIHEDALT
KORGISTATUD KULTUURIANUMATES KULTUURIDEGA).
Ettevaatust: Ärge kasutage söötme Chang Medium
C komponente pärast iga komponendi etiketile märgitud
kõlblikkusaja lõppu.
TOOTE KIRJELDUS
Sööde Chang Medium® C arendati välja inimese
amnionivedeliku rakkude tüvikultuuri kultiveerimiseks
karüotüübi määramise otstarbel ja muuks antenataalseks
geneetiliseks testimiseks. SEGU ON OPTIMEERITUD
NII LAHTISTES KUI KA KINNISTES MEETODITES
KASUTAMISEKS.
SÄILITAMINE JA STABIILSUS
Hoidke külmutatud lisas Chang Medium C Frozen
Supplement temperatuuril -10ºC, lüofiliseeritud lisand
Chang Medium C Lyophilized Supplement temperatuuril 2ºC
kuni 8ºC, põhisööde Chang Medium B Basal temperatuuril
2ºC kuni 8ºC ja täissööde Chang Medium C temperatuuril
2ºC kuni 8ºC. Põhisöödet Chang Medium B Basal ei tohi
külmutada.
Kaitske fluorestsentsvalguse eest.
Kontrollige iga komponendi pudelil selle komponendi
kõlblikkusaja lõppu. Täissöödet Chang Medium C võib hoida
temperatuuril 2ºC kuni 8ºC 10 päeva enne selle kasutamist
selle funktsiooni kahjustamata. Hoidmine rohkem kui 10
päeva ei ole soovitatav.
ÄRGE KÜLMUTAGE TÄISSÖÖDET CHANG MEDIUM C.
KOMPONENDID
mg/L
Soolad.......................................................7900
Dekstroos..................................................1400
Aminohapped.............................................1000
Polüpeptiidid..................................................66
Vitamiinid.......................................................22
Desoksüribonukleosiidid.................................21
Ribonukleosiidid.............................................20
Naatriumpüruvaat.........................................110
Muud komponendid..........................................8
Hormoonid ja mikroelemendid..................0,0025
Steroidhormoonid....................................0,0013
Vastsündinud vasika seerum....................6% v/v
Veise loote seerum..................................6% v/v
ETTEVAATUSABINÕUD JA HOIATUSED
See seade on ette nähtud kasutamiseks tervishoiutöötajatele,
kes on saanud vastava koolituse, kaasa arvatud selle
seadme kavandatud kasutuse alal.
TÄISSÖÖTME CHANG MEDIUM C
VALMISTAMINE
Lüofiliseeritud lisand
1. Lubage lüofiliseeritud lisandil Chang Medium C
Lyophilized Supplement tasakaalustuda
toatemperatuurini.
2. Aseptilisi tehnikaid kasutades lisage lüofilisaadile 10
mL või 50 mL steriilset destilleeritud vett. 10 mL viaal
on mõeldud 90 mL põhisöötme Chang Medium B Basal
jaoks; 50 mL viaal on mõeldud 450 mL põhisöötme
Chang Medium B Basal jaoks.
3. Keerutage viaali õrnalt, et lahustumine oleks täielik.
Toodete kasutamise üksikasjaliku informatsiooni vajamise
korral peab iga labor kasutama oma labori protseduure
ja protokolle, mis on välja arendatud ja optimeeritud
konkreetselt teie oma meditsiiniprogrammi jaoks.
C h a n g M e d i u m C f o r k a s u t a m i n e
tüvikultuuride kultiveerimiseks: In Situ
meetod
1. Tsentrifuugige amnionivedelik madalal kiirusel, et rakud
kontsentreeruks.
2. Resuspendeerige rakukämp väheses patsiendi oma
amnionivedelikus. Näiteks – aspireerige tsentrifuugitud
10 mL amnionivedeliku supernatant kuni seda on
rakukämbu kohale jäänud 0,5 mL ja resuspendeerige.
Lisage kontsentreeritud rakususpensioonile küllalt
söödet Chang Medium C, et see lubab lõpuks
esemeklaasi iga katteklaasi (kokku 4 katteklaasi) alla
kanda 0,5 mL ehk 2 mL kolbikese kohta.
3. Inkubeerige kultuurid segamatult 5% CO2-atmosfääris
temperatuuril 37 °C.
4. Loputage kultuurid 2. päeval, kasutades selleks 2 mL
söödet Chang Medium C.
5. 4 kuni 5 päeva möödudes kontrollige kultuuride
kasvu. Kasvu täheldamisel tuleb kultuure hakata
söötma. Söötke kultuurid kogu kultuuri supernatandi
eemaldades ja seda asendades 2 mL värske söötmega
Chang Medium C. Pärast seda on soovitatav kultuuride
söötmine iga 2 päeva tagant.
