4 - Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal

Contenido
Diagnóstico fitosanitario
Algunas consideraciones respecto a la atención fitosanitaria estatal que reciben los diferentes productores
agrícolas en Cuba
Santiago F. Jiménez Jiménez, Odalys Rodríguez Travieso, Adriana Ballester Hernández, Ángela C. Porras
González y Sonia Reyes Gómez
Malezas asociadas a plantas ornamentales
Noris López Martínez
227
233
Ecología
Reacción de clones naturales e híbridos de la FHIA de bananos y plátanos a las poblaciones de Cuba de
Fusarium oxysporum f. sp. cubense, agente causal de la marchitez por Fusarium o mal de Panamá
Luis Pérez Vicente, Alicia Batlle Viera, Julio Chacón Benazet y Virgen Montenegro Moracén
Peronospora hyoscyami f. sp. tabacina. Variabilidad de las poblaciones en Cuba (I)
Berta Lina Muiño García y Yordanka González Guardiola
Peronospora hyoscyami f. sp. tabacina. Variabilidad morfológica en esporangios de aislados (II)
Berta Lina Muiño García y Yordanka González Guardiola
237
243
253
Control biológico
Eficacia de Trichoderma harzianum A34 en el biocontrol de Fusarium oxysporum f. sp. cubense,
agente causal de la marchitez por Fusarium o mal de Panamá de los bananos en Cuba
Luis Pérez Vicente, Alicia Batlle Viera, Julio Chacón Benazet y Virgen Montenegro Moracén
Colecta de esporas de Trichoderma harzianum Rifai cepa A34 por lecho fluidizado y ciclón dual
y por tamizaje vibratorio
Orestes Elósegui Claro, Orietta Fernández-Larrea Vega, Enrique Ponce Grijuela, Giovanni Borges Marín,
Luciano Rovesti y Jesús Jiménez Ramos
Efecto del OleoNim 50 CE sobre el crecimiento y desarrollo in vitro de hongos fitopatógenos del arroz
(Oryza sativa Lin.)
Ariel Cruz Triana y Deyanira Rivero González
Evaluación de cepas nativas de Bacillus thuringiensis Berliner para el control de Heliothis virescens
Fabricius en el cultivo del tabaco en Cuba
Bertha Carreras Solís, Dayamí Rodríguez Batista y Felicia Piedra Díaz
259
265
271
277
Comunicación
Creación y desarrollo de los primeros consultorios fitosanitarios del país y su impacto para el trabajo
de la ETPP
Dagoberto Téllez Martínez
281

Contents
Phytosanitary diagnosis
Some Considerations about the State Phytosanitary Attentions Received by the Different Agricultural
Producers in Cuba
Santiago F. Jiménez Jiménez, Odalys Rodríguez Travieso, Adriana Ballester Hernández, Ángela C.
Porras González and Sonia Reyes Gómez
Weeds Associated to Ornamental Plants
Noris López Martínez
227
233
Ecology
Reaction of Natural and Hybrids Cultivars of FHIA Bananas and Plantains to Cuban Fusarium
oxysporum f. sp. cubense Populations, Causal Agent of Fusarium Wilt or Panama Disease
Luis Pérez Vicente, Alicia Batlle Viera, Julio Chacón Benazet and Virgen Montenegro Moracén
Peronospora hyoscyami f. sp. tabacina. Variability of Populations in Cuba (I)
Berta Lina Muiño García and Yordanka González Guardiola
Peronospora hyoscyami f. sp. Tabacina. Morfologic Variability of Sporangia Isolates (II)
Berta Lina Muiño García and Yordanka González Guardiola
237
243
253
Biological control
Efficacy of Trichoderma harzianum A34 in Fusarium oxysporum f. sp. cubense Biocontrol,
Causal Agent of Fusarium Wilt or Panama Disease on Bananas in Cuba
Luis Pérez Vicente, Alicia Batlle Viera, Julio Chacón Benazet and Virgen Montenegro Moracén
Collect of Trichoderma harzianum Rifai cepa A-34 Spores Using the Method of Separation by a
Fluid-bed and Dual Cyclone Machine, and Separation by Electric Vibratory Sieving
Orestes Elósegui Claro, Orietta Fernández-Larrea Vega, Enrique Ponce Grijuela, Giovanni Borges
Marín, Luciano Rovesti and Jesús Jiménez Ramos
Effect of OleoNim 50 on Growth and Development in vitro of Rice (Oryza sativa Lin.) Phytopatogen
Fungi
Ariel Cruz Triana and Deyanira Rivero González
Evaluation of Native Strains of Bacillus thuringiensis Berliner for the Control of Heliothis virescens
Fabricius in Cuban Tobacco Crop
Bertha Carreras Solís, Dayamí Rodríguez Batista and Felicia Piedra Díaz
259
265
271
277
Communication
Creation and Development of the Earliest Phytosanitary Consulting Offices of Cuba and their Impact to
the Labour of Plant Protection Stations
Dagoberto Téllez Martínez
281

FITOSANIDAD vol. 13, no. 4, diciembre 2009
Diagnóstico fitosanitario
ALGUNAS CONSIDERACIONES RESPECTO A LA ATENCIÓN
FITOSANITARIA ESTATAL QUE RECIBEN LOS DIFERENTES
PRODUCTORES AGRÍCOLAS EN CUBA
Santiago F. Jiménez Jiménez, 1 Odalys Rodríguez Travieso, 1 Adriana Ballester Hernández, 1 Ángela C.
Porras González 1 y Sonia Reyes Gómez 2
1
Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudad
de La Habana, CP 11600, sjimenez@inisav.cu, orodriguez@inisav.cu, aballester@inisav.cu,
aporras@inisav.cu
2
Laboratorio Provincial Sanidad Vegetal. Calle Carbó 40 esq. a Calle Holguín, reparto Alturas de Parera,
Holguín, Cuba, saveh@enet.cu
INTRODUCCIÓN
El sistema estatal de protección de plantas (SEPP) de
Cuba incluye, entre sus componentes básicos, a las estaciones
territoriales de protección de plantas (ETPP), que
en número de 73 están distribuidas a todo lo largo del
territorio nacional y que son las encargadas del trabajo
de atención fitosanitaria de las entidades productivas
del país. Muchos cambios se han producido en la agricultura
cubana en los últimos años, incluidos la diversificación
de formas de tenencia de la tierra y de los esquemas
productivos, los métodos y medios para el control
de las plagas y otros. Para estar a tono con este nuevo
contexto de la agricultura se requiere que las ETPP tengan
identificadas las demandas de los sistemas productivos
y ajusten su desempeño a las necesidades actuales
de los productores, lo que les permitirá optimizar el alcance
de su actividad técnica y enfrentar, con mayor eficiencia,
la solución de las necesidades del presente en
cuanto a la protección de plantas.
El objetivo del trabajo consistió en diagnosticar la situación
de los diferentes sectores productivos de Cuba
en relación con la fitosanidad, e identificar sus demandas
en aras de coadyuvar a su solución mediante el perfeccionamiento
de los servicios que les brindan la red
nacional de ETPP.
Como método utilizado se elaboró un modelo de encuesta
para su aplicación individual entre productores
implicados en las principales formas de producción que
existen actualmente en Cuba y dedicados a distintas
actividades agrícolas. Cada encuestado debió emitir sus
respuestas según el modelo que aparece en la página
siguiente.
El modelo fue circulado en las provincias a través de
los especialistas de los laboratorios provinciales de sanidad
vegetal (Laprosav), quienes posteriormente los
remitieron al Instituto de Investigaciones de Sanidad
Vegetal (Inisav), donde se llevó a cabo el procesamiento
y análisis de los resultados.
RESULTADOS
Se obtuvieron respuestas de la encuesta de parte de
414 productores procedentes de 11 provincias del país,
y pertenecientes a unidades básicas de producción cooperativa
(UBPC), cooperativas de producción agropecuaria
(CPA), cooperativas de créditos y servicios
(CCS/CCS-F), UBPC creadas en antiguas áreas de complejos
agroindustriales azucareros (CAI-UBPC), agricultura
urbana (AU), empresa de cultivos varios (ECV),
así como a productores independientes (PI) (Tabla 1).
La mayor parte de los encuestados fueron personas de
más de cuarenta años; no obstante, 157 de ellos eran
menores de esa edad, incluidos 34 jóvenes agricultores
entre veinte y treinta años.
En cuanto al nivel de escolaridad, resalta el hecho de
que solo el 7% tenía hasta sexto grado. El resto de los
encuestados, en su mayoría, recibieron enseñanza me-
fitosanidad/227

Jiménez y otros
dia (el 24% hasta 9. o grado y el 23% hasta 12. o grado).
Un número bastante elevado recibió enseñanza media
especializada (30% técnico medio) y enseñanza superior
(16% universitario).
1. Localización:
Municipio: __________________ Provincia: __________________
2. Edad:
20-30 años ___ 31-40 años ___ 41-50 años ___ 51años o más ___
3. Nivel de escolaridad:
Hasta 6. o grado __ Hasta 9. o grado __ Hasta 10. o grado __
Técnico medio __ Universitario __
4. ¿Cuántos años de experiencia tiene en la producción agrícola? ____
5. ¿En qué forma de producción se ubica?
UBPC __
CPA __
CCS __
Productor independiente__
Agricultura urbana __
UPBC ex CAI __
6. Producción agrícola fundamental a la que se dedica:
a) Cultivos varios __ d) Arroz __
b) Cítricos y frutales __ e) Café __
c) Forestales __
f) Tabaco __
7. ¿Es activista fitosanitario? Sí __ No __
8. ¿Qué dificultades enfrenta para resolver sus problemas con plagas?
a) ¿Cómo identificar una plaga? __
b) ¿Cómo reconocer el origen de una afectación?__
c) ¿Cómo aplicar la señalización de plagas? __
d) ¿Cómo aplicar el pronóstico de la aparición de plagas? __
e) El uso de plaguicidas químicos para el control de plagas __
f) Los métodos de control biológico de plagas __
g) El uso de plaguicidas biológicos para el control de plagas __
h) La utilización de alternativas para el MIP __
i) La utilización de alternativas para el MAP __
j) La evaluación de la efectividad técnica de las medidas de control __
k) El conocimiento de las regulaciones legales __
l) Otras (¿cuáles?) ______
9. ¿A quién acude cuando tiene problemas de plagas en sus cultivos?
a) La experiencia propia __
b) Amigos o familiares __
c) Otros productores __
d) Extensionista del territorio __
e) Fitosanitario de la empresa __
f) Especialista de la ETPP __
10. ¿Por qué vía recibe información técnica sobre plagas en los cultivos?
a) Programas de radio __ d) Pancartas __
b) Plegables o folletos __ e) Intercambio entre productores __
c) Programas de TV __ f) Asesoría técnica de la ETPP __
Otra (¿cuál?) _______
g) Otra (¿cuál?)______
g) Otros (¿cuáles?) __
g) Ninguna vía __
h) Otras (¿cuáles?) __
11. ¿Conoce la actividad que desarrolla la ETPP de su territorio? Sí __ No __
11a ¿Qué tipo de servicios recibe de ella?
a) Visitas periódicas para el monitoreo del estado fitosanitario de sus cultivos __
b) Recomendaciones técnicas para el trabajo de protección de plantas __
c) Indicaciones metodológicas para la protección de sus cultivos __
d) Acciones de capacitación __
e) Visitas de control __
f) Aplicación de la legalidad __
g) Otras (¿cuáles?) __
12. ¿Cómo cataloga el servicio que le brinda la ETPP?
Bueno __ Malo __ Regular __
12a. Si no es bueno, ¿por qué?
a) No lo conozco __
b) No responde cuando necesito __
c) Dista de mi área de producción__
d) No me da información __
e) No lo requiero __
f) Otras (¿cuáles?) __
228/fitosanidad

Algunas consideraciones respecto a la atención...
Tabla 1. Distribución porcentual de productores encuestados por provincias
Provincia
Encuestados
Encuestados
Provincia
(%)
(%)
La Habana 9 Camagüey 10
Ciudad de La Habana 7 Las Tunas 6
Matanzas 4 Granma 12
Villa Clara 17 Holguín 10
Cienfuegos 11 Santiago de Cuba 8
Ciego de Ávila 6
Como promedio, el total de encuestados tenía alrededor
de diecisiete años de experiencia en la producción agríco-
la. En cuanto a la pertenencia a las diferentes formas de
producción, se distribuyen como sigue (Tabla 2):
Tabla 2. Distribución porcentual de productores encuestados
por sistema de producción
Sistema
de producción
Encuestados
(%)
Sistema
de producción
CCS 27 PI 11
AU 21 CPA 9
UBPC 17 CAI-UBPC 4
ECV 11
Encuestados
(%)
Del total de involucrados, el 74% tenía como actividad
agrícola fundamental los cultivos varios, el 11% estaban
vinculados fundamentalmente al cultivo de cítricos
y frutales, el 6% al cultivo del café, el arroz y el
tabaco, y el 4% a forestales. Aproximadamente el 50%
de los participantes en la encuesta eran activistas
fitosanitarios.
En general, los criterios de los productores se refieren a
continuación. Las dificultades más frecuentes que manifestaron
para solucionar sus problemas con plagas son:
¿Cómo aplicar el pronóstico de la aparición de plagas? 38%
¿Cómo aplicar la señalización de plagas? 36%
¿Cómo reconocer el origen de una afectación? 35%
El uso de plaguicidas químicos para el control de plagas 35%
La evaluación de la efectividad técnica de las medidas de control 32%
¿Cómo identificar una plaga? 29%
El uso de plaguicidas biológicos para el control de plagas 29%
El conocimiento de las regulaciones legales 29%
Los métodos de control biológico de plagas 28%
La utilización de alternativas para el MIP 25%
La utilización de alternativas para el MAP 25%
Otras dificultades (¿cuáles?) 14%
Como se aprecia, los problemas más frecuentes que presentaban
los productores están relacionados con el uso
de los modelos de pronóstico, la aplicación de las
metodologías de señalización de las plagas y la capacidad
para el reconocimiento de sus daños.
Mención aparte es para la respuesta referida al uso de
plaguicidas químicos, pues su reconocimiento como un
problema se refiere al déficit de estos productos para
su empleo en el control de los organismos nocivos que
perjudican sus cultivos.
Los sectores que declararon más dificultades (el 40% o
más) en la mayor cantidad de aspectos considerados
fueron los CAI-UBPC (ocho), los productores independientes
(seis) y las CPA (cuatro).
En relación con las vías que utilizan para consultar los problemas
de plagas en sus cultivos, las respuestas fueron:
fitosanidad/229

Jiménez y otros
Al especialista de la ETPP 73%
Al técnico fitosanitario de la empresa 61%
A la experiencia propia 42%
A conversaciones con otros productores 33%
Al extensionista del territorio 14%
A amigos o familiares 11%
Otros (¿cuáles?) 10%
Las respuestas emitidas apuntan a la búsqueda
priorizada de asistencia técnica especializada (especialistas
de la ETPP y técnicos de las empresas) por parte
de los productores de todos los sectores productivos,
aunque cerca de la mitad de ellos se vale de su
experiencia propia, básicamente en las CPA y entre los
productores independientes (Fig. 1).
Esto está acorde con el nivel de escolaridad y de conocimientos
técnicos que posee una parte del universo de
productores encuestados; pero también puede entenderse
como cierta insuficiencia en el alcance del trabajo
de la ETPP.
De cualquier modo se considera que, según estas respuestas,
la ETPP como entidad del sistema estatal de
protección de plantas (SEPP) posee liderazgo en sus
territorios.
Figura 1. Respuestas sobre a quién acude cuando tiene problemas de plagas en sus cultivos.
Respecto a las vías por las que reciben información técnica
sobre plagas en los cultivos, los productores respondieron:
Por asesoría con técnicos de la ETPP 79%
Intercambio con otros productores 52%
Plegables o folletos 33%
Programas de radio 27%
Programas de televisión 25%
Otras (¿cuáles?) 15%
Pancartas 14%
Ninguna vía 2%
Todos los sectores productivos reciben información técnica
en más del 73% de los casos a través de los técnicos
de la ETPP, con excepción de la agricultura urbana
(66%), y la gran mayoría de ellos se vale también, en
más del 50% de los casos, del intercambio entre productores,
con excepciones de las UBPC y la agricultura
urbana.
Las respuestas obtenidas denotan un limitado acceso a
ciertas formas de divulgación del conocimiento por un
número considerable de productores, lo que puede ser
consecuencia de la poca utilización por el SEPP de recursos
disponibles para estos fines, como son los medios
masivos de comunicación locales, tales como radio
y televisión; también una limitada distribución entre
los productores de materiales impresos (plegables, folletos,
boletines, carteles), tal vez como resultado de
limitaciones materiales.
230/fitosanidad

Algunas consideraciones respecto a la atención...
Aunque también estas respuestas denotan el liderazgo
local de la ETPP, se conoció que algunos encuestados
acuden a la Asociación Cubana de Técnicos Agropecuarios
y Forestales (Actaf) para recibir asistencia
técnica y capacitación. Una alianza con esta organización
constituye una oportunidad que, bien coordinada,
puede convertirse en una fortaleza para el trabajo del
SEPP con los diferentes sectores productivos. Sobre
los servicios que reciben de la ETPP los agricultores
encuestados refirieron:
Visitas periódicas para monitoreo de sus cultivos (señalizador-inspector) 75%
Recomendaciones técnicas para el trabajo de protección de plantas 73%
Acciones de capacitación 72%
Visitas de control 70%
Indicaciones metodológicas para la protección de sus cultivos 58%
Aplicación de la legalidad (decretos leyes) 47%
Otros (¿cuáles?) 4%
Se infiere de las respuestas el desempeño, por los técnicos
de la ETPP, de su participación específica entre los
productores de todos los sectores. Menos del 50% se
refiere a la aplicación de la legalidad entre las acciones
que la ETPP lleva a cabo entre ellos, a la que le reconocen
una mayor dedicación a las cuestiones técnicas, la
capacitación y el control de la actividad fitosanitaria.
En la indagación sobre cómo catalogan el servicio que
les brinda la ETPP, los agricultores lo calificaron de
bueno de forma mayoritaria (75%); no obstante, para
el 2% de ellos el servicio es malo (sobre todo entre los
miembros de los CAI-UBPC), en tanto el 21% restante
lo califica de regular, básicamente entre las CPA, las
CCS y los productores independientes (Fig. 2).
Figura 2. Valoración de los productores acerca de los servicios que reciben de la ETPP.
Los criterios más generalizados de los productores que fundamentan
el porqué de que el servicio no sea bueno fueron:
Dista de mi área de producción 16%
Otras (¿cuáles?) 4%
No responde cuando necesito 2%
No los conozco 1%
La principal razón que argumentan (lejanía de la
ETPP) la aportan las CCS, las CPA y los productores
independientes (20% o más); pero en el resto de los
sectores encuestados se tiene la misma opinión en más
del 10% de los casos (Fig. 3).
fitosanidad/231

Jiménez y otros
Figura 3. Argumentación de los productores sobre su valoración de los servicios que reciben de las ETPP.
Dada la responsabilidad correspondiente al SEPP en
la protección fitosanitaria desde todo punto de vista y
a todos los sectores productivos, se impone la necesidad
de que el trabajo de la ETPP aumente su alcance
y solucione las necesidades de atención de todo el universo
de productores, incluidas las del 25% de ellos,
cuya opinión disiente de la mayoría.
Los problemas e insatisfacciones detectadas entre los
agricultores por la encuesta tienen soluciones factibles
de implementar, y de hecho ya el SEPP trabaja en este
sentido. Tal es el caso de:
• Fortalecer la estructura fitosanitaria a nivel de consejo
popular (uno por cada consejo) o territorios más pequeños,
y de esta forma posibilitar que se llegue a las
áreas de cultivo que no tengan adecuada protección.
• Fortalecer la capacidad de trabajo de la ETPP a través
de los puntos operativos y puntos operativos
especializados, sobre todo en las zonas montañosas.
• Fortalecer la estructura fitosanitaria en las unidades
de producción.
• Perfeccionar los métodos para la capacitación, ampliar
los temas a abordar e involucrar a agricultores
de todas las estructuras productivas.
• Ampliar la divulgación de temas sobre fitosanidad
y hacer mayor uso de los medios de difusión locales
existentes, entre otros.
• Desarrollar y profundizar alianzas locales con entidades
como la Actaf y la Asociación Cubana de Producción
Animal (ACPA), así como con instituciones
científicas y docentes que contribuyan a satisfacer
algunas de las necesidades de los agricultores.
CONCLUSIONES
• Los sectores que más dificultades presentan para
resolver sus problemas con plagas, en la mayor cantidad
de aspectos tenidos en cuenta en la encuesta,
son los CAI-UBPC, los productores independientes
y las CPA, que coinciden entre los que, por sus
insatisfacciones, no catalogan como bueno al servicio
que brindan las ETTPP, y por tanto se requiere asignarles
una atención particular.
• A pesar de las limitaciones materiales que afrontan
las ETPP y sus especialistas, los productores reconocen
su liderazgo como el órgano de consulta y orientación
por excelencia.
• Deben promoverse e incrementarse todas las acciones
que vinculen a la ETPP con todos los sistemas
productivos, por constituir una de las funciones esenciales
de estas entidades para cumplir satisfactoriamente
con la protección de plantas en todo el país.
• El SEPP está sensibilizado con la necesidad de solucionar
las demandas de todo el sector productivo, y a partir
de ellas se implementan formas para conseguirlo.
REFERENCIAS
Cárdenas, Ivis: «Desarrollo agrario municipal, ¿hacia dónde vamos?»,
Agricultura Orgánica 14(3):20-21, Cuba, 2008.
CNSV: Manual de funciones y procedimientos de protección de plantas,
Centro Nacional de Sanidad Vegetal, Minag, La Habana, 2006.
Godet, M.; P. Durante: Prospectiva estratégica: problemas y métodos,
Cuadernos de Lipsor, Cuaderno 20, 2. a ed., 2007.
Jiménez, S.: «La señalización y el pronóstico de plagas: origen, desarrollo
y retos», Fitosanidad 11(3):51-56, La Habana, 2007.
232/fitosanidad

