Chang Medium® D with Gentamicin For Human Amniotic Fluid Cells

2. Aseptisch in gewünschte aliquots aufteilen undeinfrieren.3. Scongelare le aliquote in un bagno di acqua a 37° Cquando si devono usare.DEUTSCHITALIANOBestimmungszweckChang Medium D mit Gentamicin kann für folgendeMethoden eingesetzt werden:1. Primär Kultur von Amnionzellen2. Kultur passagierter Amnionzellen3. Kultur von Knochenmarkszellen4. Amniongewebe aus Chorion VilliProbenentnahme.Dieses Medium wurde hergestellt für die verwendungin CO 2inkubatoren (Kulturen equilibriert mit 5%-8%CO 2atmosphäre). Siehe Gebrauchshinweise.Der pH Wert muss 6.8-7.2 betragen.Achtung: Chang Medium D mit Gentamicin sollte nichtüber das verfallsdatum (siehe Etikett) hinausverwendet werden.ProduktbeschreibungChang Medium ® D mit Gentamicin wird verwendet zurPrimärkultur von humanen Amnionzellen, Karyotypingund anderen pränatalen genetischen Testmethoden. DieZusammensetzung wurde sowohl für Flaschen- als auchfür In Situ-Methoden optimiert.Lagerbedingungen und StabilitätChang Medium D mit Gentamicin gefroren bei -10° C.Ungebrauchtes Chang Medium D mit Gentamicin kannwieder eingefroren oder bei 2° C to 8° C im Kühlschrankaufbewahrt werden.Vor fluoreszierendem Licht schützen.Das Verfallsdatum steht chargenspezifisch auf demFlaschenetikett. Chang Medium D mit Gentamicin kannmaximal 2 mal wieder eingefroren werden oder bei 2°C bis 8° C für 14 Tage ohne Qualitätsverlust aufbewahrtwerden. Eine längere Kühlschranklagerung kann nichtempfohlen werden.BESTANDTEILEmg/LSalze ...................................................................8515Dextrose........................................................................880Aminosäuren.................................................................804L-Glutamin ....................................................................257Polypeptides..................................................................189Vitamine ..........................................................................61Deoxyribonukleoside ......................................................35Ribonukleoside ...............................................................35Natrium Pyruvat ..............................................................97Gentamicin ………………………………………………... 50andere Komponenten ……………………………………... 9Steroid Hormone ……………………………………. 0.0009Bovine Serum Proteine …………………………… 12% v/vPhenol Rot ......................................................................10Vorsichtsmassnahmen undWarnungenDiese Vorrichtung ist für die Anwendung durch Personalvorgesehen, das in Verfahren ausgebildet wurde, welchedie für diese Vorrichtung angegebene zugelasseneAnwendung beinhalten.Der pH des medium mit dem die Kulturengefüttert werden, muss im Bereich 6.8–7.2liegen. (d.h. das Medium sollte eine leichte gelb-rosaFärbung haben). Der pH kann einfach eingestellt werden,indem das Medium mit leicht geöffnetem Verschluss für ca.30 Minuten in einen 5%-8% CO 2Inkubator gestellt wird.Achtung: in Chang Medium D mit Gentamicin bilden sichgewöhnlich Kalzium Oxalat Kristalle. Das Vorhandenseindieser Kristalle hat bislang keinen mindernden Einfluss aufdas Zellwachstum gezeigt.Chang Medium ® D mit Gentamicin enthaeltdas antibiotische Gentamicin. PassendeVorsichtsmassnahmen sollten verwendetwerden, um zu sichern, dass der Patient nichtzu diesem Antibiotikum sensibilisiert wird.QUALITAETSSICHERUNGSTERILITÄTSerum für die Produktion von Chang Medium D mitGentamicin wurde auf virale kontamination nach CFRTitle 9 Part 113.53 und mycoplasma kontaminationgetestet. Chang Medium D mit Gentamicin wurdesterilisiert durch Filtration mit einem 0.1 µ filter. Probenvon Chang Medium D mit Gentamicin sind auf möglichebakterielle kontamination getestet nach dem SterilitätsTest Protokoll beschrieben unter Sterilität (durchaktuellen USP Sterility Test ).Chang Medium ® ist ein eingetragenes Warenzeichen vonIrvine Scientific.USO RACCOMANDATOChang Medium D con gentamicina può essere utilizzatonelle applicazioni:1. colture primarie di cellule di liquido amniotico2. colture secondarie di cellule di liquido amniotico3. colture di cellule di midollo osseo4. tessuto amniotico da villi corialiQuesto terreno e’ stato sviluppato per l’uso in incubatore conCO 2(colture equilibrate in atmosfera con il 5 - 8% di CO 2).Il pH finale deve essere fra 6.8 – 7.2. Attenersi alle Istruzioniper l’uso per Uso.Precauzioni: Non usare il Chang Medium D congentamicina dopo la data di scadenzaindicata sull’etichetta.DESCRIZIONE DEL PRODOTTOChang Medium ® D con gentamicina è stato sviluppato percolture primarie di cellule di fluido amniotico umano per ladeterminazione del cariotipo ed altri test genetici prenatali.Questa formula è stata ottimizzata per sistemi in fiasca emetodologie in situ.ISTRUZIONI PER LA CONSERVAZIONEConservare il Chang Medium D con gentamicina congelatoa una temperatura tra -10 °C. Il terreno non utilizzato puòessere ricongelato o conservato a 2° - 8° C.Proteggere dalla luce fluorescente.Far riferimento alle etichette dei singoli componenti per ledate di scadenza specifiche. Il CHANG MEDIUM D congentamicina non può essere ricongelato per più di 2 volte;una volta scongelato può essere conservato a 2° - 2-8°Cper 14 giorni prima dell’uso senza che le prestazioni risultinoalterate. Si raccomanda di non conservarlo a 2-8 °C perpiù di 14 giorni.COMPONENTImg/LSale ............................................................................... 8515Destrosio ........................................................................ 880Aminoacidi ...................................................................... 804Glutamina-L .................................................................... 257Polipeptidi ........................................................................ 189Vitamine ............................................................................ 61Desossiribonucleosidi ......................................................35Ribonucleosidi ..................................................................35Piruvato di Sodio ............................................................. 97Gentamicina Solfato..........................................................50Altri Componenti ................................................................. 9Ormoni Steroidei ........................................................ 0.0009Proteine Da Siero Bovino ........................................... 12% v/vRosso Fenolo .................................................................... 10PRECAUZIONI E AVVERTIMENTIQuesto dispositivo è previsto per l’uso da parte di personaleaddestrato nelle procedure che comprendono le applicazioniindicate per le quali il dispositivo è previsto.Non usare flaconi in cui la confezione sterile sia statacompromessa.IL Ph del terreno utilizzato deve esserecompreso tra 6.8 e 7.2 (il terreno deve avere un coloreleggermente giallo tendente al salmone). Il pH può essereaggiustato facilmente ponendo il terreno in un incubatorecon CO 2al 5% - 8% con il tappo svitato per circa 30 minuti.Nota: Nel ChangMedium D si possono formare cristallidi Ossalato di Calcio. La presenza di questi cristalli nonalterano nè laqualità ne le performance del prodotto.Chang Medium D con Gentamicina contiene l’antibioticoGentamicina. Si devono perciò prendere dovute precauzioniper assicurarsi che il paziente non sia sensibile a questoantibiotico.ASSICURAZIONE DI QUALITÀSTERILITA’Il siero usato per la produzione di Chang Medium D congentamicina è stato estato per escludere contaminazionevirale secondo la procedura CFR Titolo 9 Parte 113.53.Il siero è stato testato anche per determinare eventualicontaminazioni da micoplasma. Il Chang D con gentamicinaè sterilizzato per filtrazione mediante un filtro da 0.1 mme sono testati per escludere eventuale contaminazionebatteriologica seguendo il protocollo delle prove di sterilitàdescritto nella corrente test di sterilità USP .Chang Medium ® è un marchio registrato di Irvine Scientific.Keine Flaschen verwenden, deren sterile Verpackungbeschädigt wurde.Gebrauchsvorbereitung1. Chang Medium D mit Gentamicin durch Schwenken im37° C Wasserbad schnell auftauen.2. Chang Medium D mit Gentamicin enthaelt dasantibiotische Gentamicin (50 µg/µL). Mehr antibiotikakönnen, falls gewünscht, zugefügt werden.Aliquotieren von CHANG MEDIUM D1. Chang Medium D mit Gentamicin entsprechend deninstruktionen auftauen.PREPARAZIONE PER L’USO1. Scongelare velocemente il Chang Medium D congentamicina agitando la bottiglia in un bagno di acquaa 37° C.2. Il Terreno contiene già l’antibiotico è possibileaggiungerne altri.ALIQUOTARE IL CHANG MEDIUM D1. Scongelare Chang Medium D con gentamicina secondole istruzioni.2. Suddividere, in ambiente sterile, il terreno in aliquoteericongelare.

ESPAÑOLFRANÇAISAplicaciónChang Medium D con Gentamicina se puede utilizar enlas siguientes aplicaciones:1. Cultivo primario de células de líquido amniótico.2. Cultivo de células del líquido amniótico derivadas delcultivo primario.3. Cultivo de células de médula ósea.4. Tejido amniótico sólido obtenido de vellosidadescoriónicas.Este medio ha sido diseñado para ser utilizado enincubadores de CO 2(cultivos equilibrados en una atmosferacon 5% - 8% CO 2).El pH final debe ser de 6.8 a 7.2. Por favor ver Instruccionesde uso.Precaución:No usar Chang Medium D con Gentamicinadespués de la fecha de caducidad indicadaen la etiqueta.DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTOChang Medium ® D con Gentamicina es un mediodesarrollado para el cultivo primario de células humanasde líquido amniótico, para análisis de cariotipo y otraspruebas genéticas de diagnóstico prenatal. Esta FormulaSe Ha Optimizada Para Metodologias En Frasco E In Situ.Conservación y ESTABILIDADConservar Chang Medium D con Gentamicina congeladoentre -10°C. Una vez descongelado, se puede recongelar ose puede conservar refrigerado entre 2°C y 8°C.Proteger este producto de la luz fluorescente.ESTABILIDADChang Medium D con Gentamicina es estable hasta lafecha de caducidad indicada en el envase. Una vezdescongelado, se puede conservar refrigerado entre2ºC y 8ºC un máximo de 14 días sin que ello altere sufuncionalidad. Es posible hacer alícuotas y recongelarChang Medium D con Gentamicina un máximo de 2 veces.componentesmg/LSales................................................................... 8515Dextrosa................................................................ 880Aminoácidos.......................................................... 804L-Glutamina........................................................... 257Polipéptidos........................................................... 189Vitaminas................................................................ 61Desoxirribonucleósidos............................................ 35Ribonucleósidos...................................................... 35Piruvato de Sodio.................................................... 97Gentamicina.............................................................50Otros Componentes.................................................. 9Hormonas Esteroides....................................... 0.0009Proteínas de Suero Bovino............................. 12% v/vRojo Fenol............................................................... 10Precauciones y advertenciasEste dispositivo debe ser utilizado por personalcapacitado en procedimientos que incluyan la aplicaciónprevista para el mismo.No usar frascos en los que el envase estéril esté dañado.El pH usado de los medios debe estar entre6.8 y 7.2 (el medio debe ser de color ligeramenteasalmonado). El pH puede ajustarse fácilmente poniendoel medio en un incubador al 5% a 8% CO 2, con el tapónligeramente desenroscado durante unos 30 minutos.Nota: Es posible la formación de Cristales de Oxalatode Calcio Chang Medium D con Gentamicina. No se hademostrado que la presencia de esos cristales alteren elfuncionamiento de este producto.Chang Medium D con Gentamicina contiene el antibióticoGentamicina. Es conveniente adoptar las medidasnecesarias para garantizar que la paciente no essensible a este antibiótico.CONTROL DE CALIDADESTERILIDADEl suero usado en la producción de Chang Medium Dcon Gentamicina se ha testado para contaminación viralde acuerdo a la normativa CFR capítulo 9, apartado113.53. Asímismo, se ha comprobado la contaminaciónpor Micoplasma. Chang Medium D con Gentamicinaestá esterilizado por fitración en filtros de 0.1 micras.Las muestras de Chang Medium D con Gentamicina secomprueban para posible contaminación bacteriológicasiguiendo los protocolos de esterilidad descritos en eltest de esterilidad USP actual.Chang Medium ® es una marca registrada de Irvine Scientific.Utilisation conseilléeLe milieu Chang D avec Gentamicine peut être utilisé pourles applications suivantes :1. La culture primaire des cellules du liquide amniotique.2. Le repiquage des cellules du liquide amniotique.3. La culture des cellules de la moelle osseuse.4. La culture des tissus des prélèvements de villositéschoriales.Ce milieu est destiné à une utilisation en incubateur(Cultures equilibrees en atmosphere CO 2(5%-8%)).Suivre les instructions d’utilisation. Le pH final doit êtreentre 6.8-7.2.Attention: Ne pas utiliser le milieu de Chang D avecGentamicine au delà de la date d’expirationfigurant sur l’étiquette.Description du produitLe milieu de Chang ® D avec Gentamicine est développépour la culture primaire de cellules amniotiques humainesutilisées pour les caryotypes et autres tests de diagnosticantenatal. Cette formule a été optimisée pour lessystèmes ouverts et fermés.Conservation et stabilitéConserver le milieu de Chang D avec Gentamicine congeléentre -10°C. Le milieu de Chang D avec Gentamicine nonutilisé peut être recongelé ou conservé entre 2°C et 8°C.La date d’expiration figure sur l’étiquette. Le milieu deChang D avec Gentamicine peut être recongelé 2 fois aumaximum et conservé entre 2°C et 8°C pendant 14 jourssans altération de ses capacités. Il n’est pas recommandéde le conserver au delà.composantsmg/LSels..................................................................... 8515Dextrose.................................................................880Acides aminés...............................................................804L-Glutamine...................................................................257Polypeptides..................................................................189Vitamines.........................................................................61Désoxyribonucléotides....................................................35Ribonucléotides...............................................................35Pyruvate de sodium.........................................................97Sulfate de Gentamicine...................................................50Autres composants............................................................9Hormones stéroïdes.................................................0.0009Protéines de Sérum Bovin ……………………………… 12% v/vRouge de Phénol ............................................................10Précaution et mise en gardeCe dispositif est destiné à une utilisation par un personnelformé aux procédures comprenant l’application indiquéepour laquelle le dispositif est destiné.Ne pas utiliser de flacon dont la stérilité de l’emballage aété compromise.Préparation1. Décongeler le milieu de Chang D avec Gentamicinerapidement en agitant le flacon dans un bain marie à37°C.Le pH du milieu utilisé pour supplémenter lescultures doit être situé entre 6.8-7.2 (le milieu estlégèrement rose clair). Le pH peut facilement être ajustéen plaçant le flacon dans un incubateur CO 2(5% - 8%), lebouchon légèrement dévissé, pendant 30 minutes.Note: Des cristaux d’oxalate de calcium sont susceptiblesde se formr dans le milieude Chang D avec Gentamicine. Laprésence de ces cristaux n’altèrent en rien les performancesdu milieu.Le milieu de Chang D avec Gentamicine contientl’antibiotique Sulfate de Gentamicine. Les précautionsd’usage doivent être prises pour s’assurer que lespatients ne présentent aucune sensibilité à cetantibiotique.Assurance qualitéStérilitéLe sérum utilisé pour la production du milieu de ChangD avec Gentamicine est testé pour les contaminationsvirales et par mycoplasmes (CFR 9 title part 113.53). Lemilieu de Chang D avec Gentamicine est stérilisé parfiltration avec des filtres de 0,1 µm. Des échantillons demilieu de Chang D avec Gentamicine sont testés pourune éventuelle contamination bactérienne en suivant leprotocole de contrôle de stérilité décrit dans les testsde stérilité courants de la pharmacopée américaine(USP) .Milieu Chang ® est une marque déposée de Irvine Scientific.PREPARACIÓN DEL PRODUCTO1. Descongelar Chang Medium D con Gentamicinarápidamente poniendo la botella al baño María a 37ºCy moviéndola en círculos.2. Chang Medium D con Gentamicina contiene elantibiótico Gentamicina (50 µg/µL). Si se desea, sepuede añadir antibióticos adicionales.Para ALICUOTAR Chang Medium D CONGentamicinA1. Descongelar Chang Medium D con Gentamicina deacuerdo a las instrucciones.2. En condiciones de esterilidad, distribuir en alícuotas de2. Le milieu de Chang D avec Gentamicine contientl’antibiotique Sulfate de Gentamicine (50 µg/µL).Ajouter les antibiotiques additionnel.Préparation d’Aliquots de Milieu de CHANG D1. Décongeler le milieu de Chang D avec Gentamicine ensuivant les instructions.2. Distribuer stérilement en volumes utiles et recongeler.3. Décongeler les aliquots au bain marie à 37 °C avantl’emploi.instructions d’utilisationUtilisation Du Milieu Chang D Avec Gentamicine Pour

DIRECTIONS FOR USEUse of Chang Medium D with Gentamicin for PrimaryCultures: in situ Methodologies1. Centrifuge amniotic fluid at low speed to concentratethe cells.2. Resuspend the cell pellet in a small volume of thepatient’s own amniotic fluid. For example, aspiratethe supernate of 10 mL of spun amniotic fluid to0.5 mL above the cell pellet and resuspend. Addsufficient Chang Medium D with Gentamicin to theconcentrated cell suspension to allow for final platingvolume of 0.5 mL per cover slip (total of 4 coverslips)or 2 mL per flaskette.3. Incubate cultures undisturbed at 37° C 5%-8% CO 2atmosphere.4. Flood cultures on day 2 by adding 2 mL of ChangMedium D with Gentamicin.5. After 4 to 5 days, the cultures should be checkedfor growth. Cultures should be fed once growthhas been observed. Feed cultures by removingall of the culture supernatant and replacing with2 mL fresh Chang Medium D with Gentamicin. Itis recommended that cultures be fed every 2 daysthereafter.6. Check cultures for growth on/or after day 5, andharvest when sufficient colonies are observed.7. Best results are obtained when the cultures arefed with Chang Medium D with Gentamicin the daybefore the harvest.Use of Chang Medium D with Gentamicin for PrimaryCultures: Flask Methodologies1. Centrifuge amniotic fluid at low speed to concentratethe cells.2. Resuspend the cell pellet in a small volume of thepatient’s own amniotic fluid. For example, aspiratethe supernate of 10 mL of spun amniotic fluid to 1mL above the cell pellet and resuspend. Add 4 mL ofChang Medium D with Gentamicin for a total volumeof 5 mL per flask.3. Incubate cultures undisturbed at 37° C 5%-8% CO 2atmosphere.4. Check for growth on day 5. Change medium withfresh Chang Medium D with Gentamicin and harvestif sufficient cell growth is observed.5. Check cultures for growth and completely changemedium every day thereafter until sufficient coloniesare observed and are ready to harvest.6. Best results are obtained when the cultures arefed with Chang Medium D with Gentamicin the daybefore the harvest.Use of Chang Medium D with Gentamicin for GrowingPassaged Amniotic Fluid Cells:To passage the cells, treat the cultures with trypsin (orpronase, etc.) as you would normally do when cellsare grown in conventional medium. However, proteasetreatment should be carefully monitored. Amnioticfluid cells grown in Chang Medium D with Gentamicintend to be more sensitive to protease treatment thanamniotic fluid cells grown in conventional medium. Itmay be necessary to modify your protocol to take thisinto account.2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.comPN 40791 Rev.3

