Stypopodium zonale: UN ALGA MARINA CON EFECTOS ...

Stypopodium zonale: UN ALGA MARINA CON EFECTOS ANTIINFLAMATORIO,
ANALGÉSICO Y ANTIOXIDANTE.
Stypopodium zonale: MARINE ALGAE WITH ANTI-INFLAMATORY, ANALGESIC AND
ANTIOXIDANT EFFECTS.
Llanio, Mirtha a , Fernández, M.D a ., Cabrera, B a ., Aneiros, A a ., Bermejo, P b ., Abad, M.J. b ,
Payá, M c . y Alcaraz M. J. c
a Centro de Bioproductos Marinos. Loma y 37, Plaza. C. Habana. Cuba.
E-mail: mllanio@yahoo.es , CEBIMAR@infomed.sld.cu
b Dpto. de Farmacología. Facultad de Farmacia. Universidad Complutense de Madrid.
España.
c Dpto. de Farmacología. Facultad de Farmacia. Universidad de Valencia. España.
RESUMEN
De los organismos marinos se han obtenidos compuestos con efectos antiinflamatorios
fundamentalmente a partir de esponjas, celenterados y algas. Un compuesto representativo
de las algas, debido a su gran número de propiedades, es el epitaondiol que inhibe a la
fosfolipasa A 2 y a la formación y/o liberación de prostaglandinas y leucotrienos. Otro
compuesto antiinflamatorio también aislado de algas marinas es el pacifenol que, además de
lo anterior, inhibe la formación de especies reactivas de oxígeno. (Alcaraz y Payá, 1994).
Teniendo en cuenta lo señalado anteriormente fue realizado el estudio de un extracto de
Stypopodium zonale presente en las costas cubanas, con el objetivo de conocer si el mismo
presentaba propiedades antiinflamatorias, analgésicas y antioxidantes y los posibles
mecanismos de acción de estos efectos. Para ello fueron utilizados modelos in vivo como el
edema auricular inducido por aceite de croto y ácido araquidónico y el writhing inducido por
ácido acético, así como ensayos in vitro de inhibición de: fosfolipasa A 2 (FLA 2 ),
ciclooxigenasa (COX), peroxidación lipídica (TBA), actividad superóxido dismutasa (SOD).
Además se realizó un ensayo para evaluar su toxicidad.
Como resultado de las pruebas realizadas se comprobó que el extracto inhibe el edema
auricular por ambos inductores, la FLA 2 de veneno de abeja y recombinante humana, inhibe
el writhing por ácido acético, la lipoperoxidación, tiene actividad mimética SOD. No presenta
toxicidad en el ensayo realizado.
Por todo lo anterior podemos concluir que el extracto de Stypopodium zonale presenta
propiedades antiinflamatorias, analgésicas y antioxidantes.
SUMMARY
From the marine organisms have been obtained compounds with anti-inflammatory effects
from sponges, coelenterates and algae. A representative compound of the algae, due to its
great number of properties, is the epitaondiol that inhibits phospholipase A 2 enzyme (PLA2)
and the formation and/or liberation of prostaglandins and leucotriens. Another anti-