FITOSANIDAD vol. 13, no. 4, diciembre 2009
MALEZAS ASOCIADAS A PLANTAS ORNAMENTALES
Noris López Martínez
Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal. Carretera a Santiago de Cuba Km 2½, Guantánamo, Cuba
RESUMEN
Las malezas son verdaderos enemigos de las plantas sobre las que
debe realizarse un manejo adecuado. En ornamentales es importante
conocer las principales especies que se encuentran asociadas a
las cultivables. En el municipio de Guantánamo se realizó un estudio
de las plantas adventicias en jardines, parcelas particulares y en un
organopónico de floricultura, perteneciente a la empresa municipal
de servicios comunales para determinar la composición florística
presente. Se registraron 27 malezas pertenecientes a 24 géneros y
10 familias botánicas. Las familias más representadas fueron
Poaceae, Asteraceae, Malvaceae, Euphorbiaceae y Amaranthaceae.
Palabras claves: malezas, plantas ornamentales
ABSTRACT
Weeds are really natural enemies of plants so a suitable management
is necessary to realize on them. In ornamentals is important to know
main species associated in order to define the best strategies. A
study of weeds composition in gardens, particular areas and a floristic
organoponic appertaining to Guantanamo Municipal Enterprise of
Communal Services was realized. A total of 27 weeds from 24 genera
and 10 botanic families were recorded. Principal families present
were Poaceae, Asteraceae, Malvaceae, Euphorbiaceae and
Amaranthaceae.
Key words: weeds, ornamental plants
INTRODUCCIÓN
Las plantas ornamentales han tenido gran importancia
para la humanidad a través de los años. Se aprecian
por su belleza, color y aroma. Adornan jardines, casas,
parques y otros lugares [Rodríguez et al., 2004].
La floricultura y la producción de ornamentales en general
se han convertido para el país en actividades económicas
atractivas por la alta demanda interna y la
posibilidad de exportación. En este sentido existe una
amplia gama de especies y variedades de plantas ornamentales
y florales que en Cuba se cultivan [Cruz et al.,
2009]. Este cultivo, tanto con fines exportables como
para satisfacción de la demanda interna, ha tenido un
ascenso notable en los últimos años en Cuba [Cortés,
2000; Gandarilla y Fernández, 2002].
Asimismo, con el auge del desarrollo turístico se ha
hecho necesario aumentar las áreas y variedad de plantas
ornamentales a fin de suplir las crecientes demandas
de las instalaciones turísticas.
El cultivo de plantas ornamentales es relativamente
pequeño, pero prometedor en la agricultura de muchos
países exportadores, donde la floricultura es una empresa
de alto costo que requiere mucha mano de obra;
sin embargo, aproximadamente el 30-35% del costo de
producción se invierte en el control de plagas y enfermedades
[Bayer, 1999].
Estas plantas se ven expuestas al ataque de plagas,
enfermedades y malezas que influyen de manera negativa
en su desarrollo y limitan tanto su belleza como la
producción.
El cuidado del entorno ecológico de los jardines, parques
o instalaciones turísticas constituye un aspecto
importante para la contribución de la belleza; sin embargo,
numerosos agentes nocivos pueden ocasionar
daños a las flores y ornamentales, lo cual justifica la
realización de estudios de diagnóstico para su control
[Sandoval et al., 2003].
De acuerdo con Díaz et al. (2007), Cuba posee gran heterogeneidad
de plantas ornamentales. Esta flora está
compuesta por 6140 especies que representan el 53%
de endemismos. Las plagas constituyen un importante
fitosanidad/233

López Martínez
factor limitante en su reproducción debido a las exigencias
establecidas para su comercialización.
Según Paredes et al. (2008), las malezas son plantas ajenas
al cultivo, compiten por agua, nutrientes, luz e interfieren
en la recogida de las cosechas. Pueden ser de mayor
o menor peligrosidad según su capacidad competitiva
al reducir los rendimientos de los cultivos y afectar la
calidad de las cosechas en la mayoría de las ocasiones.
Las malezas constituyen una plaga formada por un complejo
de especies con características disímiles que provocan
pérdidas de los rendimientos en los cultivos, y
que puede alcanzar el 66% en papa, el 78% en tomate,
el 94% en ajo y cebolla, y el 72% en maíz [Pérez, 1992].
Este trabajo se realiza con el objetivo de conocer las
especies de malezas asociadas a la floricultura de la ciudad
de Guantánamo, lo que podría contribuir a definir
las mejores estrategias de manejo.
MATERIALES Y MÉTODOS
El trabajo se realizó en jardines y parcelas particulares
de la parte norte de la ciudad y en un organopónico de
floricultura situado en el extremo sur, perteneciente a
la empresa de comunales, donde se dedica 1,2 ha al cultivo
de flores y plantas ornamentales, entre ellas rosas,
crisantemos, claveles, gladiolos, azucenas, extrañarrosas,
margaritas del Japón, terciopelos, escarolás, dalias, nardos,
cajigales, marigolds y encajes de la reina.
Para determinar las malezas asociadas se realizaron
muestreos por medio de marcos de 0,25 m 2 puestos al
azar en las mencionadas áreas, y se clasificaron en la
sección de Herbología del Laboratorio Provincial de
Sanidad Vegetal de Guantánamo.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Las especies de malezas encontradas aparecen en la tabla,
agrupadas en familias botánicas. Se detectaron 27
malezas asociadas a 14 especies de plantas ornamentales,
pertenecientes a 24 géneros que tuvieron una incidencia
diferente.
Se pueden destacar por su importancia la ciperácea Cyperus
rotundus L., gramíneas como Cynodon dactylon (L.) Pers.,
Eleusine indica (L.) Gaertn., Echinochloa colona L. y
especies de hoja ancha como Portulaca oleracea L.,
Euphorbia heterophylla L. y Parthenium hysterophorus L.,
entre otras.
234/fitosanidad
Malezas asociadas a plantas ornamentales
Familia Especies Nombre vulgar Ciclo de vida
Cyperaceae Cyperus rotundus L. Cebolleta Perenne
Poaceae
Cynodon dactylon (L.) Pers.
Eleusine indica (L.) Gaertn.
Echinochloa colona L.
Rottboellia cochinchinensis Lour. Clayton
Chloris barbata Sw.
Cenchrus echinatus L.
Hierba fina
Pata de gallina
Metebravo
Caminadora
Barba de indio
Guizazo
Perenne
Anual
Anual
Anual
Anual
Anual
Portulacaceae Portulaca oleracea L. Verdolaga Anual
Euphorbiaceae Euphorbia heterophylla L.
Chamaesyce hirta (L.) Millsp.
Chamaesyce hyssopifolia (L.) Small.
Asteraceae Alternanthera tenella Coll.
Melanthera deltoidea Michx.
Bidens pilosa L.
Parthenium hysterophorus L.
Malvacae
Sida acuta Burm.
Urena lobata L.
Wissadula amplissima (L.) R. F. Fries
Amaranthaceae Amaranthus viridis L.
Amaranthus dubius Mart.
Amaranthus spinosus Lin.
Achyranthes aspera Lin.
Hierba lechosa
Hierba de la niña
Hierba lechera
Sanguinaria
Botón de plata
Romerillo
Escoba amarga
Malva de caballo
Malva blanca
–
Bledo manso
Bledo
Bledo espinoso
Rabo de gato
Anual
Anual
Anual
Anual
Anual
Anual
Anual
Perenne
Anual
Anual
Anual
Anual
Anual
Anual
Fabaceae Macroptilium lathyroides (L.) Urb. Maribarí Anual
Nictaginaceae Boerhavia erecta L. Tostón Anual
Solanaceae Solanum nigrum L.
Datura stramonium L.
Hierba mora
Chamico
Anual
Anual
Caparidaceae Cleome gynandra L. Volantín Anual

Malezas asociadas a plantas ornamentales
Debe considerarse el peligro que representan para el
cultivo de ornamentales, pues su presencia es común
en la mayoría de los cultivos de importancia económica.
Principales familias botánicas encontradas.
Como se observa en la figura, las familias más representadas
son Poaceae con seis especies, Asteraceae y
Amaranthaceae con cuatro, y Euphorbiaceae y Malvaceae
con tres. A ellas pertenece el mayor porciento de
las especies encontradas en la jardinería urbana evaluada.
En cuanto a géneros, se destaca un total de 24; pero el
mayor número de las malezas más importantes pertenecen
solo a 10 géneros distintos, que son los más representados
y mostrados en la tabla.
Se ha observado que el continuo aprovechamiento del
suelo en estas áreas, la utilización de labores de cultivo,
escarde manual y buena preparación, lleva consigo la
casi inexistencia de malas hierbas.
CONCLUSIONES
• Las malezas de mayor importancia encontradas en
cultivos ornamentales fueron Cyperus rotundus,
Cynodon dactylon, Elusine indica, Echinochloa colona,
Portulaca oleracea, Alternanthera tenella, Euphorbia
heterophylla y Parthenium hysterophorus.
• Las familias más representadas fueron Poaceae,
Amaranthaceae, Asteraceae, Euphorbiaceae y Malvaceae.
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fitosanidad/235

FITOSANIDAD vol. 13, no. 4, diciembre 2009
Ecología
REACCIÓN DE CLONES NATURALES E HÍBRIDOS DE LA FHIA
DE BANANOS Y PLÁTANOS A LAS POBLACIONES DE CUBA
DE FUSARIUM OXYSPORUM F. SP. CUBENSE, AGENTE CAUSAL
DE LA MARCHITEZ POR FUSARIUM O MAL DE PANAMÁ
Luis Pérez Vicente, 1 Alicia Batlle Viera, 1 Julio Chacón Benazet 2 y Virgen Montenegro Moracén 3
1
Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudad
de La Habana, CP 11600, lperezvicente@sanidadvegetal.cu; lperezvicente@live.com
2
UBPC. Caney del Sitio. Palma Soriano, Santiago de Cuba
3
Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal. Carretara a Siboney Km 6, Ternerito Lindo, Santiago
de Cuba
RESUMEN
La marchitez por Fusarium oxysporum f. sp. cubense (Foc) es una de
las más importantes enfermedades de los bananos. Se estudió la
reacción de los clones híbridos de la FHIA, clones diploides y silvestres,
a las inoculaciones artificiales con Foc (GCV 01210, raza 1;
0124 y 0128, raza 2). El inóculo de Foc se reprodujo sobre semillas
de Sorghum vulgare en bandejas en el laboratorio. Se inocularon
cinco plantas por clon, para lo cual se colocaron 15 g de la semilla
inoculada de Sorghum con cada GCV en el fondo del hoyo de plantación.
Los clones Manzano y Gros Michel fueron altamente susceptibles
a la raza 1 (GCV 01210) y resistentes a los aislados pertenecientes
a la raza 2 (GCV 0124 y 0128). Los clones Burro CEMSA,
Pisang Awak y FHIA 03 fueron severamente afectados por aislados
pertenecientes a la raza 2. El Yangambi Km 5 y FHIA 18 fueron severa
y ligeramente afectados por el GCV 01210, respectivamente. El FHIA 21
fue ligeramente afectado por la raza 2 (GCV 0124). Los clones FHIA 02
y FHIA 14 no mostraron síntomas con ninguno de los aislados inoculados.
Se observó una reacción diferencial en los clones Pelipita,
Pisang Jari Buaya y Paka contra los GCV 0124 y 0128 obtenidos del
clon Burro Criollo (Bluggoe, raza 2), lo que evidencia que ambos
aislamientos de la raza 2 difieren en patogenicidad a otros clones. La
actual clasificación de razas de Foc no tiene sentido genético y requiere
ser revisada en el futuro.
Palabras claves: mal de Panamá, marchitez por Fusarium oxysporum
f. sp. cubense, reacción de clones, GCV
ABSTRACT
Fusarium wilt by Fusarium oxysporum f.sp.cubense (Foc) is one of
the most important diseases of banana. The reaction of FHIA hybrids
cultivars (cv.), diploids and landraces to artificial inoculations with
Foc (VCGs 01210, race 1; 0124 and 0128, race 2) was studied. Foc
inoculum was reproduced on Sorghum vulgare in trays in the lab.
Fifteen grams of inoculated Sorghum seeds of each VCG were placed
on the soil under each of five inoculated tissue culture plants. Manzano
and Gros Michel cvs. were only susceptible to race 1 (VCG 01210).
Burro CEMSA, Pisang awak and FHIA 03 were severely affected by
isolates of race 2 (VCGs 0124 and 0128) and slightly by race 1. The
cultivars FHIA 02 and FHIA 04 does not showed symptoms with any of
the isolates tested. FHIA 18 was slightly affected by the races 1 and 2.
It has been reported naturally affected in conducible soils to Foc. A
differential reaction of the cultivars Pelipita, Pisang Jari Buaya and
Paka against the GCVs 0124 y 0128 obtained from Burro Criollo (race
2) were observed, supporting the criteria that both isolates differs in
pathogenicity to other cultivars and belong to different races. The
results indicate that the current system of classification of races, has
not genetic sense and requires further international collaborative
research to achieve a better understanding of Foc pathogenicity. The
method of inoculum multiplication and inoculation proved to be efficient
for testing cvs. reaction to the disease.
Key words: Panama disease, Fusarium wilts of banana, Fusarium
oxysporum f. sp. cubense, resistance, cultivars reaction, VCG
INTRODUCCIÓN
La marchitez por Fusarium o mal de Panamá causado
por Fusarium oxysporum f. sp. cubense (Foc) es una de
las enfermedades más ampliamente distribuidas e históricamente
importantes de los bananos y plátanos a
nivel mundial. El patógeno tuvo su origen en el sudeste
asiático, aunque la enfermedad haya sido reconocida
por primera vez en otros lugares, y ha coevolucionado
junto a las musáceas en su centro de origen [Bentley et
al., 1998]. Se calcula en más de 80 000 ha de cultivo del
clon Gros Michel destruidas por la raza 1 entre 1890 y
mediados de la década de los cincuenta del pasado siglo
[Stover, 1962] solo en las grandes empresas exportadoras
[Ploetz, 2005], lo que determinó su cambio por clones
del subgrupo Cavendish (AAA). Los clones Cavendish
se afectaban únicamente en los subtrópicos; pero la
aparición de la raza 4 tropical (GCV 01213-01216) más
fitosanidad/237

Pérez y otros
recientemente ha causado importantes pérdidas en plantaciones
de Malasia e Indonesia [Masdek et al., 2003;
Nasdir, 2003].
El primer informe en Cuba oficial sobre la marchitez
por Fusarium fue el de Smith (1910); sin embargo,
Johnston (1915) informó que el clon Gros Michel (AAA)
y el Manzano (subgrupo Silk, AAB) se encontraban severamente
afectados antes de 1910, y comentaron la
existencia de antecedentes de incidencia de la enfermedad
en el clon Manzano (subgrupo Silk, AAB) desde
finales del siglo XIX. Según Acuña y Díaz (1953), la zona
de Baracoa, situada en el extremo oriental de Cuba, exportó
en 1897 tres millones de racimos de Gros Michel.
La única medida practicada para su manejo consistía
en la destrucción de las plantas afectadas y la quema de
sus residuos, hasta que comenzó su sustitución paulatina
por el clon Robusta (subgrupo Cavendish, AAA), al
que localmente se nombró Inmune por su resistencia al
mal de Panamá. La misma situación existió en el resto
de las regiones del país [Johnston, 1915]. A partir de la
sustitución del Gros Michel por clones del subgrupo
Cavendish y el cultivo masivo de clones de plátanos AAB,
la marchitez por Foc perdió su importancia económica
en Cuba, y quedó confinada a las pequeñas parcelas de
agricultores y jardines de viviendas, donde Foc se mantenía
sobre plantas de los clones Burro Criollo (Bluggoe,
ABB) y Manzano.
La aparición de la Sigatoka negra en Cuba a finales de
1990 [Vidal, 1992] tuvo un fuerte impacto en los costos
de producción, pero especialmente en la estructura
clonal de la superficie del país plantada de musáceas
[Pérez et al., 2002]. Los bananos Cavendish (AAA) fueron
sustituidos por los clones FHIA 23 (AAAA) y
FHIA 18 (AAAB), que junto al FHIA 3 (AABB) ocupan
alrededor de 11 000 ha. Asimismo, en la actualidad
solo se mantiene el 18% de las más de 43 000 ha de
plátanos (AAB) existentes en 1990. Los plátanos fueron
sustituidos por el cultivo a gran escala del clon
Burro CEMSA (ABB), que ocupa unas 63 000 ha, y
por el FHIA 3 (AABB). Junto a esto, se ha popularizado
el cultivo del clon conocido popularmente como
Burro Vietnamita (Pisang Awak, ABB).
En diferentes localidades del país se han hallado plantas
de los clones Burro CEMSA, FHIA 3 y FHIA 18,
afectadas de mal de Panamá, lo cual sugirió la necesidad
de realizar algunos ensayos de sensibilidad de todos los
clones FHIA que se han introducido, debido a la posibilidad
de que la enfermedad se estuviera propagando de
nuevo en clones moderadamente susceptibles de forma
imperceptible. La aparición en los últimos años de plantas
afectadas por la enfermedad sugiere que pudiera
existir una acumulación poliética de inóculo en los clones
con algún nivel de susceptibilidad, y que la causa de
que no se haya visto más rápidamente en clones FHIA
en otros suelos sea debido probablemente al programa
de multiplicación por vitroplantas sanas.
Las poblaciones de Foc se han clasificado en función de
grupos de compatibilidad vegetativa (GCV) [Leslie,
1990; 1993; Ploetz, 1990; Pegg et al., 1996; Ploetz y Pegg,
1999] y la patogenicidad. Se han reconocido cuatro razas
del patógeno [Stover, 1962]. Las poblaciones de Cuba
pertenecen a los GCV 01210 presentes en Manzano y
Gros Michel, pertenecientes a la raza 1, y a los 0124,
0124-0125 y 0128 presentes en Burro Criollo, FHIA 3 y
Pisang Awak, y pertenecientes a la raza 2 [Batlle y
Pérez, 1999; 2001].
El objetivo del presente estudio fue determinar la reacción
de los clones híbridos de la FHIA y de diploides y
triploides silvestres naturales en el germoplasma de
Cuba frente a las principales GCV y razas de Foc presentes
en la isla.
MATERIALES Y MÉTODOS
Para determinar la reacción de los clones de banano naturales
e híbridos se seleccionaron para las inoculaciones
aislamientos pertenecientes a los GCV 0124 (aislado
ESB-1 perteneciente a la raza 2 obtenido del clon Burro
Criollo en Esmeralda, Camagüey), 0128 (aislado SC-
3 perteneciente a la raza 2 obtenido del clon Burro Criollo
en Palma Soriano, Santiago de Cuba) y 01210 (aislado
TuPP de la raza 1 obtenido del clon Manzano en Puerto
Padre, Las Tunas).
Para la multiplicación en condiciones controladas de
Foc se procedió a utilizar semilla de sorgo (Sorghum
vulgare Pers.), las que se esterilizaron dos veces en dos
días consecutivos, se colocaron en bandejas en una capa
delgada y se cubrieron con papel de aluminio o con papel
de traza estéril. La semilla se inoculó con una suspensión
de conidios de Foc de cada GCV y raza en agua
estéril (5 x 10 5 esporas/mL), obtenidos de un cultivo
monospórico en PDA incubado por 14 días independientemente.
Se utilizó suficiente suspensión para garantizar
un completo mojado de la superficie de la semilla
de sorgo en las bandejas, y estas se incubaron por
un período de 10 a 14 días hasta que la semilla de sorgo
238/fitosanidad

Reacción de clones naturales e híbridos...
estuviera completamente cubierta de micelio y esporas
de Foc.
Se utilizaron 15 g de semilla de sorgo con Foc por hueco
antes de plantar, y se tomaron cinco plantas de cada
uno de los clones Manzano, Gros Michel, Burro Criollo,
Pelipita, Pisang Awak, Yangambi Km 5, Pisang Mas,
Calcutta 4, Niyarma Yik, Pisang Lilin, Pisang Jari
Buaya (PJB), Paka, Musa acuminata 1, Musa
acuminata, FHIA 2, FHIA 3, FHIA 4, FHIA 18 y
FHIA 21. Los clones fueron obtenidos del jardín clonal
del Instituto de Investigaciones en Viandas Tropicales
(Inivit) y multiplicados por cultivo de tejidos en el Instituto
de Biotecnología de las Plantas (IBP), de la
Universidad Central de Las Villas. Las vitroplantas se
aviveraron hasta alcanzar una altura aproximada de
25 cm y se llevaron al campo e inoculadas, para lo cual
se colocó el inóculo debajo de la planta, en el suelo previamente
humedecido (Fig. 1a y b). El ensayo se condujo
con un diseño totalmente aleatorizado.
La evaluación de la reacción de los clones se realizó por
la determinación de la frecuencia de plantas muertas,
la severidad de los síntomas externos de la enfermedad
según la siguiente escala de severidad: 1) sana; 2) clorosis
ligera y marchitez sin afectación del peciolo; 3) clorosis
moderada, peciolos doblados y marchitez con rajadura
de la base de las vainas; 4) clorosis severa, peciolos doblados,
enanismo de la nueva hoja que sale y de las
plantas, rajadura de los pseudotallos; 5) planta muerta;
y a la cosecha de las plantas se evaluaron los síntomas
internos, para lo cual se utilizó la escala propuesta
en las Guías Técnicas del Inibap para la evaluación al
marchitamiento por Fusarium [Carlier et al., 2002]:
1) cormo completamente limpio; 2) puntos aislados de
tejido vascular con coloraciones; 3) hasta 1/3 de la superficie
con coloraciones; 4) coloración entre 1/3 y 2/3
de la superficie con coloraciones; 5) más de 2/3 de la
superficie con coloraciones; 6) coloración completa del
tejido vascular.
Figura 1a y b. Colocación del inóculo de las semillas de Sorghum colonizadas por Foc
debajo y alrededor de la planta.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los clones Niyarma Yik, Musa acuminata 1 y Pisang
Mas presentaban plantas muy débiles al momento de
la inoculación artificial, y se presentaron altas mortalidades
de plantas pocos días después de la inoculación,
por lo que se descartaron del estudio.
En la Fig. 2 y en la Tabla 1 aparecen los resultados de
la evaluación de la frecuencia de plantas muertas producto
de las infecciones artificiales con diferentes GCV
de Foc, y de la severidad de los síntomas externos e
internos que mostraron los clones. La reacción de los
clones Manzano, Gros Michel y Burro Criollo (Bluggoe,
ABB) se ajustó a la expresión esperada de acuerdo con
la clasificación de razas informada por Stover (1962).
El clon Pisang Awak (ABB) mostró síntomas externos
e internos, y muerte de plantas con los aislados de los
GCV 0124 y 0128 (raza 2). Se apreciaron rajaduras de
fitosanidad/239

Pérez y otros
los tallos, acortamiento de las hojas nuevas que salen
próximo a la floración y necrosis de los rizomas. Frente
al GCV 01210 (raza 1) presentó síntomas ligeros de
clorosis en algunas plantas y coloraciones pardas aisladas
(grado 2) en algunos rizomas a la cosecha. Estos
datos concuerdan con los informes de Wardlaw (1972),
quien informó de su susceptibilidad en Trinidad después
de algunos años de cultivo en suelos infectados.
Ploetz et al. (1999) informaron en cambio que el Pisang
Awak mostró índices intermedios a severos de marchitez
al inocularlo con poblaciones pertenecientes al grupo
01210 provenientes del clon Manzano en la Florida.
Tabla 1. Reacción de diferentes clones a inoculaciones artificiales con diferentes razas
y GCV de Foc. Severidad promedio
Variedades
Grado medio.
Síntomas externos
Grado medio.
Síntomas internos
del rizoma a la cosecha
01210* 0124 0128 01210 0124 0128
Manzano Criollo 4,6 1,0 1,0 3,8 1,0 1,0
Gros Michel 5,0 1,0 1,0 6,0 1,0 1,0
Burro Criollo 1,8 4,6 3,2 2,2 5,0 3,4
Pelipita 1,6 1,4 5,0 1,2 1,8 5,0
Musa acuminata 2 1,8 1,0 2,4 1,8 1,0 2,6
Pisang Lilin 2,4 2,0 1,2 2,6 1,2 1,4
Calcutta 4 2,0 2,0 1,2 1,4 2,0 1,4
Pisang Awak 1,6 3,2 2,4 1,4 3,2 2,0
PJB 1,8 3,2 1,0 2,0 3,2 1,0
Paka 1,0 3,0 1,0 1,0 3,0 1,0
Yangambi Km 5 4,4 3,6 2,6 4,0 3,6 2,4
FHIA 02 1,0 1,8 1,0 1,0 1,8 1,0
FHIA 03 2,0 3,6 2,2 2,2 4,2 1,6
FHIA 04 1,0 1,6 1,0 1,0 1,6 1,0
FHIA 18 2,2 1,6 1,2 2,4 1,4 1,0
FHIA 21 1,8 1,6 1,0 1,0 1,6 1,0
* 01210 (raza 1), 0124 (raza 2), 0128 (raza 2).
Figura 2. Reacción de los clones a las inoculaciones artificiales con
diferentes GCV y razas de Foc. Porcentaje de plantas muertas.
240/fitosanidad