3. Aliquots vor gebrauch im 37° C wasserbad auftauen.GebrauchshinweiseChang Medium D mit Gentamicin für Primärkulturen: InSitu Methoden1. Amnionflüssigkeit bei niedrigen Drehzahlenzentrifugieren, um die Zellen zu konzentrieren.2. Das Zellpellet in einer kleinen Menge patienteneigenerAmnionflüssigkeit resuspendieren. zB: den Überstandvon 10 ml der zentrifugierten Amnionflüssigkeitbis auf o,5 ml über dem Zellpellet aspirieren undresuspendieren. Ausreichend Chang Medium D withGentamicin zu der konzentrierten Zellsuspensionzugeben: 0.5 ml pro Deckglas (maximal 4 Deckgläser)oder 2 ml pro Kulturflasche3. Kulturen ungestört bei 37° C in 5%-8% CO 2atmosphäreinkubieren.4. Am 2. Tag die Kulturen mit 2 ml Chang Medium D mitGentamicin In fluten.5. Nach 4 bis 5 Tagen sollte das Wachstum der Kulturenüberprüft werden. Die Kulturen sollten gefüttert werden,sobald sie wachsen. Dazu wird der Zellkulturüberstandentfernt und durch 2 ml neues Chang Medium D mitGentamicin ersetzt. Danach sollten die Kulturen alle 2Tage neu gefüttert werden.6. Kulturwachstum am oder nach dem 5.Tag überprüfen,und wenn ausreichend Kulturen vorhanden sind, ernten.7. Die besten Ergebnisse werden erzielt, wenn am Tagvor der Ernte nochmals mit Chang Medium D mitGentamicin gefüttert wird.Anwendung von Chang Medium D with Gentamicin fürPrimäre Kulturen: Flaschenmethode1. Amnionflüssigkeit bei niedrigen Drehzahlenzentrifugieren, um die Zellen zu konzentrieren.2. Das Zellpellet in einer kleinen Menge patienteneigenerAmnionflüssigkeit resuspendieren. zB: den Überstandvon 10 ml der zentrifugierten Amnionflüssigkeit bis auf 1ml über dem Zellpellet aspirieren und resuspendieren.4 mL of Chang Medium D mit Gentamicin zugeben zueinem Gesamtvolumen 5 mL pro Kulturflasche.3. Kulturen ungestört bei 37° C in 5%-8% CO 2Atmosphäreinkubieren.4. Kulturwachstum am 5.Tag überprüfen. Medium mitfrischem Chang Medium D mit Gentamicin austauschenund bei ausreichendem Zellwachstum ernten.5. Kulturwachstum 5.Tag überprüfen und jeden Tag dasMedium vollständig tauschen bis ausreichend Kolonienvorhanden sind. Danach ernten.6. Die besten Ergebnisse werden erzielt, wenn am Tagvor der Ernte nochmals mit Chang Medium D mitGentamicin gefüttert wird.Anwendung von Chang Medium D mit Gentamicin zur Kulturpassagierter amnionzellenZum Passagieren der zellen werden die kulturen mit Trypsin(oder Pronase, etc.) behandelt. Genau so, als wären diezellen in einem konventionellen Medium gewachsen.Allerdings sollte die Protease Behandlung sorgfältigbeobachtet werden, da amnionzellen, die in Chang MediumD mit Gentamicin kultiviert wurden, sensitiver reagierenals Zellen nach Behandlung in konventionellen Medien.Unter Umständen muss das protokoll entsprechendmodifiziert werden.ISTRUZIONI PER L’USO DEL PRODOTTOUso del Chang Medium D con gentamicina per coltureprimarie: Metodologie In Situ.1. Centrifugare il fluido amniotico a velocita bassa perconcentrare le cellule.2. Risospendere il pellet cellulare in una piccola quantità diliquido amniotico della paziente. Ad esempio, aspirareil surnatante di 10 mL di liquido amniotico centrifugatofino a 0.5 mL al di sopra del pellet e e risospendere.Aggiungere alla sospensione concentrata di cellule unaquantità di Chang Medium D con gentamicina atta aottenere un volume finale di 0.5 mL per coverslip (perun totale di 4 coverslip) o di 2 mL per fiasca.3. Incubare le colture a 37° C in atmosfera 5%-8% CO 2.4. Al secondo giorno, aggiungere 2 mL di CHANGMEDIUM D con gentamicina alle colture.5. Dopo 4 o 5 giorni, controllare la crescita delle colture.Arricchire le colture non appena si osserva una crescitarimuovendo il surnatante e sostituendolo con 2 mLdi CHANG MEDIUM D con gentamicina fresco. Siraccomanda di continuare ad arricchire le colture inquesto modo ogni 2 giorni.6. Controllare la crescita delle colture dopo 5 giorni, eprelevarle quando si osservano un numero sufficientedi colonie.7. Risultati migliori si ottengono arricchendo con CHANGMEDIUM D con gentamicina le colture il giorno primadella raccolta.Uso Di Chang D Per Colture Primarie: Metodologie In Fiasca1. Centrifugare il liquido amniotico a bassa velocità perconcentrare le cellule.2. Risospendere il pellet in una piccola quantità di liquidoamniotico della paziente. Ad esempio, aspirare ilsurnatante di 10 mL di liquido amniotico centrifugato finoa 1 mL al di sopra del pellet e risospendere. Agguingere4 mL di Chang Medium D con gentamicina per ottenereun volume totale di 5 mL per fiaschetta.3. Incubare le colture a 37° in atmosfera al C 5%-8% CO 2.4. Controllare la crescita al 5° giorno . Sostituire ilterreno con Chang Medium D con gentamicina frescoe raccogliere se si osserva una sufficiente crescitacellulare.5. Controllare la crescita e sostituire il terreno ogni giornosuccessivo al quinto fino a che le colonie sono inquantità sufficiente e pronte per la raccolta.6. Migliori risultati si ottengono con colture arricchite conChang Medium D con gentamicina il giorno prima dellaraccolta.Uso di Chang Medium d per colture secondarie di liquidoamniotico:Per trasferire le cellule, trattare le colture con tripsina(o pronase, etc.) come nel caso di colture in terrenoconvenzionale. In ogni caso il trattamento con proteasideve essere accuratamente monitorato. Le cellule di liquidoamniotico coltivate in Chang Medium D con gentamicinatendono a essere più sensibili al trattamento con proteasirispetto a quelle coltivate in un terreno tradizionale. Inragione di ciò può essere necessario modificare il protocollo.

tamaño conveniente, y recongelar.Cultures Primaires : Methode In Situ3. Descongelar las alícuotas al baño María a 37°C en elmomento de utilizarla.INSTRUCCIONES DE USOUtilización de Chang Medium D con Gentamicina en cultivosprimarios: Metodología In Situ1. Centrifugar el líquido amniótico a baja velocidad paraconcentrar las células.2. Resuspender el precipitado de células en un volumenpequeño del propio líquido amniótico de la paciente.Por ejemplo, aspirar el sobrenadante de 10 mL dejando0.5 mL de líquido, y resuspender. Añadir suficienteChang Medium D con Gentamicina a la suspensiónconcentrada de células para alcanzar un volumen decultivo final de 0.5 mL por cubre-objetos (un total de 4cubre-objetos por muestra), o 2 mL por frasco.3. Sin perturbarlos, incubar los cultivos a 37°C en unaatmosfera de 5% - 8% CO 2.4. En el día 2 del cultivo, añadir 2 mL de Chang MediumD con Gentamicina.5. A los 4 o 5 días, comprobar el crecimiento en loscultivos. Una vez que se observe crecimiento, aspirartodo el medio de cultivo y añadir 2 mL de Chang MediumD con Gentamicina fresco. A partir de este momento, esrecomendable cambiar el medio de los cultivos cada 2días.6. Comprobar el crecimiento de los cultivos durante odespués del quinto día, y sacrificar cuando se observeque hay suficientes colonias.7. Se obtienen mejores resultados cuando se realizaun cambio de medio con Chang Medium D conGentamicina el día anterior al sacrificio.Utilización de Chang Medium D con Gentamicina en cultivosprimarios: Metodología en frasco.1. Centrifugar el líquido amniótico a baja velocidad paraconcentrar las células.2. Resuspender el precipitado celular en un volumenpequeño del propio líquido amniótico de la paciente.Por ejemplo, aspirar el sobrenadante de 10 mL dejando1 mL de líquido y resuspender. Añadir 4 mL de ChangMedium D con Gentamicina para obtener un volumentotal de 5 mL por frasco.3. Sin perturbarlos, incubar los cultivos a 37°C en unaatmósfera de 5% - 8% CO 2.4. Revisar el crecimiento en el día 5. Cambiar el medio porChang Medium D con Gentamicina fresco y sacrificarel cultivo si observa un crecimiento suficiente .5. Comprobar el crecimiento de los cultivos y cambiarcompletamente el medio cada día de aquí en adelante,hasta observar un número suficiente de colonias parasacrificar.6. Se obtienen mejores resultados cuando se realizaun cambio de medio con Chang Medium D conGentamicina el día anterior al sacrificio.Utilización de Chang Medium D en el Cultivo de Células delLíquido Amniótico Derivadas de Cultivo Primario:Para realizar pases de los amniocitos cultivados, tratarlos cultivos con tripsina ( o pronasa, etc.) como se tratannormalmente las células en un medio convencional. Losamniocitos cultivados en Medio Chang D tienden a ser mássensibles al tratamiento con proteasas que los cultivados enmedios convencionales. Aunque se puede utilizar el mismotratamiento con tripsina, pronasa, etc..., es recomendablecontrolar el proceso para reajustar el protocolo en casoque sea necesario.1. Centrifuger le liquide amniotique à 1000 tours/minpendant 5 minutes pour concentrer les cellules.2. Resuspendre le culot dans un petit volume du liquideamniotique de la patiente. Par exemple, aspirer lesurnageant obtenu en centrifugeant 10 ml de liquideamniotique et resuspendre le culot dans 0,5 ml de celiquide. Ajouter suffisamment de milieu de Chang Davec Gentamicine au culot de cellules concentréesresuspendues pour obtenir un volume final nécessairepour 4 lamelles (0,5 ml par lamelle) ou 2 ml par flaskette.3. Incuber les cultures sans agitation à 37°C enatmosphère CO 2(5% - 8%).4. Alimenter les cellules à J2 en ajoutant 2 ml de milieude Chang D.5. Après 4 à 5 jours, la croissance des cultures doit êtresurveillée. Dès que des foyers ont été observés, lescultures doivent être supplémentées en enlevant lesurnageant et en le remplaçant par 2 ml de milieude Chang D avec Gentamicine frais. Il est ensuiterecommandé de changer le milieu tous les 2 jours.6. Analyser la croissance des cellules au jour 5 et après etrécolter les cellules lorsque suffisamment de coloniessont observées (15 à 20).7. Les meilleurs résultats sont obtenus lorsque les culturessont supplémentées la veille de la récolte avec du milieude Chang D avec Gentamicine frais.Utilisation Du Milieu Chang D Avec Gentamicine PourCultures Primaires: Methode En Flacon1. Centrifuger le liquide amniotique à 1000 tours/minpendant 5 minutes pour concentrer les cellules.2. Resuspendre le culot dans un petit volume du liquideamniotique de la patiente. Par exemple, aspirer lesurnageant obtenu par la centrifugation de 10 mlde liquide, ajouter 1 ml de ce liquide au culot etresuspendre. Ajouter 4 ml de milieu de Chang D avecGentamicine pour un volume total de 5 ml par flacon.3. Incuber les cultures à 37 °C en atmosphère CO 2(5%- 8%).4. Analyser la croissance à J5. Remplacer le milieu pardu Chang D avec Gentamicine frais et récolter si unecroissance suffisante est observée.5. Analyser les cultures et changer complètement le milieutous les 2 jours jusqu’à ce que suffisamment de coloniessoient observées et prêtes à être récoltées.6. Les meilleurs résultats sont obtenus lorsque les cellulessont supplémentés la veille de la récolte.Utilisation du milieu Chang D avec Gentamicine pour leRepiquage des Cellules du Liquide Amniotique:Pour les subcultures, traiter les cultures avec la trypsine(ou pronase, etc.) comme vous le faites normalementlorsque les cellules poussent dans un milieu conventionnel.Cependant, le traitement avec des protéases doit êtreconduit prudemment. Les cellules amniotiques qui croissentdans le milieu de Chang D avec Gentamicine ont tendanceà être plus sensibles aux protéases que celles qui poussentdans un milieu traditionnel. Il est nécessaire d’en tenircompte dans votre protocole.

