Chang Medium® D with Gentamicin For Human Amniotic Fluid Cells

KÄYTTÖOHJEETChang Medium D + gentamisiini -elatusaineen käyttöprimääriviljelmiin: in situ menetelmät1. Sentrifugoi amnionneste pienellä nopeudella solujenkonsentroimiseksi.2. Suspendoi solusakka uudelleen pieneen tilavuuteenpotilaan omaa amnionnestettä. Esimerkiksi imesentrifugoidun amnionnesteen (10 ml) supernatantti0,5 ml:n tilavuuteen solusakan yläpuolella ja suspendoiuudelleen. Lisää riittävästi Chang Medium D +gentamisiini -elatusainetta konsentroituun solusakkaan,jotta lopullinen maljaustilavuus on 0,5 ml per peitinlasi(kaikkiaan 4 peitinlasia) tai 2 ml per pieni pullo.3. Inkuboi viljelmiä niitä liikuttamatta 37 °C:n lämpötilassa5 % – 8 % CO 2-ilmakehässä.4. Täytä viljelmät päivänä 2 lisäämällä 2 ml Chang MediumD + gentamisiini -elatusainetta.5. Viljelmien kasvu tulee tarkistaa 4–5 päivän kuluttua.Viljelmiä on ruokittava kun kasvua on havaittu. Ruokiviljelmiä poistamalla kaikki viljelmän supernatantti jakorvaamalla se 2 ml:lla tuoretta Chang Medium D+ gentamisiini -elatusainetta. On suositeltavaa, ettäviljelmiä ruokitaan tämän jälkeen joka toinen päivä.6. Tarkista viljelmien kasvu päivänä 5 tai sen jälkeen jakerää solut, kun havaitset riittävän määrän pesäkkeitä.7. Parhaat tulokset saadaan, kun viljelmiä ruokitaan ChangMedium D + gentamisiini -elatusaineella keräämistäedeltävänä päivänä.Chang Medium D + gentamisiini -elatusaineen käyttöprimääriviljelmiin: Pullossa suoritettavat menetelmät1. Sentrifugoi amnionneste pienellä nopeudella solujenkonsentroimiseksi.2. Suspendoi solusakka uudelleen pieneen tilavuuteenpotilaan omaa amnionnestettä. Esimerkiksi imesentrifugoidun amnionnesteen (10 ml) supernatantti1 ml:n tilavuuteen solusakan yläpuolella ja suspendoiuudelleen. Lisää 4 ml Chang Medium D + gentamisiini-elatusainetta niin, että kokonaistilavuus on 5 ml perpullo.3. Inkuboi viljelmiä niitä liikuttamatta 37 °C:n lämpötilassa5 % – 8 % CO 2-ilmakehässä.4. Tarkista kasvu päivänä 5. Vaihda elatusaine tuoreeseenChang Medium D + gentamisiini -elatusaineeseen jakerää, jos havaitset riittävää solujen kasvua.5. Tarkista viljelmien kasvu ja vaihda elatusaine kokonaanjoka päivä tämän jälkeen, kunnes riittävästi pesäkkeitähavaitaan ja ne ovat valmiita kerättäviksi.6. Parhaat tulokset saadaan, kun viljelmiä ruokitaan ChangMedium D + gentamisiini -elatusaineella keräämistäedeltävänä päivänä.Chang Medium D + gentamisiini -elatusaineen käyttöviljelmässä jakautuneiden amnionnesteen solujenkasvattamiseksi:Kun haluat antaa solujen jakautua viljelmässä, käsitteleviljelmiä trypsiinillä (tai pronaasilla jne.), kuten normaalistitekisit silloin kun soluja kasvatetaan tavanomaisessaelatusaineessa. Proteaasikäsittelyä on kuitenkin seurattavahuolellisesti. Amnionnesteen soluilla, jotka kasvatetaanChang Medium D + gentamisiini -elatusaineessa, ontaipumus olla herkempiä proteaasikäsittelylle kuinamnionnesteen soluilla, jotka