Reacción de clones naturales e híbridos...
El clon Pelipita mostró síntomas externos e internos frente
a los GCV 0124 y 0128 (pertenecientes a la raza 2), y
muerte de plantas solo frente al 0128. Contrariamente,
en ensayos en la Florida Ploetz et al. (1999) informaron
plantas muertas frente al GCV 01210 (raza 1).
El cultivar Pisang Lilin mostró niveles ligeros de infección
frente a los GCV 0124 y 0128, y la afectación más
alta se expresó frente al GCV 01210, con grados intermedios
de severidad. Se ha informado como resistente
a diferentes GCV y razas en distintas localidades del
mundo en los ensayos internacionales de musáceas
[Inibap, 2000; Ploetz y Pegg, 1999]. Por su parte, Stover
(1962) lo refiere como resistente a la enfermedad, no
obstante una alta frecuencia de su progenie en cruces
con Gros Michel resultar susceptible.
La accesión Musa acuminata 2 del jardín clonal del
Inivit mostró síntomas ligeros de clorosis de los bordes
de las hojas especialmente con el GCV 0128. Llegaron
al final del ensayo sin otros síntomas importantes en la
planta madre y el primer hijo.
Musa acuminata burmannicoides Calcutta 4 mostró alta
incidencia y severidad frente a la raza 1 (GCV 01210),
lo que concuerda con los informes de Stover (1962).
El clon Pisang Jari Buaya reflejó niveles intermedios a severos
de ataque frente a los GCV 0124 y 0128 pertenecientes
a la raza 2 GCV 0124, y ligeros frente a la raza 1. El
Yangambi Km 5 presentó susceptibilidad a todos los aislados
estudiados, en contraste con los resultados de estudios
conducidos en Queensland, donde fue resistente a la raza 1
[Ploetz y Pegg, 1999]. No se dispone de referencias del comportamiento
de este clon en otros lugares.
Los clones FHIA 04 y FHIA 02 no mostraron síntomas,
o solamente muy ligeros de clorosis respectivamente
frente al GCV 0124. El FHIA 02 ha resultado
susceptible a la raza 1 en estudios conducidos en otras
regiones [Ploetz y Pegg, 1999]. En una visita a la FHIA
se observó con el doctor Phil Rowe plantas afectadas
en ensayos conducidos en La Lima, en Honduras, durante
una visita en 1996; sin embargo, en condiciones
de producción en Cuba no ha mostrado síntomas de la
enfermedad en ninguna de las localidades del país.
El clon FHIA 03 mostró infecciones frente a todos los
GCV, pero mayor susceptibilidad a los aislados pertenecientes
al GCV 0124 (raza 2). Este resultado confirma
la susceptibilidad del clon al patógeno observadas
en diferentes regiones del país.
El clon FHIA 18 presentó síntomas de bordes de las
hojas cloróticos y plantas muertas con los aislados pertenecientes
al GCV 01210 (raza 1). Una planta de este
clon se encontró afectada previamente en una finca de
la localidad del Caney del Sitio, y no en el resto de las
áreas del país, a diferencia de lo que se observó con el
FHIA 3 en diferentes suelos.
Los resultados han mostrado la inconsistencia del actual
sistema de diferenciación de razas de Foc existente
hasta el momento. Los aislados de los GCV 0124 y 0128
se obtuvieron del clon Burro Criollo (ABB Bluggoe), y
en los experimentos fueron patogénicos al Bluggoe, pero
no al Gros Michel, y por tanto debe considerarse como
raza 2. La diferencia de reacción del clon Pelipita, PJB
y Paka contra los GCV 0124 y 0128 apoyan el criterio
de que ambos aislados, supuestamente de la misma
raza, difieren en patogenicidad a algunos clones. Estos
resultados y las diferencias de reacción observadas de
algunos clones en diferentes países, aparentemente contra
la misma raza, son una expresión de las limitaciones
del actual sistema de clasificación de razas y de la
necesidad de lograr un mejor conocimiento de la especialización
patogénica como ya se ha mencionado por
Stover y Buddenhaguen (1986). Esto requiere la coordinación
de esfuerzos a nivel internacional para poder
obtener una comprensión más cabal de la especialización
fitopatogénica de Foc y su repercusión práctica.
Hasta tanto, la mejor herramienta para clasificar las
poblaciones de Foc son los GCV.
Por otro lado, se requiere lograr una mejor comprensión
de los mecanismos de defensa que operan frente a
la infección por Foc, y cómo las condiciones edáficas y
de cultivo los afectan. Clones como el Manzano, Gros
Michel, Pisang Awak, etc., son afectados en Cuba tanto
en suelos ferralíticos como pardos calcáreos arcillosos,
lo que pone de manifiesto su susceptibilidad. Otros
clones muestran síntomas solo en condiciones de suelos
pesados con una tabla de agua alta, como ocurre en las
plantaciones cercanas a las riberas de los ríos Contramaestre,
Sagua y Mayarí. En estas zonas los clones
Cavendish y los plátanos AAB no se afectan, pero los
de Burro CEMSA, FHIA 03 muestran síntomas de la
enfermedad. Para estas zonas, donde los suelos son muy
conducibles a la enfermedad, se requiere adoptar medidas
de manejo integrado tanto culturales –que haga
desfavorable el ambiente al desarrollo del patógeno y
disminuyan la población en el suelo y su diseminación–
como de uso de antagonistas.
fitosanidad/241

Pérez y otros
El método de reproducción del patógeno sobre granos
de S. vulgare permitió una inoculación eficiente para
los ensayos de campo. La reproducción es relativamente
simple y barata, y no requiere de condiciones
sofisticadas. La adopción de este sistema de inoculación
en las evaluaciones de la reacción de los clones permitiría
hacer comparables los ensayos de diferentes localidades,
y reducir las diferencias de reacción de los
clones impuestos por las condiciones ambientales, de
disponibilidad de inóculo en el suelo y la patogenicidad
de los aislamientos.
CONCLUSIONES
• Los clones FHIA 02 y FHIA 04 no mostraron síntomas
en el ensayo con ninguno de los aislados probados.
• El clon FHIA 03 mostró una susceptibilidad ligera a
la raza 1 (GCV 01210) y de moderada a intensa a la
raza 2 (CVG 0124 y 0128).
• El FHIA 18 es ligeramente afectado por la raza 1
(GCV 01210) y raza 2 (0128) en condiciones de suelos
favorables al desarrollo de la enfermedad.
• La actual clasificación de razas de Foc es incompleta.
Solo permite agrupar los aislados como patogénicos
o no a Gros Michel y Manzano, Burro Criollo o los
Cavendish; requiere de investigaciones posteriores y
colaboración internacional para lograr una mejor
comprensión de la patogenicidad de Foc. Hasta tanto,
el mejor sistema para tipificar las poblaciones
del patógeno son los GCV.
• El sistema de reproducción e inoculación con la utilización
de granos de sorgo con Foc mostró ser eficiente
como método para la prueba de la reacción de los
clones de Musa. La distribución en el suelo del patógeno
es más uniforme, evita disminuir escapes a la
enfermedad y permite controlar la raza y el GCV
con que se trabaja
Agracedimiento
El presente trabajo de investigación fue parcialmente
financiado por Inibap (Bioversity International)
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242/fitosanidad

FITOSANIDAD vol. 13, no. 4, diciembre 2009
PERONOSPORA HYOSCYAMI F. SP. TABACINA. VARIABILIDAD
DE LAS POBLACIONES EN CUBA (I)
Berta Lina Muiño García 1 y Yordanka González Guardiola 2
1
Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudad
de La Habana, CP 11600, bertam@inisav.cu
2
Instituto de Investigaciones del Tabaco. Carretera El Tumbadero Km 8½, San Antonio de los Baños,
La Habana
RESUMEN
Se evaluó la capacidad germinativa del hongo Peronospora hyoscyami
f. sp. tabacina, el período de incubación y latencia, la capacidad
esporulativa e infectiva y el área esporulada en diferentes variedades
de tabaco sensibles y resistentes a la enfermedad por el método de
discos de hojas flotantes. Los aislamientos procedentes de Holguín,
Ciego de Ávila, Pinar del Río, Cienfuegos y La Habana mostraron la
capacidad germinativa más elevada. Se observó variabilidad entre
los aislamientos por la presencia de períodos de incubación y latencia
cortos, como el procedente de Ciego de Ávila y un aislamiento de la
provincia de La Habana con períodos de cinco días, área esporulada
y capacidad infectiva del 100% y una elevada capacidad esporulativa
incluso en variedades resistentes a la enfermedad. Les siguieron los
aislamientos de Pinar del Río y algunos de La Habana con períodos
de incubación y latencia de seis y siete días, al igual que el área
esporulada y capacidad esporulativa en las variedades susceptibles
y resistentes a la enfermedad. El aislamiento de Matanzas y uno de
La Habana mostraron baja agresividad con los períodos de incubación
y latencia más largos (ocho y diez días), menor capacidad infectiva,
esporulativa y área esporulada en variedades resistentes a la enfermedad.
El aislamiento de Holguín mostró agresividad baja en las
variedades resistentes a la enfermedad, con períodos de latencia e
incubación largos (ocho y diez días) y baja capacidad esporulativa,
infectiva y área esporulada en variedades resistentes, no así en las
susceptibles, donde fue más agresivo.
Palabras claves: variabilidad, Peronospora hyocyami f. sp. tabacina,
tabaco
ABSTRACT
The germination capability of Peronospora hyoscyami f. sp. tabacina
was assessed along the incubation period and latency. Sporulation
and infective capability and the sporulated area on different blue mold
sensitive and resistant tobacco varieties were also assessed by
floating leaf discs method. Isolates originated from the provinces of
Holguín, Ciego de Ávila, Pinar del Rio, Cienfuegos and La Habana
showed the highest germination capability. A significant variability
was observed among the different isolates, which was particularly
evident due to the occurrence of short incubation and latency periods;
specially in the isolates obtained from Ciego de Ávila and one specific
isolate obtained from La Habana with a five days period, 100%
sporulated area and infective capability, and a high sporulation
capability even on blue mold resistant varieties. Isolates from Pinar
del Río and some others obtained from La Habana were the following
ones with incubation and latency periods of six and seven days, and
sporulated area and sporulation capability on blue mold susceptible
and resistant varieties. The isolate obtained from Matanzas and one
from La Habana were less aggressive, with incubation and latency
periods of eight and ten days. A lower infective and sporulation capability
and sporulated area was also registered for these isolates on blue
mold resistant varieties. The Holguin isolate showed a low
aggressiveness on the blue mold resistant varieties, with latency and
incubation periods of eight and ten days, a low infective and sporulative
capability and also a low sporulation and infective capability and
sporulation area on resistant varieties although it was much more
aggressive on the susceptible ones.
Key words: variability, Peronospora hyocyami f. sp. tabacina, tobacco
INTRODUCCIÓN
En los últimos años se han intensificado considerablemente
las áreas de plantaciones de tabaco, en las que la
introducción de nuevas variedades con diferentes grados
de resistencia al moho azul constituye una de las principales
medidas para el control de la enfermedad. Este
carácter prevalece en especies del género Nicotiana nativas
de Australia. En estas especies silvestres hay un alto
nivel de resistencia, que se reduce después de transferida
a Nicotiana tabacum, mientras que Nicotiana debneyi
constituye la principal fuente de resistencia en muchos
países de Europa, en Australia y Estados Unidos, y esta
propiedad frente a P. hyoscyami f. sp. tabacina reside en
ocho cromosomas [Rufty y Main, 1989; FAO, 2002].
Otras especies con resistencia al hongo son N. goodspeedii,
N. megalosiphon, N. rosulata [Knotop et al.,
1979], N. marirtima [Dorossiev et al., 1978], N. velutina,
N. excelsior [Gillham et al., 1977], N exigua [Manolov,
1980], N. otophora [Gajos, 1979], a partir de las que se
han obtenido variedades y líneas con diferentes grados
de resistencia.
fitosanidad/243

Muiño y González
En Cuba se han desarrollado diversas variedades de
tabaco con estas características, entre las que se destacan
Habana 92, Habana 2000, Habana Vuelta Arriba
[Espino et al.,1999], así como SS 96, Criollo 98, Corojo 99,
Habana PR, Corojo Especial, Cabaiguán 7, San Juan 1,
BH-13 [García et al., 1997]; BR-26, Virginia Resistente,
Virginia San Luis 40, Virginia Iso, destinadas a la
producción del tabaco con diversos fines en la cadena
productiva.
El presente trabajo persiguió como objetivo determinar
la variabilidad de las poblaciones de P. h y o s -
cyami f. sp. tabacina a partir de la cuantificación de
la capacidad germinativa de los esporangios, períodos
de incubación y latencia, la capacidad esporulativa
e infectiva y el área esporulada en 13 aislamientos
del patógeno, obtenidos de áreas de tabaco
de diferentes regiones del país, respecto a diferentes
variedades del cultivo resistentes y susceptibles a la
enfermedad.
MATERIALES Y MÉTODOS
Durante las campañas de tabaco 2001-2002 y 2002-2003
se realizaron muestreos en las provincias de Pinar del
Río, La Habana, Matanzas, Cienfuegos, Ciego de Ávila
y Holguín. Una vez que apareció el primer foco de moho
azul se colectaron al azar hojas con lesiones y
esporulaciones activas del hongo por cada foco de la
enfermedad. Se colocaron envés con envés en una bolsa
de nailon transparente, con papel de filtro previamente
humedecido para mantener altos niveles de humedad
relativa, se selló e identificó su procedencia y se trasladaron
al laboratorio.
El inóculo se preparó a partir de esporulaciones activas del
hongo en hojas, con un pincel se colectaron los esporangios y
se preparó la suspensión en agua destilada estéril. La concentración
se ajustó entre 1-5 x 10 4 esp · mL –1 mediante conteo
en la cámara de Neubauer.
Para la conservación de los aislamientos se utilizaron
plántulas de la variedad Corojo Tradicional obtenidas
a partir del cultivo de los semilleros en el laboratorio.
Una vez que las pequeñas plántulas alcanzaron 2 cm
de altura, alrededor de los 15-20 días de sembradas se
trasplantaron a pequeños potes plásticos de 7 x 7 x 10 cm,
previamente preparados con suelo estéril. Se sembraron
dos plantas por pote, se mantuvieron bajo régimen
de luz y oscuridad de 12:12 h sin exceso de humedad
hasta que alcanzaron la fase de cuatro a cinco
hojas, en la cual se realizó la inoculación de las plantas,
para lo que se depositaron de tres a cuatro gotas
de 10 µL de la suspensión en cada una de las hojas,
además de los aislamientos conservarse en pequeñas
hojas tomadas directamente de los semilleros, las cuales
se hicieron flotar en 12 mL de agua destilada estéril
en placas de Petri de 10 cm de diámetro. En cada
hoja se depositaron 10 µL de la suspensión de esporangios.
Después de la inoculación las placas se incubaron
bajo oscuridad completa durante cuatro
horas en un cubículo climatizado, a temperatura de
entre 16 y 18°C durante la noche, entre 20 y 22°C
durante el día, y una proporción de luz-oscuridad de
12:12 h con intensidad 4500 lux y humedad relativa
por encima del 95%.
La variedad de tabaco Corojo Tradicional se tomó como
referencia por ser susceptible a la enfermedad, respecto
a plántulas de tabaco de variedades comerciales susceptibles
y resistentes. Los semilleros de cada una de
las variedades en estudio se prepararon de acuerdo a
como se describió anteriormente.
Para evaluar la capacidad germinativa se depositaron
10 µL de la suspensión de esporangios a la concentración
de 5 x 10 4 esp · mL –1 en un portaobjetos excavado,
y se cuantificó el número de esporangios germinados a
las cuatro horas. El conteo se realizó al azar en 100
esporangios y se determinó el porcentaje de los germinados
con respecto al total evaluados.
Los indicadores fenotípicos se midieron mediante la
inoculación de las variedades de 35 a 40 días de sembradas,
con los aislamientos en estudio. Se empleó el
método de discos de hojas descrito por Muiño (1990),
el cual fue modificado. Se depositaron 7 mL de agua
destilada estéril en placas de Petri de 7 cm de diámetro,
y se hicieron flotar cinco discos de hojas de 12 mm
de diámetro en el agua, para un total de 10 discos en
dos placas por variante. Cada disco se consideró como
una réplica en todos los experimentos, y para la inoculación
se depositó una gota de 10 µL de la suspensión
en cada uno.
En las primeras cuatro horas después de la inoculación
todos los ensayos se incubaron bajo oscuridad
completa, en un cubículo climatizado a temperatura
entre 16 y 18°C durante la noche, y entre 20
y 22°C durante el día; posteriormente se mantuvieron
bajo régimen de luz-oscuridad de 12:12 h con
intensidad de 4500 lux y humedad relativa por encima
del 95%.
244/fitosanidad

Peronospora hyoscyami f. sp. tabacina. Variabilidad... (I)
El período de incubación se determinó por la
cuantificación del número de días desde la inoculación
hasta la aparición de las primeras lesiones cloróticas
antes de la esporulación, mientras que el período de
latencia se evaluó por el conteo del número de días
desde la inoculación hasta la detección de las primeras
esporulaciones a través del microscopio estereoscopio.
El área del disco esporulada se determinó mediante el
porciento que ocupaba la esporulación en el disco a los
siete y diez días de inoculados, en cada variedad, para
cada uno de los aislamientos. La capacidad esporulativa
de los aislamientos en cada variedad se evaluó a los 12
días de inoculados los discos. Los discos esporulados se
sumergieron en 0,5 mL de agua destilada estéril, y con
ayuda del pincel se recogió toda la esporulación y se
realizó el conteo en la cámara de Neubauer para cuatro
réplicas.
La evaluación de la capacidad infectiva se realizó mediante
la cuantificación del número de discos con presencia
de esporulaciones, respecto al total de discos inoculados,
y se calculó el porciento para cada aislamiento
en cada una de las variedades.
Los datos obtenidos se procesaron estadísticamente
mediante análisis de varianza simple con test de significación
de Newman Keuls al 5% de probabilidad,
con previa transformación de los datos a arcsen x
[Dagnelie, 1984]. Para el análisis de agrupamiento
se codificaron los datos obtenidos para cada uno de
los componentes fenotípicos, se construyó la matriz
básica de datos y se procesaron a través del programa
estadístico Minitab para Windows versión 11.2
de 1996.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Se obtuvieron trece aislamientos (Tabla 1), siete de
La Habana, dos de Pinar del Río, uno de Matanzas,
uno de Cienfuegos, uno de Ciego de Ávila y uno de
Holguín.
Tabla 1. Descripción de los aislamientos de P. hyoscyami f. sp. tabacina obtenidos
Cepa
Procedencia
Fecha
de aparición
Variedad
H 01 CCS Camilo Cienfuegos 7/12/00 Habana 92
C 02 CCS Lázaro Peña 13/12/01 Habana 92
M02 CCS Pedro Betancourt 15/12/01 Criollo 98
LP 02 Empresa tabacalera Lázaro Peña 6/12/01 Habana 92
S02 La Sabana 8/12/01 Criollo 98
LP 0301 Empresa tabacalera Lázaro Peña UBPC La Reserva 3/12/02 Criollo 98
LP0302 Empresa tabacalera Lázaro Peña UBPC La Reserva 5/12/02 Habana 92
LP 0303 Empresa tabacalera Lázaro Peña Las Marías 6/12/02 Criollo 98
LP 0304 UBPC Ubaldo Díaz 13/12/02 Criollo 98
LP 0305 UBPC S. Pombill 16/12/02 Criollo 98
PR0301 CCS Carlos Marx 30/12/02 Criollo 98
PR0302 CCS 26 de Julio 8/1/03 Criollo 98
CA0301 CCS A. Guiteras 12/2/03 H 92
Los parámetros fenotípicos se estudiaron en ocho variedades
de tabaco con diferentes grados de resistencia
a la enfermedad, las cuales se describen en la Tabla 2.
A las cuatro horas los aislamientos que tuvieron la menor
capacidad germinativa fueron M02, LP0302 y LP02,
un segundo grupo de aislamientos con valores intermedios
(H01, C02, S02, LP02, LP0301, LP0303, LP0304,
LP0305, PR0301, PR0302 CA0301, LP0305, PR0301,
PR0302), y el valor más alto correspondió al aislamiento
CA0302 (Fig. 1).
fitosanidad/245

Muiño y González
Tabla 2. Características de las variedades de tabaco utilizadas en el estudio
Variedad
Habana 92
Habana 2000
Habana Vuelta
Arriba
Burley Habana 13
Corojo Tradicional
Criollo Tradicional
Genotipos empleados
en la selección de la variedad
Corojo
Tradicional x Variedad Polaca
R x T
Corojo Tradicional x Habana
2.1.2
Corojo Tradicional x Variedad
Australiana GA-955
Kentucky 17 x Burley Habana
11
Criollo
Selección en una población
heterogénea
Resistente
Resistente
Resistente
Categoría
Moderadamente
resistente
Susceptible al moho
azul
Susceptible al moho
azul
Criollo 98 Habana 92 x Habana PR Resistente
Corojo 99 Habana 92 x Habana PR Resistente
Sistemas de producción
de tabaco
Cultivo al sol y recolección
en hojas o mancuernas
Cultivo bajo tela, sol
ensartado y en
determinadas condiciones
al sol en palo
Cultivos al sol ensartado y
sol en palo
Destinado a las zonas de
Pinar del Río
Cultivo bajo tela para
producción en capa
Cultivo bajo tela, sol
ensartado y al sol en palo
Cultivo bajo tela y al sol
ensartado
–
Figura 1. Capacidad germinativa de los aislamientos a las cuatro horas.
Los resultados muestran valores que oscilan entre el 30
y el 46% de capacidad germinativa, al tercer día después
de haberse observado las primeras esporulaciones
visibles en las hojas de tabaco. Zheng et al. (1998) plantean
que la capacidad germinativa de los esporangios
del hongo se encuentra estrechamente relacionada con
el tiempo de la esporulación, y que en esporangios con
dos días de evidenciada la presencia de esporulaciones
visibles presentan valores de germinación del 80%; al
tercer día comienza a disminuir y los valores alcanzan
entre el 40 y el 30%, los cuales muestran valores similares
a los obtenidos en estos resultados.
Respecto al período de incubación, la presencia de
los primeros síntomas de la enfermedad, caracterizado
por el cambio de coloración en los discos de las
hojas, varió entre una y otra variedad, y entre los
aislamientos. Generalmente estos síntomas se presentaron
antes de la presencia de la esporulación del
hongo, es decir, el cambio de coloración de un verde
intenso a un verde más claro. En la mayoría de los
discos se observó el día antes de la esporulación, aunque
hubo donde se observaban pequeñas esporulaciones;
sin embargo, el cambio de coloración apenas
se podía distinguir.
246/fitosanidad