PORTUGUÊSΕΛΛΗΝΙΚΆUtilização PrevistaO Chang Medium D com Gentamicina pode ser utilizadonas seguintes aplicações:1. Cultura primária de células de líquido amniótico.2. Cultura de células do líquido amniótico derivadas dacultura primária.3. Cultura de células de medula óssea.4. Tecido amniótico sólido obtido de amostras devilosidades coriónicas.Este meio foi concebido para ser utilizado em incubadorasde CO 2(culturas equilibradas numa atmosfera com5% - 8% CO 2).O pH final deve ser entre 6.8 - 7.2. Por favor, ver Instruçõesde utilização.Atenção: Não utilizar o Chang Medium D com Gentamicinadepois da data de expiração indicada no rótulo.Descrição do ProdutoO Chang Medium ® D com Gentamicina foi desenvolvidopara a cultura primária de células humanas de líquidoamniótico, para análises de cariótipo e outras provasgenéticas de diagnóstico pré-natal. Esta Fórmula EstáOptimizada Para Metodologias Em Recipiente E In Situ.Estabilidade e ConservaçãoConservar o Chang Medium D com Gentamicina congeladoentre -10°C. Uma vez descongelado, o Chang Medium Dcom Gentamicina pode ser recongelado ou conservadorefrigerado entre 2°C e 8°C.Proteger este produto da luz fluorescente.O Chang Medium D com Gentamicina é estável até àdata de expiração indicada no rótulo do frasco. Uma vezdescongelado, pode ser recongelado no máximo 2 vezese conservado refrigerado entre 2ºC e 8ºC no máximo 14dias sem alterar a sua funcionalidade. O armazenamentopara além de 14 dias não é recomendado.Componentesmg/LSais..................................................................... 8515Dextrose................................................................ 880Aminoácidos.......................................................... 804L-Glutamina........................................................... 257Polipéptidos........................................................... 189Vitaminas................................................................ 61Desoxirribonucleósidos............................................ 35Ribonucleósidos...................................................... 35Piruvato de Sódio.................................................... 97Gentamicina ............................................................50Outros Componentes................................................ 9Hormonas Esteróides....................................... 0.0009Proteínas de Soro Bovino............................... 12% v/vVermelho de Fenol................................................... 10O pH do meio utilizado deve estar entre 6.8 e7.2 (o meio deve apresentar uma coloração ligeiramentecor de salmão). O pH pode ajustar-se facilmente colocandoo meio numa incubadora a 5% - 8% CO 2, com a tampaligeiramente desenroscada durante 30 minutos.Nota: É possível a formação de Cristais de Oxalato deCálcio no Chang Medium D com Gentamicina. Não estádemonstrado que a presença destes cristais altere ofuncionamento deste produto.O Meio Chang D com Gentamicina contém o antibióticoSulfato de Gentamicina. É conveniente adoptar asmedidas necessárias para garantir que o doente não ésensível a este antibiótico.CONTROLO DE QUALIDADEESTERILIDADEO soro utilizado na produção de Chang Medium D comGentamicina foi testado para a contaminação viral deacordo com a norma CFR capítulo 9, parte 113.53. Foitambém testado para a contaminação por Micoplasma.O Chang Medium D com Gentamicina é esterilizadopor filtração com filtros de 0.1 micras. As amostrasde Chang Medium D com Gentamicina foram testadaspara a possível contaminação bacteriológica seguindoos protocolos de esterilidade descritos no teste deesterilidade actual da USP .Chang Medium ® é uma marca registada da Irvine Scientific.ΕΠΙΔΙΩΚΟΜΕΝΗ ΧΡΗΣΗΤο Chang Medium D με Γενταμικίνη μπορεί ναχρησιμοποιηθεί στις παρακάτω εφαρμογές:1. την πρωτογενή καλλιέργεια κυττάρων αμνιακού υγρού2. την ανάπτυξη κυττάρων διόδου αμνιακού υγρού3. την καλλιέργεια κυττάρων μυελού των οστών4. την δειγματοληψία συμπαγούς ιστού αμνίου απόχοριακές λάχνεςΑυτό το μέσο έχει σχεδιαστεί για χρήση σε επωαστήρεςCO 2(καλλιέργειες ισορροπημένες με ατμόσφαιρα 5%-8% CO 2).Το τελικό pH πρέπει να είναι 6.8-7.2. Παρακαλούμε βλ.Οδηγίες Χρήσης.Προσοχή: Μην χρησιμοποιείτε το Chang Medium D μεΓενταμικίνη πέραν της ημερομηνίας λήξης πουαναφέρεται στην ετικέτα.ΠΕΡΙΓΡΑΦΗ ΠΡΟΪΟΝΤΟΣTo Chang Medium ® D με Γενταμικίνη δημιουργήθηκεγια την πρωτογενή καλλιέργεια ανθρώπινων κυττάρωναμνιακού υγρού, για χρήση σε καρυοτυποποίηση καιάλλες προγεννητικές γενετικές εξετάσεις. Αυτή η σύνθεσηέχει βελτιστοποιηθεί τόσο για μεθοδολογίες φιαλιδίων όσοκαι για μεθοδολογίες in situ.ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΟΤΗΤΑΦυλάσσετε το Chang Medium D με Γενταμικίνη σε συνθήκεςψύξης στους -10°C. Το Chang Medium D με Γενταμικίνηπου δεν έχει χρησιμοποιηθεί, μπορεί να ψυχθεί ξανά ή ναφυλαχτεί σε θερμοκρασία 2°C έως 8°C.Προστατεύετε από φθορίζον φως.Βλ. ετικέτα φιάλης για συγκεκριμένη ημερομηνία λήξης. ΤοChang Medium D με Γενταμικίνη μπορεί να ψυχθεί εκ νέουγια μέγιστο αριθμό 2 φορών και να φυλαχτεί αποψυγμένοστους 2°C έως 8°C για 14 ημέρες, χωρίς να επηρεαστείη λειτουργία του. Δεν συστήνεται η φύλαξη για διάστημαμεγαλύτερο των 14 ημερών.ΣΥΣΤΑΤΙΚΑmg/LΆλατα …………………………………………………… 8515Δεξτρόζη ………………………………………………… 880Αμινοξέα ………………………………………………… 804L-Γλουταμίνη …………………………………………… 257Πολυπεπτίδια …………………………………………… 189Βιταμίνες ………………………………………………… 61Δεοξυριβονουκλεοζίτες ………………………………… 35Ριβονουκλεοζίτες ………………………………………… 35Πυροσταφιλικό Νάτριο ………………………………… 97Θειική Γενταμικίνη ……………………………………… 50Λοιπά συστατικά ………………………………………… 9Στεροειδείς ορμόνες………………………………… 0.0009Πρωτεΐνης Ορού Βοοειδούς ……………………… 12% v/vΕρυθρό Φαινόλης ……………………………………… 10Για να δημιουργηθούν δίοδοι στα κύτταρα, χορηγείστεστις καλλιέργειες με θρυψίνη (ή προνάση, κλπ.) όπωςθα κάνατε εάν τα κύτταρα καλλιεργούνταν σε συμβατικόμέσο. Ωστόσο, η χορήγηση προνάσης θα πρέπει ναπαρατηρείται προσεκτικά. Τα κύτταρα αμνιακού υγρούπου καλλιεργούνται σε Chang Medium D με Γενταμικίνητείνουν να είναι περισσότερο ευαίσθητα στην χορήγησηπρονάσης απ’ ότι τα κύτταρα αμνιακού υγρού πουκαλλιεργούνται σε συμβατικά μέσα. Μπορεί να χρειαστείνα τροποποιήσετε το πρωτόκολλό σας για να λάβετε υπόψηαυτή την πληροφορία.Το pH του μέσου που χρησιμοποιείται γιατροφή των καλλιεργειών πρέπει να είναι6.8–7.2 (δηλαδή το μέσο πρέπει να έχει ελαφρώς κίτρινοχρώμα σολομού). Το pH μπορεί να προσαρμοστεί εύκολα,τοποθετώντας το μέσο σε επωαστήρα 5%-8% CO 2με τοπώμα ελαφρώς χαλαρό για περίπου 30 λεπτά.Σημείωση: Στο Chang Medium D χρησιμοποιούνται συχνάκρύσταλλοι Οξαλικού Ασβεστίου. Η παρουσία αυτώντων κρυστάλλων δεν έχει αποδειχθεί ότι έχει αρνητικέςεπιδράσεις στην απόδοση του προϊόντος.Το Chang Medium ® D με Γενταμικίνη περιέχειτο αντιβιοτικό Γενταμικίνη. Θα πρέπει ναλαμβάνονται οι απαραίτητες προφυλάξειςώστε να βεβαιώνεται ότι η ασθενής δεν έχειευαισθησία στο εν λόγω αντιβιοτικό.ΔΙΑΣΦΑΛΙΣΗ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣΑΠΟΣΤΕΙΡΩΣΗΟ ορός που χρησιμοποιείται στην παραγωγή ChangMedium D με Γενταμικίνη έχει ελεγχθεί για ιογενήμόλυνση σύμφωνα με το CFR Title 9 Part 113.53. Έχειεπίσης ελεγχθεί για συγκέντρωση μυκοπλάσματος. ΤοChang Medium D με Γενταμικίνη έχει αποστειρωθεί μέσωδιήθησης με φίλτρο 0.1 εκατομμυριοστόμετρων. Δείγματατου Chang Medium D με Γενταμικίνη ελέγχονται για πιθανήβακτηριολογική μόλυνση, ακολουθώντας το πρωτόκολλοελέγχου στειρότητας που περιγράφεται στην τρέχουσαεξέταση Στειρότητας της συνθήκης Φαρμακοποϊίαςτων ΗΠΑ.Το Chang Medium ® είναι σήμα κατατεθέν της IrvineScientific.Precauções e AvisosEste dispositivo deve ser utilizado por funcionáriostreinados em procedimentos aos quais se destina.Não use nenhum frasco em que o embalamento esterilizadotenha sido comprometido.PREPARAÇÃO DO PRODUTO1. Descongelar o Chang Medium D com Gentamicinarapidamente pondo o recipiente em banho Maria a 37ºC e agitando com movimentos circulares.2. O Meio Chang D com Gentamicina contém o antibióticoSulfato de Gentamicina (50 µg/µL). Se desejar, podeadicionar antibióticos adicionales.Para ALIQUOTAR o Chang Medium D comGentamicina1. Descongelar o Chang Medium D com Gentamicina deacordo com as instruções.2. Em condições de esterilidade, distribuir em alíquotasΔΙΑΣΦΑΛΙΣΗ ΠΟΙΟΤΗΤΑΣΗ συσκευή αυτή προορίζεται για χρήση από προσωπικόπου έχει εκπαιδευτεί σε διαδικασίες που περιλαμβάνουντη συγκεκριμένη εφαρμογή για την οποία προορίζεταιη συσκευή.Μη χρησιμοποιείτε οποιεσδήποτε φιάλες των οποίων ησυσκευασία έχει διακυβευτεί.ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΧΡΗΣΗΣ1. Αποψύξτε το Chang Medium D με Γενταμικίνηγρήγορα, στροβιλίζοντας τη φιάλη σε υδατόλουτροθερμοκρασίας 37°C.2. Το Chang Medium D με Γενταμικίνη περιέχει τοαντιβιοτικό Γενταμικίνη (50 µg/µL). Μπορείτε ναπροσθέστε συμπληρωματικά αντιβιοτικά αν τοεπιθυμείτε.ΔΙΑΜΟΙΡΑΣΜΟΣ ΣΕ ΥΠΟΠΟΛΛΑΠΛΑΣΙΑ ΤΟΥ CHANGMEDIUM D1. Αποψύξτε το Chang Medium D με Γενταμικίνη σύμφωνα

ČESKYDANSK,URČENÉ POUŽITÍChang Medium D s gentamycinem lze použít k následujícímčinnostem:1. primární kultivace buněk z plodové vody2. množení pasážovaných buněk z plodové vody3. kultivace buněk kostní dřeně4. odběr vzorků pevné amniotické tkáně z choriových klků.Toto médium je určeno k použití v CO 2inkubátorech (kultivace v atmosféře s 5-8 % CO 2).Výsledné pH musí být v rozmezí 6,8-7,2. Viz bod Pokynyk použití.Upozornění: Nepoužívejte médium po uplynutí dobypoužitelnosti uvedené na štítku.POPIS VÝROBKUChang Medium ® D s gentamycinem bylo vyvinuto kprimární kultivaci lidských buněk z plodové vody pro účelykaryotypizace a jiných genetických testů. Složení přípravkubylo optimalizováno pro kultivaci v lahvích i in situ.UCHOVÁNÍ A STABILITAChang Medium D s gentamycinem uchovávejte zmrazenépři teplotě -10 °C. Nespotřebovaný materiál lze znovuzmrazit nebo uchovávat při teplotě 2-8 °C.Chraňte před fluorescenčním světlem.Konkrétní datum použití najdete na štítku lahvičky. ChangMedium D s gentamycinem lze maximálně 2 x znovuzmrazit a rozmrazené skladovat při teplotě 2 až 8 °C po 14dní bez zhoršení jeho funkčnosti. Skladování déle než 14dní se nedoporučuje.SLOŽKYmg/lSoli ……………………………………………………… 8515Glukóza …………………………………………………. 880Aminokyseliny …………………………………………… 804L-glutamin ……………………………………………….. 257Polypeptidy ……………………………………………… 189Vitamíny …………………………………………………… 61Deoxyribonukleosidy ……………………………………. 35Ribonukleosidy …………………………………………… 35Pyruvát sodný …………………………………………… .97Gentamicin sulfát ………………………………………… 50Jiné složky ………………………………………………… 9Steroidní hormony ………………………………….. 0,0009Hovězí sérové proteiny ………………………….. 12 % obj.Fenolčerveň ……………………………………………… 10BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ A VAROVÁNÍZařízení bylo určeno pro použití školeným personálem přizákrocích, které zahrnují indikovanou aplikaci, pro kterouje zařízení určeno.Nepoužívejte žádnou lahev s poškozeným sterilnímbalením.PŘÍPRAVA K POUŽITÍ1. Rychle médium rozmrazte kroužením lahví ve vodnílázni vyhřáté na 37 °C.2. Chang Medium D s gentamycinem obsahujeantibiotikum gentamycin (50 µg/µl). V případě potřebylze přidat další antibiotika.DÁVKOVÁNÍ MÉDIA1. Chang Medium D s gentamycinem rozmrazte podlepokynů.2. Asepticky rozdělte do alikvotů o vhodné velikosti aznovu zmrazte.3. Před použitím alikvoty rozmrazte ve vodní lázni vyhřáténa 37 °C.POKYNY K POUŽITÍPoužití média k primární kultivaci: kultivace in situChang Medium ® D s gentamycinem obsahujeantibiotikum gentamycin. Dbejte na včasnéodhalení pacientek alergických na totoantibiotikum.KONTROLA KVALITYSTERILITASérum použité k produkci média bylo testováno na možnouvirovou kontaminaci dle amerického předpisu CFR Title9 Part 113.53. Byl proveden také screening možnékontaminace mykoplazmaty. Médium je sterilizovánofiltrací přes 0,1µm filtry. Vzorky média jsou kontroloványs ohledem na možnou kontaminaci, a to podle protokolupro test sterility popsaného v aktuálním znění testu USPSterility .Chang Medium ® je registrovaná ochranná známkaspolečnosti Irvine Scientific.ANVENDELSEChang Medium D med gentamicin kan anvendes til følgendeapplikationer:1. Primær dyrkning af amnionvæskeceller2. Dyrkning af passerede amnionvæskeceller3. Dyrkning af knoglemarvsceller4. Solidt amnionvæv fra chorionvilliprøverDette medium er fremstillet til brug i CO 2-inkubatorer (kulturer der er tilpasset enatmosfære på 5-8 % CO 2).Den endelige pH-værdi skal ligge på 6,8-7,2. Sebrugsanvisningen.Forsigtig: Chang Medium D med gentamicin må ikkeanvendes efter udløbsdatoen på etiketten.PRODUKTBESKRIVELSEChang Medium ® D med gentamicin blev udviklet tilprimær dyrkning af humane amnionvæskeceller tilkaryotypebestemmelse og anden antenatal genetisktestning. Denne formulering er blevet optimeret tilmetodologier til såvel kolbe som in situ.OPBEVARING OG STABILITETChang Medium D med gentamicin skal opbevares frossentved -10 °C. Ubrugt Chang Medium D med gentamicin kannedfryses igen eller opbevares ved 2-8 °C.Beskyttes mod fluorescerende lys.Se udløbsdatoen på flaskens etiket. Chang Medium D medgentamicin kan nedfryses højest 2 gange efter optøningog opbevares optøet ved 2-8 °C i 14 dage uden, at detpåvirker dets virkning. Det anbefales ikke at opbevare detlængere end 14 dage.KOMPONENTERSalte …………………………………………………….. 8515Dekstrose ………………………………………………... 880Aminosyrer ………………………………………………. 804L-glutamin ……………………………………………….. 257Polypeptider ……………………………………………... 189Vitaminer ………………………………………………….. 61Deoxyribonukleosider ……………………………………. 35Ribonukleosider ………………………………………….. 35Natriumpyruvat …………………………………………… 97Gentamicinsulfat …………………………………………. 50Andre komponenter ……………………………………… 9Steroidhormoner ……………………………………. 0,0009Bovine serumproteiner ……………………….. 12 % vol/volFenolrødt …………………………………………………. 10FORHOLDSREGLER OG ADVARSLERDette udstyr er beregnet til brug af personale, der eruddannet i procedurer, der inkluderer den indiceredeanvendelse, som dette udstyr er beregnet til.Anvend ikke nogen flasker, hvor den sterile emballage erblevet kompromitteret.FORBEREDELSE1. Optø hurtigt Chang Medium D med gentamincin ved athvirvle flasken i et 37 °C vandbad.2. Chang Medium D med gentamicin indeholderantibiotikummet gentamincin (50 µg/µl). Flereantibiotika kan eventuelt tilsættes.AFMÅLING AF CHANG MEDIUM® D I MINDREMÆNGDER1. Optø Chang Medium D med gentamicin ifølgevejledningen.2. Fordel mediet aseptisk i mængder af passende størrelseog nedfrys dem.3. Optø de opdelte mængder i et 37 °C vandbad, når deskal bruges.BRUGSANVISNINGpH-værdien af det medium, der anvendes tilkulturerne, skal være 6,8-7,2 (dvs. at mediet skalhave en let gullig laksefave). pH-værdien kan let justeresved at anbringe mediet i en inkubator med 5-8 % CO 2medlåget løsnet let i ca. 30 minutter.Bemærk: Der dannes ofte kalciumoxalatkrystaller i ChangMedium D. Tilstedeværelsen af disse krystaller laderikke til at forårsage nogen skadelig effekt på produktetsperformance.Chang Medium ® D med gentamicin indeholderantibiotikummet gentamincin. Forholdsregler skal tagesfor at sikre, at patienten ikke er sensibiliseret over fordette antibiotikum.KVALITETSSIKRINGSTERILITETDet serum, der er anvendt til fremstilling af Chang MediumD med gentamicin, er blevet testet for viruskontaminationifølge CFR Title 9 Part 113.53. Det er også blevet screenetfor mykoplasmakontamination. Chang Medium D medgentamicin er steriliseret vha. filtrering gennem et filter på0,1 mikron. Prøver af Chang Medium D med gentamiciner blevet testet for bakteriologisk kontamination ifølge denaktuelle protokol for sterilitetstesting som beskrevet i denaktuelle USP sterilitetstest .Chang Medium ® er et registreret varemærke tilhørendeIrvine Scientific.