6. Kontrollige kultuuride kasvu 5. päeval või pärast seda ja
piisaval arvul kolooniate tekkimise korral koguge need
kokku.
7. Parimad tulemused saate siis, kui söödate kultuure
söötmega Chang Medium C päev enne nende kokku
kogumist.
Söötme Chang Medium C kasutamine
tüvikultuuride kultiveerimiseks: kolbi meetod
1. Tsentrifuugige amnionivedelik madalal kiirusel, et rakud
kontsentreeruks.
2. Resuspendeerige rakukämp väheses patsiendi oma
amnionivedelikus. Näiteks – aspireerige tsentrifuugitud
10 mL amnionivedeliku supernatant kuni seda on
rakukämbu kohale jäänud 1 mL ja resuspendeerige.
Lisage 4 mL söödet Chang Medium C et igas kolbis
oleks vedeliku lõplik kogus 5mL.
3. Inkubeerige kultuurid segamatult 5% CO2atmosfääris
temperatuuril 37 °C.
4. Kontrollige kultuuride kasvu 5. päeval. Kui täheldate
piisavat rakkude kasvu, vahetage sööde välja värske
söötme Chang Medium C vastu ja koguge kokku.
5. Kontrollige kultuuride kasvu ja vahetage sööde täielikult
välja ülepäeviti pärast seda kuni täheldate piisaval arvul
kolooniaid ja need on kogumiseks valmis.
6. Parimad tulemused saate siis, kui söödate kultuure
söötmega Chang Medium C päev enne nende kokku
kogumist.
MÄRKUS: Kinnises süsteemis loputage iga kultuurikolb 20
sekundit 5% CO2 - 95% õhuga. Tihendage kultuurikolbide
korgid ja inkubeerige temperatuuril 37°C. (Soovitatav on
steriilse tropiga Pasteuri pipeti kinnitamine CO2 allikale, et
tagada sissevoolava gaasi steriilsus.).
Söötme Chang Medium C kasutamine
passaaži läbinud amnionivedeliku rakkude
kultiveerimiseks:
Rakkude passaaži teostamiseks töödelge kultuure
trüpsiiniga (või proteinaasi vms) nagu rakkude harilikult
konventsionaalses söötmes kasvatamise puhul. Töötlemist

B basalt.
5. Blanda det kompletta Chang Medium C väl genom att
snurra flaskan.
6. Tillsätt L-glutamin, 10,0 mL/L (200 mM). Antibiotika kan
tillsättas om så önskas.
Fryst supplement
1. Tina Chang Medium C fryst supplement snabbt genom
att snurra ampullen i ett 37 °C vattenbad.
2. Överför aseptiskt hela mängden tinat Chang Medium
C-supplement till flaskan med Chang Medium B basalt.
3. Blanda det kompletta Chang Medium C väl genom att
snurra flaskan.
4. Tillsätt L-glutamin, 10,0 mL/L (200 mM). Antibiotika kan
tillsättas om så önskas.
ALIKVOTERING AV CHANG MEDIUM
C-SUPPLEMENT
Frystorkat supplement
Om det kompletta Chang Medium C inte kommer att
användas upp inom 10 dagar kan det vara lämpligt att
dela upp det i mindre mängder med hjälp av följande
modifierade procedur:
1. Rekonstituera Chang Medium C frystorkat supplement.
2. Fördela mediet aseptiskt i alikvoter av lämplig storlek
och frys ner dem.
3. Dela även aseptiskt upp Chang Medium B basalt i
motsvarande antal alikvoter.
4. För att bereda komplett Chang Medium C tillsätts en
alikvot tinat Chang Medium C-supplement till en alikvot
av Chang Medium B basalt.
5. Blanda väl.
Fryst supplement
1. Tina Chang Medium C fryst supplement.
2. Fördela mediet aseptiskt i alikvoter av lämplig storlek
och frys ner dem på nytt. (OBS! Ampullen med
supplement innehåller 14 mL eller 70 mL. Fördela
jämnt.)
3. Dela även aseptiskt upp Chang Medium B basalt i
motsvarande antal alikvoter.
4. För att bereda komplett Chang Medium C tillsätts en
alikvot tinat Chang Medium C-supplement till en alikvot
av Chang Medium B basalt.
5. Blanda väl.
BRUKSANVISNING
pH I DET MEDIUM SOM ANVÄNDS FÖR
NÄRINGSTILLFÖRSEL TILL KULTURERNA
MÅSTE VARA MELLAN 6,8,8–7,2 (dvs. mediet
måste ha svagt gulaktig-laxfärg). pH kan enkelt justeras
genom att mediet placeras i en 5–8 % CO2-inkubator med
locket lätt lossat.
Det slutliga pH måste vara 6,8–7,2.
För ytterligare information om användning av dessa
produkter bör varje laboratorium konsultera sina egna
laboratorieförfaranden och -protokoll som utvecklats och
optimerats särskilt för de egna medicinska programmen.