Peronospora hyoscyami f. sp. tabacina. Variabilidad... (I)
Los aislamientos LP0305 y CA0301 presentaron los
períodos de incubación más cortos en discos de variedades
de tabaco susceptible y resistente a la enfermedad,
seguidos por los procedentes de Pinar del Río y el
aislamiento LP0303. Un grupo de aislamientos se caracterizó
por presentar períodos de incubación intermedios
de siete y ocho días, entre los que se encuentran
LP02, SO2, LP0301, mientras que los aislamientos M02
y LP0302 mostraron los períodos de incubación más
largos (Tabla 3). El aislamiento H01 mostró períodos
de incubación cortos en las variedades susceptibles, no
así en las resistentes a la enfermedad, donde se presentaron
períodos de incubación más largos de nueve y
diez días.
Tabla 3. Período de incubación (días) de los aislamientos de P. hyoscyami f. sp. tabacina en cada una
de las variedades
Variedades
Corojo
tradicional
Criollo
tradicional
Aislamientos
H01 C02 M02 S02 LP02 LP0301 LP0302 LP0303 LP0304 LP0305 PR0301 PR0302 CA0301
6 7 7 6 6 9 6 6 5 6 6 5 6
6 7 8 6 7 6 10 6 6 5 6 6 5
BH13 10 7 10 6 7 6 10 6 6 5 6 6 6
H92 6 9 9 6 7 7 6 6 7 5 6 5 5
Hab. VA 9 6 7 6 6 9 0 6 7 6 6 6 5
H2000 10 5 7 7 6 6 9 6 5 5 6 6 5
Criollo 98 10 6 8 10 7 6 6 6 6 6 6 6 6
Corojo 99 10 6 10 10 6 6 7 6 6 5 6 6 6
Resalta el aislamiento de Cienfuegos (CO2) con un comportamiento
diferenciado frente a los discos de la variedad
de tabaco Habana 2000, que mostró un período
de incubación de cinco días; sobresale este comportamiento
del resto de los aislamientos obtenidos en la
primera campaña en esta variedad de tabaco, además
de que evidencias prácticas en las áreas de producción
confirman la presencia de afectaciones de tipo sistémicas
del hongo en condiciones de campo en plantaciones de
la variedad de tabaco negro Habana 2000.
Para el período de latencia existe un comportamiento
similar a lo observado respecto al período de incubación.
Los aislamientos LP0305 y CA0301 presentaron
los períodos de latencias más cortos respecto al
resto de los aislamientos en todas las variedades que
se evaluaron. Los valores intermedios de períodos de
latencias correspondieron a los aislamientos CO2,
LP02, LP0301, LP0303, LP0304 y los procedentes de
Pinar del Río (Tabla 1), con valores de siete días. El
procedente de Matanzas presentó un período de
latencia de ocho días, y el más largo fue para el aislamiento
LP0302 (Tabla 4).
Es importante destacar que existe una marcada variabilidad
entre los aislamientos respecto a estos dos
parámetros, y es de notar los períodos de incubación y
de latencia más cortos en aislamientos procedentes de
las zonas tabacaleras de las provincias de La Habana y
Ciego de Ávila. También es necesario señalar que los
aislamientos procedentes de la provincia de Pinar del
Río mostraron cortos períodos de incubación y latencia.
No obstante, se presentó un diverso comportamiento
en aislamientos de la provincia de La Habana con períodos
de incubación y latencias cortos y largos
(LP0302), por lo que es importante el hecho de que en
una misma zona geográfica exista variabilidad en este
parámetro.
En cuanto al área del disco esporulada, todos los aislamientos
procedentes de la segunda campaña de estudio
(LP0301, LP0302, LP0303, LP0304, LP0305, PR0301,
PR0302 y CA0301) tuvieron los valores más altos de
área esporulada en todos los discos evaluados, en cada
una de las variedades resistentes a la enfermedad. En
las variedades susceptibles, excepto los aislamientos SO2
y LP02 que tuvieron valores inferiores al 50% del área
fitosanidad/247

Muiño y González
esporulada en la variedad Criollo Tradicional, el resto
de los aislamientos superó el 50% de esporulación al
igual que los aislamientos H01 y el CO2 procedentes de
la primera campaña (Tablas 5 y 6).
Tabla 4. Período de latencia (días) de los aislamientos de P. hyoscyami f. sp. tabacina en cada una
de las variedades
Aislamientos
Variedades
H01 C02 M02 S02 LP02 LP0301 LP0302 LP0303 LP0304 LP0305 PR0301 PR0302 CA0301
Corojo
tradicional
6 7 8 7 7 7 9 7 7 6 7 7 6
Criollo
tradicional
7 7 8 7 7 7 10 7 7 6 7 7 6
BH13 10 8 10 7 7 7 10 7 7 6 7 7 7
H92 7 10 10 7 7 8 7 7 8 6 7 7 6
Hab. VA 10 7 8 7 7 9 0 7 8 6 7 7 6
H2000 10 5 8 7 7 7 9 7 7 6 7 7 6
Criollo 98 10 7 8 7 10 7 7 7 7 7 7 7 7
Corojo 99 10 7 10 7 10 7 8 7 7 6 7 7 7
Tabla 5. Promedio del área de disco esporulada (%) a los siete días
Variedades
Aislamientos Corojo Criollo
trad. trad.
BH13 H92 Hab. VA H2000 Criollo 98 Corojo 99
H01 30,3b 17,5bc 0a 0,62a 0a 0a 0a 0a
C02 32,5b 6,56ab 0a 0a 35cd 12,2abc 0,3ab 0,94a 0a
M02 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0a 0,6a
S02 0,62a 10ab 2,5a 5,62ab 20bc 5ab 0,3ab 0a
LP02 50b 10,94ab 26,24ab 22,9bc 15,6ab 13,12abc 0a 10ab
LP0301 25b 50de 0a 0a 0a 7,84abc 28,8c 0a
LP0302 0a 0a 0a 30,64cd 0a 0a 30,6c 13,4ab
LP0303 55,3b 18,2bc 13,1ab 5,94ab 10,3ab 21,26bc 1,56ab 15,3ab
LP0304 3,1a 21,7bc 17,5ab 0a 0a 27,1cd 0,6ab 76,9d
LP0305 76,9d 71,9e 58,8c 33,44cd 27,1bcd 52,82e 15,9abc 25,6bc
PR0301 27,5b 35cd 4,7a 50,6cd 40,3d 13,4ab 22,2ac 24,4bc
PR0302 29,4b 77,48cd 29,7b 47,18cd 42,8d 9,39abc 35,2c 35c
CA0301 66,56d 62,82de 13,76ab 61,3e 40,3d 51,26de 59,2d 35c
CV (%) 14,4 13,4 18,8 15,6 16,6 15,2 16,5 16,5
248/fitosanidad

Peronospora hyoscyami f. sp. tabacina. Variabilidad... (I)
Tabla 6. Promedio del área de disco esporulada (%) a los 10 días
Aislamientos
Corojo
Trad.
Criollo
Trad.
Variedades
BH13 H92 Hab. VA H2000 Criollo 98 Corojo 99
H01 100c 100c 5a 5a 5a 0,32a 3,76a 3,4ab
C02 91c 100c 63cd 4,4a 75,32cd 100d 10a 15,7ab
M02 90,3c 62,84c 3,12a 8,12a 35,32ab 60,9c 20,3a 20,3a
S02 55a 25a 25ab 14,4a 48,62bc 28,62b 25ab 10,62b
LP02 100c 45,3ab 41,24bc 70b 35,62ab 55,3c 10,3a 10ab
LP0301 100c 100c 55cd 82,5b 55bc 100d 100e 100c
LP0302 85b 100c 0,62a 95b 0a 20ab 90de 95c
LP0303 100c 50,64ab 80,32de 68,92b 80,32cd 100d 60,32cd 100c
LP0304 100c 100c 100e 70,6b 100d 100d 55bc 100c
LP0305 100c 100c 100e 90,32b 100d 100d 71,56cde 100c
PR0301 100c 100c 100e 100b 100d 100d 100e 100c
PR0302 100c 100c 100e 100b 100d 100d 100e 100c
CA0301 100 100 100e 100b 100d 100d 100e 100c
CV (%) 5,72 8,84 7,82 8,90 5,46 9,78 9,90 8,84
Es de importancia también la correspondencia que existe
entre los parámetros de variabilidad fenotípicos anteriores
con los aislamientos procedentes de Pinar del
Río, Ciego de Ávila y La Habana, los cuales mostraron
un valor alto del área de disco esporulada a los siete y
diez días, aislamientos que fueron obtenidos precisamente
en zonas de grandes áreas destinadas a la producción,
y donde se presentan severas afectaciones del
hongo en variedades supuestamente resistentes a la
enfermedad.
Tabla 7. Promedio de la capacidad esporulativa (x 10 5 ) de los aislamientos de P. hyoscyami f. sp tabacina respecto
a las variedades
Variedades
Aislamientos
Corojo
Trad.
Criollo
Trad.
BH13 H92 Hab. VA H2000 Criollo 98 Corojo 99
H01 2,96d 3,01f 0,02a 0,04a 0,08a 0,04a 0,21a 0,09a
C02 2,13b 3,42h 3,02fg 2,85f 2,75ef 4,14i 1,38bc 0,69a
M02 2,88d 1,52b 0,61ab 0,91b 2,04cd 2,67e 0,86b 0,57a
S02 2,99d 3,01ef 0,94b 1,27c 1,67bc 1,82d 0,87b 0,47a
LP02 2,08b 2,16c 2,19cd 1,98d 1,19b 1,67cd 0,85ab 0,49a
LP0301 2,57c 2,75d 3,18g 2,95fg 2,00cd 1,61c 1,44bc 2,67bcd
LP0302 1,48a 1,17a 0,08a 2,54e 0,00a 0,89b 2,26d 2,82cd
LP0303 2,82d 3,09fg 2,58cdefg 1,26c 2,23cde 2,76ef 1,86cd 2,13b
LP0304 2,94d 3,15g 2,02c 1,16c 2,92f 3,48h 2,13d 2,38bc
LP0305 2,89d 2,82d 2,69defg 2,54e 2,43def 3,00g 2,32d 2,05b
PR0301 3,55f 3,90j 2,42cdef 2,99g 2,30cdef 3,41h 3,11e 3,30d
PR0302 3,70f 3,77i 2,27cde 3,56h 2,62def 3,54h 3,25e 2,99cd
CA0301 3,19e 2,88de 2,84efg 2,46e 2,58def 2,93fg 2,99e 2,95cd
CV (%) 8,57 6,60 9,54 9,72 6,78 967 9,15 8,73
fitosanidad/249

Muiño y González
Hubo una alta capacidad esporulativa en la variedad
susceptible Corojo Tradicional. Se destacan los aislamientos
procedentes de Pinar del Río, Ciego de Ávila y LP0305.
Es interesante en este parámetro el comportamiento del
aislamiento de Cienfuegos con valores que llegaron a alcanzar
4,14 x 10 5 esp/cm 2 en la variedad Habana 2000;
sin embargo, esta combinación aislamiento-variedad
presentó períodos de incubación y latencia cortos, y
mayor área de disco esporulada a los siete y diez días.
Por otra parte, todos los aislamientos presentaron
una capacidad infectiva alta en los discos de las variedades
susceptibles Corojo Tradicional y Criollo
Tradicional (Tabla 8). Los aislamientos LP0301,
LP0303, LP0304, LP0305, PR0301, PR0302 y
CA0301 alcanzaron el 100% en los discos de las variedades
resistentes, a diferencia del aislamiento
LP0302, que presentó baja capacidad infectiva en los
discos de las variedades BH13 y Hab 2000, y no infectó
los discos de la variedad Hab. VA. El aislamiento
procedente de Holguín mostró una baja infectividad
frente a los discos de las variedades resistentes
a la enfermedad.
Tabla 8. Capacidad infectiva de los aislamientos de P. hyoscyami f. sp. tabacina en cada una de las variedades
Variedades
Aislamientos
H01 C02 M02 S02 LP02 LP0301 LP0302 LP0303 LP0304 LP0305 PR0301 PR0302 CA0301
Corojo
tradicional
100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
Criollo
tradicional
100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
BH13 20 80 40 60 60 100 20 100 100 100 100 100 100
H92 20 100 60 100 80 100 100 100 100 100 100 100 100
Hab. VA 20 100 60 100 40 100 0 100 100 100 100 100 100
H2000 20 100 100 80 60 100 40 100 100 100 100 100 100
Criollo 98 80 20 100 20 40 100 100 80 100 100 100 100 100
Corojo 99 60 40 80 20 20 100 100 100 100 100 100 100 100
El carácter área de disco esporulada permitió separar
los aislamientos en dos grandes grupos (Fig. 2). En un
primer grupo se encuentran los aislamientos LP0301,
LP0303, LP0304, LP0305, PR0301, PR0302 y CA0301,
y en un segundo los aislamientos H01, C02, M02, LP02,
S02, y el aislamiento más alejado LP0302.
Dentro del primer gran grupo se encuentra en un
subgrupo los aislamientos PR0301, PR0302, CA0301y
LP0305, que fueron los más agresivos, los que mostraron
los períodos de incubación y latencia más cortos, y
presentaron mayores áreas de disco esporulada y las
capacidades esporulativas e infectivas más altas. En la
zona de Pinar del Río, en la década de los noventa hasta
la fecha, se han presentado epidemias severas de la
enfermedad, lo que puede estar dado por la presencia
de aislamientos agresivos, dado que es una zona donde
se cultiva tabaco de forma intensiva. Sobresale también
el aislamiento de Ciego de Ávila, aislado de variedades
resistentes en condiciones desfavorables para el
desarrollo de la enfermedad, y que muestra gran agresividad
en todos los parámetros evaluados. Bajo condiciones
favorables a la enfermedad, la presencia de
aislamientos con estas características puede ocasionar
grandes epidemias en la región donde se presenta.
Finalmente, el aislamiento LP0305 de La Habana tuvo
características similares al procedente de Ciego de
Ávila.
En el segundo subgrupo se encuentran los aislamientos
que mostraron períodos de incubación, latencia y capacidades
esporulativas e infectivas intermedias, y
menos agresivos a los aislamientos que se encuentran
en el primer grupo.
El aislamiento más alejado en el análisis de agrupamiento
es el LP0302, que presentó los períodos de
incubación y latencia más largos, las capacidades
esporulativas e infectivas más bajas de todos, y por
tanto el menos agresivo (Fig. 2).
250/fitosanidad

Peronospora hyoscyami f. sp. tabacina. Variabilidad... (I)
Figura 2. Análisis de agrupamiento de los aislamientos de P. hyoscyami f. sp. tabacina.
Por primera vez en Cuba se evidencia la variabilidad de
aislamientos de P. hyoscyami f. sp. tabacina referente a
parámetros fenotípicos. A nivel mundial pocos estudios
se relacionan con la variabilidad fenotípica del patógeno,
principalmente por el hecho de ser un parásito
obligado, difícil de conservar en condiciones de laboratorio;
sin embargo, las investigaciones recientes apuntan
hacia el estudio de la variabilidad genética en las
poblaciones del hongo, en aislamientos sensibles y resistentes
a fungicidas, los cuales muestran variabilidad
en su comportamiento. La aplicación de los marcadores
moleculares como RADP demostró la existencia
de variabilidad genotípica en aislamientos procedentes
de diferentes regiones [Wiglesworth et al., 1994;
Wiglesworth, 1994]. En Estados Unidos se han utilizado
marcadores moleculares no solo para la identificación
precoz del hongo, sino para el estudio de la variabilidad
de las poblaciones [Sukno et al., 2002a; 2002b;
Ristaino et al., 2007]. Estudios realizados por el grupo
de moho azul de Coresta confirman la presencia de dos
genotipos genéticamente diferentes y que difieren además
respecto a la sensibilidad a los fungicidas [Zipper
et al., 2007; Spring et al., 2007]. En Cuba se han encaminado
también estudios de la genética poblacional, a
partir de su interrelación con las respuestas desde el
punto de vista epidemiológico y fenotípicas de las poblaciones
de P. hyoscyami f. sp. tabacina como contribución
a la mejora de las estrategias de manejo de la
enfermedad.
CONCLUSIONES
• Se obtuvo un total de 13 aislamientos de P. hyoscyami
f. sp. tabacina, dos procedentes de la provincia
de Pinar del Río, siete de La Habana, uno de
Matanzas, Cienfuegos, Ciego de Ávila y Holguín.
• Los aislamientos de Pinar del Río, Ciego de Ávila y
dos de La Habana manifestaron los valores más altos
de capacidades germinativas.
• El aislamiento procedente de Ciego de Ávila y el
LP0305 de La Habana tuvieron los períodos de
incubación y latencia más cortos con cinco días, en
variedades susceptibles y resistentes a la enfermedad,
mientras que los períodos más largos los mostraron
el aislamiento de Matanzas y otro procedente
de La Habana.
• Los aislamientos de Pinar del Río, Ciego de Ávila,
Cienfuegos y tres procedentes de La Habana mostraron
las capacidades esporulativas e infectivas más
elevadas en las variedades resistentes a la enfermedad.
• Se demostró que existe variabilidad fenotípica en los
aislamientos estudiados, donde los más agresivos
proceden de las provincias de Pinar del Río, Ciego de
Ávila y La Habana.
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fitosanidad/251

Muiño y González
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252/fitosanidad

FITOSANIDAD vol. 13, no. 4, diciembre 2009
PERONOSPORA HYOSCYAMI F. SP. TABACINA. VARIABILIDAD
MORFOLÓGICA EN ESPORANGIOS DE AISLADOS (II)
Berta Lina Muiño García 1 y Yordanka González Guardiola 2
1
Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudad
de La Habana, CP 11600, bertam@inisav.cu
2
Instituto de Investigaciones del Tabaco. Carretera El Tumbadero Km 8½, San Antonio de los Baños,
La Habana
RESUMEN
El moho azul causado por Peronospora hyoscyami f. sp. tabacina,
constituye la enfermedad más devastadora para el tabaco en Cuba
por las cuantiosas pérdidas que ocasiona anualmente al cultivo. La
alta capacidad de adaptabilidad que tiene este hongo a las condiciones
ambientales, y las fuertes epidemias provocadas en condiciones
adversas al desarrollo de la enfermedad en Cuba, motivó el estudio
del comportamiento de diferentes aislamientos del hongo, obtenidos
de diversas regiones tabacaleras del país, a través de marcadores
fenotípicos. Durante las campañas de tabaco 2002-2003 y 2003-
2004 se realizó un estudio en condiciones de laboratorio para determinar
la variabilidad de P. hyoscyami f. sp. tabacina en Cuba, se
colectaron aislamientos de las regiones tabacaleras de las provincias
de Pinar del Río, La Habana y Matanzas en la zona occidental de
la isla, Cienfuegos y Ciego de Ávila en la región central, y Holguín en
la oriental. Se realizaron mediciones de los esporangios y se detectó
una marcada deformación, atípica a la especie, en los esporangios
de los aislamientos procedentes de las provincias de Pinar del Río,
La Habana, Cienfuegos y Ciego de Ávila.
Palabras claves: Peronospora hyoscyami f. sp. tabacina, variabilidad,
esporangios
ABSTRACT
Tobacco Blue mold which is caused by Peronospora hyoscyami f. sp.
tabacina is the most devastating tobacco crop disease in Cuba. This
is expressed by the huge losses that it causes annually to this crop.
The high adaptability to environmental conditions that shows this
fungus, and the strong outbreaks caused by it even under adverse
development conditions for the disease in Cuba, motivated behavioral
studies of different isolates of this microorganism, which were obtained
from several tobacco plantations located in different regions of the
country. Phenotypical markers were used as a baseline for this study.
A laboratory assay was conducted during the 2002-2003 and 2003-
2004 seasons in order to determine the variability of P. hyoscyami f.
sp tabacina in Cuba. Isolates were collected from tobacco growing
areas located in the provinces of Pinar del Río, La Habana and Matanzas
in western region of the island, Cienfuegos and Ciego de Ávila
in central region and Holguín in the eastern region. Sporangia were
measured for all the isolates and marked deformities were registered.
This deformity was significantly atypical in the isolates obtained from
Pinal del Río, La Habana, Cienfuegos and Ciego de Ávila.
Key words: Peronospora hyoscyami f. sp. tabacina, variability,
sporangia
INTRODUCCIÓN
En Cuba el cultivo del tabaco (Nicotiana tabacum L.)
tiene gran importancia no solo por su estrecha relación
con la cultura e identidad del país, sino porque constituye
una fuente de ingresos en divisas a partir del reconocimiento
internacional de los puros habanos.
Peronospora hyoscyami f. sp. tabacina es el agente causal
de la enfermedad del tabaco conocida como moho
azul. La aparición de fuertes epidemias es provocada
por el transporte de las estructuras infectivas a través
del viento, que se trasladan de una región a otra. El
hongo produce tanto esporangios como oosporas. Los
esporangios son hialinos en forma de limón (15 x 25 µm)
sostenidos en esporangióforos en forma de árbol,
ramificados (bifurcados) dicotómicamente y terminan
en ápices agudos y encurvados. Los esporangios
emergen a través de los estomas sobre el envés de las
hojas, en un gran número, son frágiles, de vida corta,
sensibles a la luz ultravioleta y cuando se liberan y
exponen directamente a los rayos del sol mueren
aproximadamente en una hora. Las oosporas de este
hongo se producen en el mesófilo de las partes muertas
de la planta infectada. Las oosporas maduras son
usualmente de color marrón rojizo de 20-60 µm de
diámetro [Main, 2002].
En el ciclo de vida de la enfermedad existen dos
subciclos, uno donde intervienen las esporas producidas
asexualmente y otro donde intervienen durante la
fase sexual del hongo [Main y Spurr, 1990].
fitosanidad/253