SUOMILATVISKIKÄYTTÖTARKOITUSChang Medium D + gentamisiini -elatusainetta voidaankäyttää seuraaviin sovellutuksiin:1. amnionnesteen solujen primääriviljely2. viljelmässä jakautuneiden amnionnesteen solujenkasvatus3. luuydinsolujen viljely4. kiinteä amnionkudos korionvillusnäytteistä.Tämä elatusaine on tarkoitettu käytettäväksiCO 2-soluviljelykaapeissa (viljelmät tasapainotettu5 % – 8 % CO 2-ilmakehässä).Lopullisen pH:n on oltava 6,8–7,2. Katso käyttöohjeet.Varoitus: Älä käytä Chang Medium D + gentamisiini-elatusainetta etiketissä annetun viimeisenkäyttöpäivän jälkeen.TUOTTEEN KUVAUSChang Medium ® D + gentamisiini kehitettiin ihmisenamnionnesteen solujen primääristä viljelyä vartenkaryotyypitystä ja muuta antenataalista geneettistätestausta varten. Tämä koostumus on optimoitu sekäpullossa suoritettavia että in situ menetelmiä varten.SÄILYTYS JA STABIILIUSSäilytä Chang Medium D + gentamisiini pakastettuna-10 °C lämpötilassa. Käyttämätön Chang Medium D +gentamisiini voidaan pakastaa uudelleen tai säilyttää 2°C – 8 °C:n lämpötilassa.Suojaa fluoresoivalta valolta.Viljelmien ruokkimiseen käytetynelatusaineen pH:n on oltava välillä 6,8–7,2(eli elatusaineen on oltava väriltään hieman kellertävänlohenpunainen). pH:ta voidaan säätää helposti sijoittamallaelatusaine 5 % – 8 % CO 2-soluviljelykaappiin noin 30minuutiksi niin että korkki on hieman löysällä.Huomaa: Chang Medium D:hen muodostuu useinkalsiumoksalaattikiteitä. Näiden kiteiden läsnäolon ei oleosoitettu aiheuttavan mitään haitallista vaikutusta tuotteensuorituskykyyn.Chang Medium D + gentamisiini sisältääantibioottia, gentamisiinia. Asianmukaisiinvarotoimiin on ryhdyttävä senvarmistamiseksi, että potilas ei herkisty tälleantibiootille.LAADUNVARMISTUSSTERIILIYSChang Medium D + gentamisiini -elatusaineen tuotantoonkäytettävästä seerumista on testattu viruskontaminaatioCFR Title 9 Part 113.53:n mukaisesti. Sille on myös tehtymykoplasmakontaminaatiota koskeva seulontatutkimus.Chang Medium D + gentamisiini steriloidaan suodattamalla0,1 mikronin suodattimen läpi. Chang Medium D+ gentamisiini -elatusaineen näytteistä testataanmahdollinen bakteerikontaminaatio noudattamallasteriiliystestausprotokollan mukaisesti, joka on kuvattunykyisessä USP-steriiliystestissä .Chang Medium ® on Irvine Scientificin rekisteröitytavaramerkki.PAREDZĒTĀ IZMANTOŠANAChang Medium D ar gentamicīnu var lietot turpmākminētajos gadījumos:1. augļa ūdeņu šūnu primārajā kultivēšanā2. nošķirtu augļa ūdeņu šūnu audzēšanā3. kaulu smadzeņu šūnu kultivēšanā4. kompaktajiem amnija audiem, kas iegūti horija bārkstiņuparauga izmeklēšanā.Šī barotne ir paredzēta izmantošanai CO 2inkubatoros (stabilizējot kultūras 5%-8% CO 2vidē).Galīgajam pH līmenim ir jābūt 6,8-7,2. Lūdzu, skatietlietošanas norādījumus.Uzmanību: Nelietojiet Chang Medium D ar gentamicīnu pēcderīguma termiņa, kas norādīts marķējumā.PRODUKTA APRAKSTSChang Medium ® D ar gentamicīnu ir izveidots izmantošanaicilvēka augļa ūdeņu šūnu primārajā kultivēšanā, lai veiktukariotipu noteikšanas un citus antenatālos ģenētiskostestus. Šis sastāvs ir optimizēts gan flakona, gan in situmetodoloģijas izmantošanas gadījumiem.UZGLABĀŠANA UN STABILITĀTEUzglabājiet Chang Medium D ar gentamicīnu sasaldētu-10° C temperatūrā. Neizlietoto Chang Medium D argentamicīnu var sasaldēt atkārtoti vai uzglabāt 2° C līdz8° C temperatūrā.Aizsargāt no fluorescējošas gaismas iedarbības.Tās barotnes pH, kuru izmanto kultūrubarības vielu papildināšanā, ir jābūt no 6,8-7,2 (t. i., barotnei jābūt nedaudz iedzeltenā laša krāsā).pH līmeni iespējams vienkārši pielāgot, ievietojot barotnesflakonu ar nedaudz vaļīgāk uzliktu aizbāzni 5%-8% CO 2inkubatorā uz apmēram 30 minūtēm.Piezīme: Parasti veidojas kalcija oksalāta kristāli. Navnovērots, ka šie kristāli izraisītu jebkādu iedarbību uzprodukta funkcijām.Chang Medium D ar gentamicīnu saturantibiotiku – gentamicīnu. Jāveic atbilstošipiesardzības pasākumi, lai nodrošinātu, kapacientam nav paaugstināta jutīguma pretšo antibiotiku.KVALITĀTES NODROŠINĀŠANASTERILITĀTEChang Medium D ar gentamicīnu ražošanā izmantotaisserums ir ticis testēts attiecībā uz kontamināciju ar vīrusiemsaskaņā ar Federālā noteikumu kodeksa (CFR) 9. nodaļas,sadaļas 113.53 nosacījumiem. Barotne tikusi rūpīgi testētaarī attiecībā uz piesārņojumu ar mikoplazmu. ChangMedium D ar gentamicīnu ir sterilizēts, filtrējot caur 0,1mikronu filtru. Chang Medium D ar gentamicīnu paraugiir pārbaudīti, lai noteiktu iespējamo bakterioloģiskopiesārņojumu, ievērojot sterilitātes testēšanas protokolu,kas aprakstīts pašreizējos ASV Farmakopejas (USP)noteikumos par sterilitātes testēšanu .Chang Medium ® ir reģistrēta Irvine Scientific preču zīme.Katso viimeinen käyttöpäivä pullon etiketistä. ChangMedium D + gentamisiini voidaan pakastaa uudelleenkorkeintaan 2 kertaa ja sitä voidaan säilyttää sulatettunalämpötilassa 2 °C – 8 °C 14 päivää ilman että sen toimintamuuttuisi. Yli 14 päivän säilytystä ei suositella.Konkrēto derīguma termiņu skatiet pudeles marķējumā.Chang Medium D ar gentamicīnu var atkārtoti saldētmaksimāli 2 reizes, bet, neiespaidojot funkcijas, uzglabātatkausētu 2° C līdz 8° C temperatūrā 14 dienas. Šādi navieteicams uzglabāt ilgāk par 14 dienām.AINEOSATmg/lSuolat ………………………………………………….. 8515Dekstroosi ……………………………………………….. 880Aminohapot …………………………………………….. 804L-glutamiini …………………………………………….. 257Polypeptidit …………………………………………….. 189Vitamiinit ………………………………………………….. 61Deoksiribonukleosidit ………………………………….. 35Ribonukleosidit ………………………………………….. 35Natriumpyruvaatti ……………………………………….. 97Gentamisiinisulfaatti …………………………………….. 50Muut aineosat …………………………………………….. 9Steroidihormonit …………………………………….. 0,0009Naudan seerumiproteiinit ……………………….. 12 % v/vFenolipuna …………………………………………….. 10SASTĀVDAĻASmg/lSāļi ……………………………………………………… 8515Dekstroze ………………………………………………...880Aminoskābes ……………………………………………. 804L-glutamīns ……………………………………………… 257Polipeptīdi ……………………………………………….. 189Vitamīni ……………………………………………………. 61Dezoksiribonukleozīdi …………………………………… 35Ribonukleozīdi …………………………………………… 35Nātrija piruvāts…………………………………………… 97Gentamicīna sulfāts ……………………………………… 50Citas sastāvdaļas ………………………………………… 9Steroīdhormoni……………………………………… 0.0009Liellopu seruma proteīni …………12% no kopējā tilpumaFenolsarkanais ……………………………………………10VAROTOIMET JA VAROITUKSETTämä laite on tarkoitettu sellaisten henkilöiden käytettäväksi,jotka on koulutettu suorittamaan toimenpiteitä, joihin kuuluulaitteen käyttötarkoituksen mukainen asianmukainen käyttö.PIESARDZĪBAS PASĀKUMI UN BRĪDINĀJUMIŠo ierīci ir paredzēts izmantot personālam, kas irapmācīts tādu procedūru veikšanai, kuras ietver norādītoizmantošanu, kurai šī ierīce ir paredzēta.Pulloa ei saa käyttää, jos sen steriili pakkaus onvahingoittunut.VALMISTELU KÄYTTÖÄ VARTEN1. Sulata Chang Medium D + gentamisiini nopeastipyörittämällä pulloa 37 °C:n vesihauteessa.2. Chang Medium D + gentamisiini sisältää antibioottia,gentamisiinia (50 µg/µl). Muita antibiootteja voidaanlisätä haluttaessa.CHANG MEDIUM D:n JAKAMINEN ERIIN1. Sulata Chang Medium D + gentamisiini ohjeidenmukaan.2. Jaa aseptisesti sopivan kokoisiin alikvootteihin (eriin)ja pakasta uudelleen.3. Sulata alikvootit 37 °C:n vesihauteessa kun olet valmiskäyttämään niitä.Nelietojiet pudeles ar bojātu sterilo iepakojumu.SAGATAVOŠANA LIETOŠANAI1. Ātri atlaidiniet Chang Medium D ar gentamicīnu,pavirpinot pudeli 37°C ūdens peldē.2. Chang Medium D ar gentamicīnu satur antibiotiku– gentamicīnu (50 µg/µl). Ja vēlams, var pievienotpapildu antibiotikas.CHANG MEDIUM D IEDALĪŠANA DEVĀS1. Atlaidiniet Chang Medium D ar gentamicīnu saskaņāar instrukciju.2. Aseptiski iedaliet parocīga lieluma devās un sasaldējietatkārtoti.3. Atlaidiniet iedalītās devas 37°C ūdens peldē, kad tāsnepieciešams izmantot.

de tamanho conveniente, e recongelar.με τις οδηγίες.3. Descongelar as alíquotas em banho Maria a 37°C nomomento de utilização.INSTRUÇÕES DE UTILIZAÇÃOUtilização de Chang Medium D com Gentamicina emculturas primárias: Metodologia In Situ.1. Centrifugar o líquido amniótico a baixa velocidade paraconcentrar as células.2. Ressuspender o precipitado de células num volumepequeno do próprio líquido amniótico do doente. Porexemplo, aspirar o sobrenadante de 10 mL deixando0.5 mL de líquido, e ressuspender. Adicionar suficienteChang Medium D com Gentamicina à suspensãoconcentrada de células para alcançar um volumede cultura final de 0.5 mL por lamela (num total de 4lamelas), ou 2 mL por recipiente.3. Sem perturbar, incubar as culturas a 37°C numaatmosfera de 5% - 8% CO 2.4. No dia 2 de cultura, adicionar 2 mL de Chang MediumD com Gentamicina.5. Após 4 ou 5 dias, comprovar o crescimento das culturas.Uma vez que se observe crescimento, aspirar todo omeio de cultura e adicionar 2 mL de Chang Medium Dcom Gentamicina fresco. A partir deste momento, érecomendável mudar o meio de cultura de 2 em 2 dias.6. Verificar o crescimento das culturas durante ou depoisdo quinto dia, e colher quando se observem númerossuficientes de colónias.7. Obtém-se melhores resultados quando se muda omeio com Chang Medium D com Gentamicina no diaanterior à colheita.Utilização de Chang Medium D com Gentamicina emculturas primárias: Metodologia em recipiente.1. Centrifugar o líquido amniótico a baixa velocidade paraconcentrar as células.2. Ressuspender o precipitado de células num volumepequeno do próprio líquido amniótico do doente. Porexemplo, aspirar o sobrenadante de 10 mL deixando 1mL de líquido e ressuspender. Adicionar 4 mL de ChangMedium D com Gentamicina para obter um volume totalde 5 mL por recipiente.3. Sem perturbar, incubar as culturas a 37°C numaatmosfera de 5% - 8% CO 2.4. Verificar o crescimento ao dia 5. Mudar o meio porChang Medium D com Gentamicina fresco e colher acultura se observar um crescimento suficiente .5. Verificar o crescimento das culturas e mudarcompletamente o meio todos os dias daqui para afrente até observar um número suficiente de colóniaspara colheita.6. Obtém-se melhores resultados quando se muda omeio com Chang Medium D com Gentamicina no diaanterior à colheita.Utilização de Chang Medium D na Cultura de Células doLíquido Amniótico Derivadas de Culturas Primárias:Para passar as células cultivadas, tratar as culturas comtripsina (ou pronase, etc.) tal como se tratam normalmenteas células num meio convencional. Contudo, o tratamentocom pronase deve ser monitorizado cuidadosamente. Osamniócitos cultivados em Meio Chang D com Gentamicinatendem a ser mais sensíveis ao tratamento com proteasesque os cultivados em meios convencionais. Tendo esteaspecto em conta, pode ser por vezes necessário reajustaro protocolo.2. Διανείμετε ασηπτικά σε πρακτικού μεγέθουςυποπολλαπλάσια και ψύξτε ξανά.3. Αποψύξτε τα υποπολλαπλάσια σε υδατολουτρόθερμοκρασίας 37°C όταν είστε έτοιμοι να ταχρησιμοποιήσετε.ΟΔΗΓΙΕΣ ΧΡΗΣΗΣΧρήση Chang Medium D με Γενταμικίνη για ΠρωτογενείςΚαλλιέργειες: in situ Μεθοδολογίες1. Υποβάλλετε σε φυγόκεντρο το αμνιακό υγρό, σε χαμηλήταχύτητα, για συμπύκνωση των κυττάρων.2. Ανα-αιωρείστε το κυτταρικό συσσωμάτωμα σεμικρό όγκο του αμνιακού υγρού της ασθενούς. Γιαπαράδειγμα, αναρροφήστε το υπερκείμενο υγρό των 10mL νηματοποιημένου αμνιακού υγρού σε 0.5 mL πάνωαπό το κυτταρικό συσσωμάτωμα και ανα-αιωρείστε.Προσθέστε επαρκές Chang Medium D με Γενταμικίνηστο συμπυκνωμένο κυτταρικό αιώρημα για να έχετετελικό όγκο καλλιέργειας 0.5 mL ανά καλυπτρίδα(σύνολο 4 καλυπτρίδες) ή 2 mL ανά φιάλη.3. Επωάστε τις καλλιέργειες αδιατάρακτες στους 37°C5%-8% CO 2ατμόσφαιρα.4. Γεμίστε τις καλλιέργειες την 2η ημέρα, προσθέτοντας2 mL Chang Medium D με Γενταμικίνη.5. Μετά από 4 έως 5 ημέρες, ελέγξτε τις καλλιέργειεςγια την ανάπτυξη τους. Οι καλλιέργειες θα πρέπει νατρέφονται αφού παρατηρηθεί ανάπτυξη. Θρέψτε τιςκαλλιέργειες αφαιρώντας όλο το υπερκείμενο υγρόκαλλιέργειας και αντικαθιστώντας με 2 mL φρέσκοChang Medium D με Γενταμικίνη. Προτείνεται οικαλλιέργειες να τρέφονται κάθε 2 ημέρες μετά από αυτό.6. Ελέγξτε την ανάπτυξη των καλλιεργειών την / μετά την5η ημέρα και συλλέξτε όταν παρατηρηθούν επαρκείςαποικίες.7. Τα καλύτερα αποτελέσματα λαμβάνονται όταν οικαλλιέργειες τρέφονται με Chang Medium D μεΓενταμικίνη την ημέρα πριν την συλλογή.Χρήση Chang Medium D με Γενταμικίνη για ΠρωτογενείςΚαλλιέργειες: Μεθοδολογίες Προχοϊδών1. Υποβάλλετε σε φυγόκεντρο το αμνιακό υγρό σε χαμηλήταχύτητα για συμπύκνωση των κυττάρων.2. Ανα-αιωρείστε το κυτταρικό συσσωμάτωμα σεμικρό όγκο του αμνιακού υγρού της ασθενούς. Γιαπαράδειγμα, αναρροφήστε το υπερκείμενο υγρό των 10mL από νηματοποιημένο αμνιακό υγρό σε 1 mL πάνωαπό το κυτταρικό συσσωμάτωμα και ανα-αιωρείστε.Προσθέστε 4 mL Chang Medium D με Γενταμικίνη γιασυνολικό όγκο 5 mL ανά φιαλίδιο.3. Επωάστε τις καλλιέργειες αδιατάρακτες σεθερμοκρασία 37°C 5%-8% CO 2ατμόσφαιρα.4. Ελέγξτε την ανάπτυξη την 5η ημέρα. Αλλάξτε το μέσομε φρέσκο Chang Medium D με Γενταμικίνη καισυγκεντρώστε αν παρατηρηθεί επαρκής κυτταρικήανάπτυξη.5. Ελέγξτε την ανάπτυξη των καλλιεργειών και αλλάξτεπλήρως το μέσο καθημερινά, έως ότου παρατηρηθούνεπαρκείς αποικίες και είναι έτοιμες για συλλογή.6. Τα καλύτερα αποτελέσματα λαμβάνονται ότανοι καλλιέργειες τρέφονται με Chang Medium D εΓενταμικίνη την ημέρα πριν την συλλογή.Χρήση Chang Medium D με Γενταμικίνη για ΑνάπτυξηΚυττάρων Διόδου Αμνιακού Υγρού:

1. Odstřeďte plodovou vodu při nízkých otáčkách akoncentrujte tak buňky.Anvendelse af Chang Medium D med gentamicin til primærekulturer: Metodologi in situ2. Rozpusťte buněčnou peletu v malém objemu plodovévody stejné pacientky. Například odsajte supernatant z10 ml plodové vody a ponechte jen 0,5 ml nad peletou.Poté znovu rozpusťte. Ke koncentrované buněčnésuspenzi přidejte dostatečné množství Chang MediumD s gentamycinem, abyste měli 0,5 ml suspenze najedno krycí sklíčko (celkem 4 krycí sklíčka) nebo 2 mlna kultivační lahvičku.3. Inkubujte kultury v klidu při teplotě 37 °C a v atmosféře5-8 % CO 2.4. Druhý den kultury zalijte 2 ml přípravku Chang MediumD s gentamycinem.5. Po 4 – 5 dnech zkontrolujte růst kultur. Jakmile začnourůst, je třeba dodat živiny. Odstraňte proto veškerýsupernatant a nahraďte 2 ml čerstvého Chang MediumD s gentamycinem. Poté doporučujeme doplňovat živinykaždé 2 dny.6. Dále růst kultury kontrolujte průběžně a odebertemateriál, jakmile se vytvoří dostatek kolonií.7. Optimálních výsledků dosáhnete odebráním materiáluden po přidání čerstvého média.Použití k primární kultivaci: kultivace v lahvích1. Odstřeďte plodovou vodu při nízkých otáčkách akoncentrujte tak buňky.2. Rozpusťte buněčnou peletu v malém objemu plodovévody stejné pacientky. Například odsajte supernatantz 10 ml plodové vody a ponechte jen 1 ml nad peletou.Poté znovu rozpusťte. Přidejte 4 ml přípravku ChangMedium D s gentamycinem do celkového objemu 5 mlna láhev.3. Inkubujte kultury v klidu při teplotě 37 °C a atmosféře5-8 % CO 2.4. Zkontrolujte růst 5. den. Vyměňte médium za čerstvéChang Medium D s gentamycinem, a pokud je kulturadostatečně narostlá, odeberte materiál.5. Poté denně kontrolujte růst kultury a zcela vyměňujtemédium, dokud se nevytvoří dostatek kolonií a nejsoupřipraveny k použití.6. Optimálních výsledků dosáhnete odebráním materiáluden po přidání čerstvého média.Použití k množení pasážovaných buněk z plodové vody:Chcete-li buňky pasážovat, ošetřete kulturu trypsinem(nebo pronázou atd.), jak to normálně provádíte u buněkpěstovaných v konvenčním médiu. Průběh ošetřeníproteázou však pečlivě monitorujte. Buňky z plodové vodykultivované v přípravku Chang Medium D s gentamycinembývají citlivější na ošetření proteázou než buňky zkonvenčního média. Možná bude nutné v tomto smysluupravit protokol.pH média používaného k doplnění živin musí být v rozmezí6,8–7,2 (médium tedy musí mít mírně nažloutlou lososovoubarvu). pH lze snadno upravit vložením média s mírněpovolenou čepičkou asi na 30 minut do inkubátoru satmosférou 5-8 % CO 2.Poznámka: V médiu se běžně tvoří krystalky oxalátuvápenatého. Přítomnost krystalků není podle všeho nazávadu funkci přípravku.1. Centrifuger amnionvæsken ved lav hastighed for atkoncentrere cellerne.2. Resuspender cellepelleten i en lille volumen afpatientens egen amnionvæske. Aspirer fxsupernatanten fra 10 ml centrifugeret amnionvæske til0,5 ml over cellepelleten, og resuspender. Tilsæt nokChang Medium D med gentamicin til den koncentreredecellesuspension for at få en endelig volumen på 0,5 mlpr. dækglas (i alt 4 dækglas) eller 2 ml pr. ampul.3. Inkubér kulturerne uforstyrret ved 37 °C i en atmosfæremed 5-8 % CO 2.4. Skyl kulturerne på dag 2 ved at tilsætte 2 ml ChangMedium D med gentamicin.5. Efter 4-5 dage skal kulturernes vækst kontrolleres.Kulturerne skal forsynes med nyt medium, nårvækst observeres. Dette gøres ved at fjerne helekultursupernatanten og tilsætte 2 ml friskt ChangMedium D med gentamicin. Det anbefales, at kulturerneforsynes med friskt medium hver 2. dag derefter.6. Kontroller kulturernes vækst på/eller efter dag 5 og høst,når der kan observeres nok kolonier.7. De bedste resultater opnås, hvis kulturerne forsynesmed Chang Medium D med gentamicin dagen inden,at de høstes.Anvendelse af Chang Medium D med gentamicin til primærekulturer. Metodologi med kolbe1. Centrifuger amnionvæsken ved lav hastighed for atkoncentrere cellerne.2. Resuspender cellepelleten i en lille volumen afpatientens egen amnionvæske. Aspirer fxsupernatanten fra 10 ml centrifugeret amnionvæsketil 1 ml over cellepelleten, og resuspender. Tilsæt 4ml Chang Medium D med gentamicin, så den totalevolumen er 5 ml pr. kolbe.3. Inkubér kulturerne uforstyrret ved 37 °C i en atmosfæremed 5-8 % CO 2.4. Kontroller væksten på dag 5. Udskift mediet medfriskt Chang Medium D med gentamicin og høst, hvistilstrækkelig cellevækst kan observeres.5. Kontroller kulturernes vækst og udskift medietfuldstændigt hver dag derefter, indtil nok kolonier kanobserveres, som er klar til at blive høstet.6. De bedste resultater opnås, hvis kulturerne forsynesmed Chang Medium D med gentamicin dagen inden,at de høstes.Anvendelse af Chang Medium D med gentamicin til dyrkningaf passerede amnionvæskeceller:Passage af cellerne opnås ved at behandle kulturernemed trypsin (eller pronase m.m.) som ved celler, derdyrkes i konventionelt medium. Proteasebehandling skalimidlertid overvåges nøje. Amnionvæskeceller, der dyrkesi Chang Medium D med gentamicin, har en tendens tilat være mere sensitive over for proteasebehandling endamnionvæskeceller, der dyrkes i konventionelt medium.Det kan være nødvendigt at ændre protokollen for at tagehensyn hertil.