Det serum som används vid framställningen av Chang
Medium C-supplement har testats för viral kontamination
enligt CFR titel 9 del 113.53. Det har också screenats för
kontamination av mykoplasma. Både Chang Medium B
basalt och Chang Medium C-supplement har steriliserats
genom filtrering genom ett 0,1 mikron-filter. Representativa
prover av Chang Medium B basalt och Chang Medium
C-supplement testas för bakteriell kontamination enligt
det sterilitetstestningsprotokoll som beskrivs i aktuell
USP Sterility test (sterilitetstest enligt United States
Pharmacopeia).
Chang Medium ® är ett registrerat varumärke som tillhör
Irvine Scientific.
(MÄRKUS: Viaali inkubeerimine 5 kuni 10 minutit
temperatuuril 37 ºC võib osutuda vajalikuks, et lisand
täielikult lahustuks).
4. Aseptiliselt viige kogu rekonstitueeritud lisand Chang
Medium C Supplement põhisöödet Chang Medium B
Basal sisaldavasse pudelisse.
5. Segage täissööde Chang Medium C pudelit keerutades
korralikult läbi.
6. Lisage L-glutamiin, 10,0 mL/L (200 mM). Soovi korral
võite lisada antibiootikume.
Külmutatud lisand
1. Kiirelt sulatage külmutatud lisand Chang Medium C
Frozen Supplement viaali 37°C vesivannis keerutades.
2. Aseptiliselt viige kogu sulatatud lisand Chang Medium
C Supplement põhisöödet Chang Medium B Basal
sisadavasse pudelisse.
3. Segage täissööde Chang Medium C pudelit keerutades
korralikult läbi.
4. Lisage L-glutamiin, 10,0 mL/L (200 mM). Soovi korral
võite lisada antibiootikume.
LISANDI CHANG MEDIUM C SUPPLEMENT
ALIKVOOTIDE VÕTMINE
Lüofiliseeritud lisand
Kui teil ei ole võimalik täissöödet Chang Medium C 10
päeva jooksul ära kasutada, võib-olla soovite valmis
segada väiksemaid koguseid järgmise modifitseeritud
protseduuri järgi:
1. Rekonstitueerige lüofiliseeritud lisand Chang Medium
C Lyophilized Supplement.
2. Jagage aseptiliselt sobiva suurusega alikvootideks ja
külmutage.
3. Jagage aseptiliselt ka põhisööde Chang Medium B
Basal sama paljudeks alikvootideks.
4. Täissöötme Chang Medium C valmistamiseks lisage
üks alikvoot sulatatud lisandit Chang Medium C
Supplement ühele alikvoodile põhisöödet Chang
Medium B Basal.
5. Segage hästi.
Külmutatud lisand
1. Sulatage külmutatud lisand Chang Medium C Frozen
Supplement.
2. Jagage aseptiliselt sobiva suurusega alikvootideks ja
külmutage uuesti. (MÄRKUS: Lisandiviaal sisaldab 14
mL või 70 mL. Jagage võrdeteks osadeks.)
3. Jagage aseptiliselt ka põhisööde Chang Medium B
Basal sama paljudeks alikvootideks.
4. Täissöötme Chang Medium C valmistamiseks lisage
üks alikvoot sulatatud lisandit Chang Medium C
Supplement ühele alikvoodile põhisöödet Chang
Medium B Basal.
5. Segage hästi.
KASUTUSJUHISED
Kultuuride söötmiseks kasutatava söötme
pH peab olema 6,8...7,2 (st sööde peab olema
kergelt kollakat lõhevärvi). pH-d saab kergesti korrigeerida
lõdvalt korgistatud söötme asetamisega 5%...8% CO2
inkubaatorisse.
Lõplik pH peab olema 6,8...7,2.
proteinaasiga tuleb aga hoolikalt jälgida. Söötmes Chang
Medium C kasvatatud amnionivedeliku rakud kipuvad
olema tundlikumad proteinaasiga töötlemisele kui tavalises
söötmes kasvatatud amnionivedeliku rakud. Seda arvesse
võttes võib protokolli muutmine osutuda vajalikuks.
KVALITEEDI GARANTII
STERIILSUS
Lisandi Chang Medium C Supplement tootmisel kasutatud
seerumit on testitud viirusega kontaminatsiooni suhtes
vastavalt koodeksi CFR 9. peatüki osale 113.53. Seda
on skriinitud ka mükoplasmaga kontaminatsiooni suhtes.
Põhisööde Chang Medium B Basal ja lisand Chang
Medium C Supplement on steriliseeritud kasutades 0,1
mikronilist filtrit. Põhisöötme Chang Medium B Basal ja
lisandi Chang Medium C Supplement proovid on testitud
võimaliku bakteriaalse saastatuse suhtes järgides kehtivas
USP steriilsuse testis toodud steriilsuse kontrollimise
protokolli.