Muiño y González
El primero de los ciclos comienza cuando el esporangio
cae sobre la superficie de la hoja de tabaco y germina
en una película de agua. El tubo germinativo penetra
directamente y desarrolla hifas cenocíticas y haustorios
dentro del tejido. Cuando son estimulados por
humedad y temperatura los esporangióforos emergen
a través de los estomas, los esporangios sostenidos en
la estructura en forma de árbol se liberan y completan
el ciclo asexual. Los esporangios germinan en
un rango de temperatura de 2-30°C y el rango óptimo
para la germinación oscila desde 14 hasta 21°C.
Bajo condiciones favorables el ciclo asexual se completa
en 5-10 días después de comenzar la infección
[Fillers, 2004].
El ciclo sexual se inicia internamente en el tejido
del mesófilo de la hoja y también dentro del tejido
del tallo, se incrementan las estructuras gametangiales
anteridio y oogonio y ocurren los procesos
de meiosis, plasmogamia y cariogamia, lo cual
da lugar a numerosos eventos que involucran cambios
morfológicos, hasta finalmente obtener las
oosporas [Shiltz, 1981]. La oospora es una estructura
resistente de pared gruesa preparada para sobrevivir
frente a condiciones adversas. Cuando se
observan en el tejido aparecen en gran número, alrededor
de cien o más por centímetro cuadrado. En
condiciones idóneas el ciclo sexual se completa en
10-14 días [Main et al., 1997].
A partir de la aparición de frecuentes epidemias de la
enfermedad en la década de los noventa del pasado siglo,
se hizo necesario iniciar un estudio profundo del
comportamiento fenotípico de las poblaciones de P. hyoscyami
f. sp. tabacina, de acuerdo con la importancia
que tiene el estudio de la variabilidad del hongo como
punto decisivo en las estrategias de manejo de la enfermedad.
El presente trabajo persigue como objetivo realizar
estudios relacionados con la morfología de los
esporangios de este hongo.
MATERIALES Y MÉTODOS
Durante las campañas de tabaco 2001-2002 y 2002-
2003 se realizaron muestreos en diferentes zonas tabacaleras
del país, en las provincias de Pinar del Río,
La Habana, Matanzas, Cienfuegos, Ciego de Ávila y
Holguín, para obtener los diferentes aislamientos del
hongo P. hyoscyami f. sp. tabacina. Una vez que apareció
el primer foco de moho azul en las campañas, se
colectaron al azar hojas de tabaco con lesiones de la
enfermedad y esporulaciones activas del hongo por
cada foco existente de manera representativa. Se colocaron
envés con envés en una bolsa de nailon transparente,
con papel de filtro previamente humedecido
para mantener los niveles de humedad relativa, se selló
e identificó su procedencia y se trasladaron al laboratorio
del Instituto de Investigaciones de Sanidad
Vegetal.
El tamaño de los esporangios se determinó a partir de
mediciones a través del microscopio óptico con aumento
640X y regla micrométrica. Se tomaron mediciones
del largo y ancho de 100 esporangios al azar en campos.
Se calculó el promedio de tales mediciones y se tomaron
los mayores y menores valores de largo y ancho de
los esporangios.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Se obtuvieron trece aislamientos en las diferentes zonas
tabacaleras muestreadas, en diferentes variedades
de tabaco resistentes a la enfermedad (Tabla 1).
El mayor grupo de aislamientos (siete) perteneció a
la provincia de La Habana, y dos procedieron de Pinar
del Río, un aislamiento de Matanzas, uno de
Cienfuegos, uno de Ciego de Ávila y un aislamiento
de Holguín. Según la fecha de muestreo, un aislamiento
(Holguín) corresponde a la campaña 2000-
2001, el cual se tomó como referencia, cuatro aislamientos
a la 2001-2002 y ocho a la campaña
2002-2003 (Tabla 1).
En el estudio de los parámetros fenotípicos de variabilidad
entre los diferentes aislamientos se evidenció
la presencia de deformaciones en los esporangios
del hongo. Estas estructuras no presentaban la forma
típica de los esporangios de P. hyoscyami f. sp.
tabacina en forma de limón, sino que lo hicieron en
forma alargada con invaginaciones que subdividían
al esporangio y aparentaban la formación de uno
nuevo.
Los estudios hasta la fecha no han puesto de manifiesto
la existencia de estas deformaciones en los
esporangios del hongo, por lo que resulta novedosa la
presencia de este tipo de deformaciones, las que no solo
se presentaron en los esporangios procedentes de
Cienfuegos (Fig. 1), sino que también se evidenció su
presencia en aislamientos procedentes de La Habana
(Fig. 2).
254/fitosanidad

Tabla 1. Procedencia de los aislamientos
Cepa no.
Peronospora hyoscyami f. sp. tabacina. Variabilidad...(II)
Procedencia
Fecha
de aparición
Variedad
H 01 CCS Camilo Cienfuegos, Holguín 7/12/00 Habana 92
C 02 CCS Lázaro Peña, Cienfuegos 13/12/01 Habana 92
M02 CCS Pedro Betancourt, Matanzas 15/12/01 Criollo 98
LP 02 Empresa tabacalera Lázaro Peña, La Habana 6/12/01 Habana 92
S02 Instituto de Investigaciones del Tabaco, La Habana 8/12/01 Criollo 98
LP 0301 Empresa Lázaro Peña, UBPC La Reserva, La Habana 3/12/02 Criollo 98
LP0302 Empresa Lázaro Peña, UBPC La Reserva, La Habana 5/12/02 Habana 92
LP 0303 Empresa Lázaro Peña, Las Marías, La Habana 6/12/02 Criollo 98
LP 0304 Empresa Lázaro Peña, UBPC Ubaldo Díaz, La Habana 13/12/02 Criollo 98
LP 0305 Empresa Lázaro Peña, UBPC S. Pombill, La Habana 16/12/02 Criollo 98
PR0301 CCS Carlos Marx, Pinar del Río 30/12/02 Criollo 98
PR0302 CCS 26 de Julio, Pinar del Río 8/1/03 Criollo 98
CA0301 CCS A. Guiteras, Ciego de Ávila 12/2/03 Habana 92
Figura 1. Morfología de los esporangios del aislamiento procedente de Cienfuegos.
Figura 2. Morfología de los esporangios procedentes de La Habana.
El aislamiento procedente de Cienfuegos tuvo una elevada
incidencia de esporangios deformados (Fig. 3); sin
embargo, los correspondientes a la campaña 2002-2003
mostraron deformaciones, pero con menor incidencia.
fitosanidad/255

Muiño y González
Figura 3. Incidencia de esporangios deformados.
En el laboratorio, con la realización de pases sucesivos
del hongo para su ulterior conservación, se puso observar
que este carácter siempre se mantenía, aunque
con menor incidencia, lo que puso en evidencia que
estas deformaciones se expresan en las diferentes generaciones.
Los valores de longitud de los esporangios llegan a alcanzar
hasta 48 mm. En el caso del aislamiento de Cienfuegos,
este valor supera los informados para P. hyoscyami f. sp.
tabacina de 12-18 x 15-25 µm [Hall et al., 1997]; sin embargo,
los valores medios coinciden con los reportados por
Main y Spurr (1990), que son de 15 x 25 µm (Tabla 2).
Tabla 2. Tamaño de los esporangios en aislamientos de P. hyoscyami f. sp. tabacina
Tamaño de los esporangios. Media de 100 esporangios
Aislamiento
Ancho (µm)
Largo (µm)
Mínimo Máximo Media Mínimo Máximo Media
H 01 10 18,75 14,5 11,25 27,5 19,9
C02 10 18,75 14,5 11,25 48,75 22,95
M02 10 18,75 14,4 11,25 27,5 19,8
S02 10 18,75 14,3 11,25 27,5 19,7
LP02 10 18,75 14,5 11,25 27,5 19,8
LP0301 11,25 16,25 13,6 13,75 26,25 19,1
LP0202 8,75 17,5 14 10 30 21,5
LP0303 10 16,25 14 12,5 26,25 18,8
LP0304 10 18,75 14,2 15 26,25 19,6
LP0305 10 17,5 14,1 15 26,25 19,8
PR0301 8,75 18,75 14,1 15 30 20,5
PR0302 5 18,75 14,2 13,75 27,5 20,8
CA0301 11,25 17,5 14,1 12,5 25 20
Gómez estudió en 1983 las características morfológicas
de aislamientos de P. hyoscyami f. sp. tabacina en tres
provincias del país, y manifestó que existía identidad
entre los aislamientos. Los datos correspondientes a
las medidas de los esporangios y morfología coincidían
con lo reportado en la literatura internacional; no obstante,
en la actualidad estos estudios demuestran la
presencia de variabilidad en el tamaño de los esporangios
en los diferentes aislamientos con la presencia de deformaciones.
256/fitosanidad

Peronospora hyoscyami f. sp. tabacina. Variabilidad...(II)
CONCLUSIONES
• Se evidenció por primera vez la presencia de deformaciones
en los esporangios de los aislamientos procedentes
de Cienfuegos, Pinar del Río, Ciego de Ávila
y La Habana, atípicos a la especie, con forma alargada
e invaginaciones que subdividían al esporangio
y aparentaban la formación de uno nuevo.
REFERENCIAS
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Shiltz, P.: «Downy Mildew of Tobacco», The Downy Mildews, Academic
Press, Londres, 1981, pp. 557-559.
fitosanidad/257

FITOSANIDAD vol. 13, no. 4, diciembre 2009
Control biológico
EFICACIA DE TRICHODERMA HARZIANUM A34
EN EL BIOCONTROL DE FUSARIUM OXYSPORUM F. SP.
CUBENSE, AGENTE CAUSAL DE LA MARCHITEZ POR FUSARIUM
O MAL DE PANAMÁ DE LOS BANANOS EN CUBA
Luis Pérez Vicente, 1 Alicia Batlle Viera, 1 Julio Chacón Benazet 2 y Virgen Montenegro Moracén 3
1
Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudad
de La Habana, CP 11600, lperezvicente@sanidadvegetal.cu; lperezvicente@live.com
2
UBPC Caney del Sitio. Palma Soriano, Santiago de Cuba
3
Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal. Carretera Siboney Km 6, Ternerito Lindo, Santiago de Cuba
RESUMEN
El mal de Panamá, causado por Fusarium oxysporum f. sp. cubense
(Foc) es una de las enfermedades más nocivas de las musáceas. El
remplazo en Cuba de los clones resistentes Cavendish y los plátanos
(AAB) por clones FHIA, el Pisang Awak y el clon Burro CEMSA
(ABB) debido al impacto de la Sigatoka negra dio lugar a la
reemergencia de la enfermedad. Se estudió la eficacia de Trichoderma
harzianum aislado A34 en contenedores y campos de producción
previamente devastados por la enfermedad. El inóculo se reprodujo
en erlenmeyers con 20 g de arroz esterilizado y agua en una proporción
1:1 (v/p), y se inoculó con 2 mL de una suspensión de conidios
de cultivos puros de Foc. El antagonista se reprodujo en un sustrato
compuesto por una mezcla 2:1 (p/p) de residuos de arroz pulido con
cáscara de arroz, bagazo de caña y agua en proporción 2:1 (p/v). Los
tratamientos en campo se realizaron en plantaciones de El Sitio,
Palma Soriano. Las áreas tratadas con T. harzianum A34 mostraron
una marcada inhibición de la frecuencia y severidad de la enfermedad.
En los experimentos en tanques, la aplicación del biocontrol
una semana antes de la inoculación con Foc brindó un control completo.
La aplicación de 20 g/planta de un formulado con 8 x 10 9
conidia · mL –1 del biocontrol al plantar, y después de eliminar plantas
enfermas, brindó un control superior al 95% en parcelas de Burro
CEMSA y FHIA 03 previamente destruidas por la enfermedad en suelos
conducibles de plantaciones comerciales.
Palabras claves: Marchitez por Fusarium, mal de Panamá, Fusarium
oxysporum f. sp. cubense, biocontrol, Trichoderma harzianum
ABSTRACT
Fusarium wilt caused by Fusarium oxysporum f. sp. cubense (Foc) is
one of the most important diseases of banana. The replacement in
Cuba of resistant Cavendish banana and plantains (AAB) by FHIA
hybrids, Pisang awak and Burro CEMSA (ABB) due to the impact of
black Sigatoka, lead to the re-emergence of the disease. The efficacy
of Trichoderma harzianum isolate A34 was studied on containers and
production fields previously devastated by the disease. Inoculum was
reproduced in erlenmeyers with 20 g of sterilized rice and water at 1:1
(v/p), inoculated with 2 mL of Foc conidia from pure cultures. The
reproduction of the antagonist were carried out on a sterilized solid
substrate composed by a mixture 2:1 (w/w) of pulled rice residues
with rice husk, sugarcane milled stalks residues and water in 1:1 (v/
w) proportion. Treatments of control have been carried out in
commercial plantations of El Sitio, Palma Soriano. Trichoderma
harzianum A34 showed marked inhibition of Fusarium wilt frequency
and severity. In experiments in tanks the application of the biocontrol
a week before the inoculation with Foc gave complete control of the
pathogen. The applications of 20 g of a formulation of 8 x 10 9 conidia
· mL –1 of the biocontrol at planting and after removal of diseased
plants, brought a control higher than 95% on plots of Burro CEMSA
and FHIA 03 previously destroyed by the disease in conducible soils
of commercial plantations.
Key words: Fusarium wilt; Panamá disease; Fusarium oxysporum f. sp.
cubense; biocontrol; Trichoderma harzianum A34
INTRODUCCIÓN
La marchitez por Fusarium o mal de Panamá causado
por Fusarium oxysporum f. sp. cubense (Foc) es en el
mundo la más ampliamente distribuida, e históricamente
importante enfermedad de los bananos y plátanos.
En Cuba el primer informe oficial de la enfermedad
fue el de Smith (1910). Johnston (1915) informó
que el clon Gros Michel (AAA) y el Manzano (subgrupo
Silk, AAB) se encontraban severamente afectados ya
en 1910, aunque hay antecedentes de incidencia de la
enfermedad en el clon Manzano (subgrupo Silk, AAB)
desde finales del siglo XIX. La única medida practicada
para su manejo consistía en la destrucción de las
plantas afectadas y la quema de sus residuos, hasta
que comenzó su sustitución paulatina por el clon Robusta
(subgrupo Cavendish, AAA), al que localmente
se nombró Inmune por su resistencia al mal de Pana-
fitosanidad/259

Pérez y otros
má. El propio autor informó que la misma situación
existió en el resto de las regiones del país.
A partir de la sustitución del Gros Michel por clones del
subgrupo Cavendish y el cultivo masivo de clones de plátanos
AAB, la marchitez por Foc perdió su importancia
económica en Cuba, y quedó confinada a las pequeñas
parcelas de agricultores y jardines de viviendas, donde
se mantenía sobre plantas de los clones Burro Criollo
(Bluggoe, ABB) y Manzano. La aparición de la Sigatoka
negra en Cuba a finales de 1990 [Vidal, 1992] tuvo un
fuerte impacto en los costos de producción, y particularmente
en la estructura clonal de la superficie del país
plantada de musáceas [Pérez et al., 2002]. Los bananos
Cavendish (AAA) fueron sustituidos por los clones FHIA 23
(AAAA), FHIA 18 (AAAB y el FHIA 3 (AABB), los
cuales ocupan más de 11 000 ha. Asimismo, en la actualidad
solo se mantiene el 18% de las más de 43 000 ha de
plátanos (AAB) existentes en 1990. Los plátanos se han
sustituido por el cultivo a gran escala del clon Burro
CEMSA (ABB), que ocupa más de 60 000 ha, y por el
FHIA 3 (AABB). Junto a esto se ha popularizado el
cultivo del clon Burro Vietnamita (Pisang Awak, ABB)
debido a su sabor, que se asemeja al del Manzano. Este
drástico cambio en la composición clonal ha hecho que la
marchitez por Fusarium o mal de Panamá reemergiera
como un problema de sanidad en las plantaciones de
musáceas en Cuba. La falta de medidas regulatorias, y
de material de plantación certificado libre de la enfermedad,
ha provocado un paulatino pero consistente aumento
de la distribución e intensidad de la enfermedad en las
plantaciones estatales y de pequeños agricultores de
Burro CEMSA, tanto en monocultivo como intercaladas
con otros cultivos.
El biocontrol de fitopatógenos de suelo con especies de
Trichoderma ha sido objeto de estudio desde 1930, y se
ha aplicado a pequeñas escalas directamente al suelo o
en el tratamiento de las semillas [Weindling, 1934;
Papavizas, 1985; Harman, 1991]. Sivan y Chet (1989)
encontraron que T. harzianum induce altos niveles de
enzimas líticas (1-3 β glucanasa y quitinasa) sobre las
células de las paredes de los patógenos R. solani, P. aphanidermatum
y Fusarium oxysporum. Hay informes sobre
diversos intentos para el biocontrol de las poblaciones
de Fusarium oxysporum causantes de marchiteces
en diferentes hospedantes. Sandoval et al. (1996) y
Sandoval y López (2000; 2001) informaron de la eficacia
de Trichoderma harzianum cepa A34 en el control de
Fusarium spp. en frijol y claveles, así como de diferentes
especies de hongos en tomate, tabaco y frijol.
Los informes de la eficacia de T. harzianum en el control
de Foc son contradictorios, y la mayoría se refieren
a la eficacia de ensayos in vitro o invernaderos bajo condiciones
controladas [Ploetz, 2004a,b]. En Cuba Mitov
y Oliva (1975) informaron de la actividad inhibitoria
de cepas de Trichoderma spp. en tratamientos previos a
inoculaciones con el patógeno en plantas susceptibles.
Zhang et al. (2004) estudiaron el efecto inhibitorio de
150 aislamientos de Trichoderma spp. de 40 suelos diferentes
y otros materiales, de los cuales 39 mostraron
eficacia en la inhibición de Foc en experimentos de cultivo
dual in vitro. La eficacia estuvo relacionada al
micoparasitismo, inhibición enzimática y lisis. Nel et
al. (2006) informaron una ligera supresión mediante uso
de aislamientos de Trichoderma en el control de Foc en
ensayos de invernaderos en bananos Cavendish, y refirieron
la mejor eficacia como antagonistas del patógenos
a cepas de Fusarium oxysporum no patogénicas y a bacterias
del género Pseudomonas fluorescentes.
El objetivo del presente estudio fue determinar la eficacia
del antagonista Trichoderma harzianum cepa A34
en el control de Foc en suelos conducibles a la enfermedad
de plantaciones afectadas.
MATERIALES Y MÉTODOS
Para la reproducción de Foc se colocaron 20 g de arroz
en erlenmeyers de 250 mL, se añadió agua en proporción
1:1 (v/p) y se esterilizó a 1 atm durante 40 min.
Se inoculó con 2 mL de una suspensión de conidios de
Foc obtenidos de cultivos puros y se incubó dos semanas
a 28°C.
La reproducción de Trichoderma harzianum se realizó a
partir de un sustrato sólido compuesto por una mezcla
en proporción 2:1 (p/p) de arroz partido con cáscara de
arroz y bagacillo de caña de azúcar, al cual se le adicionó
agua en proporción 1:1 (v/p) y se distribuyó en bandejas
previo a su esterilización a 1 atm durante 40 min
a un pH aproximado de 6. Se inocularon frascos de cultivo
de 500 mL con 5 mL de una suspensión de conidios
a una concentración de 10 2 esporas/mL, obtenida de un
cultivo esporulado de T. harzianum cepa A34 (preinóculo),
los cuales fueron posteriormente incubados en
posición horizontal por cuatro días a 28-30°C. Se inocularon
las bandejas con una suspensión de conidios
10% (v/p) obtenidas de este preinóculo, y se incubaron
hasta obtener una cobertura completa del micelio del
antagonista en el sustrato (Fig.).
260/fitosanidad

Eficacia de Trichoderma harzianum A34 en el...
Se realizó un experimento en contenedores de 20 L con
plantas del clon Burro Criollo (Bluggoe ABB), para lo
cual se utilizó un diseño totalmente aleatorizado con
los siguientes tratamientos: 1) testigo sin inoculación
con Foc y sin biocontrol; 2) inoculación con Foc y sin
biocontrol; 3) inoculada con Foc y tratamiento con
T. harzianum 10 g del biopreparado sólido en arroz
de T. harzianum A34 a la base de las plantas el mismo
día; 4) tratamiento con T. harzianum 10 g del
biopreparado sólido en arroz de T. harzianum A34 a
la base de las plantas una semana antes de la inoculación
con Foc.
Reproducción de T. harzianum A34 en frascos Roux en medio agarizado y bandejas
sobre sustrato sólido en el laboratorio.
Se determinó la frecuencia de plantas afectadas y la
severidad del ataque de acuerdo con la escala de severidad
de la infección de Foc propuesta por Inibap (2002),
donde 1: sana, 2: clorosis ligera y marchitez sin afectación
del pecíolo, 3: clorosis moderada, peciolos doblados
y marchitez con rajadura de la base de las vainas,
4: clorosis severa, peciolos doblados, enanismo, rajadura
de los pseudotallos, 5: planta muerta.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En la Tabla 1 aparecen los datos del efecto del tratamiento
con T. harzianum sobre la frecuencia y severidad
de la marchitez por Foc en plantas inoculadas
artificialmente. El antagonista tuvo un marcado efecto
inhibitorio de la enfermedad, especialmente cuando
este colonizó el suelo y el sistema radical antes de la
infección. Los tratamientos con el antagonista T. harzianum
cepa A34 previo a la infección redujeron de forma
significativa la incidencia y severidad de la marchitez
por Foc. Estos resultados coinciden con los obtenidos
previamente por Mitov y Oliva (1975).
En la Tabla 2 aparecen datos de la incidencia obtenidos
de la aplicación en plantaciones de producción sobre
suelos conducibles en tratamientos al suelo previos a la
plantación y el uso de semillas obtenidas de plantaciones
libres del patógeno. Los campos previamente diezmados
por la incidencia de la enfermedad, plantados
con semilla agámica sana de clones susceptibles, se
mantuvieron en producción económica por más de cinco
años mediante el uso combinado del tratamiento con
el biocontrol. Este tratamiento, junto al uso de material
de multiplicación sano, probó ser eficiente en la
regulación de las poblaciones de Foc en suelos conducibles
en condiciones de producción comercial en fincas previamente
diezmadas por la enfermedad.
Tabla 1. Eficacia de T. harzianum en el control de Foc. Ensayo de contenedores
No.
Variante
Plantas
afectadas (%)
Severidad
(1 a 5)
1 Testigo sin inocular y sin tratar 0 0
2 Inoculada con Foc y sin tratar con T. harzianum 100 4,5
3
4
Inoculadas con Foc y tratadas con T. harzianum
el mismo día
Inoculadas con Foc y tratadas con T. harzianum
siete días antes
40 2,5
0 0
fitosanidad/261

Pérez y otros
Tabla 2. Resultados de aplicaciones de T. harzianum en suelos conducibles
a Foc en 170 ha en fincas comerciales de Caney del Sitio, Palma Soriano
Variante
Variedad
Plantas
afectadas (%)
Observaciones
Sin tratamiento Burro CEMSA > 60 Campo fue destruido
20 g/planta con
8 x 10 9 conidios/g
Sin tratamiento
20 g/planta con
8 x10 9 conidios/g
Burro CEMSA < 1
FHIA 03
FHIA 23
FHIA 03
FHIA 23
En producción por
más de cinco años
> 30 Campo fue destruido
< 1
En producción por
más de cinco años
En Taiwán la incidencia y daño de los tifones y de la
marchitez por Foc RT4 (VCG 01213-01216) determinó
el cambio de los sistemas de cultivo perenne a bajas
densidades por el cultivo anual a alta densidad de plantas
por hectárea, de clones mutantes moderadamente
resistentes a Foc derivados de Cavendish gigante, obtenidos
mediante selección somaclonal [Hwang y Ko,
2004].
El clon Burro CEMSA, el FHIA 23, el FHIA 3 y el
Burro Vietnamita (Pisang Awak) se encuentran con una
alta frecuencia de plantas enfermas en las plantaciones
comerciales y pequeños huertos de pequeños productores
en Cuba, debido a la ausencia de un sistema de producción
de semillas sanas y de medidas de manejo. Simultáneamente,
el impacto de los ciclones y de la
sigatoka negra en las plantaciones de Cuba ha llevado a
establecer el cultivo anual de plátanos a altas densidades
(> 3000 plantas/ha) [Álvarez, 2004]. Entre las ventajas
planteadas por este sistema anual de plantación se
encuentra el escape de las fechas de más frecuencia de
huracanes y una menor incidencia de enfermedades debido
a la destrucción anual de la plantación. Este sistema
constituye en sí un procedimiento de escape a los
niveles de daño económico de la enfermedad, siempre y
cuando se parta de la utilización de semilla sana uniforme
y disponibilidad de riego. El uso combinado de un
sistema de semilla sana con la disminución o regulación
de la población de Foc del suelo, por aplicaciones de
Trichoderma harzianum en los suelos infectados en plantaciones
de ciclo anual o bienal, puede contribuir al mantenimiento
de la producción de bananos susceptibles de
forma económicamente sostenible.
CONCLUSIONES
• El tratamiento al suelo al sitio de plantación con
20 g/planta de un formulado de T. harzianum cepa
A34 reproducido sobre granos de arroz con una concentración
de 8 x 10 9 conidios/g hasta una semana antes de
plantar, junto al empleo de material de plantación sano,
el saneamiento de plantas enfermas y el retratamiento
al suelo en el sitio de erradicación, permitieron un control
eficiente del mal de Panamá en suelos conducibles.
• El uso de este sistema de manejo permitió mantener la
productividad de la plantación por un período superior
a los cinco años en plantaciones de los clones Burro
CEMSA y FHIA 03 susceptibles a la enfermedad.
Agracedimiento
Los autores desean agradecer a INIBAP (hoy Bioversity
International) en la persona del doctor Franklin E.
Rosales por el financiamiento parcial del proyecto.
REFERENCIAS
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y vianda en Cuba (segunda versión)», impresiones del Ministerio de
Agricultura, La Habana, 2004, pp. 1-16.
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Crop Protection 10:166-171, EE. UU., 1991.
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Nel, B.; C. Steinberg; N. Labuschagne; A. Viljoen: «The Potential of
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Papavizas, G. C.: «Trichoderma and Gliocadium: Biology, Ecology and
Potential for Biocontrol», Ann. Rev. Phytopathology 75: 23-54, EE.UU.,
1985.
262/fitosanidad