inflammatory compound also isolated from marine algae it is the pacifenol that, besides the
above mentioned, inhibits the formation of reactive species of oxygen. (Alcaraz and Payá,
1994).
Keeping in mind that previously pointed out, we realized the study of an extract obtained from
Stypopodium zonale, present in the Cuban coasts, with the aim to know if it presented antiinflammatory,
analgesic and antioxidant properties and the possible mechanisms of action of
these effects. For these we used different in vivo tests like croton oil and arachidonic acid
mouse ear oedema and writhing induced by acetic acid, as well as in vitro inhibition test like
phospholipase A 2 (PLA 2 ), ciclooxigenase (COX), lipid peroxidation (TBA) and superoxide
dismutase activity (SOD). Also was carried out an assay to evaluate the toxicity.
As a result of the realized tests was proven that the extract inhibits the mouse ear oedema
induced by both compounds, the PLA 2 of bee poison and human recombinate source, the
writhing induced by acetic acid, the lipoperoxidation, and has mimetic SOD activity. It doesn't
present toxicity in the realized assay.
We can conclude that the Stypopodium zonale extract presents anti-inflammatory, analgesic
and antioxidant properties.
PC. Algas marinas, Stypopodium zonale, fosfolipasa A2
INTRODUCCION
Los organismos marinos representan una nueva fuente para el descubrimiento de agentes
antiinflamatorios (Grace et al, 1994), fundamentalmente obtenidos a partir de esponjas,
celenterados y algas. Un compuesto representativo de las algas debido a su gran número de
propiedades es el epitaondiol que inhibe a la fosfolipasa A 2 y la formación y/o liberación de
prostaglandinas y leucotrienos. Otro compuesto antiinflamatorio también aislado de algas
marinas es el pacifenol que, además de lo anterior, inhibe la formación de especies reactivas
de oxígeno. (Alcaraz y Payá, 1994).
Tomando en cuenta lo anteriormente expuesto nos propusimos realizar el estudio del
extracto obtenido del alga marina Stypopodium zonale (Sz), presente en las costas cubanas,
con el objetivo de conocer si el mismo presenta propiedades antiinflamatorias, analgésicas y
antioxidantes y los posibles mecanismos de acción de estos efectos.
MATERIALES Y METODOS
‣ Edema de la oreja del ratón: Inducido por aceite de croto se utilizó el modelo de
Tubaro,et al. (1986) e inducido por ácido araquidónico el de Young, et al. (1984).
‣ Inhibición de fosfolipasa A 2 (FLA 2 ): El ensayo utilizado fue el de Payá y Alcaraz (2002).
‣ Inhibición de ciclooxigenasa-2 (COX-2): El ensayo utilizado fue el de Abad et al.
(2001).
‣ Writhing inducido por ácido acético en ratón: Se utilizó el modelo de Collier, et al.
(1968).
‣ Ensayo de lipoperoxidación, TBA (Ácido tiobarbiturico): El ensayo utilizado fue el de
Ohkawa et al. (1979).
‣ Ensayo de radical catiónico ABTS (2,2 azinobis 3 etilbenzotiazolina 6 ácido sulfónico):
Se utilizó el ensayo de Re et al (1998).
‣ Actividad superóxido dismutasa (SOD): El ensayo utilizado fue el de FRIDOVICH (1970).

‣ Ensayo de MTT (Bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio): Se utilizó la
técnica de Macho et al. (2002).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El modelo de edema de la oreja inducido por aceite de croto nos permite conocer los
compuestos que actúan a través de la vía ciclooxigenasa, ya sea inhibiendo la formación y/o
liberación de prostaglandinas, (Tubaro et al, 1986, Gil et al, 1995). En esta vía actúan
fundamentalmente dos isoformas de la enzima ciclooxigenasa (COX): COX-1 y COX-2. La
COX-1 se expresa constitutivamente en casi todos los tejidos en condiciones basales y
regula fundamentalmente las funciones basales en la mucosa gástrica, riñones, plaquetas y
endotelio vascular y también parece intervenir en el mecanismo de la analgesia periférica,
mientras que la COX-2 es inducida por estímulos inflamatorios fundamentalmente
(Dannhardt y Laufer, 2000, Torres-López y Granados-Soto, 2001). Resumiendo la COX-1 es
responsable de las prostaglandinas que intervienen en la función fisiológica mientras que la
COX-2 produce estos eicosanoides durante los procesos inflamatorios. El edema de la oreja
inducido por ácido araquidónico es un modelo muy controvertido por los diferentes autores,
algunos opinan que tanto los inhibidores de la ciclooxigenasa como los de la lipooxigenasa
son capaces de inhibirlo (Pignat et al, 1986; Payá et al, 1996, Rao et al, 1993), mientras que
la mayoría admite que se forman leucotrienos y prostaglandinas, pero estas últimas en
cantidades muy pequeñas, por lo que se plantea que es un modelo para evaluar
fundamentalmente inhibidores de la vía lipooxigenasa (Young et al, 1984; Crummey et al,
1987; Inoue et al, 1988, 1993; Neves et al, 1993; Ischii et al, 1994; Blazso y Gabor, 1995)
El modelo de contorsiones inducidas por ácido acético nos permite conocer la actividad
analgésica que manifiestan los extractos. El mecanismo de acción de este ensayo no se
encuentra completamente dilucidado, no obstante se conoce que los compuestos inhibidores
de la formación y/o liberación de prostaglandinas también manifiestan actividad analgésica
(Neves et al,1993), planteándose recientemente que las prostaglandinas formadas por la vía
de la ciclooxigenasa-1 tienen relevancia como mediadores del dolor ya que su formación
ocurre en menos tiempo (30 minutos) que las formadas por la ciclooxigenasa-2 que requieren
no menos de 3 horas (Torres-López y Granados-Soto, 2001).
Las especies reactivas de oxígeno (EROS) son, en su mayoría, especies moleculares con un
electrón libre en su estructura que le confiere un carácter muy reactivo y si bien resulta
importante su formación en determinados casos, un desbalance en estas reacciones puede
implicar daños severos para las células. Por este motivo es importante conservar un
equilibrio entre su generación y aquellos mecanismos que protegen a las células de sus
efectos nocivos y cuando estos fallan se hace necesario su complementación con la
aplicación de sustancias antioxidantes.
El extracto obtenido de Sz no inhibe significativamente el edema producido por aceite de
croto en casi ninguna dosis ensayada (Figura 1). Sin embargo inhibe el edema inducido por
ácido araquidónico en todas las dosis con por cientos de inhibición superiores al 50% (
Figura 2). Los resultados nos sugieren que este extracto parece tener efecto antiinflamatorio
a través de la vía lipooxigenasa relacionada con la formación y liberación de los leucotrienos.

