Chang Medium® D with Gentamicin For Human Amniotic Fluid Cells

3. Ontdooi de delen in een 37 °C waterbad voordat u dezegebruikt.GEBRUIKSAANWIJZINGGebruik van Chang Medium D met gentamicine voorprimaire kweken: in situ-methode1. Centrifugeer het vruchtwater met lage snelheid om decellen te concentreren.2. Resuspendeer het celpellet in een kleine hoeveelheidvan het eigen vruchtwater van de patiënt. Voorbeeld:aspireer het supernatant van 10 ml gecentrifugeerdvruchtwater tot 0,5 ml boven het celpellet enresuspendeer. Voeg voldoende Chang Medium D metgentamicine toe aan de geconcentreerde celsuspensiezodat er een eindvolume van 0,5 ml per afdekplaatje (intotaal 4 afdekplaatjes) of 2 ml per fles beschikbaar is.3. Zet de kweken ongestoord in de incubator bij 37 °C en5%-8% CO 2-atmosfeer.4. Bedek de kweken op dag 2 volledig door 2 ml ChangMedium D met gentamicine toe te voegen.5. Na 4 tot 5 dagen moet de groei van de kweken wordengecontroleerd. De kweken moeten worden gevoedals eenmaal is vastgesteld dat zij groeien. Voed dekweken door al het kweeksupernatant te verwijderenen te vervangen door 2 ml vers Chang Medium D metgentamicine. Het verdient aanbeveling de kwekendaarna om de 2 dagen te voeden.6. Controleer de kweken op groei op/na dag 5, en oogstals voldoende kolonies worden waargenomen.7. De beste resultaten worden verkregen als de kwekenworden gevoed met Chang Medium D met gentamicineop de dag vóór het oogsten.Gebruik van Chang Medium D met gentamicine voorprimaire kweken: flesmethode1. Centrifugeer het vruchtwater met lage snelheid om decellen te concentreren.2. Resuspendeer het celpellet in een kleine hoeveelheidvan het eigen vruchtwater van de patiënt. Voorbeeld:aspireer het supernatant van 10 ml gecentrifugeerdvruchtwater tot 1 ml boven het celpellet enresuspendeer. Voeg 4 ml Chang Medium D metgentamicine toe zodat het totaalvolume per fles 5 mlbedraagt.3. Zet de kweken ongestoord in de incubator bij 37 °C en5%-8% CO 2-atmosfeer.4. Controleer op groei op dag 5. Vervang het medium doorvers Chang Medium D met gentamicine en oogst alsvoldoende celgroei wordt waargenomen.5. Controleer of de kweken groeien en vervang hetmedium volledig elke dag daarna totdat voldoendekolonies worden waargenomen en kunnen wordengeoogst.6. De beste resultaten worden verkregen als de kwekenworden gevoed met Chang Medium D met gentamicineop de dag vóór het oogsten.Gebruik van Chang Medium D met gentamicine voorgroeiende gepasseerde vruchtwatercellen:2511 Daimler Street, Santa Ana, California 92705-5588Telephone: 1 949 261 7800 • 1 800 437 5706Fax: 1 949 261 6522 • www.irvinesci.comPN 40791 Rev.3Om de cellen te passeren, behandel de kweken mettrypsine (of pronase etc.) zoals u dat normaal gesprokenzou doen als cellen groeien in een traditioneel medium. Deproteasebehandeling dient echter zorgvuldig in de gatente worden gehouden. Vruchtwatercellen die gekweektzijn in Chang Medium D met gentamicine hebben deneiging gevoeliger te zijn voor proteasebehandeling danvruchtwatercellen die zijn gekweekt in een traditioneelmedium. Het kan noodzakelijk zijn om uw protocol tewijzigen om hiermee rekening te houden.