Eficacia de Trichoderma harzianum A34 en el...
Pérez, L.; J. M. Álvarez; M. Pérez: «Economic Impact and Management of
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it Work (Ultimately)?», Proceedings of the International Banana
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fitosanidad/263

FITOSANIDAD vol. 13, no. 4, diciembre 2009
COLECTA DE ESPORAS DE TRICHODERMA HARZIANUM RIFAI
CEPA A34 POR LECHO FLUIDIZADO Y CICLÓN DUAL
Y POR TAMIZAJE VIBRATORIO
Orestes Elósegui Claro, 1 Orietta Fernández-Larrea Vega, 1 Enrique Ponce Grijuela, 1 Giovanni Borges
Marín, 1 Luciano Rovesti 2 y Jesús Jiménez Ramos 1
1
Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudad
de La Habana, CP 11600, oelosegui@inisav.cu
2
Consultor independiente. lrovesti@gmail.com
RESUMEN
Trichoderma harzianum Rifai cepa A34 se usa ampliamente en Cuba
por los productores como hongo antagonista contra diferentes
fitopatógenos fúngicos. Para lograr una vida en estante más prolongada
se desarrollan formulaciones del hongo, para lo que es necesario
realizar la separación y concentración de las esporas que se van a
formular, y durante estos procesos el grado de pureza del polvo extraído
puede ser muy variable, pero debe cumplir con las exigencias
del formulado. En este trabajo se describe la colecta de esporas de
la cepa A34 obtenidas sobre arroz y en mezcla con cáscara de
arroz, por los métodos de separación por lecho fluidizado y ciclón
dual, y de separación por tamizaje vibratorio. Con el primer método
en 20 min se colectó el 2,2% de las esporas y un concentrado final de
3,6 x 10 10 esporas · g –1 . Con el tamizaje vibratorio se obtuvo el 29,7%
de las esporas colectadas con un solo tamiz de 209 µm a una concentración
de 4,5 x 10 10 esporas · g –1 . Con los dos métodos la viabilidad
de las esporas y el nivel de contaminación estuvieron dentro del
rango de calidad permisible, así como el tamaño de partícula que se
requiere para la aplicación de bioproductos fúngicos para la agricultura.
Palabras claves: Trichoderma harzianum, separación, esporas, control
biológico
ABSTRACT
Trichoderma harzianum strain A34 is widely used by producers in
Cuba as an antagonist fungus against different fungal plant pathogens.
At present, research on Trichoderma formulations, to achieve a longer
shelf life is on-going in Cuba. One aspect is to develop efficient
methodologies for extracting and harvesting spores from the production
substrate, which may produce a degree of purity very variable for the
spore powder but must comply with technical formulation
requirements. This paper describes the harvesting of the native strain
spores, grown on rice and rice husk mixes, using the method of
separation by a fluid-bed and dual cyclone, and separation by electric
vibratory sieving. With the former method, after 20 minutes of
harvesting, only 2.2% of the total spores were recovered, due in part to
clogging of filters with rice husk. The spore extract had a 3.6 x 10 10
spores · g –1 final concentration. In contrast, a final yield of 29.7%
spore extraction with a concentration of 4.50 x 10 10 spores · g –1 was
achieved with the vibratory sieving method with 209 µm single sieve.
For every test carried out, both the spore viability and the
contamination level of the final spore powder were in the quality range
allowed for fungal bioproducts to be used in agriculture.
Keywords: Trichoderma harzianum, spore separation, biological control
INTRODUCCIÓN
Trichoderma harzianum Rifai cepa A34 se usa ampliamente
en Cuba como antagonista fúngico de hongos
fitopatógenos tales como Rhizoctonia solani, Sclerotium
rolfsii y especies de Pythium y Phytophthora en diversos
cultivos como tomate, col, tabaco y pimiento. Su
eficacia está demostrada tanto in vitro como en condiciones
de campo [Sandoval y López, 2001]. Actualmente
la investigación en Cuba del uso del hongo como
bioplaguicida está enfocada en obtener formulaciones
viables con al menos 18 meses de vida en estante y su
compatibilidad con las técnicas de aplicación convencionales.
El tipo y calidad de las esporas varían según el medio
sobre el que se obtengan. Las obtenidas de sustratos
sólidos son las más exitosas debido a la tolerancia mayor
frente a estreses abióticos medioambientales
[Bateman, 2006].
Los pasos de cosecha y poscosecha previos al empacado
del bioplaguicida tienen como finalidad obtener un
polvo puro de esporas apropiado para la formulación
[Jenkins y Grzywacz, 2003]. Convencionalmente esto
se ha logrado con cernidores manuales, lo que permite
obtener un polvo con determinado tamaño de partícu-
fitosanidad/265

Elósegui y otros
la según el tamaño del poro de la malla. Este método es
muy laborioso y consume mucho tiempo, además de
formar muchos aerosoles de esporas con riesgo respiratorio
para el personal expuesto, y no garantiza uniformidad
de partículas físicas con muchas de ellas de variado
tamaño obtenidas en el polvo [Sangyang et al.,
2000].
Actualmente se utilizan otras alternativas para separación
de esporas por la tecnología de lecho fluidizado y
ciclón a partir de sustratos sólidos como arroz, trigo y
otros cereales. La tecnología puede escalarse a nivel industrial
para separar esporas de Metarhizium anisopliae
y Beauveria bassiana de sustrato de granos de cereales
de forma segura y eficiente [Bateman, 2006]; sin embargo,
de acuerdo con la experiencia de los autores, estudios
de laboratorio no resultaron en una eficiente
separación de esporas de Trichoderma. El objetivo de
este trabajo fue comparar la separación y colecta de
esporas de Trichoderma harzianum cepa A34 por lecho
fluidizado y ciclón con la separación y colecta por
tamizaje vibratorio, en equipos que tuvieran versiones
industriales para el escalado productivo.
MATERIALES Y MÉTODOS
Una suspensión de esporas de Trichoderma harzianum
Rifai cepa A34 nativa fue inoculada en frascos Roux con
agar papa dextrosa (PDA), e incubado el cultivo hasta
su total esporulación por aproximadamente 72 h.
Las esporas se desarrollaron en contenedores metálicos
(cajas metálicas con tapa) con 500 g de un sustrato
compuesto por arroz partido y cáscara de arroz, según
metodología de Fernández-Larrea et al. (2006). La humedad
relativa final (Hr) del producto obtenido estuvo
entre el 10-12% determinada en balanza analítica
con aditamento analizador de humedad. En bolsas plásticas
dobles de polietileno de alta densidad se vertieron
500 g del biopreparado secado, se sellaron y se refrigeraron
a 4°C por no más de dos semanas hasta su uso.
Se realizaron controles de calidad microbiológicos para
asegurar la calidad óptima del biopreparado antes de
la separación. Los ensayos realizados y sus valores
aceptables fueron concentración de esporas mínima de
1 x 10 9 esporas · g –1 , su viabilidad mayor del 90% y el nivel
de contaminación menor o igual a 10 5 UFC · g –1 , según
métodos descritos por Meynell y Meynell (1965) citado
por Burges y Hussey (1982) y Elósegui et al. (2005).
Se ensayaron dos métodos de extracción. El primero
fue el de lecho fluidizado y ciclón dual, en un equipo de
laboratorio cosechador de esporas semiautomático, y
el segundo por tamizaje vibratorio en un tamizador eléctrico.
Ambas máquinas fueron limpiadas y desinfectadas
antes de su uso. Cada muestra a ser procesada consistió
en 500 g de biopreparado de Trichoderma
contenidos en bolsas previamente refrigeradas, con un
tiempo de operación total de 20 min. Inmediatamente,
antes de procesarse cada bolsa, el contenido se homogenizó
y la concentración de esporas fue determinada.
Solamente un experimento se llevó a cabo para la separación
de esporas por lecho fluidizado y ciclón a partir
de que experimentos preliminares no tuvieron éxito en
la separación de esporas en un solo paso, a diferencia
de lo obtenido por Bateman (2006), debido a la obstrucción
del filtro removible por la cáscara de arroz.
Por ello se realizó una separación en dos pasos de forma
que se pudieran colectar más esporas del sustrato
esporulado.
En el paso 1 el equipo sin el filtro de la cámara de lecho
fluidizado se operó por 10 min con 250 g del biopreparado
de la bolsa de 500 g; a continuación se descartó su residuo
de la cámara de lecho fluidizado y se operó otros 10
min con los restantes 250 g de la bolsa; posteriormente
se descartó igualmente su residuo de la cámara de lecho
fluidizado. En el paso 2 se colocó en el equipo el
filtro de la cámara de lecho fluidizado y se vertieron los
residuos de la cámara intermedia en la cámara separadora,
con unos segundos de fluidización; luego se
extrajo la bandeja colectora de esporas y con una fina
brocha se quitó el polvo de esporas adherido a las paredes
internas del ciclón y al borde externo del cono interno
largo, que se adicionó al polvo de esporas colectado
en la bandeja colectora. En este experimento los
residuos consistieron en todo material procesado y generado,
excepto el polvo de esporas colectado en la bandeja
colectora.
Para la separación de esporas por tamizaje vibratorio se
ensayaron dos variantes. La primera consistió en la separación
con dos tamices (un tamiz superior de 209 mm
de tamaño de poro y un tamiz inferior con tamaño de
poro de 35 mm), tal y como el tamiz era suministrado
por el fabricante. En la segunda variante se retiró el
tamiz inferior para determinar si se obtenían mejores
rendimientos de polvo de esporas, sin tomar en cuenta
la contaminación física en esta etapa de investigación.
Los residuos consistieron en todo el material retenido
en la parte superior del tamiz superior e inferior, o en el
tamiz superior respectivamente.
266/fitosanidad

Colectas de esporas de Trichoderma harzianum Rifai...
Para el polvo de esporas obtenido y los residuos generados
–producto de los métodos de separación y colecta
de esporas ensayados– se determinó la viabilidad,
concentración de esporas y nivel de contaminación según
métodos descritos por Elósegui et al. (2005). Para
el caso de las pruebas de calidad para el polvo de esporas
se pesaron 0,1 g en lugar de 1 g en balanza analítica
(e = 0,001 g) y se procedió con los mismos métodos
descritos por Elósegui et al. (2005). Se calcularon las
unidades formadoras de colonias contaminantes por
gramo de polvo de esporas (UFCt) como sigue:
UFCt = UFCn • 10 n +1
donde UFCn corresponde al número de unidades
formadoras de colonia en placa en la dilución decimal
número n.
La eficiencia en la extracción de esporas (E) de cada
prueba de separación de esporas se expresó en porcentaje
de esporas recuperadas, según el número total de
esporas contenidas en 500 g de biopreparado inicial
antes de la separación, y el número total de esporas
contenidas en el polvo de esporas. Cada prueba de separación
se replicó tres veces.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los resultados con los dos métodos ensayados mostraron
que la eficiencia de la separación por lecho fluidizado y
ciclón dual fue muy baja, con solo el 2,2% del total de
esporas del biopreparado original recuperadas, aunque
resultó doce veces más concentradas con respecto al
biopreparado de partida (Tabla 1). Para el método de
tamizaje eléctrico una eficiencia baja fue obtenida cuando
se emplearon los dos tamices en el equipo; sin embargo, el
polvo de esporas colectados tuvo una gran pureza con una
concentración treinta veces mayor que la concentración
de partida (Tabla 2). En contraste, el 29,7% (E) de las
esporas totales se recuperaron cuando el tamiz inferior de
35 mm se retiró, y las esporas se concentraron diecisiete
veces con respecto al biopreparado original (Tabla 2).
Tabla 1. Separación de esporas de T. harzianum por lecho fluidizado y ciclón dual
Muestra
(N = 3)
Masa media
(g ± SE)
Contaminación
(UFC · g –1 ± SE)
Viabilidad
(% ± SE)
Concentración de
esporas
(esporas · g –1 ± SE)
Esporas
totales
Biopreparado inicial 500 ± 2,8 < 10 4 96,6 ± 0,4 3,0 x 10 9 ± 0,3 1,5 x 10 12
Residuos de arroz 439,02 ± 1,2 < 10 4 95,0 ± 0,6 1,1 x 10 9 ± 0,1 4,8 x 10 11
Residuos de arroz
y cáscara
60,89 ± 1,1 < 10 4 95,0 ± 0,3 1,1 x 10 9 ± 0,5 6,7 x 10 10
Polvo de esporas 0,93 ± 0,02 < 10 4 97,0 ± 0,4 3,6 x 10 10 ± 0,3 3,3 x 10 10 2,2
SE: Error estándar N: Número de réplicas E: Porcentaje de esporas recobradas
E
(%)
Tabla 2. Separación de esporas de T. harzianum por tamizaje vibratorio
Muestra
(N = 3)
Masa media
(g ± SE)
Contaminación
(UFC · g –1 ± SE)
Viabilidad
(% ± SE)
Concentración de esporas
(esporas · g –1 ± SE)
Esporas totales
Biopreparado inicial 500 ± 3,15 < 10 4 92,3 ± 0,41 2,6 x 10 9 ± 0,04 1,3 x 10 12
Con dos tamices (209 µm y 35 µm)
E
(%)
Residuos 498 ± 1,4 < 10 4 64,6 ± 1.32 1,4 x 10 9 ± 0,03 7,0 x 10 11
Polvo de esporas 0,016 ± 0,001 < 10 4 91,3 ± 0,39 7,8 x 10 10 ± 0,47 1,2 x 10 9 < 0,1
Con un tamiz (209 µm)
Residuos 490 ± 1,3 < 10 4 67,3 ± 1,03 1,1 x 10 9 ± 0,03 5,5 x 10 11
Polvo de esporas 8,58 ± 0,06 < 10 4 92,0 ± 0,54 4,5 x 10 10 ± 0,05 3,9 x 10 11 29,7
SE: Error estándar N: Número de réplicas E: Porcentaje de esporas recobradas
fitosanidad/267

Elósegui y otros
En ambos métodos de separación ensayados, los residuos
obtenidos tuvieron una concentración de al menos
1,1 x 10 9 esporas · g –1 , al igual que niveles de contaminación
aceptables, excepto la viabilidad, que fue baja
(el 64,6 y 67,3%) para los residuos generados en los
experimentos por tamizaje vibratorio, lo que podría
deberse en parte a daño mecánico de las esporas. Los
residuos pueden comercializarse y usarse como
biopreparados de la forma tradicional, que consiste en
el uso directo del biopreparado.
Aunque la eficiencia en el recobrado del polvo de esporas
por tamizaje vibratorio (29,7%) no es buena comparada
con las esporas que quedan en los residuos, estas
esporas tienen la ventaja que pueden almacenarse
por largos períodos con agentes desecantes como sílica
gel, si se mantienen en refrigeración, lo que ahorra espacio
de almacenaje. Esto es de gran relevancia como lo
explican Sangyang et al. (2000) para el polvo de esporas
de Metarhizium, que fue colectado y desecado con sílica
gel a una Hr menor del 5%, y refrigerado a 5°C, que
mostró el 90% de viabilidad luego de tres años en almacenaje.
Contar además con polvo de esporas que
toleren tiempos prolongados de almlacenaje permitiría
disponer de ingrediente activo para estudios de formulaciones
sin necesidad de realizar producciones frecuentes.
Existe poca información para uso público de los métodos
para la separación de esporas a partir de sustratos
sólidos y su eficiencia para productos usados en el
biocontrol de plagas agrícolas. La poca información disponible
no es muy útil debido a que no se brindan datos
críticos del proceso, muchas veces por constituir
secretos tecnológicos de los procesos de producción de
bioplaguicidas.
Es significativo el sistema implementado por el programa
Lubilosa, liderado por CABI, Inglaterra, y explicado
en detalle por Jenkins et al. (1998) y Cherry et
al. (1999) para producir masivamente por un sistema
bifásico una cepa de M. anisopliae var. acridum (M. acridum),
donde se usa la separación de esporas del hongo
por lecho fluidizado y ciclón dual. En este sistema se
obtiene un biopreparado a una concentración promedio
de 1,5 x 10 9 esporas · g –1 , que luego de ser procesado
para extraer las esporas se obtiene un polvo concentrado
de esporas de 4-5 x 10 10 esporas · g –1 . Jenkins and
Grzywacz (2003) consideraron esta cantidad de esporas
en el polvo como deseable para producciones de esporas
de hongos y utilizarlos como biocontrol. En este
artículo el polvo de esporas obtenido por tamizaje vibratorio
con un solo tamiz tuvo una concentración de
4,5 x 10 10 esporas · g –1 similar a la obtenida por CABI
en Lubilosa para Metarhizium.
Por otra parte, Lomer y Langewald (1999) y Cherry et
al. (1999) informaron para el sistema de producción de
Lubilosa un promedio de 31,5 g de polvo de esporas de
Metarhizium por cada kilogramo de biopreparado procesado
con esporas desarrolladas sobre arroz, mediante
el uso del método de separación de lecho fluidizado y
ciclón. Elósegui et al. (2004) obtuvieron una buena eficiencia
en la separación y colecta de esporas (85%) para
biopreparados de Beauveria bassiana procesados por
lecho fluidizado y ciclón en un equipo separador a escala
de laboratorio.
Al menos uno de los puntos críticos de la baja eficiencia
en el recobrado obtenido en este trabajo podría
ser la naturaleza pegajosa que presentan las esporas
de algunas especies de Trichoderma [Carmichael et al.,
1980], por lo que ello puede contribuir a dificultar la
separación de las esporas del sustrato donde se formaron.
El disminuir la Hr del biopreparado (en este
caso fue el 10-12%) podría contribuir a un despegue
más fácil de las esporas del sustrato, al igual que el
ensayar sustratos que sean más fáciles de procesar
con las tecnologías disponibles, para de esta forma
lograr mayor eficiencia en el recobrado de esporas del
biopreparado del hongo.
El nivel de contaminación microbiológica y el porcentaje
de viabilidad de las esporas en el polvo obtenido
fueron aceptables, de acuerdo con lo recomendado por
las normas nacionales de control de calidad de
bioplaguicidas y los procedimientos normalizados internos
del laboratorio de Bioplaguicidas del Inisav, así
como de los estándares de países líderes en control biológico
[NC 72-02, 1993; Jenkins y Grzywacz, 2003].
El polvo de esporas obtenido por tamizaje vibratorio
con un solo tamiz mostró partículas físicas con menor
uniformidad en su tamaño, con la mayor parte menor
que 200 µm. Las partículas de este tamaño correspondieron
a diferentes grados de fraccionamiento de granos
y cáscara de arroz, y las pocas partículas mayores
de 200 µm a cáscara de arroz. En contraste, el polvo de
esporas obtenido por lecho fluidizado y ciclón mostró
una mayor uniformidad en el tamaño de las partículas,
con la mayor parte de las partículas menor que 10 µm,
aunque algunas partículas físicas alcanzaron 60 µm. Aun
cuando el tamaño de partícula menos uniforme para el
268/fitosanidad

Colectas de esporas de Trichoderma harzianum Rifai...
polvo obtenido por tamizaje podría verse como una dificultad
para formulaciones altamente exigentes como
las usadas para aplicaciones a ultra-bajo volumen, esta
formulación no es la comúnmente usada para Trichoderma,
donde se usan exitosamente otras formulaciones.
CONCLUSIONES
• La separación de esporas de Trichoderma harzianum
Rifai cepa A34 por tamizaje vibratorio resultó más
eficiente con el 29,7% de las esporas colectadas en
comparación con el método de separación por lecho
fluidizado y ciclón dual, que solo logró separar y colectar
el 2,2% de las esporas contenidas en el sustrato.
• La viabilidad y el nivel de contaminación microbiana
para el polvo de esporas colectado por los dos métodos
ensayados fueron aceptables.
Agradecimiento
Los autores expresan su agradecimiento al doctor Dave
Moore de CABI-Europe UK por la revisión crítica del
manuscrito y sus útiles sugerencias.
REFERENCIAS
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Development», http://www.dropdata.net/mycoharvester/ (consultado
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Pest Management 46(3):165-168, EE. UU., 2000.
fitosanidad/269