KÄYTTÖOHJEETChang Medium D + gentamisiini -elatusaineen käyttöprimääriviljelmiin: in situ menetelmät1. Sentrifugoi amnionneste pienellä nopeudella solujenkonsentroimiseksi.2. Suspendoi solusakka uudelleen pieneen tilavuuteenpotilaan omaa amnionnestettä. Esimerkiksi imesentrifugoidun amnionnesteen (10 ml) supernatantti0,5 ml:n tilavuuteen solusakan yläpuolella ja suspendoiuudelleen. Lisää riittävästi Chang Medium D +gentamisiini -elatusainetta konsentroituun solusakkaan,jotta lopullinen maljaustilavuus on 0,5 ml per peitinlasi(kaikkiaan 4 peitinlasia) tai 2 ml per pieni pullo.3. Inkuboi viljelmiä niitä liikuttamatta 37 °C:n lämpötilassa5 % – 8 % CO 2-ilmakehässä.4. Täytä viljelmät päivänä 2 lisäämällä 2 ml Chang MediumD + gentamisiini -elatusainetta.5. Viljelmien kasvu tulee tarkistaa 4–5 päivän kuluttua.Viljelmiä on ruokittava kun kasvua on havaittu. Ruokiviljelmiä poistamalla kaikki viljelmän supernatantti jakorvaamalla se 2 ml:lla tuoretta Chang Medium D+ gentamisiini -elatusainetta. On suositeltavaa, ettäviljelmiä ruokitaan tämän jälkeen joka toinen päivä.6. Tarkista viljelmien kasvu päivänä 5 tai sen jälkeen jakerää solut, kun havaitset riittävän määrän pesäkkeitä.7. Parhaat tulokset saadaan, kun viljelmiä ruokitaan ChangMedium D + gentamisiini -elatusaineella keräämistäedeltävänä päivänä.Chang Medium D + gentamisiini -elatusaineen käyttöprimääriviljelmiin: Pullossa suoritettavat menetelmät1. Sentrifugoi amnionneste pienellä nopeudella solujenkonsentroimiseksi.2. Suspendoi solusakka uudelleen pieneen tilavuuteenpotilaan omaa amnionnestettä. Esimerkiksi imesentrifugoidun amnionnesteen (10 ml) supernatantti1 ml:n tilavuuteen solusakan yläpuolella ja suspendoiuudelleen. Lisää 4 ml Chang Medium D + gentamisiini-elatusainetta niin, että kokonaistilavuus on 5 ml perpullo.3. Inkuboi viljelmiä niitä liikuttamatta 37 °C:n lämpötilassa5 % – 8 % CO 2-ilmakehässä.4. Tarkista kasvu päivänä 5. Vaihda elatusaine tuoreeseenChang Medium D + gentamisiini -elatusaineeseen jakerää, jos havaitset riittävää solujen kasvua.5. Tarkista viljelmien kasvu ja vaihda elatusaine kokonaanjoka päivä tämän jälkeen, kunnes riittävästi pesäkkeitähavaitaan ja ne ovat valmiita kerättäviksi.6. Parhaat tulokset saadaan, kun viljelmiä ruokitaan ChangMedium D + gentamisiini -elatusaineella keräämistäedeltävänä päivänä.Chang Medium D + gentamisiini -elatusaineen käyttöviljelmässä jakautuneiden amnionnesteen solujenkasvattamiseksi:Kun haluat antaa solujen jakautua viljelmässä, käsitteleviljelmiä trypsiinillä (tai pronaasilla jne.), kuten normaalistitekisit silloin kun soluja kasvatetaan tavanomaisessaelatusaineessa. Proteaasikäsittelyä on kuitenkin seurattavahuolellisesti. Amnionnesteen soluilla, jotka kasvatetaanChang Medium D + gentamisiini -elatusaineessa, ontaipumus olla herkempiä proteaasikäsittelylle kuinamnionnesteen soluilla, jotka kasvatetaan tavanomaisessaelatusaineessa. Protokollan muuttaminen tämän ottamiseksihuomioon saattaa olla tarpeen.LIETOŠANAS NORĀDĪJUMIChang Medium D ar gentamicīnu lietošana primāraikultivēšanai: in situ metode1. Centrifugējiet augļa ūdeņu šķidrumu ar nelielu ātrumu,lai koncentrētu šūnas.2. Suspendējiet šūnu lodīti no jauna nelielā daudzumāpaša pacienta augļa ūdeņu šķidruma. Piemēram,aspirējiet līdz 0, 5 ml supernatanta no 10 ml augļaūdeņu šķidruma centrifugāta virs šūnas lodītes unsuspendējiet atkārtoti. Pievienojiet koncentrētajai šūnususpensijai pietiekamu daudzumu Chang Medium Dar gentamicīnu, lai galīgajam uzklāšanas daudzumamparedzētu 0,5 ml uz katru segstikliņu (pavisam 4segstikliņi) vai 2 ml uz flakonu.3. Netraucēti inkubējiet kultūras 37° C temperatūrā 5%-8%CO 2vidē.4. 2. dienā uzpludiniet kultūras, pievienojot 2 ml ChangMedium D ar gentamicīnu.5. Pēc 4. līdz 5. dienai, jāpārbauda kultivēto šūnu augšana.Tiklīdz tiek novērota kultūru augšana, tām jāpapildinabarība. Veiciet kultūru barības papildināšanu, noņemotvisu supernatantu no kultūras un aizvietojot to ar 2 mlsvaiga Chang Medium D ar gentamicīnu. Pēc tamieteicams papildināt kultūru barotni ik pēc 2 dienām.6. Pārbaudiet kultūru augšanu 5. dienā/pēc 5. dienas unveiciet ievākšanu, kad var novērot pietiekama apjomakolonijas.7. Vislabākie rezultāti tiek iegūti, pievienojot kultūrāmChang Medium D ar gentamicīnu dienā pirmsievākšanas.Chang Medium D ar gentamicīnu lietošana primāraikultivēšanai: Flakona metode1. Centrifugējiet augļa ūdeņu šķidrumu ar nelielu ātrumu,lai koncentrētu šūnas.2. Suspendējiet šūnu lodīti no jauna nelielā daudzumāpaša pacienta augļa ūdeņu šķidruma. Piemēram,aspirējiet līdz 1 ml supernatanta no 10 ml augļa ūdeņušķidruma centrifugāta virs šūnas lodītes un suspendējietno jauna. Pievienojiet 4 ml Chang Medium D argentamicīnu, lai kopējais daudzums katrā flakonā būtu5 ml.3. Netraucēti inkubējiet kultūras 37° C temperatūrā 5%-8%CO 2vidē.4. 5. dienā pārbaudiet augšanu. Aizvietojiet barotni arsvaigu Chang Medium D ar gentamicīnu un veicietievākšanu, ja novērojama pietiekami efektīva šūnuaugšana.5. Pēc tam pārbaudiet kultūru augšanu un katru dienupilnībā nomainiet barotni, līdz var novērot pietiekamaapjoma kolonijas, kas gatavas ievākšanai.6. Vislabākie rezultāti tiek iegūti, pievienojot kultūrāmChang Medium D ar gentamicīnu iepriekšējā dienāpirms ievākšanas.Chang Medium D ar gentamicīnu lietošana nošķirtu augļaūdeņu šķidruma šūnu audzēšanā:Lai nošķirtu šūnas, apstrādājiet kultūras ar tripsīnu (vaipronāzi, u. c.), kā Jūs parasti darītu, ja šūnas tiktu audzētasstandarta barotnē. Tomēr, apstrādājot ar proteāzi, jāveicuzmanīga novērošana. Augļa ūdeņu šķidruma šūnām, kasaudzētas Chang Medium D ar gentamicīnu, ir nosliece uzlielāku jutīgumu pret apstrādi ar proteāzi nekā augļa ūdeņušķidruma šūnām, kas audzētas standarta barotnē. Var būtnepieciešams pārveidot protokolu, lai ņemtu vērā šo faktu.

Catalog No. 99404For in vitro diagnostic use.Zum Gebrauch in der in vitro Diagnostik.Per uso diagnostico in vitro.Para uso en diagnóstico in vitro.Pour l’usage diagnostique in vitro.Para a utilização em diagnóstico in vitro.Για in vitro διαγνωστική χρήση.In vitro diagnostikum.Til in vitro-diagnostik.In vitro diagnostiseen käyttöön.Lietošanai in vitro diagnostikā.Voor in vitro diagnostisch gebruik.Do stosowania w diagnostyce in vitro.Pentru utilizarea fertilizării in vitroFör in vitro-diagnostik.In vitro diagnostiliseks kasutamiseks.In vitro diagnosztikai célra.Chang Medium ® D with GentamicinFor Human Amniotic Fluid CellsSkirta in vitro diagnostikos tyrimams.In vitro diyagnostik kullanım için.Symbols:European RepresentativeMPIESchutweg 13A5145 NP Waalwijk, The Netherlands0050See instructionsfor use.Catalog NumberLot NumberSterilized using asepticprocessing techniques(filtration)Expiration:Year - Month - DayCaution: See instructionsfor useStorage TemperatureCE MarkMPIE Schutweg 13a5145 NP Waalwijk,The NetherlandsNEDERLANDSBEDOELD GEBRUIKChang Medium D met gentamicine kan worden gebruiktvoor de volgende toepassingen:1. de primaire kweek van vruchtwatercellen2. groeiende gepasseerde vruchtwatercellen3. de kweek van beenmergcellen4. vast amnionweefsel uit chorion villi-monsters.Dit medium is bestemd voor gebruik in CO 2-incubators (kweken die zijn geëquilibreerd met5%-8% CO 2-atmosfeer).De definitieve pH moet liggen tussen 6,8 en 7,2. Ziegebruiksaanwijzing.Voorzichtig: gebruik Chang Medium D met gentamicine nietna de vervaldatum die op de sticker is vermeld.PRODUCTBESCHRIJVINGChang Medium ® D met gentamicine werd ontwikkeld voor deprimaire kweek van humane vruchtwatercellen voor gebruikbij karyotypering en ander prenataal genetisch onderzoek.Deze formule werd geoptimaliseerd voor zowel fles- alsin situ-methoden.BEWAREN EN STABILITEITBewaar Chang Medium D met gentamicine bevroren bij -10°C. Niet gebruikt Chang Medium D met gentamicine kanopnieuw worden ingevroren of bewaard bij 2 °C tot 8 °C.Beschermen tegen fluorescerend licht.Zie flessticker voor de specifieke vervaldatum. ChangMedium D met gentamicine mag maximaal 2 keer opnieuwworden ingevroren en ontdooid worden bewaard bij 2 °Ctot 8 °C gedurende 14 dagen, zonder dat dit de werkingbeïnvloedt. Bewaren gedurende meer dan 14 dagenwordt afgeraden.COMPONENTENmg/lZouten ………………………………………………… 8515Dextrose ………………………………………………… 880Aminozuren ……………………………………………… 804L-glutamine ……………………………………………… 257Polypeptiden …………………………………………… 189Vitaminen ………………………………………………… 61Deoxyribonucleosiden …………………………………… 35Ribonucleosiden ………………………………………… 35Natriumpyruvaat ………………………………………… 97Gentamicinesulfaat ……………………………………… 50Andere componenten …………………………………… 9Steroïdehormonen ………………………………… 0,0009Runderserumeiwitten ……………………………… 12% v/vFenol rood ………………………………………………… 10VOORZORGSMAATREGELEN ENWAARSCHUWINGENDit hulpmiddel is bedoeld voor gebruik door personeeldat opgeleid is voor procedures inclusief de aangegeventoepassing waarvoor het hulpmiddel is bedoeld.Een fles/Flessen waarvan de steriele verpakking beschadigdof op enige wijze in gevaar werd gebracht mag/mogen nietgebruikt worden.VOORBEREIDING OP GEBRUIK1. Ontdooi Chang Medium D met gentamicine snel doorde fles in een 37 °C waterbad rond te draaien.2. Chang Medium D met gentamicine bevat hetantibioticum genta¬micine (50 µg/µl). Extra antibioticakunnen, indien gewenst, worden toegevoegd.OPDELEN VAN CHANG MEDIUM D1. Ontdooi Chang Medium D met gentamicine volgens deaanwijzingen.2. Verdeel het op aseptische wijze in gemakkelijkhanteerbare delen en vries deze opnieuw in.De pH van het medium dat wordt gebruikt omde kweken te voeden moet liggen tussen 6,8en 7,2 (d.w.z. het medium moet een lichtgele zalmkleurhebben). De pH kan iets worden aangepast door hetmedium met iets losgedraaide dop in een 5%-8% CO 2-incubator te zetten gedurende 30 minuten.Opm.: meestal vormen er zich calciumoxalaatkristallen inChang Medium D. Uit onderzoek blijkt dat de aanwezigheidvan deze kristallen geen nadelige invloed heeft op deprestatie van het product.Chang Medium D met gentamicine bevat het antibioticumgenta¬micine. Passende voorzorgsmaatregelen dienen teworden genomen om ervoor te zorgen dat de patiënt nietgevoelig is voor dit antibioticum.KWALITETISBORGINGSTERILITEITHet serum dat is gebruikt bij de productie van ChangMedium D met gentamicine is getest op virale besmettingvolgens CFR Title 9, Part 113.53. Het is ook getest opmycoplasmabesmetting. Chang Medium D met gentamicineis gesteriliseerd middels filtratie met een 0,1 micron filter.Chang Medium D met gentamicine-monsters zijn getestop mogelijke bacteriologische besmetting volgens hetsteriliteitstestprotocol zoals beschreven in de huidigeUSP-steriliteitstest .Chang Medium ® is een gedeponeerd handelsmerk vanIrvine Scientific.