Chang Medium ® on firma Irvine Scientific registreeritud
kaubamärk.

MAGYAR
RENDELTETÉS
A Chang Medium C használható a következő
alkalmazásokban:
1. magzatvíz sejtjeinek primer tenyészete
2. passzált magzatvíz sejtek növekedése
3. csontvelő sejtek tenyészete
4. szilárd amnionszövet a chorionboholy mintából
EZT A MÉDIUMOT MIND NYITOTT (TENYÉSZET
EKVILIBÁRLTATVA VAN 5%-OS CO2 ATMOSZFÉRÁBAN)
MIND PEDIG ZÁRT KULTÚRÁS RENDSZEREKRE
(TENYÉSZET ELÁRASZTVA 5% CO2-VEL ÉS INKUBÁLVA
SZOROSAN LEZÁRT TENYÉSZTŐEDÉNYBEN)
TERVEZTÉK.
Figyelmeztetés: Ne használja Chang Medium C
komponenseit az egyes adott címkéken feltüntetett lejárati
határidőn túl.
TERMÉKLEÍRÁS
A Chang Medium® C-t humán magzatvíz sejtek primer
tenyészetéhez tervezték kariotipizálásban és más
antenatális genetikai vizsgálatokban való alkalmazásnál.
EZT A FORMULÁT OPTIMALIZÁLTÁK NYITOTT ÉS ZÁRT
RENDSZERRE EGYARÁNT.
TÁROLÁS ÉS STABILITÁS
Tárolja a Chang Medium C fagyasztott kiegészítőt -10°C,
Chang Medium C liofilizált kiegészítőt 2°C és 8°C között,
Chang Medium B alapot 2°C és 8°C között, Chang Medium
C-t 2°C és 8°C között. A Chang Medium B alapot nem
szabad fagyasztani!
Védje a fluoreszcens fénytől.
Nézze meg az adott komponens üvegének címkéjén a
specifikus lejárati időpontot. A teljes Chang Medium C
10 napig tárolható a használat előtt 2°C és 8°C között
anélkül, hogy az hatással lenne a működésére. 10 napon
túli tárolása nem javasolt.
NE FAGYASSZA A TELJES CHANG MEDIUM C-T!
ALKOTÓK
mg/ml
sók........................................................................7900
dextróz..................................................................1400
aminosavak...........................................................1000
polipeptidek..............................................................66
vitaminok..................................................................22
dezoxi-ribonukleiozidok............................................21
ribonukleozidok.........................................................20
nátrium-piruvát........................................................110
más alkotók................................................................8
hormonok és nyomelemek................................0.0025
szteroid hormonok..............................................0.0013
újszülött borjúszérum........................................6% v/v
magzati marhaszérum.......................................6% v/v
ÓVINTÉZKEDÉSEK ÉS FIGYELMEZTETÉSEK
Ezt az eszközt úgy tervezték, hogy használata az eszköz
tervezett alkalmazását is magába foglaló eljárásokban
kiképzett személyzet által történjen.
BEREDNING FÖR ANVÄNDNING
Liofilizált kiegészítő
1. Hagyja a Chang Medium C liofilizát kiegészítőt
egyensúlyba kerülni szobahőmérsékleten.
2. Aszeptikus technikát alkalmazva adjon 10 ml vagy 50
ml steril desztillált vizet a liofilizátumhoz. A 10 ml fiola
a 90 ml Chang Medium B alaphoz, az 50 ml fiola a 450
ml Chang Medium B alaphoz való.
3. Rázza a fiolát óvatosan a teljes feloldás eléréséhez.
(MEGJEGYZÉS: Lehet, hogy 5 -10 percig inkubálni
kell a fiolát 37 °C-on ahhoz, hogy a kiegészítő teljesen
feloldódjon.)
4. Aszeptikusan vigye át az újra összeállított Chang
Medium C kiegészítő teljes tartalmát a Chang Medium
B alap üvegébe.
Chang Medium C használata primer
tenyészethez: In Situ módszerek:
1. Centrifugálja a magzatvizet kis sebességgel a sejtek
koncentrálására.
2. Szuszpendálja újra a pelletet a beteg saját
magzatvizének kis térfogatával. Például, szívja le
a 10 ml centrifugált magzatvizet a sejtpellet felett
0,5 ml-re és szuszpendálja újra. Adjon megfelelő
mennyiségű Chang Medium C-t a koncentrált sejt
szuszpenzióhoz, szánjon 0,5 ml végtérfogatot a
bevonathoz fedőlemezenként ( összesen 4 fedőlemez)
vagy 2 ml-t üvegcsékként.
3. Inkubálja a tenyészeteket nyugalomban, 37°C-on 5%
CO2 atmoszférában.
4. Árassza el a tenyészetet a 2. napon 2 ml Chang Medium
C hozzáadásával.