FITOSANIDAD vol. 13, no. 4, diciembre 2009
EFECTO DEL OLEONIM 50 CE SOBRE EL CRECIMIENTO
Y DESARROLLO IN VITRO DE HONGOS FITOPATÓGENOS
DEL ARROZ (ORYZA SATIVA LIN.)
Ariel Cruz Triana y Deyanira Rivero González
Estación Experimental de Arroz. Km 1½, Carretera La Francia, Los Palacios, Pinar del Río, Cuba,
CP 22 900, actriana@inca.edu.cu
RESUMEN
Las frecuentes aplicaciones de fungicidas químicos establecidas en
las estrategias fitosanitarias en el arroz son cada vez más dañinas
para el hombre y el medioambiente, y en muchas ocasiones no se
logra el control deseado. De acuerdo con esta problemática, en el
presente trabajo se evaluó el efecto in vitro de OleoNim 50 CE sobre
el crecimiento y desarrollo de los hongos fitopatógenos Pyricularia
grisea, Rhizoctonia solani, Sarocladium oryzae, Bipolaris oryzae,
Fusarium sp. y Curvularia lunata, aislados a partir de granos de arroz
manchados. Se comprobó que el OleoNim 50 CE ejerció efecto
inhibidor sobre el crecimiento micelial, la esporulación y la
germinación de conidios de los hongos evaluados, lo que brinda
nuevas perspectivas para el control de enfermedades fúngicas del
arroz.
Palabras claves: nim, Pyricularia grisea, Rhizoctonia solani,
Sarocladium oryzae, Bipolaris oryzae, Fusarium sp., Curvularia lunata
ABSTRACT
Usual applications of chemical fungicides which are established in
plant health strategies on rice become more harmful for men and the
environment, besides it does not get the expected control in many
instances. Taking this problems into account, in the present work was
evaluated the in vitro effect of OleoNim 50 CE, on the growth and
development of plant pathogen fungi Pyricularia grisea, Rhizoctonia
solani, Sarocladium oryzae, Bipolaris oryzae, Fusarium sp and
Curvularia lunata, isolated from rice spotted grains. It was proved that
OleoNim 50 CE had an inhibitory effect on the mycelial growth,
sporulation and conidial germination of the evaluated fungi, what offers
new perspectives for the rice fungal disease control.
Key words: nim, Pyricularia grisea, Rhizoctonia solani, Sarocladium
oryzae, Bipolaris oryzae, Fusarium sp., Curvularia lunata
INTRODUCCIÓN
Entre los principales factores que influyen en los bajos
rendimientos del arroz (Oryza sativa L.) se encuentran
las afectaciones por numerosos y diferentes enemigos
naturales, entre los que se halla un extenso grupo de
agentes infecciosos que causan enfermedades, las cuales
en determinadas condiciones ambientales constituyen
uno de los factores limitantes de mayor importancia
en la explotación de este cultivo. La actividad
desarrollada por estos entes (hongos, bacterias, virus,
etc.) en los órganos de las plantas origina disminuciones
en la calidad y en los rendimientos del cultivo [Cordero
y Rivero, 2001].
Los productores utilizan numerosos fungicidas sin lograr
el control deseado, situación que incrementa los
costos de producción, disminuye los rendimientos y por
lo tanto reduce los beneficios del productor.
Extractos obtenidos de partes vegetales del árbol nim
(Azadirachta indica A. Juss), mayormente de los frutos,
así como productos comerciales elaborados, se han
utilizado en forma experimental para el control de diferentes
insectos plaga y hongos [Castiglioni et al., 2002;
Teresa y Estrada, 2005]; sin embargo, son pocas las
evidencias del efecto que pudieran producir sobre hongos
fitopatógenos del cultivo del arroz. Sobre la base de
estos antecedentes el objetivo del presente trabajo fue
evaluar el efecto in vitro del OleoNim 50 CE sobre el
crecimiento y desarrollo de los hongos Pyricularia grisea,
Rhizoctonia solani, Sarocladium oryzae, Bipolaris oryzae,
Fusarium sp. y Curvularia lunata.
MATERIALES Y MÉTODOS
El trabajo se realizó en el laboratorio de Micología Vegetal
del Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria
(Censa) en el 2006. Se utilizaron aislamientos de
Pyricularia grisea Sacc, Rhizoctonia solani, Sarocladium
oryzae Sawada, Bipolaris oryzae Breda de Haan,
fitosanidad/271

Cruz y Rivero
Fusarium sp. y Curvularia lunata Wakker, los cuales
fueron obtenidos y conservados en ese laboratorio. Los
aislamientos se obtuvieron a partir de granos de arroz
manchados de la variedad INCA LP-5. El formulado
utilizado es una emulsión del aceite extraído de la semilla
de nim (OleoNim 50 CE), el cual se obtuvo en los
laboratorios del Instituto Nacional de Investigaciones
Fundamentales de la Agricultura Tropical (Inifat).
Para determinar el efecto de diferentes diluciones de
OleoNim 50 CE sobre el crecimiento micelial de los principales
hongos fitopatógenos del arroz se empleó el método
de envenenamiento del medio, para lo cual se prepararon
separadamente en enlermeyers medio PDA
(Biocen) estéril y aceite de nim, el cual se esterilizó previamente
por filtración en membranas miliporos (0,45 µm).
Las mezclas de aceite de nim y medio PDA se realizaron
de manera que se obtuvieron diluciones efectivas
del 50, 25, 10 y 5%, y se vertieron en placas Petri.
Se sembraron discos de micelio de 0,5 cm de diámetro de
cada aislamiento en el centro de placas con medio envenenado,
ajustado a pH 5,2 y a razón de un disco por placa
con cuatro repeticiones. Los discos miceliales se obtuvieron
de la periferia de las colonias, a partir de cultivos
fungosos puros de cinco días de edad, en medio PDA, incubado
en oscuridad, a una temperatura de 26 ± 2 °C. Se
utilizó como control un tratamiento de medio PDA.
Diariamente se midió el diámetro de las colonias (cm)
hasta el séptimo día; entonces se le restó el diámetro
del disco sembrado y se determinó el porcentaje de inhibición
del crecimiento micelial mediante la fórmula:
Diámetro de la colonia tratada
% Inhibición = 1−
Diámetro de la colonia control
x100
Se realizó un diseño completamente aleatorizado y se
hizo un análisis de varianza simple. Las medias se
docimaron mediante la prueba de rangos múltiples de
Duncan (p ≤ 0,05).
El efecto de OleoNim 50 CE sobre la esporulación de
los hongos se determinó transcurridos siete días del
ensayo de inhibición del crecimiento micelial. En cada
uno de los tratamientos se añadieron 10 mL de agua
destilada estéril a cada placa de cultivo con cuatro repeticiones
por tratamiento, y se removieron con una
espátula de vidrio flameada. Posteriormente se determinó
la concentración de conidios mediante la cámara
Thomas.
Los datos obtenidos se transformaron a través de la
expresión √(x + 3/8), se analizaron a través de un Anova
simple y se compararon sus medias por la prueba de
rangos múltiples de Duncan (p ≤ 0,05).
El efecto de OleoNim 50 CE en la germinación de
conidios se determinó a partir de cultivos de los hongos
de Curvularia lunata, Fusarium sp. y Sarocladium
oryzae, crecidos sobre medio PDA (control), con los que
se prepararon suspensiones de esporas. Para ello se
añadieron 10 mL de agua destilada estéril por placa y
se agitó con una espátula de Drigalski flameada. La concentración
se determinó y se ajustó a 5 x 10 5 conidios/mL.
Posteriormente en cada uno de tres portaobjetos se
adicionaron 20 µL de las suspensiones de conidios de
cada hongo, y se mezclaron con 20 µL de diferentes
soluciones madres de OleoNim 50 CE para obtener
concentraciones efectivas del formulado del 50, 25, 10 y
5%, correspondientes a los tratamientos. El control
consistió en la mezcla de 20 µL de las suspensiones de
conidios con igual volumen de agua destilada estéril.
Los portaobjetos se colocaron en condiciones de cámara
húmeda, en oscuridad, a 26 ± 1°C durante 36 h. Se
evaluó el número de conidios germinados por campo a
las 12, 24 y 36 h. Se utilizaron tres portaobjetos por
tratamiento y se observaron cuatro campos por lámina,
con al menos 50 conidios en cada campo.
Los datos obtenidos se procesaron por el análisis de
varianza de clasificación simple y las medias se
docimaron a través de la prueba de rangos múltiples de
Duncan (p ≤ 0,05).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los datos mostrados en la Tabla 1 evidencian el efecto
inhibitorio de la emulsión de aceite de nim (OleoNim
50 CE) sobre el crecimiento micelial de los principales
hongos fitopátogenos del cultivo del arroz: Rhizoctonia
solani, Bipolaris oryzae, Curvularia lunata, Fusarium sp.,
Pyricularia grisea y Sarocladium oryzae.
En todos los tratamientos con OleoNim 50 CE se observó
reducción del crecimiento micelial del patógeno
respecto al control. El porcentaje de inhibición se acentuó
a medida que se incrementó la concentración del
producto; sin embargo, no presentaron diferencias significativas
los tratamientos 25 y 50% de OleoNim 50 CE
para los patógenos Rhizoctonia solani, Bipolaris oryzae
y Curvularia lunata (a los cinco, seis y siete días), y
S. oryzae (a los seis y siete).
272/fitosanidad

Efecto del OleoNim 50 CE sobre...
Tabla 1. Efecto de OleoNim 50 CE sobre el crecimiento micelial de los principales hongos fitopatógenos causantes del manchado del grano de arr
Trats.
Inhibición del crecimiento micelial por día para cada patógeno (%)
R. solani B. oryzae C. lunata
3 4 5 6 7 3 4 5 6 7 3 4 5
Control 0 d 0 c 0 c 0 d 0 d 0 e 0 e 0 d 0 c 0 d 0 d 0 d 0 d
5% 26 c 8 b 16 b 5 c 7 c 3 d 4 d 14 c 13 b 12 c 8 cd 12 c 13 c
10% 28 c 10 b 19 b 20 b 19 b 16 c 18 c 19 b 14 b 17 b 18 bc 21 bc 19 dc
25% 58 ab 37 a 40 a 39 a 40 a 48 b 46 b 45 a 47 a 49 a 38 ab 48 a 43 d
50% 56 b 37a 38 a 40 a 37 a 61 a 53 a 51 a 50 a 50 a 51 a 42 a 33 bc
ESx 0,080 0,143 0,075 0,050 0,038 0,063 0,042 0,024 0,024 0,020 0,167 0,147 0,185
CV 61,0 64,2 82,2 67,3 58,7 77,9 86,2 63,9 61,8 54,7 67,2 66,8 66,1
Trats. Fusarium sp. P. grisea S. oryzae
Control 0 e 0 e 0 f 0 d 0 d 0 e 0 d 0 c 0 c 0 d 0 d 0 d 0 d
5% 32 d 26 d 27 d 28 c 30 c 3 d 6 cd 11 b 9 b 7 bc 7 c 7 c 14 c
10% 40 c 33 c 34 c 36 b 38 b 7 cd 14 b 16 b 12 ab 11 bc 8 c 8 c 12 c
25% 54 ab 57 a 58 a 60 a 63 a 17 a 14 b 14 b 12 ab 8 bc 48 b 46 b 37 b
50% 51 b 44 b 45 b 44 b 46 b 40 b 33 a 24 a 19 a 18 a 93 a 77 a 63 a
ESx 0,022 0,017 0,019 0,023 0,013 0,065 2,161 0,058 0,078 0,033 0,049 0,088 0,108
CV 53,6 53,5 53,5 53,4 53,3 76,9 63,4 55,7 55,0 57,4 67,4 62,3 61,7
fitosanidad/273

Cruz y Rivero
El hongo fitopatógeno Pyricularia grisea fue el que menos
se afectó. La mayor inhibición se obtuvo con las diluciones
al 50 y 25%. Independientemente de las dosis,
en todos los tratamientos hubo una reducción del porcentaje
de inhibición final; pero generalmente siguieron
la misma tendencia de incremento respecto a la concentración,
y mostraron la potencialidad del compuesto de
inhibir el crecimiento micelial de los patógenos.
El uso de formulados de nim en el manejo de las enfermedades
está altamente reconocido [Ahmed y
Grainge, 1986]. El efecto inhibitorio de OleoNim 50
CE sobre el crecimiento micelial de los hongos evaluados
fue similar al alcanzado por otros autores al evaluar
el efecto de otros formulados de nim (NO 60 EC
(A), NO 60 EC (C) y NO + PO 60 EC (C)) al 3% sobre
los hongos fitopatógenos, H. oryzae, P. oryzae
[Narasimhan et al., 1998] y S. oryzae [Rajappan et
al., 2001], aunque hay que señalar que el efecto inhibitorio
en el presente trabajo fue inferior. Estos mismos
autores demostraron que estos productos no perdieron
la actividad biológica después de ser almacenados
durante nueve meses, hecho que facilita su uso en el
manejo fitosanitario del cultivo.
La inhibición de la pudrición de la vaina por extractos
de hojas de nim, de aceite de semillas de nim y torta de
nim, fue informado por Yesuraja et al. (1995), lo que
conllevó a aumentos en los rendimientos del cultivo.
Govindachari et al. (1998) obtuvieron las fracciones de
aceite de nim –azadiradione, nimbina, salannina y
epoxy-azadiradione– y evaluaron su actividad sobre
Drechslera oryzae, Fusarium oxysporum y Alternaria
tenuis, y demostraron que por separado no tenían actividad
biológica, mientras que se observaba un efecto
contrario cuando se mezclaban, lo que indica el posible
efecto aditivo y sinérgico de las fracciones.
En la Tabla 2 se observa el efecto del producto OleoNim
50 CE sobre la esporulación total de los hongos
patógenos del grano de arroz Curvularia lunata,
Fusarium sp. y Sarocladium oryzae.
Al analizar la esporulación se observó que la mayoría
de los tratamientos, excepto el de la menor dilución
(5%), diferían significativamente del control. En todos
los hongos evaluados se apreció un marcado efecto
inhibitorio en la esporulación, al ser tratados con
las diluciones de OleoNim 50 CE; sin embargo, la
esporulación decreció a medida que disminuyó la dilución
del producto. La menor concentración de
conidios con respecto al control se observó en el hongo
S. oryzae.
Tabla 2. Efecto del OleoNim 50 CE sobre la esporulación
de los principales hongos fitopatógenos del grano de arroz
Hongos
Curvularia lunata
Fusarium sp.
Sarocladium oryzae
Letras desiguales en columnas difieren para p ≤ 0,05.
Tratamientos
Concentración de conidios
(x 10 7 conidios/mL)
Control
6,63 a
5% 6,42 a
10% 6,08 a
25% 4,70 ab
50% 3,10 b
ESx 0,107
CV 14,7
Control
7,10 a
5% 6,70 a
10% 4,05 b
25% 1,33 bc
50% 2,60 c
ESx 0,138
CV 27,9
Control
2,10 a
5% 1,05 b
10% 0,93 b
25% 0,75 b
50% 0,65 b
ESx 0,216
CV 32,7
274/fitosanidad

Efecto del OleoNim 50 CE sobre...
Resultados similares obtuvo Molina (2001), en el que demuestra
el efecto inhibitorio sobre la esporulación de Alternaria
sp., Phytophthora sp. y Botrytis sp. al ser tratados con un
formulado de aceite de nim clarificado, hidrofóbico.
El número de conidios germinados en todos los tratamientos
mostró inhibición significativa al compararlos
con el tratamiento control, independientemente del
hongo y el momento de la evaluación (Fig.). La germinación
de conidios fue menor a medida que disminuyó
la dilución del producto; sin embargo, en algunas
evaluaciones no se observaron diferencias significativas
entre los tratamientos.
Cuando se evaluó a las 12 h, las mayores afectaciones en la
germinación de conidios se observó en las suspensiones de
esporas del hongo C. lunata; pero a las 36 h las mayores
afectaciones se obtuvieron en el hongo S. oryzae, seguido
por C. lunata y Fusarium sp. Hay que destacar que con el
tiempo disminuyó el efecto inhibitorio sobre la germinación
conidial, criterio que debe tenerse en cuenta para el manejo
de estos hongos en condiciones de campo.
Rajappan et al. (2001) demostraron la inhibición en la
germinación de esporas y crecimiento micelial del hongo
Drechslera oryzae al ser tratado con extractos de
hojas de nim; sin embargo, Paul y Sharma (2002), al
tratar el hongo Drechslera graminea con extractos de
hojas de nim, cosecharon resultados diferentes a los
obtenidos en el presente trabajo, lo que pudiera deberse
a que los metabolitos secundarios presentes en el
aceite de nim (OleoNim 50 CE) ejercen un mayor efecto
inhibitorio sobre la germinación de esporas.
A
ESx = 0,65 ESx = 1,71 ESx = 3,05
B
ESx = 2,57 ESx = 2,10 ESx = 3,35
fitosanidad/275

Cruz y Rivero
C
ESx = 1,34 ESx = 1,32 ESx = 1,83
Efecto del OleoNim 50 CE sobre la germinación
de esporas de hongos fitopatógenos del grano de arroz.
A) C. lunata B) Fusarium sp. C) S. oryzae.
CONCLUSIONES
• El producto OleoNim 50 CE ejerce efecto inhibidor
sobre el crecimiento micelial, la esporulación y
germinación de conidios de los hongos fitopatógenos
Curvularia lunata, Fusarium sp. y Sarocladium oryzae,
lo que brinda nuevas alternativas de control para la
enfermedad del manchado del grano y la pudrición
de la vaina del arroz.
REFERENCIAS
Ahmed, A.; M. Grainge: «Potential of the Neem Tree (A. indica) for Pest
Control and Rural Developments», Econ. Bot. 40:201, Filipinas, 1986.
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Instituto de Investigaciones del Arroz, La Habana, 2001, p. 29.
Govindachari, T. R.; G. Suresh; Geetha Gopalakrishnan; Balaganesan
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and Molecular Plant Pathology 61(1):3-13, India, 2002.
Rajappan, K.; C. Ushamalini; N. Subramanian; V. Narasimhan; Kareem
A. Abdul: «Management of Grain Discoloration of Rice with Solvent-
Free EC Formulations of Neem and Pungam Oils», Phytoparasitica
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Teresa, María; J. Estrada: «Los bioinsecticidas de nim en el control de
plagas de insectos en cultivos económicos», Revista de la Facultad
de Ciencias Agrarias UNCuyo, XXXVII(2):41-49, Argentina, 2005.
Yesuraja, I.; V. Mariappan; K. Sethuraman: «Field Evaluation on Efficacy
of Neem Products on Management of Fungal Diseases of Rice»,
Neem for the Management of Crop Diseases, Mariappan, V., Ed.
Associated Publishing, India, 1995, pp. 11-17.
276/fitosanidad

FITOSANIDAD vol. 13, no. 4, diciembre 2009
EVALUACIÓN DE CEPAS NATIVAS DE BACILLUS
THURINGIENSIS BERLINER PARA EL CONTROL DE HELIOTHIS
VIRESCENS FABRICIUS EN EL CULTIVO DEL TABACO EN CUBA
Bertha Carreras Solís, Dayamí Rodríguez Batista y Felicia Piedra Díaz
Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal. Calle 110 no. 514 e/ 5. a B y 5. a F, Playa, Ciudad
de La Habana, CP 11600, bcarreras@inisav.cu
RESUMEN
Cultivos líquidos de ocho cepas de Bacillus thuringiensis Berliner se
evaluaron en larvas de segundo instar de Heliothis virescens Fabricius.
La cepa LBT-111 mostró el 50% de mortalidad al segundo día del
experimento. Un segundo bioensayo con esta cepa permitió determinar
la CL 50
contra H. virescens que fue de 2,6 x 10 7 esporas · mL –1 y la
correlación más alta (0,95) se obtuvo con los resultados de 48 h de
bioensayo. Los límites de confianza (p ≤ 0,05) en la línea de correlación
concentración-probit mostraron márgenes estrechos a las 48 h,
lo que denota la confiabilidad en la determinación de la CL 50
.
Palabras claves: Bacillus thuringiensis, Heliothis virescens, control
biológico, CL 50
ABSTRACT
Liquid culture of eight Bacillus thuringiensis strains were evaluated on
second instar larvae of Heliothis virescens Fabricius. LBT-111 strain
showed 50% of mortality the second day of experiment. A second
bioassay with this strain allowed to determinate the CL 50
against
Heliothis virescens, which was 2.6 x 10 7 spores/mL –1 and the highest
correlation (0.95) was obtained with the data of 48 h. The confidence
limits (p 0.05) in the dosis-probit correlation line showed narrow
margins with the data of 48 h, which indicate the accuracy in the
calculation of the CL 50
.
Key words: Bacillus thuringiensis, Heliothis virescens, biological
control, CL 50
≤
INTRODUCCIÓN
En Cuba el cultivo del tabaco es atacado por defoliadores
que causan pérdidas considerables, y es
Heliothis virescens Fabricius (cogollero del tabaco) el
más importante [Blanco et al., 2007]. El comportamiento
poblacional de esta plaga en el país lo ubica en todas
las provincias y bajo todas las condiciones de cultivo
[Piedra, 1985].
Jiménez (1995) definió las cepas LBT-21 y LBT-24 de
B. thuringiensis como las de mayor toxicidad sobre larvas
de H. virescens, y determinó que la cepa LBT-21
producía niveles de efectividad del 72,3% en campos de
tabaco después del tercer día de aplicación. Esta misma
cepa utilizada durante varias campañas en la provincia
de Sancti Spíritus declinó su efectividad a menos
del 50% [Monzón y Ayala, 1999, comunicación
personal]. Por esta razón siempre resulta muy importante
el poder contar con otras alternativas para manejar
problemas de insecto-resistencia.
El daño principal de H. virescens al tabaco es en la hoja,
que es el producto comercial del cultivo, por lo que resulta
importante contar con cepas de B. thuringiensis que
no solo muestren patogenicidad, sino que sean virulentas
y agresivas, de forma tal que en el menor tiempo
posible la plaga deje de afectar el cultivo.
El presente trabajo tuvo como objetivo la evaluación
de cepas nativas de B. thuringiensis contra larvas de
segundo estadio de H. virescens en el cultivo del tabaco
para seleccionar la cepa más promisoria.
MATERIALES Y MÉTODOS
Como material biológico se utilizaron las cepas de
Bacillus thuringiensis LBT-101, LBT-102, LBT-103,
LBT-104, LBT-105, LBT-107, LBT-108 y LBT-111 aisladas
de suelo de cultivo de tabaco de las provincias de
Sancti Spíritus y Pinar del Río [Carreras, 2009].
fitosanidad/277

Carreras y otros
Para el bioensayo de la actividad biológica frente a
H. virescens se partió de colectas de larvas en campos
cultivados de tabaco, libres de productos químicos y
biológicos. Las larvas se llevaron al laboratorio de Biología
del Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal
(Inisav), donde se estableció la cría del insecto según
metodología descrita por Piedra (1980), consistente
en colocar las larvas en cápsulas con pedazos de hojas
de tabaco y papel de filtro en el fondo para mantener la
humedad del alimento. Cuando las larvas eclosionaron
se pasaron a cápsulas de Petri individualmente con hojas
de tabaco fresco como alimento, y se realizaron observaciones
del desarrollo, comportamiento y características
del insecto. Se utilizaron larvas de H. virescens
del segundo estadio de crecimiento.
Las suspensiones de esporas y cristales de las cepas de
B. thuringiensis seleccionadas se obtuvieron a partir
del crecimiento obtenido en tubos con agar nutriente
en plano inclinado. Para los bioensayos se utilizaron
cuatro concentraciones (10 9 , 10 8 , 10 7 , 10 6 esporas • mL –1 )
preparadas con solución salina estéril de NaCl 0,85%.
Se colocaron 10 larvas individualmente en placas de
Petri de 9 cm de diámetro, con hojas de tabaco
asperjadas con cada una de las diferentes concentraciones.
Se utilizó un control negativo donde las hojas
de tabaco se asperjaron con agua destilada estéril, y
cada variante estuvo conformada por tres réplicas. La
mortalidad se evaluó cada 24 h durante siete días consecutivos.
El porcentaje de mortalidad se determinó
mediante la fórmula de Abbott corregida:
⎡ ind.vivos − ind.muertos⎤
% mortalidad = 1 − ⎢
100
ind.vivos
⎥
⎣
⎦
Fórmula de Abbott corregida
% mortalidad muestra − % mortalidad
% mortalidad corregida =
100 − % mortalidad testigo
testigo
100
Los insectos muertos se desinfectaron con una solución
acuosa de hipoclorito de sodio al 0,05% y se secaron
a 37°C. Posteriormente el material se suspendió en
solución salina (0,85%) y se sometió a pretratamiento
térmico en baño de María a 80°C por 10 min. Una asada
de la suspensión se sembró por agotamiento en placas
con agar nutriente para observar la presencia de
colonias con morfología típica de B. thuringiensis.
Con el objetivo de corroborar la muerte del insecto por
la acción de B. thuringiensis, las células seleccionadas se
tiñeron con solución de violeta cristal 0,5% y se observaron
al microscopio óptico con objetivo de inmersión
para detectar la presencia del complejo espora-cristal.
Los porcentajes obtenidos de mortalidad para cada cepa
se analizaron mediante el Modelo Lineal General de
medidas repetidas y se utilizó el programa computacional
SPSS para Windows versión 11.5.2.1.
La cepa seleccionada como promisoria, basado en este
criterio, se sometió a otro bioensayo para obtener las
líneas de regresión probit de mortalidad-concentración
y calcular la concentración letal media (CL 50
) [Finney,
1971] con la utilización de un programa computarizado.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Se evidenciaron resultados diferentes en cuanto al control
de H. virescens, aun cuando las cepas ensayadas
coexistían en el mismo hábitat del insecto.
Las cepas seleccionadas mostraron patogenicidad en
mayor o menor grado hacia las larvas de H. virescens y
presentaron diferencias estadísticas significativas cuando
se realizó la prueba de comparación múltiple DHS de
Tukey, lo que permitió seleccionar a la cepa LBT-111
como la más promisoria para el control de larvas de
segundo estadio de H. virescens (Tabla 1).
Los resultados muestran correspondencia con los obtenidos
por Gómez et al. (2006) y Weathersbee et al.
(2006), quienes encontraron diferencias significativas
en los porcentajes de mortalidad hacia el picudo del
algodonero Anthonomus grandis Boheman y Diaprepes
abbreviatus, respectivamente, entre cepas de B. thuringiensis
portadoras de proteínas Cry informadas como
tóxicas hacia coleópteros.
Para el segundo ensayo se escogió la cepa de B. thuringiensis
LBT-111 por mostrar mayor toxicidad so-
278/fitosanidad