2. Rozdzielić aseptycznie na odpowiednie wielkościowo3. Decongelaţi alicotul în baie de apă la 37 °C când estePOLSKIROMÂNĂZASTOSOWANIEPożywka Chang Medium D z gentamycyną może byćużywana w następujących procedurach:1. hodowla pierwotna komórek płynu owodniowego2. rosnące pasażowane komórki płynu owodniowego3. hodowla komórek szpiku kostnego4. biopsja stałej tkanki owodni z kosmówki.Pożywka ta została wyprodukowana do użyciaw inkubatorach CO 2(pożywki doprowadzone dorównowagi w 5%-8% atmosferze CO 2).Końcowe pH musi być 6,8 – 7,2. Zob. Wskazówki Użycia.Środki ostrożności: Nie stosować Chang Medium D zgentamycyną po upływie daty ważnościpodanej na etykiecie.OPIS PRODUKTUPożywka Chang Medium ® D z gentamycyną zostaławyprodukowana dla hodowli pierwotnej komórek ludzkiegopłynu owodniowego do kariotypowania i przeprowadzaniainnych przedporodowych testów genetycznych. Taprocedura została zoptymalizowana zarówno dlametodologii kolb oraz in situ.PRZECHOWYWANIA I STABILNOŚĆPrzechowywać pożywkę Chang Medium D z gentamycynązamrożoną w temperaturze od -10°C. Niezużytą częśćpożywki Chang Medium D z gentamycyną można zamrożićlub przechowywać w temperaturze od 2°C do 8°C.Chronić przed światłem fluorescencyjnym.Data ważności znajduje się na etykiecie butelki . PożywkaChang Medium D z gentamycyną może być powtórniezamrożona maksymalnie 2 razy lub przechowywanarozmrożona w temperaturze od 2°C do 8°C przez 14 dnibez negatywnego wpływu na jej działanie. Nie zaleca sięprzechowywania dłużej niż 14 dni.SKŁADNIKImg/lSole …………………………………………………… 8515Dekstroza ……………………………………………… 880Aminokwasy …………………………………………… 804L-glutamina ……………………………………………… 257Polipeptydy ……………………………………………… 189Witaminy ………………………………………………… 61Dezoksyrybonukleozydy ………………………………… 35Rybonukleozydy ………………………………………… 35Pirogronian sodu ………………………………………… 97Siarczan gentamycyny ………………………………… 50Inne składniki ……………………………………………… 9Hormony steroidowe ……………………………… 0,0009Białka surowicy bydlęcej ………………………… 12% v/vFenol Red ……………………………………………… 10ŚRODKI OSTROŻNOŚCI I OSTRZEŻENIATo urządzenie jest przeznaczone do użycia przez personelwykwalifikowany w dziedzinie procedur obejmującychwskazane zastosowanie, dla którego to urządzenie jestprzeznaczone.Nie używać żadnej butelki, w której doszło do naruszeniajałowego opakowania.PRZYGOTOWANIE DO UŻYCIA1. Szybko rozmrozić Chang Medium D z gentymycynąprzez obracanie butelki w łaźni wodnej o temperaturze37°C.2. Pożywka Chang Medium D z gentamycyną zawieraantybiotyk gentamycynę (50 µg/µl). W razie potrzebymożna zastosować dodatkowe antybiotyki.ROZDZIAŁ CHANG MEDIUM BMC NA ALIKWOTY1. Rozmrozić Chang Medium D z gentamycyną zgodniez instrukcjami.W celu pasażowania komórek poddać hodowle działaniutrypsyny (lub pronazy, itd.), tak jak postępuje się wprzypadkach gdy komórki wzrastają na konwencjonalnejpożywce. Jednakże, działanie proteazy należy dokładniemonitorować. Komórki płynu owodniowego rosnące napożywce Chang Medium C są bardziej czułe na działanieproteazy niż komórki płynu owodniowego rosnące napożywce konwencjonalnej. Jeśli wziąć to pod uwagę możebyć konieczna modyfikacja protokołu.pH pożywki używanej do odżywiania hodowlimusi mieścić się w granicach 6,8 – 7,2 (tzn. kolorpożywki musi być lekko żółtawo-różowy). pH można łatwodostosować przez umieszczenie pożywki w inkubatorzeprzez około 30 minut w inkubatorze 5%-8% atmosferzeCO 2z lekko poluzowaną zatyczką.Uwaga: W pożywce Chang Medium D często tworząsię kryształy szczawianu wapnia. Nie wykazano, abyobecność tych kryształów wpływała w szkodliwy sposóbna wydajność produktu.Pożywka Chang Medium D z gentamycynązawiera antybiotyk gentamycynę. Należyzastosować odpowiednie środki ostrożności,aby upewnić się, że pacjent nie jest uczulonyna ten antybiotyk.KONTROLA JAKOŚCISTERYLNOŚĆSurowica używana do produkcji Chang Medium D zgentamycyną została przetestowana na zanieczyszczeniawirusowe, zgodnie z CFR Title 9 Part 113.53. Pożywka tabyła też badana przesiewowo na obecność zanieczyszczeńmykoplazmą. Pożywka Chang Medium D z gentymycynąjest sterylizowana przez filtrację przy zastosowaniu filtrao wielkości porów 0,1 mikrona. Próbki Chang MediumD z gentamycyną zostały przetestowane na obecnośćzanieczyszczeń bakteriologicznych, zgodnie z protokołemtestowania sterylności, opisanym w bieżącym teściesterylności USP .Chang Medium ® jest zarejestrowanym znakiem towarowymIrvine Scientific.INDICAŢIILE UTILIZĂRII MEDIULUIChang Medium D cu Gentamicină poate fi utilizat pentruurmătoarele aplicaţii:1. Cultura primară de lichid de celule amniotice2. Creşterea tranzitorie a celulelor lichidului amniotic3. Cultura celulelor de măduvă osoasă4. Ţesutul solid amniotic din mostre chorionic villiMediul a fost destinat pentru utilizare înincubatorul CO 2(culturi echilibrate cu 5%-8%CO 2atmosferic).pH –ul final trebuie să fie între 6.8 – 7.2. Vă rugăm să vedeţiInstrucţiunile de Utilizare.Precauţiuni: Nu utilizaţi Chang Medium D cu Gentamicinădupă data de expirare indicată pe etichetasticlei.DESCRIEREA PRODUSULUIChang Medium ® D cu Gentamicină a fost destinat pentruculturi primare de celule de lichid amniotic uman înutilizarea cariotipurilor şi alte analize prenatale genetice.Această fromulă a fost optimizat atât pentru flacon cât şimetodologia in situ.MODUL DE PĂSTRARE ŞI TERMENUL DEVALABILITATEPăstraţi Chang Medium D cu Gentamicină congelat la -10°C. Partea nefolosită de Chang Medium D cu Gentamicinăpoate fi recongelată şi păstrată la 2 °C până la 8 °C.Feriţi de lumină fluorescentă.STABILITATEAVezi tremenul de expirare trecut pe eticheta de pe sticlă.Chang Medium D cu Gentamicină poate fi recongelatmaximum de două ori şi păstrat dezgheţat la 2 °C până la8 °C timp de 14 zile fără să fie afectată funcţia. Păstrareamai îndelungată de 14 zile nu este recomandată.COMPONENŢIImg/LSăruri............................................................................. 8515Dextroză .......................................................................... 880Aminoacizi ....................................................................... 804Glutamină-L.................................................................... 257Polipeptide ...................................................................... 189Vitamine ............................................................................ 61Dezioxiribonucleotide ........................................................ 35Ribonucleotide .................................................................. 35Piruvat de Sodiu ................................................................. 97Sulfat de Gentamicină ......................................................... 50Alte Componente ................................................................. 9Hormoni Steroizi .......................................................... 0.0009Proteine Ser de Bovin ................................................... 12% v/vFenol Roşu ........................................................................ 10AVERTISMENTE ŞI PRECAUŢIUNIAcest dispozitiv este destinat să fie utilizat de personalulspecializat în proceduri care includ aplicarea indicată pentrucare a fost creat dispozitivul.Nu utilizaţi niciun flacon al cărui ambalaj steril a fostcompromis.PREPARAREA PENTRU UTILIZARE1. Decongelaţi Chang Medium D cu Gentamicină rapidprin învârtirea sticlei într-un container cu apă la 37 °C.2. Chang Medium D cu Gentamicină conţine ca şi antibioticGentamicină (50µg/µL). Antibiotice adiţionale pot fiadăugate dacă doriţi.ALICOTAREA CHANG MEDIUM D1. Decongelaţi Chang Medium D cu Gentamicină înconformitate cu instrucţiunile.2. Distribuiţi aseptic în măsuri corespunzătoare alicotul şirecongelaţi.PH -ul mediului utilizat pentru hrănirea deculturi trebuie să fie între 6.8-7.2 (de exemplumediul trebuie să fie de culoare galben roz-portocaliu. pHulpoate fi ajustat uşor prin aşezarea mediului în 5% -8%incubator CO 2cu capacul uşor deschis pentru 30 de minute.Notă : Cristalii de Oxalat de Calciu se formează deobicei în Chang Medium D. Prezenţa cristalelor nu afost demonstrat să cauzeze efecte dăunătoare asupraperformanţei produsului.Chang Medium ® D cu Gentamicină conţineca şi antibiotic de Gentamicină. Trebuie luateprecauţiuni pentru a asigura că pacienta nueste alergică la acest antibiotic.ASIGURAREA CALITĂŢIISTERILITATESerul utilizat în producerea de Chang Mediu D cuGentamicină a fost testat pentru contaminare virală pebaza CFR titlul 9 partea 113.53. A fost deasemenea verificatpentru contaminare cu micoplasmă. Chang Medium D cuGentamicină este sterilizat prin filtrarea printr-un filtru de 0.1micron. Mostre de Chang Medium D cu Gentamicină sunttestate pentru posibile contaminări bacteriologice urmândprotocolul curent pentru testul de sterilizare descris în USP-ul test de sterilitate.Chang Medium ® este o marcă înregistrată de către IrvineScientific.

SVENSKAEESTIAVSEDD ANVÄNDNINGChang Medium D med gentamicin kan användas förföljande tillämpningar:1. primärodling av celler i amnionvätska2. odling av celler från amnionvätska i efterföljandepassage3. odling av benmärgsceller4. för fast vävnad från chorionvilli-prov.Detta medium har tagits fram för användning ien CO 2-inkubator (kulturerna ekvilibreras i enatmosfär med 5–8 % CO 2).Det slutliga pH måste vara 6,8–7,2. Se bruksanvisningen.Obs! Använd inte Chang Medium D med gentamicin efterdet utgångsdatum som anges på etiketten.PRODUKTBESKRIVNINGChang Medium ® D med gentamicin har utvecklatsför primärodling av celler i human amnionvätska förkaryotypbestämning och andra antenatala genetiska tester.Denna näringslösning har optimerats för användning både iflaska och för in situ-metoder.FÖRVARING OCH HÅLLBARHETChang Medium D med gentamicin skall förvaras fryst vid–10 °C. Oanvänt Chang Medium D med gentamicin kanfrysas på nytt eller förvaras vid 2-8 °C.Skyddas från fluorescerande ljus.Se flasketiketten för specifikt utgångsdatum. Chang MediumD med gentamicin kan frysas ned igen högst 2 gångeroch förvaras upptinat vid 2–8 °C i 14 dagar utan att dessfunktion påverkas. Förvaring under längre tid än 14 dagarrekommenderas ej.KOMPONENTERmg/LSalter …………………………………………………… 8515Dextros ………………………………………………… 880Aminosyror ……………………………………………… 804L-glutamin ……………………………………………… 257Polypeptider …………………………………………… 189Vitaminer ………………………………………………… 61Deoxiribonukleosider …………………………………… 35Ribonukleosider ………………………………………… 35Natriumpyruvat …………………………………………… 97Gentamicinsulfat ………………………………………… 50Andra komponenter ……………………………………… 9Steroider …………………………………………… 0,0009Bovina serumproteiner ……………… 12 % volym/volymFenolrött …………………………………………………… 10FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER OCHVARNINGARDenna produkt är avsedd att användas av personal medutbildning i procedurer vilka inkluderar den indiceradetillämpning för vilken produkten är avsedd.Använd aldrig en flaska vars sterila förpackning inte ärhelt intakt.pH i det medium som används förnäringstillförsel till kulturerna måste varamellan 6,8–7,2 (dvs. mediet måste ha svagt gulaktiglaxfärg).pH kan enkelt justeras genom att mediet placerasi en 5–8 % CO 2-inkubator med locket lätt lossat i cirka30 minuter.Obs! Kalciumoxalatkristaller bildas ofta i Chang MediumD. Närvaro av dessa kristaller har inte visats utöva någonnegativ effekt på produktens funktion.Chang Medium D med gentamicin innehållergentamicin. Adekvata försiktighetsåtgärderskall vidtas för att säkerställa att patienteninte är allergisk mot detta antibiotikum.KVALITETSSÄKRINGSTERILITETDet serum som används vid framställningen av ChangMedium D med gentamicin har testats för viral kontaminationenligt CFR titel 9 del 113.53. Det har också screenats förkontamination av mykoplasma. Chang Medium D medgentamicin har steriliserats genom filtrering genom ett0,1 mikron-filter. Stickprover av Chang Medium D medgentamicin testas för bakteriell kontamination enligt detsterilitetstestningsprotokoll som beskrivs i aktuell USPSterility test (sterilitetstest enligt United StatesPharmacopeia).Chang Medium ® är ett registrerat varumärke som tillhörIrvine Scientific.KASUTUSVALDKONDSöödet Chang Medium D gentamitsiiniga võib kasutadajärgmisteks rakendusteks:1. amnionivedeliku rakkude tüvikultuuri kultiveerimine2. passaaži läbinud amnionivedeliku rakkudekasvatamine3. luuüdirakkude kultiveerimine4. kõldkestahattudest tahkete amnioni kudede proovidevõtmine.See sööde on koostatud CO 2-inkubaatorites kasutamiseks(5%...8% CO 2-atmosfääris tasakaalustatud kultuuridejaoks).Lõplik pH peab olema 6,8...7,2. Palun vaadakekasutusjuhiseid.Ettevaatust: Ärge kasutage söödet Chang Medium Dgentamitsiiniga pärast etiketile märgitudkõlblikkusaja lõppu.TOOTE KIRJELDUSSööde Chang Medium ® D gentamitsiiniga arendativälja inimese amnionivedeliku rakkude tüvikultuurikultiveerimiseks karüotüübi määramise otstarbel jamuuks antenataalseks geneetiliseks testimiseks. Segu onoptimeeritud nii kolbi kui ka in situ meetodis kasutamiseks.SÄILITAMINE JA STABIILSUSHoidke sööde Chang Medium D gentamitsiiniga külmutatulttemperatuuril -10°C. Kasutamata söödet Chang MediumD gentamitsiiniga võib uuesti külmutada või hoidatemperatuuril 2°C...8°C.Kaitske fluorestsentsvalguse eest.Selle söötme kõlblikkusaeg on märgitud pudeli etiketile.Söödet Chang Medium D gentamitsiiniga võib kuni 2 kordauuesti külmutada ja hoida sulatatult 14 päeva temperatuuril2°C...8°C selle funktsiooni kahjustamata. Hoidmine rohkemkui 14 päeva ei ole soovitatav.KOMPONENDIDmg/LSoolad ………………………………………………… 8515Dekstroos ……………………………………………… 880Aminohapped ………………………………………… 804L-glutamiin …………………………………………… 257Polüpeptiidid ………………………………………… 189Vitamiinid ………………………………………………… 61Desoksüribonukleosiidid …………………………… 35Ribonukleosiidid ……………………………………… 35Naatriumpüruvaat ……………………………………… 97Gentamitsiinsulfaat …………………………………… 50Muud komponendid …………………………………… 9Steroidhormoonid ……………………………… 0,0009Veise seerumi valgud ………………………… 12% v/vFenoolpunane ………………………………………… 10ETTEVAATUSABINÕUD JA HOIATUSEDSee seade on ette nähtud kasutamiseks tervishoiutöötajatele,kes on saanud vastava koolituse, kaasa arvatud selleseadme kavandatud kasutuse alal.Kultuuride söötmiseks kasutatava söötmepH peab olema 6,8...7,2 (st sööde peab olemakergelt kollakat lõhevärvi). pH-d saab kergesti korrigeeridalõdvalt korgistatud söötme asetamisega umbes 30 minutiks5%...8% CO 2-inkubaatorisse.Märkus: Kaltsiumoksalaadi kristallide moodustuminesöötmes Chang Medium D on tavaline. Nende kristallideolemasolu puhul ei ole täheldatud toote efektiivsusekahjustumist.Sööde Chang Medium D gentamitsiiniga sisaldabantibiootikumi gentamitsiin. Peab rakendama sobivaidettevaatusabinõusid veendumaks, et patsient ei ole selleantibiootikumi suhtes ülitundlik.KVALITEEDI GARANTIISTERIILSUSSöötme Chang Medium D gentamitsiiniga tootmiselkasutatud seerumit on testitud viirusega kontaminatsioonisuhtes vastavalt koodeksi CFR 9. peatüki osale 113.53.Seda on skriinitud ka mükoplasmaga kontaminatsioonisuhtes. Sööde Chang Medium D gentamitsiiniga onsteriliseeritud kasutades 0,1 mikronilist filtrit. Söötme ChangMedium D gentamitsiiniga proovid on testitud võimalikubakteriaalse saastatuse suhtes järgides kehtivas USPsteriilsuse testis toodud steriilsuse kontrollimiseprotokolli.Chang Medium ® on firma Irvine Scientific registreeritudkaubamärk.BEREDNING FÖR ANVÄNDNING1. Tina Chang Medium D med gentamicin snabbt genomatt snurra flaskan i ett 37 °C vattenbad.2. Chang Medium D med gentamicin innehåller gentamicin(50 µg/µL). Ytterligare antibiotika kan tillsättas om såönskas.ALIKVOTERING AV CHANG MEDIUM D1. Tina Chang Medium D med gentamicin enligtanvisningarna.2. Fördela mediet aseptiskt i alikvoter av lämplig storlekoch frys ner dem på nytt.Ärge kasutage ühtegi pudelit, mille steriilne pakend onkahjustunud.ETTEVALMISTAMINE KASUTAMISEKS1. Kiirelt sulatage sööde Chang Medium D gentamitsiiniga,pudelit 37°C vesivannis keerutades.2. Sööde Chang Medium D gentamitsiiniga sisaldabantibiootikumi gentamitsiin (50 µg/µL). Soovi korralvõite lisada antibiootikume.SÖÖTME CHANG MEDIUM D ALIKVOODI VÕTMINE1. Sulatage sööde Chang Medium D gentamitsiinigavastavalt juhistele.3. Tina alikvoterna i ett 37 °C vattenbad när de skallanvändas.2. Jagage aseptiliselt sobiva suurusega alikvootideks jakülmutage uuesti.

3. Ontdooi de delen in een 37 °C waterbad voordat u dezegebruikt.GEBRUIKSAANWIJZINGGebruik van Chang Medium D met gentamicine voorprimaire kweken: in situ-methode1. Centrifugeer het vruchtwater met lage snelheid om decellen te concentreren.2. Resuspendeer het celpellet in een kleine hoeveelheidvan het eigen vruchtwater van de patiënt. Voorbeeld:aspireer het supernatant van 10 ml gecentrifugeerdvruchtwater tot 0,5 ml boven het celpellet enresuspendeer. Voeg voldoende Chang Medium D metgentamicine toe aan de geconcentreerde celsuspensiezodat er een eindvolume van 0,5 ml per afdekplaatje (intotaal 4 afdekplaatjes) of 2 ml per fles beschikbaar is.3. Zet de kweken ongestoord in de incubator bij 37 °C en5%-8% CO 2-atmosfeer.4. Bedek de kweken op dag 2 volledig door 2 ml ChangMedium D met gentamicine toe te voegen.5. Na 4 tot 5 dagen moet de groei van de kweken wordengecontroleerd. De kweken moeten worden gevoedals eenmaal is vastgesteld dat zij groeien. Voed dekweken door al het kweeksupernatant te verwijderenen te vervangen door 2 ml vers Chang Medium D metgentamicine. Het verdient aanbeveling de kwekendaarna om de 2 dagen te voeden.6. Controleer de kweken op groei op/na dag 5, en oogstals voldoende kolonies worden waargenomen.7. De beste resultaten worden verkregen als de kwekenworden gevoed met Chang Medium D met gentamicineop de dag vóór het oogsten.Gebruik van Chang Medium D met gentamicine voorprimaire kweken: flesmethode1. Centrifugeer het vruchtwater met lage snelheid om decellen te concentreren.2. Resuspendeer het celpellet in een kleine hoeveelheidvan het eigen vruchtwater van de patiënt. Voorbeeld:aspireer het supernatant van 10 ml gecentrifugeerdvruchtwater tot 1 ml boven het celpellet enresuspendeer. Voeg 4 ml Chang Medium D metgentamicine toe zodat het totaalvolume per fles 5 mlbedraagt.3. Zet de kweken ongestoord in de incubator bij 37 °C en5%-8% CO 2-atmosfeer.4. Controleer op groei op dag 5. Vervang het medium doorvers Chang Medium D met gentamicine en oogst alsvoldoende celgroei wordt waargenomen.5. Controleer of de kweken groeien en vervang hetmedium volledig elke dag daarna totdat voldoendekolonies worden waargenomen en kunnen wordengeoogst.6. De beste resultaten worden verkregen als de kwekenworden gevoed met Chang Medium D met gentamicineop de dag vóór het oogsten.Gebruik van Chang Medium D met gentamicine voorgroeiende gepasseerde vruchtwatercellen:2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.comPN 40791 Rev.3Om de cellen te passeren, behandel de kweken mettrypsine (of pronase etc.) zoals u dat normaal gesprokenzou doen als cellen groeien in een traditioneel medium. Deproteasebehandeling dient echter zorgvuldig in de gatente worden gehouden. Vruchtwatercellen die gekweektzijn in Chang Medium D met gentamicine hebben deneiging gevoeliger te zijn voor proteasebehandeling danvruchtwatercellen die zijn gekweekt in een traditioneelmedium. Het kan noodzakelijk zijn om uw protocol tewijzigen om hiermee rekening te houden.

