Aplicación de metodologías tradicionales y alternativas en el ...

Aplicación de metodologías tradicionales yalternativas en el diagnóstico oficial de E. coliO157 H7 para procesos de exportación en ChileSubtitulo de la presentación en una líneaIRMA ACEVEDO GONZÁLEZMÉDICO VETERINARIOUNIDAD DE BACTERIOLOGÍA PECUARIADEPTO. LABORATORIOS LO AGUIRRES.A.G. - CHILE

Inocuidad en ChileAgencia Chilena para laCalidad e InocuidadAlimentaria

Entrenamiento Microbiológico FSIS/SAG en TécnicasDiagnósticas para Salmonella y Escherichia coli GenéricoVictor CookTharon HoephnerSantiago, 3 al 7 de Marzo 2003Participan 20 profesionales de la red de laboratoriosSAG y privados en vías de habilitarse.

Salmonella spp

Escherichia coli O157:H7

Escherichia coli O157:H7

Escherichia coli O157:H7Instructivo Basado en U.S.D.A F.S.I.S. MLG 5.031. Etapa de detección• Muestras de 25 g• Caldo E.C.Modificado con novobiocina.• Reveal ® Neogen AOAC Official Method 2000.14Procedimiento 20 horas.Sensibilidad 99.9 (FSIS ≥ 98%)Especificidad 99.4 (FSIS ≥ 90%)Promedio de falsos positivos ‹ 1% (FSIS≤ 2%)Promedio de falsos negativos ‹ 1% (FSIS≤ 10%)

Escherichia coli O157:H7.2. Etapa de concentración para aislamiento.• Perlas IMS Dynal ® o ICE ®Biomerieux.• Medios altamente selectivos.3. Etapa confirmación bioquímica y serológica.• Sistemas de identificación API ® 20E Biomerieux.• Aglutinación en latex E. coli RIM ® Remel.4. Etapa Determinación presencia deShigatoxinas.• Premier EHEC Meridian Diagnostic.Diferencias• Cepa Control :Cepa FSIS Fluorescente EC 465-97 vsCepa I.S.P.• Agar selectivo: Rainbow ® Agar O157 vs Fluorocult ®.• Inclusión ICE ® como alternativa a la SeparaciónInmunomagnética en columnas paramagnéticas.

Escherichia coli O157:H7Criterios de EquivalenciaCompliance guidelines for establishments on theFSIS Microbiological testing program and otherverification activities for Escherichia coli O157 H7.April ,2004• Unidad analítica de al menos 325 g. analizadas comosubmuestras individuales de hasta 75 g.• Sensibilidad igual o mayor al Método F.S.I.S.a. Confirmación con metodos de cultivo que incluyen el uso deseparación inmunomagnética ob. Los resultados positivos obtenidos con métodos screeningpor AOAC Internacional u otra organización científicareconocida internacionalmente podría considerarseequivalente al método de FSIS .• Método científicamente validado, aprobado o adoptado poruna organización internacional.• Solitud de equivalencia presentada en 2008 y aprobada en2009.

Escherichia coli O157:H71. Etapa de detección.• Muestra de 325 g, 5 submuestras de 65g• Protocolos validados AFNOR (Nº 12/8-07/00) delInstructivo VIDAS® E. coli O157 (VIDAS ECO).• CaldoTripticasa Soya modificado con novobiocina• 6 o 7h /41,5 o C±1 o C.• Caldo CT-MAC 18h±1h/35-37 o C2. Etapa de concentración para aislamiento.• VIDAS ICE ®Biomerieux.• Agar O157:H7 ID (BioMérieux ref. 42.605 y 42.630)o un medio selectivo equivalente.3. Etapa confirmación bioquímica y serológica.• Sistemas de identificación API 20E Biomerieux.• Aglutinación en latex E. coli RIM ® Remel.4. Etapa Determinación presencia deShigatoxinas/genes Shigatoxinas.• PCR multiplex en Instituto de Salud Pública.

Escherichia coli O157 H7

Metodologías Incorporadas al Plan deReducción de Patógenos

Metodologías Incorporadas al Plan de Reducción de PatógenosMétodo Screening Assurance GDS SalmonellaValidación AFNOR TRA 02/12-01/09

Ultimas Metodologías Aceptadas comoEquivalentes9 de Marzo 2011VIDAS ® UP E. coli Incluyendo H7 (VIDAS ECPT)Validación AFNOR Certificado BIO 12/25-05/09Acorde a Norma ISO 16.140:2003.Método de referencia EN 16654(2001):Horizontal methodfor the detection of Escherichia coli O157VIDAS ® Listeria monocytogenes Xpress( VIDAS LMX)Validación AFNOR Certificado BIO 12/27-02/10Acorde a Norma ISO 16.140:2003.Método de referencia EN 11290-1(1997) incluye AmendmentA(2004):Horizontal method for the detection and enumerationof Listeria monocytogenes. Part 1 :Detection MethodEl FSIS informa que se ha completado la revisión conducente a laequivalencia de los métodos screening mencionados, para serutilizados en alimentos listos para el consumo enviados desde Chile.

Validación Interna e Implementación MétodoScreening VIDAS EASY SLM• Protocolo de acuerdo a la Validación AFNOR BIO 12/16-09/05.• Metodología de referencia utilizada ISO 6579:2002• Matrices: Ingredientes de importación y alimentos completas para elconsumo animal.Harinas de viscerasHarinas de carne y hueso *Harinas de plumas y sangreAlimentos terminados para aves• Se procesaron 317 muestras,261 muestras negativas y 56 muestraspositivas a Salmonella spp.• Para el análisis se consideraron 150 resultados,99 análisis negativos y51 positivos dando cumplimiento a lo indicado en la Norma ISO 16140para los cálculos de exactitud, sensibilidad y especificidad relativa, decontar con un total de resultados negativos que no supere el doble delos resultados positivos.• La exactitud, sensibilidad y especificidad relativa obtenidas fue 100%.• Se adopta la nueva metodología a partir del 10 de Julio de 2011.*• Este estudio fue realizado por la Dra. Amelia Morales con la colaboraciónde Nayaret Sepúlveda.

Próximos DesafíosShiga Toxin-Producing Escherichia coli in Certain Raw BeefProducts (Federal Register)El Food Safety and Inspection Service (FSIS) delDepartamento de Agricultura de los Estados Unidos (USDA) hapublicado en el Federal Register una determinación final consolicitud de comentarios referente a la adopción de nuevasmedidas para combatir el E.Coli. En concreto, se consideraráncomo adulterantes a 6 serogrupos adicionales de E.Coli encarne bovina cruda. La agencia recibirá comentarios delpúblico hasta el 21 de noviembre de 2011.

Otras serovariedades de Escherichia coliproductoras de shigatoxinasFSIS Guidance for evaluatingTest Kit Performance.

Gracias.irma.acevedo@sag.gob.cl