5. 4-5 nap eltelte után ellenőrizni kell a tenyészeteket
növekedését. A tenyészeteket táplálni kell, ha
növekedést tapasztalt. Táplálja a tenyészetet úgy,
hogy eltávolít minden felülúszót és helyettesíti 2 ml
friss Chang Medium C-vel. Tanácsos a tenyészeteket
ezután minden 2 napban táplálni.
6. Ellenőrizze a tenyészeteket növekedését az 5. napon
vagy 5 nap után, és végezze el a begyűjtést, ha a
kolóniák megfelelőek.
7. A legjobb eredményt akkor kapja, ha a tenyészetet
a begyűjtést megelőző napon Chang Medium C-vel
táplálta.
Chang Medium C alkalmazása primer
tenyészeteknél: Lombik módszerek
1. Centrifugálja a magzatvizet kis sebességgel a sejtek
koncentrálására.
2. Szuszpendálja újra a pelletet a beteg saját
magzatvizének kis térfogatával. Például, szívja le a
10 ml centrifugált magzatvizet a sejtpellet felett 1ml-re
és szuszpendálja újra. Adjon 4 ml Chang Medium C-t
lombikonként 5 ml össztérfogathoz.
3. Inkubálja a tenyészeteket nyugalomban 37°C-on 5%
CO2 atmoszférában.
4. Ellenőrizze a növekedést az 5. napon. Cserélje ki
a médiumot friss Chang Medium C-re és végezzen
begyűjtést, ha megfelelő sejtnövekedést tapasztalt.
5. Ellenőrizze a tenyészeteket növekedését és cserélje
ki teljesen a médiumot minden második nap ezután
addig, amíg megfelelő kolóniákat nem észlel és kész
a begyűjtésre.
6. A legjobb eredményeket akkor éri el, ha a tenyészetet
a begyűjtést megelőző napon Chang Medium C-vel
táplálta.
MEGJEGYZÉS: Zárt rendszerhez, öblítsen át minden
tenyésztőedényt 5% CO2- 95% levegővel 20 másodpercre.
Zárja le a tenyésztő lombikok kupakját és inkubálja azokat
37 °C-on. (Ajánlatos egy steril bedugott pasteur pipettát
csatlakoztatni a CO2 forráshoz a bejövő gáz sterilitásának
biztosítására).
Chang Medium C alkalmazása passzált
magzatvíz sejtek növekedésére:
A sejtpasszáláshoz kezelje a kultúrát tripszinnel
(vagy pronázzal, stb.) ahogy normálisan teszi, amikor
hagyományos közegben tenyészti a sejteket. A proteáz
kezelést azonban szigorúan monitorozni kell. A magzatvíz
sejtek növekedése a Chang Medium C-ben érzékenyebbnek
tűnik a proteáz kezelésre, mint a hagyományos mediumban
növelt magzatvíz sejteké. Lehetséges, hogy meg kell
változtatnia a protokollját ennek figyelembevételére.
LIETUVIŲ K.
REKOMENDUOJAMA TAIKYMO SRITIS
Chang Medium C terpė gali būti naudojama pagal tokią
paskirtį:
1. pirminės vaisiaus vandenų ląstelių kultūros
auginimas
2. vaisiaus vandenų persėtos kultūros ląstelių
auginimas
3. kaulų čiulpų ląstelių kultūros auginimas
4. kietųjų amniono audinių kultūrų auginimas iš
chorionų gaurelių mėginių.
ŠI TERPĖ SUKURTA NAUDOTI TIEK ATVIROSIOSE
( K U LT Ū R O S P U S I A U S V I R I N A M O S 5 % C O 2
ATMOSFEROJE), TIEK UŽDAROSIOSE KULTIVAVIMO
SISTEMOSE (KULTŪROS VEIKIAMOS 5% CO2 IR
INKUBUOJAMOS SANDARIUOSE KULTIVAVIMO
INDUOSE).
Perspėjimas: Chang Medium C komponentų naudoti
negalima pasibaigus atskirose etiketėse nurodytam
tinkamumo laikui.
PRODUKTO APRAŠYMAS
Chang Medium ® C terpė buvo sukurta pirminės žmogaus
vaisiaus vandenų ląstelių kultūros auginimui atliekant
kariotipavimo ir kitus antenatalinius genetinius tyrimus. ŠI
RECEPTŪRA YRA OPTIMIZUOTA TIEK ATVIROSIOMS,
TIEK UŽDAROSIOMS KULTIVAVIMO SISTEMOMS.
LAIKYMO SĄLYGOS
Chang Medium C šaldytą priede mažesnis kaip -10 °C
temperatūroje, Chang Medium C liofilizuotą priedą laikyti
2 °C–8 °C temperatūroje, Chang Medium B bazinę terpę
laikyti 2 °C–8 °C temperatūroje, o kompleksinę Chang
Medium C terpę laikyti 2 °C–8 °C temperatūroje. Chang
Medium B bazinės terpės negalima užšaldyti.
