0318 HBsAg ONE REF KHB5IWA REF KHB5IW - Radim S.p.A.

0318
HBsAg ONE
REF KHB5IWA
REF KHB5IW
Español
96
192
M350.es – Rev. 2 – 04/2006

REACTIVOS DEL KIT (96 Test)
Reactivos Cantidad Estado Físico
MICROPLATE 1 x 96 Listo para usar
CONTROL│ - 1 x 4.0 mL Listo para usar
CONTROL │+ 1 x 2.0 mL Listo para usar
CAL 2 Liofilizado
WASHBUF│20X 2 x 50 mL Concentrada
CONJ│DIL 1 x 15 mL Listo para usar
CONJ│20X 1 x 0.80 mL Concentrado
SUBS│TMB 2 x 16 mL Listo para usar
H2SO4 │0.3 M 1 x 16 mL Listo para usar
REACTIVOS DEL KIT (192 Test)
Reactivos Cantidad Estado Físico
MICROPLATE 2 x 96 Listo para usar
CONTROL│ - 2 x 4.0 mL Listo para usar
CONTROL │+ 1 x 4.0 mL Listo para usar
CAL 4 Liofilizado
WASHBUF│20X 2 x 50 mL Concentrada
CONJ│DIL 1 x 30 mL Listo para usar
CONJ│20X 1 x 1.5 mL Concentrado
SUBS│TMB 3 x 16 mL Listo para usar
H2SO4 │0.3 M 2 x 16 mL Listo para usar
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ENSAYO INMUNOENZIMÁTICO DE TERCERA GENERACIÓN PARA LA DETERMINACIÓN
EN UN SOLO PASO DEL ANTÍGENO DE SUPERFICIE DEL VIRUS DE LA HEPATITIS “B”
EN SUERO Y PLASMA HUMANO.
USO EXCLUSIVO PARA DIAGNÓSTICO “IN VITRO”
Il kit se puede utilizar en el control de unidades de sangre y en el control de pacientes infectados por VHB
INTRODUCCIÓN
La Organización Mundial de la Salud (OMS) define la infección por virus de la Hepatitis B como sigue:
“La Hepatitis B es una de las enfermedades más importantes que aquejan a la humanidad y constituye
un problema de salud pública global. El término hepatitis significa inflamación del hígado, y la causa
más común es la infección por uno de los cinco virus, denominados Hepatitis: A, B, C, D y E. Estos
virus pueden causar una enfermedad aguda cuyos síntomas persisten por varias semanas, se
caracterizan por el color amarillo de la piel y los ojos (ictericia); orina oscura; fatiga extrema; náuseas;
vómitos y dolores abdominales. La recuperación puede tardar de varios meses a un año. Los virus de
la Hepatitis son causantes de infecciones crónicas en las que el paciente nunca se libera del virus e
incluso, años más tarde, desarrolla cirrosis hepática o cáncer de hígado.
El tipo más serio de hepatitis viral es la causada por el VHB, es el único tipo de los que provocan una
infección crónica y para el cual existe una vacuna disponible. El virus de la Hepatitis B se transmite por
contacto con sangre o fluidos corporales de personas infectadas, de la misma forma que el virus de la
inmunodeficiencia humana (HIV), agente causal del SIDA. Sin embargo, el VHB es entre 50 y 100
veces más infeccioso que el HIV. Las principales vías de transmisión del HBV son: (a) vía perinatal
(transmisión de madre a hijo durante el parto); (b) de niño a niño; (c) mediante inyecciones y
transfusiones inseguras; (d) por contacto sexual.
A nivel mundial, la mayor parte de las infecciones ocurren de madre infectada a hijo, de niño a niño en
hogares infantiles y por la reutilización de agujas y jeringuillas sin previa esterilización. En muchos
países en desarrollo casi todos los niños acaban infectados por el virus. En muchos países
desarrollados (Europa Occidental y Norteamérica), el patrón de transmisión es diferente. En estos
países, la transmisión de madre a hijo y de niño a niño representaban cerca de un tercio de las
infecciones crónicas antes de que se implementara el programa de vacunación infantil. Sin embargo, la
mayoría de las infecciones en estos países se adquiere por la actividad sexual durante la adolescencia,
y por el consumo de drogas inyectables. Por otra parte, el virus de la Hepatitis B constituye el principal
riesgo en el trabajo, dentro del colectivo de los profesionales de la salud, motivo por el cual se ha
aplicado la vacunación para la protección de los mismos.
El virus de la Hepatitis B no se propaga por la comida o agua contaminadas, ni por contactos casuales
en el ámbito laboral. En zonas del Este y Centro de Europa se han reportado tasas elevadas de
infección crónica por VHB. En el Asia Central y en regiones de la India, aproximadamente el 5% de la
población está infectada de forma crónica, mientras que en Europa Occidental y Norteamérica, los
índices son menores del 1%.
Los niños infectados con VHB, constituyen el grupo más susceptible a la infección crónica.
Aproximadamente el 90% de los niños infectados durante el primer año de vida y entre el 30 y el 50%
de los niños infectados entre 1 y 4 años de edad, desarrollan este tipo de infección. La mortalidad por
cáncer de hígado o cirrosis asociados al VHB es cerca del 25%, entre las personas que han presentado
infección crónica en la niñez. En determinado grupo de pacientes, la Hepatitis B crónica es tratada con
interferones o lamivudinas, lo cual puede ayudar en ocasiones. En algunos casos de cirrosis se han
realizado trasplantes de hígado, pero el resultado ha sido variable.
La prevención de esta enfermedad a través de la vacunación, constituye la mejor opción. La vacuna
contra la Hepatitis B tiene índices de seguridad y eficacia demostrados. A partir de 1982, han sido
administradas mundialmente, alrededor de un billón de dosis. Se aplica por vía intramuscular en series
de tres dosis. Los estudios realizados demuestran un 95% de eficacia en la prevención de la infección
crónica en niños y adultos sin infección previa. En muchos países donde el índice de infección crónica
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en niños oscila entre 8 y 15%, se ha observado una reducción a menos del 1% en grupos de niños
inmunizados. Desde 1991, la OMS ha hecho un llamado para la introducción de la vacuna contra la
hepatitis B en todos los programas nacionales de vacunación.”
El antígeno de superficie del virus de la Hepatitis B (HBsAg) es el elemento principal de la envoltura
viral responsable de las hepatitis virales agudas y crónicas. Contiene el determinante “a”, común a
todos los subtipos virales conocidos, dividido inmunológicamente en dos subgrupos distintos (ay y ad).
