Chang Medium® D with Gentamicin For Human Amniotic Fluid Cells

3. Olvassza fel az aliquotokat 37°C-s vízfürdőben ha késza felhasználására.HASZNÁLATI UTASITÁSA gentamicines Chang Medium D alkalmazása primertenyészetekhez: in situ módszerek1. Centrfugálja a magzatvizet alacsony sebességgel asejtek koncentrálására.2. Szuszpendálja újra a pelletet a beteg sajátmagzatvizének kis térfogatával. Például, szívja le a 10ml centrifugált magzatvizet a sejtpellet felett 0,5 ml-ig,és szuszpendálja újra. Adjon megfelelő mennyiségűgentamicines Chang Medium D-t a koncentrált sejtszuszpenzióhoz, szánjon 0,5 ml-végtérfogatot afedőlemez bevonatra (összesen 4 fedőlemez) vagy 2ml-t üvegcsékként.3. Inkubálja a tenyészeteket nyugalomban, 37°C-on 5%-8% CO 2atmoszférában.4. Árassza el a tenyészeteket a 2. napon 2 ml gentamicinesChang Medium D hozzáadásával.5. 4-5 nap eltelte után ellenőrizni kell a tenyészeteketnövekedését. A tenyészeteket táplálni kell, hanövekedést tapasztalt. Táplálja a tenyészetet úgy,hogy eltávolítja az összes felülúszót és helyettesíti 2ml friss gentamicines Chang Medium D-vel. Javasolta tenyészetek táplálása ezután minden 2. napon.6. Ellenőrizze a tenyészetek növekedését az 5. naponvagy 5 nap után, és végezze el a begyűjtést, ha akolóniák megfelelőek.7. A legjobb eredmény akkor érhető el, ha a tenyészeteketa begyűjtést megelőző napon táplálta gentamicinesChang Medium D-vel.A gentamicines Chang Medium D alkalmazása primertenyészetekhez: Lombik módszerek1. Centrifugálja a magzatvizet kis sebességgel a sejtekkoncentrálására.2. Szuszpendálja újra a pelletet a beteg sajátmagzatvizének kis térfogatával. Például, szívja le a 10ml centrifugált magzatvizet a sejtpellet felett 1 ml-re ésszuszpendálja újra. Adjon 4 ml gentamicines ChangMedium D-t , 5 ml össztérfogatra lombikonként.3. Inkubálja a tenyészeteket nyugalomban, 37 °C-on,5%-8% CO 2atmoszférában.4. Az 5. napon ellenőrizze a növekedést. Cserélje ki aközeget friss gentamicines Chang Medium D-vel ésvégezzen begyűjtést, ha a sejtnövekedés megfelelő.5. Ellenőrizze a tenyészeteket növekedését és cserélje kia médiumot teljesen minden nap ezután addig, amígmegfelelő kolóniákat nem észlel, és kész a begyűjtésre.6. A legjobb eredmény akkor érhető el, ha a tenyészeteketa begyűjtést megelőző napon táplálta gentamicinesChang Medium D-vel.A Gentamicines Chang Medium D alkalmazása passzáltmagzatvíz sejtek növekedésére:A sejtpasszáláshoz kezelje a kultúrát tripszinnel(vagy pronázzal, stb.) ahogy normálisan teszi, amikorhagyományos közegben tenyészti a sejteket. A proteázkezelést azonban szigorúan monitorozni kell. Agentamicines Chang Medium D-ben növekedett magzatvízsejtek érzékenyebbeknek tűnnek a proteáz kezelésre, minta konvencionális közegben tenyésztett magzatvíz sejtek.Lehetséges, hogy meg kell változtatnia a protokollját ennekfigyelembevételére.NAUDOJIMO NURODYMAIGentamicinu papildytos Chang Medium D terpėsnaudojimas pirminėms kultūroms: in situ metodai1. Vaisiaus vandenis centrifuguokite mažu greičiukoncentruotai ląstelių masei gauti.2. Nusėdusias ląsteles resuspenduokite nedideliamepačios pacientės vaisiaus vandenų kiekyje. Pavyzdžiui,nusiurbkite 10 ml centrifuguotų vaisiaus vandenųsupernatantą palikdami 0,5 ml virš ląstelių nuosėdųir resuspenduokite. Į koncentruotą ląstelių suspensijąpridėkite pakankamai gentamicinu papildytos ChangMedium D terpės, kad galutinis po kiekvienos plokštelėsdengiamuoju stikleliu tenkantis tūris būtų 0,5 ml (iš viso4 dengiamieji stikleliai), arba po 2 ml vienam flakonėliui.3. Kultūras netrukdomai inkubuokite 37 °C temperatūroje5%–8% CO 2atmosferoje.4. 2-ą dieną ant kultūrų užliekite po 2 ml gentamicinupapildytos Chang Medium D terpės.5. Praėjus 4–5 dienoms, reikia patikrinti kultūrų augimą.Pastebėjus augimą, kultūras reikia pamaitinti. Kultūrasmaitinkite nusiurbdami visą virš kultūros susidariusįsupernatantą ir jį pakeisdami 2 ml šviežios gentamicinupapildytos Chang Medium D terpės. Po to kultūrasrekomenduojama maitinti kas 2 dienas.6. 5-ą dieną arba po 5 dienų patikrinkite kultūrų augimą iraptikę pakankamai kolonijų ląsteles surinkite.7. Geriausių rezultatų pasiekiama gentamicinu papildytaChang Medium D terpe pasėlius maitinant dieną priešląstelių surinkimą.Gentamicinu papildytos Chang Medium D terpės naudojimaspirminėms kultūroms: kultivavimo flakonuose metodai1. Vaisiaus vandenis centrifuguokite mažu greičiukoncentruotai ląstelių masei gauti.2. Nusėdusias ląsteles resuspenduokite nedideliamepačios pacientės vaisiaus vandenų kiekyje. Pavyzdžiui,nusiurbkite 10 ml centrifuguotų vaisiaus vandenųsupernatantą palikdami 1 ml virš ląstelių nuosėdų irresuspenduokite. Pridėkite 4 ml gentamicinu papildytosChang Medium D terpės, kad bendras tūris flakone būtų5 ml.3. Kultūras netrukdomai inkubuokite 37 °C temperatūroje5%–8% CO 2atmosferoje.4. 5-ą dieną patikrinkite augimą. Terpę pakeiskite šviežiagentamicinu papildyta Chang Medium D terpe irpastebėję pakankamai priaugusių ląstelių jas surinkite.5. Po to kiekvieną dieną, patikrinę kultūrų augimą, visiškaipakeiskite terpę, kol bus priaugę pakankamai kolonijų,kurias galima surinkti.6. Geriausių rezultatų pasiekiama gentamicinu papildytaChang Medium D terpe pasėlius maitinant dieną priešląstelių surinkimą.Gentamicinu papildytos Chang Medium D terpėsnaudojimas persėtoms vaisiaus vandenų ląstelėms auginti:Persėdami ląsteles, kultūras apdorokite tripsinu (arbapronaze ar kt.), kaip kad paprastai darytumėte augindamiląsteles įprastinėje terpėje. Visgi apdorojimo proteazėmisprocesą būtina atidžiai stebėti. Gentamicinu papildytojeChang Medium D terpėje augintos vaisiaus vandenųląstelės turi didesnį polinkį jautriau reaguoti į apdorojimąproteazėmis negu įprastinėje terpėje augintos vaisiausvandenų ląstelės. Į tai atsižvelgiant gali prireikti pakoreguotityrimo metodo protokolą.