Saugoti nuo fluorescencinių spindulių.
STABILUMAS
Specifinis tinkamumo laikas nurodytas atskirų komponentų
butelių etiketėse. Prieš naudojimą kompleksinę Chang
Medium C terpę galima laikyti 2 °C–8 °C temperatūroje 10
dienų nepakenkiant jos funkcinėms savybėms. Laikyti ilgiau
kaip 10 dienų nerekomenduojama.
KOMPLEKSINĖS CHANG MEDIUM C TERPĖS NEGALIMA
UŽŠALDYTI.
SUDĖTIS
mg/l
Druskos................................................................7900
Dekstrozė.............................................................1400
Aminorūgštys.......................................................1000
Polipeptidai................................................................66
Vitaminai...................................................................22
Deoksiribonukleozidai...............................................21
Ribonukleozidai........................................................20
Natrio piruvatas.......................................................110
Kiti sudėtiniai komponentai.........................................8
Hormonai ir mikroelementai...............................0,0025
Steroidiniai hormonai.........................................0,0013
Atsivesto veršiuko serumas...............................6% v/v
Galvijų vaisiaus serumas...................................6% v/v
ATSARGUMO PRIEMONĖS IR ĮSPĖJIMAI
Šis prietaisas yra skirtas naudoti darbuotojams,
apmokytiems atlikti procedūras, susijusias su prietaiso
taikymu pagal numatytą paskirtį.
KOMPLEKSINĖS CHANG MEDIUM C
TERPĖS RUOŠIMAS
Liofilizuotas priedas
1. Leiskite Chang Medium C liofilizuotam priedui kambario
temperatūroje nusistovėti iki pusiausvirosios būsenos.
2. Laikydamiesi aseptikos reikalavimų, į liofilizatą įpilkite
10 ml arba 50 ml sterilaus distiliuoto vandens. 10 ml
buteliukas yra skirtas 90 ml Chang Medium B bazinei
terpei; ml buteliukas yra skirtas 450 ml Chang Medium
B bazinei terpei.
Chang Medium C terpės naudojimas
pirminėms kultūroms: in situ metodai
1. Vaisiaus vandenis centrifuguokite mažu greičiu
koncentruotai ląstelių masei gauti.
2. Nusėdusias ląsteles resuspenduokite nedideliame
pačios pacientės vaisiaus vandenų kiekyje. Pavyzdžiui,
nusiurbkite 10 ml centrifuguotų vaisiaus vandenų
supernatantą palikdami 0,5 ml virš ląstelių nuosėdų
ir resuspenduokite. Į koncentruotą ląstelių suspensiją
pridėkite pakankamai Chang Medium C terpės, kad
galutinis po kiekvienos plokštelės dengiamuoju stikleliu
tenkantis tūris būtų 0,5 ml (iš viso 4 dengiamieji stikleliai)
arba po 2 ml vienam flakonėliui.
3. Kultūras netrukdomai inkubuokite 37 °C temperatūroje
5% CO2 atmosferoje.
4. 2-ą dieną ant kultūrų užliekite po 2 ml Chang Medium
C terpės.
5. Praėjus 4–5 dienoms, reikia patikrinti kultūrų augimą.
Pastebėjus augimą, kultūras reikia pamaitinti. Kultūras
maitinkite nusiurbdami visą virš pasėlio susidariusį
supernatantą ir jį pakeisdami 2 ml šviežios Chang
Medium C terpės. Po to kultūras rekomenduojama
maitinti kas 2 dienas.
6. 5-ą dieną arba po 5 dienų patikrinkite kultūrų augimą ir
aptikę pakankamai kolonijų ląsteles surinkite.
7. Geriausių rezultatų pasiekiama Chang Medium C terpe
pasėlius maitinant dieną prieš ląstelių surinkimą.
Chang Medium C terpės naudojimas
pirminėms kultūroms: kultivavimo flakonuose
metodai
1. Vaisiaus vandenis centrifuguokite mažu greičiu
koncentruotai ląstelių masei gauti.
2. Nusėdusias ląsteles resuspenduokite nedideliame
pačios pacientės vaisiaus vandenų kiekyje. Pavyzdžiui,
nusiurbkite 10 ml centrifuguotų vaisiaus vandenų
supernatantą palikdami 1 ml virš ląstelių nuosėdų ir
resuspenduokite. Pridėkite 4 ml Chang Medium C
terpės, kad bendras tūris flakone būtų 5 ml.
3. Kultūras netrukdomai inkubuokite 37 °C temperatūroje
5% CO2 atmosferoje.
4. 5-ą dieną patikrinkite augimą. Terpę pakeiskite šviežia
Chang Medium C terpe ir pastebėję pakankamai
priaugusių ląstelių jas surinkite.