En los últimos años la posibilidad de detectar el HBsAg mediante inmunoensayos altamente sensibles,
ha permitido comprender su distribución y epidemiología en el mundo así como la gran disminución del
riesgo de infección por transfusiones.
PRINCIPIOS DEL ENSAYO.
Los pocillos de la placa están recubiertos con un anticuerpo monoclonal de ratón anti-HBsAg. El
suero/plasma se adiciona a los pocillos conjuntamente a un segundo anticuerpo monoclonal de ratón
conjugado con Peroxidase (HRP) y dirigido contra un epitopo diferente. El inmunocomplejo específico,
formado en presencia del HBsAg de la muestra queda capturado en la fase sólida.
Terminada la incubación, los pocillos son lavados para eliminar las proteínas séricas no ligadas y el
conjugado. Luego se añade el substrato/cromogénico, que en presencia del inmunocomplejo
capturado, es hidrolizado por la enzima conjugada, generando una señal coloreada. Luego de bloquear
la reacción enzimática, la densidad óptica de la mezcla se mide en un lector ELISA.
La intensidad del color es proporcional a la cantidad de HBsAg presente en la muestra.
COMPONENTES.
El estuche, contiene reactivos suficientes para realizar 96 pruebas (código KHB5IWA) y 192 pruebas
(código KHB5IW).
1. Microplaca: MICROPLATE
12 tiras de 8 pocillos separables, recubiertos con un anticuerpo monoclonal de ratón anti-HBsAg,
purificado mediante cromatografía de afinidad, dirigido al determinante “a”. Los pocillos se encuentran
en bolsas selladas con desecante.
Kit para 96 test: 1 microplaca
Kit para 192 test: 2 microplacas
2. Control Negativo: CONTROL│-
Listo para el uso. Mezclar en Vórtex. Contiene suero de cabra, tampón fosfato 10 mM pH 7.4 +/- 0.1,
así como 0.09% de azida sódica y 0.1% de Kathon GC como conservantes. El control negativo está
codificado con el color amarillo pálido.
Kit para 96 test: 1 x 4.0 mL/vial
Kit para 192 test: 2 x 4.0 mL/vial
3. Control Positivo: CONTROL│+
Listo para el uso. Mezclar en Vórtex. Contiene suero de cabra, HBsAg recombinante no infeccioso,
tampón fosfato 10 mM pH 7.4 +/- 0.1, además de 0.02% de sulfato de gentamicina y 0.1% de Kathon
GC como conservantes. El control positivo está codificado con el color verde.
Kit para 96 test: 1 x 2.0 mL/vial
Kit para 192 test: 1 x 4.0 mL/vial
4. Calibrador: CAL
Liofilizado. Disolver en agua calidad EIA como indicado en la etiqueta. Contiene suero fetal bovino,
HBsAg recombinante a 0.5 IU/mL (2 do WHO Estándar Internacional para HBsAg, NIBSC código 00/588)
tampón fosfato 10 mM pH 7.4 +/- 0.1, así como 0.02% de sulfato de gentamicina y 0.1% de Kathon GC
como conservantes.
Nota: El volumen necesario para disolver el contenido del frasco, varía en cada lote. Se
recomienda usar el volumen indicado en la etiqueta.
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Kit para 96 test: 2 viales
Kit para 192 test: 4 viales
5. Tampón de Lavado Concentrado: WASHBUF│20X
Solución concentrada 20x. Una vez diluida, la solución de lavado contiene tampón fosfato 10 mM a
pH 7.0 +/- 0.2, 0.05% de Tween 20 y 1% de Kathon GC
Kit para 96 test: 2 x 50 mL/vial
Kit para 192 test: 2 x 50 mL/vial
6. Diluyente del Conjugado Enzimático: CONJ│DIL
Solución lista para el uso, codificada con el color rojo. Contiene tampón Tris 10mM a pH 6.8 +/- 0.1, 1%
de suero normal de ratón, 5% de BSA, así como 0.1% de Kathon GC y 0.02% de sulfato de
gentamicina, como conservantes. Normalmente la solución es opalescente.
Kit para 96 test: 1 x 15 mL/vial
Kit para 192 test: 1 x 30 mL/vial
7. Conjugado Enzimático: CONJ│20X
Solución concentrada 20x. Contiene anticuerpo monoclonal de ratón anti-HBsAg determinante “a”,
conjugado con peroxidasa (HPR), tampón Tris 10mM a pH 6.8 +/- 0.1, 5% de albúmina de suero
bovino, así como 0.02% de sulfato de gentamicina y 0.1% de Kathon GC como conservantes.
Kit para 96 test: 1 x 0.80 mL/vial
Kit para 192 test: 1 x 1.5 mL/vial
8. Cromógeno/Substrato: SUBS│TMB
Listo para el uso. Contiene una solución tamponada citrato-fosfato 50 mM pH 3.5-3.8, 0.03% de tetrametil-benzidina
(TMB), 0.02%de peróxido de hidrógeno (H2O2) y dimetilsulfóxido 4%.
Nota: Evitar la exposición a la luz, ya que la sustancia es fotosensible.
Kit para 96 test: 2 x 16 mL/vial
Kit para 192 test: 3 x 16 mL/vial
9. Ácido Sulfúrico: H2SO4 │0.3 M
Contiene solución de H2SO4 0.3M
Atención: Irritante (Xi R36/38; S2/26/30)
10. Cubreplaca adhesivo:
Kit para 96 test: n° 2
Kit para 192 test: n° 4
11. Manual de instrucciones: n° 1
MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS.
Ensayo Manual
1. Micropipetas calibradas (150μl,100μl y 50μl) y puntas de plásticas desechables.
2. Agua de calidad EIA (Bidestilada o desionizada, tratada con carbón activo para remover químicos
oxidantes usados como desinfectantes).
3. Timer con un rango de 60 minutos como mínimo.
4. Papel absorbente.
5. Incubador termostático de microplacas ELISA (en seco o húmedo), calibrado a 37ºC con capacidad
de agitar hasta 1300 rpm+/-150.
6. Lector calibrado de microplacas ELISA con filtros lectura a 450nm y si es posible a 620-630 nm,
para la determinación del blanco.
7. Lavador calibrado de microplacas ELISA.
8. Vórtex o similar.
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Ensayo automático
− El kit puede utilizarse con instrumentación automática para kits ELISA en microplaca.