alikwoty i ponownie zamrozić.gata pentru utilizare.3. Rozmrozić alikwoty w łaźni wodnej o temperaturze37°C, gdy są gotowe do użycia.INSTRUKCJE UŻYCIAPożywka Chang Medium D z gentamycyną do hodowlipierwotnych: metodologie in situ.1. Wirować płyn owodniowy przy niskich obrotach abyspowodować skupienie komórek.2. Ponownie zawiesić pelet w małej objętości własnegopłynu owodniowego pacjentki. Na przykład odebrać10 ml nadsączu z wirowanego płynu owodniowego do0,5 ml peletu ponad komórkami i ponownie zawiesić.Dodać wystarczającą ilość pożywki Chang MediumD z gentamycyną do stężonej zawiesiny komórek,aby zapewnić ostateczną objętość posiewu bakteriina pożywce stałej wynoszącą 0,5 ml na szkiełkonakrywkowe (razem 4 szkiełka nakrywkowe) lub 2 mlna kolbkę.3. Inkubować hodowle nienaruszone w temperaturze37°C, 5%-8% atmosferze CO 2.4. W drugim dniu przepłukać hodowle poprzez dodanie 2ml Chang Medium D z gentamycyną.5. Po 4 do 5 dniach należy sprawdzić wzrost hodowli.Hodowle należy odżywiać po zaobserwowaniu wzrostu.Odżywiać hodowle poprzez odebranie wszystkichnadsączy i wymianę z 2 ml świeżej pożywki ChangMedium D z gentamycyną. Zaleca się, żeby hodowlebyły następnie odżywiane co 2 dni.6. Sprawdzić wzrost hodowli w piątym dniu lub póżnieji zebrać je jeśli zaobserwowano wystarczającą ilośćkolonii.7. Najlepsze wyniki otrzymywano gdy hodowle byłyodżywiane pożywką Chang Medium D z gentamycynąna dzień przed zebraniem.Użycie Chang Medium D z gentamycyną do hodowlipierwotnych: metodologie dla kolb1. Wirować płyn owodniowy przy niskich obrotach, abyspowodować skupienie komórek.2. Ponownie zawiesić pelet w małej objętości własnegopłynu owodniowego pacjentki. Na przykład odebrać 10ml nadsączu z wirowanego płynu owodniowego do 1 mlpeletu ponad komórkami i ponownie zawiesić. Dodać4 ml Chang Medium D z gentamycyną do całkowitejobjętości 5 ml na kolbę.3. Inkubować hodowle nienaruszone w temperaturze37°C, 5%-8% atmosferze CO 2.4. Sprawdzić wzrost dnia 5-ego. Jeżeli zaobserwowanowystarczający wzrost, zmienić pożywkę na świeżąChang Medium D z gentamycyną i zebrać.5. Sprawdzic wzrost hodowli i całkowicie zmieniaćpożywkę codziennie do zaobserwowania wystarczajacejilości kolonii, gotowej do zbioru.6. Najlepsze wyniki otrzymywano, gdy hodowle byłyodżywiane pożywką Chang Medium D z gentamycynąna dzień przed zebraniem.Użycie Chang Medium D z gentamycyną do posiewówwzrastających pasażowanych komórek płynu owodniowego.INSTRUCŢIUNI DE UTILIZAREUtilizarea Chang Medium D cu Gentamicină pentru CulturilePrimare : Metodologia in situ1. Centrifugaţi lichidul amniotic la viteză mică pentru aconcentra celulele.2. Resuspendaţi celulele pelate în volum mic de lichidamniotic al pacientei. De exemplu, aspiraţi 10 mLde supernatant al lichidului amniotic centrifugaţi la0.5 mL deasupra celulelor pelate şi resuspendaţi.Adăugaţi Chang Medium D cu Gentamicină suficientăla concentraţia de celule suspendate, pentru a permiteîn sfârşit acoperirea un volum de 0.5 mL pe lamele (total4 lamele) sau 2 mL pe flaconaşe.3. Incubaţi culturile nedistribuite la 37°C 5%-8% CO 2atmosferic.4. Inundaţi culturile în ziua a doua prin adăugare de 2 mLde Chang Medium D cu Gentamicină.5. După zilele 4 la 5, culturile trebuie verificate dezvoltareaculturilor. După ce s-a observat dezvoltarea acestoraculturile trebuie hrănite. Hrăniţi culturile prin scoatereasupernatantului de pe cultură şi înlocuiţi cu 2 mL deChang Medium D cu Gentamicină proaspătă. Esterecomandat ca culturile să fie hrănite la fiecare douăzile după acea.6. Verificaţi culturile pentru dezvoltare la/sau după a 5-azi, şi recoltaţi când sunt observate colonii suficiente.7. Cele mai bune rezultate au fost obţinute când culturileau fost hrănite cu Chang Medium D cu Gentamicină ozi înainte de recoltare.Utilizarea Chang Medium D cu Gentamicină pentru CulturiPrimare: Metodologia Flacon1. Centrifugaţi lichidul amniotic la viteză mică pentru aconcentra celulele.2. Resuspendaţi celulele pelate într-un volum mic de lichidamniotic de la pacient. De exemplu, aspiraţii 10 mL desupernatant al lichidului amniotic centrifugat la 1 mLdeasupra celulelor pelate şi resuspendaţi. Adăugaţi4 mL de Chang Medium D cu Gentamicină pentru unvolum total de 5 mL pe flacon.3. Incubaţi culturile nedistribuite la 37°C 5%-8% CO 2atmosferic.4. Verificaţi dezvoltarea culturilor la 5 zile. Schimbaţimediul cu Chang Medium D cu Gentamicină proaspătăşi recoltaţi când sunt observate colonii suficiente.5. Verificaţi dezvoltarea culturilor şi schimbaţi mediulcomplet în fiecare zi până când sunt observate destulecolonii şi sunt gata pentru recoltare.6. Cele mai bune rezultate au fost obţinute când culturileau fost hrănite cu Chang Medium D cu Gentamicină ozi înainte de recoltare.Utilizaţi Chang Medium D cu Gentamicină pentru creştereatranzitorie a celulelor de lichid amniotic.Pentru tranziţia celulelor, trataţi cultura cu tripsină (saupronase, etc.) ca şi cum ar fi fost crescute normal într-unmediu convenţional. Oricum tratamentul cu proteaze trebuiesă fie monitorizat cu atenţie. Creşterea celulelor lichiduluiamniotic în Chang Medium D cu Gentamicină au tendinţasă fie mai sensibile la tratamentul cu protează decât celulelede lichid amniotic crescute în mediu convenţional. Poate finecesară modificarea protocolului Dvs. din această cauză.

BRUKSANVISNINGAnvändning av Chang Medium D med gentamicin förprimärodling: in situ-metodik1. Centrifugera amnionväskan på låg hastighet så attcellerna koncentreras.2. Resuspendera pelleten i en liten volym av patientensegen amnionvätska. Aspirera t.ex. supernatantenfrån 10 mL centrifugerad amnionvätska till 0,5 mLovanför cellpelleten och resuspendera pelleten. Tillsätttillräckligt med Chang Medium D med gentamicin till denkoncentrerade cellsuspensionen för att möjliggöra enslutlig utstryksvolym av 0,5 mL per täckglas (totalt 4täckglas) eller 2 mL per flaskett.3. Inkubera kulturerna utan att störa dem vid 37 ºC i 5-8% CO 2-atmosfär.4. Flöda kulturerna på dag 2 genom att tillsätta 2 mL ChangMedium D med gentamicin.5. Efter 4-5 dagar bör kulturerna kontrolleras medavseende på växt. När växt har observerats börkulturerna tillföras näring. Tillför näring till kulturernagenom att avlägsna all supernatant och ersätta denmed 2 mL färskt Chang Medium D med gentamicin. Detrekommenderas att därefter tillföra näring till kulturernavarannan dag.6. Kontrollera kulturerna med avseende på växt på/efterdag 5 och skörda dem när tillräckligt med kolonierobserveras.7. Bästa resultat erhålls när kulturerna tillförs näring medChang Medium D med gentamicin dagen innan deskördas.Användning av Chang Medium D med gentamicin förprimärodling: Metod med flaska1. Centrifugera amnionväskan på låg hastighet så attcellerna koncentreras.2. Resuspendera pelleten i en liten volym av patientensegen amnionvätska. Aspirera t.ex. supernatanten från10 mL centrifugerad amnionvätska till 1 mL ovanförcellpelleten och resuspendera pelleten. Tillsätt 4 mLChang Medium D med gentamicin till en total volympå 5 mL per flaska.3. Inkubera kulturerna utan att störa dem vid 37 ºC i 5–8% CO 2-atmosfär.4. Kontrollera kulturerna med avseende på växt på dag5. Byt till färskt Chang Medium D med gentamicin ochskörda om tillräcklig cellväxt observeras.5. Kontrollera kulturerna med avseende på växt och bytdärefter ut mediet varje dag tills tillräckligt med kolonierobserveras och är klara att skördas.6. Bästa resultat erhålls när kulturerna tillförs näring medChang Medium D med gentamicin dagen innan deskördas.Användning av Chang Medium D med gentamicin förodling av celler från amnionvätska i efterföljande passage:För passage av cellerna behandlas kulturerna med trypsin(eller pronas etc.) på normalt sätt som vid odling av celler ikonventionellt medium. Proteasbehandlingen bör dock nogaövervakas. Celler från amnionvätska som odlas i ChangMedium D med gentamicin tenderar att vara känsligare förproteasbehandling än celler från amnionvätska som odlas ikonventionellt medium. Laboratoriets protokoll kan behövamodifieras för att ta hänsyn till detta faktum.3. Kui olete valmis alikvoote kasutama, sulatage need37°C vesivannis.KASUTUSJUHISEDSöötme Chang Medium D gentamitsiiniga kasutaminetüvikultuuride kultiveerimiseks: in situ meetod1. Tsentrifuugige amnionivedelik madalal kiirusel, et rakudkontsentreeruks.2. Resuspendeerige rakukämp väheses patsiendi omaamnionivedelikus. Näiteks – aspireerige tsentrifuugitud10 mL amnionivedeliku supernatant kuni seda onrakukämbu kohale jäänud 0,5 mL ja resuspendeerige.Lisage kontsentreeritud rakususpensioonile küllaltsöödet Chang Medium D gentamitsiiniga, et see lubablõpuks esemeklaasi iga katteklaasi (kokku 4 katteklaasi)alla kanda 0,5 mL ehk 2 mL kolbikese kohta.3. Inkubeerige kultuurid segamatult 5%...8% CO 2-atmosfääris temperatuuril 37 °C.4. Loputage kultuurid 2. päeval, kasutades selleks 2 mLsöödet Chang Medium D gentamitsiiniga.5. 4 kuni 5 päeva möödudes kontrollige kultuuride kasvu.Kasvu täheldamisel tuleb kultuure hakata söötma.Söötke kultuure kogu kultuuri supernatandi eemaldadesja seda asendades 2 mL värske söötmega ChangMedium D gentamitsiiniga. Pärast seda on soovitatavkultuuride söötmine iga 2 päeva tagant.6. Kontrollige kultuuride kasvu 5. päeval või pärast seda japiisaval arvul kolooniate tekkimise korral koguge needkokku.7. Parimad tulemused saate siis, kui söödate kultuuresöötmega Chang Medium D gentamitsiiniga päev ennenende kokku kogumist.Söötme Chang Medium D gentamitsiiniga kasutaminetüvikultuuride kultiveerimiseks: kolbi meetod1. Tsentrifuugige amnionivedelik madalal kiirusel, et rakudkontsentreeruks.2. Resuspendeerige rakukämp väheses patsiendi omaamnionivedelikus. Näiteks – aspireerige tsentrifuugitud10 mL amnionivedeliku supernatant kuni seda onrakukämbu kohale jäänud 1 mL ja resuspendeerige.Lisage 4 mL söödet Chang Medium D gentamitsiinigaet igas kolbis oleks vedeliku lõplik kogus 5 mL.3. Inkubeerige kultuurid segamatult 5%...8% CO 2-atmosfääris temperatuuril 37 °C.4. Kontrollige 5. päeval kultuuride kasvu. Vahetage söödevärske söötme Chang Medium D gentamitsiiniga vastuja piisava kasvu täheldamise korral koguge rakudkokku.5. Kontrollige kultuuride kasvu ja vahetage sööde täielikultvälja iga päev pärast seda kuni täheldate piisaval arvulkolooniaid ja need on kokku kogumiseks valmis.6. Parimad tulemused saate siis, kui söödate kultuuresöötmega Chang Medium D gentamitsiiniga päev ennenende kokku kogumist.Söötme Chang Medium D gentamitsiiniga kasutaminepassaaži läbinud amnionivedeliku rakkude kultiveerimiseks:Rakkude passaaži teostamiseks töödelge kultuuretrüpsiiniga (või proteinaasi vms) nagu rakkude harilikultkonventsionaalses söötmes kasvatamise puhul. Töötlemistproteinaasiga tuleb aga hoolikalt jälgida. Söötmes ChangMedium D gentamitsiiniga kasvatatud amnionivedeliku rakudkipuvad olema tundlikumad proteinaasiga töötlemisele kuitavalises söötmes kasvatatud amnionivedeliku rakud. Sedaarvesse võttes võib protokolli muutmine osutuda vajalikuks.

MAGYARLIETUVIŲ K.RENDELTETÉSA Chang Medium D gentamicinnel használható a következőalkalmazásoknál:1. magzatvíz sejtjeinek primer tenyészete2. passzált magzatvíz sejtek növekedése3. csontvelő sejtek tenyésztése4. szilárd amnionszövet a chorionboholy mintábólEzt a médiumot CO 2inkubátorban valóhasználatra tervezték (tenyészetek ekvilibrálva5%-8% CO 2atmoszférával).A végső pH 6,8-7,2 között kell, hogy legyen. Nézze meg ahasználati utasítást.Figyelmeztetés: Ne használja a gentamicines ChangMedium D –t a címkén feltüntetett lejáratiidőn túl.TERMÉKLEÍRÁSA gentamicines Chang Medium ® D-t a humánmagzatvíz sejtek primer tenyészetéhez fejlesztették ki,kariotipizálásban és más antenatális genetikai vizsgálatbanvaló alkalmazásra. Ezt a formulát optimalizálták alombikokban és az in situ módszerekben való alkalmazásrais.TÁROLÁS ÉS STABILITÁSTárolja a gentamicines Chang Medium D-t fagyasztottállapotban -10°C között. A fel nem használt Changmedium D gentamicicinnel újra fagyasztható, vagy 2°és8°C között tárolható.Védje a fluoreszcens fénytől.Nézze meg az üveg címkéjén a specifikus lejáratiidőpontot. A gentamicines Chang Medium D maximumkétszer fagyasztható újra, és maximum 14 napig tárolhatófelengedve 2°C -8°C között anélkül hogy az hatássallenne a működésére. 14 napon túli tárolása nem javasolt.A tenyészet táplálására használt médiumpH-ja 6,8-7,2 között (azaz a médium halvány sárgáslazacszínű)kell, hogy legyen. A pH könnyen beállítható amédiumot egy 5%-8% CO 2-s inkubátorba téve 30 percre,meglazított fedővel.Megjegyzés: Kalcium-oxalát kristályok képződése gyakranelőfordul a Chang Medium D-ben. E kristályok jelenléte nemtűnik úgy, hogy bármilyen káros hatást okozna a termékteljesítményére.A gentamicines Chang Medium D gentamicin antibiotikumottartalmaz. Megfelelő elővigyázatossággal kell eljárni,hogy biztosítsa a beteg ne legyen szenzitizált erre azantibiotikumra.MINŐSÉGBIZTOSITÁSSTERILITÁSA gentamicines Chang Medium D készítésénél használtszérumot bevizsgálták vírus-szennyezésre CFR 9./113.53 szerint. Ellenőrizték Mycoplasma szennyezéreis. A gentamicines Chang Medium D sterilizált, 0,1mikronos szűrőn szűrt. A gentamicines Chang MediumD mintáit vizsgálták lehetséges bakteriális szennyezésrea jelenlegi USP sterilitási tesztben leirt sterilitásitesztprotokoll szerint.Chang Medium ® az Irvine Scientific bejegyzett márkaneve.NUMATYTOJI PASKIRTISGentamicinu papildyta Chang Medium D terpė gali būtinaudojama pagal tokią paskirtį:1. pirminės vaisiaus vandenų ląstelių kultūros auginimas2. vaisiaus vandenų persėtos kultūros ląstelių auginimas3. kaulų čiulpų ląstelių kultūros auginimas4. kietųjų amniono audinių kultūrų auginimui iš chorionųgaurelių mėginių.Ši terpė yra skirta naudoti CO 2inkubatoriuose (kultūrospusiausvirinamos 5%–8% CO 2atmosferoje).Galutinė pH reikšmė turi būti 6,8–7,2. Žr. naudojimonurodymus.Perspėjimas: Gentamicinu papildytos Chang Medium Dterpės naudoti negalima pasibaigus etiketėjenurodytam tinkamumo laikui.PRODUKTO APRAŠYMASGentamicinu papildyta Chang Medium ® D terpė buvosukurta pirminės žmogaus vaisiaus vandenų ląstelių kultūrosauginimui atliekant kariotipavimo ir kitus antenataliniusgenetinius tyrimus. Reagento sudėtis yra optimizuota tiekkultivavimui flakonuose, tiek in situ metodais.LAIKYMAS IR STABILUMASGentamicinu papildytą Chang Medium D terpę laikytiužšaldytą nuo -10 °C temperatūroje. Nesunaudotągentamicinu papildytą Chang Medium D terpę galimapakartotinai užšaldyti arba laikyti 2 °C–8 °C temperatūroje.Saugoti nuo fluorescencinių spindulių.Specifinis tinkamumo laikas nurodytas butelio etiketėje.Gentamicinu papildytą Chang Medium D terpę pakartotinaiužšaldyti galima ne daugiau kaip 2 kartus, o 2 °C–8°C temperatūroje laikyti 14 dienų nepakenkiant terpėsfunkcinėms savybėms. Laikyti ilgiau kaip 14 dienųnerekomenduojama.Kultūroms maitinti naudojamos terpės rūgštingumas turibūti pH 6,8–7,2 (t. y. terpė turi būti šiek tiek gelsvai lašišinėsspalvos). pH galima lengvai pakoreguoti terpę apie 30minučių palaikant 5%–8% CO 2inkubatoriuje su šiek tiekprasuktu dangteliu.Pastaba: Chang Medium D terpėje dažnai susidaro kalciooksalato kristalų. Nenustatyta, kad šių kristalų buvimas kaipnors pakenktų produkto funkcinėms savybėms.Gentamicinu papildytos Chang Medium D terpės sudėtyjeyra antibiotiko gentamicino. Būtina imtis tinkamų atsargumopriemonių užtikrinant, kad pacientas nėra alergiškas šiamantibiotikui.KOKYBĖS LAIDAVIMASSTERILUMASSerumas, naudotas gaminant gentamicinu papildytą ChangMedium D terpę, virusinių užkratų atžvilgiu yra ištirtas pagal9 CFR kodekso 113.53 dalies standartus. Taip pat patikrinta,ar jis neužkrėstas mikoplazmomis. Gentamicinu papildytaChang Medium D terpė yra sterilizuota filtruojant per 0,1mikronų filtrus. Gentamicinu papildytos Chang MediumD terpės mėginiai yra išbandyti bakteriologinio užkrėtimorizikai nustatyti pagal šiuo metu patvirtintą Jungtinių Valstijųfarmakopėjos (USP) sterilumo bandymų protokolą .Chang Medium ® yra „Irvine Scientific“ bendrovėsregistruotas prekės ženklas.ALKOTÓKmg/mlsók ……………………………………………………… 8515dextróz …………………………………………………… 880aminosavak ……………………………………………… 804L-glutamin ……………………………………………… 257polipeptidek ……………………………………………… 189vitaminok ………………………………………………… 61dezoxi-ribonukleiozidok ………………………………… 35ribonukleozidok …………………………………………… 35nátrium-piruvát …………………………………………… 97gentamicin-szulfát ……………………………………… 50más alkotók ………………………………………………… 9szteroid hormonok ………………………………… 0.0009marhaszérum fehérjék …………………………… 12% v/vfenolvörös ………………………………………………… 10SUDĖTISmg/lDruskos ………………………………………………… 8515Dekstrozė ……………………………………………… 880Aminorūgštys …………………………………………… 804L-glutaminas …………………………………………… 257Polipeptidai ……………………………………………… 189Vitaminai ………………………………………………… 61Deoksiribonukleozidai …………………………………… 35Ribonukleozidai ………………………………………… 35Natrio piruvatas ………………………………………… 97Gentamicino sulfatas …………………………………… 50Kiti sudėtiniai komponentai ……………………………… 9Steroidiniai hormonai ……………………………… 0,0009Galvijų serumo baltymai ………………………… 12% v/vFenolio raudonasis ……………………………………… 10ÓVINTÉZKEDÉSEK ÉS FIGYELMEZTETÉSEKEzt az eszközt úgy tervezték, hogy használata az eszköztervezett alkalmazását is magába foglaló eljárásokbankiképzett személyzet által történjen.ATSARGUMO PRIEMONĖS IR ĮSPĖJIMAIŠis prietaisas yra skirtas naudoti darbuotojams,apmokytiems atlikti procedūras, susijusias su prietaisotaikymu pagal numatytą paskirtį.Ne használjon olyan üveget, amelyben a steril csomagolásveszélybe került.ELŐKÉSZITÉS A HASZNÁLATRA1. Olvassza fel a gentamicines Chang Medium D-tgyorsan, az üveget 37° C-os vízfürdőben körkörösenmozgatva.2. A gentamicines Chang Medium D 50 µg/ml gentamicinantibiotikumot tartalmaz. Szükség szerint továbbiantibiotikum adagolható.CHANG MEDIUM D SZÉTOSZTÁSA ALIQUOTOKRA1. Olvassza fel a gentamicines Chang Medium D-t azutasításoknak megfelelően.2. Ossza szét aszeptikusan megfelelő méretű aliquotokraés fagyassza le újra.Nenaudokite buteliuko, jeigu sterili pakuotė buvo pažeista.PARUOŠIMAS NAUDOJIMUI1. Gentamicinu papildytą Chang Medium D terpęatitirpinkite sukiodami butelį 37 °C vandens vonelėje.2. Gentamicinu papildytos Chang Medium D terpėssudėtyje yra antibiotiko gentamicino (50 µg/µl).Pageidaujant galima pridėti papildomų antibiotikų.CHANG MEDIUM D DALIJIMAS Į PORCIJAS1. Atitirpinkite gentamicinu papildytą Chang Medium Dterpę pagal nurodymus.2. Aseptiniu būdu išpilstykite reikiamo dydžio alikvotinėmisdalimis ir vėl užšaldykite.3. Prieš naudojimą porcijas atšildykite 37 °C vandensvonelėje.