kasvatetaan tavanomaisessaelatusaineessa. Protokollan muuttaminen tämän ottamiseksihuomioon saattaa olla tarpeen.LIETOŠANAS NORĀDĪJUMIChang Medium D ar gentamicīnu lietošana primāraikultivēšanai: in situ metode1. Centrifugējiet augļa ūdeņu šķidrumu ar nelielu ātrumu,lai koncentrētu šūnas.2. Suspendējiet šūnu lodīti no jauna nelielā daudzumāpaša pacienta augļa ūdeņu šķidruma. Piemēram,aspirējiet līdz 0, 5 ml supernatanta no 10 ml augļaūdeņu šķidruma centrifugāta virs šūnas lodītes unsuspendējiet atkārtoti. Pievienojiet koncentrētajai šūnususpensijai pietiekamu daudzumu Chang Medium Dar gentamicīnu, lai galīgajam uzklāšanas daudzumamparedzētu 0,5 ml uz katru segstikliņu (pavisam 4segstikliņi) vai 2 ml uz flakonu.3. Netraucēti inkubējiet kultūras 37° C temperatūrā 5%-8%CO 2vidē.4. 2. dienā uzpludiniet kultūras, pievienojot 2 ml ChangMedium D ar gentamicīnu.5. Pēc 4. līdz 5. dienai, jāpārbauda kultivēto šūnu augšana.Tiklīdz tiek novērota kultūru augšana, tām jāpapildinabarība. Veiciet kultūru barības papildināšanu, noņemotvisu supernatantu no kultūras un aizvietojot to ar 2 mlsvaiga Chang Medium D ar gentamicīnu. Pēc tamieteicams papildināt kultūru barotni ik pēc 2 dienām.6. Pārbaudiet kultūru augšanu 5. dienā/pēc 5. dienas unveiciet ievākšanu, kad var novērot pietiekama apjomakolonijas.7. Vislabākie rezultāti tiek iegūti, pievienojot kultūrāmChang Medium D ar gentamicīnu dienā pirmsievākšanas.Chang Medium D ar gentamicīnu lietošana primāraikultivēšanai: Flakona metode1. Centrifugējiet augļa ūdeņu šķidrumu ar nelielu ātrumu,lai koncentrētu šūnas.2. Suspendējiet šūnu lodīti no jauna nelielā daudzumāpaša pacienta augļa ūdeņu šķidruma. Piemēram,aspirējiet līdz 1 ml supernatanta no 10 ml augļa ūdeņušķidruma centrifugāta virs šūnas lodītes un suspendējietno jauna. Pievienojiet 4 ml Chang Medium D argentamicīnu, lai kopējais daudzums katrā flakonā būtu5 ml.3. Netraucēti inkubējiet kultūras 37° C temperatūrā 5%-8%CO 2vidē.4. 5. dienā pārbaudiet augšanu. Aizvietojiet barotni arsvaigu Chang Medium D ar gentamicīnu un veicietievākšanu, ja novērojama pietiekami efektīva šūnuaugšana.5. Pēc tam pārbaudiet kultūru augšanu un katru dienupilnībā nomainiet barotni, līdz var novērot pietiekamaapjoma kolonijas, kas gatavas ievākšanai.6. Vislabākie rezultāti tiek iegūti, pievienojot kultūrāmChang Medium D ar gentamicīnu iepriekšējā dienāpirms ievākšanas.Chang Medium D ar gentamicīnu lietošana nošķirtu augļaūdeņu šķidruma šūnu audzēšanā:Lai nošķirtu šūnas, apstrādājiet kultūras ar tripsīnu (vaipronāzi, u. c.), kā Jūs parasti darītu, ja šūnas tiktu audzētasstandarta barotnē. Tomēr, apstrādājot ar proteāzi, jāveicuzmanīga novērošana. Augļa ūdeņu šķidruma šūnām, kasaudzētas Chang Medium D ar gentamicīnu, ir nosliece uzlielāku jutīgumu pret apstrādi ar proteāzi nekā augļa ūdeņušķidruma šūnām, kas audzētas standarta barotnē. Var būtnepieciešams pārveidot protokolu, lai ņemtu vērā šo faktu.