− Se garantiza la aplicabilidad en instrumentación RADIM y/o SEAC.
− En el caso se utilice instrumentación automática de otros fabricantes, es responsabilidad del usuario
asegurarse de que el kit haya sido oportunamente validado.
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
1. El kit debe ser usado por personal técnico adecuadamente entrenado, bajo la supervisión de un
doctor responsable del laboratorio.
2. Cuando el kit es usado para el “screening” de unidades de sangre, el laboratorio debe estar
certificado y calificado para realizar este tipo de análisis (Ministerio de Salud o entidad similar).
3. Todas las personas encargadas de la realización de las pruebas deben llevar las ropas protectoras
adecuadas de laboratorio, guantes de látex sin talco y gafas. Evitar el uso de objetos cortantes
(cuchillas) o punzantes (agujas). El personal debe ser adiestrado en procedimientos de
bioseguridad, según ha sido recomendado por el Centro de Control de Enfermedades de Atlanta,
Estados Unidos, y publicado por el Instituto Nacional de Salud: “Biosafety in Microbiological and
Biomedical Laboratories”, ed.1984. De todas maneras, referirse a la legislación nacional vigente en
el país de pertenencia.
4. Todo el personal involucrado en el manejo de muestras debe estar vacunado contra VHB y VHA,
para lo cual existen vacunas disponibles, seguras y eficaces.
5. Se debe controlar el ambiente del laboratorio para evitar la contaminación de los componentes con
polvo o agentes microbianos cuando se abran los estuches, así como durante la realización del
ensayo. Evitar la exposición del substrato/cromógeno a la luz y las vibraciones de la mesa de
trabajo durante el ensayo.
6. Conservar el kit a temperaturas entre 2-8 ºC, en un refrigerador con temperatura regulada o en
cámara fría.
7. No intercambiar reactivos de diferentes lotes ni tampoco de diferentes estuches.
8. Comprobar que los reactivos no contienen precipitados ni agregados en el momento del uso. De
darse el caso, informar al supervisor para efectuar el procedimiento de sustitución del estuche.
9. Evitar contaminación cruzada entre muestras de suero/plasma usando puntas desechables y
cambiándolas luego de cada uso.
10. Evitar contaminación cruzada entre los reactivos del estuche usando puntas desechables y
cambiándolas luego de cada uso.
11. No usar el producto después de la fecha de caducidad indicada en el estuche e internamente en
los reactivos. Según estudios realizados, no se ha detectado pérdida relevante de actividad en
estuches abiertos 6 veces, utilizados durante un período 6 meses.
12. Tratar todas las muestras como potencialmente infecciosas. Las muestras de suero humano deben
ser manipuladas al nivel 2 de bioseguridad, según ha sido recomendado por el Centro de Control
de Enfermedades de Atlanta, Estados Unidos y publicado por el Instituto Nacional de Salud:
“Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories”, ed.1984. De todas maneras, referirse a
la legislación nacional vigente en el país de pertenencia.
13. Se recomienda el uso de material plástico desechable para la preparación de las soluciones de
lavado y para la transferencia de los reactivos a los diferentes equipos, a fin de evitar
contaminaciones.
14. Los desechos producidos durante el uso del estuche deben ser eliminados según lo establecido
por las directivas nacionales y las leyes relacionadas con el tratamiento de los residuos químicos y
biológicos de laboratorio. En particular, los desechos líquidos provenientes del proceso de lavado,
así como los residuos de controles y muestras, deben ser tratados como potencialmente
infecciosos y deben ser inactivados antes de eliminarlos. Se recomienda la inactivación con lejía
al 10% de 16 a 18 horas o el uso de la autoclave a 121°C durante 20 minutos.
15. En caso de derrame accidental de algún producto, se debe utilizar papel absorbente embebido en
lejía y posteriormente en agua. El papel debe eliminarse en contenedores designados para este fin
en hospitales y laboratorios.
16. El ácido sulfúrico es irritante. En caso de derrame, se debe
lavar la superficie con abundante agua.
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17. Otros materiales de desecho generados durante la utilización del estuche (por ejemplo: puntas
usadas en la manipulación de las muestras y controles, microplacas usadas) deben ser
manipuladas como fuentes potenciales de infección de acuerdo a las directivas nacionales y leyes
para el tratamiento de residuos de laboratorio.
MUESTRA: PREPARACIÓN Y RECOMENDACIONES.
1. Extraer la sangre asépticamente por punción venosa y preparar el suero o plasma según las
técnicas estándar de los laboratorios de análisis clínico. No se ha detectado que el tratamiento con
citrato, EDTA o heparina afecte las muestras.
2. Evitar el uso de conservantes, en particular azida sódica, ya que pudiera afectar la actividad
enzimática del conjugado, generando resultados falsos negativos.
3. Las muestras deben estar identificadas claramente mediante código de barras o nombres, a fin de
evitar errores en los resultados. Cuando el estuche se emplea para el “screening” en unidades de
sangre, se recomienda el uso del código de barras.
4. Las muestras hemolizadas (color rojo) o hiperlipémicas (aspecto lechoso) deben ser descartadas
para evitar falsos resultados, al igual que aquellas donde se observe la presencia de precipitados,
restos de fibrina o filamentos microbianos.
5. Las muestra de suero y plasma pueden conservarse hasta 5 días, a partir del momento de la
extracción, a una temperatura entre 2 y 8ºC. Para períodos de conservación más largos, las
muestras deben almacenarse a –20°C, evitando luego de someter cada muestra a ciclos repetidos
de congelación y descongelación, puesto que podría generar la formación de particulas que pueden
afectar los resultados. Si la muestra es turbia o prodría parecer contaminada por partículas, aclarar
mediante filtración con un filtro desechable de 0,2 – 0,8 micras antes de comenzar el ensayo para a
fin de evitar posibles interferencias; o utilizar el procedimiento a dos pasos (steps).
PREPARACIÓN DE LOS COMPONENTES Y PRECAUCIONES.
Según estudios realizados, no se ha detectado pérdida relevante de actividad en estuches abiertos y
utilizados hasta 6 veces, en uso durante un período de 6 meses.
1. Microplacas:
Dejar la microplaca a temperatura ambiente (aprox. 1 hora) antes de abrir el envase. Compruebe que el
desecante no esté de un color verde oscuro, lo que indicaría un defecto de fabricación. De ser así,
solicitar el servicio de atención al cliente.