5. Po to kas antrą dieną patikrinę kultūrų augimą visiškai
pakeiskite terpę, kol bus priaugę pakankamai kolonijų,
kurias galima surinkti.
6. Geriausių rezultatų pasiekiama Chang Medium C terpe
pasėlius maitinant dieną prieš ląstelių surinkimą.
PASTABA: Kultivuodami uždarosiose sistemose,
kiekvieną pasėlio flakonėlį 20 sekundžių eksponuokite
5% CO2 ir 95% oro mišiniu. Sandariai prisukę dangtelius,
flakonus su kultūromis inkubuokite 37 °C temperatūroje.
(Rekomenduojama prie CO2 šaltinio prijungti sterilią Pastero
pipetę su kamštuku, užtikrinant įeinančių dujų sterilumą.)
Chang Medium C terpės naudojimas vaisiaus
vandenų persėtų kultūrų ląstelėms auginti:
Norėdami persėti ląsteles, kultūras apdorokite tripsinu (arba
pronaze ar kt.), kaip kad paprastai darytumėte augindami
ląsteles įprastinėje terpėje. Visgi apdorojimo proteazėmis
procesą būtina atidžiai stebėti. Chang Medium C terpėje
augintos vaisiaus vandenų ląstelės turi didesnį polinkį
jautriau reaguoti į apdorojimą proteazėmis negu įprastinėje
terpėje augintos vaisiaus vandenų ląstelės. Į tai atsižvelgiant
gali prireikti pakoreguoti tyrimo metodo protokolą.
KOKYBĖS LAIDAVIMAS

5. Keverje össze a teljes Chang Medium C-t alaposan az
üveg rázogatásával.
6. Adjon hozzá 10 ml/l (200 mM ) L-glutamint. Szükség
szerint antibiotikum adható hozzá.
Fagyasztott kiegészítő
1. Olvassza fel Chang Medium C fagyasztott kiegészítőt
a fiolát 37°C vízfürdőben körkörösen mozgatva.
2. Aszeptikusan vigye át a felengedett Chang Medium
C kiegészítő teljes tartalmát Chang Medium B alap
üvegébe.
3. Keverje össze a teljes Chang Medium C-t jól, az üveg
körkörös mozgatásával.
4. Adjon hozzá 10,0 ml/l (200mM) L-glutamint. Szükség
szerint antibiotikum adható hozzá.
CHANG MEDIUM C KIEGÉSZITŐ
ALIQUOTOLÁSA
Liofilizált kiegészítő
Ha nem tudja a teljes Chang Medium C-t 10 napon belül
felhasználni, célszerű kisebb mennyiségeket készíteni,
követve ezt a módosított eljárást:
1. Rekonstruálja a Chang Medium C liofilizált kiegészítőt.
2. Ossza szét aszeptikusan megfelelő méretű aliquotokra
és fagyassza le újra.
3. Szintén aszeptikusan, ossza szét Chang Medium B
alapot a megfelelő számú aliquotra.
4. A teljes Chang Medium C elkészítéséhez adjon egy
aliquot felengedett Chang Medium C kiegészítőt egy
aliquot Chang Medium B alaphoz.
5. Keverje össze jól.
Fagyasztott kiegészítő
1. Olvassza fel Chang Medium fagyasztott kiegészítőt.
2. Ossza szét aszeptikusan megfelelő méretű aliquotokra
és fagyassza le újra. (MEGJEGYZÉS: A kiegészítő fiola
14 ml vagy 70 ml-t tartalmaz. Ossza egyenlő részekre.)
3. Szintén aszeptikusan, ossza szét Chang Medium B
alapot a megfelelő számú aliquotra.
4. A teljes Chang Medium C elkészítéséhez adjon egy
felengedett Chang Medium C kiegészítőt egy aliquot
Chang Medium B alaphoz.
5. Keverje össze jól.
HASZNÁLATI UTASITÁS
A TENYÉSZETEKET TÁPLÁLÓ MÉDIUM pH
–JA 6,8 ÉS 7,2 KÖZÖTT KELL LEGYEN (azaz
a médium gyengén sárgás lazacszínű kell legyen). A pH
könnyen beállítható a médiumot 5%-8% CO2-s inkubátorba
helyezve, meglazított fedővel.
A végső pH 6,8-7,2 között kell, hogy legyen.
E termékek használatára vonatkozóan a további részletekért
minden laboratóriumnak a sajátos orvosi programjukra
speciálisan kifejlesztett és optimalizált saját laboratóriumi
eljárásaikban és protokolljaikban kell utánanéznie.
MINŐSÉGBIZTOSITÁS
STERILITÁS
A Chang Medium kiegészítő készítésekor használt szérumot
vizsgálták vírus szennyezésre CFR 9. /113.53. szerint.