Evaluación de cepas nativas de Bacillus...
bre larvas de H. virescens, y se determinó la CL 50
. La
actividad tóxica de B. thuringiensis sobre larvas de
lepidópteros se expresa en términos de la dosis letal
media (DL 50
), o la concentración letal media (CL 50
) para
larvas de primer y segundo estadio cultivadas en el laboratorio
[Gallegos et al., 2003].
Tabla 1. Prueba de comparación múltiple DHS de Tukey para las cepas
de B. thuringiensis ensayadas frente a larvas de Heliothis virescens
[I] Cepa [J] Cepa Diferencia entre medias [I-J]
LBT-111 LBT-101 47,36
La diferencia de medias es significativa al nivel 0,05.
LBT-102 12,54
LBT-103 18,75
LBT-104 35,71
LBT-105 43,18
LBT-107 15,18
LBT-108 8,93
La CL 50
de las larvas fue de 2,6 x 10 7 esporas · mL –1 . Las
correlaciones calculadas para las variables probit de
mortalidad y logaritmo de la concentración variaron
de 0,95 a 0,70 cuando la mortalidad se cuantificó de 48
hasta 120 h (Tabla 2). La correlación más alta (0,95) se
obtuvo con los datos de 48 h de bioensayo. Los resultados
coinciden con los obtenidos por Gallegos et al. (2003),
quienes informaron correlaciones similares con los datos
de 48 y 72 h de ensayo.
Es lógico obtener correlaciones más altas en menor
tiempo con larvas de mayor tamaño, debido a que a
mayor desarrollo (edad del insecto) se requiere mayor
concentración del cultivo para obtener la concentración
letal, o bien, a mayor tiempo de exposición se requiere
menor concentración para lograr el mismo porcentaje
de muerte. Esta información es importante para el
manejo estratégico de las dosis de campo de B. thuringiensis.
Tabla 2. Concentración correspondiente al 50% de mortalidad
Mortalidad
(%)
Dosis correspondiente Límite inferior Límite superior
48 50 2,6 x 10 7 2,4 x 10 7 2,7 x 10 7 0,95
72 50 6,5 x 10 6 1,9 x 10 6 1,1 x 10 7 0,77
96 50 1 x 10 4 4,2 x 10 3 1,5 x 10 4 0,70
120 50 1 x 10 3 0,4 x 10 3 1,5 x 10 4 0,70
Tiempo
(h)
Nivel de confianza 95%.
Coeficiente
correlación (R)
Los límites de confianza (p = 0,05) en la línea de correlación
concentración-probit (Tabla 2) muestran márgenes
estrechos a las 48 h, lo que denota la confiabilidad
en las determinaciones; sin embargo, a partir de las 72 h
se aprecian márgenes amplios y correlaciones bajas, con
mayor probabilidad de error en la cuantificación del
grado de toxicidad de B. thuringiensis.
La cepa LBT-111 puede considerarse, por tanto, una
cepa promisoria en el control de este insecto, al lograr
mortalidades al menor tiempo y a la menor concentración
utilizada, por lo que se hacen necesarios ensayos a
nivel de campo para comprobar la efectividad de la cepa
en condiciones no tan controladas.
CONCLUSIONES
• La cepa LBT-111 presentó toxicidad sobre larvas de
segundo estadio de Heliothis virescens en condiciones
de laboratorio, con una (CL 50
) de 2,6 x 10 7 esporas
· mL –1 , por lo que representa una alternativa
potencial para el manejo de este insecto en el cultivo
del tabaco.
REFERENCIAS
Blanco, C. A.; A. P. Terán-Vargas; J. D. López, Jr.; J. V. Kauffman; X.
Wei: «Densities of Heliothis virescens and Helicoverpa zea
(Lepidoptera: Noctuidae) in Three Plant Hosts», Fla. Entomol. 90:
742-750, EE. UU., 2007.
fitosanidad/279

Carreras y otros
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Finney, D. J.: Probit Analysis, 3 th ed., Cambridge University Press,
Londres, 1971, pp. 20-63 .
Gallegos, G.; M. Cepeda; E. Aranda; L. O. Tejeda; D. Enkerlin: «Evaluación
del efecto tóxico de Bacillus thuringiensis (Berliner) sobre
larvas del segundo estadio de Trichoplusia ni (Lepidoptera:
Noctuidae)», Agrociencia 37:405-411, México, 2003.
Gómez, S.; G. Díaz; V. M. Núñez: «Evaluación de la toxicidad de proteínas
de Bacillus thuringiensis Berliner sobre el picudo del algodonero
Anthonomus grandis Boheman», Agronomía Colombiana 24
(2):296-301, Colombia, 2006.
Jiménez, R. J.: «Lucha biológica contra el cogollero del tabaco Heliothis
virescens (Fabricius) (Lepidoptera: Noctuidae) con biopreparados
nacionales y comerciales a base de Bacillus thuringiensis Berliner
en Cuba», tesis en opción al grado científico de Doctor en Ciencias
Agrícolas, Universidad Central de Las Villas, Inisav, La Habana, 1995.
Piedra, F.: «Estudio bioecológico y control químico de Heliothis
virescens (Fabricius) en el cultivo del tabaco», Informe final de resultado
01. 004. 05, PCT 1975-1975, Minag, La Habana, 1980.
––––: Metodología para la señalización de Heliothis virescens (F.) en
el cultivo del tabaco, Manual Metodológico, CNSV, Minag, La Habana,
1985.
Weathersbee, A. A.; F. L. Lapointe; R. G. Shatters: «Activity of Bacillus
thuringiensis Isolates Against Diaprepes abbreviatus (Coleoptera:
Curculionidae)», Fla. Entomol. 89(4):441-448, EE. UU., 2006.
280/fitosanidad

FITOSANIDAD vol. 13, no. 4, diciembre 2009
Comunicación
CREACIÓN Y DESARROLLO DE LOS PRIMEROS
CONSULTORIOS FITOSANITARIOS DEL PAÍS Y SU IMPACTO
PARA EL TRABAJO DE LA ETPP
Dagoberto Téllez Martínez
Estación Territorial de Protección de Plantas Iguará. Sancti Spíritus
Mención en el VII Concurso la Historia de la Sanidad Vegetal
ANTECEDENTES
La idea surge por iniciativa del autor en 1999. Entonces
la Estación Territorial de Protección de Plantas
(ETPP) atendía los municipios de Taguasco y Yaguajay.
El período especial en el país todavía era fuerte y el
problema del transporte también era difícil. La ETPP
de Iguará y su laboratorio se encontraban muy lejos
para prestar sus servicios a los productores, y por otra
parte los planes de autofinanciamiento eran cada año
más crecientes, por lo que resultaba necesario acercar
los servicios a los clientes.
Dos grandes movimientos tuvieron además una influencia
o connotación especial: el agroecológico y la agricultura
urbana. Yaguajay es ejemplo de ello, y es Referencia
Nacional desde el 12 de febrero del 2000. Otra
motivación importante lo constituyó la necesidad de
llegar con la atención primaria de la sanidad vegetal
hasta las comunidades o consejos populares, pues se
les veía en veterinaria con mayor claridad en las clínicas,
y en salud a través del consultorio del médico de la
familia. Por todas esas influencias surge el proyecto de
los consultorios fitosanitarios agroecológicos.
Se tenía mucho entusiasmo con la nueva concepción,
pero ¿cómo llevarla a cabo? Lo primero que se hizo fue
transmitirla al director provincial, ingeniero Armando
L. Marrero Pérez, quien la valoró, aprobó e incluyó
dentro de los objetivos de trabajo de la provincia. Orientó
asimismo identificar instalaciones ociosas en los lugares
donde convenían estos centros, y además tramitarlo
con los directivos del gobierno y el partido a nivel
municipal y de los consejos populares. Todo ello se realizó
exitosamente, y comenzó el proceso constructivo de
remodelación. En esta etapa, como en todas las sucesivas,
el colectivo de trabajadores escribió páginas
imborrables. No es objetivo enumerar las dificultades,
pero sí destacar el apoyo de Marrero, sin el cual hubiera
sido imposible su realización.
El consultorio de Venegas fue inaugurado por Agustín
Lage, diputado por el municipio de Yaguajay, el 28 de
diciembre del 2002, y en julio del 2003 comenzaría a
prestar servicios el de Mayajigua.
Estos centros constituyen una extensión de la ETPP.
Para el colectivo representan el primer eslabón del sistema,
en que la capacitación y la divulgación constituyen
su primordial tarea. Esta experiencia comenzó a
aplicarse en el 2003, a treinta años de creado el sistema
estatal de protección de plantas. En ese propio año el
director del Centro Nacional de Sanidad Vegetal pidió
que se hiciera una argumentación de esta iniciativa al
ministro de la Agricultura y a la comisión de la Asamblea
Nacional que atiende al ministerio, quienes valoraron
la idea de muy avanzada, como lo expresara
Alfredo Jordán, su entonces titular.
Hoy han visitado y pueden dar fe de esta experiencia
la doctora María del Carmen Pérez, ministra del Minag;
ingeniero Humberto Vázquez, director del CNSV; doctor
Jorge Ovies, director del Inisav; doctor Luis L.
Vázquez, especialista del Inisav; doctor Adolfo
Rodríguez Nodal, director del Inifat y jefe del Grupo
Nacional de la Agricultura Urbana, entre otras personalidades,
así como todos los subdelegados de servicios
fitosanidad/281

Téllez Martínez
técnicos del país, delegación de canadienses en gira
científica y muchas otras personas de casi todas las
provincias en recorridos de agricultura urbana.
INTRODUCCIÓN
Las plantas y los animales son la principal fuente de
alimento del ser humano, y como seres vivos tienen
exigencias muy específicas. Conocerlas determina obtener
de ellos los mejores resultados. La atención primaria
de las especies tiene una importancia decisiva en
este empeño. En el país, como experiencia única en el
mundo, existe el consultorio médico de la familia, que
garantiza la atención primaria de salud. Para los animales
se cuenta con la clínica veterinaria, y para las
plantas el sistema estatal de sanidad vegetal, que llega
solo con sus laboratorios hasta el nivel territorial.
La idea de los consultorios fitosanitarios pretende lograr
la atención primaria de todas las especies de plantas
que el hombre cultiva en su entorno productivo,
con una máxima aspiración: que sea agroecológico, que
es también una forma de garantizar calidad de vida y
salud para el pueblo.
El período especial ha propiciado que en la producción
de alimentos prevenientes del agro haya cada vez mayor
participación popular; intervienen personas de todos
los sectores de la sociedad (médicos, maestros…),
y en su gran mayoría desconocen una correcta técnica
agrícola.
Este desconocimiento, a su vez, hace más vulnerable en
los sistemas agrícolas los daños que producen los organismos
nocivos como consecuencias de fallas en la vigilancia
fitosanitaria de plagas endémicas e inmigrantes.
Disponer de especialistas y de insumos necesarios al
alcance del productor garantiza los conocimientos elementales,
la difusión de nuevas tecnologías, el mejoramiento
de la fitosanidad y el incremento de la producción
de alimentos más sanos para la población.
Hacer de la agroecología una ciencia aplicada es un desafío,
pero con inteligencia positiva el hombre enfrentará
los retos y vencerá.
MATERIALES Y MÉTODOS
Este trabajo se realizó en la comunidad de Venegas y
Mayajigua, del municipio de Yaguajay, provincia de
Sancti Spíritus. Se crearon dos consultorios para atender
cinco consejos populares, en el primero los de
Venegas y Perea, y en el segundo los de Mayajigua,
El Río y Nela. Atienden toda su estructura agrícola,
incluido el universo de la agricultura urbana y la producción
popular.
En ambos casos el gobierno municipal cedió instalaciones
que cambiaron de uso y fueron remodeladas y adaptadas
para este propósito, lo que se llevó a cabo por la
dirección provincial de Sanidad Vegetal y la ETPP
Iguará.
Estos centros se concibieron con laboratorios para el
diagnóstico fitosanitario, fitofarmacias para el expendio
de medios biológicos, sustancias naturales y
biofertilizantes, además de designar, donde fuera posible,
un área de siembra de cultivos para que sirviera
como demostrativa, un área de lombricultura y compost
siempre que fuera posible, y una para la fabricación de
sustancias naturales, principalmente insecticidas botánicos.
El consultorio de Mayajigua contó también con un
aula de capacitación, y actualmente se trabaja en el
de Venegas para la creación de una plantación comercial
de árbol del nim (Azadirachta indica A. Juss), que
aportará la materia prima necesaria para la planta
procesadora de bioplaguicidas y productos veterinarios,
que se pretende instalar como una nueva proyección
aprobada por el Grupo Nacional de Agricultura
Urbana. Con ello, los objetivos generales que pueden
lograrse son:
• Introducir los beneficios de los servicios técnicos a
las comunidades agrarias.
• Reducir la carga tóxica como mínimo en dos o tres
veces el consumo actual de plaguicidas químicos.
• Establecer y consolidar manejos de cultivos donde
predomine el uso de medios biológicos, biofertilizantes,
enemigos naturales y todo tipo de alternativas
en el control de plagas.
• Capacitar a campesinos, estudiantes, obreros, futuros
técnicos, personal de la salud y población en general
sobre toxicología de los plaguicidas y ventajas
de los alimentos orgánicos.
• Contribuir a la educación ambiental y al mejoramiento
de la calidad de vida del pueblo.
• Garantizar cobertura total de vigilancia fitosanitaria
de plagas endémicas y exóticas, eliminando las zonas
de silencio que todavía persisten.
• Determinar residuos de agrotóxicos en alimentos si
se crearan las condiciones a través del financiamiento
por proyectos.
282/fitosanidad

Creación y desarrollo de los primeros consultorios...
• Estimular el incremento de la agricultura orgánica
poniendo a disposición de los productores los insumos
y conocimientos necesarios.
• Monitorear a través del terreno que hacen los especialistas
las poblaciones de plagas y entomofauna
benéfica, y en función de ello tomar las decisiones
correctas.
• Lograr integración y vínculos con organismos
cuarentenarios, enfatizando en educación y salud.
Este trabajo forma parte de un proyecto en fase de terminación
que pretende extender esta experiencia a todo el
municipio de Yaguajay, y que bien puede ser aplicado a
otras provincias del país, sobre todo en muchas ETPP
que atienden territorios muy amplios. En este caso particular
comprende llegar hasta cinco consultorios y 18
fitofarmacias, que darían cobertura a los 16 consejos populares,
y pueden generarse más de veinte nuevos empleos.
Veamos, con la aprobación del proyecto, algunas consideraciones
sobre el funcionamiento de estos centros:
• La red de consultorios y fitofarmacias serán
rectorados y abastecidos por la dirección de Sanidad
Vegetal territorial.
• Un consultorio puede atender uno o varios consejos
populares, e incluso un municipio, en dependencia
de la complejidad agrícola, el número de habitantes...;
pero las fitofarmacias conviene tenerlas en los
principales asentamientos agrarios para que los productores
dispongan de los insumos recomendados en
cada uno de los manejos planteados.
• Las fitofarmacias contarán con personal calificado y
serán atendidas directamente por el consultorio que
corresponda a su consejo popular.
• Los consultorios adecuarán su horario de manera que
les permita hacer terreno, es decir, visitar unidades
de producción, predios y todo el universo productivo
que atienden; asimismo organizarán todas las vías
de capacitación y estimularán el envío de muestras
al laboratorio como premisa decisiva para la vigilancia
fitosanitaria.
• La integración con la dirección de Educación se basará
en la creación de círculos de interés en diferentes
enseñanzas, intercambio con estudiantes para
promover los objetivos propuestos y su divulgación
en el seno de la familia. Con la dirección de Salud se
podrá preparar un compendio de toxicología sobre
plaguicidas químicos de uso en la agricultura, y
seminariar al personal médico, además de realizar
debates y videos sobre los efectos agrotóxicos en la
salud humana.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los consultorios son una extensión de la ETPP. En ellos
se consolida el trabajo y se nutren todos los frentes. Desde
su implementación en la estación de Iguará se han cosechado
resultados sostenibles en todo su encargo. Los de
mayor relevancia en el orden técnico, sindical, económico,
en la Asociación Nacional de Innovadores y Racionalizadotes
(ANIR) y en la agricultura urbana desde el
2003, se exponen a continuación.
Técnicos
• No existen en el territorio reportes de pérdidas económicas
por plagas, incluidos en ellos los productos
almacenados en los almacenes de la economía interna.
Los índices de plagamientos se han logrado mantener
bajos, y las áreas bajo señal y manejo integrado
de plagas (MIP) crecen. Los consultorios aportan
más de 190 ha y 225 diagnósticos dentro de las tareas
de vigilancia.
• Las áreas tratadas con protección química disminuyen
y crecen las que lo hacen con alternativas de control
(20 y 80% respectivamente). En el consultorio
de Venegas se han tratado 2454 ha con medios biológicos
y sustancias naturales.
• Disminución progresiva de la carga tóxica en cultivos
protegidos, sinónimo de impacto ambiental y
ahorro económico favorable. En papa, por ejemplo,
en los insecticidas de 1,65 kg de ingrediente activo
por hectárea del plan, disminuyó a 0,29 kg por hectárea
real; en ajo, de producción popular con seguimiento
del consultorio, de 2,3 kg i.a. antes, según
encuesta, a 0,90 kg i.a. ahora. El valor de los productos
que se congelaron por no aplicarse en la papa
este año asciende a 14 214,85 CUC.
• Las plagas inmigrantes se rastrean satisfactoriamente
(se tienen 12 primeros reportes provinciales detectados
oportunamente). Se perfecciona el trabajo
al incorporar dos análisis de riesgo de introducción a
nivel territorial. Los consultorios han generado 630
muestras en función de las encuestas.
• La infraestructura creada por la ETPP ha incrementado
sosteniblemente las actividades del frente
de desarrollo y servicios técnicos. En estos tres años
las acciones de capacitación ascienden a 4686 con 6960
participantes. Corresponde a los consultorios 4214
acciones con 5721 participantes, es decir, un promedio
anual en este contexto de 1405 acciones y 1907
participantes, para un promedio de cinco consultas
diarias.
fitosanidad/283

Téllez Martínez
• Crece el número de productores que adopta el control
biológico. Hoy se cuenta con 107 identificados.
Sindicales
• Se ha transitado por las categorías de Colectivo Destacado
Nacional, Reconocimiento Especial Nacional
y Vanguardia Nacional durante el 2003, 2004 y 2005,
respectivamente.
Económicos
• Se han sobrecumplido siempre los planes de
autofinanciamiento anual y mensual. En el finalizado
año se ingresaron 79 148,89 CUC para el 161% del
plan previsto. Los consultorios son buenos aportadores
y el costo por peso nunca excede los 0,50 CUC.
ANIR
El centro ostenta la condición 8 de Octubre 2003, 2004
y 2005; el mismo caso para dos trabajadores, máximo
reconocimiento que otorga la ANIR nacional a colectivos
destacados en la labor innovadora. Se presentaron
cinco trabajos en el II Simposio Internacional de Vigilancia
Fitosanitaria y Protección al Entorno en el
2005, y uno en el VI Encuentro Internacional de Agricultura
Orgánica en el 2006. El tema de los consultorios
se ha presentado en varios eventos, y en ellos además
se realizan evaluaciones en el área demostrativa,
así como en el universo que atienden, y que generan
temas para foros.
Agricultura urbana
La ETPP está considerada como Referencia Nacional
y aspirante a Excelencia, y de este movimiento desde
1999. Los consultorios y su concepción son compatibles
con los programas nacionales de la agricultura urbana.
Ya tienen propuesto culminar la plantación comercial
de nim de 8 ha aproximadamente, e instalar
una planta procesadora de bioplaguicidas y productos
veterinarios. Para ello ya se confeccionó un proyecto
por la ETPP asesorado por el Inifat que asciende a
62 214 CUC y 46 200 CUP, y que está en trámite con la
ministra del Minag.
Figura 1. Consultorio fitosanitario agroecológico en el consejo
popular Mayajigua.
Figura 2. Consultorio fitosanitario agroecológico en el consejo
popular Venegas.
Figura 3. Laboratorio del consultorio fitosanitario en el consejo
popular Venegas.
Figura 4. Área de fitofarmacia del consultorio fitosanitario
en el consejo popular Venegas.
284/fitosanidad

Creación y desarrollo de los primeros consultorios...
CONCLUSIONES
• Con la aplicación de esta experiencia se logran resultados
notables desde varios puntos de vista:
• Sociales: Por la aceptación de los productores al encontrar
solución a sus problemas sin tener que trasladarse
a grandes distancias.
• Ambientales: Porque se logra disminuir la carga tóxica
e incrementar las producciones orgánicas.
• Económicas: Porque aumentan los rendimientos con
menos costos al aplicar manejos integrados y
agroecológicos de cultivos.
• Estos centros son económicamente sustentables, pues
ingresan mucho más de lo que gastan. Durante estos
tres años, en esta experiencia el costo por peso nunca
ha excedido de 0,50 CUC.
• Tener un centro de este tipo al nivel del consejo popular
permite desarrollar cualquier iniciativa de los
servicios técnicos de la agricultura en general, y la
preparación para eventos especiales del país.
• Esta iniciativa es una fuente de generación de empleos
para futuros profesionales.
• Estos centros se insertan perfectamente en los programas
de desarrollo socioeconómico de la agricultura
en Cuba y del CNSV con los fitosanitarios de los
consejos populares.
• Este es el único país con una experiencia de este
tipo.
Recomendaciones
• Extender esta experiencia donde sea posible a través
de coordinaciones con la dirección del Minag y el gobierno
en los territorios.
• Elaborar proyectos para buscar financiamiento en
aras de cumplir los objetivos de este trabajo.
fitosanidad/285