Las tiras de pocillos no utilizadas, deben guardarse herméticamente cerradas en la bolsa de aluminio
con el desecante a +2°-8ºC. Una vez abierto el envase, las tiras sobrantes, se mantienen estables
hasta que el indicador de humedad dentro de la bolsa del desecante cambie de color amarillo a verde.
2. Control Negativo:
Listo para el uso. Mezclar bien con un vórtex, antes de usar.
3. Control Positivo:
Listo para el uso. Mezclar bien con un vórtex, antes de usar. No contiene ningún componente
infeccioso ya que se compone de HBsAg recombinante sintético.
4. Calibrador:
Añadir al polvo liofilizado el volumen de agua de calidad ELISA indicado en la etiqueta. Dejar disolver
totalmente y mezclar suavemente en el vórtex.
Nota: Una vez reconstituida, la solución no es estable. Se recomienda mantenerla congelada en
alícuotas a –20ºC.
5. Solución de Lavado Concentrada:
Todo el contenido de la solución concentrada 20x debe diluirse con agua bidestilada, hasta obtener un
volumen de 1000 ml y mezclarse suavemente antes de usarse. Puesto que podrían ser presente
cristales de sal en el frasco, disuelva el contenido con cuidado al preparar la solución. Durante la
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preparación evitar la formación de espuma y burbujas, lo que podría influir en la eficiencia de los ciclos
de lavado.
Nota: Una vez diluida, la solución es estable por una semana almacenada a una temperatura entre +2°
y 8ºC.
6. Conjugado Enzimático:
La solución de trabajo se prepara diluyendo el reactivo concentrado 20X con el Diluyente del
Conjugado (p. ej.: 100 μL conjugado + 1.9 mL diluyente). Mezclar bien con un vórtex antes de usar.
La solución de trabajo no es estable. Evitar posible contaminación del líquido con oxidantes químicos,
polvo o microbios. En caso de que deba transferirse el reactivo, usar contenedores de plástico, estériles
y desechables, siempre que sea posible.
Nota importante: Se recomienda preparar solo el volumen necesario para un día de trabajo ya que la
solución no es estable.
7. Cromógeno/Substrato:
Listo para el uso. Mezclar bien con un vórtex antes de usar. Evitar posible contaminación del líquido
con oxidantes químicos, polvo o microbios. Evitar la exposición a la luz, agentes oxidantes y superficies
metálicas. En caso de que deba transferirse el reactivo, usar solamente contenedores de plástico,
posiblemente estériles.
8. Ácido Sulfúrico:
Listo para el uso. Mezclar bien con un vórtex antes de usar.
Atención: Irritante (Xi R36/38; S2/26/30)
Leyenda:
R 36/38 = Irritante a los ojos y la piel.
S2/26/30 = En caso de contacto con los ojos, enjuagar inmediatamente con agua abundante y consultar
un médico.
INSTRUMENTOS UTILIZADOS EN COMBINACIÓN CON EL ESTUCHE.
1. Las Micropipetas deben ser calibradas para dispensar correctamente el volumen requerido en el
ensayo y sometidas a una descontaminación periódica de las partes que pudieran entrar
accidentalmente en contacto con la muestra (etanol 70%, lejía al 10%, solución desinfectante
hospitalaria). Deben además, ser regularmente revisadas para mantener una precisión del 1% y
una confiabilidad de +/- 2%.
2. La incubadora ELISA debe ser ajustada a 37ºC (+/- 1ºC) y controlada periódicamente para
mantener la temperatura correcta. Pueden emplearse incubadoras secas o baños maría siempre
que estén validados para la incubación de pruebas de ELISA.
3. Si se usa el procedimiento con agitación , el instrumento debe permitir una agitación de 350 rpm +/-
150. La amplitud de la agitación es muy importante ya que una impostación incorrecta puede causar
salpicaduras y originar resultados falsos positivos.
4. El lavador ELISA es extremadamente importante para la realización del ensayo. Antes de
emplearse en los ensayos de rutina del laboratorio, debe ser cuidadosamente optimizado y validado
usando los controles y paneles de referencia pertinentes. Para asegurar que se obtengan los
resultados esperados durante el ensayo, normalmente 4-5 ciclos de lavado son suficientes
(aspiración + dispensado de 350μl/pocillo de solución de lavado = 1 ciclo). Se recomienda un
tiempo entre ciclos de 20-30 segundos. Para establecer correctamente el número de lavados se
recomienda efectuar el ensayo con los controles del estuche, el calibrador así como sueros
positivos y negativos de referencia tratando de verificar la correspondencia con los valores
indicados en la sección “Control interno de calidad”. La calibración periódica del volumen a
dispensar (descontaminación y lavado de las agujas) debe hacerse según las instrucciones del
fabricante.
5. Los tiempos de incubación deben tener un margen de +/-5%.
6. El lector de microplacas ELISA debe estar provisto de un filtro de lectura de 450nm y, si es posible,
de un segundo filtro (620-630nm) para las operacione del Blanco. El procedimiento estándar debe
contemplar: a) Ancho de banda ≤ 10nm b) Rango de absorbancia de 0 a ≥ 2.0; c) Linealidad ≥2.0;
d) reproducibilidad ≥ 1%. El blanco se prueba en el pocillo según lo indicado en la sección
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“Procedimiento del ensayo”. El sistema óptico del lector debe ser calibrado periódicamente para
garantizar la correcta medición de la densidad óptica, según las normas del fabricante.
7. En caso de usar un sistema automatizado para kit ELISA, los pasos críticos (dispensado,
incubación, lavado, lectura, agitación y procesamiento de datos) deben ser cuidadosamente
instalados, calibrados, controlados y periódicamente validados, para garantizar los valores
indicados en la sección “Control interno de calidad”. El protocolo del ensayo debe ser instalado en
el sistema operativo de la unidad y validado tanto para el lavador como para el lector. Por otro lado,
la parte del sistema que maneja los líquidos (dispensado y lavado) debe ser validada e instalada
correctamente. Debe prestarse particular atención a evitar el arrastre (carry-over) por las agujas de
dispensación y las de lavado, a fin de minimizar la posibilidad de ocurrencia de falsos positivos por
contaminación de los pocillos adyacentes por muestras fuertemente reactivas. Se recomienda el
uso de sistemas para el « screening » en unidades de sangre y cuando la cantidad de muestras
supera las 20-30 unidades por ensayo..