TürkKULLANIM AMACIGentamisinli Chang Medyum D şu uygulamalar içinkullanılabilir:1. amniyotik sıvı hücrelerinin primer kültürü2. geçitli amniyotik sıvı hücreler geliştirme3. kemik iliği hücreleri kültürü4. koryon villi örneklemesinden sonra som amniyon doku.Bu medyum CO2 inkübatörlerinde (%5-8 CO2’li atmosferledengelenmiş kültürler) kullanım için tasarlanmıştır.Önlem: Gentamisinli Chang Medyum D’yi etiket üzerindebelirtilen son kullanım tarihinden sonrakullanmayın.ÜRÜN TANIMIGentamisinli Chang Medyum D, karyotipleme ve diğerantenatal genetik testlerde kullanıma yönelik olarak insanamniyotik sıvı hücrelerinin primer kültürü için geliştirilmiştir.Bu formül hem flask hem de in Situ yöntemler için optimizeedilmiştir.SAKLAMA VE STABİLİTEGentamisinli Chang Medyum D’yi -10°C’nin altında saklayın.Kullanılmayan Gentamisinli Chang Medyum D tekrardondurulabilir veya 2°-8°C arasında saklanabilir.Florasan ışığından koruyun.Kültürleri beslemek için kullanılacak medyumun pH’ı 6.8 ila7.2 arasında olmalıdır (yani medyum hafif sarımsı somonrenginde olmalıdır). 30 dakika boyunca medyum kapağı hafifgevşek şekilde %5-%8’lik bir CO2 inkübatörü içine konarakpH kolayca ayarlanabilir.Not: Gentamisinli Chang Medyum D’de Kalsiyum Oksalatkristalleri sıkça oluşur. Bu kristallerin varlığının ürünperformansı üzerinde herhangi bir olumsuz etki yaptığıkanıtlanmamıştır.Gentamisinli Chang Medyum D Gentamisin antibiyotiğiiçerir. Hastanın bu antibiyotiğe aşırı hassas olmadığındanemin olunması için uygun önlemler alınmalıdır.KALİTE GÜVENCESİSTERİLİTEGentamisinli Chang Medyum D’nin üretiminde kullanılanserum, CFR 9’uncu Başlık, 113.53’üncü Bölüm’e uygunolarak viral kontaminasyon için test edilmiştir. Mikoplazmakontaminasyonu için de kontrol edilmiştir. GentamisinliChang Medyum D 0.1 mikronluk bir filtreden geçirilereksterilize edilmiştir. Gentamisinli Chang Medyum D’ninörnekleri, güncel USP Sterilite testi ’de tanımlanansterilite test protokolü izlenerek olası bakteriyolojikkontaminasyona karşı test edilmiştir.Chang Medium® Irvine Scientific’in tescilli bir markasıdır.Spesifik son kullanma tarihi için şişe etiketine bakın.Gentamisinli Chang Medyum D kullanım öncesinde işlevibozulmaksızın en fazla 2 kez yeniden dondurulabilir ve2°-8°C’da 14 gün boyunca erişim halde saklanabilir. 14günden fazla saklama tavsiye edilmemektedir.BİLEŞENLERTuzlar...........................................................................8515Dekstroz........................................................................880Amino Asitler.................................................................804L-Glutamin.....................................................................257Polipeptitler....................................................................189Vitaminler.........................................................................61Deoksiribonükleositler.....................................................35Ribonükleositler...............................................................35Sodyum Pirüvat...............................................................97Gentamisin Sülfat............................................................50Diğer bileşenler..................................................................9Steroid Hormonlar....................................................0.0009Bovin Serum Proteinleri..........................................%12 v/vFenol Kırmızı...................................................................10ÖNLEMLER VE UYARILARBu cihaz, cihazla ilgili olarak tanımlanan uygulamaları dakapsayan yardımla üreme prosedürlerinde eğitimli personeltarafından kullanıma yönelik olarak tasarlanmıştır.Steril ambalajlamayla ilgili herhangi bir eksiklik veya soruntaşıyan hiçbir şişeyi kullanmayın.KULLANIM İÇİN HAZIRLAMA1. Şişeyi 37°C su banyosunda helezonik bir şekilde hızlasallayarak Gentamisinli Chang Medyum D’yi çözün.2. Gentamisinli Chang Medyum D Gentamisin antibiyotiğiiçerir (50 µg/mL). İstenirse başka antibiyotiklereklenebilir.CHANG MEDIUM D’NiN ALİKOTLANMASI1. Gentamisinli Chang Medyum D’yi talimatlara göreçözün.2. Aseptik bir şekilde uygun olarak ebatlandırılmışalikotlara bölün ve yeniden dondurun.3. Kullanmaya hazır olduğunuzda alikotları 37°C subanyosunda çözün.KULLANIM YÖNERGELERİChang Medium C’nin Primer Kültürler İçin Kullanımı: InSitu Yöntemler

3. Olvassza fel az aliquotokat 37°C-s vízfürdőben ha késza felhasználására.HASZNÁLATI UTASITÁSA gentamicines Chang Medium D alkalmazása primertenyészetekhez: in situ módszerek1. Centrfugálja a magzatvizet alacsony sebességgel asejtek koncentrálására.2. Szuszpendálja újra a pelletet a beteg sajátmagzatvizének kis térfogatával. Például, szívja le a 10ml centrifugált magzatvizet a sejtpellet felett 0,5 ml-ig,és szuszpendálja újra. Adjon megfelelő mennyiségűgentamicines Chang Medium D-t a koncentrált sejtszuszpenzióhoz, szánjon 0,5 ml-végtérfogatot afedőlemez bevonatra (összesen 4 fedőlemez) vagy 2ml-t üvegcsékként.3. Inkubálja a tenyészeteket nyugalomban, 37°C-on 5%-8% CO 2atmoszférában.4. Árassza el a tenyészeteket a 2. napon 2 ml gentamicinesChang Medium D hozzáadásával.5. 4-5 nap eltelte után ellenőrizni kell a tenyészeteketnövekedését. A tenyészeteket táplálni kell, hanövekedést tapasztalt. Táplálja a tenyészetet úgy,hogy eltávolítja az összes felülúszót és helyettesíti 2ml friss gentamicines Chang Medium D-vel. Javasolta tenyészetek táplálása ezután minden 2. napon.6. Ellenőrizze a tenyészetek növekedését az 5. naponvagy 5 nap után, és végezze el a begyűjtést, ha akolóniák megfelelőek.7. A legjobb eredmény akkor érhető el, ha a tenyészeteketa begyűjtést megelőző napon táplálta gentamicinesChang Medium D-vel.A gentamicines Chang Medium D alkalmazása primertenyészetekhez: Lombik módszerek1. Centrifugálja a magzatvizet kis sebességgel a sejtekkoncentrálására.2. Szuszpendálja újra a pelletet a beteg sajátmagzatvizének kis térfogatával. Például, szívja le a 10ml centrifugált magzatvizet a sejtpellet felett 1 ml-re ésszuszpendálja újra. Adjon 4 ml gentamicines ChangMedium D-t , 5 ml össztérfogatra lombikonként.3. Inkubálja a tenyészeteket nyugalomban, 37 °C-on,5%-8% CO 2atmoszférában.4. Az 5. napon ellenőrizze a növekedést. Cserélje ki aközeget friss gentamicines Chang Medium D-vel ésvégezzen begyűjtést, ha a sejtnövekedés megfelelő.5. Ellenőrizze a tenyészeteket növekedését és cserélje kia médiumot teljesen minden nap ezután addig, amígmegfelelő kolóniákat nem észlel, és kész a begyűjtésre.6. A legjobb eredmény akkor érhető el, ha a tenyészeteketa begyűjtést megelőző napon táplálta gentamicinesChang Medium D-vel.A Gentamicines Chang Medium D alkalmazása passzáltmagzatvíz sejtek növekedésére:A sejtpasszáláshoz kezelje a kultúrát tripszinnel(vagy pronázzal, stb.) ahogy normálisan teszi, amikorhagyományos közegben tenyészti a sejteket. A proteázkezelést azonban szigorúan monitorozni kell. Agentamicines Chang Medium D-ben növekedett magzatvízsejtek érzékenyebbeknek tűnnek a proteáz kezelésre, minta konvencionális közegben tenyésztett magzatvíz sejtek.Lehetséges, hogy meg kell változtatnia a protokollját ennekfigyelembevételére.NAUDOJIMO NURODYMAIGentamicinu papildytos Chang Medium D terpėsnaudojimas pirminėms kultūroms: in situ metodai1. Vaisiaus vandenis centrifuguokite mažu greičiukoncentruotai ląstelių masei gauti.2. Nusėdusias ląsteles resuspenduokite nedideliamepačios pacientės vaisiaus vandenų kiekyje. Pavyzdžiui,nusiurbkite 10 ml centrifuguotų vaisiaus vandenųsupernatantą palikdami 0,5 ml virš ląstelių nuosėdųir resuspenduokite. Į koncentruotą ląstelių suspensijąpridėkite pakankamai gentamicinu papildytos ChangMedium D terpės, kad galutinis po kiekvienos plokštelėsdengiamuoju stikleliu tenkantis tūris būtų 0,5 ml (iš viso4 dengiamieji stikleliai), arba po 2 ml vienam flakonėliui.3. Kultūras netrukdomai inkubuokite 37 °C temperatūroje5%–8% CO 2atmosferoje.4. 2-ą dieną ant kultūrų užliekite po 2 ml gentamicinupapildytos Chang Medium D terpės.5. Praėjus 4–5 dienoms, reikia patikrinti kultūrų augimą.Pastebėjus augimą, kultūras reikia pamaitinti. Kultūrasmaitinkite nusiurbdami visą virš kultūros susidariusįsupernatantą ir jį pakeisdami 2 ml šviežios gentamicinupapildytos Chang Medium D terpės. Po to kultūrasrekomenduojama maitinti kas 2 dienas.6. 5-ą dieną arba po 5 dienų patikrinkite kultūrų augimą iraptikę pakankamai kolonijų ląsteles surinkite.7. Geriausių rezultatų pasiekiama gentamicinu papildytaChang Medium D terpe pasėlius maitinant dieną priešląstelių surinkimą.Gentamicinu papildytos Chang Medium D terpės naudojimaspirminėms kultūroms: kultivavimo flakonuose metodai1. Vaisiaus vandenis centrifuguokite mažu greičiukoncentruotai ląstelių masei gauti.2. Nusėdusias ląsteles resuspenduokite nedideliamepačios pacientės vaisiaus vandenų kiekyje. Pavyzdžiui,nusiurbkite 10 ml centrifuguotų vaisiaus vandenųsupernatantą palikdami 1 ml virš ląstelių nuosėdų irresuspenduokite. Pridėkite 4 ml gentamicinu papildytosChang Medium D terpės, kad bendras tūris flakone būtų5 ml.3. Kultūras netrukdomai inkubuokite 37 °C temperatūroje5%–8% CO 2atmosferoje.4. 5-ą dieną patikrinkite augimą. Terpę pakeiskite šviežiagentamicinu papildyta Chang Medium D terpe irpastebėję pakankamai priaugusių ląstelių jas surinkite.5. Po to kiekvieną dieną, patikrinę kultūrų augimą, visiškaipakeiskite terpę, kol bus priaugę pakankamai kolonijų,kurias galima surinkti.6. Geriausių rezultatų pasiekiama gentamicinu papildytaChang Medium D terpe pasėlius maitinant dieną priešląstelių surinkimą.Gentamicinu papildytos Chang Medium D terpėsnaudojimas persėtoms vaisiaus vandenų ląstelėms auginti:Persėdami ląsteles, kultūras apdorokite tripsinu (arbapronaze ar kt.), kaip kad paprastai darytumėte augindamiląsteles įprastinėje terpėje. Visgi apdorojimo proteazėmisprocesą būtina atidžiai stebėti. Gentamicinu papildytojeChang Medium D terpėje augintos vaisiaus vandenųląstelės turi didesnį polinkį jautriau reaguoti į apdorojimąproteazėmis negu įprastinėje terpėje augintos vaisiausvandenų ląstelės. Į tai atsižvelgiant gali prireikti pakoreguotityrimo metodo protokolą.

1. Hücreleri konsantre etmek için amniyotik sıvıyı düşükhızla santrifüjleyin.2. Hücre pelletini hastanın kendi amniyotik sıvısınınküçük bir hacmi içinde yeniden süspanse edin. Örneğininceltilmiş 10 mL amniyotik sıvının üst fazını hücrepelletinin 0.5 mL üstüne çekin ve yeniden süspanseedin. Lamel (toplam 4 lamel) başına 0.5 mL’lik veyaflasket başına 2 mL’lik son kaplama hacmi sağlamakiçin, konsantre hücre süspansiyonuna yeterli miktardaGentamisinli Chang Medyum D ekleyin.3. Kültürleri 37°C %5 CO2’lik atmosferde kendi halinebırakarak inkübe edin.4. İkinci günde kültürlere 2 mL Gentamisinli ChangMedyum D ekleyin.5. 4-5 gün sonra kültürlerin gelişim durumu kontroledilmelidir. Gelişim gözlenir gözlenmez kültürlerbeslenmelidir. Kültürleri beslemek için tüm kültür üstfazını atın ve 2 mL yeni Gentamisinli Chang MedyumD ekleyin. Bunun ardından kültürlerin her 2 günde birbeslenmesi tavsiye edilmektedir.6. Beşinci günde veya sonrasında kültürlerin gelişimdurumunu kontrol edin ve yeterince koloni gözlendiğindehasat yapın.7. En iyi sonuçların elde edilmesi için, kültürler hasattanönceki gün Gentamisinli Chang Medyum D ilebeslenmelidir.Chang Medium C’nin Primer Kültürler İçin Kullanımı:Flask Yöntemleri1. Hücreleri konsantre etmek için amniyotik sıvıyı düşükhızla santrifüjleyin.2. Hücre pelletini hastanın kendi amniyotik sıvısının küçükbir hacmi içinde yeniden süspanse edin. Örneğininceltilmiş 10 mL amniyotik sıvının üst fazını hücrepelletinin 1 mL üstüne çekin ve yeniden süspanse edin.Flask başına 5 mL’lik toplam hacim için 4 mLGentamisinli Chang Medyum D ekleyin.3. Kültürleri 37°C %5 CO2’lik atmosferde kendi halinebırakarak inkübe edin.4. Beşinci gün kültürlerin gelişim durumunu kontrol edinMedyumu yeni Chang Medium C ile değiştirin ve eğeryeterli hücre gelişimi gözleniyorsa hasat edin.5. Kültürlerin gelişim durumunu kontrol edin ve bundansonra yeterli koloni gözlenene ve hasada hazır olanakadar iki günde bir medyumu tamamen değiştirin.6. En iyi sonuçların elde edilmesi için, kültürler hasattanönceki gün Gentamisinli Chang Medyum D ilebeslenmelidir.Chang Medium C’nin Geçitli Amniyotik Sıvı HücreleriYetiştirmek İçin Kullanımı:Hücreleri geçitlemek için, normalde hücreler normalmedyumda yetiştirildiği zaman yaptığınız gibi kültürleretripsin (veya pronaz vs) uygulayın. Fakat proteaz uygulamasıdikkatli bir şekilde gözlenmelidir. Gentamisinli ChangMedyum D’de yetiştirilen amniyotik sıvı hücreleri, gelenekselmedyumda yetiştirilmiş amniyotik sıvı hücreleriylekarşılaştırıldığında proteaz uygulamasına karşı genellikledaha hassastır. Protokolünüzü bunu dikkate alacak şekildedeğiştirmeniz gerekebilir.