Ellenőrizték Mycoplasma szennyezére is. Mind Chang
Medium B alap, mind pedig Chang Medium C kiegészítő
sterilizált, 0,1 mikronos szűrőn szűrt. A Chang Medium
B alap és a Chang Medium C kiegészítő reprezentatív
mintáit vizsgálták lehetséges baktérium szennyezettségre
a jelenlegi USP sterilitási tesztben leirt sterilitási
tesztprotokoll szerint.
Chang Medium ® az Irvine Scientific bejegyzett márkaneve.
3. Atsargiai pasukdami buteliuką sumaišykite visą tirpalą.
(PASTABA: Buteliuką gali prireikti 5–10 minučių
inkubuoti 37 °C temperatūroje, kol priedas visiškai
ištirps).
4. Aseptiniu būdu visą atskiesto Chang Medium C priedo
turinį perpilkite į Chang Medium B bazinės terpės butelį.
5. Sukdami butelį gerai sumaišykite kompleksinę Chang
Medium C terpę.
6. Pridėkite L-glutamino, 10,0 ml/l (200 mM). Pageidaujant
galima papildyti antibiotikais.
Šaldytas priedas
1. Chang Medium C šaldytą priedą greitai atitirpinkite
sukiodami buteliuką 37 °C vandens vonelėje.
2. Aseptiniu būdu visą atšildyto Chang Medium C priedo
turinį perpilkite į Chang Medium B bazinės terpės butelį.
3. Sukdami butelį gerai sumaišykite kompleksinę Chang
Medium C terpę.
4. Pridėkite L-glutamino, 10,0 ml/l (200 mM). Pageidaujant
galima papildyti antibiotikais.
CHANG MEDIUM C PRIEDO DALIJIMAS Į
PORCIJAS
Liofilizuotas priedas
Jei negalėsite kompleksinę Chang Medium C terpę
sunaudoti per 10 dienų, gali būti tikslinga pasigaminti
mažesnius kiekius pagal toliau pateikiamą modifikuotą
procedūrą.
1. Atskieskite Chang Medium C liofilizuotą priedą.
2. Aseptiniu būdu išpilstykite reikiamo dydžio alikvotinėmis
dalimis ir jas užšaldykite.
3. Taip pat aseptiniu būdu į atitinkamą skaičių alikvotinių
dalių išpilstykite Chang Medium B bazinę terpę.
4. Ruošdami kompleksinę Chang Medium C terpę, į vieną
Chang Medium B bazinės terpės porciją dėkite vieną
atšildyto Chang Medium C priedo porciją.
5. Gerai sumaišykite.
Šaldytas priedas
1. Atšildykite Chang Medium C šaldytą priedą.
2. Aseptiniu būdu išpilstykite reikiamo dydžio alikvotinėmis
dalimis ir vėl užšaldykite. (PASTABA: Priedo buteliuke
yra 14 ml arba 70 ml tirpalo. Paskirstykite vienodai.)
3. Taip pat aseptiniu būdu į atitinkamą skaičių alikvotinių
dalių išpilstykite Chang Medium B bazinę terpę.
4. Ruošdami kompleksinę Chang Medium C terpę, į vieną
Chang Medium B bazinės terpės porciją dėkite vieną
atšildyto Chang Medium C priedo porciją.
5. Gerai sumaišykite.
NAUDOJIMO NURODYMAI
Kultūroms maitinti naudojamos terpės
rūgštingumas turi būti pH 6,8–7,2 (t. y. terpė turi
būti šiek tiek gelsvai lašišinės spalvos). pH galima lengvai
pakoreguoti terpę palaikant 5%–8% CO2 inkubatoriuje su
šiek tiek atlaisvintu dangteliu.
Galutinė pH reikšmė turi būti 6,8–7,2.
Dėl išsamesnių šių produktų naudojimo gairių kiekviena
laboratorija turi žiūrėti savo vidaus darbo tvarkos taisykles ir
metodinius nurodymus, specialiai parengtus ir optimizuotus
pagal atskiros medicininės programos nuostatas.
STERILUMAS
Serumas, naudotas gaminant Chang Medium C priedą,
virusinių užkratų atžvilgiu yra ištirtas pagal 9 CFR
kodekso 113.53 dalies standartus. Taip pat patikrinta, ar jis
neužkrėstas mikoplazmomis. Tiek Chang Medium B bazinė
terpė, tiek Chang Medium C priedas yra sterilizuoti filtruojant
per 0,1 mikronų filtrus. Chang Medium B bazinės terpės ir
Chang Medium C priedo tipiniai pavyzdžiai yra išbandyti
bakteriologinio užkrėtimo rizikai nustatyti pagal šiuo metu
patvirtintą Jungtinių Valstijų farmakopėjos (USP) sterilumo
bandymų protokolą .
Chang Medium ® yra „Irvine Scientific“ bendrovės
registruotas prekės ženklas.