8. Si el dispositivo automatico, tiene un soporte de viales no adecuado a los viales suministrados con
el kit, transfiera los reactivos en viales idoneos a la instrumentación e identifíquelos con la misma
eitiqueta despegada del vial original. Este pasaje es importante para evitar de confundir el contenido
de los viales después de transferirlos. Una vez terminado el ensayo, los contenedores secundarios,
identificados con las etiquetas y bien tapados, deben conservarse a +2-°C.
9. El servicio de atención al cliente, ofrece apoyo al usuario para calibrar, ajustar e instalar los equipos
nuevos a usar en combinación con el estuche, con el propósito de asegurar el cumplimiento de los
requerimientos descritos.
OPERACIONES Y CONTROLES PREVIOS AL ENSAYO.
1. Compruebe la fecha de caducidad indicada en la parte externa del estuche. No usar si ha
caducado.
2. Compruebe que los componentes líquidos no estén contaminados con partículas o agregados
visibles. Asegúrese de que el cromógeno/substrato (TMB) sea incoloro o azul pálido, aspirando un
pequeño volumen de este con una pipeta estéril de plástico. Compruebe que no haya ocurrido
rupturas ni derrames de líquido dentro de la caja durante el transporte. Asegurarse de que la bolsa
de aluminio que contiene la microplaca no esté rota o dañada.
3. Diluir totalmente la solución de lavado concentrada 20X, como se ha descrito anteriormente.
4. Disolver el Conjugado 20X con el Diluyente del Conjugado como se ha descrito anteriormente.
5. Disolver el Calibrador como se ha descrito anteriormente
6. Dejar los componentes alcancen la temperatura ambiente (aprox. 1 hora), luego, mezclar como se
ha descrito anteriormente.
7. Ajustar la incubadora ELISA a 37ºC y cebar el lavador de microplascas ELISA utilizando la solución
de lavado diluida, según las instrucciones del fabricante. Establecer el número correcto de ciclos de
lavado de acuerdo a los parámetros indicados en la sección “Instrumentos utilizados en
combinación con el estuche”, punto 4.
8. Comprobar que el lector de ELISA esté conectado al menos 20 minutos antes de realizar la lectura.
9. Si se utiliza para el ensayo un equipo automático, conectar el equipo y comprobar que los
protocolos estén correctamente programados.
10. Comprobar que las micropipetas estén programadas en el volumen requerido.
11. Asegurarse de que el equipamiento a usar esté en perfecto estado, disponible y listo para el uso.
12. En caso de surgir algún problema, detener el ensayo y avisar al supervisor.
PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO.
El ensayo debe realizarse según las instrucciones que siguen a continuación, es importante mantener
en todas las muestras el mismo tiempo de incubación.
Ensayos Automatizados.
En el caso de que el ensayo se realice de manera automatizada con un sistema ELISA, se recomienda
programar al equipo para aspirar/dispensar 150μl de controles/calibrador, luego 150μl de muestras y
posteriormente 100μl del conjugado enzimático diluído.
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Para el paso de pre-lavado (primer punto del procedimiento del ensayo) y para las operaciones
siguientes, consulte las instrucciones que aparecen debajo para el Ensayo Manual.
Es muy importante comprobar que el tiempo entre el dispensado de la primera y la última muestra sea
calculado por el instrumento y considerado para los lavados.
Ensayo Manual.
1. Poner el número de tiras necesarias en el soporte de plástico y hacer un ciclo de lavado para
hidratar los pocillos. Identificar cuidadosamente los pocillos de controles,calibradores y muestras.
Nota importante: El prelavado es fundamental para obtener resultados confiables y específicos tanto
en el ensayo automático como en el manual. No omitir!
2. Dejar el pocillo A1 vacío para el blanco.
3. Dispensar 150μL de Control Negativo, por triplicado, 150μL de Calibrador por duplicado y 150μL del
Control Positivo, individual. Después, añadir 150μL de cada muestra.
4. Comprobar la presencia de las muestras en los pocillos a simple vista (existe una marcada
diferencia de color entre los llenos y los vacíos) o por lectura a 450/620nm (la densidad óptica de las
muestras es superior a 0.100).
5. Dispensar 100μL del Conjugado Enzimático diluído en todos los pocillos, excepto en el A1.
Nota importante: Tener cuidado de no tocar la pared interna del pocillo con la punta de la pipeta al
dispensar el conjugado. Podría producirse contaminación.
6. Luego de la adición del Conjugado compruebe que las muestras han cambiado de color amarillo a
rojo e incubar la microplaca durante 120 min. a +37°C
Notas importantes:
Las tiras se deben sellar con la hoja adhesiva suministrada solo cuando se hace el ensayo
manualmente. No sellar cuando se emplean equipos automatizados de ELISA.
7. Luego de la primera incubación, lavar los pocillos 4-5 veces con 350μL/pocillo, con la solución de
lavado diluida, según lo descrito previamente en la sección “Instrumentos utilizados en
combinación con le estuche”, parágrafo 4.
8. Dispensar 200μl del Cromógeno/Substrato en todos los pocillos, incluido el A1.
Nota importante: No exponer directamente a fuerte iluminación, de lo contrario se generan
interferencias.
9. Incubar la microplaca protegida de la luz a temperatura ambiente (18-24°C) durante 30 minutos.
Los pocillos con Control Positivo, Calibrador y muestras positivas deben pasar de un tono claro a
azul.
10. Dispensar 100μL de ácido sulfúrico en todos los pocillos para detener la reacción enzimática, usar
la misma secuencia que en el paso 8. La adición de la solución de parada cambia el color del
Control Positivo, el Calibrador y las muestras positivas de azul a amarillo.
11. Medir la intensidad del color de la solución en cada pocillo, (según se describe en la párrafo 6 de la
sección “Instrumentos utilizados en combinación con el estuche”), con un filtro de 450 nm
(lectura) y, si es posible, otro de 620-630 nm para la substracción del blanco (pocillo A1).
Notas importantes:
1. Si no se puede utilizar el segundo filtro, asegurarse de que no haya huellas digitales ni polvo en el
fondo de los pocillos antes de leer a 450nm. Podrían generarse falsos positivos en la lectura.
2. La lectura debe hacerse inmediatamente después de añadir la solución de parada y, en cualquier
caso, en el plazo máximo de 20 minutos después de su adición. Se podría producir auto
oxidación del cromógeno causando un elevado fondo, con resultados falsos positivos.