Como demuestran los resultados que se observan en la figura 3 el efecto analgésico de este
extracto se manifiesta fundamentalmente a nivel periférico, ya que el modelo utilizado actúa a
ese nivel predominantemente.
En la tabla 1 se muestra que el extracto inhibió de manera significativa la FLA 2 de veneno de
abeja y recombinante humana, no así la proveniente de otras fuentes, y no tiene efecto en
COX-1 y COX-2 en la concentracion ensayada (100 ug/mL)
El extracto inhibió de manera significativa la lipoperoxidación y el radical ABTS, además de
mostrar efecto en la técnica de actividad SOD. Otros investigadores han encontrado esta
capacidad en moléculas de bajo peso molecular extraídas de algas marinas (BRIAND Y
MEKIDECHE, 1992).
El extracto no presentó toxicidad en el ensayo de MTT a la concentración de 10 ug/mL.
CONCLUSIONES
• El extracto inhibe significativamente la FLA 2 de veneno de abeja y recombinante
humana.
• Este extracto no inhibe la COX y tiene poco efecto en el edema de la oreja inducido
por aceite de croto por lo que no parece actuar a través de la vía ciclooxigenasa.
• El extracto mostró efecto en el edema de la oreja inducido por ácido araquidónico,
modelo relacionado con la vía lipooxigenasa.
• El extracto mostró actividad antioxidante en los ensayos utilizados.

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Figura 1. Evaluación del extracto Sz en el modelo del edema de la oreja inducido por aceite
de croto (n=6, * p

60
*
50
% de inhibición
40
30
20
10
0
5 mg/mL 10 mg/mL 20 mg/mL
Dosis

80
70
60
*
*
*
% de inhibición
50
40
30
20
10
0
5 mg/mL 10 mg/mL 20 mg/mL
Dosis
% de inhibición
100
99
98
97
96
95
94
93
92
91
*
*
*
5 mg/mL 10 mg/mL 20 mg/mL
Dosis

Extracto
% de inhibición
FLA 2 v.a. FLA 2 r.h FLA 2 p. FLA 2 n.n.
Sz 99 92 17 13
(v.a: veneno de abeja, r.h: recombinante humana, p: pancreática, n.n: naja-naja)
Extracto
% de inhibición
TBARS (75 ug/mL) ABTS (5 ug/mL) SOD (0.34 mg/mL)
Sz 82 100 92