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3. Cuando las muestras que deben analisarse no son idóneas para el ensayo o hayan sido congeladas,
se recomienda efetuar el procedimiento descrito a continuación, por que menos susceptible a las
interferencias causadas por hemólisis, hiperlipemia, contaminación microbiana o micropartículas de
fibrina. El ensayo se realiza con dos incubaciones a +37°C en agitación, como descrito a
continuación:
1. Dispensar 100 µl de controles, calibrator y muestras
2. Incubar durante 60 min a +37°C en agitación a 350 rpm +/-150
3. Lavar como indicado en el párrafo n° 4 de la sección “Instrumentación utilizada en combinación con
el estuche”.
4. dispensar 100 µl de conjugado enzimático diluido
5. Incubar durante 30 min a +37°C en agitación a 350 rpm +/-150
6. Lavar como descrito anteriormente
7. Dispensar 100 µl de solución TMB&H2O2
8. Incubar durante 30 min. a temperatura ambiente en agitación a 350 rpm +/-150
9. Dispensar 100μL de ácido sulfúrico y leer
Este método demuestra un rendimiento de sensibilidad y especificidad similar al éstandar, por tanto se
puede utilizar como método alternativo.
*En caso de que se utilice en el procedimiento un sistema automático RADIM y/o SEAC para
microplacas, ver el manual correspondiente y si esto ocurre la lectura espectrofotométrica se realiza
automáticamente con 3 longitudes de onda: 450, 405 y 620 nm, permitiendo la ampliación del rango de
lectura.
ESQUEMA DEL ENSAYO.
t.a.*temperatura ambiente
Operaciones Proc. A
Paso de pre-lavado ciclo n° 1
Controles&Calibrador y muestras 150 μL
Conjugado diluído
100 μL
1 ra incubación 120 min
Temperatura +37°C
Lavado n° 4-5 (350μL/pocillo)
Cromógeno/Substrato 200 μL
2 da incubación 30 min
Temperatura t.a.*
Acido Sulfúrico 100 μL
Lectura D.O. 450nm
A continuación se describe un ejemplo del esquema de dispensado:
Microplaca
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
A BL M2
B CN M3
C CN M4
D CN M5
E CAL M6
F CAL M7
G CP M8
H M 1 M9
Leyenda: BL = Blanco CN = Control Negativo
CAL = Calibrador CP = Control Positivo M = Muestra
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CONTROL DE CALIDAD INTERNO.
Se realiza un control con los controles/calibrador cada vez que se usa el estuche para verificar si los
valores DO450nm o M/Co son los esperados.
Asegurar el cumplimiento de los siguientes parámetros:
Parámetro Exigencia
Pocillo Blanco Valor < 0.100 DO450nm
Control Negativo (CN) Valor medio < 0.050 DO450nm después de leer el blanco
Calibrador 0.5 IU/mL
(2 nd M/Co ≥ 2.0
WHO Standard)
Control Positivo (CP) Valor > 1.000 DO450nm
Si los resultados del ensayo coinciden con lo establecido anteriormente, pase a la siguiente sección.
En caso contrario, detenga el ensayo y compruebe:
Problema Compruebe que
Pocillo blanco
> 0.100 DO450nm
la solución cromógeno/substrato no se ha contaminado durante el ensayo.
Control Negativo 1. el proceso de lavado y los parámetros del lavador estén validados según
(CN) > 0.050 los estudios previos de calificación.
DO450nm después de 2. se haya usado la solución de lavado apropiada y que el lavador haya sido
leer el blanco
cebado con la misma antes del uso.
3. no se hayan cometido errores en el procedimiento del ensayo (dispensar
el control positivo en lugar del negativo).
4. no haya existido contaminación del control negativo o de sus pocillos
debido a muestras positivas derramadas, o al conjugado enzimático.
5. las micropipetas no se hayan contaminado con muestras positivas o con
el conjugado enzimático.
6. las agujas del lavador no estén parcial o totalmente obstruidas.
Calibrador
1. el procedimiento haya sido realizado correctamente.
M/Co < 2.0
2. no haya habido errores durante su distribución (dispensar el control
negativo en lugar del calibrador).
3. el proceso de lavado y los parámetros del lavador estén validados según
los estudios previos de calificación.
4. no haya ocurrido contaminación externa del calibrador.
Control Positivo (CP) 1. el procedimiento haya sido realizado correctamente.
< 1.000 DO450nm 2. no se hayan cometido errores en el procedimiento (dispensar el control
negativo en lugar del positivo. En este caso el control negativo debe tener
un valor de DO450nm > 0.050).
3. el proceso de lavado y los parámetros del lavador estén validados según
los estudios previos de calificación.
4. no haya ocurrido contaminación externa del control positivo.
Si se presenta alguno de los problemas antes mencionados, informe al supervisor para tomar las
medidas pertinentes.
CÁLCULO DEL VALOR DE CORTE
Los resultados se calculan por medio de un valor de corte (cut-off) hallado con la siguiente fórmula:
Valor de corte = CN medio DO450nm + 0.050
El valor encontrado se usa para la interpretación de los resultados, según se describe a continuación:
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Nota Importante: Cuando el cálculo de los resultados se halla mediante el sistema operativo de un
equipo de ELISA automático, asegurarse de que la formula usada para ejecutar el cálculo del valor de
corte, y para la interpretación de los resultados sea correcta.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
La interpretación de los resultados se realiza mediante la relación entre las DO a 450nm de las
muestras y el Valor de corte (M/Co), según la siguiente tabla:
(M/Co) Interpretación
< 0.9 Negativo
0.9 – 1.1 Equívoco
> 1.1 Positivo
Un resultado negativo indica que el paciente no está infectado por VHB y la unidad de sangre se puede
transfundir.
Cualquier paciente, cuya muestra resulte equívoca debe someterse a una nueva prueba con una
segunda muestra de sangre colectada 1 ó 2 semanas después de la inicial. En este caso la unidad de
la sangre no debe ser transfundida.
Un resultado positivo es indicativo de infección por VHB y por consiguiente el paciente debe ser tratado
adecuadamente. La unidad de la sangre debe ser descartada.
Notas importantes:
1. La interpretación de los resultados debe hacerse bajo la vigilancia del supervisor del laboratorio
para reducir el riesgo de errores de juicio y de interpretación.
2. Un resultado positivo debe comprobarse repitiendo el ensayo después de filtrar la muestra con un
filtro de 0.2 – 0.8µm, para evitar riesgos de interferencias con micropartículas y si se mantiene
todavía positivo se debe realizar una prueba confirmatoria.
3. Cuando se transmiten los resultados de la prueba, del laboratorio a otras instalaciones, debe
ponerse mucha atención para evitar el traslado de datos erróneos.
4. El diagnóstico de infección con un virus de la hepatitis debe ser evaluado y comunicado al paciente
por un médico calificado.
A continuación, un ejemplo de los cálculos a realizar:
Los siguientes datos no deben usarse en lugar de los valores reales obtenidos en el laboratorio.
Control Negativo: 0.012 – 0.008 – 0.010 DO450nm
Valor medio: 0.010 DO 450nm
Menor de 0.050 – Válido
Control Positivo: 2.489 DO 450nm
Mayor de 1.000 – Válido
Valor de corte = 0.010+0.050 = 0.060
Calibrador: 0.350 - 0.370 DO 450nm
Valor medio: 0.360 DO 450nm M/Co = 6.0
M/Co Mayor de 2.0 – Válido
Muestra 1: 0.028 DO 450nm
Muestra 2: 1.690 DO 450nm
Muestra 1 M/Co < 0.9 = negativo
Muestra 2 M/Co > 1.1 = positivo
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PERFORMANCES
La evaluación del performance ha sido realizada según lo reportado en las Especificaciones Técnicas
Comunes (ETC) (art. 5, Capítulo 3 de las Directivas IVD 98/79/EC).
1. Límite de detección.
El límite de detección ha sido calculado por medio de las siguientes preparaciones internacionales de
referencia:
1. Estándar para HBsAg - subtipos “ay” y “ad” - suministrada por el Instituto Paul Erlich (PEI) (a partir
de preparaciones 50.000 U/mL y 100 U/mL respectivamente).
2. NIBSC 2 do estándar de trabajo británico (French/UK código estándar 99/640-005-WI).
3. 1 er WHO Estándar internacional, código n° 80/549.
4. 2 do WHO Estándar internacional, NIBSC código n° 00/588
En la siguiente tabla se muestran los resultados del Control de Calidad:
Preparación UI/mL o
estándar
PEI
ng/mL)
Subtipo Ad
0.0125
Subtipo Ay
0.0125
NIBSC 0.03
WHO 1 ER Estándar 0.05
WHO 2 do Estándar 0.1 - 0.05
Se evaluó además el panel # 806, suministrado por Boston Biomedica Inc., Estados Unidos, para
definir el límite de sensibilidad.
Los resultados son los siguientes:
BBI Panel 806
Miembro Subtipo BBI Abbott PEI Lote 1 Lote 2 Lote 3
ID HBsAg ng/ml ng/ml U/ml M/Co M/Co M/Co
806-1 ad 2,5 3,1 0,31 9.5 9.4 9.7
806-2 ad 1,5 1,6 0,17 5.1 5.0 5.3
806-3 ad 1 1 0,1 3.2 3.2 3.3
806-4 ad 0,8 0,9 0,09 2.6 2.4 2.8
806-5 ad 0,6 0,7 0,07 2.3 2.1 2.4
806-6 ad 0,5 0,5 0,06 2.0 1.8 1.9
806-7 ad 0,4 0,5 0,05 1.7 1.6 1.8
806-8 ad 0,3 0,3 0,03 1.4 1.3 1.5
806-9 ad 0,2 0,2 0,02 1.2 1.1 1.2
806-10 ad 0,1 0,1 0,01 0.8 0.7 0.8
806-11 ay 2,4 1,8 0,21 10.5 10.7 10.6
806-12 ay 1,3 1 0,11 5.3 5.6 5.5
806-13 ay 0,9 0,6 0,07 4.7 4.9 4.9
806-14 ay 0,8 0,5 0,06 3.9 4.0 4.0
806-15 ay 0,6 0,4 0,05 2.6 2.7 2.5
806-16 ay 0,5 0,4 0,04 2.4 2.5 2.5
806-17 ay 0,4 0,3 0,03 1.7 1.8 1.9
806-18 ay 0,3 0,3 0,03 1.6 1.7 1.7
806-19 ay 0,2 0,2 0,02 1.4 1.6 1.5
806-20 ay 0,1 0,1 0,01 1.1 1.2 1.1
806-21 negative 0 0 0 0.2 0.2 0.2
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Además se probaron dos paneles de sensibilidad suministrados por EFS, Francia, obteniendose los
siguientes resultados:
Panel EFS, Francia
Muestra
(conc.) teórica HBsAg
ng/ml
media
OD450nm
M/Co
Ortho
M/Co
HB 1 0.10 0.039 0.7 0.6
HB 2 0.20 0.082 1.4 1.2
HB 3 0.30 0.116 2.0 1.8
HB 4 0.45 0.161 2.7 2.8
HB 5 0.66 0.210 3.6 3.9
HB 6 diluyente 0.009 0.2 0.2
Panel de sensibilidad SFTS, France, Ag HBs 2004
Muestra
ID
Características ng/ml S/Co
151 Adw2 + ayw3 2.24 ± 0.15 10.8
152 Adw2 + ayw3 1.15 ± 0.06 5.8
153 Adw2 + ayw3 0.95 ± 0.05 5.0
154 Adw2 + ayw3 0.58 ± 0.04 3.3
155 Adw2 + ayw3 0.50 ± 0.03 2.6
156 Adw2 + ayw3 0.36 ± 0.02 1.9
157 Adw2 + ayw3 0.23 ± 0.02 1.3
158 Adw2 + ayw3 0.13 ± 0.02 0.7
159 Adw2 + ayw3 0.06 ± 0.01 0.4
160 Adw2 + ayw3 0.04 ± 0.01 0.2
161 Adw2 0.5 ± 1.0 2.8
162 Adw4 0.5 ± 1.0 2.6
163 Adr 0.5 ± 1.0 3.0
164 Ayw1 0.5 ± 1.0 2.9
165 Ayw2 0.5 ± 1.0 3.9
166 Ayw3 0.5 ± 1.0 4.6
167 Ayw3 0.5 ± 1.0 4.3
168 Ayw4 0.5 ± 1.0 4.2
169 Ayr 0.5 ± 1.0 3.6
170 Diluyente / 0.1
2. Sensibilidad clínica.
La sensibilidad clínica ha sido probada con paneles de muestras clasificadas como positivas por un
estuche aprobado por el FDA US.
Las muestras positivas fueron colectadas en diferentes regiones geográficas (incluyendo ambos
subtipos “ad” y “ay”) y de personas con distintas enfermedades causadas por VHB (hepatitis B en
estado agudo, asintomático y crónico).
En un estudio realizado a partir de más de 400 muestras se obtuvo un valor del 100%.
Se estudiaron además un total de más de 20 paneles de Seroconversión y Performance.
A continuación se reportan los resultados obtenidos con los dos paneles suministrados por Boston
Biomedica Inc., Estados Unidos.
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BBI PHM 916
BBI PHM 923
Muestra Conc. HBsAg Radim Ortho EIA Sorin EIA
ID ng/mL M/Co M/Co M/Co
01 < 0.1 0.4 0.2 0.0
02 < 0.1 0.3 0.2 0.1
03 < 0.1 0.3 0.2 0.0
04 < 0.1 0.4 0.1 0.0
05 < 0.1 0.4 0.2 0.0
06 < 0.1 0.4 0.6 0.1
07 < 0.1 0.4 0.2 0.1
08 < 0.1 0.5 0.2 0.1
09 0.2 0.9 0.4 0.2
10 0.5 1.4 2.2 1.2
11 2.3 4.5 10.1 6.2
Muestra Conc. HBsAg. Radim Ortho EIA Sorin EIA
ID ng/mL M/Co M/Co M/Co
01 < 0.1 0.4 0.1 0.0
02 < 0.1 0.4 0.2 0.1
03 < 0.2 1.2 1.4 0.9
04 < 0.5 1.4 2.6 1.8
3. Especificidad clínica:
La especificidad clínica ha sido determinada con paneles de muestras negativas provenientes de
individuos normales y donantes sanos, clasificadas como negativas por un estuche registrado en Italia
por el Ministerio de Salud.
Se emplearon además para determinar la especificidad, plasma sometido a métodos de tratamiento
estándar (citrato, EDTA y heparina) y suero humanos. No se ha observado falsa reactividad debida a
los métodos de tratamiento de las muestras.
Las muestras congeladas han sido probadas para comprobar si la congelación interfiere con el
procedimiento del ensayo. No se ha observado interferencia a partir de muestras limpias y libres de
agregados.
Todos los subtipos “ay” y “ad” conocidos, así como las isoformas “w” y “r” suministrados por CNTS,
Francia, se probaron en el ensayo y se clasificaron como positivos según lo esperado.
Se examinaron muestras procedentes de pacientes afectados por hepatitis virales (HCV, HAV) y no
virales del hígado, que pudieran provocar interferencia en el ensayo, sin embargo no se observó
reacción cruzada.
La evaluación del procedimiento se realizó mediante un ensayo con más de 5000 muestras, en un
centro de referencia externo calificado. Se obtuvieron valores > 99.5% .
4. Precisión.
La precisión ha sido calculada con 3 muestras, examinadas en réplicas en corridas diferentes.
Se realizó un estudio con 2 muestras de diferente reactividad al HBsAg, las muestras fueron
examinadas en 16 réplicas, en tres corridas separadas (Procedimiento Estándar).
Los valores medios obtenidos utilizando 3 lotes diferentes se reportan a continuación :
KHB5IWA – KHB5IW – HBsAg ONE
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Lote# 1
Muestra Negativa (N = 16)
Valores medios 1 ra corrida 2 da corrida 3 ra corrida Media
DO 450nm 0.036 0.036 0.032 0.034
Desviación estándar 0.004 0.006 0.005 0.005
CV % 10.1 15.5 16.2 13.9
NIBSC 0.1 ng/mL (N = 16)
Valores medios 1 ra corrida 2 da corrida 3 ra corrida Media
DO 450nm 0.133 0.121 0.118 0.124
Desviación estándar 0.019 0.008 0.011 0.013
CV % 14.1 6.9 9.2 10.1
M/Co 1.5 1.4 1.4 1.4
Lote # 2
Muestra Negativa (N = 16)
Valores medios 1 ra corrida 2 da corrida 3 ra corrida Media
DO 450nm 0.034 0.035 0.031 0.033
Desviación estándar 0.005 0.005 0.005 0.005
CV % 15.5 13.5 15.4 14.8
NIBSC 0.1 ng/mL (N = 16)
Lote # 3
Valores medios 1 ra corrida 2 da corrida 3 ra corrida Media
DO 450nm 0.125 0.129 0.129 0.127
Desviación estándar 0.012 0.010 0.013 0.012
CV % 9.7 7.5 10.4 9.2
M/Co 1.5 1.5 1.6 1.5
Muestra Negativa (N = 16)
Valores medios 1 ra corrida 2 da corrida 3 ra corrida Media
DO 450nm 0.034 0.035 0.034 0.034
Desviación estándar 0.004 0.005 0.004 0.004
CV % 10.5 12.9 11.2 11.5
NIBSC 0.1 ng/mL (N = 16)
Valores medios 1 ra corrida 2 da corrida 3 ra corrida Media
DO 450nm 0.124 0.129 0.126 0.126
Desviación estándar 0.009 0.012 0.015 0.012
CV % 7.2 9.4 11.7 9.4
M/Co 1.5 1.5 1.5 1.5
La variabilidad mostrada en las tablas no dió como resultado una clasificación errónea de las muestras.
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LIMITACIONES.
Los resultados falsos positivos repetibles fueron estimados como menos del 0.1% de la población
normal, debido mayormente a altos títulos de Anticuerpos Heterofílicos anti-ratón (HAMA). También se
observaron interferencias en muestras frescas cuando no estaban “limpias” o son recolectadas no
correctamente.
Las muestras que luego de ser descongeladas presentan partículas de fibrina, partículas lipídicas o
agregadas, crioglobulinas pueden generar resultados falsos positivos.
Tales interferencias desaparecen casi totalmente cuando las mismas muestras se ensayan con el
método alternativo (dos steps).
LEYENDA SÍMBOLOS: veer p.19
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SÍMBOLOS
EN 980 – EDMA
REF Código de referencia o número de pedido
LOT Lote
Fecha de caducidad
IVD Para uso diagnóstico in vitro
96
192
Marcado CE según directiva de IVD 98/79 CE
Conservar a 2-8°C
Producido por
Riesgo biológico
Consultar las instrucciones de uso
Suficiente para 96-192 determinaciones
RDATE Fecha de referencia
RCNS Reconstituir con
H2O Agua destilada o desionizada
KHB5IWA – KHB5IW – HBsAg ONE
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BIBLIOGRAFIA - REFERENCES
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